JP5994059B2 - 抗マラリア活性を有するアザアルテミシニン誘導体及びその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、新規６−アザアルテミシニン誘導体及びその製造方法に関し、より詳細には、抗マラリア活性を有する６−アザアルテミシニン誘導体及びその製造方法に関する。

マラリアは、世界中で多くの感染者が発生し続けている感染性疾患である。ヒトに寄生するマラリア原虫類には、熱帯熱マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ)、三日熱マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ)、四日熱マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ)、卵形マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ)が存在するが、その約８０％は熱帯熱マラリア原虫によってひき起こされる。この寄生虫は、最も致死性の高い種類の熱帯熱マラリアの原因であり、重症の場合には脳性マラリアになって死に至ることが知られている。

これらのマラリア原虫類に対する既存の抗マラリア剤としては、従来、クロロキン、ファンシダール(ピリメサミンとスルファドキシンとの合剤)、メフロキン、キニン、およびプリマキン等が用いられていた。しかしながら、現在クロロキンやファンシダールに対する薬剤耐性マラリア原虫がマラリア流行地域に広く蔓延し、さらに、両者の多剤耐性株も出現しており、これらの抗マラリア剤としての有用性はマラリア流行地域で著しく低下している。

一方、このような薬剤耐性のあるマラリア原虫に対して感受性をもつ抗マラリア薬として、アルテミシニンが１９８０年以降に新規に開発された。アルテミシニン（アルテアヌイン，キンガオスとも呼ばれる）は、植物アルテミシア（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ Ｌ．；ヨモギ属の植物、和名：クソニンジン）から単離されたセスキテルペンラクトンである。アルテミシニン分子は、エンドペルオキシド架橋を含み、当該エンドペルオキシド部分は、マラリア活性に重要であることが明らかになっており、これを欠いた類似体は不活性であることが分かっている。

天然のアルテミシニンは、植物中に低濃度でしか存在しないことから薬物としては比較的高価なものとなっており、また、アルテミシニンは水への溶解性が低いこと、及び治療薬としての作用としては速効性があるが完治せずに再発し易いなどという問題があった。そこで、アルテミシニンに基づく多様な合成誘導体に変換し、それによって水への溶解性や医薬的有効性等を改善することが試みられている。そのような公知のアルテミシニン類似体には、アルテスネート、ジヒドロアルテミシニン、アルテメーテル、アルテエーテル、プロピルカルボネート、ジヒドロアルテミシニンおよびアルテリン酸などがある。また、アルテミシニンのＣ９位やＣ１０位に様々な置換基を有するアルテミシニン誘導体も製造されている（特許文献１等）。しかしながら、これらアルテミシニン誘導体は、安定性、バイオアベイラビリティーおよび起こり得る神経毒性に関連する問題があり、また、種々のマラリア原虫に対する広範な薬効を示す新たなアルテミシニン誘導体への要望も存在する。

これまで、発明者らは、多環式骨格とエンドペルオキシ導入位置を改変する合成戦略を案出し、アルテミシニンに匹敵する高い酸化度と構造の複雑性を有する低分子群の合成に成功し、それらが強力な抗トリパノソーマ活性を有することを報告している（非特許文献１及び２）。

国際公開ＷＯ００／０４０２４号公報

Ｏｇｕｒｉ，Ｈ．;Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｙ．;Ｈｉｒｕｍａ，Ｔ．;Ｏｉｋａｗａ，Ｈ．、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００９，１１，６０１． Ｏｇｕｒｉ，Ｈ．;Ｈｉｒｕｍａ，Ｔ．;Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｙ．;Ｏｉｋａｗａ，Ｈ．;Ｉｓｈｉｙａｍａ，Ａ．;Ｏｔｏｇｕｒｏ，Ｋ．;Ｙａｍａｄａ，Ｈ．;Ｏｍｕｒａ，Ｓ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２０１１，１３３，７０９６．

このような背景から、本発明は、種々の機能性官能基を付与することができ、より効果の高い抗マラリア活性を有する新規アルテミシニン誘導体を提供することを課題とするものである。また、本発明は、かかるアルテミシニン誘導体を比較的少ない工程で合成することができる製造方法を提供することを課題とするものである。

本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討を行った結果、セスキテルペンの三環性骨格のＣ６位に窒素原子を導入した新規６−アザアルテミシニン誘導体が優れた抗マラリア活性を有すること、及び、従来のアルテミシン多段階合成よりも短工程で当該６−アザアルテミシニン誘導体を得ることができることを見出した。これら知見に基づき、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、一態様において、以下の式（Ｉ）で表される６−アザアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を提供するものである。

ここで、式中、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、もしくはアシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アシル、スルホンアミド、アリール、もしくはアリールアルキルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルを表し；及び、Ｒ^４は、＝Ｏ、ＯＨ、置換されていてもよいアルキル、アルコキシ、カルボニル、もしくはカルボキシル、又は下記式を有する置換基

を表す。

好ましくは、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルもしくはＣ_１〜１０アシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０アシル、スルホンアミド、もしくはベンジルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルを表し；及び、Ｒ^４は＝Ｏである。

一つの好ましい態様において、本発明は、以下の式（ＩＩ）で表される６−アザアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を提供するものである（なお、式中、「Ｍｅ」は、メチルを意味する）。

一つの好ましい態様において、本発明は、以下の式（ＩＩＩ）で表される６−アザアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を提供するものである（なお、式中、「Ｍｅ」は、メチルを意味する）。

好ましい態様において、本発明は、上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供するものである。

好ましい態様において、本発明は、上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、マラリア原虫類の感染治療剤を提供するものである。また、マラリア原虫類による感染症を治療するための薬剤を製造するための、上記式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供するものである。

別の態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）

で表される６−アザアルテミシニン誘導体を製造する方法であって、
以下の式（Ａ）

で表される化合物と以下の式（Ｂ）

で表される化合物とを、トリメチルシリルアセチレン存在下で反応させることによって、以下の式（Ｃ）

で表される中間体を得る工程を含む、該方法に関する（なお、式中、「Ｍｅ」は、メチルを意味し、「ｔ−Ｂｕ」はｔｅｒｔ−ブチルを意味する）。

ここで、上記式（Ｉ）、（Ａ）〜（Ｃ）のいずれの式中においても、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、もしくはアシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アシル、スルホンアミド、アリール、もしくはアリールアルキルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルを表し；及び、Ｒ^４は、＝Ｏ、ＯＨ、置換されていてもよいアルキル、アルコキシ、カルボニル、もしくはカルボキシル、又は下記式を有する置換基

を表す。

好ましくは、本発明の製造方法は、前記式（Ｃ）で表される化合物をチタン錯体触媒の存在下で環化させて以下の式（Ｄ）

得る工程、及び、前記式（Ｄ）の化合物を環化させて前記式（Ｉ）の６−アザアルテミシニン誘導体を得る工程を更に含む。好ましくは、上記チタン錯体触媒はチタンイソプロポキサイド(ＩＶ)である（なお、式中、「Ｍｅ」は、メチルを意味し、「ｔ−Ｂｕ」はｔｅｒｔ−ブチルを意味する）。

好ましくは、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルもしくはＣ_１〜１０アシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０アシル、スルホンアミド、もしくはベンジルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルを表し；及び、Ｒ^４は＝Ｏである。更に好ましい１つの態様において、Ｒ^１は、メチルであり；Ｒ^２は、ベンジルであり；Ｒ^３は、Ｈであり；及び、Ｒ^４は＝Ｏである。更に好ましい別の態様において、Ｒ^１は、メチルであり；Ｒ^２は、ｐ−メトキシベンジルであり；Ｒ^３は、Ｈであり；及び、Ｒ^４は＝Ｏである。

本発明の新規６−アザアルテミシニン誘導体は、アルテミシニン三環性骨格のＣ６位に窒素原子を導入した骨格を有することによって、優れた選択毒性の抗マラリア活性を奏する。また、本発明の製造方法は、従来のアルテミシン多段階合成に比べて、短工程でアルテミシニン誘導体を得ることができ、窒素を足掛かりに様々な誘導体を簡便に合成できるという優れた効果を奏するものである。

より詳細には、Ｒ^１〜Ｒ⁴において、種々の機能性置換基を導入することができるため、水溶性や薬物動態を最適化した所望の６−アザアルテミシニン誘導体を得ることを可能とする。従って、多様な官能基を有する誘導体ライブラリーを構築し、マラリア等に対する抗感染症リード化合物を探索することに寄与する点で有益である。

図１は、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である実施例における化合物６（ＨＯＴＨ２１）の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータである。 図２は、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である実施例における化合物６（ＨＯＴＨ２１）の^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータである。 図３は、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である実施例における化合物１３（ＨＯＴＨ２２）の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータである。 図４は、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である実施例における化合物１３（ＨＯＴＨ２２）の^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータである。

以下、本発明の実施形態について説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施することができる。

本明細書において、「アルキル」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなるアルキル基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば炭素数１〜１０個（Ｃ_１〜１０）、好ましくは炭素数１〜５個（Ｃ_１〜５）である。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれであってもよい）、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。

本明細書において、「アルケニル」は、少なくとも１つの二重結合を有している直鎖又は分枝鎖のアルケニル基、例えば、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，３−ブタンジエニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１，３−ペンタンジエニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル及び１，４−ヘキサンジエニル）を含む。これらの中で、Ｃ_１〜１０アルケニル基が好ましく、Ｃ_１〜５アルケニル基が特に好ましい。

本明細書中において、「アルキニル」は、少なくとも１の三重結合を有している直鎖又は分枝鎖のアルキニル基、例えば、エチニル、１−プロピニル及びプロパルギルを含む。

本明細書中において、「アシル」は、脂肪族アシル基又は芳香族アシル基のいずれであってもよく、芳香族基を置換基として有する脂肪族アシル基であってもよい。アシル基は１個又は２個以上のヘテロ原子を含んでいてもよい。例えば、アシル基としてアルキルカルボニル基（アセチル基など）、アルキルオキシカルボニル基（アセトキシカルボニル基など）、アリールカルボニル基（ベンゾイル基など）、アリールオキシカルボニル基（フェニルオキシカルボニル基など）、アラルキルカルボニル基（ベンジルカルボニル基など）、アルキルチオカルボニル基（メチルチオカルボニル基など）、アルキルアミノカルボニル基（メチルアミノカルボニル基など）、アリールチオカルボニル基（フェニルチオカルボニル基など）、又はアリールアミノカルボニル基（フェニルアミノカルボニル基など）などのアシル基を挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらのアシル基は任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アシル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。

本明細書中において、「アリール」は単環性アリール基又は縮合多環性アルール基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含んでいてもよい。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。

本明細書中において、「アリールアルキル」は、上記アリールで置換されたアルキルを表す。アリールアルキルは、任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アシル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。代表的には、ベンジル、ｐ−メトキシベンジルなどである。

本明細書中において、「スルホンアミド」におけるアミンは上記アルキル等によって任意に置換されていてもよい。２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。

（１）６−アザアルテミシニン誘導体
本発明の６−アザアルテミシニン誘導体は、一態様において、上記式（Ｉ）で表される構造を有する化合物である。ここで、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、もしくはアシル基を表す。好ましくは、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルもしくはＣ_１〜１０アシル基であり、より好ましくは、メチル等のＣ_１〜５アルキルである。

Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アシル、スルホンアミド、アリール、もしくはアリールアルキルである。好ましくは、Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０アシル、スルホンアミド、もしくはベンジルであり、より好ましくはベンジル又はｐ−メトキシベンジルである。

Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルである。好ましくは、Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルであり、より好ましくは、Ｈである。

Ｒ^４は、＝Ｏ、ＯＨ、置換されていてもよいアルキル、アルコキシ、カルボニル、もしくはカルボキシルであり、また、アルテスネート及びアルテミソン等の従来のアルテミシニン誘導体のＣ１０位に用いられている置換基であることができ、例えば、以下の置換基

であることができるが、これらに限られない。好ましくは、Ｒ^４は＝Ｏである。

具体的な態様として、本発明の化合物は、以下の式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で表される化合物である。

上記式(I)で表される本発明の化合物は、塩として存在する場合がある。塩としては、薬学的に許容される塩であれば特に限定されないが、例えば、塩基付加塩、酸付加塩、アミノ酸塩などを挙げることができる。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などの金属塩、アンモニウム塩、又はトリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩などの有機アミン塩を挙げることができ、酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩などの鉱酸塩、メタンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩などの有機酸塩を挙げることができる。アミノ酸塩としてはグリシン塩などを例示することができる。

また、上記式(I)で表される本発明の化合物は、複数の不斉炭素を有し、光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在するが、純粋な形態の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などはいずれも本発明の範囲に包含される。

式(I)で表される本発明の化合物又はその塩は、水和物又は溶媒和物として存在する場合もあるが、これらの物質はいずれも本発明の範囲に包含される。溶媒和物を形成する溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、エタノール、アセトン、イソプロパノールなどの溶媒を例示することができる。

式(I)〜式(ＩＩＩ）で具体的に表される本発明の化合物のみならず、環状構造における炭素数の増減や更なるヘテロ原子の導入、又はＲ^１〜Ｒ⁴等の置換基の導入位置の変更などによって、更なる６−アザアルテミシニン誘導体のバリエーションを構築することもでき、これらも本発明の範囲に包含される。そのような更なる６−アザアルテミシニン誘導体としては、例えば以下のような化合物が挙げられる（いずれの式も、Ｒ⁴が＝Ｏである態様を例示している）。

本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物にも関する。医薬組成物におけるような用語「組成物」は、活性成分と、担体を構成する不活性成分（医薬的に許容される賦形剤）とを含む生成物ばかりでなく、任意の２つ以上の成分の会合、複合体化もしくは凝集の結果として、または１つ以上の成分の解離の結果として、または１つ以上の成分の別のタイプの反応もしくは相互作用の結果として、直接もしくは間接的に生ずる任意の生成物も包含する。

また、本発明は、式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、マラリア原虫類の感染治療剤にも関する。マラリア原虫とは、主として、ヒト感染性マラリア原虫であって、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫等を意味する。

本発明の化合物及び医薬組成物を治療剤として投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等として経口投与してもよいし、また注射剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は症状の程度、年齢、疾患の種類等により異なるが、通常成人１日当たり５０ｍｇ〜５００ｍｇを１日１〜数回に分けて投与することができる。

製剤化の際は通常の担体を用い、常法により製造する。経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えた後、常法により溶剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等とする。注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりpH調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤等を添加し、常法により皮下、静脈内用注射剤とする。

（２）６−アザアルテミシニン誘導体の製造方法
本発明の６−アザアルテミシニン誘導体の製造方法は、１つの態様において、以下の工程を含むことを特徴とする。

工程１：トリメチルアセチレン存在下で以下の式（Ａ）と式（Ｂ）の化合物を反応させ、

式（Ｃ）の中間体を得る。ここで、化合物（Ａ）及び（Ｂ）の代表的な例の合成については後述の実施例において説明するが、それら以外のＲ^１〜Ｒ^４の選択に応じて、当該技術分野における有機合成の標準的な知識に基づき適宜所望の出発物質を得ることができる。

工程２：次いで、式（Ｃ）の化合物を環化して、

式（Ｄ）の化合物を得る。ここで、当該工程は、チタン錯体触媒下、好ましくは、チタンイソプロポキサイド(ＩＶ)の存在下で行われる。これにより、立体選択的な環化を行うことができる。

工程３：更に、式（Ｄ）の化合物を環化して、

目的物である化合物（Ｉ）を得る。当該工程は、好ましくは、オゾン及び以下の構造を有するズダンＩＩＩに存在下で行われる。

当該製造方法におけるこれらの工程における溶媒や反応温度等の反応条件は、後述の実施例において代表的な例として詳細に記載するが、必ずしもそれらに限定されるわけではなく、当該技術分野における当業者であれば、有機合成における一般的な知識に基づいてそれぞれ適宜選択可能である。

以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。以下の合成例については、¹Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲは溶媒としてＣＤＣｌ_３を用い、日本電子株式会社製ＪＮＭ−ＥＣＸ４００、又はブルカーバイオスピン株式会社製ＡＶ５００ ｕｌｔｒａ ｓｈｉｅｌｄにより測定した。ＮＭＲスペクトルは重クロロホルムを用いた場合、特記しない限り¹Ｈ−ＮＭＲではＣＤＣｌ_３(７．２６ｐｐｍ)を^１３Ｃ−ＮＭＲではＣＤＣｌ_３(７７．１６ｐｐｍ)を基準として測定した。質量分析は日本電子株式会社製ＪＭＳ−Ｔ１００ＬＰ(ＥＳＩ)により測定した。カラムクロマトグラフィーによる精製は山善のＹＦＬＣ−ＡＩ−５８０を用いた。オゾン発生装置は京浜産業株式会社製のＳＯ−Ｏ３ＵＮ−ＯＸを使用した。μ波反応装置はＢｉｏｔａｇｅ社製のＩｎｉｔｉａｔｏｒを使用した。

以下のスキームに従って、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である化合物６（ＨＴＯＨ２１）の合成を行った。

化合物３から４を合成する方法は以下の文献を参考にした。
Ｎｉｃｈｏｌａｓ Ｅ．Ｌ．;Ｈａｎｎａ Ｍ．Ｔ．;Ｈｅａｔｈｅｒ Ｔ．、Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．、２００３，７，１３５．
化合物４から５を合成する方法は以下の文献を参考にした。
Ｕｒａｂｅ，Ｈ．;Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．;Ｓａｔｏ，Ｆ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９７，１１９，１１０１４．
化合物５から６を合成する方法は以下の文献を参考にした。
１)Ａｖｅｒｙ，Ｍ．Ａ．;Ｃｈｏｎｇ，Ｗ．Ｋ．Ｍ．;Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅｓ，Ｃ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９２，１１４，９７４．
２)Ｖｅｙｓｏｇｌｕ，Ｔ．;Ｍｉｔｓｃｈｅｒ，Ｌ．Ａ．;Ｓｗａｙｚｅ，Ｊ．Ｋ．、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９８０，８０７．

実際の合成手順を以下に示す。

［化合物２の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物１から化合物２を製造した。

５０ｍｌの二口フラスコにＮ−ベンジル-3-ブテニル２，２，２−トリフルオロアセトアミド１（１．２３ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２４．０ｍｌ）で溶かし入れ、−７８℃に冷却した。オゾン発生装置より発生させたオゾンを１５分間バブリングした。その後窒素バブリングを７分間行い、溶存オゾンを除去した後、ｔｅｒｔ−ブチルトリフェニルホスホラニリデンアセテート（２．８１ｇ，７．４６ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．０５ｍｌ，７．５３ｍｍｏｌ）を順に加えて室温まで昇温し、１６時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製することにより、対応するｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−(Ｎ−ベンジルトリフルオロアセトアミド)ペント−２−エノエート２を得た(１．１８ｇ，６９％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)：２つの回転異性体Ａ及びＢの１．０対１．２混合物
δ７．４０−７．３２（５Ｈ，ｍ，回転異性体Ａ及びＢ)，７．２４−７．２２(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，回転異性体Ａ)，７．２１−７．２０(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，６．７２−６．６９(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，回転異性体Ａ)，６．６９−６．６６(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，５．７８−５．７５(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，回転異性体Ａ)，５．７４−５．７１(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，４．６７(２Ｈ，ｓ，回転異性体Ａ)，４．６１(２Ｈ，ｓ，回転異性体Ｂ)，３．４６−３．４３(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，回転異性体Ａ)，３．４２−３．３９(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，２．４８−２．４４(２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３，７．０Ｈｚ，回転異性体Ａ)，２．４０−２．３６(２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．０，７．３，１．２Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，１．４７(９Ｈ，ｓ，回転異性体Ａ)，１．４６(９Ｈ，ｓ，回転異性体Ｂ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ) ：２つの回転異性体Ａ及びＢの１．０対１．２混合物
δ１６５．４７，１６５．２６，１４２．５８，１４１．５５，１３５．３０，１３４．６９，１２９．２６，１２９．１７，１２８．６１，１２８．３７，１２８．２１，１２７．５３，１２６．１０，１２５．７１，８０．８３，８０．６１，５１．４８，５１．４５，４９．６８,４５．４４，４５．３４，４５．３２，３１．１４，２９．２８，２８．２５．

ＭＳ(ＥＳＩ)： Ｃ_１８Ｈ_２２Ｆ_３ＮＯ_３[Ｍ＋Ｎａ]^＋として、計算値３８０．１４５０，実測値３８０．１５０９.

［化合物３の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物２から化合物３を製造した。

２００ｍｌのナス型フラスコにｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−(Ｎ−ベンジルトリフルオロアセトアミド)ペント−２−エノエート２(１．７１ｇ，４．７９ｍｍｏｌ)をエタノール(４８．０ｍｌ)で溶かし入れた。これに、５％の炭酸カリウム水溶液(２５．０ｍｌ)を加え、２７時間撹拌した。これにジクロロメタン(１５０ｍｌ)を加えて希釈し、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を３０ｍｌ加えた。有機層と水層を分液した後、水層をジクロロメタン(２００ｍｌ×２)で抽出し、炭酸カリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、対応するｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−（Ｎ−ベンジルアミノ)ペント−２−エノエート３を得た(１．２０ｇ，９６％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)
δ７．３４−７．３０(４Ｈ，ｍ)，７．２７−７．２３(１Ｈ，ｍ)，６．８６−６．８１(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．５，７．２Ｈｚ)，５．８１−５．７８(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．６，１．５Ｈｚ)，３．８０(２Ｈ，ｓ)，２．７８−２．７５(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ)，２．４１−２．３７(２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，６．９，１．４Ｈｚ)，１．４８(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)
δ１６５．９７，１４５．４９，１４０．３６，１２８．５７，１２８．２５，１２７．１４，１２４．６５，８０．３２，５４．００，４７．７３，３２．８５，２８．３１，２８．２５．

ＭＳ(ＥＳＩ)： Ｃ_１６Ｈ_２３ＮＯ_２[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値２６２．１８０７，実測値２６２．１８３２.

［化合物４の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物３から化合物４を製造した。

２０ｍｌのμ波装置用反応容器にｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−(Ｎ−ベンジルアミノ)ペント−２−エノエート３(７９７ｍｇ，３．０５ｍｍｏｌ)と１，３−ジオキサン−２−プロパナール２，５，５，−トリメチル(６８１．７ｍｇ，３．６６ｍｍｏｌ)を１，４−ジオキサン(６．０ｍｌ)で溶かし入れた。これに、ヨウ化銅(Ｉ)(５８．１ｍｇ，０．３０５ｍｍｏｌ)とテトラメチルエチレンジアミン(４６．０μｌ，０．３０５ｍｍｏｌ)を加えた。窒素雰囲気下、トリメチルシリルアセチレン(１．０５ｍｌ，７．４３ｍｍｏｌ)を加え、μ波反応装置にセットし、１５０℃で、３０分間撹拌した。溶液をセライトろ過した後、減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル＝４：１)で精製することにより、対応する(Ｅ)−ｔｅｒｔ−ブチル５−{ベンジル[５−(２，５，５−トリメチル−１，３−ジオキサン−２−イル)−１−(トリメチルシリル)ペント−１−イン−３−イル]アミノ}ペント−２−エノエート４を得た(１．０３ｇ，６４％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)
δ７．３４−７．２７(４Ｈ，ｍ)，７．２４−７．２１(１Ｈ，ｍ)，６．８３−６．７７(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．６，７．１Ｈｚ)，５．７３−５．７０(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ)，３．８３−３．８０(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ)，３．５０−３．３８(７Ｈ，ｍ)，２．６８−２．６３(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１６．０，８．０Ｈｚ)，２．５６−２．５１(１Ｈ，ｍ)，２．３７−２．２６(１Ｈ，ｍ)，１．８７−１．６６(５Ｈ，ｍ)，１．４７(９Ｈ，ｓ)，１．３３(３Ｈ，ｓ)，０．９５(３Ｈ，ｓ)，０．９２(３Ｈ，ｓ)，０．１９(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)
δ１６６．０１，１４６．１６，１３９．８９，１２８．９６，１２８．３７，１２７．０３，１２４．０４，１０４．７４，９９．０２，８９．３１，８０．１２，７０．４８，５５．５１，５３．９４，４９．７２，３４．０８，３１．１９，３０．０５，２８．３２，２８．０８，２２．８９，２２．７８，２１．２７，０．４６．

ＭＳ(ＥＳＩ)： Ｃ_３１Ｈ_４９ＮＯ_４Ｓｉ[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値５２８．３５０９，実測値５２８．３４０５.

［化合物５の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物４から化合物５を製造した。

１００ｍｌの三口フラスコにトルエン共沸後の(Ｅ)−ｔｅｒｔ−ブチル５−{ベンジル[５−(２，５，５−トリメチル−１，３−ジオキサン−２−イル)−１−(トリメチルシリル)ペント−１−イン−３−イル]アミノ}ペント−２−エノエート４(１．２４ｇ，２．３６ｍｍｏｌ)をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(４７．２ｍｌ)で溶かし入れた。窒素を３分間バブリングした後、−７８℃に冷却した。チタンイソプロポキサイド(ＩＶ)(１．４０ｍｌ，４．７２ｍｍｏｌ)とイソプロピルマグネシウムクロライドの２．０Ｍジエチルエーテル溶液(４．７２ｍｌ，９．４４ｍｍｏｌ)を加え、−４０℃まで４０分かけて昇温した。−４０℃で２時間程撹拌した後、反応溶液にシリカゲル(４．２ｇ)を投入し、３０分間撹拌した。セライトろ過を行い、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。分液後、水層を酢酸エチル(１００ｍｌ)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル＝４：１)で精製することにより、対応するＮ−ベンジル−２−(１’，３’−ジオキサン−２’−プロパン−１’−イル)−３−[(トリメチルシリル)メチレン−４−ｔｅｒｔ−ブトキシアセチル-ピペリジン５を得た(７５９ｍｇ，６１％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ)
δ７．３６−７．２６(４Ｈ，ｍ)，７．２４−７．２０(１Ｈ，ｍ)，５．４２(１Ｈ，ｓ)，３．８０−３．７６(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７ Ｈｚ)，３．６８−３．６４(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ)，３．５７−３．５４(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ)，３．４８−３．４５(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ)，３．１９−３．１５(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ)，３．１０−３．０２(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１４．０，２．４Ｈｚ)，２．９４−２．８５(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０，７．１Ｈｚ)，２．５４−２．４０(３Ｈ，ｍ)，２．３７−２．２９(１Ｈ，ｍ)，２．２２−２．１０(１Ｈ，ｍ)，２．０４−１．８８(１Ｈ，ｍ)，１．５０−１．３３(２Ｈ，ｍ)，１．４３(９Ｈ，ｓ),１．３７(３Ｈ，ｓ)，１．２６−１．２２(１Ｈ，ｍ)，１．０１(３Ｈ，ｓ)，０．９４(３Ｈ，ｓ)，０．０３(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ)
δ１７２．０６，１５７．３２，１４０．２６，１２８．７９，１２８．２６，１２６．９８，９９．２１，８０．３７，７７．３６，７０．４５，７０．３３，６４．２２，５８．２９，４２．４０，４２．１７，３９．６３，３３．５５，３０．０４，２８．５５，２８．３３，２５．５８，２２．９７，２２．７５，２２．６５，０．６２．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_３１Ｈ_５１ＮＯ_４Ｓｉ[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値５３０．３６６５，実測値５３０．３４８９.

［化合物６の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物５から化合物６を製造した。

５０ｍｌのナス型フラスコにＮ−ベンジル−２−(１’，３’−ジオキサン−２’−プロパン−１’−イル)−３−[(トリメチルシリル)メチレン−４−ｔｅｒｔ−ブトキシアセチル-ピペリジン５(１５０ｍｇ，０．２８３ｍｍｏｌ)をジクロロメタン(２．８ｍｌ)で溶かし入れ、トリフルオロ酢酸(２．８０ｍｌ)を加えた。３０分間撹拌した後、トルエン共沸を行い、トリフルオロ酢酸を完全に留去した。次に、５００ｍｌの三口フラスコに残さをジクロロメタン(２５０ｍｌ)で溶かし入れ、ズダンＩＩＩ(０．７３ｍｇ)を加えた。溶液を−７８℃に冷却し、オゾンを３分間通じた。次に、窒素を１０分間バブリングし、室温まで昇温し、アンバーリスト１５(７９０ｍｇ)を加えた。９時間半撹拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を０℃で加えた。分液後、水層をジクロロメタン(１００ｍｌ)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル＝１：１)で精製することにより、対応するＮ−ベンジル−９−デメチル−６−アザアルテミシニン６を得た(３５．３ｍｇ，３６％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ)：図１
δ７．３５−７．２３(５Ｈ，ｍ)，６．３５（１Ｈ，ｓ），４．２０−４．１７(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ)，３．２２−３．１６(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．１，６．６Ｈｚ)，３．０９−３．０５(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ)，２．８４−２．７９(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．９，３．７，２．９Ｈｚ)，２．５２−２．４４(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．７，１３．５，３．８Ｈｚ),２．４４−２．３９(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．０Ｈｚ)，２．３３−２．２８(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．０，１．０Ｈｚ)，２．２６−２．１９(１Ｈ，ｍ)，２．１５−２．０９(１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．７，５．０，３．２Ｈｚ)，２．０２−１．９５(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１１．９，３．１Ｈｚ)，１．９３−１．８２(２Ｈ，ｍ)，１．６２−１．５５(１Ｈ，ｍ)，１．５３−１．４６(１Ｈ，ｍ)，１．４８(３Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ)：図２
δ１６８．８０，１３９．１１，１２８．９８，１２８．９２，１２７．６９，１０５．５０，９４．４３，６５．７２，５７．３３，５１．８０，３８．４７，３４．８２，３１．４３，２８．９３，２６．０６，２５．５９．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_１９Ｈ_２３ＮＯ_５[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値３４６．１６５４，実測値３４６．１８５０．

以下のスキームに従って、本発明の６−アザアルテミシニン誘導体である化合物１３（ＨＴＯＨ２２）の合成を行った。

化合物１０から１１を合成する方法は以下の文献を参考にした。
Ｎｉｃｈｏｌａｓ Ｅ．Ｌ．;Ｈａｎｎａ Ｍ．Ｔ．;Ｈｅａｔｈｅｒ Ｔ．、Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．、２００３，７，１３５．
化合物11から12を合成する方法は以下の文献を参考にした。
Ｕｒａｂｅ，Ｈ．;Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．;Ｓａｔｏ，Ｆ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９７，１１９，１１０１４．
化合物12から13を合成する方法は以下の文献を参考にした。
１)Ａｖｅｒｙ，Ｍ．Ａ．;Ｃｈｏｎｇ，Ｗ．Ｋ．Ｍ．;Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅｓ，Ｃ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９２，１１４，９７４．
２)Ｖｅｙｓｏｇｌｕ，Ｔ．;Ｍｉｔｓｃｈｅｒ，Ｌ．Ａ．;Ｓｗａｙｚｅ，Ｊ．Ｋ．、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９８０，８０７．

実際の合成手順を以下に示す。

［化合物８の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物７から化合物８を製造した。

２００ｍｌのナス型フラスコに化合物Ｎ−ｐ−メトキシベンジル−３−ブテニルアミン７(１０．９ｇ，５７．０ｍｍｏｌ)をジクロロメタン(５３．０ｍｍｏｌ)で溶かし入れ、０℃に冷却した。ピリジン(１２．９ｍｌ，１５９ｍｍｏｌ)とトリフルオロ酢酸無水物(１１．０ｍｌ，７９．５ｍｍｏｌ)を加え、室温で１０時間半撹拌した。これを酢酸エチル(４００ｍｌ)で希釈し、水(５０ｍｌ)を加えた。分液後、有機層を１Ｎ塩酸(５０ｍｌ×３)、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１)で精製することにより、対応するＮ−ｐ−メトキシベンジル−３−ブテニル２，２，２−トリフルオロアセトアミド８を得た(１０．５ｇ，６４％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)：２つの回転異性体の１対１混合物
δ７．１９−７．１８(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，回転異性体)，７．１４−７．１３(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，回転異性体)，６．９１−６．８９(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，回転異性体)，６．８８−６．８７(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，回転異性体)，５．７５−５．６６(２Ｈ，ｍ，回転異性体混合物)，５．１１−５．０８(２Ｈ，ｍ，回転異性体)，５．０７−５．０３(２Ｈ，ｍ，回転異性体)，４．６０(２Ｈ，ｓ，回転異性体)，４．５５(２Ｈ，ｓ，回転異性体)，３．８１(３Ｈ，s，回転異性体)，３．８０(３Ｈ，ｓ，回転異性体)，３．３８−３．３４(４Ｈ，ｍ，回転異性体混合物)，２．３７−２．３３(２Ｈ，ｍ，回転異性体)，２．２９−２．２５(２Ｈ，ｍ，回転異性体)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)：２つの回転異性体の１対１混合物
δ１５９．７６，１５９．６１，１３４．４６，１３３．５７，１２９．７４，１２８．９３，１２７．６２，１２６．８３，１１８．０９，１１７．５８，１１４．５３，１１４．４３，５５．４８，５５．４４，５０．５８，５０．５５，４８．８５，４５．８０，４５．７８，４５．４７，３２．８０，３１．０８．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_１４Ｈ_１６Ｆ_３ＮＯ_２[Ｍ＋Ｎａ]^＋として、計算値３１０．１０３１，実測値３１０．１１６３．

［化合物９の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物８から化合物９を製造した。

５００ｍｌのナス型フラスコにＮ−ｐ−メトキシベンジル−３−ブテニル２，２，２−トリフルオロアセトアミド８(１０．５ｇ，３６．７ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン(１２３ｍｌ)と水(６１．５ｍｌ)で溶かし入れた。四酸化オスミウム・二水和物(６３．５ｍｇ，０．１７２ｍｍｏｌ)と過ヨウ素酸ナトリウム(１７．４ｇ，８１．４ｍｍｏｌ)を順次加え、１２時間程撹拌した。これをジクロロメタン(５００ｍｌ)で希釈し、飽和亜硫酸ナトリウム水溶液(２００ｍｌ)を０℃で加えた。分液後、水層をジクロロメタン(３５０ｍｌ×２)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残さをジクロロメタン(１８４ｍｌ)に溶かした。これにｔｅｒｔ−ブチルトリフェニルホスホラニリデンアセテート(１７．８ｍｇ)を加え、４時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１)で精製することにより、対応するｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−(Ｎ−ｐ−メトキシベンジルトリフルオロアセトアミド)ペント−２−エノエート９を得た(８．６４ｇ，６１％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)：２つの回転異性体の１．０対１．２混合物
δ７．１８−７．１６(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，回転異性体Ａ)，７．１４−７．１２(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，６．９１−６．８９(２Ｈ，ｍ，回転異性体Ｂ)，６．８８−６．８７(２Ｈ，ｍ，回転異性体Ａ)６．７１−６．６５(２Ｈ，ｍ，回転異性体Ａ及びＢ)，５．７８−５．７４(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１５．８，１．５Ｈｚ，回転異性体Ａ)，５．７３−５．７０(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１５．８，１．５Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，４．６０(２Ｈ，ｓ，回転異性体Ａ)，４．５４(２Ｈ，ｓ，回転異性体Ｂ)，３．８２(３Ｈ，ｓ，回転異性体Ｂ)，３．８０(３Ｈ，ｓ，回転異性体Ａ)，３．４３−３．４０(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，回転異性体Ａ)，３．３９−３．３６(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，２．４７−２．４２(２Ｈ，ｍ，回転異性体Ａ)，２．３７−２．３３(２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．０，７．６，１．５Ｈｚ，回転異性体Ｂ)，１．４７(９Ｈ，ｓ，回転異性体Ａ)，１．４６(９Ｈ，ｓ，回転異性体Ｂ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)：２つの回転異性体の１．０対１．２混合物
δ１６５．５０，１６５．２９，１５９．９０，１５９．７３，１４２．７１，１４１．６５，１２９．７５，１２９．０５，１２７．３３，１２６．４７，１２６．０３，１２５．６１，１１４．６４，１１４．５４，８０．８１，８０．５９，５５．４８，５５．４５，５０．９６,５０．９３，４９．１２，４５．０９，４５．０４，４５．０１，３１．１２，２９．２７，２８．２５．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_１９Ｈ_２４Ｆ_３ＮＯ_４[Ｍ＋Ｎａ]^＋として、計算値４１０．１５５５，実測値４１０．１５４７.

［化合物１０の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物９から化合物１０を製造した。

３００ｍｌのナス型フラスコにｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−(Ｎ−ｐ−メトキシベンジルトリフルオロアセトアミド)ペント−２−エノエート９(４．６８ｇ，１２．１ｍｍｏｌ)をエタノール(１２１ｍｌ)で溶かし入れた。これに、５％炭酸カリウム水溶液(６３．１ｍｌ)を加えて、１７時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、残さをジクロロメタン(３００ｍｌ×３)で抽出し、炭酸カリウムと硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去することで対応するｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−（Ｎ−ｐ−メトキシベンジルアミノ)ペント−２−エノエート１０を得た(３．５３ｇ，ｑｕａｎｔ．)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)
δ７．２３−７．２１(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ)，６．８６−６．８５(２Ｈ，ｍ)，６．８５−６．７９(１Ｈ，ｍ)，３．７９(３Ｈ，ｓ)，３．７２(２Ｈ，ｓ)，２．７６−２．７３(２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ)，２．３９−２．３５(２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．９，７．０，１．４Ｈｚ)，１．４７(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)
δ１６５．９４，１５８．８２，１４５．５１，１３２．４６，１２９．４０，１２４．５８，１１３．９５，８０．２７，５５．３９，５３．３６，４７．６０，３２．８０，２８．２８．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_１７Ｈ_２５ＮＯ_３[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値２９２．１９１２，実測値２９２．１８５３．

［化合物１１の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物１０から化合物１１を製造した。

２００ｍｌナス型フラスコにｔｅｒｔ−ブチル(Ｅ)−５−（Ｎ−ｐ−メトキシベンジルアミノ)ペント−２−エノエート１０(３．２６ｇ，１１．２ｍｍｏｌ)と１，３−ジオキサン−２−プロパナール２，５，５，トリメチル(２．４９ｇ，１３．４ｍｍｏｌ)をトルエン(５６．０ｍｌ)で溶かし入れた。ヨウ化銅(Ｉ)(１５３ｍｇ，０．８０３ｍｍｏｌ)とテトラメチルエチレンジアミン(１１８．０μｌ，０．７８４ｍｍｏｌ)を加え、モレキュラーシーブス４Ａ(６．９６ｇ)を加えた。窒素雰囲気下、トリメチルシリルアセチレン(３．９６ｍｌ，２８．０ｍｍｏｌ)を加えて、二日間撹拌した。セライトろ過した後、減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィーで(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１)で精製することにより、対応する(Ｅ)−ｔｅｒｔ−ブチル５−{ｐ−メトキシベンジル[５−(２，５，５−トリメチル−１，３−ジオキサン−２−イル)−１−(トリメチルシリル)ペント−１−イン−３−イル]アミノ}ペント−２−エノエート１１を得た(４．８１グラム，７７％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)
δ７．２４−７．２３(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ)，６．８４−６．８２(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ)，６．８１−６．７８(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ)，５．７３−５．７０(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ)，３．７９(３Ｈ，ｓ)，３．７６−３．７３(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ)，３．５０−３．４７(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ)，３．４４−３．４１(２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，１．４Ｈｚ)，３．３９−３．３６(１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ)，３．３４−３．３１(１Ｈ，ｄ，１３．６Ｈｚ)，２．６８−２．６２(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１３．２，８．０Ｈｚ)，２．５３−２．４７(１Ｈ，ｍ)，２．３７−２．２６(１Ｈ，ｍ)，１．８６−１．６７(４Ｈ，ｍ)，１．４７(９Ｈ，ｓ)，１．３３(３Ｈ，ｓ)，０．９５(３Ｈ，ｓ)，０．９２(３Ｈ，ｓ)，０．１８(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)
δ１６６．０４，１５８．７６，１４６．２５，１３１．８０，１３０．０７，１２３．９８，１１３．７８，１０４．８０，９９．０２，８９．２３，８０．１１，７０．４７，５５．３９,５４．８６，５３．７３，４９．４７，３４．０６，３１．２２，３０．０５，２８．３１，２８．０３，２２．８８，２２．７７，２１．２８，０．４６．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_３２Ｈ_５１ＮＯ_５Ｓｉ[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値５５８．３６１５，実測値５５８．３５１０．

［化合物１２の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物１１から化合物１２を製造した。

２００ｍｌの三口フラスコにトルエン共沸した（Ｅ)−ｔｅｒｔ−ブチル５−{ｐ−メトキシベンジル[５−(２，５，５−トリメチル−１，３−ジオキサン−２−イル)−１−(トリメチルシリル)ペント−１−イン−３−イル]アミノ}ペント−２−エノエート１１(２．００ｇ，３．５９ｍｍｏｌ)をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(７２．０ｍｌ)で溶かし入れた。窒素を３分間通じた後、−７８℃に冷却した。チタンイソプロポキサイド(ＩＶ)(２．１２ｍｌ，７．１７ｍｍｏｌ)とイソプロピルマグネシウムクロライドの２．０Ｍジエチルエーテル溶液(５．９２ｍｌ，１４．３ｍｍｏｌ)を加え、−２０℃まで１時間程かけて昇温した。−２０℃で３時間程撹拌した後、シリカゲル(７．４６ｇ)を反応溶液に投入し、１０分撹拌した。セライトろ過を行い、溶液を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。分液後、水層を酢酸エチル(３００ｍｌ)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残さをカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１)で精製することにより、対応するＮ−ｐ−メトキシベンジル−２−(１’，３’−ジオキサン−２’−プロパン−１’−イル)−３−[(トリメチルシリル)メチレン−４−ｔｅｒｔ−ブトキシアセチル-ピペリジン１２を得た(９８４ｍｇ，４９％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)
δ７．２７−７．２５(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，６．８４−６．８２(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，５．４１(１Ｈ，ｓ)，３．７９(３Ｈ，ｓ)，３．７２−３．７０(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ)，３．６０−３．５８(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ)，３．５６−３．５４(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ)，３．４７−３．４５(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ)，３．１８−３．１５(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．３，３．６Ｈｚ)，３．０６−３．００(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１３．６，２．５Ｈｚ)，２．９１−２．８７(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．３，７．３Ｈｚ)，２．５１−２．４０(３Ｈ，ｍ)，２．３３−２．２７(１Ｈ，ｍ)，２．１８−２．００(１Ｈ，ｍ)，１．９７−１．８９(１Ｈ，ｍ)，１．４８−１．４０(２Ｈ，ｍ)，１．４３(９Ｈ，ｓ)，１．３６(３Ｈ，ｓ)，１．２４−１．２１(１Ｈ，ｍ)，１．００(３Ｈ，ｓ)，０．９４(３Ｈ，ｓ)，０．０４(９Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)
δ１７２．０６，１５８．７４，１５７．４８，１３２．３５，１２９．８６，１２８．１７，１１３．６８，９９．２４，８０．３４，７０．４８，７０．３６，６４．１２，５７．７０,５５．４２，４２．４７，４２．２３，３９．５４，３３．７２，３０．０６，２８．５７，２８．３５，２５．６４，２２．９７，２２．７９，２２．５６，０．６６．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_３２Ｈ_５３ＮＯ_５Ｓｉ[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値５６０．３７７１，実測値５６０．３６２２.

［化合物１３の製造］
次に示す反応式にしたがって化合物１２から化合物１３を製造した。

５０ｍｌのナス型フラスコにＮ−ｐ−メトキシベンジル−２−(１’，３’−ジオキサン−２’−プロパン−１’−イル)−３−[(トリメチルシリル)メチレン−４−ｔｅｒｔ−ブトキシアセチル-ピペリジン１２(８１．０ｍｇ，０．１４５ｍｍｏｌ)をジクロロメタン(１．５ｍｌ)で溶かし入れ、トリフルオロ酢酸(１．５ｍｌ)を加えた。３０分撹拌した後、トルエン共沸を行い、トリフルオロ酢酸を完全に留去した。次に、５０ｍｌの二口フラスコに残さをジクロロメタン(２９．０ｍｌ)で溶かし入れ、ズダンＩＩＩ(０．５０ｍｇ)を加えた。溶液を−７８℃に冷却し、オゾンを５分間バブリングした。窒素を５分間通じた後、−１０℃まで昇温し、アンバーリスト１５(９３．２ｍｇ)を加えた。室温で７時間程撹拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(５ｍｌ)を０℃で加えた。分液後、水層をジクロロメタン(１００ｍｌ×２)で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン／酢酸エチル＝１０／１)で精製することにより、対応するＮ−ｐ−メトキシベンジル−９−デメチル−６−アザアルテミシニン１３を得た(２２．２ｍｇ，４１％)。

^１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ)：図３
δ：７．１８−７．１６(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ)，６．８６−６．８４(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，６．３２(１Ｈ，ｓ)，４．１２−４．０９(２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ)，３．８０(３Ｈ，ｓ)，３．２０−３．１５(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１８．１，６．６Ｈｚ)，３．０３−３．００(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ)，２．８２−２．７９(１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．０，３．２Ｈｚ)，２．５０−２．４４(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１４．０，３．８Ｈｚ)，２．４０−２．３６(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．０Ｈｚ)，２．３１−２．２８(１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８．１Ｈｚ)，２．２５−２．２０(１Ｈ，ｍ)，２．１４−２．０９(１Ｈ，ｍ)，１．９７−１．９２(１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１２．１，３．０Ｈｚ)，１．９１−１．８２(２Ｈ，ｍ)，１．６１−１．５６(１Ｈ，ｍ)，１．５５−１．４４(１Ｈ，ｍ)，１．４８(３Ｈ，ｓ)．

^１３Ｃ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ)：図４
δ：１６８．４３，１５８．９８，１３０．６０，１２９．８４，１１３．９７，１０５．１５，９４．１３，７６．５１，６５．３７，５６．３３，５５．４２，５１．２６，３８．１７，３４．５４，３１．１３，２８．６３，２５．７５，２５．２５．

ＭＳ(ＥＳＩ): Ｃ_２０Ｈ_２５ＮＯ_６Ｓｉ[Ｍ＋Ｈ]^＋として、計算値３７６．１７６０，実測値３７６．１６８６．

６−アザアルテミシニン類のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるマラリア原虫増殖阻害活性
東京大学大学院医学系研究科の北潔教授より分与された、熱帯熱マラリア原虫(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ)の薬剤耐性株であるＫ１株および薬剤感受性株であるＦＣＲ３株を用いて、これらのマラリア原虫に対するｉｎ ｖｉｔｒｏでの６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２の抗マラリア活性の測定は、乙黒らの方法[Ｏｔｏｇｕｒｏ，Ｋ．，Ｋｏｈａｎａ，Ａ．，Ｍａｎａｂｅ，Ｃ．，Ｉｓｈｉｙａｍａ，Ａ．,Ｕｉ，Ｈ．，Ｓｈｉｏｍｉ，Ｋ．，Ｙａｍａｄａ，Ｈ．ａｎｄ Ｏｍｕｒａ，Ｓ．：Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，Ｘ−２０６．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，５４：６５８−６６３，(２００１)]に従って測定した。

試験原虫としてはTｒａｇｅｒとＪｅｎｓｅｎの方法[Ｔｒａｇｅｒ，Ｗ ａｎｄ Ｊｅｎｓｅｎ，Ｊ．：Ｈｕｍａｎ ｍａｌａｒｉａ ｐａｒａｓｉｔｅｓ ｉｎ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９３：６７３−６７７，(１９７６)]を若干改変し、維持、継代を行ったものを用いた。すなわち、培養シャーレ内で、１０％ヒト血漿を添加したＲＰＭＩ１６４０培地と新鮮なヒト赤血球を用いて継代した原虫感染赤血球を希釈し(ヘマトクリット値：２〜５％、原虫感染赤血球率：０．２５〜１％)、３７℃にて３％Ｏ_２−４％ＣＯ_２−９３％Ｎ_２の混合ガス下で培養を行い、２〜３日毎に培地交換と新鮮な赤血球を添加して連続培養を行った。

薬剤感受性試験は、Ｄｅｓｊａｒｄｉｎｓらの方法[Ｄｅｓｊａｒｄｉｎｓ，Ｒ．Ｅ．，Ｃａｎｆｉｅｌｄ，Ｃ．Ｊ．，Ｈａｙｎｅｓ，Ｄ．Ｅ．ａｎｄ Ｃｈｕｌａｙ，Ｊ．Ｄ．：Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ａ ｓｅｍｉａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，１６：７１０−７１８(１９７９)]を改変して行った。被験化合物としては上述の方法で調製した６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２、及び培養熱帯熱マラリア原虫に対する既知の抗マラリア剤であるアルテミシニン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、米国）、アルテスネート（Ｃｅｒｂｉｏｓ Ｐｈａｒｍａ社製、スイス国）を用いた。具体的には、９６穴プレートの各ウェルに前培養した原虫浮遊液(ヘマトクリット値：２％、原虫感染赤血球率：０．５または１％)１９０マイクロlと最終濃度１００〜０．０００１μｇ／ｍＬとなるような濃度で段階希釈した被験化合物の溶液(５０％エタノール溶液)１０μｌを添加し、混和後、前述の混合ガス下で７２時間培養を行った。

原虫増殖の測定はＭａｋｌｅｒらの方法[Ｍａｋｌｅｒ，Ｍ．Ｔ．，Ｒｉｓｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ａ．，Ｂａｎｃｒｏｆｔ，Ｊ．Ｅ．，Ｐｉｐｅｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｇｉｂｂｉｎｓ，Ｂ．Ｌ．ａｎｄ Ｈｉｎｒｉｃｈｓ，Ｄ．Ｊ．：Ｐａｒａｓｉｔｅ ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｓ ａｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．，４８：７３９−７４１(１９９３)]を改変し、Ｍａｌｓｔａｔ試薬（Ｆｌｏｗ社製、米国）にて原虫の乳酸脱水素酵素(ｐ−ＬＤＨ)を比色定量する方法を用いた。

すなわち、培養７２時間後に９６穴プレートを直接−２０℃下で１８時間凍結後、３７℃下で融解することにより、原虫感染赤血球を溶血させ、かつ原虫を破壊させ粗酵素液を調製した。新たな９６穴プレートの各ウェルにＭａｌｓｔａｔ試薬１００μｌと粗酵素液２０μｌを添加、混和し、１５分間室温にて反応後、ニトロブルーテトラゾリウム(ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ)２ｍｇ／ｍｌ:フェナジンエトサルフェート(ｐｈｅｎａｚｉｎｅ ｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ)０．１ｍｇ／ｍｌ＝１：１溶液２０μｌを各ウェルに添加し、遮光条件下、室温にて２時間反応させた。

反応により生じたブルーフォルマザン(ｂｌｕｅ ｆｏｒｍａｚａｎ)生成物をマイクロプレートリーダー(Ｌａｂｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、フィンランド国)を用いて、測定波長６５５ｎｍでの吸光度を測定することにより、原虫の増殖の有無を比色定量した。化合物の５０％原虫増殖阻止濃度(ＩＣ_５０値)は化合物濃度作用曲線より求めた。本発明で調製した６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２と既知の抗マラリア剤アルテミシン、アルテスネートの培養熱帯熱マラリア原虫に対する抗マラリア活性は下記の表１に示す通りであった。

本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２は熱帯熱マラリア原虫の薬剤耐性のＫ１株および薬剤感受性のＦＣＲ３株に対して２６−５５ｎＭで有効であり、既存の抗マラリア剤アルテミシニンの約１／２〜１／３倍の抗マラリア活性を示した。さらに既存の抗マラリア剤アルテスネートの約１／５〜１／９倍の抗マラリア活性を示した。６−アザアルテミシニン類が抗マラリア活性を示すことは新しい知見である。

６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２は既存の抗マラリア剤アルテミシニンおよびアルテスネートと同様に薬剤耐性のＫ１株と薬剤感受性のＦＣＲ３株に対して同程度の活性があり、構造の類似性より抗マラリア剤アルテミシニンおよびアルテスネートと同様の作用メカニズムで抗マラリア活性を示していると考えられる。

６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２の細胞毒性試験
本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２の細胞毒性試験は乙黒らの方法［Ｏｔｏｇｕｒｏ Ｋ， Ｋｏｈａｎａ Ａ， Ｍａｎａｂｅ Ｃ， Ｉｓｈｉｙａｍａ Ａ， Ｕｉ Ｈ， Ｓｈｉｏｍｉ Ｋ， Ｙａｍａｄａ Ｈ， Ｏｍｕｒａ Ｓ． Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ， Ｘ−２０６． Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，５４：６５８−６６３，（２００１）］に準じて行った。すなわち、宿主細胞のモデルとしてヒト胎児肺由来正常繊維芽細胞ＭＲＣ−５細胞［Ｄｒ． Ｌ． Ｍａｅｓ（Ｔｉｂｏｔｅｃ ＮＶ，Ｍｅｃｈｅｌｅｎ，ベルギー国)より分与可能］を１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）及び抗生物質添加ＭＥＭ培地にて維持、継代培養を行ったものを用いた。

ヒト胎児肺由来正常繊維芽細胞ＭＲＣ−５細胞を１０％ＦＣＳ−ＭＥＭにて１×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように浮遊液を調整し、９６穴プレートに該浮遊液を１００μＬ添加し混和後、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒ下で２４時間培養を行った。その後、各ｗｅｌｌに１０％ＦＣＳ−ＭＥＭ９０μＬと本化合物の溶液（５０％エタノール水溶液）１０μＬを添加し、混和後、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒ下で７日間培養を行った。ＭＲＣ−５細胞の増殖の有無はＭＴＴ法にて比色定量することにより測定した。本化合物の５０％細胞増殖阻止濃度（ＩＣ_５０値）を化合物濃度作用曲線より求めた。また、選択毒性比（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ：ＳＩ）は、（細胞毒性のＩＣ_５０値）／（抗マラリア原虫活性のＩＣ_５０値）により計算して求めた。

ＩＣ_５０と選択毒性比について計算した結果を下記の表２に示す。

本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２のヒト胎児肺由来正常繊維芽細胞ＭＲＣ−５細胞に対する細胞毒性（ＩＣ_５０値）は１１６，０１０および３５，９０８ｎＭであり、抗マラリア原虫活性との選択毒性比（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ：ＳＩ）は薬剤耐性のＫ１株の場合で２，１０９および１，０２６、薬剤感受性のＦＣＲ３株の場合で２，６９８および１，３８１と高い選択毒性を示した。

６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２のｉｎ ｖｉｖｏにおけるマラリア原虫増殖阻害活性
本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２のネズミマラリア原虫Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ Ｎ株(薬剤感受性株)[Ｄｒ．Ｗ．Ｐｅｔｅｒｓ(Ｎｏｒｔｈｗｉｃｋ Ｐａｒｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｄｄｌｅｓｅｘ，英国)より分与可能]感染実験モデルに対するｉｎ ｖｉｖｏでの治療効果の測定は乙黒らの方法[Ｏｔｏｇｕｒｏ，Ｋ．，Ｋｏｈａｎａ，Ａ．，Ｍａｎａｂｅ，Ｃ．，Ｉｓｈｉｙａｍａ，Ａ．，Ｕｉ，Ｈ．，Ｓｈｉｏｍｉ，Ｋ．，Ｙａｍａｄａ，Ｈ．ａｎｄ Ｏｍｕｒａ，Ｓ．：Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ,Ｘ−２０６．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，５４：６５８−６６３，(２００１)]およびＰｅｔｅｒｓらの方法[Ｐｅｔｅｒｓ，Ｗ．；Ｐｏｒｔｕｓ，Ｊ．Ｈ．ａｎｄ Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｂ．Ｌ．：Ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｒｏｄｅｎｔ ｍａｌａｒｉａ． ＸＸＩＩ． Ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ ｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ ｂｌｏｏｄ ｓｃｈｉｚｏｎｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．，Ａｎｎ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，６９：１５５−１７１，(１９７５)]を若干改変して行った。

すなわち、供試動物としてはＩＣＲマウス(日本チャールス・リバー社)の雄、体重１８〜２０ｇの一群５匹を用い、ｉｎ ｖｉｖｏ ｐａｓｓａｇｅにて維持・継代した原虫を２ｘ１０^６個の寄生虫感染赤血球に調整し、尾静脈接種にて感染させた。治療実験は４ ｄａｙｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｔｅｓｔで行った。感染日をｄａｙ ０とすると、感染２時間後に化合物の溶液(１０％ジメチルスルホキサイド溶液-Ｔｗｅｅｎ８０)を腹腔内(ｉ．ｐ．)で投与し、以後１日１回３日間連続投与し(ｄａｙｓ１〜３)、ｄａｙ４で尾静脈より血液塗末標本を作成し、原虫感染赤血球率(ｐａｒａｓｉｔａｅｍｉａ)を観察し、化合物非投与群の感染率より治療効果(ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ％)を判定した。

本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２の腹腔内投与における治療効果の結果を下記の表３に示す。

本発明の６−アザアルテミシニン類ＨＴＯＨ−２１およびＨＴＯＨ−２２を腹腔内投与した場合、ネズミマラリア原虫Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ Ｎ株感染実験モデルに対して、ＨＴＯＨ−２１は３０ｍｇ／ｋｇの低用量で薬剤無添加の対照群と比べ９５．５％の原虫感染赤血球率の抑制があり、ＨＴＯＨ−２２は３０ｍｇ／ｋｇの低用量で薬剤無添加の対照群と比べ４７．３％の原虫感染赤血球率の抑制があり、感染治療効果が認められた。薬剤添加の対照として用いた既存の抗マラリア剤のアルテスネートは３０および１ｍｇ／ｋｇの用量で９４．０％および４４．７％の原虫感染赤血球率の抑制が認められた。このことよりＨＴＯＨ−２１はアルテスネートと同程度の低容量で、ＨＴＯＨ−２２はアルテスネートの約３０倍の容量で治療効果があることが示された。

Claims (12)

1. 以下の式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩：
   

   

   （式中、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、もしくはアシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アシル、スルホンアミド、アリール、もしくはアリールアルキルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルを表し；及び、Ｒ^４は、＝Ｏを表す）。
2. Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルもしくはＣ_１〜１０アシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０アシル、スルホンアミド、もしくはベンジルを表し；及び、Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルを表す、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
3. 以下の式（ＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   

   
4. 以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   

   
5. 請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
6. 請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、マラリア原虫類の感染治療剤。
7. マラリア原虫類による感染症を治療するための薬剤を製造するための、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
8. 以下の式（Ｉ）
   

   

   で表される化合物を製造する方法であって、
   以下の式（Ａ）
   

   

   で表される化合物と以下の式（Ｂ）
   

   

   で表される化合物とを、トリメチルシリルアセチレン存在下で反応させることによって、以下の式（Ｃ）
   

   

   で表される中間体を得る工程を含む、該方法：
   （いずれの式中においても、Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、もしくはアシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アシル、スルホンアミド、アリール、もしくはアリールアルキルを表し；Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルを表し；及び、Ｒ^４は、＝Ｏを表す）。
9. 前記式（Ｃ）で表される化合物をチタン錯体触媒の存在下で環化させて以下の式（Ｄ）
   

   

   得る工程、及び、前記式（Ｄ）の化合物を環化させて前記式（Ｉ）の化合物を得る工程を更に含む、請求項８に記載の方法。
10. Ｒ^１は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルもしくはＣ_１〜１０アシルを表し；Ｒ^２は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０アシル、スルホンアミド、もしくはベンジルを表し；及び、Ｒ^３は、Ｈ、又は置換されていてもよいＣ_１〜１０アルキルを表す、請求項８又は９に記載の方法。
11. Ｒ^１は、メチルであり；Ｒ^２は、ベンジルであり；及び、Ｒ^３は、Ｈである、請求項８乃至１０のいずれか一項に記載に記載の方法。
12. Ｒ^１は、メチルであり；Ｒ^２は、ｐ−メトキシベンジルであり；Ｒ^３は、Ｈである、請求項８乃至１０のいずれか一項に記載に記載の方法。

Images