JP6144967B2 - エタノールアミンオキシダーゼ - Google Patents
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Landscapes
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Description
[1]
下記(A)又は(B)の蛋白質:
(A)配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質;
(B)配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、下記式で表される反応を触媒する蛋白質。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2
[2]
下記(a)〜(d)のいずれかの塩基配列を含む遺伝子:
(a)配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードする塩基配列;
(b)配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、下記式で表される反応を触媒する蛋白質をコードする塩基配列:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;
(c)配列番号2に記載の塩基配列;
(d)配列番号2に記載の塩基配列において1又は複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列であって、下記式で表される反応を触媒する蛋白質をコードする塩基配列。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2
[3]
[2]に記載の遺伝子を含む組換えベクター。
[4]
[3]に記載の組換えベクターを含む形質転換体。
[5]
[4]に記載の微生物を培地で培養し、培養物中に[1]に記載の蛋白質を生成蓄積させ、該培養物から該蛋白質を採取することを特徴とする蛋白質の製造方法。
[6]
[1]に記載の蛋白質を用いるモノエタノールアミンの酸化方法。
[7]
[1]に記載の蛋白質を用いてモノエタノールアミンからグリコールアルデヒド、アンモニア、又は過酸化水素を製造する方法。
[8]
[1]に記載の蛋白質を含有するモノエタノールアミン酸化剤。
[9]
下記(1)及び(2):
(1)作用
下記式で表される反応を触媒する:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;及び
(2)比活性
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である;
の理化学的性質を有する蛋白質であって、さらに下記(3)〜(5):
(3)触媒効率(Vmax/Km)
モノエタノールアミンに対して10μmol・mg-1・min-1・mM-1以上である;
(4)金属イオン又はキレート剤の影響
Zn2+(5mM)で作用が阻害される、及び/又は
EDTA(5mM)で作用が実質的に阻害されない;及び
(5)基質特異性
アミルアミン及びヘキシルアミンに対し、チラミンに対するよりも高い活性を有する;
から選択されるいずれか1以上の理化学的性質を有する蛋白質。
[10]
(1)〜(3)の理化学的性質を有する蛋白質であって、さらに(4)及び(5)から選択されるいずれか1以上の理化学的性質を有する、[9]に記載の蛋白質。
[11]
(1)〜(5)の理化学的性質をいずれも有する、[9]に記載の蛋白質。
[12]
さらに下記(6)〜(11):
(6)等電点
pH5.2〜5.6の範囲である;
(7)至適pH
pH7.2〜7.5の範囲である;
(8)分子量
67〜81kDaの範囲である;
(9)pH安定性
4℃、pH6.5〜9の範囲で3時間保持後、80%以上の残存活性を有する;
(10)熱安定性
200mM Bis−Tris/塩酸緩衝液(pH7.2)中、37℃、30分間の熱処理後、90%以上の残存活性を有する;及び
(11)至適温度
43〜47℃の範囲である;
から選択されるいずれか1以上の理化学的性質を有する[9]〜[11]のいずれかに記載の蛋白質。
[13]
(6)及び(7)の理化学的性質を有する、[12]に記載の蛋白質。
[14]
(6)〜(11)の理化学的性質をいずれも有する、[12]に記載の蛋白質。
[15]
下記(1)及び(2):
(1)作用
下記式で表される反応を触媒する:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;及び
(2)比活性
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である;
の理化学的性質を有する蛋白質であって、配列番号12〜14に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質。
[16]
Syncephalastrum racemosum(NITE P−01594)由来である、[9]〜[15]のいずれかに記載の蛋白質。
[17]
下記(C)〜(E)のいずれかの蛋白質:
(C)配列番号2に記載の塩基配列によりコードされる蛋白質;
(D)配列番号2に記載の塩基配列において、1又は複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列によりコードされる蛋白質であって、下記式で表される反応を触媒する蛋白質:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;
(E)配列番号2に記載の塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列によりコードされる蛋白質であって、下記式で表される反応を触媒する蛋白質。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2
[18]
下記(2)〜(11):
(2)比活性
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である;
(3)触媒効率(Vmax/Km)
モノエタノールアミンに対して10μmol・mg-1・min-1・mM-1以上である;
(4)金属イオン又はキレート剤の影響
Zn2+(5mM)で作用が阻害される、及び/又は
EDTA(5mM)で作用が実質的に阻害されない;
(5)基質特異性
アミルアミン及びヘキシルアミンに対し、チラミンに対するよりも高い活性を有する;
(6)等電点
pH5.2〜5.6の範囲である;
(7)至適pH
pH7.2〜7.5の範囲である;
(8)分子量
67〜81kDaの範囲である;
(9)pH安定性
4℃、pH6.5〜9の範囲で3時間保持後、80%以上の残存活性を有する;
(10)熱安定性
200mM Bis−Tris/塩酸緩衝液(pH7.2)中、37℃、30分間の熱処理後、90%以上の残存活性を有する;及び
(11)至適温度
43〜47℃の範囲である;
から選択されるいずれか1以上の理化学的性質を有する[17]に記載の蛋白質。
[19]
(a)〜(d)のいずれかの塩基配列からなる、[2]に記載の遺伝子。
[20]
(e)配列番号2に記載の塩基配列に相補的な塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、下記式で表される反応を触媒する蛋白質をコードする塩基配列
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;
を含む遺伝子。
[21]
(e)の塩基配列からなる、[20]に記載の遺伝子。
[22]
下記(2)〜(11):
(2)比活性
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である;
(3)触媒効率(Vmax/Km)
モノエタノールアミンに対して10μmol・mg-1・min-1・mM-1以上である;
(4)金属イオン又はキレート剤の影響
Zn2+(5mM)で作用が阻害される、及び/又は
EDTA(5mM)で作用が実質的に阻害されない;
(5)基質特異性
アミルアミン及びヘキシルアミンに対し、チラミンに対するよりも高い活性を有する;
(6)等電点
pH5.2〜5.6の範囲である;
(7)至適pH
pH7.2〜7.5の範囲である;
(8)分子量
67〜81kDaの範囲である;
(9)pH安定性
4℃、pH6.5〜9の範囲で3時間保持後、80%以上の残存活性を有する;
(10)熱安定性
200mM Bis−Tris/塩酸緩衝液(pH7.2)中、37℃、30分間の熱処理後、90%以上の残存活性を有する;及び
(11)至適温度
43〜47℃の範囲である;
から選択されるいずれか1以上の理化学的性質を有する蛋白質をコードする、[19]〜[21]のいずれかに記載の遺伝子。
[23]
[19]〜[22]のいずれかに記載の遺伝子を含む組換えベクター。
[24]
[23]に記載の組換えベクターを含む形質転換体。
[25]
[1]及び[9]〜[18]のいずれかに記載の蛋白質を生産することを特徴とする微生物。
[26]
Syncephalastrum racemosum(NITE P−01594)である、[25]に記載の微生物。
[27]
下記(1)及び(2):
(1)作用
下記式で表される反応を触媒する:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;及び
(2)比活性
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である;
の理化学的性質を有する蛋白質の製造方法であって:
[24]〜[26]のいずれかに記載の微生物を培地で培養し、培養物中に上記(1)及び(2)の理化学的性質を有する蛋白質を生成蓄積させ、該培養物から該蛋白質を採取することを特徴とする蛋白質の製造方法。
[28]
[9]〜[18]のいずれかに記載の蛋白質を用いるモノエタノールアミンの酸化方法。
[29]
[9]〜[18]のいずれかに記載の蛋白質を用いてモノエタノールアミンからグリコールアルデヒド、アンモニア、又は過酸化水素を製造する方法。
[30]
[9]〜[18]のいずれかに記載の蛋白質を含有するモノエタノールアミン酸化剤。
[31]
ホスファチジルエタノールアミン(PE)の定量方法であって:
PEを加水分解してホスファチジン酸とモノエタノールアミンを得る工程;
得られモノエタノールアミンから、[1]及び[9]〜[18]のいずれかに記載の蛋白質を用いて過酸化水素を発生させる工程;及び
発生した過酸化水素を定量する工程;
を含む方法。
なお、本発明の蛋白質は銅イオンの存在下に下記(1)〜(11)の理化学的性質を有するものであってもよく、特に2価の銅イオンと錯体を形成して下記(1)〜(11)の理化学的性質を有するものであってもよい。
酸素及び水の存在下でモノエタノールアミンを酸化し、グリコールアルデヒド、アンモニア、及び過酸化水素を得る反応を触媒する。
上記(1)の作用で触媒される反応は〔式1〕で表すこともできる。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O
→HOCH2CHO+NH3+H2O2・・・〔式1〕
pH7.5及び37℃の条件下におけるモノエタノールアミンに対する比活性が、10μmol/mg/min以上である。
モノエタノールアミンに対して10μmol・mg-1・min-1・mM-1以上である。
触媒効率 = Vmax/Km・・・〔式2〕
Zn2+(5mM)で作用が阻害される、及び/又は
EDTA(5mM)で作用が実質的に阻害されない。
Mn2+(5mM)存在下で作用が50%以上阻害される;
Ca2+(5mM)で作用が実質的に阻害されない;及び
Mg2+(5mM)で作用が実質的に阻害されない。
アミルアミン及びヘキシルアミンに対し、チラミンに対するよりも高い活性を有する。
<1>チラミンに対して175〜195%;
<2>アグマチンに対して47〜67%;
<3>ヘキシルアミンに対して354〜374%;
<4>アミルアミンに対して366〜386%;
<5>フェニルエチルアミンに対して183〜203%。
下記〔式3〕に示すように、基質に対する本発明の蛋白質の作用により生成する過酸化水素と、ペルオキシダーゼとを用いて、N,N−ビス(4−スルホブチル)−3−メチルアニリン(TODB)と4−アミノアンチピリン(4AA)の酸化的カップリング反応を行う。これにより生成するキノン色素を比色定量分析することにより、本発明の蛋白質がモノエタノールアミンを酸化する活性を測定する。〔式3〕から明らかなように、本発明の蛋白質の作用で製造される過酸化水素2モルに対して、1モルの、546nmに吸収波長をもつQuinone Dyeが生成する。
石英製の1.0cmキュベットに反応試薬混合液1をとり、37℃で5分間予備加温する。反応試薬混合液1中の本発明の蛋白質溶液は200mM Tris/HCl緩衝液(pH7.5)で適当な濃度に希釈したものである。反応試薬混合液2を混和して、546nmにおける吸光度を10分間測定し、求められた吸光変化をAs/min、本発明の蛋白質溶液の代わりに精製水を用いた盲検をAb/minとして、1分間に1μmolのエタノールアミンを酸化する酵素量を1Uとし、酵素活性(U/mL)を下記〔式4〕により算出する。
酵素活性(U/mL)
={(As/min−Ab/min)/18}×0.32/0.05×希釈倍数・・〔式4〕
200mM Tris/HCl緩衝液 pH7.5 190μL
50U/mL ペルオキシダーゼ 16μL
本発明の蛋白質溶液 50μL
[反応試薬混合液2]
40mM 基質 32μL
0.2% TODB 16μL
0.3% 4AA 16μL
pH5.2〜5.6の範囲である。
pH7.2〜7.5の範囲である。
67〜81kDaの範囲である。
4℃、pH6.5〜9の範囲で3時間保持後、80%以上の残存活性を有する;及び/又は
4℃、pH5.5〜9.5の範囲で3時間保持後、60%以上の残存活性を有する。
200mM Bis−Tris/塩酸緩衝液(pH7.2)中、37℃、30分間の熱処理後、90%以上の残存活性を有する;及び/又は
200mM Bis−Tris/塩酸緩衝液(pH7.2)中、45℃、30分間の熱処理後、40%以上の残存活性を有する。
43〜47℃の範囲である。
本実施例では、Syncephalastrum racemosum由来のモノエタノールアミンオキシダーゼ(本発明の蛋白質)の製造方法を示す。なお、蛋白質濃度はBCA法でウシ血清アルブミンを標準蛋白として、Protein Assay Reagent Kit(Thermo SCIENTIFIC、Product # 23225)を用いて測定した。また、活性は、上記[本発明の蛋白質の活性測定方法]の通りに測定した。
非特許文献1に記載の、Arthrobacter属由来のエタノールアミンオキシダーゼの比活性を計算すると0.0621μmol/min/mgとなる。
非特許文献2に記載の、Phormia regina由来のエタノールアミンオキシダーゼの比活性を計算すると0.00026μmol/min/mgとなる。
非特許文献3に記載の、Arthrobacter sp.(FERM P−06240、BP−0421)由来の一級アミンオキシダーゼの比活性を計算すると9μmol/min/mgとなる。
本実施例では本発明の蛋白質の作用を確認した。本発明の蛋白質の活性測定方法は上記の通りであり、本発明の蛋白質の作用で製造される過酸化水素2モルに対して1モルの、546nmに吸収波長をもつQuinone Dyeが生成する。図1は実施例1のCell−free extract(黒丸)と該Cell−free extractを98℃20分間の熱処理したもの(白丸)について、上記の活性測定方法に供し、546nmの吸光変化を測定した結果を示す。図1から明らかなように、546nm吸光が経時的に増加していることから、実施例1のCell−free extractに含まれる本発明の蛋白質の作用により過酸化水素が製造され、その作用は98℃20分間の熱処理で認められなくなることが確認された。
表2に、各種基質に対する本発明の蛋白質の作用を、実施例2に記載の手法に準じて測定した結果を示す。結果は、エタノールを基質とした場合の測定値を100として、相対活性で示した。表2から、本発明の蛋白質は、ヘキシルアミン及びアミルアミンに対して高い活性を有することが明らかになった。
非特許文献3に記載のArthrobacter sp.(FERM P−06240、BP−0421)由来の一級アミンオキシダーゼの、モノエタノールアミンを酸化する活性を100%とした場合のチラミンに対する相対活性は約244%である(非特許文献3、Table3。
本実施例では、実施例1で製造した本発明の蛋白質の〔式1〕の反応に係る触媒効率をHanes−Woolfプロットにより求めた。図2に示したHanes−Woolfプロットによる本発明の蛋白質のモノエタノールアミンに対する最大反応速度Vmaxとミカエリス定数Kmは26μmol/min/mgと0.26mMであった。これらの値から〔式2〕により算出した本発明の触媒効率(Vmax/Km)は100μmol・mg-1・min-1・mM-1であり、10μmol・mg-1・min-1・mM-1以上であった。
非特許文献3に記載のArthrobacter sp.(FERM P−06240、BP−0421)由来の一級アミンオキシダーゼのモノエタノールアミンに対する触媒効率(Vmax/Km)は、0.6μmol・mg-1・min-1・mM-1である(非特許文献3、Table3)。
本実施例では、本発明の蛋白質の分子量をSDS−PAGE法と配列番号1のアミノ酸配列から計算することにより求めた。実施例1で製造した本発明の蛋白質のSDS−PAGE分析結果を図3に示した。SDS−PAGEのゲルは12%で、レーン1の分子量マーカーはBio―Rad社のBroad range(カタログナンバー161−0311)である。図3に示したように、SDS−PAGE法により求めた本発明の蛋白質の分子量は約70kDaであった。また、本発明の蛋白質は、下記実施例12に記載のとおり、配列番号1のアミノ酸配列を有する。本発明の蛋白質の分子量を配列番号1のアミノ酸配列から計算すると77143.1である。測定値の誤差等を考慮し、本実施例により、本発明の蛋白質の分子量は67〜81kDaの範囲であると考えられた。
本実施例では、本発明の蛋白質の等電点を配列番号1のアミノ酸配列をもとに、酸性/塩基性アミノ酸の数とpKaから計算した。本発明の蛋白質は配列番号1のアミノ酸配列から明らかなように、Arg、His、Lys、Asp、Cys、Glu、及びTyrの数がそれぞれ33、25、32、45、11、45、及び29であり、それぞれのpKaを12.5、6.0、10.5、3.9、8.3、4.3、及び10.1とすると、本発明の蛋白質の等電点は5.38と計算できる。この計算値は、蛋白質の構造等を考慮していないため、本実施例により、本発明の蛋白質の等電点がpH5.2〜5.6の範囲であると考えられた。
本実施例では、実施例1で製造した本発明の蛋白質の作用に対する金属イオン又はキレート剤(金属イオン等)(5mM)の影響を測定した。実施例2の方法を用いて、本発明の蛋白質の作用を、それぞれ5mMのCa2+、Mg2+、EDTA、Mn2+、又はZn2+の存在下或いはそれらの非存在下で測定した。金属イオン等の非存在下における本発明の蛋白質の活性を100とし、各金属イオン等の存在下における活性を相対活性として表4に示した。
本実施例では、実施例1で製造した本発明の蛋白質の至適pHを測定した。緩衝液として、グリシン−NaOH緩衝液(pH9〜10.5)、HEPES/NaOH緩衝液(pH7.5〜9)、Tris/HCl緩衝液(pH7.2〜8.8)、BisTris/HCl緩衝液(pH5.6〜7.2)又はクエン酸/NaOH緩衝液(pH4.1〜5.6)を用いて、実施例2に記載の方法に準じて活性を測定した結果を、図4に示す。活性は、pH7.2における測定値を100とする相対活性で示した。図4から明らかなように、本発明の蛋白質は、pH5.5〜8.5の範囲で活性を有し、特にpH7.2で最大の活性を示した。本実施例により、本発明の蛋白質の至適pHは、90%以上の相対活性を示すpH7.2〜7.5の範囲にあると考えられた。
本実施例では、本発明の蛋白質のpH安定性を測定した。実施例1において、HiTrap Qを使用したクロマトグラフィーで得られた、本発明の蛋白質を含む画分(20.5U/mg、548mU/mL)を、実施例8と同様各種pHの50mM緩衝液で5倍希釈し、各緩衝液に置換し、4℃で3時間保持した後、実施例2と同様の手法により残存活性を測定した。結果を図5に示す。図5中、4本の折れ線は、左から:クエン酸/NaOH緩衝液(pH4.0〜5.6);BisTris/HCl緩衝液(pH5.6〜7.0);HEPES/NaOH緩衝液(pH7.0〜8.4)及びグリシン−NaOH緩衝液(pH8.8〜10.5)を示す。図5から明らかなように、本発明の蛋白質は、4℃で3時間保持後、pH6.5〜9の範囲で80%以上の活性を保持し、pH5.5〜9.5の範囲で60%以上の活性を保持した。本実施例により、本発明の蛋白質のpH安定性について、4℃、pH6.5〜9の範囲で3時間保持後、80%以上の残存活性を有することが示された。
本実施例では、本発明の蛋白質の熱安定性を測定した。実施例1において、HiTrap Qを使用したクロマトグラフィーで得られた、本発明の蛋白質を含む画分(20.5U/mg、548mU/mL)を、表5に記載の各温度でpH7.2になるよう調製した0.2M Bis−Tris/塩酸緩衝液で5倍希釈し、表5に記載の各温度で30分間熱処理した後、実施例2に記載の手法を用いて残存活性を測定した。各温度について3回の測定を行い、得られた最大の残存活性を表5に示した。
本実施例では、本発明の蛋白質の反応至適温度を測定した。実施例1において、HiTrap Qを使用したクロマトグラフィーで得られた、本発明の蛋白質を含む画分(20.5U/mg、548mU/mL)の活性を、測定温度を20〜60℃に変化させ、実施例2に記載の手法に準じて測定した。最大の活性を示した温度である45℃の結果を100とし、各温度における測定値を相対活性として図6に示した。本実施例により、本発明の蛋白質は少なくとも20〜60℃の範囲で作用し、最大の活性を示す45℃と比較して、43〜47℃の範囲で90%以上の活性を示すことが示された。
実施例1で用いたSyncephalastrum racemosum(NITE P−01594)のゲノムDNAを、NucleoSpin Plant II(タカラバイオ株式会社、製品コード740770.10)を用いて精製した。精製した該ゲノムDNAをテンプレートにし、配列番号3に記載の塩基配列をセンスプライマー、配列番号4に記載の塩基配列をアンチセンスプライマーとして、KOD FX(東洋紡績株式会社、Code No.KFX−101)を用いてPCRし、PCR産物1を得た。PCR産物1の塩基配列は配列番号5の通りであり、イントロンを含む配列であることが予想された。
実施例12で得られたPCR産物2をテンプレートにし、配列番号8に記載の塩基配列をセンスプライマー、配列番号9に記載の塩基配列をアンチセンスプライマーとして、KOD FXを用いてPCRし、PCR産物3を得た。得られたPCR産物3をZero Blunt PCR Cloning Kit(Invitrogen、製品番号K2700−20)を用いてpCR−Bluntにクローニングして、本発明の蛋白質をコードする塩基配列からなるポリヌクレオチドを含む組換えベクターEAO/pCR−Bluntを得た。
実施例13で得た組換えベクターEAO/pCR−Bluntを、One Shot TOP10 Chemically Competent E.coli(Invitrogen、製品番号C4040−10)に形質転換して本発明の蛋白質をコードする塩基配列からなるポリヌクレオチドを含む組換えベクターを有する形質転換体EAO/pCR−Blunt/Top10を得た。
実施例14で得た形質転換体EAO/pET−21a(+)を、50μg/mlのアンピシリンを含む、100mL(500mL三角フラスコ)のOvernight Express Instant TB Medium(メルク、注文番号71757−5)に植菌した。20℃で4日間振とう培養して培養液を遠心分離して集菌し、20mLの10μM硫酸銅を含む20mM Tris/HCl緩衝液(pH8.5)に懸濁し超音波破砕して、遠心分離し、得られた上清を粗蛋白質液とした。粗蛋白質液について、実施例2に記載の手法に準じて測定した、上記〔式1〕で表される反応を触媒する総活性は約100Uであった。
実施例12で得られた本発明の蛋白質のアミノ酸配列(配列番号1)の配列解析の結果、銅イオンと複合体を形成する一級アミンオキシダーゼに特徴的な、銅のキレートに関与するコンセンサス配列である、配列番号12及び13の2つのアミノ酸配列が存在することが明らかになった。
Claims (8)
- 下記(A)又は(B)の蛋白質:
(A)配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質;
(B)配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、下記式で表される反応を触媒する蛋白質。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2 - 下記(a)〜(d)のいずれかの塩基配列を含む遺伝子:
(a)配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードする塩基配列;
(b)配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、下記式で表される反応を触媒する蛋白質をコードする塩基配列:
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2;
(c)配列番号2に記載の塩基配列;
(d)配列番号2に記載の塩基配列において1又は複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列であって、下記式で表される反応を触媒する蛋白質をコードする塩基配列。
HOCH2CH2NH2+O2+H2O→HOCH2CHO+NH3+H2O2 - 請求項2に記載の遺伝子を含む組換えベクター。
- 請求項3に記載の組換えベクターを含む形質転換体。
- 請求項4に記載の微生物を培地で培養し、培養物中に請求項1に記載の蛋白質を生成蓄積させ、該培養物から該蛋白質を採取することを特徴とする蛋白質の製造方法。
- 請求項1に記載の蛋白質を用いるモノエタノールアミンの酸化方法。
- 請求項1に記載の蛋白質を用いてモノエタノールアミンからグリコールアルデヒド、アンモニア、又は過酸化水素を製造する方法。
- 請求項1に記載の蛋白質を含有するモノエタノールアミン酸化剤。
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