JP6177357B2 - 改変バクテリオファージ - Google Patents
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Description
遺伝子を、相同組換えを使用して除くことができ、またファージゲノムに加えることができる。外来の遺伝子およびプロモーターを保有するファージを構築することができる方法がいくつかあり、下記はそのような方法の一例である。
すべてのPCR反応が、製造者の説明書に従って、Expand High Fidelity PCRシステム、およびプライマーの融解温度(Tm)に依存するストリンジェントな条件を使用して行われた。別途の記載がない限り、一般的な分子生物学的手法、例えば、制限酵素消化、アガロースゲル電気泳動、T4DNAリガーゼ依存性連結、コンピテント細胞の調製および形質転換などは、Sambrookら(1989年)に記載の方法に基づいた。DNAを、Qiagen DNA精製キットを使用して酵素反応液から精製し、細胞から調製した。S.aureus細胞を、SchenckおよびLadagga(1992年)によって記載されるような方法を使用して、エレクトロポレーションによってプラスミドDNAで形質転換した。
1.溶菌遺伝子にまたがるφ11の1.8kbフラグメントを含有するpBluescriptSK+を含むプラスミドpSA1を下記のように構築した。図1は、φ11ゲノム由来領域を増幅するための下記のオリゴヌクレオチドについてのプライマー作用部位を示す。
B1001(配列番号1)
5'-AACTGCAGGTGTATTGCAACAGATTGGCTC-3'
B1002(配列番号2)
5'-GCTCTAGACTTTGCTCCCTGCGTCGTTG-3'
B1003(配列番号3)
5'-CGGGATCCGACTAAAAATTAGTCG-3'
B1004(配列番号4)
5'-GGACTAGTGAATGAGTATCATCATGGAGG-3'
B1005(配列番号5)
5'-CGATGGATCCTCTCATTTATAAGGTTAAATAATTC-3'
B1006(配列番号6)
5'-GCAGACCGCGGCTATTTATCCTTCACTCTCATC-3'
B1007(配列番号7)
5'-CTACGGATCCTTTATCCTCCAATCTACTTATAAA-3'
B1008(配列番号8)
5'-CATGCCATGGAAGTTCCTCCTTGAGTGCT-3'
B1009(配列番号9)
5'-CGATCCATGGCAAATTATCAAAACGC-3'
B1010(配列番号10)
5'-AGTGAGATCTGAATTCGCTGATTAAAAGAAAC-3'
1.pSA4をS.aureusのPTL47株に形質転換した。PTL47はRN4220におけるφ11のモノ溶原菌である。
Donegan,N.、2006年、米国医療疫学学会年会。
Family Medicine 4:132−137。
一般的な病原体およびそれらのファージの一部のリスト(このリストは網羅的ではなく、代表的なものである)。
大腸菌ファージ:
バクテリオファージλ
バクテリオファージ933W(大腸菌O157:H7)
バクテリオファージVT2−Sa(大腸菌O157:H7)
大腸菌ファージ186
大腸菌ファージP1
大腸菌ファージP2
大腸菌ファージN15
バクテリオファージT3
バクテリオファージT4
バクテリオファージT7
バクテリオファージKU1
サルモネラ菌種(Salmonella spp)のバクテリオファージ:
バクテリオファージFelix
バクテリオファージP22
バクテリオファージL
バクテリオファージ102
バクテリオファージ31
バクテリオファージF0
バクテリオファージ14
バクテリオファージ163
バクテリオファージ175
バクテリオファージVir
バクテリオファージViVI
バクテリオファージ8
バクテリオファージ23
バクテリオファージ25
バクテリオファージ46
バクテリオファージE15
バクテリオファージE34
バクテリオファージ9B
志賀赤痢菌(Shigella dysenteriae)のバクテリオファージ:
バクテリオファージφ80
バクテリオファージP2
バクテリオファージ2
バクテリオファージ37
コレラ菌(Vibrio cholerae)のバクテリオファージ:
バクテリオファージfs−2
バクテリオファージ138
バクテリオファージ145
バクテリオファージ149
バクテリオファージ163
マイコプラズマ・アルスリチジス(Mycoplasma arthritidis)のバクテリオファージ:バクテリオファージMAV1
連鎖球菌属細菌のバクテリオファージ:
バクテリオファージCP−1
バクテリオファージφXz40
バクテリオファージ1A
バクテリオファージ1B
バクテリオファージ12/12
バクテリオファージ113
バクテリオファージ120
バクテリオファージ124
緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)のバクテリオファージ:
バクテリオファージD3
バクテリオファージφCTX
バクテリオファージPP7
インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)のバクテリオファージ:
バクテリオファージS2
バクテリオファージHP1
バクテリオファージflu
バクテリオファージMu
黄色ブドウ球菌のバクテリオファージ:
バクテリオファージTwort
バクテリオファージtIII−29S
バクテリオファージφPVL
バクテリオファージφPV83
バクテリオファージφ11
バクテリオファージφ12
バクテリオファージφ13
バクテリオファージφ42
バクテリオファージφ812
バクテリオファージK
バクテリオファージP3
バクテリオファージP14
バクテリオファージUC18
バクテリオファージ15
バクテリオファージ17
バクテリオファージ29
バクテリオファージ42d
バクテリオファージ47
バクテリオファージ52
バクテリオファージ53
バクテリオファージ79
バクテリオファージ80
バクテリオファージ81
バクテリオファージ83
バクテリオファージ85
バクテリオファージ93
バクテリオファージ95
バクテリオファージ187
クラミジア属細菌のバクテリオファージ:
バクテリオファージφCPAR39
マイコバクテリオファージ:
バクテリオファージL5
バクテリオファージLG
バクテリオファージD29
バクテリオファージRv1
バクテリオファージRv2
バクテリオファージDSGA
リステリア菌(Listeria monocytogenes)のバクテリオファージ:
バクテリオファージA118
バクテリオファージ243
バクテリオファージA500
バクテリオファージA511
バクテリオファージ10
バクテリオファージ2685
バクテリオファージ12029
バクテリオファージ52
バクテリオファージ3274
肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)のバクテリオファージ:
バクテリオファージ60
バクテリオファージ92
ペスト菌(Yersinia pestis)のバクテリオファージ:
バクテリオファージR
バクテリオファージY
バクテリオファージP1
Claims (16)
- 標的細菌に感染することができる改変バクテリオファージであって、標的細菌に対して毒性であるSASPをコードするα/β低分子量酸可溶性胞子タンパク質(SASP)遺伝子を含み、前記SASP遺伝子が、バクテリオファージおよびSASP遺伝子に対して外来である構成的細菌プロモーターの制御下にあり、
前記プロモーターが、標的細菌中に多数コピーで存在するとき、毒性レベルのSASPの産生を行わせるようにし、かつ、
前記バクテリオファージは、溶原性であり、かつ、細菌宿主産生菌株中で、SASP遺伝子の一つのコピーを含む、改変バクテリオファージ。 - 前記SASPがB.megateriumのSASP−Cを含む、請求項1に記載の改変バクテリオファージ。
- 改変されたS.aureusバクテリオファージを含む、請求項1または請求項2に記載の改変バクテリオファージ。
- 前記S.aureusバクテリオファージがφ11バクテリオファージである、請求項3に記載の改変バクテリオファージ。
- 前記プロモーターが、pdhA、rpsB、pgi、およびfbaAから選択される、S.aureusプロモーターである、請求項1〜4のいずれかに記載の改変バクテリオファージ。
- 非溶菌性である、請求項1〜5のいずれかに記載の改変バクテリオファージ。
- 前記SASP遺伝子によって中断され、不活性化された溶菌遺伝子を含む、請求項6に記載の改変バクテリオファージ。
- ホリン − である、請求項6または請求項7に記載の改変バクテリオファージ。
- 非抗生物質耐性マーカーをさらに含む、請求項1〜8のいずれかに記載の改変バクテリオファージ。
- 前記非抗生物質耐性マーカーがカドミウム耐性マーカーである、請求項9に記載の改変バクテリオファージ。
- 請求項1〜9のいずれかに記載の改変バクテリオファージと、そのためのキャリアとを含む、細菌の細胞成長を阻害または予防するための組成物。
- 局所使用のために処方される、請求項11に記載の組成物。
- 医薬品として使用される、請求項1〜10のいずれかに記載の改変バクテリオファージ。
- 細菌除染剤として使用される、請求項1〜10のいずれかに記載の改変バクテリオファージ。
- 細菌の細胞成長を阻害または予防するための医薬品を調製するための、請求項1〜10のいずれかに記載の改変バクテリオファージの使用。
- 標的細菌に感染することができる改変バクテリオファージを作製するためのプロセスであって、請求項1〜10のいずれかに記載のバクテリオファージをコードする遺伝物質を含む細菌宿主を成長培地において成長させる工程、前記バクテリオファージを前記細菌宿主において複製させる工程、および前記バクテリオファージを採取する工程を含む、プロセス。
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