JP6048959B2 - リゾチームの製造方法 - Google Patents
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Description
(1)以下の(a)又は(b)の分泌シグナルペプチドと以下の(c)〜(e)のいずれか1つの成熟型リゾチームタンパク質とを含む融合タンパク質をコードする遺伝子を有するヨトウガ由来の細胞を培養するか、又は該遺伝子を有するカイコを生育させることを含み、前記培養又は生育によりリゾチームが分泌生産される、リゾチームの製造方法。
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列から成る分泌シグナルペプチド
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1又は2個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列から成り、且つ分泌シグナル活性を有する分泌シグナルペプチド
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列から成るリゾチームタンパク質
(d)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質
(e)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質
(2)前記分泌シグナルペプチドが配列番号2に記載のアミノ酸配列から成る、(1)記載の方法。
(3)前記成熟型リゾチームタンパク質が配列番号4に記載のアミノ酸配列から成る、(1)又は(2)記載の方法。
(4)前記生育によりリゾチームが前記遺伝子を有するカイコの絹糸腺中に分泌生産され、且つ絹糸表層に蓄積される、(1)〜(3)のいずれか1記載の方法。
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1〜3個(好ましくは1又は2個、特に好ましくは1個)のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列から成り、且つ分泌シグナル活性を有する分泌シグナルペプチド;
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列を含むか、又は当該アミノ酸配列から成るリゾチームタンパク質;
(d)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1又は数個(例えば、1〜10個、好ましくは1〜5個、特に好ましくは1〜3個)のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質;
(e)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して80%以上(好ましくは90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、特に好ましくは99%以上)の同一性を有するアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質。
成熟型ブタリゾチーム遺伝子にウシリゾチーム分泌シグナルペプチド遺伝子を連結したハイブリッド(融合)遺伝子を人工的に合成し、ビール酵母(サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae))、昆虫細胞及びカイコ絹糸腺で発現させ、培養液中や絹糸表層に組換え型ブタリゾチームを分泌させることを試みた。
本比較例では、成熟型ヒトリゾチーム遺伝子にウシリゾチーム分泌シグナルペプチド遺伝子を連結したハイブリッド(融合)遺伝子を人工的に合成し、ヨトウガ由来細胞(expresSF+細胞)で発現させ、培養液中に組換え型ヒトリゾチームを分泌させることを試みた。
Claims (3)
- 以下の(a)の分泌シグナルペプチドと以下の(b)〜(d)のいずれか1つの成熟型リゾチームタンパク質とを含む融合タンパク質をコードする遺伝子を有するヨトウガ由来の細胞を培養するか、又は該遺伝子を有するカイコを生育させることを含み、前記培養又は生育によりリゾチームが分泌生産される、リゾチームの製造方法。
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列から成る分泌シグナルペプチド
(b)配列番号4に記載のアミノ酸配列から成るリゾチームタンパク質
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質
(d)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列から成り、且つリゾチーム活性を有するリゾチームタンパク質 - 前記成熟型リゾチームタンパク質が配列番号4に記載のアミノ酸配列から成る、請求項1記載の方法。
- 前記生育によりリゾチームが前記遺伝子を有するカイコの絹糸腺中に分泌生産され、且つ絹糸表層に蓄積される、請求項1又は2記載の方法。
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