JP5979810B2

JP5979810B2 - Anti-aging agent

Info

Publication number: JP5979810B2
Application number: JP2009235386A
Authority: JP
Inventors: 美弥子柳原; 弘正田中; 智基立藤; 橋本　健; 健橋本
Original assignee: Yamada Bee Co Inc
Current assignee: Yamada Bee Co Inc
Priority date: 2009-10-09
Filing date: 2009-10-09
Publication date: 2016-08-31
Anticipated expiration: 2029-10-09
Also published as: JP2011079797A

Description

本発明は抗老化剤に関する。より具体的には、本発明はサーチュインを活性化することにより老化を抑制する抗老化剤、または抗老化剤を含む医薬組成物、食品に関する。 The present invention relates to an anti-aging agent. More specifically, the present invention relates to an anti-aging agent that suppresses aging by activating sirtuin, or a pharmaceutical composition and food containing the anti-aging agent.

老化・寿命制御に関するこれまでの研究で、酵母、線虫、ショウジョウバエ等においてはカロリー制限が延命・抗老化を実現するための有効な処理であることが知られている。そして、それらのカロリー制限による延命の実現には、ＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素活性を有するＳｉｒ２が関与していることが明らかになっており（非特許文献１）、Ｓｉｒ２の哺乳類ホモログとしてはサーチュイン１〜７が知られている。 In previous studies on aging / lifetime control, it is known that caloric restriction is an effective treatment for prolonging life and anti-aging in yeast, nematodes, Drosophila and the like. And it has been clarified that Sir2 having NAD-dependent deacetylase activity is involved in realizing life extension by calorie restriction (Non-patent Document 1), and sirtuin is a mammalian homologue of Sir2. 1-7 are known.

従来から、このようなサーチュインを増強あるいは活性化する因子としては、赤ワイン中のポリフェノールであるレスベラトロールをはじめとした植物性ポリフェノール類が知られている（非特許文献２）。 Conventionally, plant polyphenols including resveratrol, which is a polyphenol in red wine, are known as factors that enhance or activate such sirtuins (Non-patent Document 2).

一方、グネツム科植物の一種であるメリンジョの種子にはポリフェノールの一種であるグネチンＣ、グネモノシドＡ、グネモノシドＤが含まれており、抗菌作用、抗酸化作用を有すること（特許文献１）、インターロイキン-2やインターフェロン-γを増強することで免疫賦活作用を有することが記されている（特許文献２）。 On the other hand, the seeds of Melinjo, which is a kind of Gnetsum family, contain Gnetin C, Gnemonoside A, Gnemonoside D, which are polyphenols, and have antibacterial and antioxidative effects (Patent Document 1), interleukins. -2 and interferon-γ are described as having an immunostimulatory effect (Patent Document 2).

国際特願PCT／JP2005-016824International Patent Application PCT / JP2005-016824 特開2009-046446JP2009-046446

PLoS ONE 3: e1759, 2008PLoS ONE 3: e1759, 2008 Nature, 425:191-196 (2003)Nature, 425: 191-196 (2003)

本発明は抗老化剤、より具体的には、本発明はサーチュインを活性化することにより老化を抑制する抗老化剤を提供することを目的とする。さらに、本発明は、老化を抑制するための医薬組成物、食品を提供することを目的とする。 The present invention aims to provide an anti-aging agent, more specifically, an anti-aging agent that suppresses aging by activating sirtuin. Furthermore, an object of this invention is to provide the pharmaceutical composition and foodstuff for suppressing aging.

上記課題の下、本発明者らが鋭意検討を重ねたところ、グネツム科植物の抽出物およびグネチンCに、従来からサーチュイン活性化作用が知られているレスベラトロールに比べて顕著に高いサーチュイン活性化作用を有し、老化を抑制する作用があることを見出し、抗老化剤の有効成分として使用できることを確認した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものであり、下記の実施形態を有するものである。 Under the above-mentioned problems, the present inventors conducted extensive studies, and the sirtuin activity is significantly higher than that of resveratrol, which has been known to have a sirtuin-activating effect, in the extract of the gnetaceae plant and gnetin C. It has been found that it has an aging action and has an action to suppress aging, and it can be used as an active ingredient of an anti-aging agent. The present invention has been completed based on this finding, and has the following embodiments.

（I）グネツム科植物の抽出物およびグネチンCからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分とするサーチュイン活性化剤。
（II）グネツム科植物の抽出物がメリンジョ抽出物である上記（I）記載のサーチュイン活性化剤。
（III）グネツム科植物の抽出物がメリンジョの実又は種子の抽出物である上記（I）記載のサーチュイン活性化剤。
（IV）グネツム科植物の抽出物がメリンジョの実又は種子の水、低級アルコール又はそれら混合物による抽出物である上記（I）記載のサーチュイン活性化剤。
（V）上記（I）〜（IV）記載のサーチュイン活性化剤を含む抗老化剤。
（VI）上記（V）記載の抗老化剤を含む医薬組成物。
（VII）上記（V）記載の抗老化剤を含む食品。 (I) A sirtuin activator comprising, as an active ingredient, at least one selected from the group consisting of an extract of a gnetum plant and gnetin C.
(II) The sirtuin activator according to the above (I), wherein the extract of the Gnetsum plant is a melinjo extract.
(III) The sirtuin activator according to the above (I), wherein the extract of the Gnetsum plant is an extract of meringo berries or seeds.
(IV) The sirtuin activator according to the above (I), wherein the Gnetsum plant extract is an extract of meringo berries or seeds with water, a lower alcohol or a mixture thereof.
(V) An anti-aging agent comprising the sirtuin activator according to (I) to (IV) above.
(VI) A pharmaceutical composition comprising the anti-aging agent described in (V) above.
(VII) A food containing the anti-aging agent described in (V) above.

本発明のサーチュイン活性化剤は、サーチュインを活性化することで老化を抑制することができる。また、抗老化剤を含む医薬組成物および食品の摂取により、老化を抑制することができる。 The sirtuin activator of the present invention can suppress aging by activating sirtuins. Moreover, aging can be suppressed by ingestion of a pharmaceutical composition and food containing an anti-aging agent.

試験例２において、各検体（メリンジョエキス、グネチンC、グネモノシドA、グネモノシドD、レスベラトロールおよびサーチュイン阻害剤であるスラミン（Suramin））を用いてサーチュイン活性化作用を調べた結果を図１に示す。In Test Example 2, the results of examining the sirtuin activation action using each sample (merinjo extract, gnetin C, gnemonoside A, gnemonoside D, resveratrol and sirmin as a sirtuin inhibitor) are shown in FIG. Show.

本発明のサーチュイン活性化剤、抗老化剤、抗老化剤を含む医薬組成物および食品（以下、「本発明の製剤」と総称する）は、いずれもグネツム科植物の抽出物およびグネチンCからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分とする。 The sirtuin activator, anti-aging agent, and pharmaceutical composition and food containing the anti-aging agent of the present invention (hereinafter collectively referred to as “the preparation of the present invention”) are each composed of an extract of a gnetaceae plant and gnetin C. At least one selected from the group is an active ingredient.

本発明の製剤の有効成分であるグネツム科植物の抽出物は、グネツム科に属する植物から抽出をすることで得られる。グネツム科に属する植物は特に制限されないが、Gnetum
latifolium、Gnetum
africanumおよびGnetum gnemon（メリンジョ）を例示することができる。好ましくはメリンジョである。使用する植物の部位についてもグネチンＣを多く含む部位であれば、実（または種子）、花及び葉など、部位に制限されないが、好ましくは実（または種子）、より好ましくは実の胚乳である。 An extract of a gnetaceae plant that is an active ingredient of the preparation of the present invention can be obtained by extracting from a plant belonging to the family Gnetumaceae. Plants belonging to the family Gnetum are not particularly limited, but Gnetum
latifolium, Gnetum
Examples include africanum and Gnetum gnemon (Melinjo). Melinjo is preferred. The plant part to be used is not limited to parts such as fruits (or seeds), flowers and leaves as long as it contains a lot of gnetin C, but is preferably fruit (or seeds), more preferably real endosperm. .

グネツム科植物から抽出する場合、その方法は特に制限されないが、極性溶媒を用いて抽出する方法や二酸化炭素等による超臨界抽出法を用いて抽出する方法が挙げられる。極性溶媒で抽出する場合、使用する抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール(メタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノールなど)、ケトン類(アセトン、メチルエチルケトン、メチルブチルケトンなど)、エステル類(酢酸メチル、酢酸エチルなど)、グリコール類(エチレングリコール、プロピレングリコール)、グリセリン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸、プロピオン酸、アセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドを挙げることができる。 When extracting from a gnetaceae plant, the method in particular is not restrict | limited, The method of extracting using the method of extracting using a polar solvent and the supercritical extraction method by a carbon dioxide etc. is mentioned. When extracting with a polar solvent, examples of the extraction solvent to be used include water, lower alcohols (methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, etc.), ketones (acetone, methyl ethyl ketone, methyl butyl ketone, etc.), esters (acetic acid, etc.). Methyl, ethyl acetate, etc.), glycols (ethylene glycol, propylene glycol), glycerin, tetrahydrofuran, acetonitrile, acetic acid, propionic acid, acetamide, dimethylformamide, and dimethyl sulfoxide.

これらの抽出溶媒は１種で使用しても、また２種以上を任意に組み合わせて混合液として用いることもできる。好ましくは、水、低級アルコール（好ましくはエタノール）またはこれらの混合液（含水アルコール、好ましくは含水エタノール）である。なお、抽出溶媒として含水アルコール（好ましくは含水エタノール）を使用する場合、アルコール濃度としては、制限されないものの、２０〜９０容量％、特に４０〜８０容量％を好適に挙げることができる。 These extraction solvents can be used alone or in a combination of two or more. Preferably, water, lower alcohol (preferably ethanol) or a mixture thereof (hydrous alcohol, preferably hydrous ethanol). In addition, when using water-containing alcohol (preferably water-containing ethanol) as an extraction solvent, although it does not restrict | limit as alcohol concentration, 20-90 volume%, Especially 40-80 volume% can be mentioned suitably.

抽出は、溶媒に上記植物体の一部または全部を加え、０℃〜溶媒が沸騰する温度、通常100℃以下の温度で、30分から3日程度、浸漬静置または浸漬振盪抽出し、次いで不溶物を除去することなどにより、容易に行うことができる。得られた溶媒抽出物はそのまま用いてもよいが、減圧、加温または自然乾燥などの方法を用いて濃縮し、固形分量または有効成分の濃度を調製することができる。固形分量は以降の加工のしやすさなどから、１〜９９重量％、好ましくは２０〜８０重量％、さらに好ましくは３０〜７０重量％を挙げることができる。 Extraction is carried out by adding a part or all of the above plant to the solvent, followed by soaking or soaking for 30 minutes to 3 days at a temperature where the solvent boils, usually at a temperature of 100 ° C or lower, and then insoluble. This can be done easily by removing the object. The obtained solvent extract may be used as it is, but it can be concentrated by using a method such as reduced pressure, warming or natural drying to adjust the solid content or the concentration of the active ingredient. The solid content is 1 to 99% by weight, preferably 20 to 80% by weight, and more preferably 30 to 70% by weight in view of ease of subsequent processing.

ここで有効成分の濃度は、グネツム科植物の抽出物中に含まれるグネチンC、グネモノシドA、グネモノシドDおよびレスベラトロール（以下、「レスベラトロール類」と総称する）の総量と表されるものとする。以下、特別の理由がない限り、グネツム科植物の抽出物の有効成分の濃度はレスベラトロール類の総量をモル濃度で表すこととする。 Here, the concentration of the active ingredient is expressed as the total amount of gnetin C, gnemonoside A, gnemonoside D and resveratrol (hereinafter collectively referred to as “resveratrols”) contained in the extract of the gnetaceae plant. And Hereinafter, unless there is a special reason, the concentration of the active ingredient in the extract of the gnetaceae plant represents the total amount of resveratrol in a molar concentration.

かくして得られたグネツム科植物の抽出物は、そのまま医薬及び食品用途に供することができるが、更に加工したうえで当該用途に供することもできる。加工方法は特に制限されないが、上記抽出物を液剤、半液体形態、固体形態に調製する方法が挙げられる。具体的には、液剤の形態としてドリンクやシロップ、半液体形態としてはペースト状およびゼリー状、固体形態としては凍結乾燥物(例えば凍結乾燥粉末)、顆粒などを挙げることができる。なお、凍結乾燥物は、上記溶媒抽出物を凍結乾燥処理することによって製造することができる。凍結乾燥処理は定法に従って行うことができる。 The extract of the gnetaceae plant thus obtained can be used as it is for pharmaceutical and food applications, but it can be further processed and used for such applications. The processing method is not particularly limited, and examples thereof include a method of preparing the extract into a liquid agent, a semi-liquid form, and a solid form. Specifically, drinks and syrups can be used as liquid forms, pastes and jellies can be used as semi-liquid forms, and lyophilized products (eg, freeze-dried powders) and granules can be used as solid forms. The lyophilized product can be produced by lyophilizing the solvent extract. The lyophilization treatment can be performed according to a conventional method.

一方、グネチンＣは、自家調製品または市販品を問わず用いることができる。ここでグネチンＣを自家調製する方法としては、特に制限されず、グネチンＣを含む植物から抽出し単離する方法、微生物に産生させて単離する方法（例えばAdil E Bala et al., “Antifungal activity of
resveratrol oligomers from Cyphostemma crotalarioides”, Pesticide Science,
Vol.55, Issue 2, Pages 206-208, 1998など参照）、および化学的に合成する方法を挙げることができる。 On the other hand, gnetin C can be used regardless of whether it is a home-made product or a commercial product. Here, the method for self-preparing gnetin C is not particularly limited, and is a method of extracting and isolating from a plant containing gnetin C, a method of producing and isolating it by microorganisms (for example, Adil E Bala et al., “Antifungal activity of
resveratrol oligomers from Cyphostemma crotalarioides ”, Pesticide Science,
Vol. 55, Issue 2, Pages 206-208, 1998), and chemical synthesis methods.

また、グネチンCの単離精製処理に、上記で得られた抽出物を使用することができる。かかる単離精製処理は、慣用の方法を１または２種以上組み合わせて行うことができる。このような処理としては、例えば、析出法、液−液向流分配法、活性炭や樹脂などによる吸着処理、カラムクロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーなどによる精製処理等が挙げられる。なお、グネチンＣの単離精製は、グネチンＣの分子量（454）および極大吸収波長（320nm）のほか、下記の挙動を指標として行うことができる。 Moreover, the extract obtained above can be used for the isolation and purification treatment of gnetin C. Such isolation and purification treatment can be performed by combining one or more conventional methods. Examples of such treatment include a precipitation method, a liquid-liquid counter-current distribution method, an adsorption treatment with activated carbon, a resin, and the like, a purification treatment with column chromatography, ion exchange chromatography, and the like. In addition, isolation and purification of gnetin C can be performed using the following behavior as an index in addition to the molecular weight (454) and maximum absorption wavelength (320 nm) of gnetin C.

＜薄層クロマトグラフィー（TLC）＞
下記条件で分析した際のRf値が0.61。シリカゲル60F₂₅₄、展開溶媒：20容量％メタノールを含むクロロホルム、検出波長：254 nm。 <Thin layer chromatography (TLC)>
The Rf value when analyzed under the following conditions is 0.61. Silica gel 60F _254, developing solvent: chloroform containing 20 volume% methanol, detection wavelength: 254 nm.

＜高速液体クロマトグラフィー（HPLC）＞
下記条件で分析した際の保持時間が33.5分。
カラム：東ソー製 TSKgel ODS-100V、5
μm, 4.6×150 mm、
移動層: Ａ液：1.0容量％酢酸含有水、Ｂ液：1.0容量％酢酸含有メタノール、
グラジェント条件：0分→10分：Ａ:Ｂ=65:35(v/v)→63:37(v/v)、10分→20分：Ａ:Ｂ=63:37(v/v)→56：44(v/v)、20分→40分：Ａ:Ｂ=48:52 (v/v)、
検出波長：320 nm、
流速: 0.8 mL/min。 <High performance liquid chromatography (HPLC)>
The retention time when analyzed under the following conditions is 33.5 minutes.
Column: Tosoh TSKgel ODS-100V, 5
μm, 4.6 × 150 mm,
Moving bed: A liquid: 1.0 vol% acetic acid-containing water, B liquid: 1.0 vol% acetic acid-containing methanol,
Gradient condition: 0 minutes → 10 minutes: A: B = 65: 35 (v / v) → 63: 37 (v / v), 10 minutes → 20 minutes: A: B = 63: 37 (v / v) → 56: 44 (v / v), 20 minutes → 40 minutes: A: B = 48: 52 (v / v),
Detection wavelength: 320 nm,
Flow rate: 0.8 mL / min.

なお、精製は純度１００％まで行う必要はない。本発明で使用するグネチンＣは、純度が通常５０％以上のものであればよく、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上のものを挙げることできる。 Note that purification does not need to be performed up to a purity of 100%. Gnetin C used in the present invention may have a purity of usually 50% or higher, preferably 80% or higher, more preferably 90% or higher.

また、グネチンＣを、微生物を用いて産生する場合、また化学合成によって取得する場合も、上記と同様に精製処理を施すことが好ましい。 Moreover, when producing | generating gnetin C using microorganisms, also when acquiring by chemical synthesis, it is preferable to perform a refinement | purification process similarly to the above.

後述する試験例に示すように、これらグネツム科植物の抽出物およびグネチンCはいずれも、サーチュインを活性化することで老化を抑制する作用を持つ。よって、グネツム科植物の抽出物およびグネチンCはいずれも、１種単独または組み合わせて、老化を抑制する抗老化剤の有効成分として利用することができる。 As shown in the test examples to be described later, these gnetum plant extracts and gnetin C both have the action of suppressing aging by activating sirtuins. Therefore, any of the extracts of Gnetumaceae plants and Gnetin C can be used as an active ingredient of an anti-aging agent that suppresses aging, either alone or in combination.

かくして得られた抗老化剤を含有する本発明の医薬組成物又は食品はこれらグネツム科植物の抽出物またはグネチンC 100%からなるものであってもよいし、またそうでなくてもサーチュイン活性化作用を発揮する有効量を含有するものであってもよい。 The pharmaceutical composition or food of the present invention containing the anti-aging agent thus obtained may be composed of an extract of these gnetaceae plants or 100% of gnetin C, or it may be sirtuin activated. It may contain an effective amount that exerts the action.

本発明の抗老化剤を医薬用途に供する場合、当該医薬組成物は、通常、有効量のグネツム科植物の抽出物およびグネチンCに加えて、薬学的に許容される担体または添加剤を配合して調製することができる。 When the anti-aging agent of the present invention is used for pharmaceutical use, the pharmaceutical composition usually contains a pharmaceutically acceptable carrier or additive in addition to an effective amount of an extract of Gnetaceae and Gunnetin C. Can be prepared.

また、当該医薬組成物の投与方法として、特に制限されないが、経口投与、ならびに静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経粘膜投与、経皮投与、および直腸内投与等の非経口投与を挙げることができる。好ましくは、経口投与、静脈内若しくは筋肉内投与、経粘膜投与、および経皮投与である。 The administration method of the pharmaceutical composition is not particularly limited, and includes oral administration and parenteral administration such as intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, transmucosal administration, transdermal administration, and rectal administration. be able to. Preferably, they are oral administration, intravenous or intramuscular administration, transmucosal administration, and transdermal administration.

当該医薬組成物は、かかる投与方法に応じて、種々の形態の製剤（剤型）に調製することができる。以下に、各製剤（剤型）について説明するが、本発明において用いられる剤型はこれらに限定されるものではなく、医薬製剤分野において通常用いられる各種剤型を用いることができる。 The pharmaceutical composition can be prepared into various forms of preparations (dosage forms) depending on the administration method. The preparations (dosage forms) will be described below, but the dosage forms used in the present invention are not limited to these, and various dosage forms that are usually used in the pharmaceutical preparation field can be used.

経口投与を行う場合の剤型として、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤およびシロップ剤を挙げることができ、これらの中から適宜選択することができる。また、それらの製剤について徐放化、安定化、易崩壊化、難崩壊化、腸溶性化、易吸収化等の修飾を施すことができる。 Examples of dosage forms for oral administration include powders, granules, capsules, pills, tablets, elixirs, suspensions, emulsions, and syrups, and can be appropriately selected from these. . Moreover, modifications such as sustained release, stabilization, easy disintegration, poor disintegration, enteric solubility, easy absorption and the like can be applied to these preparations.

また、静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与を行う場合の剤型として、注射剤または点滴剤（用時調製の乾燥品を含む）等があり、適宜選択することができる。 In addition, dosage forms for intravenous administration, intramuscular administration, or subcutaneous administration include injections and infusions (including dried products prepared at the time of use), and can be selected as appropriate.

また、経粘膜投与や経皮投与を行う場合の剤型として、咀嚼剤、舌下剤、パッカル剤、トローチ剤、外用剤（軟膏剤、クリーム剤、貼布剤、液剤）等が、また直腸内投与を行う場合の剤型として軟膏剤があり、適応場所に応じて適宜選択することができる。また、それらの製剤について徐放化、安定化、易崩壊化、難崩壊化、易吸収化等の修飾を施すことができる。 In addition, as dosage forms for transmucosal administration and transdermal administration, chewing agents, sublingual agents, buccal agents, troches, external preparations (ointments, creams, patches, liquids), etc. There is an ointment as a dosage form for administration, and it can be appropriately selected according to the place of application. Moreover, modifications such as sustained release, stabilization, easy disintegration, difficulty disintegration, and easy absorption can be applied to these preparations.

当該医薬組成物にはその剤形（経口投与または各種の非経口投与の剤形）に応じて、薬学的に許容される担体および添加剤を配合することができる。薬学的に許容される担体及び添加剤としては、溶剤、賦形剤、コーティング剤、基剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、粘稠剤、乳化剤、安定剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤、矯味剤、芳香剤、着色剤が挙げられる。以下に、医薬上許容される担体および添加剤の具体例を列挙するが、本発明はこれらに制限されるものではない。 According to the dosage form (oral administration or various parenteral administration dosage forms), pharmaceutically acceptable carriers and additives can be blended in the pharmaceutical composition. Pharmaceutically acceptable carriers and additives include solvents, excipients, coating agents, bases, binders, lubricants, disintegrants, solubilizers, suspending agents, thickeners, emulsifiers, Stabilizers, buffers, tonicity agents, soothing agents, preservatives, flavoring agents, fragrances, and coloring agents can be mentioned. Specific examples of pharmaceutically acceptable carriers and additives are listed below, but the present invention is not limited thereto.

溶剤としては、精製水、滅菌精製水、注射用水、生理食塩液、ラッカセイ油、エタノール、グリセリン等を挙げることができる。賦形剤としては、デンプン類（例えばバレイショデンプン、コムギデンプン、トウモロコシデンプン）、乳糖、ブドウ糖、白糖、結晶セルロース、硫酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、タルク、酸化チタン、トレハロース、キシリトール等を挙げることができる。 Examples of the solvent include purified water, sterilized purified water, water for injection, physiological saline, peanut oil, ethanol, glycerin and the like. Excipients include starches (eg, potato starch, wheat starch, corn starch), lactose, glucose, sucrose, crystalline cellulose, calcium sulfate, calcium carbonate, sodium bicarbonate, sodium chloride, talc, titanium oxide, trehalose, xylitol Etc.

結合剤としては、デンプンおよびその誘導体、セルロースおよびその誘導体（たとえばメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース）、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、トラガント、アラビアゴム等の天然高分子化合物、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等の合成高分子化合物、デキストリン、ヒドロキシプロピルスターチ等を挙げることができる。 Examples of binders include starch and derivatives thereof, cellulose and derivatives thereof (for example, methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose), gelatin, sodium alginate, tragacanth, gum arabic and other natural polymer compounds, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc. Synthetic polymer compounds, dextrin, hydroxypropyl starch and the like.

滑沢剤としては、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸およびその塩類（たとえばステアリン酸マグネシウム）、タルク、ワックス類、コムギデンブン、マクロゴール、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、シリコン油等を挙げることができる。 Lubricants include light anhydrous silicic acid, stearic acid and its salts (eg magnesium stearate), talc, waxes, wheat denbun, macrogol, hydrogenated vegetable oil, sucrose fatty acid ester, polyethylene glycol, silicone oil, etc. be able to.

崩壊剤としては、デンプンおよびその誘導体、寒天、ゼラチン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、セルロースおよびその誘導体、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースおよびその塩類ならびにその架橋体、低置換型ヒドロキシプロピルセルロース等を挙げることができる。 Examples of disintegrants include starch and derivatives thereof, agar, gelatin powder, sodium bicarbonate, calcium carbonate, cellulose and derivatives thereof, hydroxypropyl starch, carboxymethylcellulose and salts thereof, and cross-linked products thereof, and low-substituted hydroxypropylcellulose. be able to.

溶解補助剤としては、シクロデキストリン、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。懸濁化剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、クエン酸、各種界面活性剤等を挙げることができる。 Examples of the solubilizer include cyclodextrin, ethanol, propylene glycol, polyethylene glycol and the like. Examples of the suspending agent include sodium carboxymethyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, gum arabic, tragacanth, sodium alginate, aluminum monostearate, citric acid, various surfactants and the like.

粘稠剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、トラガント、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。 Examples of the thickener include sodium carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinyl alcohol, tragacanth, gum arabic, sodium alginate and the like.

乳化剤は、アラビアゴム、コレステロール、トラガント、メチルセルロース、レシチン、各種界面活性剤（たとえば、ステアリン酸ポリオキシル４０、セスキオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８０、ラウリル硫酸ナトリウム）等を挙げることができる。 Examples of the emulsifier include gum arabic, cholesterol, tragacanth, methylcellulose, lecithin, various surfactants (for example, polyoxyl 40 stearate, sorbitan sesquioleate, polysorbate 80, sodium lauryl sulfate) and the like.

安定剤としては、トコフェロール、キレート剤（たとえばＥＤＴＡ、チオグリコール酸）、不活性ガス（たとえば窒素、二酸化炭素）、還元性物質（たとえば亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ロンガリット）等を挙げることができる。 Stabilizers include tocopherols, chelating agents (eg, EDTA, thioglycolic acid), inert gases (eg, nitrogen, carbon dioxide), reducing substances (eg, sodium bisulfite, sodium thiosulfate, ascorbic acid, Rongalite) and the like. be able to.

緩衝剤としては、リン酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸等を挙げることができる。 Examples of the buffer include sodium hydrogen phosphate, sodium acetate, sodium citrate, boric acid and the like.

等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等を挙げることができる。無痛化剤としては、局所麻酔剤（塩酸プロカイン、リドカイン）、ペンジルアルコール、ブドウ糖、ソルビトール、アミノ酸等を挙げることができる。 Examples of isotonic agents include sodium chloride and glucose. Examples of soothing agents include local anesthetics (procaine hydrochloride, lidocaine), pendyl alcohol, glucose, sorbitol, amino acids and the like.

矯味剤としては、白糖、サッカリン、カンゾウエキス、ソルビトール、キシリトール、グリセリン等を挙げることができる。芳香剤としては、トウヒチンキ、ローズ油等を挙げることができる。着色剤としては、水溶性食用色素、レーキ色素等を挙げることができる。 Examples of the corrigent include sucrose, saccharin, licorice extract, sorbitol, xylitol, glycerin and the like. Examples of fragrances include spruce tincture and rose oil. Examples of the colorant include water-soluble food dyes and lake dyes.

保存剤としては、安息香酸およびその塩類、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、逆性石けん、ベンジルアルコール、フェノール、チロメサール、デヒドロ酢酸、ホウ酸等を挙げることができる。 Examples of the preservative include benzoic acid and its salts, paraoxybenzoic acid esters, chlorobutanol, reverse soap, benzyl alcohol, phenol, thimerosal, dehydroacetic acid, boric acid and the like.

コーティング剤としては、白糖、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、セラック、ゼラチン、グリセリン、ソルビトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、メチルメタアクリレート−メタアクリル酸共重合体および上記記載した高分子等を挙げることができる。 Coating agents include sucrose, hydroxypropylcellulose (HPC), shellac, gelatin, glycerin, sorbitol, hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), ethylcellulose, polyvinylpyrrolidone (PVP), hydroxypropylmethylcellulose phthalate (HPMCP), cellulose acetate phthalate (CAP) ), Methyl methacrylate-methacrylic acid copolymer and the above-described polymers.

基剤としては、ワセリン、流動パラフィン、カルナウバロウ、牛脂、硬化油、パラフィン、ミツロウ、植物油、マクロゴール、マクロゴール脂肪酸エステル、ステアリン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ベントナイト、カカオ脂、ウイテップゾール、ゼラチン、ステアリルアルコール、加水ラノリン、セタノール、軽質流動パラフィン、親水ワセリン、単軟膏、白色軟膏、親水軟膏、マクロゴール軟膏、ハードファット、水中油型乳剤性基剤、油中水型乳剤性碁剤等を挙げることができる。 Bases include petrolatum, liquid paraffin, carnauba wax, beef tallow, hardened oil, paraffin, beeswax, vegetable oil, macrogol, macrogol fatty acid ester, stearic acid, sodium carboxymethylcellulose, bentonite, cacao butter, witepsol, gelatin, stearyl Alcohol, hydrolanolin, cetanol, light liquid paraffin, hydrophilic petrolatum, simple ointment, white ointment, hydrophilic ointment, macrogol ointment, hard fat, oil-in-water emulsion base, water-in-oil emulsion glaze etc. Can do.

なお、上記の各剤型について、公知のドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の技術を採用することができる。本明細書にいうＤＤＳ製剤とは、徐放化製剤、局所適用製剤（トローチ、バッカル錠、舌下錠等）、薬物放出制御製剤、腸溶性製剤および胃溶性製剤等、投与経路、バイオアベイラビリティー、副作用等を勘案した上で、最適の製剤形態にした製剤である。 In addition, about each said dosage form, the technique of a well-known drug delivery system (DDS) is employable. The DDS preparations referred to in this specification include sustained release preparations, topical preparations (troches, buccal tablets, sublingual tablets, etc.), drug release control preparations, enteric preparations and gastric preparations, etc., administration routes, bioavailability Considering side effects and the like, it is a preparation in an optimal preparation form.

当該医薬組成物の１回あたりの投与量は、グネツム科植物の抽出物の総量に換算して0.1〜5000 ｍｇ／ｋｇの範囲が好ましく、より好ましくは1〜500
ｍｇ／ｋｇ、またはグネチンCの総量に換算して0.002〜100 mg/kgの範囲が好ましく、より好ましくは0.02〜10 mg/kgである。また、本発明の抗老化医薬組成物の一日投与量としては、グネツム科植物の抽出物の総量に換算して、通常
5 mg〜250 g、またはグネチンCの総量に換算して0.1 mg〜5000 mgを挙げることができる。なお、これらの投与量は、年齢、性別、体型等により変動し得る。 The dose per time of the pharmaceutical composition is preferably in the range of 0.1 to 5000 mg / kg, more preferably 1 to 500 in terms of the total amount of the extract of the gnetaceae plant.
It is preferably in the range of 0.002 to 100 mg / kg, more preferably 0.02 to 10 mg / kg in terms of mg / kg or the total amount of gnetin C. In addition, the daily dose of the anti-aging pharmaceutical composition of the present invention is usually converted to the total amount of the extract of the gnetaceae plant,
5 mg to 250 g, or 0.1 mg to 5000 mg can be mentioned in terms of the total amount of gnetin C. Note that these doses may vary depending on age, sex, body type and the like.

一方、本発明の抗老化剤を食品成分として使用する場合は、グネツム科植物の抽出物およびグネチンCをそのまま当該食品の用に供することができ、あるいは、例えば水、アルコール、ビタミン、ミネラル、デンプン、蛋白質、繊維質、脂質、脂肪酸、着香料、着色料、甘味料、調味料、香辛料、乳化剤、防腐剤、保存料、防かび剤、殺菌剤または酸化防止剤のように通常食品に用いられる原料及び、または素材の１つまたは複数とともに使用することもできる。 On the other hand, when the anti-aging agent of the present invention is used as a food ingredient, the extract of the gnetaceae plant and gnetin C can be used for the food as they are, or, for example, water, alcohol, vitamins, minerals, starch , Protein, fiber, lipid, fatty acid, flavoring, coloring, sweetener, seasoning, spice, emulsifier, preservative, preservative, fungicide, fungicide, antioxidant, etc. It can also be used with one or more of the raw materials and / or raw materials.

グネツム科植物の抽出物およびグネチンCの食品への配合割合は、特に限定されず、当該食品の使用目的、使用形態および使用量に応じて適宜選択することができる。当該グネツム科植物の抽出物およびグネチンCがサーチュイン活性化作用を有する量を含有するようにするには、通常、グネツム科植物の抽出物においては本発明の食品中に有効成分が1〜1000μM（約0.00025〜0.25重量％）、好ましくは30〜300
μM（約0.0075〜0.075重量％）、グネチンCにおいては１〜1000 μM（約0.00005〜0.05重量％）、好ましくは30〜300 μM（約0.0015〜0.015重量％）であるのが好ましい。 The mixing ratio of the extract of Gnetsum plant and Gnetin C in the food is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the purpose of use, the form of use and the amount of use of the food. In order that the extract of the gnetaceae plant and gnetin C contain an amount having a sirtuin activating action, the active ingredient is usually 1 to 1000 μM in the food of the present invention in the extract of the gnetaceae plant ( About 0.00025-0.25 wt%), preferably 30-300
It is preferable that the concentration is μM (about 0.0075 to 0.075% by weight), 1 to 1000 μM (about 0.00005 to 0.05% by weight) in Gnetin C, and preferably 30 to 300 μM (about 0.0015 to 0.015% by weight).

さらに、本発明の食品は保健、健康維持、増進等を目的とする食品、例えば健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、あるいは厚生労働省の定める特別用途食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、病者用食品、病者用組合せ食品、高齢者用食品など）として提供することも可能である。 Furthermore, the food of the present invention is a food intended for health, health maintenance, enhancement, etc., such as health food, functional food, dietary supplement, supplement, or special-purpose food defined by the Ministry of Health, Labor and Welfare (for example, food for specified health use, Food with functional nutrition, food for the sick, combination food for the sick, food for the elderly, etc.).

また、本発明の食品の種類としては特に制限されず、例えば、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜を挙げることができる。これら食品や食品素材には、カルシウム、マグネシウム、リン等のミネラルを併用してもよく、食品や食品素材とした場合のグネツム科植物の抽出物の摂取量は成人１人１日あたり、好ましくは5 ｍｇ〜250 ｇ、より好ましくは50 mg〜25 ｇ、グネチンCの摂取量は成人１人１日あたり、好ましくは0.1 mg〜5000
mg、さらに好ましくは1〜500 mｇを挙げることができる。 In addition, the type of food of the present invention is not particularly limited, for example, yogurt, drink yogurt, juice, milk, soy milk, liquor, coffee, tea, sencha, oolong tea, sports drinks and other beverages, pudding, cookies, Baked confectionery such as bread, cake, jelly, rice cracker, Japanese confectionery such as sheep candy, frozen confectionery, bread and confectionery such as chewing gum, noodles such as udon and soba, fish paste products such as kamaboko, ham, fish sausage, miso, Examples include seasonings such as soy sauce, dressing, mayonnaise, sweeteners, dairy products such as cheese and butter, and various side dishes such as tofu, konjac, other boiled fish, dumplings, croquettes, and salads. Minerals such as calcium, magnesium and phosphorus may be used in combination with these foods and food materials, and the intake of the extract of the gnetaceae plant when used as food or food materials is preferably per adult per day. 5 mg to 250 g, more preferably 50 mg to 25 g, the intake of gnetin C per adult per day, preferably 0.1 mg to 5000
mg, more preferably 1 to 500 mg.

以下、本発明をより詳細に説明するために試験例及び実施例を挙げるが、本発明はこれらの記載に限定されるものではない。 Hereinafter, although a test example and an example are given in order to explain the present invention in detail, the present invention is not limited to these descriptions.

調製例
以下の方法に従い、グネツム科植物の抽出物、グネチンC、グネモノシドA、グネモノシドDを得た。 Preparation Example According to the following method, an extract of Gnetaceae plant, gnetin C, gunemonoside A, and gunemonoside D were obtained.

（１）グネツム科植物の抽出物（メリンジョエキス）の調製
特開2009-013123号公報の段落[0024]の記載に従ってメリンジョの乾燥果実の破砕物を室温下で含水エタノールに浸漬し、得られた抽出液を減圧濃縮して、固形分を63.2重量％含むメリンジョエキスを得た。 (1) Preparation of gnetsum plant extract (melinjo extract) According to the description in paragraph [0024] of JP-A-2009-013123, a crushed product of dried fruit of melinjo is immersed in hydrous ethanol at room temperature. The extract was concentrated under reduced pressure to obtain a meringo extract containing 63.2% by weight of solid content.

（２）グネチンCの調製
上記で得られたメリンジョエキス2.5gをカラムクロマトグラフィー（ゲルの種類：Cosmosil
75C₁₈-PREP（ナカライテスク製）、カラムサイズ：φ3×26.5 cm）に付し、溶離液としてメタノール含量が10容量％、25容量％、40容量％、80容量％および100容量％の含水メタノールを用いて順次ステップワイズ溶出した（各溶離液600 mLを流し、100 mLずつ分取）。得られた各成分を下記条件のＨＰＬＣで確認したところ、グネチンＣは、保持時間33.5分（１容量％酢酸および80容量％メタノールを含有する含水メタノール溶出フラクション）に溶出することが確認された。 (2) Preparation of gnetin C 2.5 g of the meringo extract obtained above was subjected to column chromatography (gel type: Cosmosil
75C ₁₈ -PREP (manufactured by Nacalai Tesque), column size: φ3 × 26.5 cm) with methanol content of 10%, 25%, 40%, 80% and 100% by volume as the eluent Stepwise elution was carried out using each (flowing 600 mL of each eluent and fractionating 100 mL each). When each component obtained was confirmed by HPLC under the following conditions, it was confirmed that Gnetin C was eluted at a retention time of 33.5 minutes (water-containing methanol elution fraction containing 1% by volume acetic acid and 80% by volume methanol).

＜HPLC条件＞
カラム：東ソー製 TSKgel ODS-100V、5
μm, 4.6×150 mm、
移動層: Ａ液：1.0容量％酢酸含有水、Ｂ液：１.0容量％酢酸含有メタノール、
グラジェント条件：０分→10分：Ａ:Ｂ=65:35(v/v)→63:37(v/v)、10分→20分：Ａ:Ｂ=63:37(v/v)→56：44(v/v)、20分→40分：Ａ:Ｂ=48:52 (v/v)
検出波長：320 nm、
流速: 0.8 mL/min。 <HPLC conditions>
Column: Tosoh TSKgel ODS-100V, 5
μm, 4.6 × 150 mm,
Moving bed: Liquid A: 1.0 vol% acetic acid-containing water, Liquid B: 1.0 vol% acetic acid-containing methanol,
Gradient condition: 0 minute → 10 minutes: A: B = 65: 35 (v / v) → 63: 37 (v / v), 10 minutes → 20 minutes: A: B = 63: 37 (v / v) → 56: 44 (v / v), 20 minutes → 40 minutes: A: B = 48: 52 (v / v)
Detection wavelength: 320 nm,
Flow rate: 0.8 mL / min.

上記フラクションを濃縮後、下記条件の中圧カラムクロマトグラフィーで順次溶出した。 After concentrating the above fractions, the fractions were sequentially eluted by medium pressure column chromatography under the following conditions.

＜中圧カラムクロマトグラフィー条件＞
ゲルの種類：シリカゲル、Daisogel
IR-60-40/63-W、
カラムサイズ：φ2×7.48 cm、
検出波長：320 nm
移動層：Ａ液：メタノール、Ｂ液：クロロホルム、
グラジェント条件：０分→2分：Ａ:Ｂ=11:89(v/v)、2分→8分：Ａ:Ｂ=11:89(v/v)→18:82(v/v)、8分→12分：Ａ:Ｂ=18:82(v/v)、12分→14分：Ａ:Ｂ=21:79(v/v)、14分→20分：Ａ:Ｂ=21:79(v/v)→29:71(v/v)、20分→24分：Ａ:Ｂ=29:71(v/v)、24分→30分：Ａ:Ｂ=29:71(v/v)→36:64(v/v)、30分→34分：36:64(v/v)、
流速: 60 ml/min。 <Medium pressure column chromatography conditions>
Gel type: Silica gel, Daisogel
IR-60-40 / 63-W,
Column size: φ2 × 7.48 cm,
Detection wavelength: 320 nm
Moving layer: A liquid: methanol, B liquid: chloroform,
Gradient condition: 0 minute → 2 minutes: A: B = 11: 89 (v / v), 2 minutes → 8 minutes: A: B = 11: 89 (v / v) → 18: 82 (v / v) 8 minutes → 12 minutes: A: B = 18: 82 (v / v), 12 minutes → 14 minutes: A: B = 21: 79 (v / v), 14 minutes → 20 minutes: A: B = 21 : 79 (v / v) → 29: 71 (v / v), 20 minutes → 24 minutes: A: B = 29: 71 (v / v), 24 minutes → 30 minutes: A: B = 29: 71 ( v / v) → 36:64 (v / v), 30 minutes → 34 minutes: 36:64 (v / v),
Flow rate: 60 ml / min.

溶出液を60mLずつ分取し、検出波長：320 nmで吸収ピークを示した29番目から30番目のフラクションをエバポレーターで濃縮し、グネチンＣ(35.2 mg、純度97%)を得た。 The eluate was fractionated 60 mL each, and the 29th to 30th fractions having an absorption peak at a detection wavelength of 320 nm were concentrated by an evaporator to obtain gnetin C (35.2 mg, purity 97%).

（３）グネモノシドAの調製
以下の方法に従い、グネモノシドAを単離した。 (3) Preparation of gnemonoside A Gnemonoside A was isolated according to the following method.

(i) メリンジョエキスペースト2.5gをカラムクロマトグラフィー（ゲルの種類：Cosmosil 75C18-PREP ナカライテスク、カラムサイズ：φ3×26.5
cm）に付し、10%,25%,40%,80%,100%メタノール水（各3 Lを流し、1 Lずつ分取）で順次溶出した。得られた各成分をHPLCで確認したところ、グネモノシドA
（保持時間 10.3分）は40%メタノール水溶出フラクション中にあった。 (i) Column chromatography of 2.5 g of Melinjo extract paste (gel type: Cosmosil 75C18-PREP Nacalai Tesque, column size: φ3 × 26.5
cm), and eluted sequentially with 10%, 25%, 40%, 80%, 100% aqueous methanol (3 L each, 1 L was collected). When each component obtained was confirmed by HPLC, gnemonoside A
(Retention time 10.3 min) was in the 40% methanol water elution fraction.

(ii) 上記の40%フラクションを分取用カラムクロマトグラフィー[カラム：Cosmosil 5C18-AR-II ナカライテスクφ20×250
mm、移動層：A液：0.1% トリフルオロ酢酸（TFA）、B液：メタノール、A:B＝67:33 (v/v)で60分間アイソクラテック、検出波長：320nm、流速
10 mL/min、注入量：5 mg(100 mg/mL×50 μL)、溶出時間:45分]で分取を行い、グネモノシドA
130 mg (純度99.4%)を得た。 (ii) The above 40% fraction was subjected to preparative column chromatography [column: Cosmosil 5C18-AR-II Nacalai Tesque φ20 × 250
mm, moving layer: A solution: 0.1% trifluoroacetic acid (TFA), B solution: methanol, A: B = 67: 33 (v / v) for 60 minutes, isocratec, detection wavelength: 320 nm, flow rate
10 mL / min, injection volume: 5 mg (100 mg / mL x 50 μL), elution time: 45 minutes]
130 mg (purity 99.4%) were obtained.

（４）グネモノシドDの調製
以下の方法に従い、グネモノシドDを単離した。 (4) Preparation of gnemonoside D Gnemonoside D was isolated according to the following method.

(i)メリンジョエキスペースト2.5gをカラムクロマトグラフィー（ゲルの種類：Cosmosil 75C18-PREP ナカライテスク、カラムサイズ：φ3×26.5
cm）に付し、10%,25%,40%,80%および100%メタノール水（各3 Lを流し、1 Lずつ分取）で順次溶出した。得られた各成分をHPLCで確認したところ、グネモノシドD
（保持時間 24.7分）は80%メタノール水溶出フラクション中にあった。 (i) Column chromatography of 2.5 g of Melinjo extract paste (gel type: Cosmosil 75C18-PREP Nacalai Tesque, column size: φ3 × 26.5
cm), and eluted sequentially with 10%, 25%, 40%, 80% and 100% methanol water (3 L each, 1 L fraction). Each component obtained was confirmed by HPLC.
(Retention time 24.7 minutes) was in the 80% methanol water elution fraction.

(ii)上記80%フラクションをセライト(933 mg)に吸着後、中圧カラムクロマトグラフィー（ゲルの種類：シリカゲル、Daisogel
IR-60-40/63-W、カラムサイズφ2×7.48 cm、検出波長：320 nm）に付し、メタノールを含有するクロロホルム（移動層 A液：メタノール、B液：クロロホルム、A:B=11:89(v/v)2分保持後18:82(v/v)6分のリニアグラジエント、18:82(v/v)4分保持、21:79(v/v)2分保持後29:71(v/v)6分のリニアグラジエント、29:71(v/v)4分保持後36:64(v/v)6分間のリニアグラジエント、36:64(v/v)4分間保持、流速:
60 mL/min、60mLずつ分取）で順次溶出した。 (ii) After adsorbing the above 80% fraction to Celite (933 mg), medium pressure column chromatography (gel type: silica gel, Daisogel
Chloroform containing IR-60-40 / 63-W, column size φ2 × 7.48 cm, detection wavelength: 320 nm, and containing methanol (moving bed solution A: methanol, solution B: chloroform, A: B = 11 : 89 (v / v) 2 minute hold 18:82 (v / v) 6 minute linear gradient, 18: 82 (v / v) 4 minute hold, 21: 79 (v / v) 2 minute hold 29 : 71 (v / v) 6-minute linear gradient, 29: 71 (v / v) 4-minute hold 36:64 (v / v) 6-minute linear gradient, 36: 64 (v / v) 4-minute hold , Flow rate:
The elution was performed sequentially at 60 mL / min and 60 mL each).

（iii）上記のフラクション16-21を分取用カラムクロマトグラフィー[カラム：Cosmosil
5C18-AR-II 20×250 mm、移動層：A液：0.1% TFA、B液：メタノール、A:B＝60:40(v/v)で80分アイソクラテック、検出波長：320nm、流速
10 mL/min、注入量：5 mg(100 mg/mL×50 μL)、溶出時間:62分]で分取を行い、グネモノシドD
40 mg（純度99.1%）を得た。 (Iii) Fraction 16-21 is subjected to preparative column chromatography [column: Cosmosil
5C18-AR-II 20 × 250 mm, moving bed: A solution: 0.1% TFA, B solution: methanol, A: B = 60: 40 (v / v) for 80 minutes, isocratec, detection wavelength: 320 nm, flow rate
10 mL / min, injection volume: 5 mg (100 mg / mL x 50 μL), elution time: 62 minutes]
40 mg (purity 99.1%) were obtained.

試験例１メリンジョエキス中のグネチンC、グネモノシドA、グネモノシドD、レスベラトロールの定量
（1）試験方法
(i)サンプル調製
メリンジョエキスを30.00 mg量り取る。30%アセトニトリル水で50
mLにメスアップした。0.2μmメンブランフィルター(ADVANTEC製 DISMIC-13HP、PTFE、0.2μm)でろ過した。 Test Example 1 Quantification of gnetin C, genomonoside A, gnemonoside D, resveratrol in melinjo extract (1) Test method
(i) Weigh out 30.00 mg of sample preparation Merinjo extract. 50% with 30% acetonitrile water
The volume was made up to mL. The solution was filtered with a 0.2 μm membrane filter (DISMIC-13HP, PTFE, 0.2 μm manufactured by ADVANTEC).

(ii)検量線の作成
標準品のレスベラトロール及びグネチンCを各2.00
mg量り取り、メタノールで10 mLにメスアップした。レスベラトロール及びグネチンCをそれぞれ0.1、0.25、0.5、1.0 mL量り取り、30%アセトニトリル水で10
mLにメスアップした。これを用いて検量線とした。 (ii) Preparation of calibration curve 2.00 each of standard products resveratrol and gnetin C
mg was weighed and made up to 10 mL with methanol. Resveratrol and gnetin C are weighed 0.1, 0.25, 0.5, and 1.0 mL, respectively, and 10% with 30% acetonitrile water.
The volume was made up to mL. This was used as a calibration curve.

(i)で調製した検体を用い、下記条件に従って高速液体クロマトグラフィー（HPLC, 島津製 Prominence）により分析を行った。 The sample prepared in (i) was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC, Prominence manufactured by Shimadzu) according to the following conditions.

(iii)HPLC条件
カラム：東ソー製
TSKgel ODS-100V 5μm 4.6×150 mm、移動層: A液：1%酢酸水、B液：アセトニトリル、A:B=80:20(v/v)から78:22(v/v)10分、78:22(v/v)から70：30(v/v)10分のリニアグラジエント後、63:37
(v/v)で15分保持、検出波長：320 nm、流速: 0.8 mL/min、注入量 20 μLで分析(保持時間：グネモノシドＡ 8.6分、グネモノシドＤ 23.5分、グネチンＣ 33.8分、レスベラトロール 21.3分)。 (iii) HPLC condition column: manufactured by Tosoh Corporation
TSKgel ODS-100V 5μm 4.6 × 150 mm, moving layer: A solution: 1% acetic acid water, B solution: acetonitrile, A: B = 80: 20 (v / v) to 78:22 (v / v) 10 minutes, After a linear gradient from 78:22 (v / v) to 70:30 (v / v) 10 minutes, 63:37
(v / v) held for 15 minutes, detection wavelength: 320 nm, flow rate: 0.8 mL / min, analysis at 20 μL injection volume (retention time: Gunemonoside A 8.6 minutes, Gunemonoside D 23.5 minutes, Gunnetin C 33.8 minutes, Resvera Troll 21.3 minutes).

（2）試験結果
調製例(1)で調製したメリンジョエキスにはグネモノシドA 12 mM、グネモノシドD 4.6 mM、グネチンC 4.7 mM、レスベラトロール0.059 mMが含まれていた。以下の試験においてはメリンジョエキス中に含まれるこれらレスベラトロール類の総和をメリンジョエキスの濃度として扱うこととする。 (2) Test results The melinjo extract prepared in Preparation Example (1) contained 12 mM of Gunemonoside A, 4.6 mM of Gunemonoside D, 4.7 mM of Gunnetin C, and 0.059 mM of Resveratrol. In the following tests, the sum of these resveratrols contained in the meringo extract is treated as the concentration of the meringo extract.

試験例２サーチュイン活性化の測定
（1）試験方法
サーチュインの活性測定には、SIRT1/Sir2 Deacetylase Fluorometric Assay
Kit （CycLex, Nagano, Japan）を用いた。使用方法は取り扱い説明書に記載の方法に従った。試験検体としてメリンジョエキス、グネチンC、グネモノシドA、グネモノシドD、レスベラトロール（シグマ社）またはサーチュイン阻害剤のスラミン（Suramin sodium、BIOMOL社）を各々１００μＭで用いた。また、試験検体にDMSOを用いた場合をコントロールとした。蛍光の測定にはマイクロプレートリーダー（FLUOStar OPTIMA, BMG LABTECH, Germany）を使用した。 Test Example 2 Measurement of sirtuin activation (1) Test method SIRT1 / Sir2 Deacetylase Fluorometric Assay was used to measure sirtuin activity.
Kit (CycLex, Nagano, Japan) was used. The method of use followed the method described in the instruction manual. As test specimens, melinjo extract, gnetin C, gunemonoside A, gunemonoside D, resveratrol (Sigma) or sirtuin inhibitor suramin (Suramin sodium, BIOMOL) were used at 100 μM each. The case where DMSO was used as a test sample was used as a control. A microplate reader (FLUOStar OPTIMA, BMG LABTECH, Germany) was used for fluorescence measurement.

（2）試験結果
結果を図１に示す。コントロールの値よりも、メリンジョエキス、グネチンC、グネモノシドA、グネモノシドDまたはレスベラトロールを添加したときの値の方が高くなっており、これらの試験検体によってサーチュインの活性が高まることが明らかとなった。特にメリンジョエキスおよびグネチンCによるサーチュインの活性化はそれぞれ、レスベラトロールによる活性の2倍および3倍高かった。 (2) Test results The results are shown in FIG. The value when Merinjo extract, Gnetin C, Gnemonoside A, Gnemonoside D or Resveratrol was added was higher than the control value, and it is clear that these test samples increase the activity of sirtuin became. In particular, activation of sirtuins by melinjo extract and gnetin C was 2 and 3 times higher than that by resveratrol, respectively.

試験例３線虫を用いた寿命延長測定試験
（1）試験方法
(i)線虫（Caenorhabditis elegans）の培養はNGM寒天培地（52
mM 塩化ナトリウム, 1.7% 寒天末, 0.25% bactopeptone, 0.001% コレステロール, 1 mM 硫酸マグネシウム, 1 mM 塩化カルシウム, 25 mM リン酸二水素カリウム）上に餌として大腸菌（Escherichia coli strain OP50）を播種した9 cm プレートを用いた。線虫の取り扱いは、「線虫ラボマニュアル」（シュプリンガーフェアラーク東京、三谷昌平編、2003年）記載の方法を一部変更して行った。同一生育ステージの線虫を得るため、産卵期にある成虫から卵を回収した。すなわち、水酸化ナトリウムと次亜塩素酸ナトリウム溶液で成虫を溶解することで卵のみを得た。卵はM9バッファー（精製水１L中に3 g
リン酸二水素カリウム, 6 g リン酸水素二ナトリウム, 5 g 塩化ナトリウム,
1 ml 1 M 硫酸マグネシウム）中24.5℃で一晩孵化させた。このように生育ステージを合わせた第一期幼虫をNGM培地に移し、さらに2日間24.5℃で培養させることで得られた成虫を寿命解析に用いた。 Test example 3 Life extension measurement test using nematodes (1) Test method
(i) The nematode (Caenorhabditis elegans) is cultured using NGM agar medium (52
E. coli (Escherichia coli strain OP50) was seeded on mM sodium chloride, 1.7% agar powder, 0.25% bactopeptone, 0.001% cholesterol, 1 mM magnesium sulfate, 1 mM calcium chloride, 25 mM potassium dihydrogen phosphate 9 A cm plate was used. Handling of nematodes was carried out by partially changing the method described in the “Nematode Lab Manual” (Springer Fairlark Tokyo, Shohei Mitani, 2003). In order to obtain nematodes of the same growth stage, eggs were collected from adults in the spawning season. That is, only eggs were obtained by dissolving adults with sodium hydroxide and sodium hypochlorite solution. Egg is M9 buffer (3 g in 1 liter of purified water
Potassium dihydrogen phosphate, 6 g disodium hydrogen phosphate, 5 g sodium chloride,
(1 ml 1 M magnesium sulfate) and incubated at 24.5 ° C. overnight. The first-stage larvae with the same growth stage were transferred to NGM medium and further cultured for 2 days at 24.5 ° C., and adults obtained were used for life analysis.

(ii)得られた成虫を、コントロールとして1%ジメチルスルフォキシド（DMSO）を含むNGM寒天培地、試験検体としてメリンジョエキスまたはグネチンCを含むNGM寒天培地へ移し24.5ºC で培養した。この日を寿命0日目とし、2 日毎に計3回、新しく作製した1%DMSOまたは試験検体を含むNGM寒天培地へ線虫を移すとともに、生死数をカウントした。5日目以降は生死数のカウントのみを行った。白金線で刺激を与え、何ら反応を返さなかった線虫を死と判断した。生死数のカウント結果より線虫の平均寿命を求めた。 (ii) The obtained adults were transferred to an NGM agar medium containing 1% dimethyl sulfoxide (DMSO) as a control, and to an NGM agar medium containing melinjo extract or gunetin C as test samples, and cultured at 24.5 º C. This day was defined as the 0th life, and the nematode was transferred to a newly prepared NGM agar containing 1% DMSO or a test sample three times every two days, and the number of viable deaths was counted. From the 5th day onward, only the number of deaths was counted. Nematodes that were stimulated with platinum wire and did not respond at all were judged dead. The average life span of the nematode was obtained from the result of counting the number of life and death.

（2）試験結果
結果を表１に示す。メリンジョエキス、グネチンCの添加により、線虫の平均寿命はコントロールよりも延長したことから、これらの検体が寿命を延長させることが明らかとなった。 (2) Test results The results are shown in Table 1. The addition of merinjo extract and gnetin C increased the average lifespan of nematodes compared to controls, indicating that these specimens prolong lifespan.

実施例１粉末
調製例（１）で得られたメリンジョエキス50 gにデキストリン10重量％含有水溶液2.3 g加えて均一になるまで撹拌した。その後凍結乾燥により、レスベラトロール類を227
mM（20重量％）含有するメリンジョ抽出物粉末を得た。 Example 1 Powder To 50 g of the meringo extract obtained in Preparation Example (1), 2.3 g of an aqueous solution containing 10% by weight of dextrin was added and stirred until uniform. The resveratrols are then 227 by freeze-drying.
Melinjo extract powder containing mM (20% by weight) was obtained.

実施例２錠剤
上記実施例１で得られたメリンジョ抽出物粉末30 mgにショ糖脂肪酸エステル3 mg、結晶セルロース100 mg、デキストリン197 mgを混合・打錠し、錠剤を得た。 Example 2 Tablets 30 mg of the melinjo extract powder obtained in Example 1 above were mixed and tableted with 3 mg of sucrose fatty acid ester, 100 mg of crystalline cellulose and 197 mg of dextrin to obtain tablets.

実施例３カプセル剤
上記実施例１で得られたメリンジョ抽出物粉末45 mgにショ糖脂肪酸エステル5 mg、デキストリン200 mgをカプセルに充填し、カプセル製剤を得た。 Example 3 Capsule A 45 mg melinjo extract powder obtained in the above Example 1 was filled into a capsule with 5 mg sucrose fatty acid ester and 200 mg dextrin to obtain a capsule preparation.

実施例４錠剤
下記処方に従って、１錠あたりグネチンCを10 mg含む錠剤を調製した。
1錠（300 mg）中
グネチンC 10 mg
乳糖 50 mg
結晶セルロース 100 mg
デンプン 100 mg
ヒドロキシプロピルセルロース 25 mg
ステアリン酸マグネシウム 10 mg
甘味料（ステビア） 5 mg
Example 4 Tablets Tablets containing 10 mg of gnetin C per tablet were prepared according to the following formulation.
Gnetin C 10 mg in 1 tablet (300 mg)
Lactose 50 mg
Crystalline cellulose 100 mg
Starch 100 mg
Hydroxypropylcellulose 25 mg
Magnesium stearate 10 mg
Sweetener (stevia) 5 mg

Claims

A sirtuin activator comprising gnetin C.