JP5923821B2 - 微生物の培養方法 - Google Patents
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
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Description
(1) 特定の微生物を、該特定の微生物と共生関係にある微生物と共培養するための方法であって、前記特定の微生物を培養するための第一の寒天培地と、前記特定の微生物と共生関係にある微生物を培養するための第二の寒天培地と、第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画し、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターと、を含んでなる培養システムを用いることを特徴とする方法。
(2) 第一の寒天培地は、第二の寒天培地の表面上に前記フィルターを介して積層されていることを特徴とする(1)に記載の方法。
(3) 培養システムは、第一の寒天培地又は第二の寒天培地中の微生物の培養に必要な物質を含む第三の寒天培地をさらに含むことを特徴とする、(1)又は(2)に記載の方法。
(4) 第二の寒天培地は、第三の寒天培地の表面上に積層されていることを特徴とする、(3)に記載の方法。
(5) 第一の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲であり、第二の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲である、(1)〜(4)のうちのいずれか一に記載の方法。
(6) 前記フィルターの孔径が0.22μm以下であることを特徴とする(1)〜(5)のうちのいずれか一に記載の方法。
(7) 特定の微生物を、該特定の微生物と共生関係にある微生物と共培養するための方法であって、
(a) 特定の微生物と共生関係にある微生物を第二の寒天培地で培養する工程と、
(b) 第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画する工程であって、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターで区画する工程と、
(c) 前記特定の微生物を第一の寒天培地で培養する工程と、を含む方法。
(8) 第一の寒天培地が、第二の寒天培地の表面上に前記フィルターを介して積層されることを特徴とする(7)に記載の方法。
(9) (a‐2) 第二の寒天培地を、第一の寒天培地又は第二の寒天培地中の微生物の培養に必要な物質を含む第三の寒天培地の表面上に積層させる工程をさらに含むことを特徴とする(8)に記載の方法。
(10) 第一の寒天培地の寒天の濃度が0.3〜1.0%の範囲であり、第二の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲である、(7)〜(9)のうちのいずれか一に記載の方法。
(11)フィルターの孔径が0.22μm以下であることを特徴とする、(7)〜(10)のうちのいずれか一に記載の方法。
(12) 特定の微生物を生産するための方法であって、
(a)(1)〜(11)のうちのいずれか一に記載の方法によって、特定の微生物を培養する工程と、
(b)工程(a)において、第一の寒天培地にて培養した特定の微生物を回収する工程と、を含む方法。
(13) 特定の微生物を培養するための第一の寒天培地と、前記特定の微生物と共生関係にある微生物を培養するための第二の寒天培地と、第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画し、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターと、を含む培養システム。
(14) 第一の寒天培地は、第二の寒天培地の表面上に前記フィルターを介して積層されていることを特徴とする(13)に記載の培養システム。
(15) 第一の寒天培地又は第二の寒天培地中の微生物の培養に必要な物質を含む第三の寒天培地をさらに含む、(13)又は(14)に記載の培養システム。
(16) 第二の寒天培地は、第三の寒天培地の表面上に積層されていることを特徴とする、(15)に記載の培養システム。
(17) 第一の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲であり、第二の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲である、(13)〜(16)のうちのいずれか一に記載の培養システム。
(18) 前記フィルターの孔径が0.22μm以下であることを特徴とする(13)〜(17)のうちのいずれか一に記載の培養システム。
(19) 第一の寒天培地の組成物と、第二の寒天培地の組成物と、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターと、第三の寒天培地の組成物と、スぺーサーと、培養容器とからなる群から選択される少なくとも2種の要素を含む、特定の微生物の培養用又は生産用のキット。
(a)特定の微生物と共生関係にある微生物を第二の寒天培地で培養する工程と、
(b)第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画する工程であって、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが微生物が産出する物質は通過させるフィルターで区画する工程と、
(c)前記特定の微生物を第一の寒天培地で培養する工程と、を含む。
(a)前述の、特定の微生物を、該特定の微生物と共生関係にある微生物と共培養するための方法によって、特定の微生物を培養する工程と、
(b)工程(a)において、第一の寒天培地にて培養した特定の微生物を回収する工程。
(a)第一の寒天培地の組成物
(b)第二の寒天培地の組成物
(c)フィルター
(d)第三の寒天培地の組成物
(e)スぺーサー
(f)培養容器。
本発明のキットには、さらに、使用説明書を含むことができる。
他の微生物が産出する物質を利用して増殖を行う微生物にとって,目的の物質がより早く培地中を拡散することが増殖を開始するために望ましい。そこで、微生物の培養を行うために最適な培地層の寒天濃度を決定するため、種々の寒天濃度における物質の拡散の様子を観察した。すなわち,液体培地(Nutrient broth、Difco社製)25mLに寒天(Difco社製)を0.15、0.3、0.4、0.75、1.0または1.5%の濃度になるように添加し、種々の濃度の平板培地を作製した。そして、各平板培地層内に0.1%メチレンブルー色素液(wako社製)をlμL注入し、この色素の拡散の程度を経時的に観察した。得られた結果を図2に示す。
糞便をEG平板培地(寒天の濃度は1.5%、その他の組成は表1参照のこと。)上に塗抹して37℃で2日間、アネロパック(三菱ガス化学株式会社製)を使用して嫌気培養した際、Baeteroides dorei 376株(以下、「B.dorei376株」とも称する。)のコロニーに重なって認められた微小コロニー(以下「377株」とも称する。図3 参照)は16SrRNAの配列解析の結果、Phascolarctobacterium属の未同定微生物種である可能性が高いことが明らかとなった(図4 参照)。
実施例2において示した通り、Phascolarctobacterium 377株は、B.dorei376株によって増殖が促進されることは明らかとなった。一方でB.dorei376株以外にも複数の菌種が混在する糞便懸濁液とのフィルターを介した共培養によってもその増殖促進も確認された。
腸内常在菌の分離作業の際、Bacteroides fragilisが特定の菌株(Sutterella sp.252)と同じ寒天培地上で培養した場合のみコロニー径が大きくなる傾向が認められた。
糞便の塗抹培養をNT培地(寒天の濃度は1.5%、その他の組成は表2及び3参照のこと。)にて行った際に、大きいコロニー(large colony、Klebsiella pneumoniaeが形成するコロニ―)に隣接して、小さなコロニー(small colony)が形成されていた。
Claims (12)
- 特定の微生物を、該特定の微生物と共生関係にある微生物と共培養するための方法であって、
(a) 特定の微生物と共生関係にある微生物を第二の寒天培地で培養する工程と、
(b) 第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画する工程であって、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターで区画する工程と、
(c) 前記特定の微生物を第一の寒天培地で培養する工程と、を含む方法。 - 第一の寒天培地が、第二の寒天培地の表面上に前記フィルターを介して積層されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- (a‐2) 第二の寒天培地を、第一の寒天培地又は第二の寒天培地中の微生物の培養に必要な物質を含む第三の寒天培地の表面上に積層させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 第一の寒天培地の寒天の濃度が0.3〜1.0%の範囲であり、第二の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲である、請求項1〜3のうちのいずれか一項に記載の方法。
- フィルターの孔径が0.22μm以下であることを特徴とする、請求項1〜4のうちのいずれか一項に記載の方法。
- 特定の微生物を生産するための方法であって、
(a)請求項1〜5のうちのいずれか一項に記載の方法によって、特定の微生物を培養する工程と、
(b)工程(a)において、第一の寒天培地にて培養した特定の微生物を回収する工程と、を含む方法。 - 特定の微生物を培養するための第一の寒天培地と、前記特定の微生物と共生関係にある微生物が培養されている第二の寒天培地と、第一の寒天培地と第二の寒天培地を区画し、両寒天培地で培養される各微生物を通過させないが、微生物が産出する物質は通過させるフィルターと、を含む培養システム。
- 第一の寒天培地は、第二の寒天培地の表面上に前記フィルターを介して積層されていることを特徴とする請求項7に記載の培養システム。
- 第一の寒天培地又は第二の寒天培地中の微生物の培養に必要な物質を含む第三の寒天培地をさらに含む、請求項7又は8に記載の培養システム。
- 第二の寒天培地は、第三の寒天培地の表面上に積層されていることを特徴とする、請求項9に記載の培養システム。
- 第一の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲であり、第二の寒天培地の寒天濃度が0.3〜1.0%の範囲である、請求項7〜10のうちのいずれか一項に記載の培養システム。
- 前記フィルターの孔径が0.22μm以下であることを特徴とする請求項7〜11のうちのいずれか一項に記載の培養システム。
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