JP6063871B2

JP6063871B2 - 組合せ

Info

Publication number: JP6063871B2
Application number: JP2013546309A
Authority: JP
Inventors: ダグラス、ジェイ．デマリーニ; ゴシディップ、ティー．ル
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2010-12-20
Filing date: 2011-12-20
Publication date: 2017-01-18
Anticipated expiration: 2031-12-20
Also published as: US20130261075A1; EP2654755A1; WO2012088030A1; EP2654755A4; ES2603479T3; EP2654755B1; JP2014500326A; US8906879B2

Description

発明の背景

技術分野
本発明は、哺乳動物における癌の処置方法、またそのような処置に有用な組合せに関する。特に、本方法は、代謝拮抗物質ヌクレオシド：４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩と、ＭＥＫ阻害剤：Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを含んでなる新規な組合せ、その組合せを含んでなる医薬組成物およびそのような組合せを癌の処置において使用する方法に関する。

背景技術
一般に、癌は、細胞分裂、分化、およびアポトーシス細胞死を制御する正常な過程が制御不能になることから生じる。アポトーシス（プログラム細胞死）は、胚発生および様々な疾患（神経細胞変性疾患、循環器疾患、癌等）の発病において重要な役割を果たす。アポトーシスのキナーゼ調節に関わる、最もよく研究されている経路の１つが、細胞表面の増殖因子受容体から核への細胞内シグナル伝達である（Crews and Erikson, Cell, 74:215-17, 1993)。

ヌクレオシドは、β−グリコシド結合を介してリボースまたはデオキシリボース糖に結合した核酸塩基（単に塩基と称されることが多い）からなるグリコシルアミンである。ヌクレオシドの例には、シチジン、ウリジン、アデノシン、グアノシン、チミジン、およびイノシンが含まれる。

ヌクレオシドは、細胞において、糖の第１アルコール基（−ＣＨ_２−ＯＨ）上で特定のキナーゼによりリン酸化され得て、ヌクレオチドとなり、ヌクレオチドはＤＮＡおよびＲＮＡのビルディングブロック分子である。

ヌクレオシドは、特には肝臓におけるデノボ(de novo)合成経路で作りだせるが、食事に含まれる核酸の経口摂取および消化を通じてより豊富に供給され、ヌクレオチダーゼがヌクレオチド（チミンヌクレオチド等）を、ヌクレオシド（チミジン等）とホスフェートとに分解する。このヌクレオシドを続いて、消化器系の管腔において、ヌクレオシダーゼにより核酸塩基とリボースまたはデオキシリボースとに分解する。

加えて、ヌクレオチドを、細胞内で窒素含有塩基と、リボース−１−ホスフェートまたはデオキシリボース−１−ホスフェートとに分解することができる。

医療においては、幾つかのヌクレオシド類似体が、抗ウイルス剤または抗癌剤として使用されている。ウイルスポリメラーゼは、これらの化合物を非標準の塩基と共に取り込む。これらの化合物は、細胞内でヌクレオチドに変換されることで活性化され、電荷を帯びたヌクレオチドは細胞膜を容易には通過できないため、ヌクレオシドとして投与される。

マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼ／細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）キナーゼ（以下、ＭＥＫと称する）は、多数の細胞内プロセスの制御に関与していることが知られている。Ｒａｆファミリー（Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ等）はＭＥＫファミリー（ＭＥＫ−１、ＭＥＫ−２等）を活性化し、ＭＥＫファミリーはＥＲＫファミリー（ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２）を活性化する。広義には、ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路のシグナル伝達活性が、ｍＲＮＡ翻訳を制御する。これには細胞周期に関係した遺伝子が含まれる。このため、この経路の過剰活性化は、無制御の細胞増殖につながる場合がある。ＥＲＫの過剰活性化によるＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の制御が効かない状態は、全てのヒト悪性腫瘍の約３０％に見られる（Allen, LF, et al. Semin. Oncol. 2003. 30(5 Suppl 16):105-16）。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴおよびＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫの両方を通じてシグナル伝達することができるＲＡＳは、全ての癌の１５％で変異した発癌性タンパク質を有する（Davies, H. et al. Nature. 2002. 417:949-54）。また、活性化ＢＲＡＦ変異が、高い頻度で特定の腫瘍タイプ（例えば、黒色腫）において認められている（Davies, H. et al. Nature. 2002. 417:949-54）。ＭＥＫにおける活性化変異それ自体はヒトの癌において頻繁には起きないようだが、ＭＥＫは、ＥＲＫ経路におけるその中心的な役割から、ヒトの癌の処置にとっての重要な創薬ターゲットであると考えられる。更に、ＭＥＫ阻害活性は、ＥＲＫ１／２活性の阻害および細胞増殖の抑制を効果的に引き起こし（The Journal of Biological Chemistry, vol. 276, No. 4, pp. 2686-2692, 2001）、化合物は、望ましくない細胞増殖（腫瘍発生および／または癌等）によって引き起こされる疾患に効果を発揮すると期待される。

癌の作用に苦しんでいる個人に、より効果的および／または強力な処置を施す改善された治療を提供することが有用と考えられる。

本発明の一実施形態では、
（ｉ）下記構造（Ｉ）：
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｉｉ）構造（ＩＩ）：
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを含んでなる組合せが提供される。

本発明の一実施形態では、癌を処置する方法を、それを必要とするヒトに提供し、この方法は、治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２，２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２′−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物との組合せをそのようなヒトにin vivo投与することを含んでなる。

本発明の一実施形態では、癌を処置する方法を、それを必要とするヒトに提供し、この方法は、治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩とＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物との組合せをそのようなヒトにin vivo投与することを含んでなり、この組合せをある指定間隔内で投与し、またこの組合せをある期間にわたって投与する。

本発明の一実施形態では、癌を処置する方法を、それを必要とするヒトに提供し、この方法は、治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩とＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物との組合せをそのようなヒトにin vivo投与することを含んでなり、この組合せの化合物は順次投与される。

Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドおよびゲムシタビン（単独および組合せ）による、ＢｘＰＣ−３、Ｐａｎｃ−０２−０３、Ｍｉａ−ＰａＣａ、およびＣａｐａｎ−１ヒト膵癌細胞についての細胞増殖阻害を示す。

発明の具体的説明

本発明は、抗増殖活性を示す組合せに関する。適切には、この方法は、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩（以下、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、適切には塩酸塩）である下記構造Ｉ：
で表わされる化合物と、
Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物（以下、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物）である下記構造ＩＩ：
で表わされる化合物との同時投与により癌を処置する方法に関する。

化合物Ａは、一般名ゲムシタビンとして市販されている公知の抗新生物化合物である。ゲムシタビンは、１９９９年１２月１４日発行の米国特許第６００１９９４号の記載通りに調製することができる。

適切には、化合物Ａは塩酸塩の形態である。ゲムシタビン塩酸塩は商品名Ｇｅｍｚａｒ（商標）として市販されていて、当業者は、１９９９年１２月１４日発行の米国特許第６００１９９４号の記載から調製することができる。

化合物Ｂは、その薬学的に許容可能な塩および溶媒和物と共に、ＭＥＫ活性の阻害剤として特には癌の処置において有用であると国際出願日が２００５年６月１０日の国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号、国際公開日が２００５年１２月２２日の国際公開番号第ＷＯ２００５／１２１１４２号（引用することにより、本明細書の開示の範囲とされる）において開示、請求されている。化合物Ｂは、実施例４−１の化合物である。化合物Ｂを、国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号の記載通りに調製することができる。化合物Ｂを、２００６年１月１９日公開の米国特許出願公開第２００６／００１４７６８号の記載通りに調製することができる（引用することにより、本明細書の開示の範囲とされる）。

適切には、化合物Ｂはジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。適切には、化合物Ｂはナトリウム塩の形態である。適切には、化合物Ｂは、水和物、酢酸、エタノール、ニトロメタン、クロロベンゼン、１−ペンタンシ（pentanci）、イソプロピルアルコール、エチレングリコールおよび３−メチル−１−ブタノールから選択される溶媒和物の形態である。これらの溶媒和物および塩の形態は、当業者によって、国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号または米国特許出願公開第２００６／００１４７６８号の記載に従って調製することができる。

治療有効量の本発明の組合せの投与は、その組合せの個々の成分化合物よりも、組合せたほうが、治療有効量の成分化合物を別々に投与する場合と比較して、１つ以上の下記の向上した特性が得られる点で有利である。すなわち（ｉ）最も活性の高い剤単独よりも高い抗癌作用、（ｉｉ）相乗的または高く相乗的な抗癌活性、（ｉｉｉ）低副作用プロファイルの高抗癌活性が得られる投与プロトコル、（ｉｖ）毒性作用プロファイルにおける毒性低下、（ｖ）治療域の拡大または（ｖｉ）成分化合物の一方または両方のバイオアベイラビリティの上昇である。

本発明の化合物は１つ以上のキラル原子を有し得て、あるいは別の形で２つのエナンチオマーとして存在可能となり得る。このため、本発明の化合物には、エナンチオマーの混合物および精製エナンチオマーまたは鏡像異性的強化混合物が含まれる。また、全ての互変異性体および互変異性体の混合物が化合物Ａおよびその薬学的に許容可能な塩並びに化合物Ｂおよびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の範囲内に含まれることがわかる。

本発明の化合物は、溶質（本発明においては化合物Ａもしくはその塩および／または化合物Ｂもしくはその塩）と、溶媒とで構成される可変の化学量論の複合体であると理解される溶媒和物を形成し得る。本発明の目的に適うそのような溶媒は溶質の生物学的活性を干渉し得ない。適切な溶媒の例には、以下に限定するものではないが、水、メタノール、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が含まれる。適切には、使用する溶媒は薬学的に許容可能な溶媒である。適切には、使用する溶媒は水またはジメチルスルホキシドである。

本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、当業者によって容易に調製される。

また、本発明では、本発明の組合せを使用して癌を処置する方法も考えられ、この方法においては化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩および／または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物をプロドラッグとして投与する。本発明の化合物の薬学的に許容可能なプロドラッグは、当業者によって容易に調製される。

投与プロトコルに言及する際、用語「日」、「１日あたり」等とは、深夜０時から次の日の深夜０時までのカレンダー上の１日の間の時間のことである。

本明細書で用いられる用語「処置」およびその派生語は、「治癒効果のある療法」を意味する。ある特定の状態に関し、処置とは（１）その状態の１つ以上の生物学的な徴候の状態を回復させるまたは防止すること、（２）その状態につながるまたはその状態の原因である生物学的カスケードにおける１つ以上の地点（ａ）あるいはその状態の１つ以上の生物学的徴候（ｂ）に干渉すること、（３）その状態またはその処置に関係する１つ以上の症状、作用または副作用を緩和する、あるいは（４）その状態またはその状態の１つ以上の生物学的徴候の進行を遅延させることを意味する。「処置」では予防的療法も想定している。当業者ならば、「予防」が絶対的な用語ではないことがわかる。医学において、「予防」とは、薬剤を予防的に投与することによって、ある状態またはその生物学的な徴候に見舞われる可能性またはその重症度を実質的に低下させる、あるいはそのような状態またはその生物学的な徴候の発現を遅延させることであると理解される。予防的療法は、例えば、患者の癌発症リスクが高いと考えられる場合（患者の家族に癌を発症したものが多い、あるいは患者が発癌物質に曝されている等）に適切である。

本明細書で用いられる用語「有効量」とは、例えば研究者または臨床医が求めている組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す薬物または医薬品の量を意味する。更に、用語「治療有効量」とは、そのような量を投与していない同じような患者と比較した場合に、ある疾患、障害、または副作用の改善された処置、治癒、予防または回復あるいはある疾患または障害の進行速度の低下をもたらす量を意味する。この用語は、その範囲内に、正常な生理機能を強化するのに有効な量も含む。

本明細書で用いられる用語「組合せ」およびその派生語は、特に定義がない限り、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との同時投与または何らかの形での別々の順次投与を意味する。好ましくは、投与が同時ではない場合、これらの化合物を時間的に互いに近接させて投与する。更に、これらの化合物を同じ剤形で投与するか否かは問題ではなく、例えば一方の化合物を局所的に投与し、もう一方の化合物を経口で投与し得る。適切には、化合物Ａを静脈内投与し、化合物Ｂを経口投与する。

本明細書で用いられる用語「組合せキット」とは、本発明に従って化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを投与するのに使用する医薬組成物を意味する。両方の化合物を同時に投与する場合、この組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、１つの医薬組成物（錠剤等）または別々の医薬組成物中に含有し得る。これらの化合物を同時に投与しない場合、組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを別々の医薬組成物中に含有する。組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、１つのパッケージ内の別々の医薬組成物中にまたは別々のパッケージ内の別々の医薬組成物中に含んでなり得る。

一態様において、成分：
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを
含んでなる組合せキットを提供する。

本発明の一実施形態において、組合せキットは以下の成分：
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを含んでなり、
これらの成分は順次、個別、および／または同時投与に適した形態で提供される。

一実施形態において、組合せキットは、
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩が入った第１容器と、
薬学的に許容可能な担体と共に化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物が入った第２容器と、
第１容器および第２容器を収容するためのこん包手段(container means)とを含んでなる。

また、「組合せキット」を、指示（用量および投与方法についての指示等）に従って与え得る。このような用量および投与方法についての指示は、例えば薬品ラベルによって医師に提供される類のものになり得る。あるいは、医師が出す類のもの、例えば患者への説明書になり得る。

本明細書で用いられる用語「化合物Ａ^２」は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を意味する。

本明細書で用いられる用語「化合物Ｂ^２」は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を意味する。

適切には、本発明の組合せを「指定間隔」内で投与する。

本明細書で用いられる用語「指定間隔」およびその派生語は、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方の投与と、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方の投与との間の時間的な間隔を意味する。特に定義されない限り、指定間隔には同時投与も含まれ得る。本発明の両方の化合物を１日１回投与する場合、指定間隔とは、１日のうちの化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の投与のタイミングのことである。本発明の一方または両方の化合物を１日２回以上投与する場合は、指定間隔を、ある特定の日における各化合物の１回目の投与に基づいて計算する。指定間隔を計算する際は、本発明の化合物のある特定の日における１回目に続く全投与を考慮に入れない。

適切には、化合物を「指定間隔」内で投与するが同時には投与しない場合、両方の化合物を互いに約２４時間以内に投与する。この場合、指定間隔は約２４時間となる。適切には両方の化合物を互いに約１２時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約１２時間となる。適切には両方の化合物を互いに約１１時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約１１時間となる。適切には、両方の化合物を互いに約１０時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約１０時間となる。適切には両方の化合物を互いに約９時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約９時間となる。適切には、両方の化合物を互いに約８時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約８時間となる。適切には両方の化合物を互いに約７時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約７時間となる。適切には両方の化合物を互いに約６時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約６時間となる。適切には両方の化合物を互いに約５時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約５時間となる。適切には両方の化合物を互いに約４時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約４時間となる。適切には両方の化合物を互いに約３時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約３時間となる。適切には両方の化合物を互いに約２時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約２時間となる。適切には両方の化合物を互いに約１時間以内に投与し、この場合、指定間隔は約１時間となる。本明細書において、化合物Ａ^２の投与と化合物Ｂ^２の投与との間隔が約４５分未満ならば同時投与とみなす。

適切には、本発明の組合せを「指定間隔」にわたって投与する場合、化合物はある「投与期間」にわたって同時投与される。

本明細書で用いられる用語「投与期間」およびその派生語は、本発明の両方の化合物を「指定間隔」内で指示された連続日数にわたって投与し、任意で成分化合物の一方だけをある連続日数にわたって投与することを意味する。特に定義がない限り、「投与期間」を、また本明細書に記載の全ての投与プロトコルにおいて、処置開始時に始めて処置終了時に終わらせる必要はなく、両方の化合物を投与する連続する日数および成分化合物の一方だけを投与する任意の連続する日数または指示された投与プロトコルが一連の処置の間のある時点で起きさえすればよい。

「指定間隔」投与に関し、適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも１日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも２日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも３日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも５日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１４連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも１４日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３０連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも３０日となる。処置中、両方の化合物を指定間隔内で３０日を越えて投与する場合、処置は長期処置と見なされ、変更事象（癌の状態の再評価、患者の体調における変化等）によりプロトコルを修正する時まで継続する。

更に、「指定間隔」投与に関し、適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも２日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも３日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも３日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも４日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも４日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも５日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも５日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも６日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも６日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも８日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも３日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも４日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも３連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも５日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも４連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも６日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも５連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも６連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも８日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも９日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも４日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも５日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも３連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも６日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも４連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも５連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも８日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも６連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも９日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも１０日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも５連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも６連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも３連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも４連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも８連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも１１連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも１日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも６連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも７連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも３連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも８連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも４連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも９連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも５連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも１０連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも７連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも２連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも９連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも１４連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも２１連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で少なくとも３０連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを少なくとも７連続日にわたって投与し、この場合、投与期間は少なくとも３７連続日となる。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で１〜３連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを３〜７連続日にわたって投与する。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で３〜６連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを１〜４連続日にわたって投与する。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で５連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを２連続日にわたって投与する。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で２連続日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２だけを３〜７連続日にわたって投与する。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で７日の期間中の１〜３日にわたって投与し、その７日の期間の残りの日数にわたって化合物Ａ^２だけを投与する。適切には、処置中、両方の化合物を指定間隔内で７日の期間中の２日にわたって投与し、その７日の期間の残りの日数にわたって化合物Ａ^２だけを投与する。

適切には、化合物を「指定間隔」中に投与しない場合、これらの化合物を順次投与する。本明細書で用いられる用語「順次投与」およびその派生語は、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方を１日以上の連続日にわたって投与し、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方をその後に１日以上の連続日にわたって投与することを意味する。特に定義しない限り、「順次投与」を、また本明細書に記載の全ての投与プロトコルにおいて、処置開始時に始めて処置終了時に終わらせる必要はなく、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方の投与とそれに続く化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方の投与または指示された投与プロトコルが一連の処置のある時点で起こりさえすればよい。また、本発明においては化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方並びに化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方の順次投与の間に休薬期間を設けることが考えられる。本明細書において、休薬期間とは、順次投与する化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方の投与の後であり且つ化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方の投与の前である、化合物Ａ^２も化合物Ｂ^２も投与していないある日数の期間のことである。適切には、休薬期間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日および１４日から選択される日数の期間になる。

順次投与に関し、適切には、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方を１〜３０連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方を１〜３０連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方を１〜２１連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方を１〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方を１〜１４連続日にわたって投与し、続いて１〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方を１〜１４連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２の一方を２〜７連続日にわたって投与し、続いて２〜１０日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２のもう一方を２〜７連続日にわたって投与する。

適切には、化合物Ｂ^２をシークエンスの最初に投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を投与する。適切には、化合物Ｂ^２を１〜２１連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を１〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を３〜２１連続日にわたって投与し、続いて１〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を３〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を３〜２１連続日にわたって投与し、続いて３〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を３〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を２１連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を１４連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を１４連続日にわたって投与し、続いて１〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を１４連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を７連続日にわたって投与し、続いて３〜１０日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を７連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を３連続日にわたって投与し、続いて３〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を７連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を３連続日にわたって投与し、続いて３〜１０日の休薬期間があり、続いて化合物Ａ^２を３連続日にわたって投与する。

適切には、化合物Ａ^２をシークエンスの最初に投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を投与する。適切には、化合物Ａ^２を１〜２１連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を１〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を３〜２１連続日にわたって投与し、続いて１〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を３〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を３〜２１連続日にわたって投与し、続いて３〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を３〜２１連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を２１連続日にわたって投与し、続いて任意の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を１４連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を１４連続日にわたって投与し、続いて１〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を１４連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を７連続日にわたって投与し、続いて３〜１０日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を７連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を３連続日にわたって投与し、続いて３〜１４日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を７連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を３連続日にわたって投与し、続いて３〜１０日の休薬期間があり、続いて化合物Ｂ^２を３連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を７連続日にわたって投与し、続いて化合物Ｂ^２を１日にわたって投与する。適切には、化合物Ａ^２を６連続日にわたって投与し、続いて化合物Ｂ^２を１日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を１日投与し、続いて化合物Ａ^２を７連続日にわたって投与する。適切には、化合物Ｂ^２を１日にわたって投与し、続いて化合物Ａ^２を６連続日にわたって投与する。

「指定間隔」投与および「順次」投与に続いて繰り返し投与を行い得ること、あるいは交互投与プロトコルを実施し得ること、また繰り返し投与または交互投与プロトコルに先立って休薬期間を設け得ることがわかる。

適切には、投与プロトコルは以下の通りである：
化合物Ａを、７週間にわたる、週１回３０分の１０００ｍｇ／ｍ^２の静脈内注入とそれに続く化合物Ａでの処置のない１週間とからなる第１サイクルと、続く
１日目、８日目および１５日目の３０分の１０００ｍｇ／ｍ^２の静脈内注入とそれに続く２８日間の処置期間毎の化合物Ａでの処置のない１週間とからなるサイクルで投与し、
化合物Ｂを、遊離のまたは塩を形成していない、また溶媒和されていない化合物の重量基準で約０．５ｍｇ、約１ｍｇおよび約２ｍｇから選択される、適切には約２ｍｇである１日量で投与する。

適切には、本発明の組合せの一部として投与する化合物Ｂ^２の量は、約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量である。適切には、この量は約０．２５ｍｇ〜約９ｍｇから選択される。適切には、この量は約０．２５ｍｇ〜約８ｍｇから選択される。適切には、この量は約０．５ｍｇ〜約８ｍｇから選択される。適切には、この量は約０．５ｍｇ〜約７ｍｇから選択される。適切には、この量は約１ｍｇ〜約７ｍｇから選択される。適切には、この量は約５ｍｇである。したがって、本発明の組合せの一部として投与する化合物Ｂ^２の量は約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量である。例えば、本発明の組合せの一部として投与する化合物Ｂ^２の量は、０．１２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇになり得る。

本明細書において、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２について具体的に述べた量は全て、１用量あたりの遊離のまたは塩を形成していない化合物の投与量として示される。

本発明の方法を、他の癌治療法と共に用いてもよい。

治療における使用に関し、治療有効量の本発明の組合せを未加工の化学薬品として投与することも可能だが、本発明の組合せを医薬組成物として提供することが好ましい。したがって、本発明では、化合物Ａ^２および／または化合物Ｂ^２と１種以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を更に提供する。本発明の組合せは上記の通りである。担体は、製剤のその他の成分との適合性があり、製剤化が可能であり、また製剤を投与する患者には無害であるという意味で許容可能なものでなくてはならない。本発明の別の態様においては医薬製剤の調製方法も提供し、この方法は化合物Ａ^２および／または化合物Ｂ^２を１種以上の薬学的に許容可能な担体と混合することを含む。上述したように、利用する薬学的組合せのそのような成分を別々の医薬組成物として提供し得る、あるいは１つの医薬製剤中に一緒に配合し得る。

医薬製剤は、１単位用量あたり所定の量の有効成分を含有する単位剤形として提供し得る。当業者には公知のように、１用量あたりの有効成分の量は、処置の対象である状態、投与経路並びに患者の年齢、体重および体調に左右される。好ましい単位投与製剤は、１日量またはその分割用量またはその適切な一部の有効成分を含有するものである。更に、このような医薬製剤は、薬学技術で周知の方法のいずれを用いても調製し得る。

化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２は、いずれの適切な経路でも投与し得る。適切な経路には、経口投与、直腸内投与、経鼻投与、局所投与（頬側投与、舌下投与を含む）、膣内投与、および非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮内投与、髄腔内投与、硬膜外投与を含む）が含まれる。好ましい経路は、例えば本発明の組合せを投与する患者の体調および処置対象の癌に応じて異なり得ることがわかる。投与する各剤を同一または異なる経路で投与し得ること、また化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２をある医薬組成物／製剤に一緒に調合し得ることもわかる。適切には、化合物Ａ^２および化合物Ｂ^２を別々の医薬組成物として投与する。

本発明の化合物または組合せを、カプセル、錠剤、または注射剤等の便利な剤形に組み込む。固体または液体の薬学的担体を利用する。固体の担体には、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が含まれる。液体の担体には、シロップ、ピーナツ油、オリーブ油、生理食塩水、および水が含まれる。同様に、担体には、持続放出材料、例えばモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリル（単独でまたはワックスと共に）が含まれ得る。固体の担体の量は多様であり、適切には１投与単位あたり約２５ｍｇ〜約１ｇになり得る。液体の担体を使用する場合、製剤は適切にはシロップ、エリキシル剤、エマルション、ソフトゼラチンカプセル、無菌注射液（アンプル等）または水性もしくは非水性懸濁液の形態となる。

例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与の場合、活性を有する薬剤成分を、経口用の非毒性の薬学的に許容可能な不活性な担体（エタノール、グリセロール、水等）と組合せ得る。粉末は、化合物を適切な微粉度に粉末化し、同様に粉末化した食用炭水化物等の薬学的担体（例えば、デンプン、マンニトール）と混合することによって調製する。香味料、保存料、分散剤および着色料も存在し得る。

上記の成分に加えて、製剤は、問題となっている製剤のタイプに応じた当該分野で慣用の他の剤を含み得ることを理解すべきであり、例えば経口投与に適したものには香味料が含まれ得る。

上述したように、治療有効量の本発明の組合せ（化合物Ｂ^２と組合せた化合物Ａ^２）をヒトに投与する。典型的には、本発明の投与剤の治療有効量は多数の要因に左右され、例えば患者の年齢および体重、処置を必要としている正確な状態、その状態の重症度、製剤の性質、および投与経路が含まれる。最終的には、治療有効量は主治医の判断に委ねられる。

本発明の組合せを、概して公知の手順に従って有効性、有利且つ相乗的な特性について試験する。

適切には、本発明の組合せを、概して以下の腫瘍異種移植増殖遅延アッセイに従って有効性、有利且つ相乗的な特性について試験する。腫瘍細胞を、マウスに皮下または同所性(orthotopically)に移植する。腫瘍体積が１００〜４００ｍｍ^３に達したら、マウスを異なる処置群に無作為に分ける。マウスに、様々な用量の化合物Ａを単独でまたは様々な用量の化合物Ｂと組合せて１日１回または２回投与して処置を行う。週に２回、マウスの体重を測定し、腫瘍をノギスで測定する。腫瘍体積を、式：腫瘍体積＝（長さｘ幅^２）／２を使用して計算する。腫瘍増殖阻害率（％）を式：１００ｘ［１−（化合物で処置した腫瘍の平均増殖／ビヒクルで処置した対照腫瘍の平均増殖）］を使用して各腫瘍測定日に計算した。

あるいは、本発明の組合せを、概して以下の組合せ細胞増殖アッセイに従って有効性、有利且つ相乗的な特性について試験する。細胞を、３８４ウェルプレートにおいて、各細胞型に適し且つ１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した培地に５００細胞／ウェルでプレーティングし、一晩、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートする。細胞を、３８４ウェルプレート上で左から右に向って化合物Ａ^２を希釈し（化合物の入っていないものを含めた、組合せに応じた１〜２０μＭから始まる２倍希釈の２０の希釈物）、また３８４ウェルプレート上で上から下に化合物Ｂ^２（化合物の入っていないものを含めた、組合せに応じた１〜２０μＭから始まる２倍希釈の２０の希釈物）で処理する格子状で処理し、上記のように更に７２時間にわたってインキュベートする。幾つかの例においては、化合物を千鳥格子状に添加し、インキュベーション時間は７日間にまで延長し得る。細胞増殖を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）試薬を使用し、製造者のプロトコルに従って測定し、シグナルを、ルミネセンスモードに設定したＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）リーダーで０．５秒読み取りで読む。データを後述のようにして分析する。

結果をｔ＝０値の百分率として表わし、化合物濃度に対してプロットする。このｔ＝０値は１００％に正規化され、また化合物添加時に存在する細胞数を表す。細胞応答を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社のＥｘｃｅｌソフトウェア用のＩＤＢＳＸＬｆｉｔプラグインを使用した濃度に対する細胞生存率の４−または６−パラメータカーブフィットを使用し、また細胞増殖の５０％阻害（ｇＩＣ_５０）に必要な濃度を求めることによって、各化合物および／または化合物の組合せについて求める。バックグラウンド補正を、細胞の入っていないウェルの値を引くことで行う。各薬剤組合せについて、コンビネーションインデックス（ＣＩ）、エクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェント（Excess Over Highest Single Agent:EOHSA）およびエクセス・オーバー・ブリス（Excess Over Bliss:EOBliss）を、ChouおよびTalalay（１９８４）（Advances in Enzyme Regulation, 22, 37-55）およびBerenbaum, MC（１９８１）（Adv. Cancer Research, 35, 269-335）に記載されるような公知の方法に従って計算する（注記：本明細書において、以下の実施例および図１に言及する場合、また以下の実施例および図１に言及する場合のみ、化合物ＡはＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたは薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはジメチルスルホキシド溶媒和物であり、化合物Ｂはゲムシタビンである）。

膵腫瘍細胞株における化合物Ａ、化合物Ｂ（ゲムシタビン）およびこれらの組合せによるインビトロでの細胞増殖阻害
方法
細胞株および増殖条件
この研究では、ＢｘＰＣ−３、ＨｕＰ−Ｔ４、ＰＬ４５、Ｐａｎｃ−０２−０３、Ｍｉａ−ＰａＣａ、ＨＰＡＦ−ＩＩ、ＳＷ１９９０、Ｐａｎｃ−０８−１３、Ｃａｐａｎ−１、ＡｓＰＣ−１、Ｃａｐａｎ−２、ＨＰＡＣ、ＹＡＰＣおよびＰａｎｃ−１株を使用した。ＢｘＰＣ−３、Ｍｉａ−ＰａＣａ、ＨＰＡＦ−ＩＩ、ＳＷ１９９０、ＡｓＰＣ−１、Ｃａｐａｎ−２およびＹＡＰＣを、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（カタログ番号：ＳＨ３００７１．０３、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（カタログ番号：７２４０００４７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で培養した。Ｃａｐａｎ−１およびＨｕＰ−Ｔ４を、２０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。ＰＬ４５およびＰＡＮＣ−１株を、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ（ＡＴＣＣ３０−２００２）で培養した。Ｐａｎｃ−０２−０３およびＰａｎｃ−０８−１３を、１５％ウシ胎仔血清およびＩＴＳＸ（５１５００−０５６、Ｇｉｂｃｏ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。ＨＰＡＣを、５％ＦＢＳ、ＩＴＳＸ、４０ｎｇ／ｍｌのヒドロコルチズム（Hydrocortism）および１０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ（８５５７０Ｃ−１ＭＧ、ＳＡＦＣＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。

細胞増殖阻害アッセイおよび組合せデータ分析
全ての細胞を、細胞のプレーティングに先立って、最低７２時間培養した。１ウェルあたり１０００細胞で、全ての細胞について、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地の９６ウェル組織培養プレート（ＮＵＮＣ１３６１０２）において細胞をアッセイした。プレーティングから約２４時間後に、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地において、細胞を、化合物または２種の剤の組合せの１０の３倍系列希釈物（一定モル比〜化合物Ａ対化合物Ｂのモル比１：１）に曝露した。細胞を化合物の存在下、３日間にわたってインキュベートした。ＡＴＰレベルを、製造者のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を添加することによって求めた。簡単に説明すると、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（商標）を各プレートに加え、３０分間にわたってインキュベートし、次に発光シグナルを、０．５秒の積分時間でＳｐｅｃｔｒａＭａｘＬプレートリーダで読み取った。

３日間にわたる化合物または化合物の組合せでの処理後、細胞増殖の阻害を評価し、シグナルをビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理した細胞と比較した。細胞増殖を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理した対照のウェルに対して計算した。対照の細胞増殖の５０％を阻害する化合物の濃度（ＩＣ_５０）を、式：ｙ＝（Ａ＋（Ｂ−Ａ）／（１＋（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））（式中、Ａは最小応答（ｙ_最小）であり、Ｂは最大応答（ｙ_最大）であり、Ｃは曲線の変曲点（ＥＣ_５０）であり、ＤはＨｉｌｌ係数である）によって非線形回帰を用いて、ｙ＝ビヒクル対照の５０％の場合に補間した。

逆補間した(back-interpolated)ＩＣ_５０値と、ChouおよびTalalayが導き出した相互に非排他的な式（mutually non-exclusive equation）：
ＣＩ＝Ｄａ／ＩＣ_５０（ａ）＋Ｄｂ／ＩＣ_５０（ｂ）＋（ＤａｘＤｂ）／（ＩＣ_５０（ａ）ｘＩＣ_５０（ｂ））
（式中、ＩＣ_５０（ａ）は化合物ＡのＩＣ_５０であり、ＩＣ_５０（ｂ）は化合物ＢのＩＣ_５０であり、Ｄａは、細胞増殖の５０％を阻害した化合物Ｂと組み合せた化合物Ａの濃度であり、Ｄｂは、細胞増殖の５０％を阻害した化合物Ａと組み合せた化合物Ｂの濃度である）とを用いて計算したコンビネーションインデックス（ＣＩ）を用いて、効力に対する組み合せ効果を評価した。一般に、０．９未満、０．９〜１．１の間または＞１．１を超えるＣＩ値はそれぞれ、相乗作用、加成性および拮抗作用を示す。一般に、ＣＩ数が小さいほど、相乗作用の強度が大きい。

応答スケールに対する組合せ効果を、Liuら（２０１１）が詳細に記載したような非線形混合の概念に基づき、エクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェント（ＥＯＨＳＡ）で定量化した。ＥＯＨＳＡ値は、最良の単剤（組合せにおけるその成分の用量レベルにある）に対する、組合せによってもたらされる改善の増加（ここでは「百分率ポイント」（ｐｐｔ）差）として定義される。単剤および両方の剤での処理に関し、細胞を一定用量比の化合物に曝露し、用量反応曲線を実験データにフィットさせ、回帰モデルを使用して分析した。用量反応曲線に沿ったＩＣ_５０の指定された総用量レベルで、ＥＯＨＳＡの統計的推測を行うために（ＩＣ_５０に対応する）用量組合せを決定した。より具体的には、組合せ薬剤に関し、用量ｄ１の薬剤１および用量ｄ２の薬剤２（すなわち、総用量はｄ１＋ｄ２に等しい）が関与する実験は、組合せでの平均応答が用量ｄ１の薬剤１または用量ｄ２の薬剤２に対する平均応答より良好である場合、正のＥＯＨＳＡを有するとされる。

結果
ＭＥＫ１／２阻害剤化合物Ａ、ゲムシタビン化合物Ｂおよび２つの化合物の組合せが細胞増殖に及ぼす影響を、ヒト膵腫瘍細胞株のパネルにおいて判定した。表１は、（少なくとも２つの独立した実験からの）平均ＩＣ_５０およびＩＣ_５０での組合せ効果をＫＲＡＳ変異状態と共にまとめたものである。野生型ＫＲＡＳのＢｘＰＣ３細胞は、単剤としての化合物Ａ（ＩＣ_５０＝０．０１４μＭ）および化合物Ｂ（ＩＣ_５０＝０．００８μＭ）の両方に対して感受性が高かった。化合物Ａと化合物Ｂとの組合せは、ＣＩ値０．８８によって実証されるようにわずかに相乗的であり、またＢｘＰＣ３細胞におけるＥＯＨＳＡ分析（１５ｐｐｔ）で判明したように細胞増殖阻害を強化した。ＫＲＡＳ変異腫瘍株ＨｕＰ−Ｔ４、ＰＬ４５、Ｐａｎｃ−０２−０３およびＭｉａ−ＰａＣａは、単剤としての化合物Ａ（ＩＣ_５００．００１〜０．０５９μＭ）および化合物Ｂ（ＩＣ_５００．００７〜０．０８８μＭ）の両方に対して感受性であった。化合物Ａと化合物Ｂとの組合せは、４つの株において相乗効果〜ほぼ相加効果（ＣＩ値０．５５〜０．９３）を示した。更に、化合物Ａに中程度に感受性（ＩＣ_５０＝０．０５９〜０．１９３μＭ）で化合物Ｂに非感受性（ＩＣ_５０＞１μＭ）のＫＲＡＳ変異株ＨＰＡＦ−ＩＩ、ＳＷ１９９０、Ｐａｎｃ−０８−１３およびＣａｐａｎ−１は、化合物Ａと化合物Ｂとの組合せに対してより感受性であった（ＩＣ_５０＝０．００３〜０．０１２μＭ）。この組合せは、細胞増殖阻害もＥＯＨＳＡを１１から２３ｐｐｔへと強化した。対照的に、ＫＲＡＳ変異株ＡｓＰＣ−１、Ｃａｐａｎ−２、ＨＰＡＣおよびＹＰＡＣは化合物Ａまたは化合物Ｂ単体に感受性であり、最も活性な単剤と同様の組合せ活性を示した。ＫＲＡＳ変異Ｐａｎｃ−１細胞は化合物Ａおよび化合物Ｂの両方に耐性であり、化合物Ａと化合物Ｂとの組合せに中程度の感受性を示した。

ＢｘＰＣ−３、Ｐａｎｃ−０２−０３、Ｍｉａ−ＰａＣａおよびＣａｐａｎ−１ヒト膵癌細胞についての代表的な細胞増殖曲線を図１に示す。

化合物Ａ、化合物Ｂおよびこれらの組合せのヒト膵腫瘍細胞における細胞増殖阻害
表１の凡例
ＩＣ_５０：細胞増殖を５０％低下させる単剤としての化合物の濃度または化合物Ａと化合物Ｂとが１：１のモル比の場合の組合せにおける化合物Ａもしくは化合物Ｂの濃度
ＣＩ：コンビネーションインデックス、ｎ／ａ＝適用なし
ＥＯＨＳＡ：エクセス：オーバー・ハイエスト・シングル・エージェント（百分率として測定）

図１：ＢｘＰＣ−３、Ｐａｎｃ−０２−０３、Ｍｉａ−ＰａＣａおよびＣａｐａｎ−１ヒト膵癌細胞についての代表的な細胞増殖曲線

参考文献

本発明の組合せは上記のアッセイにおいて活性であることから、本発明の組合せは、癌の処置において有利な治療的有用性を示す。

適切には、本発明は、炎症性乳癌、腺管癌および小葉癌を含めた乳癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、結腸癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、インスリノーマ、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌およびグルカゴノーマを含めた膵癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、転移性黒色腫を含めた黒色腫を含む皮膚癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、腺癌および大細胞癌を含めた肺癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、脳癌（グリオーマ）、グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多形グリア芽細胞腫、バナヤン−ゾナナ症候群（Bannayan-Zonana syndrome）、カウデン病、レルミット・デュクロ病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵癌、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽腔癌、頬癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質性腫瘍）および精巣癌からなる群から選択される癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。

適切には、本発明は、ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１に関して野生型または変異型である、あるいは活性化された受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ等）を有する癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法に関する。これには、ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１および受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ等）のそれぞれについて野生型、変異型および野生型と変異型との組合せの患者が含まれる。本発明は、例えば遺伝子の変異もしくは増幅またはタンパク質の過剰発現による活性化されたＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１または活性化された受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ等）を有する癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法にも関する。

当該分野で理解されるところの用語「野生型」とは、天然の集団において遺伝子に変更が起きることなく存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列のことである。また、当該分野において、「変異型」には、アミノ酸または核酸中に、野生型のポリペプチドまたはポリヌクレオチドのそれぞれにおいて見出される対応するアミノ酸または核酸と比較して少なくとも１つの変更を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列が含まれると理解される。変異型という用語には、最も多く見られる（野生型）核酸鎖と比較して、核酸鎖の配列中に１個の塩基対の変異が存在する一塩基変異多型（ＳＮＰ）が含まれる。

ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−ＫｉｔまたはＰＤＧＦＲに関して野生型または変異型である、あるいはＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＮＦ１、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−ＫｉｔまたはＰＤＧＦＲの増幅または過剰発現を有する癌は、公知の方法によって特定される。

例えば、野生型または変異型のＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、またはＰＤＧＦＲ腫瘍細胞は、ＤＮＡの増幅およびシークエンシング技法、ＤＮＡ／ＲＮＡ検出技法により特定し得て、検出技法には、以下に限定するものではないがノーザンブロット法、サザンブロット法、および／または様々なバイオチップ／アレイ技法またはインサイチュハイブリダイゼーションが含まれる。野生型および変異型ポリペプチドは様々な技法により検出し得て、技法には、以下に限定するものではないが免疫診断技法、例えばＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットまたは免疫細胞化学が含まれる。

本発明は、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩とＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せを提供する。

本発明は、治療で使用するための４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩とＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せも提供する。

本発明は、癌の処置に使用するための４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩とＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せも提供する。

本発明は、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物との組合せを含んでなる医薬組成物も提供する。

本発明は、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せキットも提供する。

本発明は、薬剤の製造における、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せの使用も提供する。

本発明は、癌を処置するための薬剤の製造における、４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる組合せの使用も提供する。

本発明は癌を処置する方法も提供し、この方法は、処置を必要とする患者に４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩、適切にはその塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物との組合せを投与することを含んでなる。

以下の実施例は説明を目的としたものに過ぎず、本発明の範囲を限定しようとするものではない。

実験の詳細
実施例１：カプセル組成物
標準的なツーピースハードゼラチンカプセルに成分を以下の表Ｉに示す割合で充填することによって、本発明の組合せを投与するための経口剤形を形成する。

実施例２：カプセル組成物
標準的なツーピースハードゼラチンカプセルに成分を以下の表ＩＩに示す割合で充填することによって、本発明の化合物の一方を投与するための経口剤形を形成する。

実施例３：カプセル組成物
標準的なツーピースハードゼラチンカプセルに成分を以下の表ＩＩＩに示す割合で充填することによって、本発明の化合物の一方を投与するための経口剤形を形成する。

実施例４：錠剤組成物
以下の表ＩＶに示すようなスクロース、結晶セルロースおよび本発明の組合せの化合物を、１０％ゼラチン溶液と共に表に示す割合で混合および顆粒化する。湿潤した顆粒を選別し、乾燥させ、デンプン、タルクおよびステアリン酸と混合し、次に選別し、打錠する。

実施例５：錠剤組成物
以下の表Ｖに示すようなスクロース、結晶セルロースおよび本発明の組合せの化合物の一方を、１０％ゼラチン溶液と共に表に示す割合で混合および顆粒化する。湿潤した顆粒を選別し、乾燥させ、デンプン、タルクおよびステアリン酸と混合し、次に選別し、打錠する。

実施例６：錠剤組成物
以下の表ＶＩに示すようなスクロース、結晶セルロースおよび本発明の組合せの化合物の一方を、１０％ゼラチン溶液と共に表に示す割合で混合および顆粒化する。湿潤した顆粒を選別し、乾燥させ、デンプン、タルクおよびステアリン酸と混合し、次に選別し、打錠する。

実施例７：注射用非経口組成物
本発明の組合せの化合物を投与するための注射剤を、１．５重量％の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩（化合物Ａの塩酸塩）を水中の１０体積％のプロピレングリコール中で撹拌することによって製造する。適切には、投与すると、１０００ｍｇ／ｍ^２の化合物Ａが静脈内にもたらされる。

本発明の好ましい実施形態を上で説明したが、本発明が本明細書で開示の明確な指示に限定されないこと、また以下の請求項の範囲に含まれる全ての変型に対する権利を留保することを理解されたい。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］（ｉ）下記構造（Ｉ）：
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｉｉ）下記構造（ＩＩ）：
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを含んでなる、組合せ。
［２］構造（Ｉ）を有する化合物が塩酸塩の形態であり、構造（ＩＩ）を有する化合物がジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である、［１］に記載の組合せ。
［３］［１］または［２］に記載の組合せを、薬学的に許容可能な担体と共に含んでなる、キット。
［４］構造（Ｉ）を有する化合物の量が、３０分間にわたって投与される１０００ｍｇ／ｍ ^２であり、構造（ＩＩ）を有する化合物の量が、約０．５ｍｇ、１ｍｇ、および２ｍｇから選択される量であり、該量が１日１回投与されるように用いられる、［１］〜［３］のいずれか一項に記載の組合せ。
［５］癌の処置のための薬剤の製造における、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の組合せの使用。
［６］処置を必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、
治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、それを必要とするヒトにin vivo投与することを含んでなり、
前記組合せをある指定間隔内で投与し、また前記組合せがある期間にわたって投与する、方法。
［７］処置を必要とするヒトにおいて癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法であって、
４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドとをin vivo投与することを含んでなり、
投与プロトコルが、
４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩を、７週間にわたる、週１回３０分の１０００ｍｇ／ｍ ^２の静脈内注入と、それに続く化合物Ａで処置のされない１週間とからなる第１サイクルと、そして
１日目、８日目、および１５日目の３０分の１０００ｍｇ／ｍ ^２の静脈内注入とそれに続く２８日間の処置期間毎の化合物Ａで処置されない１週間とからなるサイクルで投与し、
Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドを、溶媒和されていない化合物の重量基準で約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、および約２ｍｇから選択される、適切には約２ｍｇである１日量で投与する、方法。
［８］前記癌が、乳癌、炎症性乳癌、腺管癌、小葉癌、結腸癌、膵癌、インスリノーマ、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、黒色腫、転移性黒色腫、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌、脳癌（グリオーマ）、グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多形グリア芽細胞腫、バナヤン−ゾナナ症候群（Bannayan-Zonana syndrome）、カウデン病、レルミット・デュクロ病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵癌、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽腔癌、頬癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質性腫瘍）および精巣癌から選択されるものである、［７］に記載の方法。
［９］前記癌が、卵巣癌、乳癌、膵癌および前立腺癌から選択される、［８］に記載の方法。
［１０］処置を必要とするヒトにおいて、ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲまたはＥｒｂＢ−２遺伝子に関して野生型または変異型である、あるいはＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ２タンパク質の過剰発現を有する癌を処置するまたはその重症度を低下させる方法であって、
治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、処置を必要とするヒトにin vivo投与することを含んでなり、
前記組合せをある指定間隔内で投与し、また前記組合せをある期間にわたって投与する、方法。
［１１］前記癌が、卵巣癌、乳癌、膵癌、および前立腺癌から選択される、［１０］に記載の方法。

Claims

（ｉ）下記構造（Ｉ）：
を有する化合物の塩酸塩と、
（ｉｉ）下記構造（ＩＩ）：
を有する化合物のジメチルスルホキシド溶媒和物とを含んでなる、組合せ医薬。
請求項１に記載の組合せ医薬を、薬学的に許容可能な担体と共に含んでなる、キット。
構造（Ｉ）を有する化合物の量が、３０分間にわたって投与される１０００ｍｇ／ｍ^２であり、構造（ＩＩ）を有する化合物の量が、０．５ｍｇ、１ｍｇ、および２ｍｇから選択される量であり、該量が１日１回投与されるように用いられる、請求項１または２に記載の組合せ医薬。
癌の処置のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ医薬を含む、医薬組成物。
治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との組合せを含んでなる、癌の処置のための医薬組成物であって、
前記組合せがin vivoで投与され、前記組合せをある指定間隔内で投与され、また前記組合せがある期間にわたって投与されるように用いられる、医薬組成物。
４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドとの組合せを含んでなる、癌を処置するまたはその重症度を低下させるための医薬組成物であって、
前記組合せがin vivoで投与され、
投与プロトコルが、
４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩を、７週間にわたる、週１回３０分の１０００ｍｇ／ｍ^２の静脈内注入と、それに続く４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンで処置のされない１週間とからなる第１サイクルと、そして
１日目、８日目、および１５日目の３０分の１０００ｍｇ／ｍ^２の静脈内注入とそれに続く２８日間の処置期間毎の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンで処置されない１週間とからなるサイクルで投与し、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドを、溶媒和されていない化合物の重量基準で０．５ｍｇ、１ｍｇ、および２ｍｇから選択される、１日量で投与されるように用いられる、医薬組成物。
前記癌が、乳癌、炎症性乳癌、腺管癌、小葉癌、結腸癌、膵癌、インスリノーマ、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、黒色腫、転移性黒色腫、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌、脳癌（グリオーマ）、グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多形グリア芽細胞腫、バナヤン−ゾナナ症候群（Bannayan-Zonana syndrome）、カウデン病、レルミット・デュクロ病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵癌、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽腔癌、頬癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質性腫瘍）および精巣癌から選択されるものである、請求項６に記載の医薬組成物。
前記癌が、卵巣癌、乳癌、膵癌および前立腺癌から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
ＢＲＡＦ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＳＯＳ１、ＮＦ１、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲまたはＥｒｂＢ−２遺伝子に関して野生型または変異型である、あるいはＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ２タンパク質の過剰発現を有する癌を処置するまたはその重症度を低下させるための医薬組成物であって、
治療有効量の４−アミノ−１−（２−デオキシ−２,２−ジフルオロ−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノシル）ピリミジン−２（１Ｈ）−オン２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチ；−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との組合せを含んでなり、
前記組合せがin vivoで投与され、前記組合せをある指定間隔内で投与し、また前記組合せをある期間にわたって投与されるように用いられる、医薬組成物。
前記癌が、卵巣癌、乳癌、膵癌、および前立腺癌から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。