JP5907947B2 - 生物学的粒子のクラスターを検出するための方法 - Google Patents
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Description
a)前記表面のトポグラフィー表現を決定するステップ、および
b)前記トポグラフィー表現において、生物学的粒子のクラスターに潜在的に対応する領域を画定する少なくとも1つの輪郭を検出するステップ
を含む方法により達成される。
前記生物学的粒子は、細菌、酵母または真菌等の微生物、および植物または動物細胞から選択され得る。
光源を使用して、3次元表現が得られる表面を照らすこと、
光センサを使用して、表面により反射または透過された光に対応する信号を検出すること、および、
検出された信号から、表面の3次元トポグラフィー表現を決定すること
を含む。
1キロヘルツ(kHz)のサンプリング周波数、
約300μmの距離ダイナミックレンジ、および
1000ピクセルCCDストリップ(各ピクセルは300ナノメートル(nm)の高さをコードする)をその検出器として使用した分光光度計
を特徴とする光学システムを使用することにより、実験的に実証されている。
Claims (11)
- 表面(11)上の生物学的粒子のクラスター(12)を検出する方法であって、
該方法は
−光源を使用して、3次元表現が得られる表面を照らし、
−光センサを使用して、表面により反射または透過された光に対応する信号を検出する
ものであり、
該方法は、
a)検出されるクラスター(12)がその上で成長している前記表面(11)の3次元トポグラフィー表現(20)を決定する第1のステップ(E1)(ここで、前記表面(11)の前記3次元トポグラフィー表現(20)は、前記表面のトポグラフィーの3次元マップまたは2つの隣接するピクセルの間の強度の変動が前記表面の高度の変動を表す2次元画像である);
b)前記トポグラフィー表現を前処理する操作する第2のステップ(E2)(ここで、前処理操作は、基準表面を検出するステップ、基準表面を差し引くステップを含む)、及び
前記3次元トポグラフィー表現において、生物学的粒子のクラスターに潜在的に対応する領域を画定する少なくとも1つの輪郭を検出するステップである
c)前記3次元トポグラフィー表現(20)において閉領域(23)を画定するために輪郭(22)を抽出する第3のステップ(E3)(ここで、ピクセルを連結している前記輪郭は、同じ勾配または同じグレーレベルに対応する)、
d)生物学的粒子のクラスターに対応し得るものとして前記閉領域(23)を特定する第4のステップ(E4)
を含み、
これらのステップは、電子データプロセッサー手段を利用して実行される、方法。 - 前記生物学的粒子が、細菌、酵母または真菌等の微生物、および植物または動物細胞から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記生物学的粒子が、100μm以下の直径または主要寸法を示す、請求項1または2に記載の方法。
- 前記表面(11)が、培養培地と空気等の周囲媒体との間の界面、機能化基板の表面、および微多孔膜の表面から選択される、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記表面のトポグラフィー表現を決定することにある前記第1のステップ(E1)が、接触なしに、および試料調製なしに行われる光学的方法により実行される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記表面のトポグラフィー表現を決定することにある前記第1のステップ(E1)が、色共焦点マイクロトポグラフィーにより実行される、請求項5に記載の方法。
- 前記表面のトポグラフィー表現を決定することにある前記第1のステップ(E1)が、シュリーレン写真またはオンブロスコピーにより実行される、請求項5に記載の方法。
- 少なくとも1つの輪郭を検出することにある前記第3及び第4のステップ(E3、E4)が、表面の前記トポグラフィー表現の局所的勾配を測定して閾値化することにより実行される、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 連続した時間で、第1のステップ(E1)並びに第3及び第4のステップ(E3、E4)を反復するステップと、第3及び第4のステップ(E3、E4)において特定される、経時的に変化する形状またはサイズを有する領域のみを選択するステップとを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- クラスター内に存在する生物学的粒子の量を評価することにある追加的ステップを含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- クラスター内に配置された微生物のin situまたはex situ同定の追加的ステップを含む、請求項2から10のいずれか一項に記載の方法。
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