JP5963391B2 - Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 - Google Patents
Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5963391B2 JP5963391B2 JP2010141050A JP2010141050A JP5963391B2 JP 5963391 B2 JP5963391 B2 JP 5963391B2 JP 2010141050 A JP2010141050 A JP 2010141050A JP 2010141050 A JP2010141050 A JP 2010141050A JP 5963391 B2 JP5963391 B2 JP 5963391B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- seq
- fluorescent protein
- primer
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、分子生物学の分野に関する。より具体的には、本発明は、新規な蛍光タンパク質、そのタンパク質をコードするDNA配列を同定する方法、およびそれらの使用に関する。
蛍光標識は、目的のタンパク質、細胞、または生物を標識するための特に有用なツールである。伝統的に、目的のタンパク質は精製され、次いで蛍光団誘導体に共有結合的に結合体化される。インビボ研究のために、次いで、タンパク質−色素複合体が、マイクロピペッティングまたは可逆的透過化処理の方法を使用して、目的の細胞に挿入される。しかし、色素吸着工程および色素挿入工程は、プロセスを、骨が折れかつ制御することが困難にする。目的のタンパク質を標識する代替的な方法は、目的のタンパク質を発現する遺伝子を、マーカーを発現する遺伝子に連結または融合させ、次いで融合産物を発現することである。タンパク質標識のこの方法のための代表的なマーカーは、β−ガラクトシダーゼ、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼである。しかし、これらのマーカーは、外因性の基質または補因子を必要とし、従ってインビボ研究のためには用途が限定される。
本発明は、amFP486、cFP484、zFP506、zFP538、dsFP483、drFP583、asFP600、dgFP512、およびdmFP592からなる群より選択される、単離および精製された蛍光タンパク質に関する。
(項目1) 蛍光タンパク質をコードするDNA配列を同定する方法であって、以下:
サンプル中の核酸配列の存在をスクリーニングする工程であって、ここで該核酸配列は、配列番号3、5、8、11、12、および14からなる群より選択される配列を有するペプチドをコードし、該核酸配列の存在は、該蛍光タンパク質をコードするDNA配列を同定する工程、
を包含する方法。
(項目2) 蛍光タンパク質をコードするDNA配列を同定する方法であって、以下:
サンプル中の核酸配列の存在をスクリーニングする工程であって、ここで該核酸配列は、配列番号4、6、7、9、10、13、15、および16からなる群より選択されるプライマーとハイブリダイズし、該核酸配列の存在は、該蛍光タンパク質をコードするDNA配列を同定する工程、
を包含する方法。
(項目3) 細胞中で蛍光タンパク質を分析する方法であって、以下:
a)該細胞中で配列番号55〜63からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する蛍光タンパク質をコードする核酸配列を発現する工程;および
b)該タンパク質からの蛍光シグナルを測定する工程、
を包含する方法。
(項目4) 前記シグナルに従って前記細胞を分別する工程をさらに包含する、項目3に記載の方法。
(項目5) 前記分別する工程は、前記細胞を、蛍光活性化細胞分別法によって分別することを包含する、項目4に記載の方法。
(項目6) 前記核酸配列が、前記蛍光タンパク質に融合された目的のタンパク質をコードする目的の遺伝子を含み、該目的のタンパク質は該蛍光タンパク質と異なる、項目3に記載の方法。
(項目7) 前記蛍光シグナルは、前記細胞中の前記目的の遺伝子の存在を示す、項目6に記載の方法。
(項目8) 前記細胞は、前記蛍光タンパク質に融合された目的のタンパク質をさらに含む、項目7に記載の方法。
(項目9) 前記蛍光タンパク質の細胞内局在を同定することによって、前記目的のタンパク質の細胞内局在が同定される工程をさらに包含する、項目8に記載の方法。
(項目10) amFP486、cFP484、zFP506、zFP538、dsFP483、drFP583、asFP600、dgFP512、およびdmFP592からなる群より選択される、単離および精製された蛍光タンパク質。
本明細書において用いる場合、用語「GFP」は、Aequorea victoria由来の塩基性のグリーン蛍光タンパク質をいう。これには、より大きい蛍光を提供するかまたは異なる色で蛍光発光するように操作されたGFPの先行技術のバージョンを含む。Aequorea victoriaのGFPの配列(配列番号54)は、Presherら、Gene 111(1992)、229〜33に開示されている。
者の範囲内)が使用され得る。このような技術は、文献中で十分に説明される。例えば、Maniatis、FritschおよびSambrook、「Molesular Cloning:A Laboratory Manual(1982);「DNA Cloning:A Practical Approach」第I巻およびII巻(D.N.Glover編,1985);「Oligonucleotide Synthesis」(M.J.Gait編,1984);Nucleic Acid Hybridization」(B.D.HamesおよびS.J.Higgins編(1985));「Transcription and Translation」(B.D.HamesおよびS.J.Higgins編(1984));「Animal Cell Cult
ure」(R.I.Freshney編(1986));「Immobilized Cells and Enzymes」(IRL Press,(1986));B.Perbal、「A Practical Guide To Molecular Cloning」(1984)を参照のこと。
メントが付着され得る。
。
(生物学的材料)
新規な蛍光タンパク質を、Anthozoaのいくつかの属から同定した。これらの属は、いかなる生物発光も示さないが、通常の白色光または紫外光の下で観察した場合に、蛍光色を有する。6つの種を選択した(表1を参照のこと)。
(実施例2)
(cDNAの調製)
全RNAを、ChomczynskiおよびSacchi(Chomczynski P.ら、Anal.Biochem.162(1987)、156〜159)のプロトコルに従って、目的の種から単離した。第1鎖cDNAを、SMART PCR cDNA合成キット(CLONTECH)を提供されたプロトコルに従って使用して、1〜3μgの全RNAから開始して合成したが、唯一、このキット中に提供された「cDNA合成プライマー」をプライマーTN3(5’−CGCAGTCGACCG(T)13、配列番号1)(表2)で置き換える変更を行った。次いで、増幅されたcDNAサンプルを、提供されたプロトコルに記載されたように調製したが、ただし、PCRに使用した2つのプライマーがTSプライマー(5’−AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT、配列番号2)(表2)およびTN3プライマー(表2)であった(ともに、0.1μMの濃度)ことが異なる。20〜25回のPCRサイクルを実施して、cDNAサンプルを増幅した。この増幅されたcDNAを水で20倍希釈し、そしてこの希釈物のうちの1μlを、続く手順にて使用した。
cDNA合成およびRACEにて使用したオリゴ
(実施例3)
(オリゴの設計)
新規な蛍光タンパク質のcDNAのフラグメントを単離するために、縮重プライマーを使用するPCRを実施した。縮重プライマーは、蛍光タンパク質のファミリー中で最も変化しないと予測された領域におけるmRNAの配列と一致するように設計した。このような4つのストレッチを選択し(表3)、そして縮重プライマーの変異体を設計した。このようなプライマーはすべて、mRNAの3’末端に関した。すべてのオリゴを、使用前にゲル精製した。表2は、cDNA合成およびRACEにおいて使用したオリゴを示す。
(重要なアミノ酸ストレッチおよび蛍光タンパク質の単離のために使用した対応縮重プライマー)
(実施例4)
(nFPの3’−cDNAフラグメントの単離)
3’−RACEの改変型ストラテジーを使用して、標的フラグメントを単離した(図1を参照のこと)。このRACEストラテジーは、連続する2つのPCR工程を含んだ。第1のPCR工程は、第1の縮重プライマー(表4)およびcDNA合成のために使用されたTN3プライマーと同一の3’部分を有する、T7−TN3プライマー(配列番号17)(T7−TN3の配列については、表2)を含んだ。このPCR工程において長い方であるT7−TN3プライマーを置き換えた理由は、短い方であるTN3プライマーを使用した場合、特にT7−TN3プライマーを低濃度(0.1μM)にて使用した場合に、生じるバックグラウンド増幅が効果的に抑制されたことである(Frohmanら(1998)PNAS USA、85、8998〜9002)。第2のPCR工程は、TN3プライマー(配列番号1、表2)および第2の縮重プライマー(表4)を含んだ。
(nFP cDNAの3’フラグメントの特異的増幅を生じる、第1および第2のPCRのための縮重プライマーの組み合わせ)
第1のPCR反応を、以下のように実施した:増幅されたcDNAサンプルの20倍希釈物1μlを反応混合物に添加した。この反応混合物は、提供された緩衝液を含む1× Advantage KlenTaq Polymerase Mix(CLONTECH)、200μM dNTP、0.3μMの第1の縮重プライマー(表4)および0.1μMのT7−TN3(配列番号17)プライマーを、総量20μlにて含んでいた。サイクルのプロフィールは、以下の(Hybaid OmniGene Thermocycler、チューブコントロールモード)であった:95℃で10秒、55℃で1分、72℃で40秒を1サイクル;95℃で10秒、62℃で30秒、72℃で40秒を24サイクル。次いで、この反応物を水で20倍希釈し、そしてこの希釈物のうちの1μlを第2のPCR反応物に添加した。この第2のPCR反応物は、製造業者により提供された緩衝液を含む1× Advantage KlenTaq Polymerase Mix(CLONTECH)、200μM dNTP、0.3μMの第2の縮重プライマー(表4)および0.1μMのTN3プライマーを含んでいた。サイクルのプロフィールは、以下の(Hybaid OmniGene Thermocycler、チューブコントロールモード)であった:95℃で10秒、55℃(GEG/GNGまたはPVMに関して)または52℃(NFPに関して)で1分、72℃で40秒を1サイクル;95℃で10秒、62℃(GEG/GNGまたはPVMに関して)または58℃(NFPに関して)で30秒、72℃で40秒を13サイクル。PCRの産物を、製造業者のプロトコルに従って、PCR−Scriptベクター(Stratagene)中にクローニングした。
(全長cDNAのコピーの取得)
得られた新規な蛍光タンパク質cDNAの3’フラグメントを配列決定する際に、2つの5’指向性(directed)入れ子(nested)プライマーをcDNAについて合成し(表5)、次いでこのcDNAの5’末端を、連続する2つのPCRを使用して増幅した。その次のPCR反応において、「ステップアウトPCR」という新規なアプローチを使用して、バックグラウンドの増幅を抑制した。このステップアウト反応混合物は、製造業者により提供された緩衝液を用いる1× Advantage KlenTaq Polymerase Mix(CLONTECH)、200μM dNTP、0.2μMの第1の遺伝子特異的プライマー(表5を参照のこと)、0.02μMのT7−TSプライマー(配列番号18)、0.1μMのT7プライマー(配列番号19)および増幅されたcDNAサンプルの20倍希釈物1μlを、総容量20μlにて含んでいた。サイクルのプロフィールは、以下の(Hybaid OmniGene Thermocycler、チューブコントロールモード)であった:95℃で10秒、60℃で30秒、72℃で40秒を23〜27サイクル。増幅の産物を水で50倍希釈し、そしてこの希釈物のうちの1μlを、第2の(入れ子)PCRに添加した。この反応は、提供された緩衝液を含む1× Advantage KlenTaq Polymerase Mix(CLONTECH)、200μM dNTP、0.2μMの第2の遺伝子特異的プライマーおよび0.1μMのTSプライマー(配列番号2)を、総容量20μlにて含んでいた。サイクルのプロフィールは、以下の(Hybaid OmniGene Thermocycler、チューブコントロールモード)であった:95℃で10秒、60℃で30秒、72℃で40秒を12サイクル。次いで増幅の産物を、製造業者のプロトコルに従って、pAtlasベクター(CLONTECH)中にクローニングした。
(5’−RACEに使用した遺伝子特異的プライマー)
(実施例6)
(E.coliにおけるnFPの発現)
新規な蛍光タンパク質発現のためのDNA構築物を調製するために、以下の2つのプライマーを各DNAについて合成した:そのcDNAの3’−UTRに位置するアニーリング部位を有する5’指向性「下流」プライマー、および翻訳開始部位(最初のATGコドンを含まない)の部位に対応する3’指向性「上流」プライマー(表6)。両方のプライマーは、制限エンドヌクレアーゼについての部位をコードする5’−ヒール(heel)を有した;さらに、この上流プライマーは、そのPCR産物をpQE30ベクター(Qiagen)中に、このベクターにコードされる6×HisタグとnFPのリーディングフレームの融合が生じるような様式でクローニングすることを可能にするように設計した。PCRを以下のように実施した:増幅されたcDNAサンプルの20倍希釈物1μlを反応混合物に添加した。この反応混合物は、製造業者により提供された緩衝液を含む1× Advantage KlenTaq Polymerase Mix(CLONTECH)、200μM dNTP、0.2μMの上流プライマーおよび0.2μMの下流プライマーを、最終容量20μlにて含んでいた。サイクルのプロフィールは、以下の(Hybaid OmniGene Thermocycler、チューブコントロールモード)であった:95℃で10秒、60℃で30秒、72℃で40秒を23〜27サイクル。この増幅工程の産物を、フェノール−クロロホルム抽出およびエタノール沈殿により精製し、次いで標準的プロトコルに従ってこのプライマーの配列に対応する制限エンドヌクレアーゼを使用して、pQE30ベクター中にクローニングした。
(発現構築物へとクローニングするためにnFPの全長コード領域を得るために使用したプライマー)
(実施例7)
(新規な蛍光タンパク質およびこのタンパク質をコードするcDNA)
蛍光タンパク質をコードする7つの全長cDNAを得(配列番号45〜51)、そして7つの新規な蛍光タンパク質を産生した(配列番号53〜59)。これらの単離された新規な蛍光タンパク質のスペクトル特性を表7に示し、そしてこれらの新規なタンパク質についての発光スペクトルおよび励起スペクトルを、表3〜11に示す。
(単離したNFPのスペクトル特性)
1.Ormoら(1996)Science 273:1392〜1395。
2.Yang,F.ら(1996)Nature Biotech 14:1246〜1251。
3.Cormackら(1996)Gene 173、33〜38。
4.Haasら(1996)Current Biology 6.315〜324。
5.Yangら(1996)Nucleic Acids Research 24、4592〜4593。
6.Ghodaら(1990)J.Biol.Chem.265:11823〜11826。
7.Prasher D.C.ら(1992)Gene 111:229〜33。
8.Kainら(1995)Biotechniques 19(4)650〜55。
9.Chomczynski P.ら(1987)Anal.Biochem.162、156〜159。
10.Frohmanら(1998)PNAS USA、85、8998〜9002。
Claims (10)
- Anthozoa蛍光タンパク質をコードする核酸であって、該核酸は、62℃において該核酸に特異的にハイブリダイズする配列番号4の第1のプライマーと、62℃において該核酸に特異的にハイブリダイズする配列番号6、10および16、ならびに、58℃において該核酸に特異的にハイブリダイズする配列番号13から選択される第2のプライマーとを用いてPCR増幅され得る、蛍光性Anthozoaのゲノムからクローニングされた配列を含み、それぞれの該核酸配列は、該第1のプライマーを用いた第1のPCR増幅および該第2のプライマーを用いた第2のPCR増幅により、該核酸の3’フラグメントを増幅する位置にあり、そして、該蛍光タンパク質はレポーターとしての使用に適しており、かつ、配列番号3のアミノ酸配列と、配列番号5、8、11、12または14の1以上のアミノ酸配列とを含み、ただし、該蛍光タンパク質は、以下:
(a)Anemonia majanoによって産生され、かつ、配列番号36および配列番号37の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
(b)Clavularia sp.によって産生され、かつ、配列番号38および配列番号40の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
(c)Zoanthus sp.によって産生され、かつ、配列番号41および配列番号42の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
(d)Discosoma sp.「red」によって産生され、かつ、配列番号43および配列番号44の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
(e)Discosoma striataによって産生され、かつ、配列番号45および配列番号46の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
(f)Anemonia sulcataによって産生され、かつ、配列番号47および配列番号48の配列を有するプライマーを用いて増幅され得る核酸によってコードされる、蛍光タンパク質;
からなる群から選択されるものを除く、核酸。 - 前記核酸が単離された核酸である、請求項1に記載の核酸。
- 請求項1または2に記載の核酸によってコードされるタンパク質。
- ベクターと、請求項1または2に記載の核酸とを含む構築物。
- 請求項1または2に記載の核酸で形質転換された細胞。
- 請求項3に記載のタンパク質を産生する方法であって、該方法は、
請求項5に記載の細胞を増殖させて、該タンパク質を産生する工程、
を包含する、方法。 - 細胞内の蛍光タンパク質を分析するための方法であって、該方法は、
請求項1または2に記載の蛍光タンパク質をコードする核酸配列を発現させる工程、および
該タンパク質からの蛍光シグナルを測定する工程、
を包含する、方法。 - 配列番号62および配列番号63からなる群より選択される配列を有する、Anthozoa蛍光タンパク質。
- 請求項8に記載の蛍光タンパク質をコードする、核酸。
- Anthozoa蛍光タンパク質をコードする核酸を同定する方法であって、該方法は、
蛍光性Anthozoanのゲノムから該核酸をPCR増幅する工程
を包含し、該増幅する工程は、該ゲノムから作製されたcDNAに対する、配列番号4を含む第1のプライマーの62℃におけるハイブリダイゼーションと、配列番号6、10および16から選択される配列を含む第2のプライマーの62℃におけるハイブリダイゼーション、または、配列番号13を含む第2のプライマーの58℃におけるハイブリダイゼーションとを含む、方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US21033098A | 1998-12-11 | 1998-12-11 | |
US09/210,330 | 1998-12-11 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000586958A Division JP4618891B2 (ja) | 1998-12-11 | 1999-12-10 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016085810A Division JP2016165299A (ja) | 1998-12-11 | 2016-04-22 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010268798A JP2010268798A (ja) | 2010-12-02 |
JP5963391B2 true JP5963391B2 (ja) | 2016-08-03 |
Family
ID=22782478
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000586958A Expired - Fee Related JP4618891B2 (ja) | 1998-12-11 | 1999-12-10 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
JP2010141050A Expired - Lifetime JP5963391B2 (ja) | 1998-12-11 | 2010-06-21 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
JP2016085810A Withdrawn JP2016165299A (ja) | 1998-12-11 | 2016-04-22 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000586958A Expired - Fee Related JP4618891B2 (ja) | 1998-12-11 | 1999-12-10 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016085810A Withdrawn JP2016165299A (ja) | 1998-12-11 | 2016-04-22 | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1135532B1 (ja) |
JP (3) | JP4618891B2 (ja) |
AT (1) | ATE502116T1 (ja) |
DE (1) | DE69943286D1 (ja) |
ES (1) | ES2361971T3 (ja) |
WO (3) | WO2000034319A1 (ja) |
Families Citing this family (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9834584B2 (en) | 1998-12-11 | 2017-12-05 | Takara Bio Usa, Inc. | Nucleic acids encoding chromophores/fluorophores and methods for using the same |
US20030087492A1 (en) | 2001-11-02 | 2003-05-08 | Promos Technologies, Inc. | Semiconductor device and method of manufacturing the same |
US7338785B2 (en) | 1998-12-11 | 2008-03-04 | Clontech Laboratories, Inc. | Nucleic acids encoding chromophores/fluorophores and methods for using the same |
WO2000034319A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
AUPP846399A0 (en) * | 1999-02-02 | 1999-02-25 | University Of Sydney, The | Pigment protein from coral tissue |
US7485715B2 (en) | 1999-06-18 | 2009-02-03 | Ceres, Inc. | Sequence-determined DNA encoding AP2 domain polypeptides |
US7479555B2 (en) | 1999-07-21 | 2009-01-20 | Ceres, Inc. | Polynucleotides having a nucleotide sequence that encodes a polypeptide having MOV34 family activity |
EP1305412A2 (en) | 1999-10-14 | 2003-05-02 | Clontech Laboratories Inc. | Anthozoa derived chromo/fluoroproteins and methods for using the same |
JP4330338B2 (ja) * | 2000-10-12 | 2009-09-16 | クローンテック ラボラトリーズ インク. | 大きく赤側にシフトした蛍光タンパク質 |
US6977293B1 (en) | 2000-11-03 | 2005-12-20 | Ceres, Inc. | Chimeric polypeptides |
WO2002059309A2 (en) * | 2000-12-13 | 2002-08-01 | Clontech Laboratories, Inc. | Anthozoa derived chromoproteins, fluorescent mutants thereof and methods for using the same |
US6969597B2 (en) | 2001-02-21 | 2005-11-29 | Clontech Laboratories, Inc. | Nucleic acids encoding non aggregating fluorescent proteins and methods for using the same |
US7005511B2 (en) | 2001-02-26 | 2006-02-28 | The Regents Of The University Of California | Fluorescent protein variants and methods for making same |
WO2002068605A2 (en) | 2001-02-26 | 2002-09-06 | The Regents Of The University Of California | Non-oligomerizing tandem fluorescent proteins |
US7022826B2 (en) | 2001-02-26 | 2006-04-04 | The Regents Of The University Of California | Non-oligomerizing fluorescent proteins |
US7687614B2 (en) | 2001-02-26 | 2010-03-30 | The Regents Of The University Of California | Monomeric and dimeric fluorescent protein variants and methods for making same |
EP1427856B1 (en) | 2001-09-18 | 2011-05-11 | Carnegie Institution Of Washington | Fusion proteins useful for detecting analytes |
ATE450608T1 (de) | 2001-10-11 | 2009-12-15 | Riken | Fluoreszenzprotein |
CA2461824A1 (en) | 2001-10-12 | 2003-04-17 | Clontech Laboratories, Inc. | Nucleic acids encoding linked chromo/fluorescent domains and methods for using the same |
JP4258724B2 (ja) | 2001-12-20 | 2009-04-30 | 独立行政法人理化学研究所 | 蛍光蛋白質 |
CA2483646A1 (en) | 2002-02-25 | 2003-08-28 | Riken | Fluorescent protein |
CA2489054A1 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-18 | Riken | Chromoprotein |
DE60325589D1 (de) * | 2002-06-10 | 2009-02-12 | Med & Biological Lab Co Ltd | Pigmentprotein |
US7345157B2 (en) | 2002-08-23 | 2008-03-18 | Riken | Fluorescent protein and chromoprotein |
US7344886B2 (en) | 2002-11-29 | 2008-03-18 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg | Neomycin-phosphotransferase-genes and methods for the selection of recombinant cells producing high levels of a desired gene product |
US7384744B2 (en) | 2002-11-29 | 2008-06-10 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg | Expression vector, methods for the production of heterologous gene products and for the selection of recombinant cells producing high levels of such products |
US7413874B2 (en) | 2002-12-09 | 2008-08-19 | University Of Miami | Nucleic acid encoding fluorescent proteins from aquatic species |
DE602004023199D1 (de) * | 2003-06-16 | 2009-10-29 | Riken Wako | Fluoreszenzprotein und pigmentprotein |
DE10338531A1 (de) | 2003-08-19 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Reklonierung von Produktionszellen |
US8669109B2 (en) | 2003-08-19 | 2014-03-11 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Methods of producing proteins in Chinese hamster ovary (CHO) cells |
US9758790B2 (en) | 2004-12-08 | 2017-09-12 | Ceres, Inc. | Modulating the level of components within plants |
US20070199096A1 (en) | 2005-11-14 | 2007-08-23 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Compositions and Methods for Altering Alpha- and Beta-Tocotrienol Content |
US20080124760A1 (en) | 2006-07-26 | 2008-05-29 | Barbara Enenkel | Regulatory Nucleic Acid Elements |
EP2034025A1 (en) * | 2007-09-04 | 2009-03-11 | Freie Universität Berlin | Inflammation-induced anti-inflammatory gene expression |
DE102010018878B4 (de) | 2009-04-30 | 2013-09-26 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Neue Zell-Linie zur Fluoreszenz-basierten Detektion von funktionell aktiven Antikörpern und Autoantikörpern gegen den Beta1-adrenergen Rezeptor |
CN104497146B (zh) * | 2014-12-01 | 2018-03-06 | 广州古藤兰生物科技有限公司 | 一种融合蛋白及其载体的构建方法和应用 |
EP3379253A1 (en) | 2017-03-24 | 2018-09-26 | Biogemma | Method for determining the level of zygosity of a seed |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5491084A (en) * | 1993-09-10 | 1996-02-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Uses of green-fluorescent protein |
DE19718640B4 (de) * | 1997-05-02 | 2008-04-24 | Wiedenmann, Jörg, Dr. | Anwendung eines orange-fluoreszierenden Proteins und weiterer farbiger Proteine aus der Artengruppe Anemonia sp. (sulcata) Pennant, (Cnidaria, Anthozoa, Actinaria) in Gentechnologie und Molekularbiologie |
WO2000034326A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034322A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034321A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034319A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034324A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034323A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
WO2000034325A1 (en) * | 1998-12-11 | 2000-06-15 | Clontech Laboratories, Inc. | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof |
EP1444245A4 (en) * | 2001-11-13 | 2005-11-16 | Clontech Lab Inc | NEW CHROMOPHORE / FLUOROPHORE AND METHOD FOR THE APPLICATION |
-
1999
- 1999-12-10 WO PCT/US1999/029300 patent/WO2000034319A1/en active Application Filing
- 1999-12-10 WO PCT/US1999/029393 patent/WO2000034320A1/en active Application Filing
- 1999-12-10 JP JP2000586958A patent/JP4618891B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-12-10 EP EP99966135A patent/EP1135532B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 DE DE69943286T patent/DE69943286D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 AT AT99966135T patent/ATE502116T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-12-10 ES ES99966135T patent/ES2361971T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 WO PCT/US1999/029405 patent/WO2000034526A1/en active Application Filing
-
2010
- 2010-06-21 JP JP2010141050A patent/JP5963391B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2016
- 2016-04-22 JP JP2016085810A patent/JP2016165299A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2000034319A1 (en) | 2000-06-15 |
JP2002531146A (ja) | 2002-09-24 |
JP4618891B2 (ja) | 2011-01-26 |
EP1135532A4 (en) | 2004-11-03 |
JP2010268798A (ja) | 2010-12-02 |
WO2000034320A1 (en) | 2000-06-15 |
EP1135532A1 (en) | 2001-09-26 |
ATE502116T1 (de) | 2011-04-15 |
WO2000034526A1 (en) | 2000-06-15 |
DE69943286D1 (de) | 2011-04-28 |
JP2016165299A (ja) | 2016-09-15 |
ES2361971T3 (es) | 2011-06-24 |
EP1135532B1 (en) | 2011-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5963391B2 (ja) | Anthozoa綱の非生物発光性種由来の蛍光タンパク質、そのようなタンパク質をコードする遺伝子、およびそれらの使用 | |
WO2000034325A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
WO2000034326A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
AU783767B2 (en) | Anthozoa derived chromophores/fluorophores and methods for using the same | |
RU2303600C2 (ru) | Новые хромофоры/флуорофоры и способы их применения | |
WO2000034321A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
WO2000034323A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
WO2000034324A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
WO2000034322A1 (en) | Fluorescent proteins from non-bioluminescent species of class anthozoa, genes encoding such proteins and uses thereof | |
EP1334122B1 (en) | Nucleic acids encoding stichodactylidae chromoproteins | |
AU2002211722A1 (en) | Nucleic acids encoding stichodactylidae chromoproteins | |
JP2006508678A (ja) | 水性の生物種からの蛍光タンパク質 | |
JP2011092198A (ja) | 急速に成熟する蛍光タンパク質およびその使用法 | |
JP2010017186A (ja) | 連結された色素/蛍光性ドメインをコードする核酸ならびにその使用法 | |
JP2005514032A (ja) | 変異体発色団/蛍光団ならびにそれらの製造法および使用法 | |
AU2002361624A1 (en) | Novel chromophores/fluorophores and methods for using the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110603 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120604 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120831 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121004 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20130219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130517 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140516 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140526 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20140725 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141209 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20150220 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20151102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160422 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160628 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5963391 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |