JP5829672B2 - 結腸直腸及び胃腸癌の予防 - Google Patents

Description

１． 関連出願の参照
本願は、仮出願第６１／３１７，２４５号（２０１０年３月２４日出願）の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ． § １１９（ｅ）下の利益を主張し、その内容がその全体において参照により組み入れられる。

２． 配列リスト、表、又はコンピュータプログラムの参照
配列リストを本明細書と同時に提出する。

３． 発明の属する技術分野
本開示は、とりわけ、被験者にプロガストリンに特異的な抗体を含む組成物を投与することにより、腺腫性ポリープを発生する素因のある被験者において結腸直腸及び／又は胃腸癌を防止する方法に向けられる。

４． 背景
結腸直腸癌（「ＣＲＣ」）を含む、胃腸管の癌は、毎年数十万の個人に影響を及ぼし、数万人のＣＲＣに関連する死亡が米国だけで毎年生じる。Rustgi, 2010, "The genetics of hereditary colon cancer," Genes & Development 21: 2525-2538を参照のこと。ＣＲＣは様々な様式で起こりうるが、その１つは悪性腫瘍への腺腫性ポリープの形質転換である。腺腫性ポリポーシスは、家族性腺腫性ポリポーシス（「ＦＡＰ」）を伴う個人についての症例と同様に、遺伝しうるか、又は、それは散発的でありうる。ＦＡＰ又は散発性腺腫性ポリポーシスを伴う個人は、小腸、結腸、及び／又は直腸における腺腫性ポリープの形成に関連付けられる大腸腺腫性ポリポーシス（「ＡＰＣ」）腫瘍抑制遺伝子の突然変異を保有する。これらのポリープは、次に、結腸直腸及び胃腸癌に発展することができる。散発性腺腫性ポリポーシス、ＣＲＣの多くの例の根底にある非遺伝性状態の場合において、ＡＰＣ遺伝子が体細胞において突然変異している。散発性腺腫性ポリポーシスを伴う個人は良性ポリープを発生し、その一部は、その後、悪性癌に形質転換しうる。

ＦＡＰは全ＣＲＣ症例の１%前後を占め、１３，０００出産中１人に影響を及ぼす（同上）。ＦＡＰ患者におけるＡＰＣの突然変異は、結腸全体にわたる数百〜数千の小さな腺腫性ポリープの形成に関連付けられる。悪性腫瘍へのポリープの進行は、実質的に不可避である。平均して、予防的処置なしでは、ＦＡＰを伴う個人は年齢３９歳までにＣＲＣを発生する。予防的処置は医療の標準であり、一般的に年齢２５歳前での、根治手術（結腸、又は結腸及び直腸の両方の除去を含む）を含む。予防は無処置よりも好ましいが、若年患者における結腸の外科的切除（結腸切除）は生活の質を重度に損なう。また、外科的切除単独は、患者を無癌に保つためには不適切でありうる：結腸切除を有する患者は、上部胃腸管においてポリープ及び癌を発生する高いリスクを有する。ＦＡＰを伴う個人及び散発性腺腫性ポリポーシスを伴う個人について無癌の生命を延ばす、効果的な予防的処置、特に非外科的処置についての深刻な必要性がある。

５． 要約
本開示は、腺腫性ポリープを発生する素因のある動物（ヒトを含む）において胃腸癌（ＣＲＣを含む）を防止するために有用な方法及び組成物を提供する。下に記載する通り、本願は、プロガストリン（「ＰＧ」）に結合すると考えられる処置計画を示し、ＰＧの生物学的活性を中和する明らかな能力を伴い、それらは、上部胃腸管においてＣＲＣ又は癌を発生する増加した可能性を有するが、しかし、まだ発生していない被験者において有用である。出願において記載する種々の発明は、抗ＰＧ抗体が、ＦＡＰのモデルマウスにおいて胃腸腫瘍の発生を防止するという出願者の発見に部分的に基づく。操作の任意の理論により拘束されることを意図しないが、身体においてＰＧに結合し、他のタンパク質とのその相互作用に干渉することは、腺腫性ポリープが悪性腫瘍に発展することを防止すると考えられる。

したがって、一局面において、本開示は、抗ＰＧ抗体を含む組成物を投与することにより、腺腫性ポリープを発生する素因のある被験者においてＣＲＣを含む、胃腸癌を防止する方法を提供する。一般的に、方法は、それを必要とする被験者に、抗ＰＧ抗体の効果的な量を投与することを含む。抗ＰＧ抗体、及びその組成物は、効果的な投与量で、即ち、被験者においてＣＲＣを含む、胃腸癌を防止又は遅延するために効果的な量で、抗体ベースの治療のための当技術分野において公知の計画に従って投与することができる。

予防的抗ＰＧ処置のための適した被験者は、ＣＲＣの家族歴を伴う被験者、ＦＡＰを伴う個人、ならびに腺腫性ポリープが以前に見出された及び／又は除去された被験者を含む、腺腫性ポリープを発生する素因のある被験者である。典型的には、適した被験者は、ＦＡＰ又は散発性腺腫性ポリポーシスに導く、ＡＰＣ遺伝子における１つ又は複数の突然変異を有する。適した被験者は、また、以前に結腸切除を有した、上部胃腸管においてポリープ及び癌を発生する増加リスクにある個人を含む。

本開示の抗ＰＧ抗体は、ＰＧに結合することが可能な抗体を含む。ＰＧに結合することが可能な任意の抗体を、本開示の方法において使用してもよく、しかし、限定しないが、ポリクローナル及びモノクローナル抗ＰＧ抗体を含む。好ましくは、抗ＰＧ抗体は、処置されている種のＰＧに特異的である。例えば、抗ヒトＰＧ（抗ｈＰＧ）抗体はヒト被験者に投与される。適した抗ＰＧ抗体は、結合親和性において、少なくとも約５０００nMから少なくとも約０．００１nM、又はより高い、又はその間の任意の値の範囲でありうる。

本明細書に記載する抗ＰＧ抗体を、ＣＲＣを含む、胃腸癌を防止又は遅延させるための他の処置との組み合わせにおいて、又はそれに対する補助として使用することができる。他の処置の非限定的な例は、外科的切除、化学療法、抗体治療、放射線治療、及び本明細書に記載する第２の薬剤を用いた処置を含む。抗ＰＧ抗体は、別の処置と同時に、又はその前もしくは後の時間に投与することができる。

本開示の方法における使用のために適した組成物は、抗ＰＧ抗体に加えて、医薬的に許容可能な担体、賦形剤、及び／又は希釈剤を含んでもよい。組成物は、本明細書に記載する通り、種々の投与経路のために製剤化することができ、選ばれた経路のために適した担体、賦形剤、及び／又は希釈剤を含む。ヒト及び動物における処置のために、抗ＰＧ抗体を含む組成物を、例えば注射及び抗体ベースの臨床産物ための当技術分野において公知の他の投与経路など、任意の適した投与経路を使用して投与することができる。処置目的のために、組成物は、使用の容易さのために単位用量でパッケージ化することができる。

本明細書に示す通り、複数の腺腫性ポリープを伴う患者が上昇した血清ＰＧレベルを有するのに対し、ポリープが除去された患者は低い又は検出不可能な血清ＰＧレベルを有する。この発見は、散発性又は家族性腺腫性ポリポーシス及びその処置の経過を診断及びモニターするための強力な新たなツールを提供する。

したがって、別の局面において、本開示は、腺腫性ポリープを発生する素因のある個人において抗ＰＧ処置の効力をモニターする方法を提供する。一般的に、方法は、抗ＰＧ治療を受けている個人からの血液（血清、血漿、又は全血）サンプル中のＰＧの濃度、又はレベルを抗ＰＧ治療の経過の間又はその後に測定すること、測定されたＰＧレベルをＰＧのベースラインレベル（例、処置の開始時の個人におけるＰＧレベル）と比較することを含み、それにおいて、ベースラインレベルのものを下回る測定されたＰＧレベルは処置の効力を示しており、ベースラインレベルのものを上回る測定されたＰＧレベルは効力の欠如を示している。一部の実施態様において、方法は、さらに、例えば、内視鏡検査により、被験者におけるポリープの数及びサイズを評価することを含む。

さらに別の局面において、本開示は、個人を選択するための方法を提供し、それにおいて、内視鏡検査又は抗ＰＧ処置が示される。方法は、腺腫性ポリープを発生する素因のある個人において行うことが意図される。一般的に、方法は、個人からの血液サンプル中でのＰＧのレベルを測定すること、及び、測定されたＰＧのレベルをベースラインレベルと比較することにより行われ、そこで、ベースラインレベルよりも高い測定されたＰＧレベルは、内視鏡検査についての必要性を示す。一部の実施態様において、ベースラインを上回るＰＧレベルは、抗ＰＧ処置についての必要性を示す。ベースラインは、より早期の時間点での個人からの１つ又は複数のサンプルから得ることができる、あるいは、その個人と同様の特徴を有する集団において測定されたＰＧレベルに基づくことができる。

図１は、ヒトプレプロガストリン（配列番号１００）のアミノ酸配列を提供し、そこで、シグナルペプチド配列に下線が引かれている。成熟ヒトプロガストリン（配列番号２０）ならびにプロガストリンプロセシングの特定の産物、Ｇ３４（配列番号１０２）、Ｇ３４−Ｇｌｙ（配列番号１０３）、Ｇ１７（配列番号１０４）、Ｇ１７−Ｇｌｙ（配列番号１０５）、及びＣＴＦＰ（配列番号１０６）を含む。 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ａは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ３のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号１２）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１６）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｂは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ３のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号１３）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１７）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｃは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ４のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号１４）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１８）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｄは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ４のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号１５）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１９）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｅは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ８のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号５９）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６７）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｆは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ８のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号６３）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号７１）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｇは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１３のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号６０）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６８）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｈは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１３のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号６４）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号７２）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｉは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１６のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号６１）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６９）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｊは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１６のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号６５）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号７３）を提供する； 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｋは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１９のＶ_Ｈ鎖のポリペプチド配列（配列番号６２）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号７０）を提供する；ならびに 図２は、特定の例示的なマウス抗ｈＰＧモノクローナル抗体の可変軽鎖及び可変重鎖のポリヌクレオチド及びアミノ酸配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図２Ｌは、マウス抗ｈＰＧ ＭＡｂ１９のＶ_Ｌ鎖のポリペプチド配列（配列番号６６）及びそれをコードするポリヌクレオチド配列（配列番号７４）を提供する。 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ａは、ヒト化ＭＡｂ３のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号２１）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｂは、ヒト化ＭＡｂ３のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号２２）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｃは、ヒト化ＭＡｂ４のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号２３）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｄは、ヒト化ＭＡｂ４のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号２４）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｅは、ヒト化ＭＡｂ８（ａ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号７５）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｆは、ヒト化ＭＡｂ８（ａ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号７６）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｇは、ヒト化ＭＡｂ８（ｂ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号７７）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｈは、ヒト化ＭＡｂ８（ｂ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号７８）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｉは、ヒト化ＭＡｂ８（ｃ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号７９）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｊは、ヒト化ＭＡｂ８（ｃ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号７６）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｋは、ヒト化ＭＡｂ１３（ａ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号８０）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｌは、ヒト化ＭＡｂ１３（ａ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号８１）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｍは、ヒト化ＭＡｂ１３（ｂ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号８２）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｎは、ヒト化ＭＡｂ１３（ｂ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号８３）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｏは、ヒト化ＭＡｂ１６（ａ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号８４）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｐは、ヒト化ＭＡｂ１６（ａ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号８５）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｑは、ヒト化ＭＡｂ１６（ｂ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号８６）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｒは、ヒト化ＭＡｂ１６（ｂ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号８７）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｓは、ヒト化ＭＡｂ１６（ｃ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号８８）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｔは、ヒト化ＭＡｂ１６（ｃ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号８９）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｕは、ヒト化ＭＡｂ１９（ａ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号９０）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｖは、ヒト化ＭＡｂ１９（ａ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号９１）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｗは、ヒト化ＭＡｂ１９（ｂ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号９２）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｘは、ヒト化ＭＡｂ１９（ｂ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号９３）を提供する； 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｙは、ヒト化ＭＡｂ１９（ｃ）のＶ_Ｈ鎖の予測アミノ酸配列（配列番号９４）を提供する；ならびに 図３は、本明細書に記載する、選択された抗ｈＰＧモノクローナル抗体のヒト化可変重鎖及び軽鎖の予測ポリペプチド配列を提供する。各々の場合において、３つのＣＤＲを太字の下線付きテキストで示す。具体的には：図３Ｚは、ヒト化ＭＡｂ１９（ｃ）のＶ_Ｌ鎖の予想アミノ酸配列（配列番号９５）を提供する。

７． 詳細な説明
７．１ 家族性及び散発性腺腫性ポリポーシスにおける癌
家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）は、ＡＰＣ遺伝子の１つの対立遺伝子での生殖細胞突然変異に関連付けられる稀な遺伝性状態である。ＡＰＣ遺伝子の多数の突然変異がＦＡＰを伴う被験者においてマッピングされており、突然変異の多くが切断タンパク質をもたらす。例えば、Rustgi, 2010, "The genetics of hereditary colon cancer," Genes & Development 21: 2525-2538；Groves et al., 2002, "Duodenal cancer in patients with familial adenomatous polyposis (FAP): results of a 10 year prospective study," Gut 50: 636-641を参照のこと。ＡＰＣにおけるこれらの突然変異は、変動する重症度のＦＡＰに関連付けられる。

ＦＡＰは、非常に若い年齢での罹患個人の小腸及び結腸における複数の腺腫（ポリープ）の出現により特徴付けられる。これらのポリープの一部は結腸直腸癌（ＣＲＣ）に形質転換し、ＦＡＰ由来のＣＲＣ症例は全ＣＲＣ症例の約１%に当たる。ＣＲＣの家族歴がある場合、個人は、典型的には、非常に早い年齢で遺伝子テストを受け、ＡＰＣ遺伝子中の突然変異の存在を検出する。そのような突然変異を有することが見出された個人における古典的な経過観察は、ポリープが見出された場所での結腸内視鏡検査、ポリープ切除で始まり、ポリープが内視鏡的に除去するには多すぎる場合、結腸の部分的又は完全切除（結腸切除）。ＦＡＰを伴う大半の個人は年齢２５歳までに結腸切除を受けているであろう。

散発性腺腫性ポリープの大きなパーセンテージが、また、ＡＰＣ遺伝子において突然変異を持つ。Rutsgi, 2010, "The genetics of hereditary colon cancer," Genes & Development 21: 2525-2538を参照のこと。ＣＲＣの任意の家族歴の非存在において、症状（例えば直腸出血など）を提示する個人は、典型的には、結腸内視鏡検査により検査される。多数のポリープを有することが見出された、又は、ポリープが切除後に再発する個人は、典型的には、また、遺伝的にテストされうる。ＡＰＣ遺伝子における突然変異が見出された場合、結腸切除が推奨される処置である。

結腸切除後でさえ、腺腫性ポリープを発生する素因のある個人は、それらの胃腸管の非切除部分において腺腫性ポリープを発生する増加リスクを有する。そのような個人は定期的に内視鏡検査により経過観察され、上部胃腸管における腺腫症について評価される。個人はスピーゲルマンの分類に従ってステージングされ、それは腺腫症の程度又は重症度を評価するための４つのパラメータに頼る：ポリープの数、ポリープのサイズ、ポリープの組織像、及びポリープ異形成（無秩序な成長）の程度。Spigelman et al., 1989, "Upper gastrointestinal cancer in patients with Familial Adenomatous Polyposis," Lancet 2: 783-785を参照のこと。スピーゲルマン分類は、４つのパラメータに基づき、十二指腸ポリポーシスについての５つのステージ（ステージ０〜ＩＶ）の１つに個人を分類する（表１に示す通り）：

ＦＡＰを伴う１１４の個人での十年間の研究では、スピーゲルマンステージＩＶの患者は、ステージ０〜ＩＩＩに分類された患者についての０%〜２．４%リスクと比較して、十二指腸癌を発生する３６．４%のリスクを有していることが明らかになった。Groves et al., 2002, "Duodenal cancer in patients with familial adenomatous polyposis (FAP): results of a 10 year prospective study," Gut 50: 636-641を参照のこと。

ＣＲＣを伴う患者の約７０%が、ＰＧの上昇レベルを有することが以前に示されている。以下の実施例に示す通り、出願人は、今回、ＰＧの血液レベルが、まだＣＲＣを発生していないＦＡＰを伴う個人において、ならびに散発性腺腫性ポリポーシスを示す患者の約２０%において上昇しうることを発見している。操作の任意の理論により拘束されることを意図しないが、ＰＧは、ポリープが悪性腫瘍に移行する機構の一部であると考えられる。抗ＰＧ抗体によるＰＧの結合は、この移行に干渉すると考えられる（ＦＡＰのマウスモデルＡＰＣΔ１４において実証される通り）。抗ＰＧ抗体を用いた予防的処置は、大手術を回避又は遅延させ、生活の質を有意に増加させる可能性を提示する。

７．２ 予防の方法
本開示は、腺腫性ポリープを発生する素因のある患者においてＣＲＣを含む、胃腸癌を防止する方法を提供する。一般的に、方法は、そのような患者に、治療的利益を提供するために効果的な１つ又は複数の抗ＰＧ抗体の量を投与することを含む。抗ＰＧ抗体は一般的に、及び方法において有用な特異的抗ＰＧ抗体が、後のセクションにおいて詳細に記載される。

予防のための「被験者」又は「患者」は、好ましくは、哺乳動物、例えば非霊長類（例、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）又は霊長類（例、サル又はヒト）などである。投与される抗ＰＧ抗体は、処置されている動物の種について特異的であるべきである。ヒト被験者の処置のために、抗ＰＧ抗体は、ヒトプロガストリンに特異的に結合しなければならない（本明細書において「抗ｈＰＧ抗体」として言及し、以下でより詳細に記載する）。

被験者又は患者は、ヒト、例えば成人患者又は小児患者などでありうる。適した被験者は、腺腫性ポリープを発生する素因があり、結果的に、ＣＲＣの家族歴を伴う個人、腺腫性ポリープが検出もしくは除去される又はされている個人、ＦＡＰを伴う個人、ポリープを除去するための結腸切除を有した個人、及びＡＰＣ遺伝子において突然変異を伴う個人を含む、ＣＲＣ又は胃腸癌を発生する増加した可能性を有する個人である。

抗ＰＧ処置は、１つ又は複数の他の処置と組み合わせて、又はその補助として投与し、ＣＲＣを含む、胃腸癌を防止又は遅延することができる。他の処置は、限定しないが、化学療法的処置、放射線、外科的切除、抗体治療、及び第２の薬剤を用いた処置（本明細書に記載する通り）を含む。本明細書に提供する組み合わせ処置は、患者への少なくとも２つの処置の投与を含み、その第１は、少なくとも１つの抗ＰＧ抗体を用いた抗ＰＧ処置であり、その第２は、治療的又は予防的薬剤又は手順を用いた処置である。

抗ＰＧ処置は、例えば外科的切除などの外科的手順と組み合わせることができる。抗ＰＧ抗体は、胃腸管の罹患部分の外科的切除との組み合わせで、前癌性ポリープを有することが見出された又はそれを発生する素因のある被験者、例えば家族性腺腫性ポリポーシスを伴う個人に投与することができる。抗ＰＧ処置を、外科的切除の前に、それと同時に、又はその後に開始することができる。

抗ＰＧ処置は、また、放射線治療と組み合わせることができる。放射線治療は、癌細胞を殺し、腫瘍を縮小するためのＸ線、ガンマ線、中性子、陽子、及び他の供給源からの高エネルギー放射線の使用である。放射線は身体外の機械から来ることがあり（外部ビーム放射線治療）、又は、それは、癌細胞の近くの身体において配置された放射性材料から来ることがある（内部放射線治療又は近接照射療法）。全身放射線治療では、身体全体の組織に血液中を移動する、放射性物質（例えば放射性標識モノクローナル抗体など）を使用する。放射線治療は、また、照射及び放射線療法と呼ばれうる。他の放射線治療は、三次元原体放射線治療（３Ｄ−ＣＲＴ）及び強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）を含む。他の放射線治療も可能である。

抗ＰＧ抗体処置を第２薬剤と組み合わされる場合、第２薬剤は化学療法剤でありうる。化学療法は、癌細胞を殺す（細胞傷害又は細胞破壊）又はその成長を防止する（細胞分裂停止）小分子薬の使用である。化学療法剤は、しかし、限定しないが、毒素（細胞毒素又は細胞毒性薬剤とも言及され、細胞の生存に有害である任意の薬剤を含む）、薬剤、及び化学療法用化合物を含むリポソーム又は他の小胞を含む。適した化学療法剤の例は、しかし、限定しないが、１デヒドロテストステロン、５フルオロウラシルデカルバジン（decarbazine）、６メルカプトプリン、６チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、アントラマイシン（ＡＭＣ））、有糸分裂阻害剤、シス‐ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、ジアミノジクロロ白金、アントラサイクリン、抗生物質、代謝拮抗剤、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ（膀胱内）、リン酸ベタメタゾンナトリウム及び酢酸ベタメタゾン、ビカルタミド、硫酸ブレオマイシン、ブスルファン、ロイコウオリン（leucouorin）カルシウム、カリケアマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルヒチン、抱合型エストロゲン、シクロホスファミド、シクロトスファミド（cyclothosphamide）、シタラビン、シタラビン、サイトカラシンＢ、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ダウニルビシンＨＣＬ（daunirubicin）、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトックス、デキストラゾキサン（dextrazoxane）、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドセタキセル、メシル酸ドラセトロン、ドキソルビシンＨＣＬ、ドロナビノール、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｌアスパラギナーゼ、エメチン、エポエチンα、エルウィニアＬアスパラギナーゼ、エステル型エストロゲン、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチジウムブロマイド、エチニルエストラジオール、エチドロネート、エトポシドシトロロラムファクター（citrororum factor）、リン酸エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、ゲムシタビンＨＣＬ、グルココルチコイド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンＤ、グラニセトロンＨＣＬ、ヒドロキシ尿素、イダルビシンＨＣＬ、イホスファミド、インターフェロンα−２ｂ、イリノテカンＨＣＬ、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸リュープロレリン、レバミゾールＨＣＬ、リドカイン、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミンＨＣｌ、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファランＨＣＬ、メルカプチプリン（mercaptipurine）、メスナ、メトトレキサート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド酢酸塩、オンダンセトロンＨＣＬ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ペントスタチン、ピロカルピンＨＣＬ、プリマイシン（plimycin）、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロザン２０、ポルフィマーナトリウム、プロカイン、プロカルバジンＨＣＬ、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テガフール、テニポシド、テノポシド、テストラクトン、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、トポテカンＨＣＬ、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、及びビノレルビン酒石酸塩。

抗ＰＧ抗体は、また、化学療法剤の組み合わせで投与することができる。化学療法剤の例示的な組み合わせは、ロイコボリン（フォリン酸又はＬＶ）と組み合わせた５フルオロウラシル（５ＦＵ）；ウラシル（ＵＦＴ）及びロイコボリンと組み合わせたカペシタビン；ウラシル（ＵＦＴ）及びロイコボリンと組み合わせたテガフール；５ＦＵと組み合わせた又はカペシタビンと組み合わせたオキサリプラチン；カペシタビンと組み合わせたイリノテカン、５ＦＵ、イリノテカン、又はカペシタビンと組み合わせたマイトマイシンＣを含む。本明細書に開示する化学療法剤の他の組み合わせも可能である。

ＣＲＣに苦しむ患者のために使用される化学療法剤についての標準的な投与計画を、本開示の方法において使用することができる。関連技術において公知の通り、異なる化学療法剤の組み合わせを使用した結腸直腸癌のための化学療法計画が、臨床試験において標準化されている。そのような計画はしばしば略語により公知であり、５ＦＵ Ｍａｙｏ、５ＦＵ Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ、ＬＶＦＵ２、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ４、ＦＯＬＦＯＸ６、ｂＦＯＬ、ＦＵＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＩＦＬ、ＸＥＬＯＸ、ＣＡＰＯＸ、ＸＥＬＩＲＩ、ＣＡＰＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸＩＲＩを含む。例えば、Chau, I. et al., 2009, Br. J., Cancer 100: 1704-19、及びField, K. et al., 2007, World J. Gastroenterol.13: 3806-15を参照のこと。それらの両方が参照により組み入れられる。

抗ＰＧ抗体は、また、他の抗体（しかし、限定しないが、癌細胞を直接的もしくは間接的に殺す、又は、その成長を遅くするもしくは停止させるモノクローナル抗体を含む）との組み合わせで使用することができる。そのような抗体は、種々の別々の機構を通じて機能することができる。例えば、特定の抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は他の機構を介した患者の免疫システムによる攻撃のために癌細胞をマークすることができる。リツキシマブ（リツキサン（登録商標））（Ｂ細胞で見出されるＣＤ２０抗原に結合する）及びエドレコロマブ（１７−１Ａ抗原に結合する）がこの方法で機能すると考えられる。他の抗体は、癌細胞が生存及び／又は成長のために要求する抗原に結合し、その機能を変化及び阻害する。多数の抗体がこの方法で機能すると考えられている。例えば、セツキシマブ（アービタックス（登録商標））及びパニツムマブ（ベクチビックス（登録商標））（それらの各々はＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）に結合する）；ならびにベバシズマブ（アバスチン（登録商標））（それは成長因子ＶＥＧＦに結合する）。他の機構も可能であり、特定の抗体は、１つ又は複数の作用機構を介して作用しうる。さらに他の抗体を放射性又は化学毒性部分に共役させ、それらを、抗体により特異的に認識される抗原を優先的に発現する癌細胞に標的化することができる。

抗ＰＧ抗体は、また、非ステロイド性抗炎症薬（「ＮＳＡＩＤ」）と組み合わせて投与することができる。例えば、セレコキシブ、又は４［５（４メチルフェニル）３（トリフルオロメチル）ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドは、ＦＡＰ患者において腺腫性ポリープを低下させることが示されているＮＳＡＩＤである。

抗ＰＧ抗体及び第２薬剤を、同時に、連続的に、又は別々に投与することができる。本明細書において使用する通り、抗ＰＧ抗体及び第２薬剤が、それらが患者に同じ日、例えば同じ患者の診察の間に投与される場合、連続的に投与されると言う。連続的投与は、１、２、３、４、５、６、７、又は８時間離して生じうる。対照的に、抗ＰＧ抗体及び第２薬剤は、それらが異なる日に患者に投与される場合、例えば、抗ＰＧ抗体及び第２薬剤が、１日、２日、又は３日、１週間、２週間、又は１ヶ月間隔で投与することができる場合、別々に投与すると言う。本開示の方法において、本開示の抗ＰＧ抗体の投与は、第２薬剤の投与に先行する又はそれに続くことができる。

非限定的な例として、抗ＰＧ抗体及び第２薬剤を一時期にわたり同時に投与することができ、抗ＰＧ抗体及び第２薬剤の投与を交互に行う第２の時期が続く。

７．３ 医薬的組成物及びキット
本開示の方法において有用な抗ＰＧ抗体を、組成物中で製剤化することができる。場合により、組成物は、１つ又は複数の追加薬剤（例えば上に記載する第２薬剤など）を含むことができる。組成物は、医薬的に許容可能な担体を通例含む無菌の医薬的組成物の部分として通常供給される。この組成物は、任意の適した形態にすることができる（個人へのその投与の所望の方法に依存して）。

抗ＰＧ抗体は、種々の経路により、例えば経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、局所、髄腔内、及び脳室内などに個人に投与することができる。任意の所与の場合における最も適した投与のための経路は、特定の抗体、被験体、ならびに疾患の性質及び重症度ならびに被験体の身体的状態に依存しうる。抗体は、水溶液として製剤化し、皮下注射により投与することができる。開示における使用のための医薬的に許容可能な担体は、多種多様の形態を、例えば、処置すべき状態又は投与経路に依存して取りうる。

医薬的組成物は、用量当たりに抗ＰＧ抗体の所定量を含む単位用量形態で便利に提示することができる。そのような単位は、しかし、限定しないが、５mg〜５g、例えば１０mg〜１g、又は２０〜５０mgの抗ＰＧ抗体／単位用量を含みうる。医薬的組成物は、１つを上回るＰＧエピトープに結合することが可能である抗ＰＧ抗体を含みうる。あるいは、医薬的組成物は抗ＰＧ抗体の組み合わせを含みうるが、各々が異なるＰＧエピトープに結合することが可能である。

開示の医薬的組成物は、所望の純度を有する抗体を、当技術分野において典型的に用いられる任意の医薬的に許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤（それらは全て本明細書において「担体」として言及される）、即ち、緩衝化薬剤、安定化薬剤、保存剤、等張剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤、及び他の種々の添加剤を混合することにより、凍結乾燥製剤又は水溶液としての保存のために調製することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed.1980)を参照のこと。そのような添加剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに非毒性でなければならない。

緩衝化薬剤は、生理的条件に近似する範囲内のｐＨを維持するために役立つ。それらは約２mM〜約５０mMの範囲の濃度で存在することができる。本開示を用いた使用のための適した緩衝化薬剤は、有機酸及び無機酸の両方ならびにその塩、例えばクエン酸緩衝剤（例、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝剤（例、コハク酸−コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸−水酸化ナトリウム混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝剤（例、酒石酸−酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸−酒石酸カリウム混合物、酒石酸−水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸塩緩衝剤（例、フマル酸−フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝剤（例、グルコン酸−グルコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸緩衝剤（例、シュウ酸−シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝剤（例、乳酸−乳酸ナトリウム混合物、乳酸−水酸化ナトリウム混合物、乳酸−乳酸カリウム混合物など）、及び酢酸緩衝剤（例、酢酸−酢酸ナトリウム混合物、酢酸−水酸化ナトリウム混合物など）などを含む。加えて、リン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、及びトリメチルアミン塩（例えばＴｒｉｓなど）を使用することができる。

保存剤を加えて、微生物の成長を遅らせることができ、０．２%−１%（ｗ／ｖ）の範囲の量で加えることができる。本開示を用いた使用のための適した保存剤は、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド、ベンザルコニウムハロゲン化物（例、塩化物、臭化物、及びヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、及びアルキルパラベン（例えばメチル又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、及び３ペンタノールなど）を含む。等張剤（時折「安定剤」として公知である）を加えて、本開示の液体組成物の等張性を確実にし、多価糖アルコール、例えば、三価又はそれより高い糖アルコール（例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールなど）を含む。安定剤は、機能において、増量剤から添加剤（治療用薬剤を安定化する、又は、変性もしくは容器壁への付着を防止することを助ける）に及びうる広範なカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上に列挙）；アミノ酸（例えばアルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど）、有機糖又は糖アルコール（例えばラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール、ガラクチトール、グリセロールなど）、シクリトール（例えばイノシトールなど）を含む；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；含硫の還元剤（例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、αモノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなど）；低分子量ポリペプチド（例、１０残基又はそれより少ないペプチド）；タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドンなど）単糖類（例えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなど）；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）、及び三糖類（例えばラフィノースなど）；及び多糖類（例えばデキストランなど）でありうる。安定剤は、０．１〜１０，０００重量部の活性タンパク質重量の範囲で存在することができる。

非イオン性界面活性物質又は界面活性剤（「湿潤剤」としても公知である）を加えて、治療的薬剤を可溶化し、ならびに、撹拌誘導性の凝集に対して治療的タンパク質を保護するのを助けることができ、それは、また、タンパク質の変性を起こすことなく、製剤が剪断面に曝露されることを可能にする。適した非イオン性界面活性物質は、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、プルロニックポリオール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（TWEEN（登録商標）２０、TWEEN（登録商標）８０など）を含む。非イオン性界面活性物質は、約０．０５mg/ml〜約１．０mg/ml、例えば、約０．０７mg/ml〜約０．２mg/mlの範囲で存在しうる。

追加の種々の賦形剤は、キレート剤（例、ＥＤＴＡ）、酸化防止剤（例、メチオニン、アスコルビン酸、ビタミンＥ）、及び共溶媒を含むことができる。

抗ＰＧ抗体は、ＣＲＣを防止する際に有用な、又はＣＲＣのための治療の補助としての他の薬剤との混合物又は組み合わせで、１つ又は複数の抗ＰＧ抗体の混合物として単独で投与することができる。適した組み合わせ及び補助治療の例を、上に提供する。

本開示により包含されるのは、本開示の抗ＰＧ抗体（抗体複合体を含む）を含む医薬的キットである。医薬的キットは、抗ＰＧ抗体組成物（例、凍結乾燥形態又は水溶液のいずれか）及び以下：
・ 第２の治療用薬剤（例えば、上に記載する）；
・ 抗ＰＧ抗体組成物を投与するためのデバイス（例えば、ペン、ニードル、及び／又はシリンジ）；及び
・ 抗体が凍結乾燥形態である場合、抗体を再懸濁するための医薬品グレードの水又は緩衝剤
の１つ又は複数を含むパッケージである。

抗ＰＧ抗体の各単位用量は別々にパッケージ化することができる。キットは１つ又は複数の単位用量（例、２単位用量、３単位用量、４単位用量、５単位用量、７単位用量、８単位用量、１０単位用量又はそれ以上）を含むことができる。特定の実施態様において、１つ又は複数の単位用量を、各々、シリンジ又はペンに収容する。

７．４ 効果的な投与量及び処置計画
本開示の抗ＰＧ抗体は、治療的利益を提供するために十分な又は効果的な量で被験者に投与される。胃腸癌（ＣＲＣを含む）を防止する状況において、腺腫性ポリープを発生する素因のある被験者において、治療的利益が、以下の１つ又は複数が達成される場合に推察されうる：被験者におけるポリープの数及び／又はサイズにおける低下又は増加の欠如；悪性腫瘍の非存在（被験者がポリープを有する又は有した場所を含む）；血漿又は血清ＰＧレベルにおける低下又は増加の欠如；スピーゲルマンの分類に従った、ポリポーシスのより進行したステージからポリポーシスのあまり進行していないステージへの退行（例、ステージＩＶからステージＩＩＩ、ステージＩＩＩからステージＩＩ、ステージＩＩからステージＩへの退行）；スピーゲルマンのステージＩＶポリポーシスから胃腸癌への進行の欠如。抗ＰＧ抗体を含む医薬的組成物は、効果的な投与量で個人（例、ヒト被験者）に投与することができる。

胃腸癌の完全防止は、望ましいが、治療的利益が存在するために要求されない。実際に、ＦＡＰに苦しむ大半の患者は年齢２５歳までに大手術を要求するため、疾患の進行を遅らせ、手術を遅延させ、生活の質を改善させることができる。さらに、例えばＣＲＣなど、胃腸癌の発症における任意の遅延は、治療的利益を提供する。

一部の状況において、治療的利益は、当業者の知識に従い、１つ又は複数のサロゲートエンドポイントと相関しうる。例として、限定しないが、血漿及び／又は血清ＰＧ濃度を被験者において経時的に測定することができ、ＰＧレベルにおける低下、又は閾値レベルを下回るレベル、例えば、約５０pM、４０pM、３０pM、２０pM、１０pM、又は５pM未満は治療的利益を示している。

ポリープのサイズ及び数は、内視鏡技術、例えば結腸内視鏡検査など、ならびに当業者に公知の他の方法を使用して測定することができる。

全ての遊離ＰＧを結合することが、治療的効力を達成するために要求されないが、それが望まれうる。遊離ＰＧは、抗ＰＧ抗体により結合されるために利用可能であるＰＧを意味する。むしろ、ポリープ内又は周囲の遊離ＰＧの濃度を全身的に、特に体液又は他においてより限定された範囲まで低下させることも効果的でありうる。遊離ＰＧ濃度が抗ＰＧ抗体組成物の投与により低下されうる例示的な組織及び体液は、しかし、限定しないが、患者から除去されたポリープ又は腫瘍サンプル、腹水、胸水からの液体、脳脊髄液、リンパ、血液、血漿、血清、及びその他を含む。これらの組織又は体液のる１つ又は複数におけるＰＧの濃度を、ＥＬＩＳＡ技術又は当業者が精通している他の技術を使用して定量化することができる。

当業者の知識によれば、抗ＰＧ抗体の用量を、患者において滴定し、投与後の所定の時間での目的の組織又は体液中での遊離ＰＧ濃度を少なくとも約１０%、２０%、３０%、４０%、５０%、６０%、７０%、８０%、９０、又は１００%、あるいは約５%−１０%、約１０%−１５%、約１５%−２０%、約２０%−２５%、約２５%−３０%、約３０%−３５%、約３５%−４０%、約４０%−４５%、約４５%−５０%、約５０%−５５%、約５５%−６０%、約６０%−６５%、約６５%−７０%、約７０%−７５%、約７５%−８０%、約８０%−８５%、約８５%−９０%、又は約９０%−９５%又は先行する値のいずれかの間の範囲での遊離ＰＧ濃度におけるパーセンテージ低下させるようにすることができる。

投与される抗ＰＧ抗体の量は、被験者において見出された腺腫性ポリープの数及びサイズ、投与の形態、経路、及び部位、処置計画（例えば、第２の治療用薬剤が使用されるか否か）、処置されている特定の被験者の年齢及び状態、患者の抗ＰＧ抗体への感受性を含む種々の因子に依存しうる。適切な投与量は、当業者により容易に決定されることができる。最終的には、臨床医が、使用される適切な投与量を決定する。この投与量は、しばしば、適宜、反復することができる。副作用が発生した場合、投与量の量及び／又は頻度を、通常の臨床診療に従って、変える又は低下させることができる。適当な投与量及び治療計画は、当業者に公知の従来技術を使用して、処置の進行をモニターすることにより確立することができる。

効果的な投与量を、最初にインビトロアッセイから推定することができる。例えば、動物における使用のための初回用量を製剤化し、インビトロで測定されたプロガストリンについての抗体の結合親和性である又はそれを上回る抗ＰＧ抗体の循環血液又は血清濃度を達成してもよい。特定の抗体のバイオアベイラビリティを考慮に入れた、そのような循環血液又は血清中濃度を達成するための投与量の算出は、十分に当業者の能力内である。ガイダンスについては、読者は、Fingl & Woodbury, "General Principles" in Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, latest edition, Pagamonon Press及びそれに引用される参考文献を参照する。

初回投与量は、また、インビボのデータ、例えば動物モデルなどから推定することができる。ＣＲＣ腫瘍を含む胃腸腫瘍の発生を遅延又は防止するための化合物の効力をテストするために有用な動物モデルが、当技術分野において周知である。加えて、ＦＡＰの動物モデルが、以下の実施例に記載されている。当業者は、そのような情報を定期的に適応して、ヒトへの投与のために適した投与量を決定することができる。

特定の実施態様において、静脈内用量を、処置の数日から数週間前に数回個人の血清又は血漿ＰＧ濃度を測定し、飽和しうる抗ＰＧ抗体の量、即ち、ＰＧの全てに結合するために十分でありうる量を算出することにより個々の被験者について決定してもよい。当業者により理解される通り、ＰＧの所与の血清又は血漿中濃度について飽和を達成するために必要な任意の特定の抗体の量は、特定の抗体の親和定数に部分的に依存する。目的の特定の抗ＰＧ抗体についての飽和量を算出するための方法は周知である。

飽和を保証するために、算出された飽和量より大きい量を投与してもよく、例えば、算出された飽和量よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又はさらには１０倍大きい量を投与してもよい。静脈内以外の投与様式のために、量を、当技術分野において周知の通りに、薬物動態及びバイオアベイラビリティに基づいて適応することができる。

開示の抗ＰＧ抗体の効果的な用量は、１回（例、ボーラス）投与、複数回投与、又は連続（例、注入）投与当たり約０．００１〜約７５mg/kgの範囲でありうる、あるいは、１回投与、複数回投与、又は連続投与当たり０．０１〜５０００μg/mL血清濃度の血清濃度を達成するためであり、あるいは、処置されている状態、投与経路、ならびに被験体の年齢、体重、及び状態に依存した本明細書における任意の効果的な範囲又は値である。特定の実施態様において、各用量は以下の範囲でありうる：約０．１mg/kg〜約０．５mg/kg；約０．２５mg/kg〜約０．７５mg/kg；約０．５mg/kg〜約１mg/kg；約１mg/kg〜約２mg/kg；約１．５mg/kg〜約２．５mg/kg；約２mg/kg〜約３mg/kg；約２．５mg/kg〜約３．５mg/kg；約３mg/kg〜約４mg/kg；約３．５mg/kg〜約４．５mg/kg；約４mg/kg〜約５mg/kg；約５mg/kg〜約７mg/kg；約６mg/kg〜約８mg/kg；約７mg/kg〜約９mg/kg；約８mg/kg〜約１０mg/kg；約１０mg/kg〜約１５mg/kg；約１２．５mg/kg〜約１７．５mg/kg；約１５mg/kg〜約２０mg/kg；約１７．５mg/kg〜約２２．５mg/kg；約２０mg/kg〜約２５mg/kg；約２２．５mg/kg〜約２７．５mg/kg；約２５mg/kg〜約３０mg/kg；約３０mg/kg〜約４０mg/kg；約３５mg/kg〜約４５mg/kg；約４０mg/kg〜約５０mg/kg；約４５mg/kg〜約５５mg/kg；約５０mg/kg〜約６０mg/kg；約５５mg/kg〜約６５mg/kg；約６０mg/kg〜約７０mg/kg；約６５mg/kg〜約７５mg/kg。他の投与量範囲も可能である。

投与の量、頻度、及び持続時間は、種々の要因、例えば患者の年齢、体重、及び疾患の状態などに依存する。抗ＰＧ処置は、前癌性腺腫性ポリープを検出及び／又は除去されている被験者、ならびに、まだポリープを顕在化させていない、ＦＡＰと診断された被験者において適応される。ＦＡＰを伴うヒトにおいて、ポリープは一般的に次の１０年に出現し始める。抗ＰＧ処置は、ポリープが、ＦＡＰを伴う被験者において検出される前又はその時に開始することができる。散発腺腫性ポリポーシスを伴う被験者について、抗ＰＧ処置は、ポリープが検出された時に開始することができる。抗ＰＧ処置は、また、少なくとも１つのポリープを除去した被験者において開始することができ、従って、より多くのポリープ及びＣＲＣを含む胃腸癌を発生する増加リスクにある。

投与のための処置計画は、２週間から無期限に継続することができる。場合により、処置計画は、例えば、反復投与、例えば、１日１回、１日２回、２日、３日、５日、１週間、２週間、又は１ヶ月毎を提供する。反復投与は、同じ用量で又は異なる用量でありうる。投与は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回又はそれ以上反復することができる。抗ＰＧ抗体の効果的な量は、単回用量として又は処置計画の経過にわたり投与することができる。腺腫性ポリポーシスを発生する素因のある患者のための抗ＰＧ処置の持続時間は、好ましくは、長く、例えば、数年の経過にわたるが、しかし、より短くてもよく、例えば、１〜数ヶ月、〜１年である。

７．５ 経過観察又は処置のために患者を選択する方法、及び処置の効力を決定するための患者モニタリング
操作の任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ＰＧの上昇レベルは、腺腫性ポリープの良性から悪性への形質転換に関連すると考えられる。下の実施例６に示す通り、複数のポリープを伴う被験者が上昇したＰＧレベルを有したのに対し、ポリープを有さなかった被験者は、血清ＰＧの低い又は検出不可能なレベルを有した。この観察に基づき、ＰＧの血漿及び／又は血清レベルを使用して、経過観察又は処置のために患者を特定する、ならびに処置を受けている患者において予防の有効性をモニターすることができる。

ＦＡＰ又は散発性腺腫性ポリポーシスの病歴を伴う個人においてＰＧレベルをモニターすることは、結腸内視鏡検査による経過観察が正当化される被験者、ならびに抗ＰＧ処置の必要がある患者を特定するために有用である。腺腫性ポリープを発生する素因のある個人のための標準的な医療は、３〜５年の間隔での内視鏡検査である。テスト間のこの間隔は、特定の個人において、多数のポリープが発生している、又は癌が経過観察の内視鏡検査が実施される時までに起こっていることを意味しうる。ＰＧレベルについての簡単な血液テストが、容易に、より頻繁な間隔で実施され、内視鏡検査（例、結腸内視鏡検査）を直ぐに受けるべき又は抗ＰＧ処置のための候補である個人を特定することができる。

ＦＡＰと診断された又はポリープが以前に検出されている個人をモニターし、適切なベースラインと比べた、体液、例えば全血、血漿、又は血清中のＰＧレベル、又は濃度を決定することができる。したがって、ＰＧレベルを個人からのサンプルにおいて測定し、次に、ベースラインＰＧレベルと比較する。

ＦＡＰ又は散発性腺腫性ポリポーシスの病歴を伴う被験者におけるＰＧレベルが、被験者における以前の測定値と比べて不変である、又は、被験者が比較されている関連集団についてのベースラインレベルと等しい場合、被験者は、さらなる経過観察が要求されないとしてスコア化される。対照的に、ＰＧ濃度がベースラインを上回る、又は、被験者に置いて期間にわたり上昇するのが見られる場合、被験者は、さらなる経過観察（例えば、結腸内視鏡検査）のため及び抗ＰＧ処置のための候補である。

処置の効力をモニターする目的のために、血液、血漿、又は血清ＰＧレベルを、特定の時間点で抗ＰＧ処置を受けている患者において測定することができ、測定レベルがベースラインレベルを上回る又は下回るかに基づき、処置が効果的であるか否かの指標として使用することができる。この情報は、医療提供者により使用され、抗ＰＧ抗体の投与を継続する又は処置を変更するかどうかを決定することができる。これらの方法を使用して、上に記載する通りに、単独で使用された、又は、他の処置との組み合わせでの抗ＰＧ処置をモニターすることができる。

方法の一部の実施態様において、抗ＰＧ抗体処置を受けている患者の１つ又は複数の体液（例えば全血、血漿、血清など）中でのＰＧレベルを測定し、次に、ベースラインレベルと比較することができる。濃度における経時的な減少、及び／又は特定の時間点での閾値を下回る測定レベルは、効力を示している。経時的な及び／又はベースラインＰＧレベルを上回る濃度の増加は、処置の効力の欠如を示している。典型的には、ＰＧレベルはサンプル中でのＰＧの濃度であり、モル（M）量又はモル／リットル（モル／リットル）で表現する。

ベースラインレベルは、単一の数又は数の範囲でありうる。ベースラインは、患者から取った１つ又は複数の測定値に基づく、又は、個人の集団からのサンプル中でのＰＧの測定値に基づきうる。方法の一部の実施態様において、ベースラインは、同じ患者からの、１つ又は複数の間隔、例えば、抗ＰＧ処置の開始前、処置の経過の間、又は処置が停止した後に得られたＰＧレベルである。一部の実施態様において、ベースラインは、モニタリングを受けている個人のものと同様の特徴を伴う個人の集団における平均ＰＧレベルでありうる。そのような特徴は、しかし、必ずしも限定しないが、性別、年齢、ＡＰＣ遺伝子における突然変異の位置、スピーゲルマン分類におけるステージ、手術歴、抗ＰＧ処置、又は他の処置を含みうる。一部の実施態様において、ベースラインは特定のＰＧレベル、例えば約５０pM、約４０pM、約３０pM、約２０pM、約１０pM、約５pM、約２pM、約１pM又はさらに低い。一部の実施態様において、ベースラインは範囲である。

ＰＧレベルは、当業者が精通する分析技術（例えば、しかし、限定しないが、ＲＩＡ及びＥＬＩＳＡなど）を使用して測定することができる。特定の実施態様において、ＰＧレベルは、プロガストリンのＮ末端を標的化する１つの抗ＰＧ抗体及びプロガストリンのＣ末端を標的化する第２の抗ＰＧ抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法を使用して測定されうる。そのようなサンドイッチアッセイのために有用な例示的なＮ及びＣ末端抗ＰＧ抗体を、後のセクションに記載する。そのようなアッセイにおいて、表面（例えば９６ウェルプレート中のウェルなど）を調製し、それに、既知量の第１の「捕捉」Ｎ末端又はＣ末端抗ＰＧ抗体を結合させる。テストサンプルを次に表面に適用し、インキュベーション期間が続く。表面を次に洗浄し、非結合抗原を除去し、第２「検出」抗ＰＧ抗体を含む溶液を適用し、そこで検出抗体がＰＧの異なるエピトープに結合する（例えば、捕捉抗体がＣ末端抗ＰＧ抗体である場合、Ｎ末端抗ＰＧ抗体が検出抗体として使用され、及び逆もまた同様である）。ＰＧレベルを次に直接的（例えば、検出抗体が検出可能な標識に結合している場合）又は間接的（検出抗ＰＧ抗体に結合する標識二次抗体を通じて）のいずれかで測定する。このアッセイのために、抗体を過剰に使用すべきであり、全てのＰＧが結合され、定量化されるようにする。血漿及び／又は血清ＰＧレベルを測定するための特定のサンドイッチアッセイを、実施例１に提供する。

異なる間隔での複数の測定値を取り、次に、グラフ化し、傾向が存在するか否かを決定しうる。非限定的な例において、ＰＧレベルは、毎週、毎月、又は毎年の間隔で決定することができ、患者は抗ＰＧ抗体を受ける。他の間隔も可能である。

抗ＰＧ抗体を使用した１ラウンドの治療を含む実施態様において、１つ又は複数の測定値を、また、治療の経過の間に取ってもよく、ＰＧレベルに対する抗体を、効果を推定することができる。他のそのような実施態様において、残留抗ＰＧ抗体がサンプリングの間に患者において存在する場合、データは、抗体によるＰＧの隔離に起因するＰＧレベルにおける低下を示すことがあり、この効果が軽減するにつれて上昇が続き、処置が効果的である場合にはその後の減退が続く。さらに他の実施態様において、治療後の測定値を、抗ＰＧ抗体が患者から取り除かれたことを推定した後に取ることができ、そのような抗体によるＰＧの結合がＰＧ濃度の測定の精度に影響を及ぼさないようにする。

食べることは、普通、ガストリンの合成及び分泌を増加させることから、血液ＰＧレベルにおける一過性の増加も起こしうるが、モニターされている患者におけるＰＧレベルの正確な測定に干渉しうる。この効果を回避するために、特に血液サンプル中のＰＧ濃度を決定する場合、サンプルは絶食後に患者から採取することができる。

７．６ 抗ＰＧ抗体
本明細書に開示する方法において有用な抗体は、ガストリン遺伝子の他の産物を上回りプロガストリンに特異的に結合するものである。図１を参照し、ヒトガストリン遺伝子は、１０１アミノ酸ポリペプチド（プレプロガストリンと呼ばれる）に翻訳され、それは、切断されて、ヒトプロガストリン（８０アミノ酸ポリペプチド）を生じるシグナル配列（下線）を含む。プロガストリンは、順に、切断されて、３４アミノ酸産物（配列において、プロガストリンの残基３８−７１に対応する）を生成し、それは、次に、グリシン残基を用いてそのカルボキシ末端で伸長されて、グリシン伸長Ｇ３４（「Ｇ３４−Ｇｌｙ」）を生成する。この切断の副産物は、６アミノ酸ペプチド（Ｃ末端隣接ペプチド、又はＣＴＦＰと呼ばれる）であり、それは、配列において、プロガストリンの残基７５−８０に対応する。Ｇ３４−Ｇｌｙは、次に、さらに切断されて、配列において、プロガストリンの残基５５−７１に対応し、Ｇ１７−Ｇｌｙとして言及される１７残基ポリペプチドを生成する。Ｇ３４−Ｇｌｙ及びＧ１７−ＧｌｙのＣ末端グリシンの除去、それに続くＣ末端アミド化は、それぞれＧ３４及びＧ１７をもたらし、それらの両方がＣ末端アミド化されている。

本明細書において使用する通り、抗体は、それが全長プロガストリンに結合するが、しかし、ＣＴＦＰ、アミド化ガストリン、又はグリシン伸長ガストリンには全く結合しない場合、ｈＰＧ「について高度に特異的」又はｈＰＧに「高度に特異的に結合する」、及び、標準的な結合アッセイにおいて測定した通り、それがＣＴＦＰ及びガストリン遺伝子の他の産物よりも少なくとも約５倍大きなｈＰＧの結合を示す場合、ｈＰＧ「について特異的」又はｈＰＧに「特異的に結合する」。特定の抗ｈＰＧ抗体の特異性を評価するために使用することができる特定のＥＬＩＳＡアッセイが、実施例２に提供される。

そのような高度に特異的及び／又は特異的な抗ｈＰＧ抗体（本明細書において「抗ｈＰＧ抗体」として言及される）は、ポリクローナル（「抗ｈＰＧ ＰＡｂ」）又はモノクローナル（「抗ｈＰＧ ＭＡｂ」）であるが、治療的使用、一部の例において、診断又は他のインビトロでの使用のために、モノクローナル抗体が好ましい。

抗ｈＰＧ抗体により結合されるエピトープは決定的ではない。有用な抗ｈＰＧ抗体は、ｈＰＧのＮ末端領域、ｈＰＧのＣ末端領域、又はｈＰＧの異なる領域に結合しうる。近年、少なくともモノクローナル抗ｈＰＧ抗体について、抗ｈＰＧ抗体を産生するために使用される抗原の選択が重要でありうることが発見されている（国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００６３２９号（２０１０年１０月１５日出願）及び米国出願第１２／９０６，０４１号（２０１０年１０月１５日出願）、その開示及び具体的に開示される抗ｈＰＧ抗体が参照により本明細書において組み入れられる；以下、‘３２９及び‘０４１出願としてそれぞれ言及される）。‘３２９及び‘０４１出願において開示される通り、ｈＰＧに由来する全ての抗原が、生理学的条件下でｈＰＧに特異的に結合するモノクローナル抗体の産生を刺激するわけではない。実際に、ポリクローナル抗ｈＰＧ抗体を成功裏に産生するために使用されてきた特定の抗原（例えば全長組換えｈＰＧ（例、ＷＯ０８／０７６４５４ Singhを参照のこと）及びｈＰＧのＣ末端の最後の１０アミノ酸に対応するペプチド（ＷＯ０７／１３５５４２ Hollande et al.を参照のこと）など）は、モノクローナル抗体の生成に失敗した。‘３２９及び‘０４１出願において記述される通り、ｈＰＧ配列内の抗原性Ｎ末端及びＣ末端配列が同定されており、ｈＰＧに特異的に結合するモノクローナル抗体を生成するために使用することができる。興味深いことに、抗原性配列は、それに固有であるｈＰＧ配列の領域に限定する必要はない。ガストリン遺伝子の他の産物と共通の配列の領域を有するペプチド抗原、例えば、Ｇ１７、Ｇ３４、及びＣＴＦＰは、ｈＰＧに結合するだけでなく、しかし、それに特異的に結合するモノクローナル抗体をもたらす。

ｈＰＧのＮ末端領域に対応する配列を有するペプチド抗原を使用して入手可能であり及び／又はｈＰＧのＮ末端領域に結合する抗ｈＰＧ抗体を、本明細書において「Ｎ末端抗ＰＧ抗体」として言及する。ｈＰＧについて特異的なポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方を得るために適した免疫原を構築するために使用することができるｈＰＧの特定の例示的な抗原性領域は、ｈＰＧの残基１〜１４：ＳＷＫＰＲＳＱＱＰＤＡＰＬＧ（配列番号２５）に対応する。Ｎ末端抗ｈＰＧ抗体を得るために有用な例示的な免疫原、ならびに、これらの例示的な免疫原を用いて得られたＮ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体のＣＤＲならびにＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列を以下の表２Ａ及び実施例のセクションに提供する：

ｈＰＧのＣ末端領域に対応する配列を有するペプチド抗原を使用して入手可能であり及び／又はｈＰＧのＣ末端領域に結合する抗ｈＰＧ抗体を、本明細書において「Ｃ末端抗ｈＰＧ抗体」として言及する。ポリクローナル及びモノクローナルＣ末端抗ｈＰＧ抗体の両方を得るために有用な免疫原を構築するために使用することができる特定の例示的な抗原性領域は、ｈＰＧの残基５５〜８０：ＱＧＰＷＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦＧＲＲＳＡＥＤＥＮ（配列番号２７）に対応する。Ｃ末端抗ｈＰＧ抗体を得るために有用なこの抗原を含む例示的な免疫原、ならびに、これらの例示的な免疫原を用いて得られたＣ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体のＣＤＲならびにＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列を以下の表２Ｂ及び実施例のセクションに提供する。

表２Ａ及び２Ｂに提供する例示的な抗ｈＰＧモノクローナル抗体ＭＡｂ１−ＭＡｂ２３により結合される特定のエピトープは、ＳＰＯＴ技術及びアラニンスキャンを使用してマッピングされた（Laune et al., 2002, J. Immunol. Methods 267: 53-70及びLaune, 1997, J. Biol. Chem. 272: 30937-30944にそれぞれ記載される通り）（‘３２９出願の実施例６も参照のこと）。

ＳＰＯＴ技術において、推定エピトープに及ぶ１５のアミノ酸ペプチド配列を生成し、ニトロセルロース膜上にスポットし、それを、次に、テスト抗体でプローブし、抗体により認識される最小エピトープ配列を決定する。アラニンスキャンを使用して、抗体結合のために決定的であるエピトープ内の残基を決定する。推定エピトープ内の各残基が、１つずつ、アラニンに突然変異しており、アラニン含有ペプチドを、次に、テスト抗体を用いてプローブする。

Ｎ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体ＭＡｂ１−４及び１５−２０について、エピトープは少なくとも以下の配列を含む：ＤＡＰＬＧ（配列番号２８）、ＰＤＡＰＬＧ（配列番号２９）、ＰＲＳＱＱＰＤ（配列番号３０）、ＷＫＰＲＳＱＱＰＤ（配列番号３１）、又はＷＫＰＲＳＱＱＰＤＡＰＬＧ（配列番号３２）（以下の表３Ａに示す通り）。

Ｃ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体ＭＡｂ５−７、９−１２、１４、及び２１−２３について、エピトープは少なくとも以下の配列を含む：ＦＧＲＲ（配列番号３３）、ＭＤＦＧＲ（配列番号３４）、ＡＥＤＥＮ（配列番号３５）、及びＧＷＭＤＦＧＲＲ（配列番号３６）（以下の表３Ｂに示す通り）。

エピトープマッピング実験では、抗ｈＰＧ ＭＡｂ２及びＭＡｂ４が同じエピトープに結合することが明らかになる；抗ｈＰＧ ＭＡｂ１及びＭＡｂ３はほぼ同じエピトープに結合する；ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、及びＭＡｂ２０はほぼ同じエピトープに結合する；ＭＡｂ１５及びＭＡｂ１６はほぼ同じエピトープに結合する；抗ｈＰＧ ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ９、及びＭＡｂ１２は同じエピトープに結合し、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１０とほぼ同じエピトープに結合する；ならびに抗ｈＰＧ ＭＡｂ１１及びＭＡｂ１４はほぼ同じエピトープに結合する。

本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用なＮ末端抗ＰＧ抗体の特定の実施態様は、ｈＰＧの残基１０〜１４（配列番号２８）、ｈＰＧの残基９〜１４（配列番号２９）、ｈＰＧの残基４〜１０（配列番号３０）、ｈＰＧの残基２〜１０（配列番号３１）、又はＰＧの残基２〜１４（配列番号３２）を含むエピトープに結合する抗体を含む。

本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用なＣ末端抗ＰＧ抗体の特定の実施態様は、ｈＰＧの残基７１〜７４（配列番号３３）、ｈＰＧの残基６９〜７３（配列番号３４）、ｈＰＧの残基７６〜８０（配列番号３５）、又はｈＰＧの残基６７〜７４（配列番号３６）を含むエピトープに結合する抗体を含む。

本明細書に開示する方法及びキットにおいて有用なＮ末端及びＣ末端抗ｈＰＧ抗体は、表２Ａ及び２Ｂに提供するものに加えて、例示的なＭＡｂ１−２３を用いた、あるいは、後のセクションにおいてより詳細に記載する通り、Ｎ又はＣ末端エピトープに結合する他の参照抗体を用いた競合結合アッセイにおいて同定することができる。

‘３２９及び‘０４１出願においても報告される通り、全ての抗ｈＰＧ抗体（ｈＰＧについて高い程度の特異性及び親和性を示すものでさえ）が、ｈＰＧの生物学的活性を中和するわけではない。例えば、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１４は約６pMのＫＤでｈＰＧに結合するが、それは少なくともテストした濃度では、インビトロアッセイにおいて結腸直腸癌細胞の成長を阻害しなかったのに対し、他の抗ｈＰＧモノクローナル抗体（例えば、ＭＡｂ１−ＭＡｂ１３及びＭＡｂ１５−ＭＡｂ２３）は様々な程度まで阻害活性を示した。ｈＰＧに特異的に結合する非中和性及び中和性抗体の両方が本開示の診断方法のために有用であるが、治療方法のために有用な抗ｈＰＧ抗体は中和活性を示すはずである。

本明細書において使用する通り、「中和抗ｈＰＧ抗体」は、非特異的抗体を用いて処理したコントロールサンプルと比較して、抗ｈＰＧ抗体を用いて処理したテストサンプル中の生きたＬＳ１７４Ｔの数における統計的に有意な低下をもたらす抗ｈＰＧ抗体である。任意の特定の抗ｈＰＧ抗体が中和する能力を評価するための特定のアッセイが、実施例３に記載される。このアッセイにおいて生細胞の数における少なくとも約５０%低下を示すそれらの抗ｈＰＧ抗体は、胃腸癌（ＣＲＣを含む）を防止する方法において特に有用であると考えられるが、このアッセイにおける生細胞の数におけるより低いレベルの中和活性、例えば、４０%、３０%、２０%、１５%、又はさらには１０%の統計的に有意な低下を示す抗ｈＰＧ抗体が治療的利益を提供することが期待される。

したがって、一部の実施態様、例えば、治療的な実施態様において、有用な抗ｈＰＧ抗体は中和性である。‘３２９及び‘０４１出願において開示される通り、抗ｈＰＧモノクローナル抗体の能力は、エピトープ依存的ではない。なぜなら、Ｎ末端及びＣ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体の両方が、ＡＰＣ遺伝子において突然変異を持つ結腸直腸癌細胞を用いたアッセイにおいて中和活性を示したからである。このように、一部の特定の実施態様において、中和性抗ｈＰＧ抗体はＮ末端中和性抗ｈＰＧ抗体である。他の実施態様において、中和性抗ｈＰＧ抗体はＣ末端中和性抗ｈＰＧ抗体である。

任意の特定の抗ｈＰＧ抗体の親和性は決定的ではない。しかし、一部の使用のために、少なくとも約１μMの親和性を示す抗体が好まれうる。治療的使用のために、少なくとも約９０nM、８０nM、７０nM、６０nM、５０nM、４０nM、３０nM、２０nM、１５nM、１０nM、７nM、６nM、５nM、４nM、３nM、２nM、１nM、０．１nM、０．０１nM、０．００１nM又はさらに大きい親和性が望まれうる。表２Ａ及び２Ｂにおいて同定された抗ｈＰＧモノクローナル抗体の測定された親和性は、以下の表４に記述する通り、１０^−６〜１０^−１２Mの範囲である：

特定の所望の適用のために特に適する親和性を有する抗ＰＧモノクローナル抗体を、これらの間より容易に選択する、あるいは、本明細書に記載する抗ｈＰＧ抗体の種々の免疫原、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、可変重鎖（Ｖ_Ｈ）及び可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）配列を使用して生成又は設計することができる。任意の特定の抗ＰＧモノクローナル抗体の親和性は、当技術分野において周知の又は本明細書に記載する技術（例えばＥＬＩＳＡ、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、ＢＩＡｃｏｒｅ、又は蛍光偏光アッセイなど）を使用して決定することができる。特定のアッセイを実施例４に提供する。

表２Ａ及び２Ｂに記述する通り、いくつかのＮ末端及びＣ末端モノクローナル抗ｈＰＧ抗体が同定されている。これらの抗体の全てがｈＰＧについて特異的であり、ＭＡｂ１４の例外を伴い、全てが結腸直腸癌細胞を用いたテストにおいて中和活性を示した。抗体を得るための有用なハイブリドーマのいくつかが、２０１０年１０月６日に、ブダペスト条約に従って、Collection Nationale de Cultures de Microorganismes（ＣＮＣＭ）に寄託された。抗ｈＰＧ ＭＡｂ１−２３を産生するハイブリドーマの指定名称及び寄託されたそれらのハイブリドーマの寄託登録番号を表２Ａ及び２Ｂに提供する。また、抗体のいくつかについて、それらの可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）、Ｖ_Ｌ相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びＶ_Ｈ ＣＤＲのアミノ酸配列が決定されている。これらのアミノ酸配列、及び開示を通じてそれらを参照するために使用される省略命名法も表２Ａ及び２Ｂに提供する。簡単には、マウス重鎖及び軽鎖可変ドメインは、本明細書においてｍＶ_Ｈ及びｍＶ_Ｌとして言及され、対応するモノクローナル抗体の番号が続く（例えば、抗ｈＰＧ ＭＡｂ３の可変軽鎖及び可変重鎖についてそれぞれｍＶ_Ｈ．３及びｍＶ_Ｌ．３）。同様に、ヒト重鎖及び軽鎖可変ドメインは、本明細書においてｈＶ_Ｈ及びｈＶ_Ｌとして言及され、対応するモノクローナル抗体の番号が続く。３つの可変重鎖ＣＤＲ及び３つの可変軽鎖ＣＤＲは、それぞれＶ_Ｈ ＣＤＲ１、２、又は３及びＶ_Ｌ ＣＤＲ１、２、又は３として言及され、特定の抗ｈＰＧモノクローナル抗体の番号が続く。例えば、ＭＡｂ３のＶ_Ｈ ＣＤＲ１はＶ_Ｈ ＣＤＲ１．３と表示され、及び、ＭＡｂ３のＶ_Ｌ ＣＤＲ １はＶ_Ｌ ＣＤＲ１．３と表示される。ＭＡｂ３のＶ_Ｈ ＣＤＲ２はＶ_Ｈ ＣＤＲ２．３と表示され、及び、ＭＡｂ３のＶ_Ｌ ＣＤＲ２はＶ_Ｌ ＣＤＲ２．３と表示される。

ほぼ同じエピトープに結合する抗ｈＰＧモノクローナル抗体の対応するＣＤＲ及び／又はＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ鎖を交換して、本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用な新たな抗ｈＰＧモノクローナル抗体をもたらしうることが期待される。例えば、上に記述する通り、例示的な抗ｈＰＧモノクローナル抗体ＭＡｂ５及びＭＡｂ６は同じエピトープに結合する。そのＶ_Ｌ鎖において、これらの２つの抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲの種々の組み合わせ、及び／又は、そのＶ_Ｈ鎖において、これらの２つの抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲの種々の組み合わせを含む抗ｈＰＧモノクローナル抗体を設計することができる。可能な種々の組み合わせを例証するための特定の非限定的な例として、そのような抗体は、そのＶ_Ｌ鎖において、ＭＡｂ５のＣＤＲ１及び２（それぞれＶ_Ｌ ＣＤＲ １．５及びＶ_Ｌ ＣＤＲ ２．５）ならびにＭＡｂ６のＣＤＲ３（Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．６）、及び、そのＶ_Ｈ鎖において、ＭＡｂ６のＣＤＲ１（Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．６）ならびにＭＡｂ５のＣＤＲ２及び３（それぞれＶ_Ｈ ＣＤＲ ２．５及びＶ_Ｈ ＣＤＲ ３．５）を含みうる。寄託されているハイブリドーマにより産生される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列（超可変領域としても公知）は、従来の手段を使用して得ることができる。

当技術分野において公知の通り、抗体の超可変領域を描写するアミノ酸位置／境界は、状況及び当技術分野において公知の種々の定義に依存して変動しうる。可変ドメイン内の一部の位置を、ハイブリッド超可変位置として見なすことができ、それにおいて、これらの位置は、１セットの基準下で超可変領域内と見なすことができ、異なるセットの基準下で超可変領域外と見なす。これらの位置の１つ又は複数は、また、伸長した超可変領域において見出すことができる。本明細書に記載する抗ＰＧ抗体は、これらのハイブリッド超可変位置において改変を含みうる。天然重及び軽鎖の可変ドメインは、大部分がβシート配置（３つのＣＤＲにより連結され、それは、βシート構造を連結し、一部の場合において、その一部を形成するループを形成する）を採用することにより、各々、４つのＦＲ領域を含む。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域により近接して、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順番で、他の鎖からのＣＤＲと一緒に保持され、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, Md.1987を参照のこと）。本明細書において使用する通り、免疫グロブリンのアミノ酸残基のナンバリングを、他に示さない場合、Kabat et al.の免疫グロブリンのアミノ酸残基ナンバリングに従って行う。

表２Ａを参照して、本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用なＮ末端抗ｈＰＧ抗体の特定の実施態様は、しかし、限定しないが、以下を含む：
（ａ）配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｌ ＣＤＲに対応するＶ_Ｌ ＣＤＲ、及び、配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｈ ＣＤＲに対応するＶ_Ｈ ＣＤＲを有する抗体；
（ｂ）配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲに対応するＶ_Ｌ ＣＤＲ及びＶ_Ｈ ＣＤＲを有する抗体；
（ｃ）抗体、それにおいて：
（ｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １はＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．３」；配列番号４）、ＱＳＬＶＨＳＳＧＶＴＹ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．４」；配列番号１０）、ＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．１６」；配列番号５０）、及びＳＱＨＲＴＹＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．１９」；配列番号５１）より選択される；
（ｉｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２はＫＶＳ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．３」及び（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．４」；配列番号５）、ＬＶＳ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．１６」；配列番号５３）、及びＶＫＫＤＧＳＨ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．１９」；配列番号５４）より選択される；
（ｉｉｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ３はＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．３」；配列番号６）、ＳＱＳＴＨＶＰＰＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．４」；配列番号１１）、ＷＱＧＴＨＳＰＹＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．１６」；配列番号５７）、及びＧＶＧＤＡＩＫＧＱＳＶＦＶ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．１９」；配列番号５８）より選択される；
（ｉｖ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ１はＧＹＩＦＴＳＹＷ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．３」；配列番号１）、ＧＹＴＦＳＳＳＷ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．４」；配列番号７）、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．１６」；配列番号３９）、及びＧＹＳＩＴＳＤＹＡ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．１９」；配列番号４０）より選択される；
（ｖ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２はＦＹＰＧＮＳＤＳ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．３」；配列番号２）、ＦＬＰＧＳＧＳＴ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．４」；配列番号８）、ＩＮＰＳＮＧＧＴ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．１６」；配列番号４３）、及びＩＳＦＳＧＹＴ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．１９」；配列番号４４）より選択される；及び
（ｖｉ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３はＴＲＲＤＳＰＱＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．３」；配列番号３）、ＡＴＤＧＮＹＤＷＦＡＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．４」配列番号９）、ＴＲＧＧＹＹＰＦＤＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．１６」；配列番号４７）、及びＡＲＥＶＮＹＧＤＳＹＨＦＤＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．１９」；配列番号４８）より選択される；
（ｄ）配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｌに対応するＶ_Ｌ、及び、配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｈに対応するＶ_Ｈを有する抗体；及び
（ｅ）配列において、ＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ４、ＭＡｂ１５、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１８、ＭＡｂ１９、又はＭＡｂ２０のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈに対応するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈを有する抗体。

表２Ｂを参照して、本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用なＣ末端抗ｈＰＧ抗体の特定の実施態様は、しかし、限定しないが、以下を含む：
（ａ）配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｌ ＣＤＲに対応するＶ_Ｌ ＣＤＲ、及び、配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｈ ＣＤＲに対応するＶ_Ｈ ＣＤＲを有する抗体；
（ｂ）配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲに対応するＶ_Ｌ ＣＤＲ及びＶ_Ｈ ＣＤＲを有する抗体；
（ｃ）抗体、それにおいて：
（ｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１はＫＳＬＲＨＴＫＧＩＴＦ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．８」；配列番号４９）及びＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ １．１３」；配列番号５０）より選択される；
（ｉｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２はＱＭＳ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．８」；配列番号５２）及び ＬＶＳ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ２．１３」；配列番号５３）より選択される；
（ｉｉｉ）Ｖ_Ｌ ＣＤＲ３はＡＱＮＬＥＬＰＬＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．８」；配列番号５５）及びＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（「Ｖ_Ｌ ＣＤＲ ３．１３」；配列番号５６）より選択される；
（ｉｖ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ１はＧＦＴＦＴＴＹＡ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．８」；配列番号３７）及びＧＦＩＦＳＳＹＧ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ １．１３」；配列番号３８）より選択される；
（ｖ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２はＩＳＳＧＧＴＹＴ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．８」；配列番号４１）及びＩＮＴＦＧＤＲＴ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ２．１３」；配列番号４２）より選択される；及び
（ｖｉ）Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３はＡＴＱＧＮＹＳＬＤＦ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．８」；配列番号４５）及びＡＲＧＴＧＴＹ（「Ｖ_Ｈ ＣＤＲ ３．１３」；配列番号４６）より選択される；
（ｄ）配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｌに対応するＶ_Ｌ、及び、配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｈに対応するＶ_Ｈを有する抗体；及び
（ｅ）配列において、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ７、ＭＡｂ８、ＭＡｂ９、ＭＡｂ１０、ＭＡｂ１１、ＭＡｂ１２、ＭＡｂ１３、ＭＡｂ１４、ＭＡｂ２１、ＭＡｂ２２、又はＭＡｂ２３のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈに対応するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈを有する抗体。

当業者により理解される通り、診断方法において有用な抗ｈＰＧ抗体は、任意の起源（例えば、哺乳動物（例、ヒト、霊長類、げっ歯類、ヤギ、又はウサギ）、非哺乳動物、又は天然のキメラ（１を上回る種に由来する）を含む）でありうる。動物（ヒトを含む）における治療的使用のために適した抗体は、好ましくは、処置されることが意図される同じ種に由来する、あるいは、改変又は設計され、非免疫原性である、又は処置されている動物において低下した免疫原性を有する。ヒトにおける治療的使用のために有用な抗ｈＰＧ抗体の特定のクラスは、ヒト化抗体のクラスであり、以下により詳細に考察する。本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用な抗ｈＰＧ抗体は、また、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ（例、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）、又はＩｇＭを含む）でありうる、又はそれに由来しうる。治療的使用のために設計された抗ｈＰＧ抗体は、好ましくは、ＩｇＧアイソタイプである。

一部の実施態様において、本明細書に記載する治療的方法のために有用な抗ｈＰＧ抗体はヒト化される。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、それにおいて、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものであり、「ＣＤＲ移植」として言及することができる。ヒト化抗体は、また、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものを含むことができる。抗体をヒト化するための方法（ヒト化抗体を設計するための方法を含む）は、当技術分野において周知である。例えば、Lefranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77；Lefranc et al., 2009, Nucl. Acids Res. 37: D1006-1012；Lefranc, 2008, Mol. Biotechnol. 40: 101-111；Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323-7；米国特許第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、及び第６，１８０，３７０号、Queen et al.；ＥＰ２３９４００；ＰＣＴ公開ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；ＥＰ５９２１０６；ＥＰ５１９５９６；Padlan, 1991, Mol. Immunol. 28: 489-498；Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7: 805-814；Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91: 969-973；及び米国特許第５，５６５，３３２号（その開示は、その全体において参照により本明細書により組み入れられる）。

非ヒト抗ｈＰＧ抗体のＣＤＲに対応するＣＤＲ配列を有する抗体のヒト化バージョン（例として、限定しないが、表２Ａに提供する種々のＮ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体及び表２Ｂに提供する種々のＣ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体を含む）を、これらの周知の方法を使用して得ることができる。選択された抗ｈＰＧ抗体のヒト化Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ鎖の予測配列を、表２Ａ及び２Ｂに提供する。ヒト化抗体の特定の例は、以下を含む抗体を含む：
（ａ）本明細書に開示される任意の３つのＶ_Ｌ ＣＤＲ及び任意の３つのＶ_Ｈ ＣＤＲ；
（ｂ）配列番号２１に対応するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２２に対応するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号２３に対応するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２４に対応するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号７５、７７、及び７９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号７６及び７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号８０及び８２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８１及び８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号８４、８６、及び８８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８５、８７、及び８９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び
（ｇ）配列番号９０、９２、及び９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号９１、９３、及び９５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。

当業者により認識される通り、特定の結合特性（例えば、目的の特定のエピトープに結合する能力など）を有する抗ｈＰＧ抗体は、本明細書に記載する種々の抗原及び免疫原を使用し、目的の参照抗体とｈＰＧ結合について競合するそれらの能力を評価して容易に得ることができる。本明細書に記載する抗ｈＰＧ抗体のいずれかを、そのような競合アッセイにおいて参照抗体として利用することができる。目的のビオチン化参照抗ｈＰＧ抗体を用いてｈＰＧ結合について競合する抗体の能力を評価するために有用な特定のアッセイを、実施例５に提供する。

参照抗ｈＰＧ抗体と任意のテスト抗体（種又はアイソタイプと無関係）の間での抗体競合試験を行う際、最初に、参照を、直接的（例えばラジオアイソトープ又はフルオロフォアなど）又は間接的（例えばビオチン（蛍光標識ストレプトアビジンとの結合を介して検出可能）又は酵素（酵素反応を介して検出可能）など）のいずれかで検出可能な標識を用いて標識し、その後の同定を可能にしうる。この場合において、標識参照抗ｈＰＧ抗体（固定又は増加濃度で）を、既知量のｈＰＧを用いてインキュベートし、ｈＰＧ：標識抗ｈＰＧ抗体複合体を形成する。非標識テスト抗体を、次に、複合体に加える。複合標識の強度を測定する。テスト抗体が、重複するエピトープに結合することにより、ｈＰＧについて標識参照抗ｈＰＧ抗体と競合する場合、複合標識の強度は、テスト抗体の非存在において行うコントロール実験と比べて減少する。

結合競合アッセイを行うための多数の方法が公知であり、適応して、上に及び実施例５に記載するアッセイと同等の結果をもたらすことができる。

抗体は、それが、競合結合アッセイ、及び、具体的には、実施例５の競合結合アッセイにおいて参照抗ｈＰＧ抗体のｈＰＧへの結合を、少なくとも５０%だけ（より高いレベルの低下、例えば６０%、７０%、８０%、９０%、又はさらには１００%が望まれうる）、テスト抗体濃度の範囲０．０１−１００μg/mL（例、０．０１μg/mL、０．０８μg/mL、０．４μg/mL、２μg/mL、１０μg/mL、５０μg/mL、又は１００μg/mL、あるいは記述する範囲内の他の濃度）で低下させる場合、参照抗ｈＰＧ抗体とｈＰＧ結合について競合すると考えられ、このように、参照抗ｈＰＧ抗体とほぼ同じ又は重複するｈＰＧのエピトープに結合すると考えられる。

当業者は、一部の状況、例えば、診断及びモニタリングの状況において、抗ＰＧ抗体を標識することが望まれうることを理解するであろう。そのような標識は検出及び定量化のために有用である。適した標識が当技術分野において周知であり、それらが直接的に観察可能又は検出可能である点で「直接的」（例えば、フルオロフォア又はラジオアイソトープ）、あるいは、それらが観察可能又は検出可能なシグナルを産生する何か他のものと相互作用する点で間接的（例えば、基質上で作用し、検出可能なシグナルを産生する酵素、又は、結合分子、例えば、標識したストレプトアビジン分子に結合するビオチンなど）でありうる。多数の標識システム、ならびにそれらを用いて抗体を標識するための手段が、当技術分野において公知であり、本明細書において使用のために熟慮される。

本明細書に記載する方法及びキットにおいて有用な種々の抗ｈＰＧ抗体は、全長抗体を用いて例示されてきたが、当業者は、結合フラグメント、あるいは全長抗体又は結合フラグメントから設計される又はそれに由来するサロゲート抗体も使用してもよいことを理解するであろう。適したフラグメント、サロゲートなどは、しかし、限定しないが、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｖＩｇＧ、ｓｃＦｖフラグメント、及びサロボディ（ｓｕｒｒｏｂｏｄｙ）を含む。他に特定しない場合、用語「抗体」は、本明細書において使用する通り、全ての形態の抗体及び「抗体様」サロゲート分子（一本鎖抗体、サロボディ、及び結合フラグメントを含む）を含むことを意図する。自然発生する抗体に典型的な構造を有する抗体は、本明細書において「天然抗体」として言及される。

７．７ 抗ＰＧ抗体を産生する方法
本明細書に記載する方法において有用な抗ＰＧ抗体は、標準的な周知の方法を使用して得てもよい。本明細書に記載する方法において有用な抗ＰＧ抗体を発現するために、部分又は全長の軽及び重鎖をコードするＤＮＡを発現ベクター中に挿入し、遺伝子が、転写及び翻訳制御配列に操作的に結合されるようにする。この状況において、用語「操作的に結合される」は、抗体遺伝子がベクター中に連結され、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節するそれらの意図される機能を果たすようにすることを意味することを意図する。発現ベクター及び発現制御配列を選び、使用する発現宿主細胞と適合させる。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子を別々のベクター中に挿入することができる。又は、より典型的には、両方の遺伝子を同じ発現ベクター中に挿入する。

抗体遺伝子は、標準的な方法により発現ベクター中に挿入される（例、抗体遺伝子フラグメント及びベクター上の相補的制限部位のライゲーション、又は、制限部位が存在しない場合には平滑末端のライゲーション）。抗ＰＧ抗体の軽又は重鎖配列の挿入前に、発現ベクターは既に抗体定常領域配列を保有することができる。例えば、抗ＰＧ抗体Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列を全長抗体遺伝子に変換する１つのアプローチは、それらを、重鎖定常及び軽鎖定常領域をそれぞれ既にコードする発現ベクター中に挿入することであり、Ｖ_Ｈセグメントがベクター内のＣＨセグメントに操作的に結合され、Ｖ_Ｌセグメントがベクター内のＣ_Ｌセグメントに操作的に結合されるようにする。加えて又は代わりに、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードしうる。抗体鎖遺伝子をベクター中にクローン化することができ、シグナルペプチドをインフレームで抗体鎖遺伝子のアミノ末端に結合するようにする。シグナルペプチドは免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）でありうる。

抗体鎖遺伝子に加えて、開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞において抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保有する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー、及び抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。そのような調節配列は、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 (Academic Press, San Diego, CA, 1990)に記載されている。発現ベクターの設計（調節配列の選択を含む）は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの因子に依存しうることが当業者により理解されうる。哺乳動物宿主細胞発現のための適した調節配列は、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現に向けるウイルスエレメント、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）（例えばＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（例、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーなどを含む。ウイルス調節エレメント及びその配列のさらなる記載については、例えば、米国特許第５，１６８，０６２号（Stinskiによる）、米国特許第４，５１０，２４５号（Bell et al.による）、及び米国特許第４，９６８，６１５号（Schaffner et al.による）を参照のこと。

抗体鎖遺伝子及び調節配列に加えて、組換え発現ベクターは、追加の配列、例えば宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例、複製起点）及び選択可能なマーカー遺伝子などを保有することができる。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を促進させる（例、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、及び第５，１７９，０１７号（全てAxel et al.による）を参照のこと）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、薬物（例えばＧ４１８、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ハイグロマイシン、又はメトトレキサートなど）への耐性を、ベクターが導入された宿主細胞に与える。適した選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅を伴うＤＨＦＲ宿主細胞における使用のため）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）を含む。軽及び重鎖の発現のために、重及び軽鎖をコードする発現ベクターを、標準的な技術により宿主細胞中にトランスフェクトする。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、原核又は真核宿主細胞中への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される多種多様の技術、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することを意図する。

原核又は真核生物のいずれかの宿主細胞において本明細書に記載する抗体を発現させることが可能である。特定の実施態様において、抗体の発現が、適切に折り畳まれた、免疫学的に活性な抗体の最適な分泌のために、真核細胞（例、哺乳動物宿主細胞）中で実施される。開示の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Urlaub & Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されるＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含み、例えば、Kaufman & Sharp, 1982, Mol. Biol. 159: 601-621に記載される通りにＤＨＦＲ選択可能なマーカーと使用される）、ＮＳ０ミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、及びＳＰ２／０細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞中に導入した場合、抗体が、宿主細胞における抗体の発現又は宿主細胞が成長する培養培地中への抗体の分泌を可能にするために十分な期間にわたり宿主細胞を培養することにより産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞は、また、インタクトな抗体の部分（例えばＦａｂフラグメント又はｓｃＦｖ分子など）を産生するために使用することができる。上の手順のバリエーションは本開示の範囲内であることが理解される。例えば、本明細書中に記載する抗ＰＧ抗体の軽鎖又は重鎖のいずれか（両方ではない）をコードするＤＮＡを用いて宿主細胞をトランスフェクトすることが望まれうる。

組換えＤＮＡテクノロジーを使用し、ＰＧへの結合のために必要ではない軽及び重鎖のいずれか又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全てを除去することもできる。そのような切断ＤＮＡ分子から発現される分子は、また、本明細書に記載する方法において有用である。

抗ＰＧ抗体の組換え発現のために、宿主細胞を、２つの発現ベクター、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１ベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２ベクターを用いてコトランスフェクトすることができる。典型的には、２つのベクターは、各々、別々の選択可能なマーカーを含む。あるいは、重及び軽鎖の両方のポリペプチドをコードする単一のベクターを使用することができる。

抗ＰＧ抗体を化学合成により産生することもできる（例、Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.に記載される方法による）。変異抗体を、また、無細胞プラットフォームを使用して生成することができる（例、Chu et al., 2001, Biochemia No. 2 (Roche Molecular Biologicals)を参照のこと）。

一旦、抗ＰＧ抗体が組換え発現又は合成手段により産生されれば、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当該分野において公知の任意の方法により、例えば、クロマトグラフィー（例、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ又はプロテインＧ選択後のＰＧについての親和性により、及びサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心、溶解度差により、又はタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術により精製することができる。さらに、抗ＰＧ抗体又はその結合フラグメントを、本明細書に記載する又は当技術分野において他で公知の異種ポリペプチド配列に融合し、精製を促進することができる。

８．実施例
８．１ 実施例１：血漿又は血清ＰＧレベルの定量化
ＰＧの血漿及び／又は血清レベルは、以下のアッセイを使用して便利に決定することができる。９６ウェルマイクロタイタープレートを、０．５〜１０μg/mLのＣ末端抗ｈＰＧ抗体、例えば、ウサギＣ末端抗ｈＰＧポリクローナル抗体、又はＣ末端抗ｈＰＧ抗体（本明細書に記載する）を用いてコーティングし、次に、一晩インキュベートする。プレートを、次に、ＰＢＳ−TWEEN（０．０５%）中で３回洗浄し、ＰＢＳ−TWEEN（０．０５%）中の２%（ｗ／ｖ）脱脂乾燥ミルクを用いてブロックする。別々に、テストサンプル、コントロールサンプル（ブランク又はＰＧ陰性血漿又は血清サンプル）、及び約５ｐＭ（０．５×１０^−１１M）〜約０．１nM（１×１０^−１０M）のｈＰＧ参照基準（ＰＧ陰性血漿又は血清中で希釈した凍結乾燥ｈＰＧ）を適切な希釈剤（例、ＰＢＳ−TWEEN ０．０５%）中で調製する。サンプルを、コーティングしたプレート上で２〜４時間にわたり３７℃で、又は、あるいは、１２〜１６時間２１℃でインキュベートする。インキュベーション後、プレートを、ＰＢＳ−TWEEN（０．０５%）を用いて３回洗浄し、０．００１〜０．１μg/mLのＮ末端抗ｈＰＧ抗体、例えば、ポリクローナルＮ末端抗ｈＰＧ抗体又はＮ末端モノクローナル抗ｈＰＧ抗体（本明細書に記載する）を用いてインキュベートし、２１℃で３０分間にわたり西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（Nakane et al., 1974, J. Histochem. Cytochem. 22(12): 1084-1091を参照のこと）に共役させる。プレートを次にＰＢＳ−TWEEN（０．０５%）中で３回洗浄し、ＨＲＰ基質を２１℃で１５分間にわたり加える。反応を、１００μLの０．５Ｍ硫酸を加えることにより停止させ、光学密度測定値を４０５nmで取る。テストサンプルｈＰＧレベルを、ｈＰＧ参照基準に由来する測定値から構築された標準曲線との比較により決定する。

８．２ 実施例２：抗ｈＰＧ抗体の特異性を評価するためのＥＬＩＳＡアッセイ
抗ｈＰＧ抗体の特異性を、以下の通りにＥＬＩＳＡアッセイを使用して便利に決定することができる。９６ウェルプレートを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の適切な濃度のテストポリペプチド（例、２５及び５０ngの組換えヒトＰＧ、ならびに５０及び２５０ngのＣＴＦＰ又は他のガストリン由来の遺伝子産物）を用いて４℃で一晩インキュベートした。その後、ウェルを、洗浄溶液（ＰＢＳ及び０．１%TWEEN−２０）を用いて３回洗浄し、次に１ウェル当たり１００μLのブロッキング溶液（ＰＢＳ、０．１%TWEEN−２０、０．１%ウシ血清アルブミン又はカゼイン加水分解物）を用いて２２℃で２時間にわたりインキュベートした。ブロッキング後、ウェルを３回洗浄し、アッセイする抗体（テスト抗体）を加える。１００μLのＰＢＳ中のテスト抗体（０．３〜１ng/mL）及び０．１%TWEEN−２０を各ウェルに加える。プレートを次に２２℃で２時間にわたりインキュベートし、その後、テスト抗体溶液を捨て、洗浄工程（３×１００μLの洗浄溶液、上に記述する通り）後、二次抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼに共役させたヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）抗体を含むブロッキング溶液を用いて置換する。二次抗体を用いた１時間のインキュベーション後、１００μLの基質溶液（例、Ｆａｓｔ ＯＰＤ、又はＯ−フェニレンジアミン二塩酸塩、Sigma-Aldrich Co.から入手可能、製造者の指示に従って調製した）を各ウェルに加え、暗所で、２２℃で２０分間にわたりインキュベートした。反応は、５０μLの４Ｎ硫酸を加えることにより停止させ、触媒された基質の量を、４９２nmでの光学密度（ＯＤ）を測定することにより決定する。基質変換は、抗原に結合した一次（テスト）抗体の量に比例する。実験を２通りに実行し、ＯＤ測定値を抗原濃度の関数としてプロットする。テスト抗体は、測定されたＯＤがｈＰＧについて０．２〜１．５の間であり、ＣＴＦＰ又は他のガストリン遺伝子由来ペプチドのいずれかを用いて、バックグラウンドを上回る統計的に有意なシグナルがない場合、ＰＧについて特異的であるとスコア化される（ここで、バックグラウンドはＰＢＳだけを含むコントロールウェルからの平均シグナルである）。

８．３ 実施例３：抗ｈＰＧ抗体の中和性抗体を評価するためのアッセイ
特異的な抗ｈＰＧ抗体が中和性であるか否かを評価するための特定のテストを、以下の通りに実行することができる。ＬＳ１７４Ｔ細胞を６ウェルプレートの６ウェル中に約５０，０００個細胞／ウェルで播種する。細胞を、次に、テスト抗ｈＰＧ抗体又はコントロール抗体を用いて、約５μg/mLの抗体濃度で４８時間にわたり１２時間間隔で処理する。テスト抗体は、テスト抗体を用いて処理した細胞の数が、コントロールの非特異的抗体を用いて処理した細胞の数と比較して、生存細胞の数における少なくとも１０%の統計的に有意な低下を示す場合（両側マン・ホイットニー検定（差は、ｐ＜０．０５の場合に有意と考えられる）を使用する）、アッセイにおいて中和性であるとして定義される。全細胞数は、処理期間の開始時での細胞数について補正され、Ｔ０として言及される。

８．４ 実施例４：抗ｈＰＧ抗体の親和性を評価するためのアッセイ
抗ｈＰＧ抗体の親和性定数は、Proteon Technique（BioRad）を使用して、Nahshol et al., 2008, Analytical Biochemistry 383: 52-60（その全体において参照により本明細書により組み入れられる）に従って測定することができる。簡単には、マウス抗ＰＧ抗体について、抗マウスＩｇＧ抗体（５０μg/mL）を最初にセンサーチップ上にコーティングし、抗体の注射後にチップにより検出されたシグナルが１０，０００〜１１，５００応答単位（ＲＵ）の間に入ることを確認する。目的のマウス抗ｈＰＧ抗体（テスト抗体）を次に注射する（３０μg/mLの典型的な濃度で）。テスト抗体が十分に結合する場合、少なくとも５００ＲＵの追加シグナルが観察される。テスト抗体とｈＰＧの間での結合の時間経過を、次に、ｈＰＧの変動濃度、例えば、２００nM、１００nM、５０nM、２５nM、及び１２．５nMを注射し、結合のレベルを検出することにより得る。典型的には、いくつかのチャンネルが、単一の実験において並行して複数の抗体をテストするために利用可能であり、ｈＰＧの異なる濃度で並行して単一のテスト抗体の結合をアッセイすることを可能にする。１つのチャネルを、非特異的結合についてのコントロールとして、ｈＰＧに特異的ではないマウスモノクローナル抗体を用いて注射すべきである。別のチャネルを、バックグラウンドシグナルについてのベースラインとして、希釈緩衝液単独を用いて注射すべきである。一般的に、結合は、非特異的マウス抗体を用いて注射したチャネルにおいて検出可能ではない。この設定において高レベルの結合を示す抗体は、ｈＰＧによる捕捉モノクローナル抗体の飽和をもたらしうるが、より低いｈＰＧ濃度（５０nM、２５nM、１２．５nM、６．２５nM、及び３．１２５nM）に対してテストすることができ、より洗練された測定を可能にする。

親和性定数（Ｋ_Ｄ）を、解離定数（ｋ_ｄ）と結合定数（ｋ_ａ）の間の比率として算出する。実験値は、結合測定値に基づく実験曲線及び理論上のプロファイルの間での統計的に関連する類似性を分析することにより検証することができる。

非マウス抗ｈＰＧ抗体の親和性定数は、抗ｈＰＧテスト抗体の起源の種について特異的なＩｇＧを使用して同様のフォーマットにおいて評価することができる。

８．５ 実施例５：参照抗ｈＰＧ抗体を用いた競合的結合を評価するためのアッセイ
目的の抗体（テスト抗体）が、ｈＰＧ結合について、ビオチン化参照抗ｈＰＧ抗体と競合するか否かを評価するための特定のアッセイを、以下の通りに実施することができる。９６ウェルプレートを、捕捉抗ｈＰＧ抗体（ビオチン化参照抗ｈＰＧ抗体により認識されるエピトープとは異なるｈＰＧのＮ又はＣ末端領域を認識するポリクローナル又はモノクローナル抗体）を用いて、１〜１０μg/mLの範囲内で選ばれる濃度で、４℃で一晩コーティングする（０．１〜１μg/ウェル）。２２℃で２時間にわたるブロッキングバッファー（ＰＢＳ中の０．１% TWEEN−２０、０．１%ＢＳＡ）を用いたブロッキング後、組換えｈＰＧを、１０pM〜１nM（１０〜１０００pg/ウェル）の間の範囲の濃度で加え、２２℃で２時間にわたりインキュベートする。その後、ビオチン化参照抗ｈＰＧ抗体（又はビオチン化参照抗ｈＰＧ抗体を含む混合物）を、増加濃度の非標識テスト抗体濃度と共に加え、２２℃で１時間にわたりインキュベートする。非結合抗体を除去するための洗浄後、結合した標識参照抗ｈＰＧ抗体の検出を、混合物を、５０ng/mlのストレプトアビジン（steptavidin）−ＨＲＰと２２℃で１時間にわたりインキュベートすることにより実施し、２２℃で５分間にわたる西洋ワサビペルオキシダーゼ用の蛍光基質とのインキュベーション、及び、次に、ルミノメーターにおける相対的な光単位（ＲＬＵ）の定量化が続く。アッセイを２通りに実施する。

参照抗ｈＰＧ抗体と競合する抗体は、ｈＰＧへの参照抗体の結合を阻害する。実質的に同一のエピトープに、又は重複するエピトープと参照抗体として結合する抗体は、結合した参照抗ｈＰＧ抗体の量を有意に低下させる（例えば、少なくとも５０%）（観察されたＲＬＵにおける低下により証明される通り）。

高いコントロール値が、標識した参照抗体を、テスト抗体を伴わず、組換えｈＰＧとインキュベートすることにより行われるコントロール実験から得られる。低いコントロール値は、過剰濃度の非標識参照抗体（非標識参照抗体は、このように、ｈＰＧへの結合について標識抗体と競合する）の存在において、標識された参照抗体を、組換えｈＰＧを用いてインキュベートすることにより行われるコントロール実験から得られる。参照抗ｈＰＧ抗体と競合するテスト抗体の能力は、次に、標識した参照抗体を、増加濃度の非標識テスト抗体の存在において組換えｈＰＧとインキュベートすることにより決定される。

テストアッセイにおいて、テスト抗体の存在における観察されたＲＬＵにおける有意な低下は、テスト抗体が、参照抗ｈＰＧ抗体と実質的に同じエピトープを認識することを示す。

結合の阻害は阻害定数又はＫ_ｉとして表現することができ、以下の式：
Ｋ_ｉ＝ＩＣ_５０／（１＋（［参照抗ｈＰＧ Ａｂ濃度］／Ｋ_Ｄ ^{参照抗ｈＰＧ Ａｂ}））
に従って算出される。式中、「ＩＣ_５０」は、参照抗体の結合における５０%低下をもたらすテスト抗体の濃度であり、Ｋ_Ｄ ^{参照抗ｈＰＧ Ａｂ}は参照抗ｈＰＧ抗体の解離定数（ｈＰＧについてのその親和性の測定値）である。参照抗ｈＰＧ抗体（例えば、本明細書に記載する抗ｈＰＧ抗体の１つ）と競合する有用なテスト抗体は、典型的には、本明細書に記載するアッセイ条件下で１０pM〜１００nMの範囲のＫ_ｉを有する。

８．６ 実施例６：家族性腺腫性ポリポーシスを伴う患者からのサンプル中での血清ＰＧの検出
この実施例は、上昇した血清ＰＧレベルが、ＦＡＰを伴う個人におけるポリープの存在と相関しうることを示す。

８．６．１ 方法
血清ＰＧレベルを、実施例１に記載する通りに、家族性腺腫性ポリポーシスを伴う６人の患者からのサンプルにおいて定量化した。血清サンプルを、以下の特徴を伴う患者から得た：
・ ２人の個人（Ａ及びＢ）（両者とも５５歳以上、結腸切除を以前に受けている、内視鏡検査により定期的にモニターされた、ポリープが手術以降に検出されていない）。
・ １人の個人（Ｃ）（年齢３０歳、結腸切除及びさらなるポリープを除去するための経過観察での手術を以前に受けている）。個人は、血液サンプルを回収する数ヶ月前に手術を受けていた。
・ １人の個人（Ｄ）（年齢２７歳、結腸切除を以前に受けている、血液サンプルを回収した時に小腸において複数のポリープを提示した（しかし、癌はない））。
・ １人の個人（Ｅ）（年齢５２歳、結腸切除を以前に受けている、血液サンプルを回収した時に結腸において複数のポリープを提示した）。
・ １人の個人（Ｆ）（年齢１０歳、血液サンプルを回収した時に複数の結腸直腸ポリープを提示した）。

８．６．２ 結果
下の表５に示す結果は、平均ＰＧ濃度±標準偏差（pM）として表現する：

結果は、ＰＧレベルが、サンプリング時に多数のポリープを持った個人において特に上昇していることを示す。比較において、手術を受けた患者は、ＰＧの非常に低い又は検出不可能なレベルを表示する。

８．７ 実施例７：前癌性散発性腺腫性ポリープを伴う患者からのサンプル中での血清ＰＧの検出
この実施例は、散発性腺腫性ポリポーシスを伴う個人の２５パーセント超が、増加した血清ＰＧレベルを有することを実証する。

８．７．１ 方法
ＰＧレベルを２つの異なるサンプルセットにおいて測定した：ＦＡＰを伴う被験者において見出されうる数と同様の、複数の腺腫性ポリープを有する２５人の個人から得られたサンプルの第１セット、及び４５〜６５歳の年齢の範囲の１０４人の個人から回収した、血漿バンクからのサンプルの第２セット。血漿プロガストリンレベルを、ＥＬＩＳＡ法を使用して定量化した（実施例１において上に記載する通り）。

８．７．２ 結果
試験した腺腫性ポリープを伴う被験者の２３%（１２／５２）が、５０pMを上回るプロガストリンレベルを有した。比較により、血液バンク群における／からの被験者の１６．３%（１７／１０４）が、５０pMを上回るＰＧレベルを有した。サンプルがバンク化された個人の病歴は未知である。健康な個人はＰＧの低いレベルを有し、典型的には５０pMを超えない。例えば、Siddheshwar et al., 2001, "Plasma levels of progastrin but not amidated gastrin or glycine extended gastrin are elevated in patients with colorectal carcinoma," Gut 48: 47-52を参照のこと。５０pMを上回るレベルは、根底にある病理を示していると考えられる。

ポリープが見出された個人のほぼ４分の１が、また、上昇したＰＧレベルを有した。これは、散発性腺腫性ポリープの約２０%が悪性腫瘍に発展する（上昇したＰＧレベルを伴うと考えられる形質転換）という観察と一致している。従って、腺腫性ポリープの存在における上昇したＰＧレベルは、さらなる経過観察のため又は予防的抗ＰＧ処置のために患者を特定する際に有用な測定基準としての役割を果たすことができる。

血漿バンクからのサンプルに関して、５０pMを上回るＰＧレベルを伴うバンク化サンプルの一部又は全てが、上昇したＰＧレベルを起こした、根底にある状態を伴う個人から来ていた可能性がある。適切にスクリーニングされたコントロールサンプルの使用は、散発性腺腫性ポリープを伴う個人のパーセンテージと５０pMを上回るＰＧレベルを有するポリープを伴わない個人とのパーセンテージとの間のより大きな差を示す可能性が高いであろう。

８．８ 実施例８：抗ＰＧ組成物は、ＦＡＰのマウスモデルにおいて腫瘍発生を防止する
この実施例では、インビボでの腫瘍の形成を防止する抗ｈＰＧ抗体の能力を実証する。

８．８．１ 方法
家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）を伴う個人において見出されるものと同様の、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ）遺伝子の対立遺伝子において突然変異を保有するトランスジェニックマウスを、抗ｈＰＧ抗体を用いて処理した。これらのマウスは、ＡＰＣΔ１４マウスとして言及され、第２の（野生型）ＡＰＣ対立遺伝子が「ヘテロ接合性の消失」（ＬＯＨ）機構を介して失われた場合、それらの腸において腫瘍を自然に発生する（Colnot et al., 2004, "Colorectal cancers in a new mouse model of familial adenomatous polyposis: influence of genetic and environmental modifiers," Lab Investigation 84: 1619-1630）。第１の検出可能な腫瘍は、２ヶ月齢前後で、３．５ヶ月までに見出されうるが、腫瘍の数は一般的に１５〜２０前後である。これらの腫瘍はプロガストリンを産生することが示されている。

４ヶ月齢のＡＰＣΔ１４マウスを、６週間にわたり週２回、コントロールポリクローナル抗体抗体−ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗血清（Jackson ImmunoResearch（参照番号３０９−００５−００８９））−又は（１）Ｎ末端ペプチド及び（２）Ｃ末端ペプチド（Hollande et al.， ＷＯ ０７／１３５５４２に記載されている）に対して産生された抗ＰＧポリクローナル抗体のいずれかを用いて、９mg/kgの用量での腹腔内注射により処置した。マウスを週１回秤量する。６週間の処置計画の終了時、それらの腸を撮影し、腫瘍の総数をカウントした。処理群と対照群で６匹のマウスがあった。ジェノタイピングによって、予測されるヘテロ接合性ＡＰＣ突然変異を保有しないコントロール群からの２匹のマウスが同定され、実験から除外された。

８．８．２ 結果
結果を表６において下に示す。対照抗体を用いて処置したマウスは、合計１２５個の腫瘍を示し、マウス１匹当たりの平均で３１．２５個の腫瘍を伴った。抗ＰＧ処置マウスは合計４６の腫瘍、又は、平均で、７．６の腫瘍／マウスを有する。この差は統計的に有意である（マン・ホイットニー検定、Ｐ＝０．００９５）。

結果は、抗プロガストリン抗体を用いて処置された６匹の動物からの４匹において見出された腫瘍の数が、３．５ヶ月齢のＡＰＣΔ１４マウスにおいて一般的に見出された１５〜２０の腫瘍の平均数を下回ることを示す。以下の表６を参照のこと。これらのデータは、抗プロガストリン抗体を用いた処置は、これらの動物において新たな腫瘍が発生することを防止することを示す。

本願において引用する全ての刊行物、特許、特許出願、及び他の文書が、各々の個々の刊行物、特許、特許出願、又は他の文書が全ての目的のために参照により組み入れられることが個々に示される場合と同じ程度まで、全ての目的のためにそれらの全体において参照により本明細書により組み入れられる。

種々の特定の実施態様が例証及び記載されているが、種々の変化を、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく作ることができることが理解されるであろう。

Claims (12)

1. 腺腫性ポリープを発生する素因のあるヒト被験者における胃腸癌の発症前の予防のための、抗ｈＰＧモノクローナル抗体を含む医薬組成物であって、
   抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、Ｎ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体又はＣ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体であり、
   前記Ｎ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
   ａ．ＣＤＲ１が配列番号１のＶ_ＨＣＤＲ１．３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号２のＶ_ＨＣＤＲ２．３のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号３のＶ_ＨＣＤＲ３．３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号４のＶ_ＬＣＤＲ１．３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５のＶ_ＬＣＤＲ２．３のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号６のＶ_ＬＣＤＲ３．３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む；
   ｂ．ＣＤＲ１が配列番号７のＶ_ＨＣＤＲ１．４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号８のＶ_ＨＣＤＲ２．４のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号９のＶ_ＨＣＤＲ３．４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号１０のＶ_ＬＣＤＲ１．４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５のＶ_ＬＣＤＲ２．４のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号１１のＶ_ＬＣＤＲ３．４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む；
   ｃ．ＣＤＲ１が配列番号３９のＶ_ＨＣＤＲ１．１６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号４３のＶ_ＨＣＤＲ２．１６のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号４７のＶ_ＨＣＤＲ３．１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号５０のＶ_ＬＣＤＲ１．１６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５３のＶ_ＬＣＤＲ２．１６のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号５７のＶ_ＬＣＤＲ３．１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む；又は
   ｄ．ＣＤＲ１が配列番号４０のＶ_ＨＣＤＲ１．１９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号４４のＶ_ＨＣＤＲ２．１９のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号４８のＶ_ＨＣＤＲ３．１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号５１のＶ_ＬＣＤＲ１．１９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５４のＶ_ＬＣＤＲ２．１９のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号５８のＶ_ＬＣＤＲ３．１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、
   前記Ｃ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
   ａ．ＣＤＲ１が配列番号３７のＶ_ＨＣＤＲ１．８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号４１のＶ_ＨＣＤＲ２．８のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号４５のＶ_ＨＣＤＲ３．８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号４９のＶ_ＬＣＤＲ１．８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５２のＶ_ＬＣＤＲ２．８のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号５５のＶ_ＬＣＤＲ３．８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む；又は
   ｂ．ＣＤＲ１が配列番号３８のＶ_ＨＣＤＲ１．１３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号４２のＶ_ＨＣＤＲ２．１３のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号４６のＶ_ＨＣＤＲ３．１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１が配列番号５０のＶ_ＬＣＤＲ１．１３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ２が配列番号５３のＶ_ＬＣＤＲ２．１３のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ３が配列番号５６のＶ_ＬＣＤＲ３．１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、医薬組成物。
2. 抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、ヒト化抗ｈＰＧモノクローナル抗体である、請求項１記載の医薬組成物。
3. Ｎ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体の免疫原が、配列ＳＷＫＰＲＳＱＱＰＤＡＰＬＧ（配列番号２５）を有するペプチドを含む免疫原である、請求項１記載の医薬組成物。
4. Ｎ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、配列において、配列番号１２、１４、６１又は６２のＶ_ＨＣＤＲに対応する３つのＶ_ＨＣＤＲ、及び配列において、配列番号１３、１５、６５又は６６のＶ_ＬＣＤＲに対応する３つのＶ_ＬＣＤＲを含む参照抗体とｈＰＧ結合について競合する、請求項１記載の医薬組成物。
5. Ｃ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体の免疫原が、配列ＱＧＰＷＬＥＥＥＥＥＡＹＧＷＭＤＦＧＲＲＳＡＥＤＥＮ（配列番号２７）を有するペプチドを含む免疫原である、請求項１記載の医薬組成物。
6. Ｃ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、配列において、配列番号５９又は６０のＶ_ＨＣＤＲに対応する３つのＶ_ＨＣＤＲ、及び配列において、配列番号６３又は６４のＶ_ＬＣＤＲに対応する３つのＶ_ＬＣＤＲを含む参照抗体とｈＰＧ結合について競合する、請求項１記載の医薬組成物。
7. 被験者が、腺腫性ポリープに関連付けられるＡＰＣ遺伝子における突然変異を有する、請求項１記載の医薬組成物。
8. 被験者が、家族性腺腫性ポリポーシスを有する、請求項１記載の医薬組成物。
9. 被験者が、散発性腺腫性ポリポーシスを有する、請求項１記載の医薬組成物。
10. 腺腫性ポリープを含む組織の外科的切除に対して補助的に用いられる、請求項１記載の医薬組成物。
11. 化学療法に対して補助的に用いられる、請求項１記載の医薬組成物。
12. 非ステロイド性抗炎症薬を用いた処置に対して補助的に用いられる、請求項１記載の医薬組成物。

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