JP5868845B2 - 再生歯ユニットの移植による歯槽骨の回復方法 - Google Patents
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Description
一方で、歯自体の疾患の場合にも、歯を失い、インプラント治療が行われることがしばしばある。この場合、インプラントを移植するためには、インプラントを支える歯槽骨が必要であるが、歯槽骨が十分にない場合には、インプラント治療を行うことができない。また、インプラント治療時には十分な骨組織があったとしても、インプラントの移植後に、歯槽骨の吸収が進行してしまうことも知られている。
そこで、失われた歯槽骨を回復または再生する技術への関心が高まっている。
即ち、本発明は、歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法であって、再生歯ユニットを、前記歯を欠損した部位に移植する工程を含む、方法に関する。
ここで、本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の一実施態様においては、前記動物が非ヒト哺乳動物であることを特徴とする。
本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の一実施態様においては、下記の工程;
(a)再生歯胚を作製する工程、
(b)前記再生歯胚を哺乳動物の生体内において培養し、再生歯ユニットを作製する工程、
(c)前記再生歯ユニットを哺乳動物の歯を欠損した部位に移植する工程、
を含むことを特徴とする。
本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の一実施態様においては、下記の工程;
(a)再生歯胚を作製する工程、
(b)前記再生歯胚を、哺乳動物であって顎骨回復の対象とは異なる個体の生体内において培養し、再生歯ユニットを作製する工程、
(c)前記再生歯ユニットを顎骨回復の対象となる哺乳動物の歯を欠損した部位に移植する工程、
を含むことを特徴とする。
本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の一実施態様においては、前記再生歯胚は、間葉系細胞で実質的に構成される第1の細胞集合体と、上皮細胞で実質的に構成される第2の細胞集合体を密着させて支持担体内部に配置されて培養・維持されたものであり、間葉系細胞と上皮細胞の少なくともいずれか一方が歯胚由来であることを特徴とする。
本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の別の一実施態様においては、
前記(b)工程が哺乳動物の生体内に配置されたスペーサー内部において再生歯胚を培養することを特徴とする。
本発明の歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨の回復方法の別の一実施態様においては、
前記(b)工程において、哺乳動物の外部から機械的刺激を与えることを特徴とする。
また、本発明の別の態様によれば、本発明は、前記歯槽骨の回復方法に用いるための、歯槽骨回復用再生歯ユニットに関する。
また、本発明の別の態様によれば、本発明は、前記歯槽骨の回復方法に用いるための、再生歯ユニット作製用再生歯胚に関する。
また、本発明の一態様として、スペーサーを用いて作製した再生歯ユニットを移植する方法によれば、再生歯胚を動物の生体内で培養しても、当該動物の組織等から過剰な圧力を受けることなく、再生歯の周囲に歯周組織が広く発達した再生歯ユニットを得ることができ、当該再生歯ユニットを移植することによって、移植された動物の歯槽骨をよりよく回復することができる。また、本発明の一態様として、スペーサーを用いて作製した再生歯ユニットを移植する方法によれば、歯が必要以上に伸長することを防ぎつつ、歯周組織の発達を促すように長期間培養することができ、当該再生歯ユニットを移植することによって、移植された動物の歯槽骨をよりよく回復することができる。また、本発明の一態様として、歯の欠損部の大きさや形状に合わせてスペーサーの大きさや形状を調整し、当該スペーサーを用いて培養し作製した再生歯ユニットを移植することにより、再生歯ユニットの移植を成功させやすくし、当該再生歯ユニットを移植された動物の歯槽骨をよりよく回復することができる。
さらに、本発明の一態様として、機械的刺激を与えて作成した再生歯ユニットを移植する方法によれば、再生歯胚を動物の生体内で培養しても、十分な歯根膜組織を有する再生歯を得ることができ、当該再生歯ユニットを移植することにより、移植された動物の歯槽骨をよりよく回復することができる。
再生歯ユニットにおける歯の部分は、後に説明する歯の発生段階における歯芽から歯の段階の構成を有している。また、歯周組織は、歯根膜と歯槽骨を含む。「再生歯ユニット」とは、再生された歯の部分及び再生された歯周組織の部分を含むものであれば、その製造方法は特に限定されない。再生歯ユニットの一作製方法としては、再生歯胚を哺乳動物の生体内で培養することにより、再生歯ユニットを得ることができる。再生歯ユニットの他の作製方法としては、再生歯胚をある程度の長期間器官培養を行うことにより、再生歯ユニットを得ることができる。
本明細書において「再生歯胚」とは、細胞培養技術により人工的に形成した歯胚をいう。
再生歯ユニットは、再生歯胚を作製し培養することにより、再生歯の周囲に歯周組織を形成させることができる。再生歯胚はどのような方法で作製したものであってもよいが、例えば、間葉系細胞と上皮系細胞を用いて、これらの細胞のうちの少なくともいずれか一方を歯胚由来の細胞とし、間葉系細胞で実質的に構成される第1の細胞集合体と、上皮細胞で実質的に構成される第2の細胞集合体を密着させて配置する工程と、第1及び第2の細胞集合体を支持担体の内部で培養する工程と、を含む方法によって作製することができる。なお、本明細書において、2つの細胞集合体を区別するために、便宜上、間葉系細胞で実質的に構成される細胞集合体の方を第1の細胞集合体と呼んだが、上皮細胞で実質的に構成される細胞集合体の方を第1の細胞集合体と呼ぶこともでき、いずれを第1の細胞集合体と呼ぶか否かは重要ではない。
また、本発明において「歯周組織」とは、歯の主として外層に形成された歯槽骨及び歯根膜をいう。歯槽骨及び歯根膜は、当業者が、組織染色などによって形態的に容易に特定することができる。
ここで、細胞集合体とは、細胞が密着した状態をいい、組織であっても、ばらばらの細胞から調製された細胞凝集塊であってもよい。組織を用いれば、細胞配置や形状の正しい歯が得られやすいという利点があるが、入手できる量に制約がある場合もある。細胞凝集塊は、培養細胞も用いることができるので、比較的入手しやすく好ましい。本発明に係る方法によれば、細胞凝集塊を用いても、細胞配置や形状の正しい再生歯を得ることができる。
また、配置した後に、支持担体を固化する工程を設けることも好ましい。これにより、細胞がさらに凝集して、より高密度な状態とすることができる。例えば、コラーゲンゲルの場合、培養温度下で数分〜数十分間静置することによって固化することができる。このとき、細胞集合体内に細胞以外の成分が少なければ少ないほど、より高密度な状態が実現される。
培養期間を長くすることによって、象牙質及びエナメル質の蓄積、歯冠の形成、及び歯根の形成のように、再構成歯胚の形成をより進行させることができる。所望の状態を得るために、例えば、6日以上、30日以上、50日以上、100日以上、又は300日以上培養してもよく、培養の途中で、培地や培養条件を変更することもできる。
支持担体を単独で培養する場合、培養条件は、一般的な動物細胞の培養に用いられる条件とすることができる。また、培養には、哺乳動物由来の血清を添加してもよく、またこれらの細胞の増殖や分化に有効であることが知られている各種細胞因子を添加してもよい。このような細胞因子としては、FGF、BMP等を挙げることができる。
一般的には、スペーサーの内部空間は、所望の再生歯ユニットよりも大きいものでなければならない。換言すれば、スペーサーの内部空間は、再生歯ユニットが、最大許容値以上に伸長することを防止する役割を果たすことになる。
このような上下が開いた円筒状(リング状)とする場合には、上下の解放部を通じて、スペーサー外部からの栄養供給路も十分に確保され、再生歯ユニットの形成が可能となる。
また、そのような円筒状(リング状)のスペーサーを用いる場合、再生歯胚の伸長方向を円筒リングの横方向(すなわち、円筒の径方向)とすると、円筒の縦方向(すなわち、円筒の高さ)は、所望の再生歯ユニットの咬合面の厚みを得られるように、また、最大許容値を超えないように、設定すればよい。また、この場合、円筒の縦方向(すなわち、円筒の高さ)は、所望の再生歯ユニットの歯周組織の厚みを得られるように、また、最大許容値を超えないように、設定してもよい。この場合の所望の厚みや最大許容値は、対象とする動物の歯の欠損部の大きさや形状に基づいて決定することができる。再生歯ユニットの歯周組織の形状が移植対象となる欠損部の大きさや形状に沿っている方が、移植が成功しやすく、骨が生着しやすくなる点で好ましい。また、リングの内径は、再生歯ユニットが必要以上に伸長するのを防ぐため、再生歯ユニットの長さの略最大許容値を意図して設定すればよい。
このような円筒状のスペーサーを用いる場合に、リングの径方向を伸長方向として、縦方向(高さ方向)を再生歯ユニットの歯冠の幅となるように、再生歯胚を配置する場合には、筒の高さは、例えば、ヒトの歯を培養する場合は3−15mm、好ましくは5−12mmとし、マウスの歯を培養する場合は0.4−2.0mm、好ましくは0.6−1.8mmとし、その内径(内直径)は、ヒトの歯を培養する場合は10−30mm、好ましくは15−26mmとし、マウスの歯を培養する場合は、0.9−2.0mm、好ましくは1.2−1.9mmとする。
再生歯胚の咬合面は、圧力によってつぶされることなく自然な形状に成長することができ、歯は筒の直径方向に伸長し、一般に、反対側の壁に到達する前に、または、到達後、最大許容値未満の長さで伸長を止めることができる。
再生歯胚は、筒の水平方向からの圧力をスペーサーの壁によって回避することができるとともに、上下方向からの圧力をスペーサーの上端及び下端によってほとんど回避することができる。
移植後の培養期間は、移植時の歯の大きさと発生させる歯の大きさによって異なるが、一般に3日〜400日とすることができる。例えば、腎皮膜下に移植する場合、移植する歯胚の大きさと再生させる歯の大きさによっても異なるが、7日〜60日程度が好ましい。
支持担体は、内部で細胞の培養が可能なものであれば特に限定されないが、例えば、ゲル状、繊維状、固体状のものが好ましく、かかる支持担体を用いることによって、さらに生体内で再生歯胚に過剰な圧力がかかるのを防ぐことができる。
本発明に用いる再生歯ユニットの製造において用いられる支持担体としては、例えば、コラーゲン、アガロースゲル、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、寒天、ハイドロゲル、セルマトリクス(商品名)、メビオールゲル(商品名)、マトリゲル(商品名)、エラスチン、フィブリン、ラミニン、細胞外マトリクス混合物、ポリグリコール酸(PGA)、ポリ乳酸(PLA)、乳酸/グリコール酸共重合体(PLGA)等を挙げることができる。中でも、適切な硬さや保持力を有するコラーゲン、アガロースゲル、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、寒天、ハイドロゲル、セルマトリクス、メビオールゲル、マトリゲル、細胞外マトリクス混合物、エラスチン、フィブリン、ラミニンが好ましい。
例えば、支持担体は液状のものを用い、再生歯胚を配置した後に硬化させてもよい。例えば、スペーサー内部をコラーゲン溶液で満たし、コラーゲン溶液内に再生歯胚を配置した後、37℃のCO2インキュベーター内で培養することにより、コラーゲンをゲル化させることができる。次いで、再生歯胚をスペーサーごと哺乳動物の生体内に配置して培養を行うことができる。
機械的刺激を与えることによって、再生歯ユニットにおける歯根膜の形成が促進される。機械的刺激とは、例えば、振動、圧迫、摩擦等が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、音波程度の周波数(例えば、20000Hz〜40000Hz程度)の振動を与えることが好ましい。このように、機械的刺激を与えられて歯根膜の形成が促進された再生歯ユニットを移植することにより、歯槽骨のよりよい回復が促されると考えられる。
スペーサーを用いて再生歯ユニットを製造する方法によれば、再生歯胚を生体内で培養する際、歯が生体内で圧力を受けてつぶれることがなく、自然な形状に成長させることができるので、欠損部に適合した形状の歯を製造しやすい。
また、欠損部に移植するためには、欠損した歯と同じ長さを有する再生歯を作製することが望ましいところ、本発明に係る歯の製造方法によれば、歯の長さの最大値を制御することができる。歯の長さが最大許容値を超えている場合、その歯をそのまま移植することができないが、最大許容値より短ければ、移植してから成長させて所望の長さの再生歯を得ることが可能である。
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項(部材、ステップ、要素、数字など)が存在することを意図するものであり、それ以外の事項(部材、ステップ、要素、数字など)が存在することを排除しない。
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語(技術用語及び科学用語を含む。)は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
本発明の実施態様は模式図を参照しつつ説明される場合があるが、模式図である場合、説明を明確にするために、誇張されて表現されている場合がある。
第一の、第二のなどの用語が種々の要素を表現するために用いられるが、これらの要素はそれらの用語によって限定されるべきではないことが理解される。これらの用語は一つの要素を他の要素と区別するためのみに用いられているのであり、例えば、第一の要素を第二の要素と記し、同様に、第二の要素は第一の要素と記すことは、本発明の範囲を逸脱することなく可能である。
<実施例1:スペーサーを用いた再生歯ユニットの作製>
本発明に用いる再生歯ユニットの作製方法の一例として、再生歯胚を作製した後、哺乳動物の生体内において生体内培養を行い、再生歯ユニットを作製した。腎皮膜下移植において腎皮膜の圧力の影響を回避し、歯の欠損部の形状に適し、かつ、歯周組織が十分に発達した再生歯ユニットを作製する目的で、スペーサーを用いて再生歯胚の生体内培養を行った。
マイクロピペットチップ(HRI−110NEW,Molecular Bio Products,SanDiego,CA,USA)を内径(内直径)1.3mm、高さ1.3mmになるようリング状(筒状)に切断してスペーサーを作製し、内部にコラーゲン溶液を満たして使用した。再生歯胚は、歯根方向への伸長を促すためスペーサーの壁面に歯冠側を近接させるよう配置し、37℃のCO2インキュベーター(三洋電機,大阪,日本)で培養し、コラーゲンゲルを硬化させた。次に、再生歯胚を含むスペーサーを7週齢C57BL/6マウスの両側腎皮膜下に移植した。腎皮膜下への移植は、腎臓皮膜に2〜3mmの切開を入れ、腎臓皮膜と腎臓実質を剥離し、その間に再生歯胚を含むスペーサーを挿入することにより行った。比較例として、7日間器官培養した再生歯胚を、スペーサーを用いずに腎皮膜下に移植した。移植時の写真を図1に示す。また、移植時のスペーサーと再生歯胚の位置関係の模式図を図11に示す。
移植3週間後に、マイクロCT撮影を行い、画像データは統合画像処理ソフトを用いて解析した。歯冠部における最大径を長径とし、長径と直交する最大径を短径と定義し、それぞれの長さを計測し、その比率を算出した。
スペーサーを用いて培養した例を図2に、用いないで培養した例を図3に示す。スペーサーを用いて培養した再生歯ユニットは、正常歯に近い形態である一方、スペーサーを用いないで培養した再生歯ユニットは、長径が短径に対して極端に長く、扁平な形状であった。
スペーサーを用いて培養した群(制御群)及びスペーサーを用いないで培養した群(非制御群)の各7例について長径と短径を計測し、長径/短径比を求めた結果を図4(右側)に示す。再生歯ユニットの長径/短径比は、スペーサーを用いて培養した群(制御群:実施例)では1.46±0.16mmであり、スペーサーを用いないで培養した群(非制御群:比較例)では2.30±0.35mmであった。
図4(左側)には、成獣マウスの下顎第一、第二、第三臼歯(M1、M2、M3)の歯冠部における最大径を長径とし、長径と直交する最大径を短径と定義して測定し、長径/短径比を求めた結果も示す。M1、M2、M3の長径/短径比は、それぞれ、1.61±0.05(n=5)、1.09±0.04(n=5)、1.12±0.04(n=5)であった。
以上より、スペーサーを用いずに生体内培養した再生歯ユニット形状が扁平となるのに対し、スペーサーを用いて生体内培養した再生歯ユニットは、形状が扁平にならず、両者の長径/短径比は有意差があること、また、スペーサーを用いて生体内培養した再生歯ユニットの長径/短径比は天然の歯と同等になることが確認された(Student’s−t検定、*p<0.0001)。また、再生歯ユニットの歯冠部分のみならず、再生歯ユニットの歯周組織部分も、スペーサーを用いずに生体内培養した場合に比べ、スペーサーを用いて生体内培養した場合には、形状が扁平にならずに、図中の歯冠の短径方向及び長径方向の両方向に歯周組織が広がった形状の再生歯ユニットが得られることが確認された(図2及び図3の右図を参照)。このように、歯周組織の形状も、スペーサーの形状(本実施例では、スペーサーの円筒の高さ)を変更することにより、コントロールすることができる。スペーサーの大きさや形状を調整することにより、欠損部の形状に沿った歯周組織を有する再生歯ユニットを作製し移植することは、移植を成功させ、ひいては、移植された動物の歯槽骨の回復させることに役立つ。また、スペーサーを用いることにより、歯周組織が、歯冠の長径及び短径の両方向に広がった形状の再生歯ユニットでは、再生歯を歯槽骨によってより強固に支えることが可能になると考えられる。
結果を図5に示す。スペーサーを用いない非制御群においては咬頭−根尖長が30日目に1.07±0.20mm(n=6)であったところ、60日目には1.70±0.26mm(n=6)となっており、有意に歯の長さが増加していた。一方、スペーサーによる制御群では、30日目で1.01±0.19mm(n=13)、60日目で1.02±0.11mm(n=10)と、移植日数による歯の長さの増加は認められなかった(Student’s−t検定、*p<0.0001)。
以上より、スペーサーを用いて再生歯胚を生体内培養すると、再生歯の長さを任意に調節できることが明らかになった。
実施例1の方法に従って、スペーサーを用いて器官培養を行った再生歯胚をスペーサーごと腎皮膜下に移植し、機械的刺激として、腎皮膜下移植後7日目から音波電動歯ブラシ(周波数31,000Hz:Doltz(商標)、パナソニック)をマウス背部皮膚に3.9×104Paの圧力にて圧接した(5分間/日)。コントロール群には機械的刺激を与えず、30日間の移植期間後に摘出して比較対象とした。
摘出した再生歯ユニットは実施例1と同様の方法でマイクロCT撮影を行い、三次元画像解析ソフトウェアを用いて歯根膜腔の幅(単に、「歯根膜の幅」と呼ぶこともある。)を計測した。具体的には、三次元画像上で再生歯ユニットの歯根表面と形成された歯槽骨との距離を歯根膜腔の幅とし、長径・短径における断面において、それぞれ6点ずつ計測した。その後、再生歯を4%パラフォルムアルデヒド(Paraformaldehyde:PFA)にて固定し、10%エチレンジアミン四酢酸(EDTA)にて脱灰し、パラフィン包埋した。その後、厚さ8マイクロメートルの連続切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジン(HE)染色を行い、組織学的評価を行った。
組織学的評価の結果を図6に示す。図中、Bは歯槽骨、Dは象牙質、Pは歯根膜を示し、図中のPの文字の隣のバーが歯根膜の幅を示す。なお、図中の右下のスケールバーは100μmを示す。有刺激群の歯根膜は、無刺激群より厚く形成され、歯根膜領域の細胞の規則的な配列が認められた。
またCT画像上で歯根膜の幅を計測した結果を図7に示す。有刺激群の歯根膜の幅は、108.5±30.6μm(n=33)であり、無刺激群の歯根膜の幅は、68.7±14.1μm(n=12)であった(Student’s−t検定、*p<0.0001)。
以上の結果から、再生歯胚を生体内培養する際に、外部から機械的な刺激を与えることにより、十分な歯根膜組織を有する再生歯ユニットが得られることが判明した。
4週齢C57BL/6マウスの下顎第一臼歯を抜歯し、3日間の治癒期間を設けた。その後、同部の歯肉切開・剥離を行い、歯科用マイクロモーター(Viva−Mate Plus,ナカニシ,東京,日本)を用いて歯槽骨を切削し、近遠心径1mm、頬舌径0.8mmの移植窩を形成した。
実施例1に従って、スペーサーを用いて30日間腎皮膜下で培養し、且つ、実施例2に従って培養中に機械的刺激を加えて作製した再生歯ユニットを、顎骨移植窩に埋入し、8−0ナイロン縫合糸(ベアーメディック,千葉,日本)で歯肉縫合した。
図8に移植窩の形成、及び再生歯ユニットの移植の様子を示す。
再生歯ユニットを移植したマウスは移植0日、14日、30日目に前述と同様の方法にてマイクロCT撮影を行い、移植片とレシピエントの歯槽骨における結合を評価した。その後、移植片を含む顎骨を4%PFAにて固定し、10%ギ酸‐クエン酸ナトリウム脱灰液にて脱灰し、パラフィン包埋した後に、厚さ8μmの連続切片を作製し、HE染色にて組織学的評価を行った。
図9にCT画像、図10にHE染色像を示す。
図9に示すとおり、移植14日目には移植片とレシピエントの下顎第二臼歯歯槽骨間に部分的な結合が認められ、移植30日目にはほぼ全周にわたり骨結合が認められた。図中、矢印は再生歯ユニットを示す。
図10に示すとおり、移植30日目の組織像では、再生歯と下顎第二臼歯との槽間中隔歯槽骨が融合しており、再生歯ユニットが骨結合を介して移植部位の歯槽骨に生着している可能性が示された。また組織解析より、移植による偶発症として再生歯歯髄の一部に石灰化が認められた(16例中3例)ものの、再生歯ユニットの歯根膜は移植後も維持されており、骨性癒着は認められなかった(16例中0例)。図中、矢印は骨結合による生着を示し、スケールバーは100μmを示し、BTは再生歯を、NTは天然下顎第二臼歯を示す。
以上より、本発明の製造方法で製造された再生歯ユニットは、顎骨に移植すると良好に生着することが示された。
4週齢C57BL/6マウスの下顎第一臼歯を抜歯し、3日間の治癒期間を設けた。その後、同部の歯肉切開・剥離を行い、歯科用マイクロモーター(Viva−Mate Plus,ナカニシ,東京,日本)を用いて歯槽骨を切削し、近遠心径2.5〜3mm、頬舌径2mm、深さ3mmの3壁性の広範性骨欠損モデルを作製した。実施例1と同様の方法により、再生歯胚をスペーサー内に配置して50〜60日間腎皮膜下移植して作製した再生歯ユニットを、骨欠損部に移植し、8−0ナイロン縫合糸(ベアーメディック,千葉,日本)で歯肉縫合した。図12に、移植した再生歯ユニットの実体像、CT外観像及びCT断面像を示す。
再生歯ユニットを移植したマウスは移植0日、14日、30日、40日目にマイクロCT撮影を行い、移植片とレシピエントの歯槽骨における結合、ならびに頬側歯槽骨の垂直的な骨再生を評価した。マイクロCT撮影は、再生歯ユニットおよび、再生歯ユニットを移植した顎骨を、実験動物用3DマイクロX線CT R_mCT(リガク)を用いて90kV,150mA、断層厚10mmの条件で撮影し、小動物用画像ファイリングソフトウェア i− VIEW タイプR、および高精細3D/4D画像解析ソフトウェア Imaris(Bitplane)を用いて画像構築および解析することにより行った。図13に、コントロール(再生歯ユニットの移植なし)、及び、実施例(再生歯ユニットの移植あり)について、移植0日、14日、30日、40日目のCT画像を示す。
マイクロCT画像を用いて、移植直後および移植45日後の再生歯ユニットを観察すると、再生歯ユニットを移植しなかったコントロールと比較して、再生歯ユニット移植による頬側歯槽骨量の有意な回復が認められると共に、再生歯ユニットの生着が示された。図14に、コントロール(再生歯ユニットの移植なし)、及び、実施例(再生歯ユニットの移植あり)について、移植45日後のCT画像を示す。画像中、移植直後の歯槽骨の上端部を点線により、移植45日後の歯槽骨の上端部を実線により示す。
さらに、コントロール(再生歯ユニットの移植なし)、及び、実施例(再生歯ユニットの移植あり)について、移植45日間での歯槽骨再生量を測定した。すなわち、欠損部位または移植部位を、経時的にマイクロCT撮影し、統合画像処理ソフトによる解析を行って、移植前から移植後に増加した頬側歯槽骨の体積を測定することにより、再生された歯槽骨量を測定した。測定した結果を図15に示す。歯槽骨再生量の測定により、再生歯ユニットを移植した例では、再生歯ユニットを移植していないコントロールに比べて、歯槽骨再生量において有意に増加していることが示された。
さらに、別の実施例において、コントロール(再生歯ユニットの移植なし)、及び、実施例(再生歯ユニットの移植あり)について、移植0日目、移植49日目におけるCT画像を図16に示す。図16の右図において、実施例の移植49日後の歯槽骨上端部の水平ラインを、コントロール及び実施例の写真中、点線により示す。コントロールのCT写真中、実際の歯槽骨の上端部ラインと、実施例の場合の歯槽骨の上端部ラインとの垂直方向の差を両矢印により示した。この図に示されるように、歯欠損部への再生歯ユニットの移植により、歯槽骨が垂直方法に回復することが示された。
これらのことから、通常ではインプラントや歯胚移植が不可能な広範性骨欠損に対して、再生歯ユニットを移植することにより、欠損部の歯槽骨再生と同時に、骨性結合による歯の再生も可能であることが示唆された。
Claims (4)
- 歯を欠損した哺乳動物の歯槽骨を回復するための医薬組成物の製造における再生歯ユニットの使用であって、
前記再生歯ユニットは、下記の工程:
(a)再生歯胚を作製する工程、
(b)前記再生歯胚を非ヒト哺乳動物の生体内において培養し、再生歯ユニットを作製する工程、
を含む方法によって製造されるものであり、
その際、工程(b)は、非ヒト哺乳動物の生体内に配置されたスペーサー内部において再生歯胚を培養することを含んでおり、
前記スペーサーは、金、銀、鉄、銅、アルミニウム、ポリエチレン、樹脂、歯科用レジン、または歯科用セメントから選択される材質からなる、前記再生歯胚が最大許容値以上に伸長することを防止可能な略円筒状構造物である、使用。 - 前記方法が下記の工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の使用;
(a)再生歯胚を作製する工程、
(b)前記再生歯胚を、非ヒト哺乳動物であって顎骨回復の対象とは異なる個体の生体内において培養し、再生歯ユニットを作製する工程。 - 請求項1または2に記載の使用であって、
前記再生歯胚は、間葉系細胞で実質的に構成される第1の細胞集合体と、上皮細胞で実質的に構成される第2の細胞集合体を密着させて支持担体内部に配置されて培養・維持されたものであり、間葉系細胞と上皮細胞の少なくともいずれか一方が歯胚由来であることを特徴とする使用。 - 請求項1〜請求項3のいずれかに記載の使用であって、
前記(b)工程において、非ヒト哺乳動物の外部から機械的刺激を与えることを特徴とする使用。
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