JP5769448B2 - Dna修復促進剤及び皮膚外用剤 - Google Patents
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Description
一般的にブドウの皮には、視力回復や活性酸素の除去に効果がある抗酸化作用を有するポリフェノールの一種であるアントシアンが多く含まれ、いわゆる悪玉コレステロールの発生を防ぎ血液をキレイにする効果があるので、動脈硬化やがん予防への効果を示唆されているところ、特にデラウエアなどの赤ブドウには、強い発がん抑制作用を持つレスベラトロールというポリフェノールが含まれているものとされている。
このような効果を広く一般に提供する方法としては、一般的に皮膚外用剤、化粧品という方法が一般的である。
すなわち、本発明は、主に次の構成による。
1.デラウエア種(Delaware)の果実の圧縮搾汁粕をセルラーゼ処理し、次いでポリガラクツロナーゼ処理した後に極性溶媒で抽出した抽出物を含有することを特徴とする「DNA修復促進剤」、「細胞死抑制剤」、「抗糖化剤」、「抗酸化剤」。
2.果実が、ジベレリン処理され種子を含まないことを特徴とする1.記載の「DNA修復促進剤」、「細胞死抑制剤」、「抗糖化剤」、「抗酸化剤」。
3.極性溶媒が、水を含むことを特徴とする1.から2.に記載の「DNA修復促進剤」、「細胞死抑制剤」、「抗糖化剤」、「抗酸化剤」。
4.1.から3.に記載の「DNA修復促進剤」、「細胞死抑制剤」、「抗糖化剤」、「抗酸化剤」を含有する外用剤。
デラウエア果皮エキスは、デラウエア種(Delaware)の果実の圧縮搾汁粕を酵素処理した後、溶媒抽出して得ることができる。酵素処理については、セルラーゼ処理、次いでポリガラクツロナーゼ処理することが望ましい。溶媒抽出については、水、エタノール等の極性溶媒を用いることが望ましく、水とその他の極性溶媒を同時に用いることがさらに望ましい。さらに、抽出物を活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、等によって、分離精製し、さらに活性の高い画分(成分)を抽出することもできる。
外用剤としては、例えば化粧品として調整する場合は、パウダー、パウダーファンデーション等の粉体;石けん、リップスティック等の固体;クリーム、乳液、クリームファンデーション等の乳化物;化粧水、美容液等の液体;など、種々の形態に調製することが出来る。また、シャンプー、トリートメント、頭皮用皮膚外用剤であってもよい。
正常ヒト表皮角化細胞(NHEK)および真皮線維芽細胞(正常ヒト胎児皮膚由来線維芽細胞: NB1RGB)にUVBを照射し、照射後、デラウエア果皮エキスを添加した培地で培養後、細胞から全DNAを抽出し、ドットブロッティング法でUVBが誘起する代表的なDNA損傷であるCPDの形成を無添加培地で培養したものと比較評価した。
A.NHEKに対する効果について、UVB照射(強度15mJ/cm2)48時間後の精製水と0.5%デラウエア果皮エキスのCPD形成抑制効果を比較した。
B.NB1RGBに対する効果について、UVB照射(強度10mJ/cm2)48時間後の精製水と1.0%デラウエア果皮エキスを含有した検体のCPD形成抑制効果を比較した。
デラウエア果皮エキスを添加した培地で培養すると、無添加培地で培養するよりも、UVBにより形成されたCPDがDNA修復促進作用によって有意に減少した。
表皮角化細胞(正常ヒト表皮角化細胞: NHEK)および真皮線維芽細胞(正常ヒト胎児皮膚由来線維芽細胞: NB1RGB)にUVBを照射し、照射後、デラウエア果皮エキスを添加した培地で培養した。培養後、細胞をMTT染色することで細胞生存率を測定し、無添加培地で培養したものと比較評価した。
C.NHEKに対する効果について、UVB照射(強度15mJ/cm2)48時間後の精製水と0.5%デラウエア果皮エキスを含有した検体の細胞生存率を比較した。
D.NB1RGBに対する効果について、UVB照射(強度10mJ/cm2)48時間後の精製水と1.0%デラウエア果皮エキスを含有した検体の細胞生存率を比較した。
デラウエア果皮エキスを添加した培地で培養すると無添加培地で培養した細胞に比べUVBによる細胞死が有意に抑制された。
デラウエア果皮抽出エキスの抗糖化作用を検証するにあたり、一般的な方法の一つとしてNB1RGBによるコラーゲンゲル収縮活性を指標とした評価手法を用いた。
本法においては、コラーゲンゲル収縮の度合いは、糖化反応によるコラーゲンゲルの収縮阻害の抑止(架橋阻害)の度合い、すなわち抗糖化作用の度合いを意味しており、抗糖化作用がなければ、糖化反応による変性によりコラーゲンゲル収縮がほとんど生じず、抗糖化作用が強ければ、その度合いに従って糖化変性されていないコラーゲンゲル収縮活性に基づくゲル収縮が生じる。
E.NB1RGBに対する効果について、精製水と0.25%デラウエア果皮エキスを含有した検体のゲル収縮率を比較した。
比較例では、ほぼコラーゲンゲルは収縮しなかったが、実施例では、抗糖化作用による大きなゲル収縮が見られた。
デラウエア果皮エキスについて、酸化作用を持つDPPH(1、1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl)ラジカルの消去率を測定した。
F.精製水と1.0%デラウエア果皮エキスを含有した検体のDPPHラジカルの消去率を比較した。
デラウエア果皮エキスのDPPHラジカルが減少し、精製水では効果が無かった。
実施例1のデラウエア果皮エキスを使用して以下の構成成分を常法で調製した。(数値は重量%)
また、比較例として、デラウエア果皮エキス分を精製水で置換したものを調製した。
デラウエア果皮エキス 3.00
エタノール 1.00
防腐剤 0.10
精製水で全量 100.00
実施例1のデラウエア果皮エキスを使用して以下の構成成分を常法で調製した。(数値は重量%)
また、比較例として、デラウエア果皮エキス分を精製水で置換したものを調製した。
PEG−60硬化ヒマシ油 0.30
1、3−ブチレングリコール 6.00
ジプロピレングリコール 2.00
ペンチレングルコール 1.00
グリセリン 4.00
ソルビトール発酵多糖 2.00
クエン酸 0.01
クエン酸Na 0.01
防腐剤 0.10
デラウエア果皮エキス 3.00
精製水で全量 100.00
実施例1のデラウエア果皮エキスを使用して以下の構成成分を常法で調製した。(数値は重量%)
また、比較例として、デラウエア果皮エキス分を精製水で置換したものを調製した。
モノステアリン酸デカグリセリル 2.50
モノステアリン酸グリセリン 2.00
ベヘニルアルコール 4.00
スクワラン 9.00
ホホバ油 3.00
トリ(カプリル/カプリン酸)グリセリル 5.00
メチルポリシロキサン 1.00
防腐剤 0.10
クインスシード 0.10
1、3ブチレングリコール 10.00
リン酸L−アスコルビルマグネシウム 3.00
クエン酸ナトリウム 0.50
エデト酸4Na 0.10
デラウエア果皮エキス 3.00
精製水で全量 100.00
実施例1のデラウエア果皮エキスを使用して以下の構成成分を常法で調製した。(数値は重量%)
また、比較例として、デラウエア果皮エキス分を精製水で置換したものを調製した。
(アクリル酸ブチル/イソプロピルアクリルアミド/ジメタクリル酸PEG−18)クロスポリマー 60.00
ペンチレングリコール 10.00
塩化ナトリウム 1.00
リン酸アスコルビルマグネシウム 1.00
デラウエア果皮エキス 3.00
精製水で全量 100.00
実施例2から5及び対応する比較例について、「抗シワ」「ハリ向上」「保湿」「透明感向上」「肌荒れ改善」の各効果を検証した。
検証にあたっては、女性社員から選抜した健常な皮膚を有するモニター3名に複数回使用させ、「抗シワ」「ハリ向上」「保湿」「透明感向上」については5段階による官能評価、「肌荒れ改善」については、塗布後、テープストリッピングで角層を採取し重層剥離度について、判定員2名による合議で評価した。
1.前腕内側部に20回テープストリッピングを行い荒れ肌を作製し、3%デラウエアエキス配合した各検体を朝・夜1回ずつ5日間塗布した。
2.5日後テープストリッピング法を用いて角層を採取し、テープ除去後、ゲンチアナバイオレットで10分、ブリリアントグリーンで5分染色を行い、判定員2名が重層剥離状態を観察し五段階で評価した。
以上のことから、各効果について、各実施例の試験結果は対応する比較例よりも優れているという結果となった。
Claims (4)
- デラウエア種(Delaware)の果実の圧縮搾汁粕をセルラーゼ処理し、次いでポリガラクツロナーゼ処理した後に極性溶媒で抽出した抽出物を含有することを特徴とするDNA修復促進剤。
- 果実が、ジベレリン処理され種子を含まないことを特徴とする請求項1に記載のDNA修復促進剤。
- 極性溶媒が、水を含むことを特徴とする請求項1から請求項2に記載のDNA修復促進剤。
- 請求項1から請求項3のいずれかに記載のDNA修復促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
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