JP6077710B2 - がん療法のためのリポソームシスプラチン組成物 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／７８０，２７２号に対する優先権の利益を請求し、その内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

連邦政府による支援を受けた研究開発下でなされた発明に対する権利に関する陳述
適用されず
「配列表」、表、またはコンパクトディスクで提出されたコンピュータプログラム一覧の添付書類に対する言及
適用されず

本発明の背景
白金ベースの薬物（または「プラチン」）は効果的な抗がん薬物であり、がん細胞におけるＤＮＡおよびＲＮＡ合成を遮断するＤＮＡ付加物を形成し、アポトーシスを誘導する。シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンは、卵巣、肺、結腸直腸、精巣、膀胱、胃、メラノーマ、および頭頸部がんを含めた、多数の固形腫瘍を処置するために用いられる主要なプラチンである。しかしながら、プラチンの主な欠点は毒性である。一般的な副作用は、腎臓および神経の損傷、ハイエンドの（ｈｉｇｈ−ｅｎｄ）聴力喪失、長期間の吐き気、および嘔吐を含む。

シスプラチン（シス−ＰｔＣｌ_２（ＮＨ_３）_２；式Ｉとして以下に示される）は、種々のがんの処置のために１９７８年にＦＤＡによって認可され、それ以来、がん処置のために用いられてきた。シスプラチンは、平面状分子構造を呈し、２５〜３７℃において０．９％食塩水に対して約１〜２ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する（６５℃において８ｍｇ／ｍＬ）。シスプラチンは、食塩水（塩化ナトリウム溶液）において患者に静脈内投与され、受動的拡散またはその他の促進輸送メカニズムのいずれかによって細胞に入る。一旦細胞質の内部に入ると、シスプラチンは加水分解を受ける。塩化物リガンドは、各々、水の分子によって置き換えられ、正電荷を持つ分子を生じる。荷電していない種は反応性ではないが、一価カチオン種および二価カチオン種は最も反応性である。

シスプラチンは特に毒性の薬物である。該薬物の使用に関していくつかの欠点がある：ａ）主要な投与量制限因子である、腎毒性、神経毒性および催吐性などの、その重篤な毒性；ｂ）短い循環半減期をもたらす、腎臓を介したその迅速な排出、ｃ）血漿タンパク質に対するその強い親和性；およびｄ）室温における約１ｍｇ／ｍＬの制限された水溶解度。腫瘍部位において局所的にシスプラチンの濃度を増加させるであろう製剤を開発することが望ましい。他の組織におけるシスプラチンの蓄積を減少させて、毒性副作用を最小化することも望ましい。

リポソームは、薬物の毒性を低下させる試みにおいて、プラチン用の送達ビークルとして用いられてきた。リポソームは、外部の水相と内部の水相とを分離するリン脂質二重層を含む小胞である。リポソームは、脂質二重層中の疎水性薬物および／または薬物送達用の水性コア中の親水性薬物の両方を保持することができる。リポソームの大きさは、典型的には、直径が５０〜２５０ｎｍの範囲であり、５０〜１５０ｎｍの直径が、ある種の適用のために特に好ましい。シスプラチンを含めたリポソームプラチンの使用は、かなりの難題を提示してきた。リポソームプラチンは、遊離薬物と比較して、分布、代謝、および体からの排出の独特なパターン、ならびに様々な毒性レベルおよび独特な副作用を示す。特に、リポソームプラチンの放出速度を最適化することは、安全性と有効性との間の難しい均衡を保つ行為である。一般に、漏洩性リポソームは、封入薬物をより利用しやすくするであろうが、天然の薬物と同様に、毒性におけるより高い危険性を引き起こす。他方、漏洩性の低いリポソームは毒性を低下させ得るが、適切な有効性のための十分な薬物放出を提供できないことがある。

米国特許第６，１２６，９６６号（‘９６６特許）は、立体的に安定化されたリポソームシスプラチンを記載する。具体的には、リポソーム組成物は、１〜２０モル％の、荷電していないキャップを有する親水性ポリマーを持つビークル形成脂質誘導体（例えば、ポリ（エチレングリコール）修飾リン脂質）を含む小胞形成性脂質（例えば、ホスファチジルコリン）のものとして記載されており、前記リポソームは、親水性ポリマーが、リポソームの内側と外側の両方の表面に親水性ポリマー鎖のコーティングを形成するように形成される。しかしながら、別の報告は、種々の濃度でポリ（エチレングリコール）−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００）を含有するジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）分散液の低温ＴＥＭ画像を含むものであった（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌｕｍｅ ８５、２００３年１２月、３８３９−３８４７頁）。該画像は、７．１モル％の低いＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００ ＤＳＰＣを含有する混合物が、‘９６６特許で特許請求されるリポソームとは反対に、大部分がミセルであったことを示した。さらに、‘９６６特許に記載された立体的に安定化されたリポソームシスプラチンは、第ＩＩ相試験において限定されたイン・ビボ有効性を示した（Ｆｅｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５４：４４１−４４８、２００４）。明らかに、イン・ビボ半減期および薬物放出プロフィールを含めた、リポソームの構造および物理的特性は、リポソームの構成に基づいて単純には予測できない。
既知の製剤の欠点を考えると、既存のリポソームおよび非リポソームプラチン治療剤と比較して改善された特性を備えたリポソームシスプラチンを開発することが望ましい。有効性と安全性とが均衡しており、標的とするがん細胞に対するシスプラチンの生物学的利用性を改善する製剤に対する要望が存在する。本発明は、これらおよび他の要望に取り組む。

米国特許第６，１２６，９６６号明細書

Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌｕｍｅ ８５、２００３年１２月、３８３９−３８４７頁 Ｆｅｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５４：４４１−４４８、２００４

１つの態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、（ａ）５０〜７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、２０〜４５モル％のコレステロール、および２〜８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含む。

第二の態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、（ａ）５０〜６５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、３０〜４５モル％のコレステロール、および２〜８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約６５：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含む。

別の態様において、本発明は、がんを処置する方法を提供する。該方法は、本発明の組成物を、投与を必要とする被験体に投与することを含む。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
（ａ）約５０モル％〜約７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約２０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９５：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
を含む、がんの処置用の組成物。
（項目２）
前記ホスファチジルコリン脂質が、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）よりなる群から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記ホスファチジルコリン脂質がＰＯＰＣである、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記ホスファチジルコリン脂質がＤＳＰＣおよびＤＰＰＣを含む、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記ホスファチジルコリン脂質がＤＳＰＣである、項目１に記載の組成物。
（項目６）
前記ＰＥＧ−脂質が、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、Ｎ−アシル−スフィンゴシン−１−｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、およびそれらの混合物よりなる群から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−５０００）よりなる群から選択される、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記双性イオン性リポソームが、約４０〜５０モル％のＤＳＰＣ、約１５〜２５モル％のＤＰＰＣ、約２５〜３５モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記双性イオン性リポソームが、約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記双性イオン性リポソームが、約５５〜７５モル％のＤＳＰＣ、約２０〜４０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記双性イオン性リポソームが、約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記双性イオン性リポソームが、約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
前記全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜９０：１である、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
前記全脂質重量対シスプラチン重量の比が約９０：１である、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
前記双性イオン性リポソームが、約７５〜約１２５ｎｍの平均粒径（体積平均）を有する、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
前記双性イオン性リポソームが、約９０ｎｍの平均粒径（体積平均）を有する、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
前記双性イオン性リポソームが、
ａ）前記ホスファチジルコリン脂質、前記コレステロール、前記ＰＥＧ−脂質、およびＣ_１−４アルカノールおよびＣ_１−４アルカノール／水混合物よりなる群から選択される溶媒を含む脂質溶液を形成し；
ｂ）該脂質溶液を水性緩衝液と混合して、多層小胞（ＭＬＶ）を形成し；
ｃ）該ＭＬＶを多孔性フィルターを通して押し出して、小型単層小胞（ＳＵＶ）を形成し；
それにより、前記双性イオン性リポソームを形成することを含む方法によって調製される、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
前記シスプラチンの封入が、前記ＭＬＶの形成中に前記水性緩衝液中に前記シスプラチンを含ませ、封入されていないシスプラチンを除去することによって行われる、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記方法が、さらに；
ｄ）前記双性イオン性リポソームを滅菌濾過すること
を含む、項目１７に記載の組成物。
（項目２０）
がんを処置する方法であって、該方法が、項目１に記載の組成物を、投与を必要とする被験体に投与することを含む方法。
（項目２１）
前記組成物が：
ａ）約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記組成物が：
ａ）約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約７０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記組成物が：
ａ）約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
を含む、項目２０に記載の方法。

図１は、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ２０００（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）を含む、および含まない、リポソームシスプラチン製剤のＴＥＭ顕微鏡写真を示す。

図２は、様々な量のＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含有するリポソームシスプラチン製剤のＴＥＭ顕微鏡写真を示す。

図３は、様々な量のＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００を含有するリポソームシスプラチン製剤のＴＥＭ顕微鏡写真を示す。

図４は、マウスＫＢ腫瘍モデルにおける種々のリポソームシスプラチン製剤の投与から得られた最大耐性用量（ＭＴＤ）およびＤＮＡ／Ｐｔ付加物レベルを示す。

図５は、経時的なマウスＫＢ腫瘍モデルにおけるＤＮＡ／Ｐｔ付加物の形成を示す。

図６は、リポソームシスプラチン製剤の投与後における、経時的なヌードマウスでのＫＢ腫瘍のメジアン成長を示す。

図７は、リポソームシスプラチン製剤の投与の後における、経時的なヌードマウスでのＡ４２７腫瘍の平均成長を示す。

Ｉ．概要
本発明は、がん療法用のリポソームシスプラチン組成物に関する。本明細書に記載されるリポソーム組成物は、ホスファチジルコリン、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コンジュゲート化脂質、および封入したシスプラチンより実質的になる。当業者であれば、該組成物は、しばしば、封入媒体または緩衝液、および外部媒体を含むと認識する。該組成物を調製する方法および該組成物でのがんの処置も記載される。該組成物は、がん細胞において細胞内シスプラチンの生物学的利用性を増強し、がん処置のための全体的な安全性を改善するために特に有用である。該組成物は、がんを予防し、制御し、多数の利点を患者および臨床家に提供するために広く適用可能である。

ＩＩ．定義
本明細書中で用いる場合、用語「リポソーム」は、脂質二重層によって包まれたあらゆる区画を含む。用語リポソームは、単一の脂質二重層よりなり、一般には、約２０〜約４００ｎｍの範囲の直径を有する単層小胞を含む。リポソームは、一般に、１〜１０μｍの範囲の直径を有する多層であってもよい。いくつかの実施態様において、リポソームは、多層小胞（ＭＬＶ；大きさは約１μｍ〜約１０μｍ）、大型単層小胞（ＬＵＶ；大きさは数百ナノメートル〜約１０μｍ）、および小型単層小胞（ＳＵＶ；大きさは約２０ｎｍ〜約２００ｎｍ）を含むことができる。

本明細書中で用いる場合、用語「双性イオン性リポソーム」とは、同じ脂質分子中に正電荷を持つ官能基と負電荷を持つ官能基の両方を持つ脂質を含有するリポソームをいう。双性イオン性リポソームの全体的な表面電荷は、外部媒体のｐＨに応じて変化する。一般に、双性イオン性リポソームの全体的な表面電荷は、生理学的ｐＨ（すなわち、ｐＨ約７．４）において中性または負である。

本明細書中で用いる場合、用語「リポソームの大きさ」および「平均粒径」とは、リポソームの外径をいう。平均粒径は、動的光散乱（ＤＬＳ）、準弾性光散乱（ＱＥＬＳ）、および電子顕微鏡観察を含めた多数の技術によって決定することができる。

本明細書中で用いる場合、用語「モルパーセント（ｍｏｌａｒ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ）」および「モル％」とは、リポソームの所定の脂質成分のモル数を全ての脂質成分の合計モル数で割ったものをいう。明示的に述べない限り、リポソームの脂質成分についてモル％を計算する場合に、活性剤、希釈剤、または他の成分の量は含まれない。

本明細書中で用いる場合、用語「ホスファチジルコリン脂質」とは、コリン頭部基（すなわち、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）を有するジアシルグリセリドリン脂質をいう。ホスファチジルコリン脂質中のアシル基は、一般に、６〜２４個の炭素原子を有する脂肪酸に由来する。ホスファチジルコリン脂質中の２つのアシル基は、同じ数の炭素原子または異なる数の炭素原子を有することができる。ホスファチジルコリン脂質は、合成および天然由来の１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含むことができる。

本明細書中で用いる場合、用語「コレステロール」とは、２，１５−ジメチル−１４−（１，５−ジメチルヘキシル）テトラシクロ［８．７．０．０^２，７．０^{１１，１５}］ヘプタコス−７−エン−５−オール（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ登録番号５７−８８−５）をいう。

本明細書中で用いる場合、用語「ＰＥＧ−脂質」とは、疎水性または両親媒性脂質部分に共有結合したポリ（エチレングリコール）ポリマーをいう。脂質部分は、脂肪、ワックス、ステロイド、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、およびスフィンゴ脂質を含むことができる。好ましいＰＥＧ−脂質は、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］およびＮ−アシル−スフィンゴシン−１−｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝を含む。ＰＥＧ−脂質中のＰＥＧの分子量は、一般に、約５００〜約５０００ダルトン（Ｄａ；ｇ／モル）である。ＰＥＧ−脂質中のＰＥＧは、線状または分岐状構造を有することができる。

本明細書中で用いる場合、用語「シスプラチン」とは、（ＳＰ−４−２）−ジアンミンジクロリド白金（ＩＩ）（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ登録番号１５６６３−２７−１）をいう。

本明細書中で用いる場合、用語「組成物」とは、特定量の特定成分を含む生成物、ならびに特定量の特定成分の組合せから直接的にまたは間接的に得られるあらゆる生成物をいう。本発明の医薬組成物は、一般に、本明細書に記載されたリポソームシスプラチンおよび薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含有する。「薬学的に許容され得る」とは、担体、希釈剤、または賦形剤が製剤の他の成分と適合しなければならず、かつその受容者にとって有害であってはならないことを意味する。

本明細書中で用いる場合、用語「アルカノール」とは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有するＣ_１−４アルカンをいう。アルカノールは、限定されるものではないが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、およびｔ−ブタノールを含む。

本明細書中で用いる場合、用語「多孔性フィルター」とは、規定された直径（例えば、３０〜１０００ｎｍ）を持つ孔を含有するポリマー膜または無機膜をいう。多孔性フィルターは、限定されるものではないが、ポリカーボネートおよびポリエステルを含むポリマー、ならびに限定されるものではないが、多孔性アルミナを含む無機基材で作製することができる。

本明細書中で用いる場合、用語「滅菌濾過」とは、微生物および／またはウィルスを濾液から排除する能力を持つフィルターに組成物を通すことによる組成物の滅菌をいう。一般に、滅菌に用いられるフィルターは、フィルターを通ってリポソームが濾液へと通過することを可能とするのに十分大きいが、細菌または真菌などの生物の通過を遮断するのに十分小さな孔を含有する。

本明細書中で用いる場合、用語「がん」とは、ヒトのがんおよび癌、肉腫、腺癌、リンパ腫、白血病、および固形がんおよびリンパ性がんを含めた状態をいう。様々なタイプのがんの例としては、限定されるものではないが、肺がん（例えば、非小細胞肺がんまたはＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、前立腺がん、結腸直腸がん、肝臓がん（すなわち、肝癌）、腎臓がん（すなわち、腎臓細胞癌）、膀胱がん、乳がん、甲状腺がん、胸膜がん、膵臓がん、子宮がん、子宮頸がん、精巣がん、肛門がん、膵臓がん、胆管がん、胃腸カルチノイド腫瘍、食道がん、胆嚢がん、虫垂がん、小腸がん、胃（胃の）がん、中枢神経系のがん、皮膚がん、絨毛がん、頭頸部がん、血液がん、骨原性肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、膠腫、メラノーマ、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、および多発性骨髄腫が挙げられる。

本明細書中で用いる場合、用語「処置する」、「処置すること」および「処置」とは、症状の緩和；軽快；縮小、またはがんまたはがん症状を患者にとってより許容できるものとするようなあらゆる客観的または主観的パラメータを含めた、がんまたはがんの症状の処置または軽減における成功のあらゆる兆候をいう。症状の処置または軽減は、例えば、理学的検査または臨床検査の結果を含めた、あらゆる客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

本明細書中で用いる場合、用語「投与する」、「投与された」、または「投与すること」とは、本発明のリポソーム組成物を投与する方法をいう。本発明のリポソーム組成物は、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、または腹腔内を含めた種々の方法で投与することができる。リポソーム組成物は、組成物または製剤の一部として投与することもできる。

本明細書中で用いる場合、用語「被験体」とは、一生のいずれかの段階におけるいずれかの哺乳動物、特にヒトをいう。

本明細書中で用いる場合、用語「約」は、特定の値を修飾するのに用いられる場合、その数値の前後の近い範囲を示す。「Ｘ」が値である場合、例えば、「約Ｘ」は、０．９Ｘ〜１．１Ｘの値、より好ましくは、０．９５Ｘ〜１．０５Ｘの値を示す。「約Ｘ」へのあらゆる言及は、少なくとも値Ｘ、０．９Ｘ、０．９１Ｘ、０．９２Ｘ、０．９３Ｘ、０．９４Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、１．０５Ｘ、１．０６Ｘ、１．０７Ｘ、１．０８Ｘ、１．０９Ｘ、および１．１Ｘを具体的に示す。

ＩＩＩ．本発明の実施態様
リポソーム
１つの態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、（ａ）約５０モル％〜約７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約２０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含む。

別の態様において、本発明は、がんの処置用の組成物を提供する。該組成物は、（ａ）約５０モル％〜約６５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約３０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約６５：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含む。

本発明のリポソームは、あらゆる適切なホスファチジルコリン脂質（ＰＣ）またはＰＣの混合物を含有することができる。適切なホスファチジルコリン脂質は、飽和ＰＣおよび不飽和ＰＣを含む。

飽和ＰＣの例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジミリストイルホスファチジルコリン；ＤＭＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ）、および１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＭＰＣ）が挙げられる。

不飽和ＰＣの例としては、限定されるものではないが、１，２−ジミリストレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジミリステライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミテライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジペトロセレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン；ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＯＰＣ）、１−ステアロイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−オレオイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＭＰＣ）、１−オレオイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＰＰＣ）、および１−オレオイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＳＰＣ）が挙げられる。

卵ＰＣ、心臓抽出物、脳抽出物、肝臓抽出物、大豆ＰＣ、および水素添加大豆（ＨＳＰＣ）などの脂質抽出物もまた本発明で有用である。

いくつかの実施態様において、ホスファチジルコリン脂質は、ＰＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＣ、およびＤＰＰＣから選択される。いくつかの実施態様において、ホスファチジルコリン脂質はＰＯＰＣである。いくつかの実施態様において、ホスファチジルコリン脂質はＤＳＰＣおよびＤＰＰＣを含む。

一般に、本発明の組成物は、５０〜７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物を含有するリポソームを含む。リポソームは、例えば、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５モル％のホスファチジルコリンを含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは５０〜５５モル％のホスファチジルコリンを含有する。一般に、本発明の組成物は、５０〜６５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物を含有するリポソームを含む。いくつかの実施態様において、リポソームは、５５〜６５モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、６５〜７５モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約７５モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約７０モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約６５モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約６０モル％のホスファチジルコリンを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約５５モル％のホスファチジルコリンを含有する。

本発明の組成物中のリポソームは、２０〜４５モル％のコレステロール（すなわち、２，１５−ジメチル−１４−（１，５−ジメチルヘキシル）テトラシクロ［８．７．０．０^２，７．０^{１１，１５}］ヘプタコス−７−エン−５−オール）も含有する。リポソームは、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５モル％のコレステロールを含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは、２０〜３０モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、３０〜４０モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、３０〜４５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、４０〜４５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約２０モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約２５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約３０モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約３５モル％のコレステロールを含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約４０モル％のコレステロールを含有する。

本発明のリポソームは、任意の適切なポリ（エチレングリコール）−脂質誘導体（ＰＥＧ−脂質）を含むことができる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質は、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、Ｎ−アシル−スフィンゴシン−１−｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、およびそれらの混合物から選択される。ＰＥＧ−脂質中のポリ（エチレングリコール）の分子量は、一般に、約５００Ｄａ〜約５０００Ｄａの範囲である。ポリ（エチレングリコール）は、例えば、７５０Ｄａ、１０００Ｄａ、２０００Ｄａ、または５０００Ｄａの分子量を有することができる。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質はジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−５０００）から選択される。いくつかの実施態様において、ＰＥＧ−脂質はＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００である。

一般に、本発明の組成物は、２〜８モル％のＰＥＧ−脂質を含有するリポソームを含む。リポソームは、例えば、約２、約３、約４、約５、約６、約７、または約８モル％のＰＥＧ−脂質を含有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは、４〜６モル％のＰＥＧ−脂質を含有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、約５モル％のＰＥＧ−脂質を含有する。

いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約５５モル％のＰＯＰＣ、約４０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約６０モル％のＰＯＰＣ、約３５モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約６５モル％のＰＯＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。

いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約４０〜５０モル％のＤＳＰＣ、約１５〜２５モル％のＤＰＰＣ、約２５〜３５モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。

いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約５５〜７５モル％のＤＳＰＣ、約２０〜４０モル％のコレステロール、および約２〜８モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約５５〜７５モル％のＤＳＰＣ、約２０〜４０モル％のコレステロール、約２〜８モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含み、ＤＰＰＣは含まない。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。

いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約４５モル％のＤＳＰＣ、約２０モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。いくつかの実施態様において、双性イオン性リポソームは、約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む。

一般に、本発明の組成物は、治療上有効投与量のシスプラチンを好都合な投与体積で被験体に送達することができるような量のリポソームに封入したシスプラチンを含有する。所定の製剤のシスプラチン含有量は、絶対濃度（例えば、ｍｇ／ｍＬ）として、またはリポソーム中の脂質に対する相対的な量として表すことができる。一般に、全脂質重量対シスプラチン重量の比は、約４０：１〜約９５：１である。いくつかの実施態様において、全脂質重量対シスプラチン重量の比は、約６５：１〜約９５：１である。脂質：シスプラチン比は、例えば、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、または９５：１であり得る。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、全脂質重量対シスプラチン重量の比が約７０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有するリポソームを含む。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、全脂質重量対シスプラチン重量の比が約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有するリポソームを含む。

リポソームの大きさは、当業者に知られた多数の方法によって決定することができる。リポソームの大きさは、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）、準弾性光散乱（ＱＥＬＳ）、分析超遠心、または電子顕微鏡観察によって決定することができる。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、約７５〜約１２５ｎｍ（直径、体積平均）の平均粒径を有する双性イオン性リポソームを含む。例えば、リポソームは、７５、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、または１２５ｎｍの直径を有することができる。いくつかの実施態様において、リポソームは、８０〜１２０ｎｍの平均粒径を有する。いくつかの実施態様において、リポソームは、９０〜１２０ｎｍの平均粒径を有する。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、９０ｎｍ（体積平均）の平均粒径を有するリポソームを含有する。

リポソームシスプラチンを調製する方法
リポソームは、当業者に知られた多数の技術を用いて調製し、シスプラチンを負荷することができる。脂質小胞は、例えば、（適切な容器中の脂質と有機溶媒との混合物の蒸発によって調製された）乾燥した脂質フィルムを水または水性緩衝液で水和することによって調製することができる。脂質フィルムの水和は、典型的には、多層小胞（ＭＬＶ）の懸濁液をもたらす。別法として、ＭＬＶは、Ｃ_１−４アルカノールなどの適切な溶媒中の脂質の溶液を水または水性緩衝液で希釈することによって形成することができる。単層小胞は、超音波処理、または規定された細孔径を持つ膜を通す押出しによってＭＬＶから形成することができる。シスプラチンの封入は、ＭＬＶ形成中にフィルム水和または脂質希釈に用いられる水溶液に薬物を含めることによって行うことができる。シスプラチンは、予め形成された小胞に封入することもできる。

従って、本発明のいくつかの実施態様は、上記の双性イオン性リポソームを含有する組成物を提供し、ここで、リポソームは；ａ）ホスファチジルコリン脂質、コレステロール、ＰＥＧ−脂質、およびＣ_１−４アルカノールおよびＣ_１−４アルカノール／水混合物から選択される溶媒を含有する脂質溶液を形成し；ｂ）該脂質溶液を水性緩衝液と混合して、多層小胞（ＭＬＶ）を形成し；ｃ）該ＭＬＶを多孔性フィルターを通して押し出して、小型単層小胞（ＳＵＶ）を形成し；ｄ）透析濾過して、封入されていないシスプラチンを除去することを含む方法によって調製される。いくつかの実施態様において、封入されていないシスプラチンの除去は、遠心分離によって行うこともできる。いくつかの実施態様において、シスプラチンの封入は、ＭＬＶの形成中にシスプラチンを水性緩衝液に含めることによって行われる。いくつかの実施態様において、リポソームの調製は、さらに、双性イオン性リポソームを滅菌濾過することを含む。

製剤および投与
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、上記のリポソームおよび生理学的に（すなわち、薬学的に）許容され得る担体を含むことができる。用語「担体」とは、リポソームシスプラチンのための希釈剤またはビークルとして用いられる典型的には不活性な物質をいう。該用語は、粘着性の性質を組成物に付与する典型的には不活性な物質も含む。典型的には、生理学的に許容され得る担体は、液体形態で存在する。液体担体の例としては、生理食塩水、リン酸緩衝液、規定濃度の緩衝化食塩水（１３５〜１５０ｍＭ ＮａＣｌ）、水、緩衝化水、０、４％食塩水、０．３％グリシン、０．３Ｍスクロース（および他の炭水化物）、安定性の増強を提供するための糖タンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリン等）等が挙げられる。生理学的に許容され得る担体は、部分的には、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するのに用いられる特定の方法によって決定されるので、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な製剤がある（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、１９８９参照）。

本発明の組成物は、慣用的なよく知られた滅菌技術によって滅菌してよく、または滅菌条件下で生産してよい。水溶液は、使用のために無菌条件下で包装することができるか、または無菌条件下で濾過して、凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は、投与に先立って滅菌水溶液と合わせられる。必要に応じて、組成物は、ｐＨ調整および緩衝化剤、等張性調整剤、湿潤剤等、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、およびトリエタノールアミンオレエートなどの、薬学的に許容され得る補助物質を含有して、生理学的条件に近似することができる。凍結乾燥したリポソーム組成物のための安定化剤など、組成物を安定化させるために糖を含めることもできる。

例えば、関節内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、皮内、腹腔内、および皮下経路によるなどの、非経口投与に適した製剤は、水性および非水性の等張滅菌注射溶液を含む。注射溶液は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図した受容者の血液と等張にする溶質、および懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含むことができる水性および／または非水性滅菌懸濁液を含有することができる。注射溶液および懸濁液は、凍結乾燥したリポソームなどの滅菌粉末から調製することもできる。本発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入によって、腹腔内、膀胱内、または髄腔内投与することができる。非経口投与および静脈内投与は、投与の好ましい方法である。リポソーム組成物の製剤は、アンプルおよびバイアルなどの、単位用量（ｕｎｉｔ−ｄｏｓｅ）または複数回用量の密閉された容器中で与えることができる。

医薬調製物は、好ましくは、単位投与形態で存在する。そのような形態において、調製物は、適切な量の活性成分、例えば、リポソーム組成物を含有する単位用量にさらに分割される。単位投与形態は、包装された調製物であってよく、該包装は個別の量の調製物を含有する。組成物は、所望であれば、他の適合する治療剤を含有することもできる。

がんを処置する方法
別の実施態様において、本発明は、がんを処置する方法を提供する。該方法は、上記のリポソームシスプラチンを含有する組成物を、投与を必要とする被験体に投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、（ａ）約５０モル％〜約７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約２０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、（ａ）約５０モル％〜約６５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約３０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および（ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約６５：１〜約９５：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、ａ）約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ；約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；およびｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、ａ）約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ；約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；およびｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約７０：１〜約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、ａ）約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；およびｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、ａ）約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＣ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；およびｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約７０：１〜約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、ａ）約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；およびｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、リポソームに封入したシスプラチンを含有する組成物を投与することを含む。

がんの処置のための治療的使用において、本発明のリポソーム組成物は、シスプラチンの初期投与量が、毎日約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であるように投与することができる。約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ、または約１〜１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇの日用量範囲を用いることができる。

投与量は、患者の要求、処置されるがんの重症度、および使用されるリポソーム組成物に応じて変化し得る。例えば、投与量は、特定の患者において診断されたがんのタイプおよびステージを考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される投与量は、経時的に患者における有益な治療的応答に影響を及ぼすのに十分なものとすべきである。投与量の大きさは、特定の患者における特定のリポソーム組成物の投与に伴うあらゆる有害な副作用の存在、性質、および程度によっても決定されるであろう。特定の状況のために適切な投与量の決定は、開業医の技量の範囲内のものである。一般に、処置は、リポソーム組成物の最適投与量未満であるより小さな投与量で開始される。その後、投与量を状況下での最適な効果に到達するまで、小さな増分ずつ増加させる。便宜上、毎日の投与量の合計を、所望であれば、該日の間に少量ずつに分割して投与してよい。

組成物は、本発明の方法において単独で、または他の治療剤と組み合わせて投与してよい。追加の剤は、限定されるものではないが、アバスチン、ドキソルビシン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、またはパクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキサンを含む抗がん剤または細胞毒性剤であり得る。追加の抗がん剤は、限定されるものではないが、２０−エピ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３，４−イポメアノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミドックス、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス、アントラマイシン、抗背側化形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、抗エストロゲン、抗ネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、グリシン酸アフィジコリン、アポトーシス遺伝子調節剤、アポトーシス制御因子、アプリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、塩酸ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフレート、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カルステロン、カンプトテシン誘導体、カナリポックスＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カレストＭ３、カルムスチン、カム７００、軟骨由来阻害剤、塩酸カルビシン、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セデフィンゴール、セトロレリクス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベスシジン８１６、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタントラキノン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ）、シクロホスファミド、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、デュアゾマイシン(ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ)、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エダトレキセート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロミチン、塩酸エフロミチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン、塩酸エピルビシン、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクター系、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルアステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホルフェニメクス、フォルメスタン、フォスキドン、フォストリエシン、フォストリエシンナトリウム、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセタミド、ヒドロキシ尿素、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、インスリン様成長因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、酢酸ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、線状ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ ７）、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、メイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、微細藻類プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミチンドミド、ミトカルシン（ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）、ミトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）、ミトギリン（ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ミトマルシン（ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトスペル（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）、ミトタン、マイトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、モノホスホリル脂質ａ／ミオバクテリア細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍サプレッサー１ベースの療法、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素調節剤、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカインインデューサ、オルマプラチン、オサテロン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、ペルフルブロン、ペルフォスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベータ阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺癌抗アンドロゲン、プロテアソーム阻害剤、タンパク質Ａベースの免疫調節剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＳ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲＥ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス（ｒｏｑｕｉｎｉｍｅｘ）、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、サルクヌ（ｓａｒｃｎｕ）、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ １ミメティックス、セムスチン、老化由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達調節剤、シムトラゼン、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフラン、ソブゾキサン、ボロカプテートナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ）、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホサートナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、
ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、スロフェヌル（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオダイド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチンミメティック、チマルファシン、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、リン酸トリシリビン、トリメトトレキセート、グルクロン酸トリメトトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルフォスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、または塩酸ゾルビシンを含むことができる。いくつかの実施態様においては、該方法はフルオロウラシル、ロイコボリン、およびそれらの混合物から選択される薬物の投与を含むことができる。

ＩＶ．実施例
実施例１ リポソームシスプラチン組成物を調製するための一般的な方法
リポソーム中へのシスプラチンの封入は、溶媒希釈法によって行った。脂質混合物（変化する脂質比の５００ｍｇの部分）を、１ｍＬのｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ（１／１、ｖ／ｖ比）、またはｔ−ＢｕＯＨ／ＥｔＯＨ／水（４９／４９／２ ｖ／ｖ比）に溶解させ、透明になるまで７０℃で加熱した。９０ｍｇのシスプラチンを９ｍＬの緩衝液（１４５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭヒスチジン緩衝液ｐＨ６．５）中に７０℃で溶解させた。脂質溶液を、迅速に混合しながら、シスプラチン溶液に加えて、多層小胞（ＭＬＶ）を形成した。７０℃まで加熱したＬＩＰＥＸ^ＴＭ押出機（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄ Ｉｎｃ．）を用いて、ＭＬＶを２つの重ねた８０ｎｍポリカーボネートフィルターに通した。小胞の大きさおよびサイズ分布を、それぞれ通過させた後、準弾性光散乱の原理（ＱＥＬＳ）に基づいて粒径アナライザーを用いて決定し、９０〜１２０ｎｍの体積平均径に到達した後に押出しを停止した。押出しに続いて、リポソームを冷（２〜１５℃）１４５ｍＭ ＮａＣｌで１０倍希釈した。この工程は、シスプラチンの濃度を低下させ、シスプラチンの沈殿の形成を防止する。加えて、この工程は、溶媒濃度を低下させる。溶媒濃度を低下させなければシスプラチンの小胞からの放出を促進し得る。

（交差流濾過としても知られる）透析濾過を、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓカートリッジ（５００ｋＤ、１４５ｃｍ^２の表面積、カタログ番号Ｘ３−５００−３００−０２Ｎ）で行った。それを用いて、封入されていないシスプラチンおよび残存する有機溶媒を除去し、外部緩衝液を交換し、リポソームを濃縮した。典型的には、製剤は限外濾過を経て、５０ｍｇ／ｍＬの脂質濃度を達成し、引き続いて、１０洗浄体積の示された緩衝液に対して透析濾過され、続いて、７０〜９０ｍｇ／ｍＬの脂質およびほぼ１ｍｇ／ｍＬのシスプラチンまで限外濾過された。調製物の滅菌濾過を、酢酸セルロース膜を備えたＳａｒｔｏｒｉｕｓ ０．２μｍシリンジフィルター（カタログ番号１６５３４−Ｋ、約２８ｍｍの直径、６．２ｃｍ^２の表面積）で、親指で押して行った。薬物製剤を滅菌した発熱物質除去バイアルに充填し、２〜８℃で貯蔵した。

実施例２ リポソームの形態はＰＥＧ化脂質含有量によって異なる
ＤＳＰＣ、コレステロール、およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００、または５０００）を含有する一連のリポソームを調製した。ＤＳＰＣ／コレステロールの比を５５／４５（モル％）に固定し、ＰＥＧ化脂質は、各々、０、５、１０、２０、３０モル％の全脂質組成物であった。リポソーム組成物を表１に示す。低温ＴＥＭ画像を以下の図１、２、および３に示す。これらの画像は、リポソームの形態が、リポソーム中のＰＥＧ化脂質のレベルによって異なることを明瞭に示す。約５モル％を超えると、本質的には、リポソームは不安定であり、大きな円盤状の粒子が形成された。７モル％よりも大きなレベルは、特に高い形態学的不均一性をもたらした。

実施例３ 種々のリン脂質を用いたリポソームの調製
上記の方法に従って一連の１４のリポソーム試料を調製した。リポソーム組成物を表２に列挙する。比較の目的で、試料１を米国特許第６，１２６，９６６号の実施例５（ＳＰＩ−０７７組成物）に従って調製した。試料３、４、１４および１０を、０モル％〜４０モル％の範囲であるコレステロールレベルで、ＤＳＰＣリン脂質を用いて調製した。ＤＳＰＣとＤＰＰＣとの二元混合物を試料５〜９で用いた。試料５、６、および７は、より高いコレステロールレベル（３０〜４０モル％）を有し、試料８〜９は、より低いコレステロールレベル（１０〜２０モル％）を有した。試料１０を、ＨＳＰＣが用いられた試料１および２との具体的な比較のために、主要なリン脂質成分としてＤＳＰＣを用いて調製した。試料１１および１２を、主要なリン脂質成分としてＤＰＰＣおよびＤＭＰＣを用いて調製し、ここで、ＤＭＰＣは１４個の炭素原子の脂肪酸鎖を有する。試料１３は、主要なリン脂質成分としてＰＯＰＣを用いており、そこでは、脂肪酸鎖は飽和および不飽和脂肪酸を含有する。

実施例４ リポソームシスプラチン製剤の安定性および有効性
本実施例は、実施例２において表２に与えられたリポソーム組成物の中で、試料７、１３、および１４の優れた有効性および安全性を説明する。

リポソーム製剤を、ＫＢ腫瘍動物においてＰＫ研究のために評価した。動物研究を、以下のプロトコルに従って行った。ＫＢ腫瘍をヌードマウスに注射し、約１０日間成長させた。１８匹の動物にリポソーム調製物を注射した。動物を、処置前、５分、４時間、２４時間、４８時間、および９６時間の時点において３つの群において殺した。組織試料を回収し、腫瘍中のＰｔ／ＤＮＡ付加物を分析した。試料分析中にエクス・ビボで生じたＰｔ／ＤＮＡ付加物の可能性を、シスプラチンを与えたナイーブ腫瘍を用いて評価した。

組織からのＤＮＡを、ＱｉａｇｅｎのＤＮｅａｓｙプロトコルから採用された手法によって単離した。溶出画分を、ＤＮＡ／Ｐｔ付加物Ｐｔ分析のために回収した。誘導結合質量分析（ＩＣＰＭＳ）によってＰｔ定量を行い、ＤＮＡ定量をＰｉｃｏｇｒｅｅｎ蛍光法によって行った。

実施例２からのリポソーム試料１〜１４を、上記のプロトコルに従って、イン・ビボ動物研究で用いた。全ての製剤を、ＤＮＡ／Ｐｔ付加物アッセイにおいて、８ｍｇ／ｋｇシスプラチンで投薬した。１マイクログラム（ｕｇ）ＤＮＡ当たりのピコグラム（ｐｇ）Ｐｔによって測定した、ピーク腫瘍ＤＮＡ／Ｐｔ付加物、および最大耐性用量（ＭＴＤ）の値を図４に示されるようにプロットした。より高いレベルのＤＮＡ／Ｐｔ付加物およびより高いＭＴＤ値は、それぞれのリポソーム組成物について、より良好な有効性および安全性を示す。時間の関数としてのＤＮＡ／Ｐｔ付加物値を図５に示す。試料７を、Ａ４２７肺異種移植片腫瘍を持つマウスでの腫瘍有効性試験で評価した。

試料７、１３、および１４は、他の試料と比較して明らかに優れている。注目すべきことに、試料１は、８ｍｇ／ｋｇ未満の非常に低いＭＴＤ、および２０ｐｇ未満のＰｔ／μｇのＤＮＡのピークＤＮＡ／Ｐｔ付加物値を呈する。試料７、１３および１４は、米国特許第６，１２６，９６６号に記載された例である試料１よりも明らかに優れる。さらに、天然シスプラチンを用いた場合、そのＭＴＤは１０ｍｇ／ｋｇ未満であり、ＤＮＡ／Ｐｔ付加物値は１μｇのＤＮＡ当たり１０ｐｇのＰｔ未満であった。

試料７は、試料５、６、８、９および１１と比較した場合に優れている。試料７は、３０モル％のコレステロールレベル、および２倍よりも大きなモル比を持つＤＳＰＣ／ＤＰＰＣの二元混合物を有する。この傾向は試料１４によってさらに裏付けられ、試料１４では、組成物は３０モル％の高いコレステロールレベルを有するが、ＤＰＰＣを有さず、そしてＤＰＰＣがＤＳＰＣなしで単独で用いられた試料１１よりも良好である。試料５は、試料７および１４と同様に３０モル％のコレステロールを有するが、試料５は４６．２５％のＤＰＰＣと共にたった１８．７５％のＤＳＰＣを含有し、より低いＤＮＡ／Ｐｔ付加物を生じた。

図５において、試料７、１３、および１４は、時間の関数としての、イン・ビボでＤＮＡ／Ｐｔ付加物を形成するそれらの能力について明らかに優れている。試料１は、２０ｐｇ Ｐｔ／μｇのＤＮＡ未満のピークＤＮＡ／Ｐｔ付加物値を呈することに注意すべきである。

有効性を、ＫＢヒトモデルにおいて研究した。実験を、ＫＢモデルについて先に記載されたように行った。図６は、試料１４が、ＫＢヒト異種移植片を持つマウスにおいて、同等のシスプラチンレベルで投薬された、シスプラチンまたは試料２（ＨＳＰＣの比較対象）よりも高いイン・ビボでの有効性を生じたことを示す。

有効性を、Ａ４２７ヒトＮＳＣＬＣモデルにおいても研究した。実験を、上記ＫＢモデルについて記載されたように行った。図６は、試料７が、Ａ４２７ヒトＮＳＣＬＣ異種移植片を持つマウスにおいて、同等のシスプラチンレベルで投薬されたシスプラチンよりも高いイン・ビボ有効性を有することを示す。試料７での単回の処置の結果、遊離シスプラチンについての３０％と比較して、注射から１４日後に、６１％の腫瘍成長阻害がもたらされた。

ここまで、明瞭性および理解の目的で、説明および実施例によって幾分詳細に記載してきたが、当業者であれば、ある種の変形および変更を添付の特許請求の範囲内で実施することができることを十分に理解するはずである。加えて、本明細書中で提供された各文献は、あたかも各文献が参照により個々に組み込まれるのと同等な程度に、参照によりその全体が組み込まれる。

Claims (25)

1. （ａ）約５５モル％〜約７５モル％のホスファチジルコリン脂質またはホスファチジルコリン脂質の混合物、約２０モル％〜約４５モル％のコレステロール、および約２モル％〜約８モル％のＰＥＧ−脂質より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
   （ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９５：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
   を含む、がんの処置用の組成物であって、
   該組成物は、約１０ｍｇ／ｋｇより高い最大耐性用量および／または１μｇのＤＮＡ当たり約２０ｐｇのＰｔより高いピークＤＮＡ／白金（Ｐｔ）付加物値を有する、組成物。
2. 前記ホスファチジルコリン脂質が、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）よりなる群から選択される、請求項１記載の組成物。
3. 前記ホスファチジルコリン脂質がＰＯＰＣである、請求項１に記載の組成物。
4. 前記ホスファチジルコリン脂質がＤＳＰＣおよびＤＰＰＣを含む、請求項１に記載の組成物。
5. 前記ホスファチジルコリン脂質がＤＳＰＣである、請求項１に記載の組成物。
6. 前記ＰＥＧ−脂質が、ジアシル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、Ｎ−アシル−スフィンゴシン−１−｛スクシニル［メトキシ（ポリエチレングリコール）］｝、およびそれらの混合物よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
7. 前記ＰＥＧ−脂質が、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００）およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−５０００）よりなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
8. 前記双性イオン性リポソームが、約４０〜５０モル％のＤＳＰＣ、約１５〜２５モル％のＤＰＰＣ、約２５〜３５モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、請求項１に記載の組成物。
9. 前記双性イオン性リポソームが、約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、請求項１に記載の組成物。
10. 前記双性イオン性リポソームが、約５５〜７５モル％のＤＳＰＣ、約２０〜４０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、請求項１に記載の組成物。
11. 前記双性イオン性リポソームが、約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、請求項１に記載の組成物。
12. 前記双性イオン性リポソームが、約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を含む、請求項１に記載の組成物。
13. 前記全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜９０：１である、請求項１記載の組成物。
14. 前記全脂質重量対シスプラチン重量の比が約９０：１である、請求項１に記載の組成物。
15. 前記双性イオン性リポソームが、約７５〜約１２５ｎｍの平均粒径（体積平均）を有する、請求項１に記載の組成物。
16. 前記双性イオン性リポソームが、約９０ｎｍの平均粒径（体積平均）を有する、請求項１に記載の組成物。
17. 請求項１に記載の組成物を調製するための方法であって、
    前記双性イオン性リポソームが、
    ａ）前記ホスファチジルコリン脂質、前記コレステロール、前記ＰＥＧ−脂質、ならびにＣ_１−４アルカノールおよびＣ_１−４アルカノール／水混合物よりなる群から選択される溶媒を含む脂質溶液を形成し；
    ｂ）該脂質溶液を水性緩衝液と混合して、多層小胞（ＭＬＶ）を形成し；
    ｃ）該ＭＬＶを多孔性フィルターを通して押し出して、小型単層小胞（ＳＵＶ）を形成し；
    それにより、前記双性イオン性リポソームを形成することを含む工程によって調製される、方法。
18. 前記シスプラチンの前記双性イオン性リポソームによる封入が、前記ＭＬＶの形成中に前記水性緩衝液中に前記シスプラチンを含ませ、封入されていないシスプラチンを除去することによって行われる、請求項１７に記載の方法。
19. 前記方法が、さらに；
    ｄ）前記双性イオン性リポソームを滅菌濾過する工程
    を含む、請求項１７に記載の方法。
20. がんを処置するための医薬の製造における、請求項１に記載の組成物の使用。
21. 前記組成物が：
    ａ）約４６モル％のＤＳＰＣ、約１９モル％のＤＰＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
    ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
    を含む、医薬の製造における、請求項２０に記載の組成物の使用。
22. 前記組成物が：
    ａ）約５７モル％のＰＯＰＣ、約３８モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
    ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約７０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
    を含む、医薬の製造における、請求項２０に記載の組成物の使用。
23. 前記組成物が：
    ａ）約６５モル％のＤＳＰＣ、約３０モル％のコレステロール、および約５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）より実質的になる双性イオン性リポソーム；および
    ｂ）全脂質重量対シスプラチン重量の比が約４０：１〜約９０：１であるような量の、該リポソームに封入したシスプラチン
    を含む、医薬の製造における、請求項２０に記載の組成物の使用。
24. 約１０ｍｇ／ｋｇより高い最大耐性用量および１μｇのＤＮＡ当たり約２０ｐｇのＰｔより高いピークＤＮＡ／白金（Ｐｔ）付加物値を有する、請求項１に記載の組成物。
25. 平均腫瘍体積を減少させる、シスプラチンよりも高いイン・ビボ有効性を有する、請求項１に記載の組成物。