JP5858405B2 - 肺腺がんの予後予測方法、および、肺腺がんの検出キット - Google Patents
肺腺がんの予後予測方法、および、肺腺がんの検出キット Download PDFInfo
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Description
哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出することにより予後を予測する予後予測方法であって、
前記哺乳動物から得られたI期肺腺がん組織の細胞におけるα−アクチニン−4遺伝子(ACTN4)のコピー数を測定する工程、を含んでなり、
前記遺伝子のコピー数が4を超える場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、ことを特徴とする。
哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出するための検出キットであって、細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定することのできる試薬を含んでなる、ことを特徴とする。
哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出することにより予後を予測する予後予測方法であって、
(a)前記哺乳動物から得られたI期肺腺がんの組織または細胞において、ACTN4遺伝子の発現量を測定する工程、および
(b)工程(a)で得られた発現量を、対応する正常な組織または細胞におけるACTN4遺伝子の発現量と比較する工程、を含んでなり、
前記正常な組織または細胞に対して前記I期肺腺がんの組織または細胞における前記遺伝子の発現が増強されていた場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、ことを特徴とする。
哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出するための検出キットであって、組織または細胞内のACTN4遺伝子の発現量を測定することのできる試薬を含んでいる、ことを特徴とする。
ヒト細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定するための検出キットであって、FISH法に利用可能な、ゲノム上の前記遺伝子に特異的なプローブを含んでなり、該特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなる、ことを特徴とする。
サンプルとして、1997年12月から2001年3月までに国立がんセンター中央病院(日本国)においてI期肺腺がんの切除手術を施行された372名の患者からの、ホルマリン固定パラフィン包埋された切除検体を用いた(以下「コホート1」という)。これらのサンプルについて、α−アクチニン−4タンパク質の発現を免疫組織化学分析によって検討した。免疫組織化学分析に用いた一次抗体は、国立がんセンター研究所(日本国)で作製された抗ヒトα−アクチニン−4ウサギポリクローナル抗体とした。免疫染色は、アビジン・ビオチン複合体(Avidin-Biotin Complex)を用いるABC法によって行った。
実施例1に記載のコホート1およびコホート2のそれぞれについて、α−アクチニン−4タンパク質の発現亢進と血清CEA濃度との組み合わせと、I期肺腺がんの予後との関連を調べた。具体的には、コホート1およびコホート2のそれぞれを、次の3群:血清CEA5ng/mL以下かつα−アクチニン−4タンパク質陰性の群;血清CEA5ng/mL超またはα−アクチニン−4タンパク質陽性の群;および血清CEA5ng/mL超かつα−アクチニン−4タンパク質陽性の群に分割し、それぞれの群についてKaplan-Meier法によって生存曲線を作成し、Log-rank検定により検討した。
ACTN4遺伝子のゲノム上のコピー数を調べるため、19番染色体の長椀上に存在するACTN4遺伝子に対する特異的プローブを作製し、I期肺腺がん切除標本のパラフィン切片に対してFISH(Fluorescence in Situ Hybridization)法による分析を行った。
実施例1に記載のコホート1について、α−アクチニン−4タンパク質の発現亢進とACTN4遺伝子増幅との組み合わせと、I期肺腺がんの予後との関連を調べた。具体的には、サンプルを次の3群:ACTN4遺伝子増幅(−)かつα−アクチニン−4タンパク質発現陰性の群;ACTN4増幅(−)かつアクチニン−4発現陽性の群;およびACTN4遺伝子増幅(+)かつα−アクチニン−4タンパク質発現陽性の群に分割し、それぞれの群についてKaplan-Meier法によって生存曲線を作成し、Log-rank検定により検討した。
実施例1と同様に、α−アクチニン−4タンパク質の発現を免疫組織化学分析によって検討した。サンプルとして、実施例1におけるコホート1に加えて、1997年から2001年までに国立がんセンター中央病院(日本国)において、II及びIII期肺腺がんの切除手術を施行された168名の患者からの、ホルマリン固定パラフィン包埋された切除検体(計540=372+168)を用いた(以下「コホート1」という)。また、実施例1におけるコホート2に加えて、1993年から2005年までに国立がんセンター東病院(日本国)において、I期肺腺がんの切除手術を施行された447名の患者からの、ホルマリン固定パラフィン包埋された切除検体(計661=214+447)を用いた(以下「コホート2」という)。免疫組織化学分析に用いた一次抗体、免疫染色法、陽性(IHC-positive)及び陰性(IHC-negative)の定義は、実施例1と同様である。
実施例3と同様に、ACTN4遺伝子のゲノム上のコピー数を調べるため、19番染色体の長椀上に存在するACTN4遺伝子に対する特異的プローブを作製し、I期肺腺がん切除標本のパラフィン切片に対してFISH(Fluorescence in Situ Hybridization)法による分析を行った。サンプルとして、1997年から2009年までに国立がんセンター中央病院(日本国)においてI〜IV期肺腺がんの切除手術を施行された543名の患者からの、ホルマリン固定パラフィン包埋された切除検体を用いた。543の切除検体のうち、288検体は上皮成長因子受容体(FGFR)遺伝子の変異があり、255検体は変異がない。そして、これら543検体は、実施例5のコホート1及び2とは重複していない。使用した特異的プローブ、陽性(FISH-positive)及び陰性(FISH-negative)の定義は、実施例3と同様である。
サンプルとして、実施例5おいて用いたコホート1のうち、I期肺腺がんの206切除検体、及び、実施例5おいて用いたコホート2のうち、I期肺腺がんの645切除検体、を用いた。これらのサンプルについて、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性症例及び陰性症例と、FISH法分析の陽性症例及び陰性症例と、を組み合わせて、Kaplan-Meier法によって生存曲線を作成し、Log-rank検定により検討した。得られた生存曲線を図9に示す。図9のパネルAはコホート1のI期の生存曲線を示している。α−アクチニン−4タンパク質発現の陰性症例の5年生存率は95%であり、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性症例、かつ、FISH法分析の陰性症例の5年生存率は87%であった。これに対し、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性症例、かつ、FISH法分析の陽性症例の5年生存率は58%であった。また、図9のパネルBはコホート1のIA期の生存曲線を示している。α−アクチニン−4タンパク質発現の陰性症例の5年生存率は96%であり、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性症例、かつ、FISH法分析の陰性症例の5年生存率は92%であった。これに対し、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性症例、かつ、FISH法分析の陽性症例の5年生存率は57%であった。このため、図9のパネルAおよびBによれば、α−アクチニン−4タンパク質発現の陽性・陰性症例に比べて、FISH法分析の陽性・陰性症例は統計学的な有意差をもって予後が不良であったことがわかる。
Claims (26)
- 哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出することにより予後を予測する予後予測方法であって、
前記哺乳動物から得られたI期肺腺がん組織の細胞におけるα−アクチニン−4遺伝子(ACTN4)のコピー数を測定する工程、を含んでなり、
前記遺伝子のコピー数が4を超える場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、
ことを特徴とする肺腺がんの予後予測方法。 - 前記遺伝子のコピー数の測定は、ゲノム上の該遺伝子に特異的なプローブを用いるFISH法によって行われる、ことを特徴とする請求項1に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 前記特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなる、ことを特徴とする請求項2に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出するための検出キットであって、細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定することのできる試薬を含んでなる、ことを特徴とする肺腺がんの検出キット。
- 前記試薬は、ゲノム上の前記遺伝子に特異的なプローブである、ことを特徴とする請求項4に記載の肺腺がんの検出キット。
- 前記特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなる、ことを特徴とする請求項5に記載の肺腺がんの検出キット。
- 哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出することにより予後を予測する予後予測方法であって、
(a)前記哺乳動物から得られたI期肺腺がんの組織または細胞において、ACTN4遺伝子の発現量を測定する工程、および
(b)工程(a)で得られた発現量を、対応する正常な組織または細胞におけるACTN4遺伝子の発現量と比較する工程、を含んでなり、
前記正常な組織または細胞に対して前記I期肺腺がんの組織または細胞における前記遺伝子の発現が増強されていた場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、
ことを特徴とする肺腺がんの予後予測方法。 - 前記工程(a)では、前記組織または細胞内のα−アクチニン−4タンパク質を検出する、ことを特徴とする請求項7に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- α−アクチニン−4タンパク質は、配列番号2で表されるアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項8に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- α−アクチニン−4タンパク質の検出は、特異的抗体を用いる免疫組織化学染色によって行われる、ことを特徴とする請求項8に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 前記工程(a)では、前記組織または細胞内のα−アクチニン−4のmRNAを検出する、ことを特徴とする請求項7に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- α−アクチニン−4のmRNAは、配列番号1で表されるヌクレオチド配列(ただし、配列中のtはuに変換されている)を含む、ことを特徴とする請求項11に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 以下の工程:
(c)前記哺乳動物から得られた血清において、癌胎児性抗原(CEA)の濃度を測定する工程、および
(d)工程(c)で得られた濃度を、正常な血清における癌胎児性抗原(CEA)の濃度と比較する工程、をさらに含んでなり、
前記正常な組織または細胞に対して前記I期肺腺がんの組織または細胞における前記遺伝子の発現が増強されており、かつ、前記正常な血清に対して前記哺乳動物から得られた血清における癌胎児性抗原(CEA)濃度が有意に高い場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、
ことを特徴とする請求項7に記載の肺腺がんの予後予測方法。 - 前記工程(c)で得られた濃度が5.0ng/mLを超える場合に、前記正常な血清に対して有意に高いと判断される、ことを特徴とする請求項13に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 以下の工程:
(e)前記哺乳動物から得られたI期肺腺がん組織の細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定する工程、をさらに含んでなり、
前記正常な組織または細胞に対して前記I期肺腺がんの組織または細胞における前記遺伝子の発現が増強されており、かつ、前記遺伝子のコピー数が4を超える場合に、前記哺乳動物からのI期肺腺がんが予後不良のI期肺腺がんであると予測する、
ことを特徴とする請求項7に記載の肺腺がんの予後予測方法。 - 前記遺伝子のコピー数の測定は、ゲノム上の該遺伝子に特異的なプローブを用いるFISH法によって行われる、ことを特徴とする請求項15に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 前記特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなる、ことを特徴とする請求項16に記載の肺腺がんの予後予測方法。
- 哺乳動物において予後不良のI期肺腺がんを検出するための検出キットであって、組織または細胞内のACTN4遺伝子の発現量を測定することのできる試薬を含んでいる、ことを特徴とする肺腺がんの検出キット。
- 前記試薬は、前記組織または細胞内のα−アクチニン−4タンパク質を定量するための試薬である、ことを特徴とする請求項18に記載の肺腺がんの検出キット。
- α−アクチニン−4タンパク質を定量するための試薬は、α−アクチニン−4タンパク質に特異的に結合する抗体である、請求項19に記載の肺腺がんの検出キット。
- 前記試薬は、前記組織または細胞内のα−アクチニン−4のmRNAを定量するための試薬である、ことを特徴とする請求項18に記載の肺腺がんの検出キット。
- 血清中の癌胎児性抗原(CEA)の濃度を測定することのできる試薬をさらに含んでいる、ことを特徴とする請求項18に記載の肺腺がんの検出キット。
- 細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定することのできる試薬をさらに含んでいる、ことを特徴とする請求項18に記載の肺腺がんの検出キット。
- 前記試薬は、ゲノム上の前記遺伝子に特異的なプローブである、ことを特徴とする請求項23に記載の肺腺がんの検出キット。
- 前記特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなるものである、ことを特徴とする請求項24に記載の肺腺がんの検出キット。
- ヒト細胞におけるACTN4遺伝子のコピー数を測定するための検出キットであって、FISH法に利用可能な、ゲノム上の前記遺伝子に特異的なプローブを含んでなり、該特異的プローブは、ヒト第19番染色体上の第43.81Mb〜第44.02Mbの領域のヌクレオチド配列からなる、ことを特徴とする肺腺がんの検出キット。
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