JP5995700B2

JP5995700B2 - ポリメトキシフラボン類の製造方法

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Publication number: JP5995700B2
Application number: JP2012273185A
Authority: JP
Inventors: 剛有馬; 村西　修一; 修一村西; 足立　謙次; 謙次足立; 篤村社
Original assignee: Ogawa and Co Ltd
Current assignee: Ogawa and Co Ltd
Priority date: 2012-12-14
Filing date: 2012-12-14
Publication date: 2016-09-21
Anticipated expiration: 2032-12-14
Also published as: JP2014118370A

Description

本発明は、水溶性で保存安定性に優れた高純度のポリメトキシフラボン類を、天然物を原材料として製造する方法に関するものである。
詳しくは、みかん属植物の果皮や種などを原材料とし、超臨界二酸化炭素流体と助溶媒であるエタノール水溶液とを用いて得られた抽出物から、濃縮による溶媒の除去と液液抽出、多孔質素材を用いた精製工程により、保存安定性に優れた水溶性ポリメトキシフラボン類を製造する方法に関する。

従来から下記一般式（Ｉ）

（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、及びＲ₅は各々独立して水素又はメトキシ基である）
の構造式で表されるポリメトキシフラボン類は、みかん属植物、すなわち柑橘類に多く含まれていることが知られている。
特にノビレチン（上記式（Ｉ）でＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、及びＲ₅のすべてがメトキシ基）に関しては、発ガン抑制作用等の生理活性が明らかにされている物質である（非特許文献１参照）。

さらにポリメトキシフラボン類は食品の分野において、呈味改善剤及び呈味改善方法（特許文献１参照）や、香味劣化抑制剤（特許文献２参照）など、様々な有用な効果が見出され注目されている。

みかん属植物の果皮油にはポリメトキシフラボン類以外に、性質が非常に異なる多種多様な数多くの成分が含まれている（非特許文献２、非特許文献３参照）。例えば、テルペン類等の炭化水素化合物、アルデヒド、エステル等のカルボニル化合物、アルコール類等の揮発性成分および通常の条件では揮発しないワックス類、カロテノイド色素等の不揮発性成分が含まれており、簡便な方法でポリメトキシフラボン類を選択的に分離することは困難とされている。

みかん属植物に含まれるポリメトキシフラボン類を精製する従来技術が、前掲の特許文献１及び２に開示されている。
具体的には、みかん属植物の果実、果皮、果皮油、種、葉部等の原料からエタノールやメタノール、クロロホルム等の有機溶剤を用いて加熱抽出する方法や、それらの抽出方法と合成樹脂による精製を組み合わせた方法である。

また超臨界流体と助溶媒を併用して抽出する方法（特許文献３参照）や抽出した果皮油から分子蒸留を用いて分離精製する方法（特許文献４、特許文献５参照）なども知られている。

前掲の特許文献４及び５記載の分子蒸留を用いる方法では、確かにポリメトキシフラボン類を精製する上で有効であると考えられる。しかし、精留及び分子蒸留といった蒸留操作を繰り返し行わなければならず、工程が煩雑で長いため時間あたりの収率が悪く、また長い熱履歴による精油の劣化などが懸念される。さらに原料には精油しか使用できないため、まず精油を得る工程も必要となってくる。

そこで原料の形態にとらわれることなく、短時間で効率良くポリメトキシフラボン類を得る方法として前掲の特許文献３に記載されているような超臨界流体と助溶媒を用いて抽出する方法が挙げられる。当該方法において、超臨界流体として一般的に利用されている二酸化炭素を用いれば、原料に対する熱履歴などの不安も少なく安全且つ省エネルギーで抽出することが可能である。

しかし上記の特許文献３の方法で得られる抽出物は、助溶媒由来のエタノール水溶液と原料由来の炭化水素化合物をはじめとする非極性の油脂成分からなる不均一な液体である。また目的のポリメトキシフラボン類の純度もあまり高いものではなく、そのままでは呈味改善剤や香味劣化抑制剤等の目的で食品等に使用する上で極めて用途が制限されることとなる。

前掲の特許文献３においては、上記のような抽出物を濃縮し、その濃縮物をエタノールに溶解させることで分析サンプルを供する方法が示されている。
しかしながら、この方法で得られる組成物中には原料由来の油脂成分が多く含まれているためポリメトキシフラボン類の純度は低く、食品などに添加物として使用するには不向きである。また濃縮物そのものの極性が低いため、特に水溶性のものが求められる飲料などにはそのまま使用することが出来ない。

特開平６−３３５３６２号公報特開平１１−１６９１４８号公報特開２００９−６７７５５公報特開２００９−２１５３１８公報特開２０１０−３７３１７公報

日本農芸化学会誌75巻、12号、2001年、1283〜1290貢香料化学総覧（Ｉ）232頁、廣川書店、昭和42年果実の科学、130頁、朝倉書店、1991年

本発明の目的は、超臨界流体抽出によって得られたみかん属植物の抽出物から、保存安定性と水溶性に優れたポリメトキシフラボン類を高純度で製造する方法を提供することである。

本発明者らは、上記製造方法を確立するために鋭意研究した結果、下記の方法で、水溶性の安定なポリメトキシフラボン類を高い純度で簡便に製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の方法では、まず、超臨界流体と助溶媒によって得られた抽出物から濃縮操作に
よりエタノール水溶液を除去しオイル様の濃縮物とする。次いで、得られたオイル様の濃縮物に新たにエタノール水溶液を加えて液液抽出を行い、その後活性炭などの多孔質素材で精製する。そして最後にエタノール濃度及び固形濃度の調整を行う。

本発明は、超臨界流体と助溶媒によって得られた抽出物を濃縮により助溶媒を除去した後、液液抽出と活性炭処理を行うことによって、安定で水溶性のポリメトキシフラボン類を製造する方法である。
すなわち、本発明は、下記の工程：
（Ａ）超臨界流体と助溶媒による抽出操作によって、みかん属植物から抽出液Ａを得る工程；
（Ｂ）濃縮操作によって、前記抽出液Ａから助溶媒を除去した濃縮物Ｂを得る工程；
（Ｃ）エタノール水溶液による抽出操作によって、前記濃縮物Ｂから抽出液Ｃを得る工程；
（Ｄ）前記抽出液Ｃ又は前記抽出液Ｃにエタノール水溶液を添加した希釈溶液を多孔質素材で精製してポリメトキシフラボン類を得る工程；
を含む、水溶性ポリメトキシフラボン類の製造方法である。

本発明の製造方法によれば、水に対する溶解性が高く、かつ長期間保存した場合に溶解後の沈殿や濁りが生じることのない安定性に優れたポリメトキシフラボン類を簡便で経済的に得ることができる。また、本発明の製造方法によれば、純度が高く異味異臭のないポリメトキシフラボン類を提供することができる。

以下に本発明の実施形態について説明する。
〔１〕ポリメトキシフラボン類およびその原材料
本発明で製造されるポリメトキシフラボン類は、下記一般式（Ｉ）：

（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、及びＲ₅は各々独立して水素又はメトキシ基である）で表される化合物である。
具体的には、ペンタメトキシフラボン（融点１７９℃）、ノビレチン（融点１３４℃）、テトラメトキシフラボン（融点１２８℃）、ヘプタメトキシフラボン（融点１２９〜１３１℃）、タンゲレチン（融点１５４℃）等が該当する。

上記ポリメトキシフラボン類は、みかん属（Citrus）植物の外果皮に含まれる果皮油中に多く含有されている。中でも、入手の容易さの観点から特にシイクワシャー（Citrus depressa Hayata）、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）の果皮を原材料として用いることが好ましい。
果皮の形態は特に限定されるものではないが、例えば、果汁を搾汁した後の残渣を生の
ままもしくは乾燥したものを使用する方法が挙げられる。

〔２〕超臨界流体による抽出工程（工程Ａ）
本工程で使用する超臨界流体としては、例えば、その圧力が７.４〜６０ＭＰａ、好ましくは１５〜４０ＭＰａ、その温度が３２〜１００℃、好ましくは３５〜７０℃の領域における超臨界状態の二酸化炭素が挙げられる。また使用する超臨界流体の使用量は原料のみかん属植物の１〜３倍容量、好ましくは１.７〜２.５倍容量であり、その抽出時間は、２〜６時間、好ましくは２.５〜４時間である。

さらに本発明ではポリメトキシフラボン類の抽出効率を上げるため、上記超臨界流体と共に助溶媒を使用することが好ましい。助溶媒としてはエタノール水溶液が食品に使用できる観点から好適である。そのエタノール濃度は１０〜８０（ｗ／ｗ）％、好ましくは２０〜５０（ｗ／ｗ）％である。使用量は原料のみかん属植物の０.１〜２倍、好ましくは０.３〜１倍量である。

〔３〕濃縮工程（工程Ｂ）
本工程は、先の超臨界流体抽出によって得られた抽出物中の助溶媒、例えばエタノール水溶液を、エバポレーター等を用いた濃縮操作によって除去する工程である。
みかん属植物の果皮等から超臨界二酸化炭素流体と助溶媒であるエタノール水溶液で抽出物を得た場合、その抽出物は、水溶性ポリメトキシフラボン類が多量に存在する含水エタノール抽出液とみかん属植物の果皮由来のオイル抽出液の不均一な溶液となる。ここで抽出液中のエタノール水溶液のみを分離、精製することでポリメトキシフラボン類の液体製剤とすることも可能であるが、不要な非極性成分を多く含むため飲料などに添加する際、沈殿や濁りなどを生じてしまい安定な水溶性製剤であるとは言えない。
また、分離した含水エタノール抽出液は高アルコール濃度であるため、水を加えて低アルコール濃度に調整して不要成分を除去し精製する方法も考えられる。しかし、この方法による調整液は白濁化しているため、活性炭処理などで清澄化することは可能であるが、その際ポリメトキシフラボン類も多く失われるため有効な方法とは言えない（後記の比較例１を参照）。

そこで含水エタノール抽出液中の各成分を一旦オイル抽出液に移行させ、改めてポリメトキシフラボン類を含む成分を精製抽出する必要がある。すなわちエタノール及び水を濃縮操作により除去することで、次工程でのポリメトキシフラボン類の精製抽出を可能とするものである。
また、濃縮後の助溶媒の濃度は、例えば助溶媒がエタノールである場合は、濃縮物中に０〜１０（ｗ／ｗ）％が好ましく、特に好ましくは０〜５（ｗ／ｗ）％である。

〔４〕液液抽出工程（工程Ｃ）
上記濃縮物からポリメトキシフラボン類を効率よく精製抽出する簡便な方法としてエタノール水溶液を用いた液液抽出が挙げられる。
その際、エタノール濃度はなるべく低い方が不要な油溶成分を抽出することなくポリメトキシフラボン類を抽出することができるが、あまり低すぎるとポリメトキシフラボン類の抽出効率を損なうこととなる。そのため抽出に使用するエタノール水溶液の濃度は１０〜８０（ｗ／ｗ）％、好ましくは２０〜４０（ｗ／ｗ）％である。
使用量は濃縮物の２〜４０倍、好ましくは５〜２０倍量である。また抽出時の温度は、１０〜９０℃、好ましくは４０〜８０℃である。

〔５〕濃度調整工程（工程Ｃ１）
上記液液抽出によって得られた抽出液は、そのまま次の工程Ｄに付することができるが、濃度調整の観点から、次工程Ｄの実施前に、エバポレーター等で、水及びエタノールを
除去して濃縮し、エタノール濃度調整を行うことが好ましい。調整後のエタノール濃度は、４０〜９０（ｗ／ｗ）％が好ましく、特に好ましくは５０〜８０（ｗ／ｗ）％である。

〔６〕精製工程（工程Ｄ）
工程Ｃ１を省略する場合は、工程Ｃで得られた抽出液をそのまま、或いは工程Ｃの抽出液にエタノール水溶液を添加することにより希釈した希釈溶液を精製処理に付する。
工程Ｃ１を実施する場合は、工程Ｃ１で得られた溶液にエタノール水溶液を添加して希釈した後、当該希釈溶液を精製処理に付する。
多孔質素材による精製処理に付す際の溶液濃度は、ポリメトキシフラボン濃度が０.１〜２０質量％、特に５質量％程度が好ましく、また、エタノール濃度が２０〜１００質量％、特に７０質量％程度に調整しておくことが好適である。
必要に応じて上記の濃度の調整を行った後、当該溶液を多孔質素材によって精製し、より安定なポリメトキシフラボン類を得ることができる。
多孔質素材による精製は、通常行われている方法で行えば良く、例えば、カラムに充填された多孔質素材に前記抽出物を含む溶液を一定流量で接触させる方法や、該抽出物に多孔質素材を投入し、一定時間撹拌後に多孔質素材を分離する方法がある。その方法に格別の制約はなく、目的により選択することができる。

使用できる多孔質素材は、活性炭もしくは非イオン性多孔性樹脂吸着剤が安価で簡便に使用できる点で好ましい。
樹脂吸着剤は、一般に不溶性の三次元架橋構造ポリマーであってイオン交換基のような官能基を実質的に持たないものであり、例えば、その母体がスチレン系である「アンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−１６」（オルガノ株式会社製）、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体系である「セパビーズＳＰ７０（商品名）」（三菱化学株式会社製）あるいは「ダイヤイオンＨＰ２０（商品名）」（三菱化学株式会社製）等を使用できるが、これらに限るものではない。

多孔質素材の使用量はその種類によっても異なるが、処理液中の固形に対して、５〜１００（ｗ／ｗ）％量、好ましくは１０〜５０（ｗ／ｗ）％量である。また処理時の温度は、０〜９０℃、好ましくは２０〜７０℃である。さらに処理時間は、０.５〜１０時間、好ましくは１〜５時間である。
なお、抽出液に多孔質素材を投入した場合は、処理後にメッシュろ過、ろ紙ろ過又は珪藻土ろ過など一般的なろ過方法によって使用した多孔質素材を除去することが出来る。

〔７〕ポリメトキシフラボン類の製剤化
得られたポリメトキシフラボン類は、高純度のペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、ヘプタメトキシフラボン及びタンゲレチンから成るので、そのままでも飲食品などに添加して使用できるが、必要に応じて、公知の製剤添加剤などと混合して、カプセル、顆粒状、錠剤、ペースト状又は飲料の形態に製剤化することができる。

公知の製剤添加剤としては、賦形剤、基剤、結合剤、崩壊剤、崩壊補助剤、滑沢剤、流動化剤、コーティング剤、可塑剤、消泡剤、糖衣剤、剤皮、光沢化剤、発泡剤、防湿剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、溶解剤、溶解補助剤、溶剤、安定化剤、乳化剤、懸濁剤、分散剤、抗酸化剤、充填剤、粘稠剤、粘稠化剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、保存剤、甘味剤、矯味剤、清涼化剤、着香剤・香料、芳香剤、着色剤などが挙げられる。

また、その他、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、大豆レシチン、卵黄レシチン、トコトリエノール、ＧＡＢＡ（γ−アミノ酪酸）、テアニン、リコピン、ヤマブシタケ、イチョウ葉
、明日葉、ホップ、菊の花、ガジュツ、サフラン、ニンニク、発芽玄米、ビタミンＣ、ビタミンＥ、コエンザイムＱ10、ローヤルゼリー、プロポリス、コラーゲン、植物ステロール、植物性油脂類（オリーブ油、大豆油など）、不飽和脂肪酸、ミツロウ、亜鉛酵母、セレン酵母等を配合してもよい。

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例の記載に限定されるものではない。

〔実施例１〕
（１）試料
シイクワシャーの果皮及び種を熱風機械乾燥し、ハンマーミルで粉砕したものを試料とした。

（２）超臨界流体による抽出
試料約２５０ｇに５０（ｗ／ｗ）％エタノールを１８０ｇ添加し、混合したものを抽出槽に仕込み、圧力２５ＭＰａ、温度４０℃の超臨界二酸化炭素を連続的に４時間供給して抽出を行った。
抽出槽から流出する抽出物含有超臨界二酸化炭素は、圧力４ＭＰａ、温度２５℃に保った分離槽に移し、抽出物を二酸化炭素から分離し、１００ｇの抽出物を得た。得られた抽出物はエタノール水溶液層とオイル層の２層に分離していた。

（３）濃縮
ロータリーエバポレーターで、上記で得られた抽出物から水及びアルコールを除去し、ほぼオイル層のみになるまで濃縮し、３０ｇの濃縮物を得た。

（４）液液抽出
上記オイル状の濃縮物に３０（ｗ／ｗ）％エタノールを３００ｇ添加し４０℃で２時間攪拌した後、全量を分液ロートに移した。分液ロート中で２時間静置して上下２層に分離させ、下層のエタノール溶液層約３００ｇを抽出液として回収した。回収した抽出液は薄く黄色がかった白濁液の外観を呈していた。

（５）ろ過
上記で得られた抽出液は−１５℃で一晩静置し、その後珪藻土ろ過を行った。得られたろ液は清澄化され黄色透明の溶液であった。

（６）濃度調整及び精製
清澄化されたろ液をロータリーエバポレーターで濃縮し３ｇの濃縮液を得た。
得られた濃縮液に９５（ｖ／ｖ）％エタノールを９.５ｇ、蒸留水を１.５ｇ添加し、ポリメトキシフラボン類を６.５（ｗ／ｗ）％含有する７０（ｗ／ｗ）％エタノール溶液に調整した。
この調整液に活性炭を０.３ｇ添加し、６５℃で２時間攪拌して精製した後、珪藻土ろ過で活性炭を除去した。その後、水を加えてポリメトキシフラボン類の濃度が５.１（ｗ／ｗ）％になるように調整し、ポリメトキシフラボン類含有液を得た。

こうして製造されたポリメトキシフラボン類含有液は表１に示すように、高純度の各種ポリメトキシフラボンを含んでいた。

〔ポリメトキシフラボンの測定〕
各種ポリメトキシフラボンの測定は、得られた水溶性ポリメトキシフラボン類を９９．
５％エタノールで１０００倍希釈し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）用いて以下の条件で行った。
装置：アジレント・テクノロジー株式会社製「Agilent 1100 HPLC システム」
カラム：株式会社資生堂製「CAPCELL PAK C18MG」
カラム温度：４０℃
溶離液：Ａ．アセトニトリル
Ｂ．１０％アセトニトリル水溶液（ｐＨ2.5 Ｈ₃ＰＯ₄）
グラジエント条件：０分 → ２５分
Ａ．アセトニトリル０％１００％
Ｂ．１０％アセトニトリル水溶液１００％０％
（ｐＨ2.5 Ｈ₃ＰＯ₄）
流速：１ｍｌ／分間
検出波長：３２５ｎｍ

ポリメトキシフラボンの含有量は、予め単離した純品で作成した検量線を用いて算出した。
表１の総ポリメトキシフラボン濃度はノビレチンとタンゲレチンの含有濃度の和を示す。また、総固形濃度は、蒸発皿に海砂と水溶性ポリメトキシフラボン類を入れて均一に混合させた後、１０５℃の恒温槽に２時間入れ、その前後の質量変化で固形量を求めることで算出した。ポリメトキシフラボン純度は、総ポリメトキシフラボン濃度を総固形濃度で除した値を百分率で示した。

実施例１で製造したポリメトキシフラボン類含有液を水に０〜１.０ｇ添加した時のポリメトキシフラボン濃度と比濁度、そして目視で濁っているかを確認した結果を表２に示す。
比濁度はハック社製の比濁計「2100AN型ラボ用濁度計」（ホルマジン標準液）を使用して測定した。
目視評価は、ポリメトキシフラボン類含有液を添加する前の水（透明）を基準に評価した。
この結果からも分かるように、本発明で製造されたポリメトキシフラボン類は水溶性に優れる。

実施例１で製造したポリメトキシフラボン類含有液を５℃、２５℃、４０℃で、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月間保管した後のポリメトキシフラボン濃度の変化や沈殿の発生の有無、異味異臭の発生の有無を確認した結果を表３に示す。表中「０月」は製造直後のポリメトキシフラボン類含有液の状態を示したものである。
この結果からも分かるように、本発明方法で製造されたポリメトキシフラボン類は高い保存安定性を持つものであった。

〔比較例１〕
工程Ｂの濃縮操作の有効性を確認するため、以下の対比実験を行った。
実施例１の「（２）超臨界流体による抽出」で得られた粗抽出物を濃縮せずにエタノール水溶液層のみを分液ロートにて分離し７０ｇの溶液を得た。得られた溶液の組成は、エタノールが８４（ｗ／ｗ）％、水が１３（ｗ／ｗ）％、そして固形が３（ｗ／ｗ）％であった。
この溶液に９５（ｖ／ｖ）％エタノールを３３.１ｇ、水を１９６.９ｇ添加することで３００ｇに調整した。この調整液は実施例１の「（４）液液抽出」で得られた抽出液と同様に薄く黄色がかった白濁色の外観を呈していた。
その後実施例１の「（５）ろ過」と同様に冷却後、珪藻土ろ過を行ったが溶液は清澄化されず白濁したままだった。
そこで濁りを除去するために活性炭を２ｇ添加し、６５℃で２時間攪拌した後、珪藻土ろ過により活性炭を除去した。こうして得られた溶液は黄色透明な外観を呈していた。
この比較例１で得られたポリメトキシフラボン類含有液と実施例１の「（５）ろ過」で得られたポリメトキシフラボン類含有液のそれぞれのポリメトキシフラボン類の濃度及び全固形の濃度、ポリメトキシフラボン類の純度、そしてポリメトキシフラボン濃度が約５０ｐｐｍとなるように水に添加した時の濁りの有無（目視評価）について表４に示した。

表４から明らかなように、ポリメトキシフラボン類を効率よく精製抽出し、且つ飲料に添加した際に濁りを生じないようにするためには、実施例１のように超臨界抽出物中のエタノール溶液を一旦濃縮により除去し、その濃縮物を改めて含水エタノールで液液抽出する方が有利であることが明らかとなった。

〔比較例２〕
工程Ｄの精製操作の有効性を確認するため、以下の対比実験を行った。
実施例１の「（５）ろ過」までと同様にポリメトキシフラボン類溶液を製造し、その後の「（６）濃度調整及び精製」において活性炭処理を行わずに５.１（ｗ／ｗ）％ポリメトキシフラボン類含有液を製造した。
この比較例２で製造したポリメトキシフラボン類含有液と、実施例１で製造したポリメトキシフラボン類含有液をそれぞれ常温で６０日間保管し、経時的な沈殿発生の有無（目視評価）を観察して表５に示した。表中「０日」は製造直後のポリメトキシフラボン類含有液の状態を示したものである。

表５から明らかなように、活性炭処理を行わない比較例２のポリメトキシフラボン類含有液では製造後５日目から沈殿の発生が見られた。安定なポリメトキシフラボン類含有液を製造するには活性炭処理の工程を設けることが有効であることが確認された。

〔実施例２〕
以下の表６の処方に従ってオレンジ飲料を調製した。
試飲したところ、異味異臭がなくオレンジの自然な風味が感じられた。

本発明の製造方法によれば、保存時の安定性が高く、また水への溶解性に優れたポリメトキシフラボン類をみかん属植物から効率よく且つ安価に得ることができる。

Claims

下記の工程：
（Ａ）超臨界流体と助溶媒による抽出操作によって、みかん属植物から抽出液Ａを得る工程；
（Ｂ）濃縮操作によって、前記抽出液Ａから助溶媒を除去した濃縮物Ｂを得る工程；
（Ｃ）エタノール水溶液による抽出操作によって、前記濃縮物Ｂから抽出液Ｃを得る工程；
（Ｄ）前記抽出液Ｃ又は前記抽出液Ｃにエタノール水溶液を添加した希釈溶液を多孔質素材で精製してポリメトキシフラボン類を得る工程；
を含む、水溶性ポリメトキシフラボン類の製造方法。
下記の工程：
（Ａ）超臨界流体と助溶媒による抽出操作によって、みかん属植物から抽出液Ａを得る工程；
（Ｂ）濃縮操作によって、前記抽出液Ａから助溶媒を除去した濃縮物Ｂを得る工程；
（Ｃ）エタノール水溶液による抽出操作によって、前記濃縮物Ｂから抽出液Ｃを得る工程；
（Ｃ１）濃縮操作によって、抽出液Ｃからエタノール及び水を除去した濃縮物Ｃ１を得る工程；
（Ｄ）前記濃縮物Ｃ１にエタノール水溶液を添加して希釈溶液を得た後、当該希釈溶液を多孔質素材で精製してポリメトキシフラボン類を得る工程；
を含む、水溶性ポリメトキシフラボン類の製造方法。
みかん属植物が、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、サワーオレンジ（Citrus aurantium）、タンジェリン（Citrus reticlata Blanco var. tangerine）、マンダリン（Citrus reticlata Blanco var. mandarin）、シイクワシャー（Citrus depressa Hayata）から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１又は２記載の製造方法。
ポリメトキシフラボン類が、ペンタメトキシフラボン、ノビレチン、テトラメトキシフラボン、タンゲレチン、ヘプタメトキシフラボンからなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求項１〜３のいずれかの項に記載の製造方法。
工程（Ａ）の助溶媒が、水、エタノール又はエタノール水溶液である請求項１〜４のいずれかの項に記載の製造方法。
工程（Ｂ）の濃縮物Ｂ中の助溶媒濃度が、０〜１０（ｗ／ｗ）％である請求項１〜５のいずれかの項に記載の製造方法。
工程（Ｃ）の抽出に用いるエタノール水溶液のエタノール濃度が、１０〜８０（ｗ／ｗ）％である請求項１〜６のいずれかの項に記載の製造方法。
工程（Ｄ）の多孔質素材が、活性炭又は非イオン性多孔性樹脂吸着剤である請求項１〜７のいずれかの項に記載の製造方法。