JP5939976B2 - イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 - Google Patents
イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5939976B2 JP5939976B2 JP2012504068A JP2012504068A JP5939976B2 JP 5939976 B2 JP5939976 B2 JP 5939976B2 JP 2012504068 A JP2012504068 A JP 2012504068A JP 2012504068 A JP2012504068 A JP 2012504068A JP 5939976 B2 JP5939976 B2 JP 5939976B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dog
- liver
- copper
- seq
- atp7a
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 title claims description 569
- 239000010949 copper Substances 0.000 title claims description 540
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 title claims description 539
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 538
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 title claims description 278
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title description 59
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 45
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 title description 40
- 230000037213 diet Effects 0.000 title description 29
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 title description 27
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 307
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 192
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 claims description 141
- 102000012437 Copper-Transporting ATPases Human genes 0.000 claims description 132
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 81
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 68
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 68
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 68
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 67
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 33
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 33
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 33
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 claims description 27
- 101001039330 Homo sapiens Golgin subfamily A member 5 Proteins 0.000 claims description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 101150054444 Atp7a gene Proteins 0.000 claims description 17
- 102100041032 Golgin subfamily A member 5 Human genes 0.000 claims description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 17
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 claims description 16
- 101150081190 ubl5 gene Proteins 0.000 claims description 13
- 230000013011 mating Effects 0.000 claims description 12
- 238000004590 computer program Methods 0.000 claims description 10
- 229940091251 zinc supplement Drugs 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims description 2
- 108010022637 Copper-Transporting ATPases Proteins 0.000 description 128
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 98
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 48
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 33
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 33
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 32
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 32
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 20
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 230000008859 change Effects 0.000 description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 15
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 14
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 14
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 11
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 11
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 11
- 102100029698 Metallothionein-1A Human genes 0.000 description 10
- 101710196500 Metallothionein-1A Proteins 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 10
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 10
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 10
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 10
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 10
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 9
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 9
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 9
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 9
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 9
- 208000008948 Menkes Kinky Hair Syndrome Diseases 0.000 description 9
- 208000012583 Menkes disease Diseases 0.000 description 9
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 9
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 8
- WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L Zinc gluconate Chemical compound [Zn+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 8
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 235000011478 zinc gluconate Nutrition 0.000 description 8
- 239000011670 zinc gluconate Substances 0.000 description 8
- 229960000306 zinc gluconate Drugs 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 7
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 101000772767 Homo sapiens Ubiquitin-like protein 5 Proteins 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 5
- 101001073206 Arabidopsis thaliana Peroxidase 30 Proteins 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 5
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000020856 Copper Transport Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091004554 Copper Transport Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 4
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 4
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 4
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 4
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 4
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N copper-64 Chemical compound [64Cu] RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 230000028974 hepatocyte apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 238000000719 MTS assay Methods 0.000 description 2
- 231100000070 MTS assay Toxicity 0.000 description 2
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108700005079 Recessive Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000052708 Recessive Genes Human genes 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 2
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 102100030580 Ubiquitin-like protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003935 denaturing gradient gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 208000022602 disease susceptibility Diseases 0.000 description 2
- OAEGRYMCJYIXQT-UHFFFAOYSA-N dithiooxamide Chemical compound NC(=S)C(N)=S OAEGRYMCJYIXQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000705 flame atomic absorption spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 2
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 2
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 2
- 235000020665 omega-6 fatty acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940033080 omega-6 fatty acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000008234 soft water Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]butane-1,4-diol;(2r,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O.C1=C(O)C(OC)=CC(C[C@@H](CO)[C@H](CO)CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N 0.000 description 1
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 1
- YWARNRIBWGHMIS-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(4,5-dimethyl-1,3-thiazol-2-yl)-3-(4-sulfophenyl)-1h-tetrazol-5-yl]phenoxy]acetic acid Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC(=CC=2)S(O)(=O)=O)N=C(C=2C=C(OCC(O)=O)C=CC=2)N1 YWARNRIBWGHMIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033051 40S ribosomal protein S19 Human genes 0.000 description 1
- 102100023779 40S ribosomal protein S5 Human genes 0.000 description 1
- 102100035931 60S ribosomal protein L8 Human genes 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001125840 Coryphaenidae Species 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- VVNCNSJFMMFHPL-VKHMYHEASA-N D-penicillamine Chemical compound CC(C)(S)[C@@H](N)C(O)=O VVNCNSJFMMFHPL-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 description 1
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000733040 Homo sapiens 40S ribosomal protein S19 Proteins 0.000 description 1
- 101000622644 Homo sapiens 40S ribosomal protein S5 Proteins 0.000 description 1
- 101000853659 Homo sapiens 60S ribosomal protein L8 Proteins 0.000 description 1
- 101000804764 Homo sapiens Lymphotactin Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- MFESCIUQSIBMSM-UHFFFAOYSA-N I-BCP Chemical compound ClCCCBr MFESCIUQSIBMSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 102100035304 Lymphotactin Human genes 0.000 description 1
- 101150080728 MT1A gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 238000001190 Q-PCR Methods 0.000 description 1
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L Zinc carbonate Chemical compound [Zn+2].[O-]C([O-])=O FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- FBKZHCDISZZXDK-UHFFFAOYSA-N bathocuproine disulfonic acid Chemical compound C=12C=CC3=C(C=4C=CC(=CC=4)S(O)(=O)=O)C=C(C)N=C3C2=NC(C)=CC=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 FBKZHCDISZZXDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000011325 biochemical measurement Methods 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011111 cardboard Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000003467 cheek Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 1
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 1
- -1 chronic hepatitis Chemical compound 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000019784 crude fat Nutrition 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000023077 detection of light stimulus Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001317 epifluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000008524 evening primrose extract Nutrition 0.000 description 1
- 239000010475 evening primrose oil Substances 0.000 description 1
- 229940089020 evening primrose oil Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000004426 flaxseed Nutrition 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000009246 food effect Effects 0.000 description 1
- 235000021471 food effect Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000003230 hygroscopic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003947 neutron activation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001151 non-parametric statistical test Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000011087 paperboard Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 235000021404 traditional food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011667 zinc carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000004416 zinc carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000010 zinc carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
- 235000014692 zinc oxide Nutrition 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/34—Copper; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/30—Oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
- A23K50/42—Dry feed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
- A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/172—Haplotypes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
Description
・ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および/またはそれと連鎖不平衡にある1つまたは複数の多型、ならびにそれらと肝臓の銅蓄積からのイヌの保護との関連に関する情報を含むデータベースと、
・イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、
(a)イヌのゲノムにおける本明細書に定義されている多型の有無に関するデータをコンピュータシステムに入力することと、
(b)該データを、前記多型および前記多型と肝臓の銅蓄積からのイヌの保護またはそれに対するイヌの感受性との関連に関する情報を含むコンピュータデータベースと比較することと、
(c)比較に基づいて、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定することと
を含む方法と、
・コンピュータシステムにおいて実行される際に、コンピュータシステムに本発明の方法を実施するよう指示するプログラムコード手段を含むコンピュータプログラムと、
・本発明のコンピュータプログラムおよび本発明のデータベースを含むコンピュータ記憶媒体と、
・本発明の方法を実施するように構成されているコンピュータシステムであって、
(a)イヌのゲノムにおける本明細書に定義されている多型の有無に関するデータを受け取るための手段と、
(b)前記多型および/またはそれと連鎖不平衡にある1つまたは複数の多型、ならびにそれら多型と肝臓の銅蓄積からのイヌの保護またはそれに対するイヌの感受性との関連に関する情報を含むデータベースと、
(c)データをデータベースと比較するためのモジュールと、前記比較に基づいてイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定するための手段と
を含むコンピュータシステムと、
・イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、イヌのゲノムにおける、(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および(b)(a)と連鎖不平衡にある1つまたは複数の多型から選択される1つまたは複数の多型の有無を検出することを含む方法と、
・肝臓の銅蓄積からのイヌの保護を決定するための、本明細書に定義されている多型の使用と、
・肝臓の銅蓄積から保護される可能性のある子孫を作出するためのイヌを選択する方法であって、
・第一のイヌ候補のゲノムが、本発明に係る肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むか決定し、これによって第一のイヌ候補が、肝臓の銅蓄積から保護される可能性のある子孫の作出に適しているか決定することと、
・場合により、第一のイヌとは異なる性別の第二のイヌのゲノムが、本発明に係る肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むか決定することと、
・場合により、第一のイヌと第二のイヌとを交配して、肝臓の銅蓄積から保護される可能性のある子孫を作出することと
を含む方法
も提供する。
・ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防する方法であって、好ましくは、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が本発明の方法によって決定されており、イヌに本発明の食材を給餌することを含む方法と、
・ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌのための食材の製造における銅の使用であって、好ましくは、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が本発明の方法によって決定されており、食材が、4.5〜12mg/kg(乾物)の濃度の銅を含み、イヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患の予防に用いるためのものである、使用と、
・ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患の予防において同時に、別個にまたは連続的に用いるための、4.5〜12mg/kg(乾物)の濃度の銅と、少なくとも120mg/kg(乾物)の濃度を提供するための亜鉛サプリメントとを含む食材を含むパックであって、好ましくは、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が本発明の方法によって決定されている、パックと、
・本発明のラベルを付けた食材または本発明のラベルを付けたパックと
をさらに提供する。
配列番号1〜142は本発明のSNPを含むポリヌクレオチド配列を示す。
肝臓における銅の蓄積は、ラブラドールレトリーバー、ドーベルマン・ピンシェル、ジャーマンシェパード、キースハウンド、コッカースパニエル、ウェストハイランド・ホワイトテリア、ベッドリントンテリア、およびスカイテリアを含む多数のイヌの血統における肝疾患をもたらす。任意の血統の正常イヌの肝臓における平均銅濃度は、乾燥重量を基準にして200〜400mg/kgであるが、新生児のイヌは一般にそれより高い肝臓銅濃度を有する。イヌの肝臓における銅の量は、生検によって測定することができる。
驚くべきことに、本発明者らは、肝臓の銅蓄積に対して感受性を示すこととは対照的に肝臓の銅蓄積からの保護を示すATP7Aのタンパク質配列に影響を与える多型を発見した(実施例2〜5)。この多型は、ATP7A遺伝子のタンパク質配列のアミノ酸328をトレオニンからイソロイシンへと変化させる。in vitro実験により、突然変異がタンパク質に重大な機能的効果を有することが決定された(実施例5)。この実験は、タンパク質の変異型を発現する細胞における銅の蓄積速度がより速いことを明らかにした。蓄積は銅曝露中により多く、放出は銅曝露後により遅くなる。さらに、銅曝露に応答した細胞内のATP7A移動は、突然変異を有する細胞において変化する。突然変異を有する細胞において、銅輸送タンパク質の発現も増加する。ATP7Aの発現レベルは、2種類の型を有する細胞の間で変化しない。したがって、ATP7Aコード領域突然変異は、タンパク質の機能に重要な効果がある。
(i)多型(a);
(ii)1つまたは複数の多型(b);または
(iii)多型(a)および1つまたは複数の多型(b)
のそれぞれの位置でタイピングすることができる。
(iii)2個以上の多型(c)、
(iv)2個以上の多型(d)または
(v)1つまたは複数の多型(c)および1つまたは複数の多型(d)
のそれぞれの位置においてタイピングすることができる。
・配列番号1(BICF2P506595、SNP1)の位置61;
・配列番号2(BICF2P772765、SNP2)の位置61;
・配列番号3(BICF2S2333187、SNP3)の位置61;
・配列番号4(BICF2P1324008、SNP4)の位置61;
・配列番号5(BICF2P591872、SNP5)の位置61;または
・これらの位置のいずれか1つと連鎖不平衡にある任意の位置と同等の位置から選択されることが好ましい。好ましくは、該方法は、BICF2P506595のSNP(配列番号1)、BICF2P772765(配列番号2)、BICF2S2333187(配列番号3)、BICF2P1324008(配列番号4)、およびBICF2P591872(配列番号5)の有無を検出することを含む。
(iii)BICF2P506595のSNP(SNP1)に対するAA遺伝子型;
(iv)BICF2P772765のSNP(SNP2)に対するGG遺伝子型;
(v)BICF2S2333187のSNP(SNP3)に対するCC遺伝子型;
(vi)BICF2P1324008のSNP(SNP4)に対するGG遺伝子型;および/または
(vii)BICF2P591872のSNP(SNP5)に対するAAまたはAG遺伝子型;
の有無を検出することと、
それによりイヌのゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護および/またはそれに対する感受性を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定することとをさらに含むことができる。より好ましい方法は、遺伝子型(iiii);遺伝子型(iv)、(v)および(vi);または遺伝子型(vii)の有無を検出することを含む。さらにより好ましい方法は、すべての5つの遺伝子型(iii)から(vii)のすべての有無を検出することを含む。
(i)(a)表VIにおいて特定されたSNP(ATP7a_Reg3_F_6(SNP142))および(b)表Xにおいて特定されたSNP(ATP7a_Reg16_F_42(SNP143))などの前記SNP(a)と連鎖不平衡にある1つまたは複数のSNPから選択される1つまたは複数のSNP;ならびに
(ii)(a)表III、IVおよびVにおいて特定されたSNP、および(b)前記SNP(a)と連鎖不平衡にある1つまたは複数のSNPから選択される1つまたは複数のSNP
で、タイピングすることができる。
本発明による多型の検出は、イヌからの試料中のポリヌクレオチドまたはタンパク質と多型に対して特異的な結合剤とを接触させて、該結合剤がポリヌクレオチドまたはタンパク質に結合するどうかを決定することを含むことができ、この場合、結合剤の結合は多型の存在を示し、結合剤の結合の欠如は、多型の存在しないことを示す。
検出抗体は、1つの多型に対して特異的であるが、本明細書において記載した任意の他の多型には結合しない抗体である。検出抗体は、例えば、免疫沈殿技法を含む精製、単離またはスクリーニングの方法において有用である。
I.本発明の抗体を提供することと、
II.抗体抗原コンプレックスの形成が可能な条件下で、生物学的試料を前記抗体と共にインキュベートすることと、
III.前記抗体を含む抗体抗原コンプレックスが形成されているかどうかを決定することと
を含む。
本発明は、本明細書において定義した1つまたは複数の多型をタイピングするための手段を含むキットも提供する。特に、そのような手段は、本明細書において定義した多型を検出するかまたは検出に役立つことができる、本明細書において定義した特異的な結合剤、プローブ、プライマー、プライマーのペアまたは組合せ、または、抗体フラグメントを含む抗体を含むことができる。プライマーまたはペアまたはプライマーの組合せは、本明細書において論じた検出されるべき多型を含むポリヌクレオチド配列のPCR増幅のみを起こす配列特異的プライマーであることができる。プライマーまたはプライマーのペアは、多型のヌクレオチドに対して二者択一的に特異的ではなくてもよいが、上流(5’)および/または下流(3’)領域に対して特異的であり得る。これらのプライマーは、領域がコピーされるべき多型のヌクレオチドを包含することを可能にする。プライマー伸張技法で使用するのに適したキットは、標識されたジデオキシヌクレオチド三リン酸(ddNTP)を特異的に含むことができる。これらは、伸張生成物の検出およびそれに続く多型の位置に存在するヌクレオチドの決定を可能にするために、例えば蛍光標識または質量改変され得る。
多型の配列は、電子書式で、例えばコンピュータデータベースで貯蔵することができる。したがって、本発明は、ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および/またはそれらと連鎖不平衡にある1つもしくは複数の多型、ならびに肝臓の銅蓄積からのイヌの保護とのそれらの関連に関する情報を含むデータベースを提供する。データベースは、GOLGA5、ATP7AまたはUBL5各遺伝子における1もしくは複数の多型および/またはそれと連鎖不平衡にある1もしくは複数の多型、ならびにそれらと肝臓の銅蓄積に対するイヌの感受性との関連に関する情報を含むこともできる。データベースは、多型についての情報、例えば多型と、肝臓の銅蓄積からの保護またはそれに対する感受性との関連性をさらに含むことができる。
育種価は個体の親としての価値と定義され、農業において家畜の望ましい特色を改良するために普通に使用される。イヌの全体的銅処理能力を改良して慢性肝炎などの銅関連疾患の発生を減少させるためには、肝臓の銅蓄積から保護される血統についてイヌを選択するのが有利であろう。この問題は、血統を知らせるために、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されるかどうかを決定するために使用することができる多型を使用することにより解決される。
(a)被験対象のイヌおよび被験対象のイヌと性が反対の2頭以上のイヌの検査群中の各イヌについて、ゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型、および場合により肝臓の銅蓄積に対して感受性を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定することと、
(b)被験対象のイヌと交配させることについて検査群から1頭または複数のイヌを選択することと
を含む方法も提供する。
(a)被験対象のイヌの遺伝的血統の継承を、同じ血統のかつ被験対象のイヌと性が反対の2頭以上のイヌの検査群中の各イヌの遺伝的血統の継承と比較することと、
(b)この比較から、被験対象のイヌと検査群中の各イヌとの間の縁続きの程度を決定することと、
(c)被験対象のイヌと交配させることについて検査群から1頭または複数のイヌを選択することと、
を含むことができる。
本発明は、ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌのための食材に関する。本発明者らは、市販の食餌中に見出される銅のレベルがラブラドールレトリーバーにおける肝臓の銅蓄積と関連していること、および食餌中の銅のレベルを減少させることが、驚くべきことに、薬剤のペニシラミンより効果的に、肝臓の銅レベルが正常レベルにもたらされることを可能にすることを発見した。本発明の食材は、低い銅濃度、具体的には21mg/kg(乾物)未満の銅濃度を有する。食材は、ラブラドールレトリーバーの肝臓における銅の蓄積を予防するために使用される。したがって、それは、肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患または病態を予防するために有用である。したがって、本発明の食材は、イヌのゲノムが肝臓の銅蓄積に対する感受性を示す1つまたは複数の多型を含むと本発明の方法により決定されているイヌに与えることができる。本明細書において使用される「食材」という用語は、食材、食餌、食料品またはサプリメントを包含する。これらの形態のいずれも、固体、半固体または液体であってよい。
本発明の食材は、ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける肝臓の銅蓄積を予防するのに適する。イヌは、典型的には伴侶犬またはペットである。イヌは、純粋種のラブラドールレトリーバーであってよい。あるいは、イヌは、混血のもしくは交雑種のイヌ、または異系交配されたイヌ(雑種)であってもよい。イヌの両親の一方または両方が純粋種のラブラドールレトリーバー犬であってもよい。イヌの祖父母の1、2、3または4頭が純粋種のラブラドールレトリーバー犬であってもよい。イヌは、その遺伝的背景において少なくとも50%または少なくとも75%のラブラドールレトリーバーの血統を有することができる。したがって、イヌのゲノムの少なくとも50%または少なくとも75%は、ラブラドールレトリーバーの血統に由来してよい。
本発明の食材は、適当な成分を一緒にして混合することにより作製することができる。製造は、食材が要求される銅濃度を有するように制御される。銅の濃度は、食材製造工程中にモニターすることができる。したがって本発明は、本発明の食材を作製する方法であって、食材が21mg/kg(乾物)未満の銅濃度を有するように、食材用の成分を一緒にして混合することを含む方法を提供する。食材中に組み込まれるべき1種または複数種の構成要素は、銅の供給源を提供し得る。しかしながら、銅に富みそうな構成要素の使用を避けることは重要である。銅分が高くかつ食材の製造中に避けることができる食物成分には、貝、肝臓、腎臓、心臓、筋肉、ナッツ、キノコ、シリアル、ココア、莢果および軟水(銅管)が含まれる。場合により、構成要素の1種または複数種は本発明の食材のために亜鉛の供給源を提供するであろう。亜鉛に富みかつ調合時に含めることができる食物成分には、ミルク、ゼラチン、卵黄、米および馬鈴薯が含まれる。構成要素/成分は、食材の製造/加工中の任意の時に添加することができる。
本発明の食材は、イヌにおける肝臓の銅蓄積を予防する方法において使用することができる。したがって、銅関連慢性肝炎、肝硬変または肝不全などの高い肝臓銅と関連する疾患または病態を予防するために使用することができる。したがって、本発明は、ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける肝臓の銅蓄積および肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防する方法であって、イヌに本明細書に記載した食材を給餌することを含む方法を提供する。本発明は、ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける銅関連慢性肝炎を予防する方法であって、本発明の食材をイヌに与えることを含む方法も提供する。本発明の食材は、典型的には、ラブラドールレトリーバーにおける銅の蓄積の予防における、予防的使用のためのものである。それはまた、典型的には、ラブラドールレトリーバーにおける銅関連慢性肝炎を予防するためのものである。
120頭のラブラドールのDNA試料を、22000を超えるSNPにわたって遺伝子型決定した。高銅のイヌ(肝臓銅のレベルが600mg/kgを超える)から72頭のイヌの試料および正常銅肝臓レベル(400mg/kg未満)から48頭のイヌの試料があった。データは、可能なイヌの対すべての間の相互比較を使用して分析した。データは、疾患を支持する情報を与える遺伝子座により配列した。高銅レベルに連関する最良のフィッティングマーカーを見出すために、Booleanオペレータを使用して、最良の3つのゲノムの遺伝子座からのデータを使用した。3つの遺伝子座を使用する簡単なBooleanモデルの結果を下に示す:
ゲノムの遺伝子座CFA8(GOLGA5遺伝子)
1=BICF2P506595のSNPにAA遺伝子型がある場合
0=BICF2P506595のSNPの任意の他の遺伝子型がある場合
ゲノムの遺伝子座CFA32(UBL5遺伝子領域)
1=BICF2P772765にGG、BICF2S2333187にCCおよびBICF2P1324008にGGがある場合
0=これらのSNPのいずれかが異なった遺伝子型を示す場合
ゲノムの遺伝子座CFAX(ATP7A遺伝子領域)
1=BICF2P591872にAAまたはAGがある場合
0=BICF2P591872にGGがある場合
すべての遺伝子座において、X=使用されない対立遺伝子。
実施例1で同定された3つの遺伝子を調べて肝臓の銅蓄積に対する感受性と関連するさらなるSNPを同定した。3つの同定された遺伝子のエクソンを残らず網羅する33個の単位複製配列を選んだ。これらは、ラブラドールレトリーバーの血統のイヌからのゲノムのDNAの72個の試料中で増幅されていた。試料は、高銅(600mg/kgを超える肝臓銅のレベル)または正常銅肝臓レベル(400mg/kg未満)のいずれかのイヌから採取した。増幅された生成物は、サンガー法により両方向で配列を決定した。DNASTARにより供給されるソフトウェア「Seqman4.0」を各単位複製配列中の配列のアセンブルに使用した。次にアセンブリーを検査して一塩基変異(SNP)を見出した。次に、これらの変異は、両方向からの配列におけるSNPで、基準強度(base−intensity)を検査することにより遺伝子型を決定される。2つの方向からのSNPの遺伝子型が10個を超える試料中で不一致であれば、SNPはアーチファクトと分類されておよび無視される。同定された感受性SNPを表Vに提示する。
表VI中のATP7AのSNPは、該SNPが他の血統においても存在するかどうかを決定するために、ラブラドールレトリーバーに加えて他の血統のイヌからのDNA試料においても遺伝子型を決定された。表VIIIは、各遺伝子型のイヌの数について、結果を示す。「T」の縦欄はホモ接合体の雌(TT)およびヘミ接合体の雄(T)を示す。結果は、SNPは多様なイヌの血統に存在し、したがって種々の異なった血統、混血のイヌおよび雑種における銅蓄積からの保護の指標として使用することができることを示す。該SNPのT対立遺伝子は、米国および日本のラブラドール集団にも見出され、イヌの地理的位置はSNPの効用の障害ではないことを示す。
ATP7A遺伝子の配列決定により、コード領域のATP7a_Reg3_F_6のSNPとほとんど完全な連鎖不平衡にあるイントロンのSNPが明らかになった。コード領域のSNPと同様に、イントロンのSNP(ATP7a_Reg16_F42)は、肝臓の銅蓄積からの保護と有意に関連する(表IX)。遺伝子型と疾患状態の独立性における2種類の自由度によるカイ2乗検定を用いて両者の有意性を測定した。疾患状態は、銅定量化が>600mg/kg(乾燥肝臓重量)かつ組織学スコアが>=2.5に対して陽性であり、銅定量化が<400mg/kg(乾燥肝臓重量)かつ組織学スコアが<2.5に対して陰性であった。予想の表は、2個の変数の独立性を予見する試料内における遺伝子型頻度および疾患頻度のベイズ法による予測に基づいていた。
材料と方法
細胞系
安楽死させた雌のラブラドールから、イヌ皮膚線維芽細胞CDFIB44、CDFIB62およびCDFIB111を単離した。安楽死させる前に採取した血液試料を本発明の遺伝子検査に付し、疾患に対する危険性の増加を確認した。CDFIB111はATP7AのSNPがホモ接合型であり、CDFIB62はヘテロ接合型であった。CDFIB42は対照として用いた。これらの細胞は、ATP7Aの野生型、ヘテロ接合型または変異型を発現するイヌ皮膚線維芽細胞に対応して、ATP7AC/C、ATP7AC/TまたはATP7AT/Tと言う。臨床的メンケス病患者(ATAC)からヒト皮膚線維芽細胞HB156を得た。対照として、H8881細胞を用いた。現在のところATP7Aは、これらの細胞では配列決定されていない。ATP7A配列に関する情報は、これらの細胞に関しては利用できない。
免疫蛍光法のため、カバーガラス上で培養した顕微鏡観察用の細胞を、200mMバソクプロインジスルホン酸(BCS;Sigma)を含む低血清培地中で24時間インキュベートした。細胞を新しく調製した4%パラホルムアルデヒド/PBSで20分間固定し、洗浄し、0.2%Triton−X100/PBSで透過処理した。非特異的シグナルを0.2%Triton−X100を含む3%BSA/PBSで1時間ブロッキングし、続いてニワトリ抗ATP7A(1:50;ab13995(Abcam)、アミノ酸1407〜1500に対して作製)+マウス抗58k(1:50;Abcam)を含む同ブロッキング培地中で2時間インキュベーションした。Texas red結合ヤギ抗ニワトリ(1:100)およびFITC結合ロバ抗マウス(1:100)抗体(Abcam)を用いて一次抗体を検出した(1時間)。その後、Texas red結合ウサギ抗ヤギ抗体(1:1000;Abcam)を用いて、ヤギ抗ニワトリ二次抗体由来のシグナルを増幅した(1時間)。最後に、カバーガラスでProlong Anti−fade gold(Sigma)中にマウントし、落射蛍光によって観察した。
約170MBq.mg.−1の誘導放射能を与えるリアクタ内で一晩放射線照射された金属銅線(3.3mg)を用いて、64銅アイソトープを作製した。到着したら、照射の約4時間後かつ実験開始30分前に、50μlの濃HNO3(10.3M)に銅線を溶解し、1.3mlの0.5M NaOHで中和した。銅が最終濃度4.7mMになるようDMEM培地を添加した。6ウェルプレート中の添加剤入り5%FBS添加DMEM培地に、線維芽細胞を2回複製して蒔いた。
Qiagen RNeasy Tissue Kit(Qiagen)を用いてメーカーの取扱説明書に従って浄化する前に、フェノールクロロホルム抽出法を用いて組織の線維芽細胞から全RNAを3回繰り返して単離した。すなわち、約75mgの組織を単離し、1mlのTri Reagentおよび5mmのQiagen製スチールボールベアリングに加えた。TissueLyser(Qiagen)により、20 30Hz、2分間を3回行って組織をホモジナイズした。100μlの1ブロモ3クロロプロパンを添加し、短時間ボルテックス攪拌し、室温で5分間静置し、その後卓上遠心分離機によって15分間4℃で遠心分離した。透明な水相を取り分け、0.5mlのイソプロパノールに加えて静置し、10分間、4℃で再度スピンした。70%エタノール中でペレットを洗浄し、室温で風乾し、300μlの水に再懸濁した。gDNA除去カラムを用いてRNAの純度をさらに上げ、Qiagen RNeasy plusキットを用いて精製した。Qiagen RNeasy plusキットを用いて細胞から全RNAを単離した。
Speeらによって記載されている通りにQ−PCRを行った(J Vet Intern Med 2006:20:1085〜1092)。リアルタイムPCRは、高親和性の二本鎖DNA結合染色試薬であるSYBR green Iに基づき、分光蛍光分析サーマルサイクラーにおいて3回繰り返して行った。PCR反応毎に、384ウェルプレートにおいて、1×Power SYBR(登録商標)Green PCR Master Mixおよび40pmolの両方のプライマーを含む20μlの反応容量において、8.7μlの(希釈ストックの)cDNAを用いた。表XIに図示されているプライマー対(ATP7Aのプライマー対を除く)は、Speeらを参照した。全PCRプロトコールは、5分間のポリメラーゼ活性化ステップと、それに続く40サイクルの(変性)95℃20秒間、アニーリング30秒間および伸長72℃30秒間、ならびに最後の伸長5分間72℃を含んでいた。アニーリング温度は50℃から67℃までの範囲であった(表XI)。解離曲線、Bioanalyser(Agilent2100)および配列決定(MWG)を用いて、各試料の純度および特異性を試験した。cDNAの段階的10倍希釈を行い、相対的な出発量対閾値サイクル数のプロットによって構築された効率曲線を作成した。各検量線の増幅効率E(%)=(10(1/s)1)・100(s=勾配)を決定し、これは広ダイナミックレンジで>95%かつ<105%であると考えられる。各実験試料は、適切な誤差伝搬により、内在性参照であるヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HPRT)、RPL8、RPS5およびRPS19に対して正規化した。
ラバーポリスマンを用いて細胞をこすり取り、細胞をPBSで3回洗浄し、200μlの新しく調製した煮沸用溶解バッファー(1%SDSを含むトリス緩衝食塩水(TBS))に溶解した。25ゲージの注射針に数回通過させることにより試料をホモジナイズし、続いて70℃で5分間加熱し、その後解析されるまで−20℃で保存した。細胞ライセートを解凍し、ローディングバッファー(50mM Tris.HCl、pH6.8、2%SDS、0.1%ブロモフェノールブルー、10%グリセロール、40mM DTT)中で5分間煮沸し、予め組み立てられたSDS−PAGEにロードした。メンブレンを5%ミルク/PBS−Tで1〜2時間ブロッキングし、その後1時間RTで一次抗体とインキュベーションした。メンブレンをブロッキングバッファーで10分間、3回洗浄し、その後ブロッキングバッファーで1:10,000希釈したウサギ抗ニワトリIg抗体HRPと1時間室温でインキュベーションした。メンブレンをブロッキングバッファーで10分間3回洗浄し、続いてPBS−Tで1回洗浄した。メンブレンをPBSで短時間洗浄して洗剤を除去し、ECLウエスタンブロッティング検出試薬システムを用いてメーカーの取扱説明書に従って現像した。その後メンブレンをSuperRX Fuji X線フィルム(東京、日本)に露光し、Kodak自動プロセッサ(イーストマン・コダック社、日本)において現像した。
リプローブの前に、結合した抗体をメンブレンからストリップした。さらに別のウエスタンブロッティングを行う前に、メンブレンをストリッピングバッファー(100mM 2−メルカプトエタノール、2%SDS、62.5mM Tris−HCl、pH6.7)中で、55℃で30分間インキュベートし、次にPBSで十分に洗浄した。
解析前にqPCRデータをlog10変換し、分散の均一性を確実にした(パラメトリック解析の仮説)。次にlog10(発現)値をANOVAにより解析し、発現値の標準誤差に対して加重した。ATP7AC/C遺伝子型に対してペアワイズ比較を行い、95%信頼区間で倍数変化を算出した。
イヌ皮膚の変異型線維芽細胞は、野生型またはヘテロ接合型細胞と比べてより多くの銅64を取り込み、より遅い速度で流出させる
以後、野生型、ヘテロ接合型および変異型細胞は、それぞれATP7AC/C、ATP7AC/TまたはATP7AT/Tとする。線維芽細胞を超生理学的濃度のアイソトープ銅64(Cu64)(100μM)とインキュベーションすると、ATP7AC/C細胞と比べてATP7AT/T細胞およびATP7AC/T細胞において、24時間および48時間後に約2倍の銅取込み増加が示される(図7A)。より低濃度(50μM)では、ATP7AT/T細胞は、他の遺伝子型細胞と比べてより多量の銅を取り込んだ。生理学的濃度におけるインキュベーションは、取込みの細胞型間の差異を示さない。ATP7AT/T細胞におけるCu64レベルの増加が流出抑制によるものであったかを決定するために、次に本出願人らは、洗い流し法によって細胞からの流出レベルを測定した(図7B)。多量のCu64(100μM)を添加して2時間洗い流した後、ATP7AC/C細胞はアイソトープの約45%を保持し、一方ATP7AT/T細胞は90%近くを保持した。ATP7AT/T細胞と同様の量の銅を取り込んだATP7AC/T細胞は、ATP7AC/C細胞と同様の流出速度を示した。より多量の銅取込みに伴い、高い銅負荷下のATP7AT/T細胞において細胞生存率が低くなることが判明した(データなし)。
流出低下がATP7Aの発現レベルに起因するものであるか証明するため、本出願人らは、qPCRによりATP7A転写レベルを解析した。イヌではATP7Aのイソ型が説明されていなかったため、3種のプライマーセットを次の通り設計した。スプライスバリアントを明らかにできるよう、ATP7Aiは突然変異と重複する領域を増幅し、ATP7AiiiおよびATP7Aiiは転写産物の3’および5’末端における領域を増幅するよう設計した。基本条件下または銅とのインキュベーションにおいて、遺伝子型の間でATP7A発現レベルの変化は見られなかった(図8A)。しかし、ATP7Aのタンパク質レベルを測定すると、ATP7Aの発現はイヌ細胞系全3種類において銅依存的であり、ATP7AT/T細胞における発現が最も高く(図8B)、これは測定された時点では銅キレート剤BCSの添加により回復できなかったことが判明した。興味深いことに、基本条件下では、ATP7AC/C細胞と比べてATP7AT/T細胞においてより高レベルのATP7A発現が見られた。メンブレン上に多くのバンドが示されたが、これらは異なるイソ型に相当すると思われる。しかし、これらのバンドは変化せず、単純ではなかった。ATP7A特異的バンドを同定するために、siRNAおよび過剰発現コンストラクトを用いたさらなる実験が行われるであろう。
ATP7AT/T細胞におけるより高レベルの銅の取込みによってより高レベルの銅応答遺伝子発現がもたらされるか決定するため、本出願人らは、ATP7AC/C、ATP7AC/TおよびATP7AT/T各細胞におけるメタロチオネイン1A(MT1A)発現のqPCR解析を行った(図9)。無処理細胞におけるMT1Aの発現解析は、ATP7AC/TとATP7AT/T細胞の両方が、ATP7AC/C細胞と比べてMT1Aを有意により高レベルに発現することを示す(図9A)。ATP7AC/TおよびATP7AT/Tは、1〜100μMの銅に応答して有意に制御されないMT1A発現を行い、一方、ATP7AC/Cは、10μMを超える銅の添加で有意となった(図9B)。さらに、遺伝子型内における銅に応答したMT1A発現の上方制御の比較は、1μMの銅に応答させたATP7AT/Tを除く遺伝子型の間で比較した場合、有意ではなかった。ATP7AC/C UT対Cu1対ATP7AT/T UT対Cu1;(p=0.014)。したがって、ATP7AT/T細胞は銅に対してより感受性である(図9C)。
ATP7AT/T線維芽細胞における銅保持の増加および対応する銅依存的MT1A発現の増加から、本出願人らは、対応するメンケス病の表現型が腸および肝臓生検において観察されるか調査した。したがって、そこから線維芽細胞が外移植された3個体から生検された肝臓および小腸組織の凍結試料においてMT1A発現のqPCR解析を行った(図10)。MT1Aの発現は、ATP7AC/Cと比べてATP7AT/T肝臓組織において有意により低く、小腸組織において有意により高い。
ATP7AT/T細胞における銅の増加がATP7A輸送の低下によるものであったか決定するため、本出願人らは、免疫細胞化学を用いて異なる細胞型におけるATP7Aを銅に応答させて局在化した。本出願人らは、BCSを用いて細胞外の銅をキレート化し、TGNにおけるATP7Aを「分類」した(上パネル)。予想された通り、ATP7AC/CとATP7AT/T細胞の両方において、ATP7Aは主としてTGNにあることが判明した(抗58Kによって示されている、中央パネル)。洗い流しを行い、続いて100μMの銅と1〜3時間インキュベーションした後、ATP7AC/C細胞におけるATP7Aは、銅を細胞から排出するためにTGNから細胞周縁へと移動した。ATP7Aは銅曝露後に主としてTGNに見られたため、ATP7AT/T細胞はATP7Aの移動の顕著な抑制を示した。パネルに示されている細胞密度は、成長速度を示すものではない。両方の細胞型は、同様の形態と密度で成長することが判明した。
本研究により、銅の蓄積率はタンパク質の変異型を発現する細胞においてより大きく、蓄積は銅曝露中により多く、放出は銅曝露後により遅いことが示された。さらに、銅曝露に応答した細胞内のATP7A移動は、突然変異を有する細胞で変化する。突然変異を有する細胞において、銅輸送タンパク質の発現も増加する。ATP7Aの発現レベルは、2種類の型を有する細胞の間で変化しない。
試験の目的は、食事管理がペニシラミンによる治療後のラブラドールにおいて肝銅濃度に影響するのに有効であるかどうか、および亜鉛による追加の治療が役に立つかどうかを調べることであった。
ラブラドールレトリーバー
試験集団は、以前にCACHと記述されたイヌの家族構成員であった24頭の純粋種のラブラドールレトリーバーからなる。すべてのイヌは、オランダのラブラドールレトリーバーの血統クラブで登録された。
11頭のイヌで、何らかの治療に先立って、肝銅濃度の測定を、平均8.7カ月(範囲6〜15カ月)をおいて繰り返した。この期間中、すべての動物は、食物由来の12〜25mg/kg(乾物)の間の銅濃度および80〜270mg/kg(乾物)の間の亜鉛濃度を含有する、それらの通常の維持食餌を製造業者により給餌された。
すべてのイヌの飼い主は、同じ特製の食餌を提供された。給餌された食餌の近似分析:水分57.9%、粗タンパク質6.1%、粗脂肪5.9%、ミネラル1.7%。給餌された代謝性エネルギー(Association of American Feed Control Officialsのプロトコルに従って測定した):1650kcal/kg)。食餌は、銅を4.75mg/kg(乾物)の濃度で、および亜鉛を102mg/kg(乾物)の濃度で含有した。イヌは、さらなる栄養補助食品およびご馳走はなしに食餌を給餌された。この試験のラブラドールは、420g食餌/日と840g食餌/日との間を与えられた。
2頭の縁続きでない9歳の健康なラブラドールレトリーバー(1頭は雌および1頭は雄)を薬物動態試験で使用した。食物は、亜鉛の経口投与前の12時間の間、および検査期間初期の6時間の間許さなかった。水は自由に利用できた。経口グルコン酸亜鉛は、第1のイヌには10mg/kgの用量で、および第2のイヌには5mg/kgの用量で投与した。ヘパリン化血液試料(4ml)を頚静脈から服用前(0時間)および薬剤適用後15、30、45、60、90、120分、および4、8、12および24時間に捕集した。血漿は、原子吸収分光法を使用する亜鉛の分析まで−20℃で貯蔵した。
グルコン酸亜鉛の選択は、該薬剤が、酢酸塩または硫酸塩のような他の塩より副作用が少ないという臨床的観察に基づいてなされた。錠剤が、ユトレヒト大学獣医学部の獣医学薬剤部により提供された。亜鉛錠剤は25mgの元素亜鉛をグルコン酸亜鉛塩として(Toppharm Zink 25 gluconaat、Parmalux BV、Uitgeest、NL)含有した。プラセボ錠剤は、160mgのラクトース(Albochin、Pharmachemie BV、Haarlem、NL)を含有した。両群の錠剤の外見は同一であった。
薬物動態学的パラメーター(WinNonlin 4.0.1.(Pharsight Corporation、800 West El Camino Real、Mountain View、CA、USA)および統計分析(windows用のSPSS11.0、2001、SPSS Inc.、Chicago、IL、USA)は市販のソフトウェアパッケージの使用により計算した。小さい群サイズのため、ノンパラメトリック統計検定を群間の比較のために使用した。食餌およびグルコン酸亜鉛(第1群)を用いる治療の前および後の2回の対照検査時(1度目の再チェックおよび2度目の再チェック)、ならびに食餌およびプラセボ(第2群)を用いる治療後の両検査時の肝銅濃度の間の差を検出するために、Mann−Whitney検定を使用した。それに加えて該検定を、試験前、1度目の再チェック時、および2度目の再チェック時における第1群と第2群との間の差を検出するために使用した(有意性レベルp≦0.05)。
無治療における肝臓の銅蓄積の進行
11頭のラブラドール犬で、何らかの治療が与えられる前、イヌがそれらの通常の維持食餌を与えられていた間に、肝銅濃度の測定を繰り返した。1頭を除くすべてのイヌで、肝銅濃度は、8.7カ月の間隔の期間中に、両方の測定の間で、平均1000mg/kg(乾燥重量)(範囲290〜2370)から平均1626mg/kg(乾燥重量)(範囲630〜3610)にまで上昇した。患者犬の体重(平均:33.9kg、範囲25〜39.5kg)に関して、これは、8.7カ月の間に体重1kg当たり銅18mgの上昇であった。結果を図1に示す。
2頭のイヌで10mg/kg(イヌ1)および5mg/kg(イヌ2)の元素亜鉛の経口適用後に測定された血漿亜鉛濃度から計算された薬物動態学的パラメーターは:
食餌試行の開始時に、20頭のイヌの肝銅濃度は、400mg/kg(乾燥重量)という基準範囲を超えていた(平均:894、範囲:70〜2810)。銅の半定量的評価の結果は、0〜4.5の範囲であった。17頭のイヌの肝生検材料の組織学的検査は上昇した肝銅含有率を示し(2を超えた)、それは小葉中心の肝細胞に局在化した。銅に対する染色は5頭のイヌで正常であり、高い正常染色結果が、定量的分析から上昇した肝銅を有する2頭のイヌの生検材料から得られた。7頭のイヌに慢性肝炎が存在した。CHは、肝細胞のアポトーシスおよび壊死、単核性炎症、再生および線維症の変化する程度により特徴づけた。肝炎症の活性は炎症の程度ならびに肝細胞アポトーシスおよび壊死の程度により決定した。疾患のステージは線維症の程度およびパターンならびに肝硬変の存在により決定した。肝炎は4頭の患者犬で軽症、2頭のイヌで中程度であり、1頭のイヌにおいては肝硬変が診断された。13頭のイヌにおいて、肝臓に存在する炎症の組織学的な徴候はなく、4頭のイヌの生検材料で病理組織検査は反応性変化を示した。
胆汁酸の濃度は、平均14μmol/l(範囲:3〜101)から、1度目の再チェックで平均7.8μmol/l(範囲:1〜39)に、および2度目の再チェックで7.1μmol/l(範囲:0〜21)に低下した。アルカリホスファターゼ(ALP)、およびアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)の平均濃度は、すべての検査で正常範囲内にとどまった。治療前の平均ALP濃度は、41U/l(範囲:8〜111)であり、1度目の再チェックで平均ALP=37U/l(範囲12〜143)、2度目の再チェックで平均ALP=37U/l(範囲:19〜152)であった。治療前の平均ALT濃度は28U/l(範囲:10〜234)であり、1度目の再チェックで平均ALT=47U/l(範囲:11〜78)、2度目の再チェックで平均ALT=51U/l(26〜68)であった。
肝銅の定量的測定は両群において治療中に改善された。1度目の再チェック、および2度目の再チェックで、肝銅濃度は、両群のイヌにおいて開始時点に比較して有意に低下していた(第1群の1度目の再チェック:平均286mg/kg、範囲84〜700、p<0.001;第1群の2度目の再チェック:平均421mg/kg、範囲220〜790、p=0.03、第2群の1度目の再チェック:平均277mg/kg、範囲80〜450、p=0.001、第2群の2度目の再チェック:平均401mg/kg、範囲118〜850、p=0.04)。1度目の再チェックで両群における肝銅濃度に差はなく(p=0.52)、2度目の再チェックでも群間の差はなかった(p=0.79)。それに加えて、1度目の再チェックと2度目の再チェックとの間で肝銅濃度のさらなる低下はなかった(第1群p=0.44、第2群p=0.25)。結果は図2に示す。
銅についての組織染色は治療で改善された。銅の半定量的評価の組織検査スコアは、第1群および第2群において1度目の再チェックおよび2度目の再チェックで開始時点に比較して減少した(第1群 1度目の再チェックで:p=0.031、第1群 2度目の再チェックで:p=0.01、第2群 1度目の再チェックで:p=0.01、第2群 2度目の再チェックで:p=0.001)。どの時点においても両群間に差はなかった(p=0.16〜0.75)。
CACHを有する患者犬に肝銅濃度のよりバランスのとれた長期の制御を提供するために、この試験の目的は、食事管理がペニシラミンを用いる治療後のラブラドールにおける肝銅濃度に影響するのに有効かどうか、および亜鉛を用いる追加治療が有用かどうかを調べることであった。この試験の結果は、食事管理は肝銅濃度を低下させるのに有効であり得ることを示す。亜鉛を用いる補助的治療は脱銅効果を増幅しなかった。
本発明は、以下の態様を包含する。
[1]
イヌを検査してイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、試料中のイヌのゲノムにおける、(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および(b)(a)と連鎖不平衡にある1つまたは複数の多型から選択される1つまたは複数の多型の有無を検出することを含む方法。
[2]
(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)または(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNP(配列番号143)の有無を検出することを含む、上記[1]に記載の方法。
[3]
イヌが生後1年以内である、上記[1]または[2]に記載の方法。
[4]
イヌがラブラドールレトリーバー、ゴールデンレトリーバーまたはトイプードルの血統を遺伝的に継承している、上記[1]から[3]のいずれか一項に記載の方法。
[5]
イヌがラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承している、上記[4]に記載の方法。
[6]
イヌのゲノムにおける(c)肝臓の銅蓄積に対して感受性を示すGOLGA5、ATP7AまたはUBL5遺伝子における多型および/または(d)前記多型(c)と連鎖不平衡にある多型の有無を検出することをさらに含む、上記[1]から[5]のいずれか一項に記載の方法。
[7]
BICF2P506595(配列番号1)、BICF2P772765(配列番号2)、BICF2S2333187(配列番号3)、BICF2P1324008(配列番号4)、BICF2P591872(配列番号5)、ATP7a_Reg4_F_9(配列番号131)、UBL5_Reg1F_16(配列番号132)、golga5_Reg1_24(配列番号133)、golga5_26(配列番号134)、golga5_27(配列番号135)、golga5_28(配列番号136)、golga5_29(配列番号137)、golga5_30(配列番号138)、golga5_31(配列番号139)、atp7areg17_32(配列番号140)、atp7areg17_33(配列番号141)およびそれらと連鎖不平衡にある1つまたは複数のSNPから選択される1つまたは複数のSNPの有無を検出することを含む、上記[6]に記載の方法。
[8]
BICF2P506595(配列番号1)、BICF2P772765(配列番号2)、BICF2S2333187(配列番号3)、BICF2P1324008(配列番号4)、およびBICF2P591872(配列番号5)のSNPの有無を検出することを含む、上記[7]に記載の方法。
[9]
多型(a)または(c)と連鎖不平衡にある多型が、多型(a)または(c)の680kb以内にあり多型(a)または(c)と同一の染色体上に存在し、多型対間の連鎖不平衡の計算された尺度D’が0.9を超えるまたはそれに等しい、上記[1]から[8]のいずれか一項に記載の方法。
[10]
ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および/またはそれらと連鎖不平衡にある1つもしくは複数の多型、ならびに肝臓の銅蓄積からのイヌの保護とのそれらの関連に関する情報を含むデータベース。
[11]
イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、
(a)コンピュータシステムに、上記[1または2および場合により上記[6]から[8]までのいずれか一項に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータを入力するとと、
(b)前記データを、前記多型、および肝臓の銅蓄積からのイヌの保護またはそれに対するイヌの感受性とのそれらの関連に関する情報を含むコンピュータデータベースと比較することと、
(c)前記比較に基づいてイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定することと
を含む方法。
[12]
コンピュータシステムにおいて実行される場合、コンピュータシステムに上記[11]に記載のすべてのステップを実施するように指示するプログラムコード手段を含むコンピュータプログラム。
[13]
上記[12に記載のコンピュータプログラムおよび上記[10]に記載のデータベースを含むコンピュータ記憶媒体。
[14]
上記[11]に記載の方法を実施するように構成されているコンピュータシステムであって、
(a)上記[1]または[2]および場合により上記[6]から[8]までのいずれか一項に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータを受け取る手段と、
(b)前記多型、および肝臓の銅蓄積からのイヌの保護またはそれに対するイヌの感受性とのそれらの関連に関する情報を含むデータベースと、
(c)前記データを前記データベースと比較するためのモジュールと、
(d)前記比較に基づいてイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定するための手段と
を含むコンピュータシステム。
[15]
イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、イヌのゲノムにおける、(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142)および(b)(a)と連鎖不平衡にある1つまたは複数の多型から選択される1つまたは複数の多型の有無を検出することを含む方法。
[16]
イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定するための、上記[1]または[2]および場合により上記[6]から[8]のいずれか一項に記載の多型の使用。
[17]
肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出することについてイヌを選択する方法であって、
・上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に記載の方法に従って、候補の第1のイヌのゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定し、それにより候補の第1のイヌが肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出するのに適するかどうかを決定することと、
・場合により、上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に従って、第1のイヌと反対の性の第2のイヌのゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定することと、
・場合により、第1のイヌと第2のイヌとを交配して、肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出することと
を含む方法。
[18]
イヌがラブラドールレトリーバー、ゴールデンレトリーバーまたはトイプードルの血統を遺伝的に継承している、上記[17]に記載の方法。
[19]
イヌがラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承している、上記[18]に記載の方法。
[20]
ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防する方法に用いるための、4.5〜12mg/kg(乾物)の濃度の銅を含む食材であって、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に記載の方法によって決定されている、食材。
[21]
亜鉛を少なくとも120mg/kg(乾物)の濃度でさらに含む、上記[20]に記載の食材。
[22]
4.5〜10mg/kgまたは4.5〜8mgの濃度の銅を含み、および/または120〜250mg/kgまたは150〜250mg/kg(乾物)の濃度の亜鉛を含む、上記[20]または[21]に記載の食材。
[23]
(i)少なくとも一方の親が純血種のラブラドールレトリーバーであり、
(ii)肝臓の銅蓄積と関連する臨床症状がなく、
(iii)400mg/kg(乾燥肝臓重量)未満の肝銅濃度を有し、および/または
(iv)検出可能な肝疾患にかかっていない
イヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防する方法に用いるための、上記[20]から[22]のいずれか一項に記載の食材。
[24]
銅関連慢性肝炎を予防する方法において使用するための、上記[20]から[23]までのいずれか一項に記載の食材。
[25]
ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防する方法であって、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に記載の方法によって決定されており、イヌに上記[20]から[24]のいずれか一項に記載の食材を給餌することを含む方法。
[26]
亜鉛を少なくとも120mg/kgの濃度で含む食材またはサプリメントをイヌに給餌することをさらに含む、上記[25]に記載の方法。
[27]
400mg/kg(乾燥肝臓重量)未満の肝臓銅濃度を有し、かつ/または検出可能な肝疾患を有しないイヌにおいて肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防するための、上記[25]または[26]に記載の方法。
[28]
ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌ用の食材の製造における銅の使用であって、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に記載の方法により決定されており、前記食材が、銅を4.5〜12mg/kg(乾物)の濃度で含み、前記イヌにおいて肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患の予防に使用するためのものである使用。
[29]
ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患の予防に同時に、別々にまたは順次に使用するための、銅を4.5〜12mg/kg(乾物)未満の濃度で有する食材と少なくとも120mg/kg(乾物)の濃度を提供するための亜鉛サプリメントとを含むパックであって、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、上記[1]から[8]、[11]および[15]のいずれか一項に記載の方法により決定されているパック。
[30]
上記[20]から[24]までのいずれか一項に記載のラベルを付けた食材または上記[29]に記載のラベルを付けたパック。
20 イヌの遺伝的データを受け取る手段
30 データを多型に関する情報を含むデータベース10と比較するためのモジュール
40 比較に基づいて、イヌのゲノムが肝臓の銅蓄積に対するイヌの感受性またはそれからの保護を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定するための手段
Claims (27)
- イヌを検査してイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、試料中のイヌのゲノムにおける多型として、
(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142の位置102)および(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNP(配列番号143の位置68)の有無を検出することを含み、
前記(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNPが対立遺伝子Tであること、および/または前記(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNPが対立遺伝子Tであることが、前記イヌが肝臓の銅蓄積から保護されていることを示す、方法。 - イヌが生後1年以内である、請求項1に記載の方法。
- イヌがラブラドールレトリーバー、ゴールデンレトリーバーまたはトイプードルの血統を遺伝的に継承している、請求項1または2のいずれか一項に記載の方法。
- イヌがラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承している、請求項3に記載の方法。
- イヌのゲノムにおける、
(c)肝臓の銅蓄積に対して感受性を示すGOLGA5、ATP7AまたはUBL5遺伝子における多型の有無を検出することをさらに含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。 - BICF2P506595(配列番号1)、BICF2P772765(配列番号2)、BICF2S2333187(配列番号3)、BICF2P1324008(配列番号4)、BICF2P591872(配列番号5)、ATP7a_Reg4_F_9(配列番号131)、UBL5_Reg1F_16(配列番号132)、golga5_Reg1_24(配列番号133)、golga5_26(配列番号134)、golga5_27(配列番号135)、golga5_28(配列番号136)、golga5_29(配列番号137)、golga5_30(配列番号138)、golga5_31(配列番号139)、atp7areg17_32(配列番号140)およびatp7areg17_33(配列番号141)から選択される1つまたは複数のSNPの有無を検出することを含む、請求項5に記載の方法。
- BICF2P506595(配列番号1)、BICF2P772765(配列番号2)、BICF2S2333187(配列番号3)、BICF2P1324008(配列番号4)、およびBICF2P591872(配列番号5)のSNPの有無を検出することを含む、請求項6に記載の方法。
- イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、
(a)コンピュータシステムに、請求項1に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータを入力することと、
(b)前記データを、前記多型、ならびに、前記多型と肝臓の銅蓄積からのイヌの保護または肝臓の銅蓄積に対するイヌの感受性との関連に関する遺伝子型決定分析の情報を含むコンピュータデータベースと比較することと、
(c)前記比較に基づいてイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定することと
を含む方法。 - ステップ(a)が、請求項5から7のいずれか一項に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータをコンピュータシステムに入力することをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- コンピュータシステムにおいて実行される場合、コンピュータシステムに請求項8または9に記載のすべてのステップを実施するように指示するプログラムコード手段を含むコンピュータプログラム。
- 請求項10に記載のコンピュータプログラムと、
以下、
− (a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142の位置102)および(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNP(配列番号143の位置68)、ならびに
− 前記選択された1つまたは複数の多型と肝臓の銅蓄積からのイヌの保護との関連
に関する情報を含むデータベースと、
を含むコンピュータ記憶媒体。 - 請求項8または9に記載の方法を実施するように構成されているコンピュータシステムであって、
(a)請求項1に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータを受け取る手段と、
(b)前記多型、ならびに、前記多型と肝臓の銅蓄積からのイヌの保護または肝臓の銅蓄積に対するイヌの感受性との関連に関する情報を含むデータベースと、
(c)前記データを前記データベースと比較するためのモジュールと、
(d)前記比較に基づいてイヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定するための手段と
を含むコンピュータシステム。 - 手段(a)として、請求項1に記載の多型および請求項5から7のいずれか一項に記載の多型のイヌのゲノムにおける有無に関するデータを受け取る手段を含む、請求項12に記載のコンピュータシステム。
- イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性を決定する方法であって、イヌのゲノムにおける、
(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNP(配列番号142の位置102)および(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNP(配列番号143の位置68)の有無を検出することを含み、
前記(a)ATP7a_Reg3_F_6のSNPが対立遺伝子Tであること、および/または前記(b)ATP7a_Reg16_F_42のSNPが対立遺伝子Tであることが、前記イヌが肝臓の銅蓄積から保護されていることを示す、方法。 - 肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出することについてイヌを選択する方法であって、
請求項1から9および14のいずれか一項に記載の方法に従って、候補の第1のイヌのゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定し、それにより候補の第1のイヌが肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出するのに適するかどうかを決定すること
を含む方法。 - 請求項1から9および14のいずれか一項の方法に従って、第1のイヌと反対の性の第2のイヌのゲノムが肝臓の銅蓄積からの保護を示す1つまたは複数の多型を含むかどうかを決定することをさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 第1のイヌと第2のイヌとを交配して、肝臓の銅蓄積から保護される可能性が高い子孫を作出することをさらに含む請求項16に記載の方法。
- 第1のイヌおよび/または第2のイヌがラブラドールレトリーバー、ゴールデンレトリーバーまたはトイプードルの血統を遺伝的に継承している、請求項15から17のいずれか一項に記載の方法。
- イヌがラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承している、請求項18に記載の方法。
- ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承しているイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防するための剤であって、前記剤は乾物1kgあたり4.5〜10mg(4.5〜10mg/kg(乾物))の濃度の銅を含む食材を含み、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、請求項1から9および14のいずれか一項に記載の方法によって決定されている、前記剤。
- 亜鉛を乾物1kgあたり少なくとも120mgの濃度でさらに含む、請求項20に記載の剤。
- 乾物1kgあたり4.5〜8mgの濃度の銅を含み、および/または乾物1kgあたり120〜250mgの濃度の亜鉛を含む、請求項20または21に記載の剤。
- 亜鉛が乾物1kgあたり150〜250mgの濃度で存在する、請求項20または21に記載の剤。
- (i)少なくとも一方の親が純血種のラブラドールレトリーバーであり、
(ii)肝臓の銅蓄積と関連する臨床症状がなく、
(iii)400mg/kg(乾燥肝臓重量)未満の肝銅濃度を有し、および/または
(iv)検出可能な肝疾患にかかっていない
イヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患を予防するための、請求項20から23のいずれか一項に記載の剤。 - 銅関連慢性肝炎を予防するための、請求項20から24までのいずれか一項に記載の剤。
- ラブラドールレトリーバーの血統を遺伝的に継承するイヌにおける肝臓の銅蓄積に起因し得る疾患の予防に同時に、別々にまたは順次に使用するための、銅を乾物1kgあたり4.5〜10mgの濃度で有する食材と少なくとも乾物1kgあたり120mgの濃度を提供するための亜鉛サプリメントとを含むパックであって、イヌが肝臓の銅蓄積から保護されている可能性が、請求項1から9および14のいずれか一項に記載の方法により決定されるパック。
- ラベルを付けた請求項20から25までのいずれか一項に記載の剤またはラベルを付けた請求項26に記載のパック。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0906162.3 | 2009-04-08 | ||
GB0906162A GB0906162D0 (en) | 2009-04-08 | 2009-04-08 | Genetic test and pet diet |
GB0913309A GB0913309D0 (en) | 2009-07-30 | 2009-07-30 | Genetic test and pet diet |
GB0913309.1 | 2009-07-30 | ||
PCT/GB2009/002355 WO2010038032A1 (en) | 2008-10-03 | 2009-10-05 | Genetic test for liver copper accumulation in dogs and low copper pet diet |
GBPCT/GB2009/002355 | 2009-10-05 | ||
PCT/GB2010/000703 WO2010116137A1 (en) | 2009-04-08 | 2010-04-07 | Genetic test for liver copper accumulation in dogs and low copper pet diet |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016002939A Division JP2016127838A (ja) | 2009-04-08 | 2016-01-08 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012523228A JP2012523228A (ja) | 2012-10-04 |
JP2012523228A5 JP2012523228A5 (ja) | 2013-05-23 |
JP5939976B2 true JP5939976B2 (ja) | 2016-06-29 |
Family
ID=41278468
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011529618A Withdrawn JP2012504410A (ja) | 2008-10-03 | 2009-10-05 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
JP2012504068A Active JP5939976B2 (ja) | 2009-04-08 | 2010-04-07 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
JP2016002939A Pending JP2016127838A (ja) | 2009-04-08 | 2016-01-08 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011529618A Withdrawn JP2012504410A (ja) | 2008-10-03 | 2009-10-05 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016002939A Pending JP2016127838A (ja) | 2009-04-08 | 2016-01-08 | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20120208182A1 (ja) |
EP (2) | EP2342353A1 (ja) |
JP (3) | JP2012504410A (ja) |
CN (3) | CN102232116A (ja) |
AU (2) | AU2009299571A1 (ja) |
RU (1) | RU2564129C2 (ja) |
WO (2) | WO2010038032A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9827314B2 (en) | 2003-12-08 | 2017-11-28 | Mars, Incorporated | Edible compositions which are adapted for use by a companion animal |
EP2342353A1 (en) * | 2008-10-03 | 2011-07-13 | Mars, Incorporated | Genetic test for liver copper accumulation in dogs and low copper pet diet |
GB201120989D0 (en) * | 2011-12-06 | 2012-01-18 | Mars Inc | Genetic test |
FI20126143L (fi) * | 2012-11-01 | 2014-05-02 | Genoscoper Oy | Menetelmä ja järjestely nisäkkään ominaisuuksien määrittämiseksi |
CN114431189B (zh) * | 2022-01-26 | 2023-04-21 | 青岛市畜牧工作站(青岛市畜牧兽医研究所) | 一种蛋鸡饲养方法 |
Family Cites Families (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2108927C (en) | 1993-09-21 | 2008-09-02 | Peter Bull | Wilson disease gene |
US6911224B1 (en) * | 1996-08-06 | 2005-06-28 | Nestec S.A. | Multi-layered canned pet food |
DE19703252A1 (de) * | 1996-11-07 | 1998-05-14 | Wolfgang Heinz Richard P Pries | Nahrungsmittel mit Mineralsalz und Verfahren zu dessen Herstellung |
GB9806444D0 (en) * | 1998-03-25 | 1998-05-27 | Mars Uk Ltd | Food |
US6156355A (en) | 1998-11-02 | 2000-12-05 | Star-Kist Foods, Inc. | Breed-specific canine food formulations |
US6265438B1 (en) * | 1998-12-03 | 2001-07-24 | Heritage Technologies, Llc | Vitamin compatible micronutrient supplement |
US6932980B1 (en) * | 2001-01-18 | 2005-08-23 | Richard Sayre | Method of making microalgal-based animal foodstuff supplements, microalgal-supplemented animal foodstuffs and method of animal nutrition |
US20030092019A1 (en) * | 2001-01-09 | 2003-05-15 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and treating neuropsychiatric disorders such as schizophrenia |
CA2387277C (en) * | 2001-05-25 | 2015-03-03 | Hitachi, Ltd. | Information processing system using nucleotide sequence-related information |
US7291363B2 (en) * | 2001-06-30 | 2007-11-06 | Texas Instruments Incorporated | Lubricating micro-machined devices using fluorosurfactants |
GB0125179D0 (en) | 2001-10-19 | 2001-12-12 | Mars Uk Ltd | Diagnostic tests |
GB0313964D0 (en) * | 2003-06-16 | 2003-07-23 | Mars Inc | Genotype test |
RU2259195C2 (ru) * | 2003-09-18 | 2005-08-27 | Государственное научное учреждение Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии) | Способ профилактики и лечения заболеваний животных биостимуляторами и гормонами тканевого препарата комплексного действия |
US20070009899A1 (en) * | 2003-10-02 | 2007-01-11 | Mounts William M | Nucleic acid arrays for detecting gene expression in animal models of inflammatory diseases |
US9827314B2 (en) * | 2003-12-08 | 2017-11-28 | Mars, Incorporated | Edible compositions which are adapted for use by a companion animal |
US20070134370A1 (en) * | 2003-12-26 | 2007-06-14 | Kao Corporation | Pet food |
CA2555259A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-09 | Applera Corporation | Genetic polymorphisms associated with stroke, methods of detection and uses thereof |
US7602937B2 (en) * | 2004-06-08 | 2009-10-13 | International Electronic Machines Corporation | Image-based visibility measurement |
JP4658712B2 (ja) * | 2005-06-30 | 2011-03-23 | 株式会社沖データ | 定着装置及び画像形成装置 |
GB0518959D0 (en) * | 2005-09-16 | 2005-10-26 | Mars Inc | Dog periodontitis |
US7695911B2 (en) * | 2005-10-26 | 2010-04-13 | Celera Corporation | Genetic polymorphisms associated with Alzheimer's Disease, methods of detection and uses thereof |
GB0615300D0 (en) * | 2006-08-01 | 2006-09-06 | Mars Inc | Diabetes test |
MX2009010439A (es) * | 2007-03-26 | 2009-10-20 | Decode Genetics Ehf | Variantes geneticas de chr2 y chr16 como marcadores para el uso en valoracion, diagnosis, prognosis y tratamiento de riesgo de cancer de mama. |
GB0719358D0 (en) * | 2007-10-03 | 2007-11-14 | Mars Inc | Pet diet |
EP2342353A1 (en) | 2008-10-03 | 2011-07-13 | Mars, Incorporated | Genetic test for liver copper accumulation in dogs and low copper pet diet |
US20120021928A1 (en) * | 2010-06-18 | 2012-01-26 | Kerstin Lindblad-Toh | Genetic risk assessment for shar-pei fever |
-
2009
- 2009-10-05 EP EP09740183A patent/EP2342353A1/en not_active Withdrawn
- 2009-10-05 AU AU2009299571A patent/AU2009299571A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-05 JP JP2011529618A patent/JP2012504410A/ja not_active Withdrawn
- 2009-10-05 US US13/122,070 patent/US20120208182A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-05 WO PCT/GB2009/002355 patent/WO2010038032A1/en active Application Filing
- 2009-10-05 CN CN2009801481190A patent/CN102232116A/zh active Pending
-
2010
- 2010-04-07 CN CN201410227480.5A patent/CN104273317A/zh active Pending
- 2010-04-07 CN CN201080025445.5A patent/CN102459633B/zh active Active
- 2010-04-07 JP JP2012504068A patent/JP5939976B2/ja active Active
- 2010-04-07 AU AU2010233549A patent/AU2010233549B2/en active Active
- 2010-04-07 EP EP10713354.8A patent/EP2640846B1/en active Active
- 2010-04-07 RU RU2011145029/10A patent/RU2564129C2/ru active
- 2010-04-07 US US13/263,282 patent/US20120040017A1/en not_active Abandoned
- 2010-04-07 WO PCT/GB2010/000703 patent/WO2010116137A1/en active Application Filing
-
2013
- 2013-09-09 US US14/021,376 patent/US9415067B2/en active Active
-
2015
- 2015-09-11 US US14/852,252 patent/US20150374750A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-01-08 JP JP2016002939A patent/JP2016127838A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102459633A (zh) | 2012-05-16 |
US9415067B2 (en) | 2016-08-16 |
AU2010233549A1 (en) | 2011-11-03 |
JP2016127838A (ja) | 2016-07-14 |
US20140093584A1 (en) | 2014-04-03 |
US20120040017A1 (en) | 2012-02-16 |
US20160184355A9 (en) | 2016-06-30 |
CN102459633B (zh) | 2015-11-25 |
EP2342353A1 (en) | 2011-07-13 |
US20120208182A1 (en) | 2012-08-16 |
CN104273317A (zh) | 2015-01-14 |
EP2640846A1 (en) | 2013-09-25 |
WO2010116137A1 (en) | 2010-10-14 |
WO2010038032A1 (en) | 2010-04-08 |
RU2564129C2 (ru) | 2015-09-27 |
RU2011145029A (ru) | 2013-05-20 |
JP2012504410A (ja) | 2012-02-23 |
JP2012523228A (ja) | 2012-10-04 |
EP2640846B1 (en) | 2016-01-06 |
US20150374750A1 (en) | 2015-12-31 |
AU2010233549B2 (en) | 2015-07-02 |
AU2009299571A1 (en) | 2010-04-08 |
CN102232116A (zh) | 2011-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tian et al. | Genetic variation in the β, β‐carotene‐9′, 10′‐dioxygenase gene and association with fat colour in bovine adipose tissue and milk | |
US20060147962A1 (en) | Genotype test | |
Downs et al. | Late‐onset progressive retinal atrophy in the G ordon and I rish S etter breeds is associated with a frameshift mutation in C2orf71 | |
JP2016127838A (ja) | イヌにおける肝臓の銅蓄積についての遺伝子検査およびペット用低銅食餌 | |
Finno et al. | Risk of false positive genetic associations in complex traits with underlying population structure: a case study | |
Mickelson et al. | The genetics of skeletal muscle disorders in horses | |
Jin et al. | Association of polymorphisms in Pit-1 gene with growth and feed efficiency in meat-type chickens | |
JP5627462B2 (ja) | 遺伝子検査およびペット食 | |
Neumann et al. | Further indications for genetic heterogeneity of euthyroid familial goiter | |
Kumar et al. | First report of cholesterol deficiency associated APOB mutation causing calf mortality in Indian Holstein Friesian population | |
Zhang et al. | Expression profiles of the ovine IL18 gene and association of its polymorphism with hematologic parameters in Hu lambs | |
Braiek et al. | A Nonsense Variant in CCDC65 Gene Causes Respiratory Failure Associated with Increased Lamb Mortality in French Lacaune Dairy Sheep | |
Yousif et al. | Detection of growth hormone (GH) gene polymorphism in norduz sheep | |
Nkrumah et al. | Polymorphisms in the leptin gene and their associations with performance, feed efficiency, and carcass merit of beef cattle. | |
Umego et al. | Single nucleotide polymorphism in the insulin-like growth factor-1 gene and its effects on growth traits in Yankasa sheep | |
Gonzalez-Berrios | Comparison of Molecular Breeding Values and Phenotypic Evaluation of Growth Traits in Short-Haired Senepol Cattle Segregating for the MSTN NT821 Allele | |
Ben Braiek et al. | A Nonsense Variant in CCDC65 Gene Causes Respiratory Failure Associated with Increased Lamb Mortality in French Lacaune Dairy Sheep. Genes 2022, 13, 45 | |
Gandolfi et al. | First WNK4-Hypokalemia Animal Model Identified by Genome-Wide Association | |
Mosher et al. | A mutation in the myostatin gene increases muscle mass and enhances racing |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130408 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130408 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140902 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141119 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141127 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141219 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150302 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150908 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160204 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160229 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160419 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160517 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5939976 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |