JP5767625B2 - Il−17brに対する抗体 - Google Patents
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Description
本明細書で記述される抗体分子は、インビボでのIL−25の生理活性を妨害する、ならびに気道炎症、AHR、および結腸の炎症を防ぐのに有用である可能性がある。
好ましくは、抗体分子はIL−17BRのIL−25への結合を妨害し、IL−25に仲介されるAHR;IL−13の産生;IL−25に仲介されるIL−5の産生;IL−25に仲介されるIL−8の産生;ならびにガンマ/デルタT細胞の増殖および浸潤の少なくとも1種類を低減または阻害する。
本発明の観点は、本明細書で記述される抗体分子をコードする単離された核酸、その核酸を含むベクターおよび宿主細胞中でその核酸を発現させて本発明の抗体分子を生成する方法も提供する。
本発明の抗体分子を、さらに本明細書において下記の配列識別番号を参照して記述する:
SEQ ID NO:1 D9.2 VHをコードするヌクレオチド配列
SEQ ID NO:2 D9.2 VHのアミノ酸配列
SEQ ID NO:3 D9.2 VLをコードするヌクレオチド配列
SEQ ID NO:4 D9.2 VLのアミノ酸配列
SEQ ID NO:5 D9.2 VH CDR1のアミノ酸配列
SEQ ID NO:6 D9.2 VH CDR2のアミノ酸配列
SEQ ID NO:7 D9.2 VH CDR3のアミノ酸配列
SEQ ID NO:8 D9.2 VL CDR1のアミノ酸配列
SEQ ID NO:9 D9.2 VL CDR2のアミノ酸配列
SEQ ID NO:10 D9.2 VL CDR3のアミノ酸配列
添付の配列リストにおいてさらなる配列を示す。
一般に、抗体の重鎖可変領域(VHドメイン)は抗体の抗原への結合において重要な役割を果たす。VHドメインのCDR3領域はCDR1およびCDR2領域よりも多様であることが分かっており、従ってほとんどの抗体において抗体の標的への特異性を提供する。従って、本発明の抗体分子はD9.2抗体のVH CDR3領域の周辺に基づいている。一部の好ましい態様において、本発明の抗体分子はD9.2抗体のVH領域の3種類のCDRを全て含む。
本明細書で記述される抗体分子はヒトのIL−17BRおよび/またはマウスのIL−17BRと結合してよい。例えば、抗体分子はヒトのIL−17BRと結合し、マウスのIL−17BRには結合を示さない、または実質的に結合を示さなくてよい。あるいは、本発明の抗体分子はマウスのIL−17BRと結合し、ヒトのIL−17BRには結合を示さない、または実質的に結合を示さなくてよい。
本明細書で記述される抗体分子のIL−17BRとの結合は、組み換えIL−17BRとの競合により無効にされて(abolished)よい。
抗体分子は、必要とされるIL−17BRに対する特異性および/または結合を有する抗体抗原結合部位を有するあらゆる結合メンバーまたは物質を含む。抗体分子の例には、天然のものまたは完全にもしくは部分的に合成によるものを問わず、以下のものが含まれる:免疫グロブリンのアイソタイプおよびそれらのアイソタイプのサブクラス;抗体断片、例えばFab、Fab’、Fab’−SH、scFv、Fv、dAbおよびFd;設計された(engineered)抗体分子、例えばFab2、Fab3、ダイアボディ(diabodies)、トリアボディ(triabodies)、テトラボディ(tetrabodies)およびミニボディ(minibodies);ならびに抗体抗原結合部位を含むあらゆる他のポリペプチド。従って、別のポリペプチドに融合した抗原結合ドメインまたは均等物を含むキメラ分子も含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現はEP−A−0120694およびEP−A−0125023において記述されている。
論じたように、本明細書において開示されている可変ドメインのアミノ酸配列の変形を用いることができる。個々の変形は1個以上のアミノ酸配列の変更(アミノ酸残基の付加、削除、置換および/または挿入)を含んでいてよく、それは約20個未満の変更、約15個未満の変更、約10個未満の変更または約5個未満の変更、4、3、2または1個の変更であってよい。変更は1個以上のフレームワーク領域および/または1個以上CDR中でなされてよい。
SEQ ID NO:2またはSEQ ID NO:4のCDR配列の1個以上(すなわち、1個、2個、3個、4個、5個または6個全て)を有する抗体分子をコードする出発核酸を提供し;
CDR配列(単数または複数)を変更するために前記の核酸を改変し;
前記の改変された抗体分子を発現させ;そして
前記の改変された抗体分子をIL−17BRに対する結合に関して試験する
ことを含む、IL−17BRに対する抗体分子を得るための方法を提供する。
出発核酸は好ましくは、SEQ ID NO:2それ自体の形または別のフレームワーク配列中に保持された形のどちらかで、SEQ ID NO:2の3個の重鎖CDR全てを含む。
本発明で用いられる可変ドメインはあらゆる生殖細胞系もしくは再編成されたヒト可変ドメインから得られてよく、または既知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づく合成可変ドメインであってよい。本発明で記述されるCDR配列(例えばCDR3)は、組み換えDNA技術を用いてCDR(特にCDR3)を欠く可変ドメインのレパートリーの中に導入することができる。
(a)置き換えられるCDR3を含むか、またはCDR3をコードする領域を欠いているかのどちらかであるVHドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供し;
(b)前記のレパートリーを、実質的にSEQ ID NO:7で述べられている通りのアミノ酸配列をコードするドナー核酸と、前記のドナー核酸がレパートリー中のCDR3領域の中に挿入されるように組み合わせて、VHドメインをコードする核酸の生成物レパートリーを提供し;
(c)前記の生成物レパートリーの核酸を発現させ;
(d)IL−17BRに特異的な抗体分子を選択し;そして
(e)前記の抗体分子またはそれをコードする核酸を回収する
ことを含む。
本発明の別の観点は、IL−17BRに関する抗体抗原結合ドメインを得るための方法であって、本明細書で記述される抗体分子のVHドメイン(上記で論じたような変形を含む)を1種類以上のVLドメインと組み合わせ、VH/VLの組み合わせ(単数または複数)をIL−17BRに関する抗体抗原結合ドメインに関して試験することを含む方法を提供する。
これは、WO92/01047において開示されているようないわゆる階層的二重組み合わせアプローチ(hierarchical dual combinatorial approach)を用いるファージディスプレイスクリーニング法により達成することができ、ここで、HまたはL鎖のクローンのどちらかを含む個々のコロニーを用いて他方の鎖(LまたはH)をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、得られた二本鎖抗体分子を、ファージディスプレイの技法、例えば参考文献において記述されている技法に従って選択する。
(a)SEQ ID NO:7のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体VHドメインを提供し;
(b)前記のVHドメインを複数の抗体VLドメインと組み合わせて抗体分子を提供し;
(c)前記の抗体分子をIL−17BRへの結合に関してスクリーニングし;そして
(d)IL−17BRに結合する抗体分子を選択する
ことを含む。
複数のVLドメインは、104個以上の個々のドメイン、例えば106から108または1010個までのドメインのいずれかであってよい。
さらなる観点において、本発明は、上記のような抗体分子、VHドメイン、またはVLドメイン、例えばそれぞれSEQ ID NO:2および4のVHまたはVLドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸、ならびに上記のような抗体分子、VHドメイン、またはVLドメインを調製する方法であって、前記の核酸を前記の抗体分子、VHドメイン、またはVLドメインの生成をもたらすための条件の下で発現させ、それを回収することを含む方法を提供する。
核酸は宿主細胞のゲノム(例えば染色体)の中に組み込まれてよい。組み込みは、ゲノムとの組換えを促進する配列を標準的な技法に従って含ませることにより促進することができる。
本発明は、上記の1個または核酸またはベクターを含む組み換え宿主細胞も提供する。
本発明の別の観点は、それを必要とする対象(例えばヒト)において気道の反応性亢進を予防または低減する方法であって、対象にIL−17BRに結合する抗体分子、例えば上記の抗体分子を投与することを含む方法を提供する。本発明の別の観点は、それを必要とする対象において喘息または他のIL−25に仲介される病気を予防、低減または処置する方法であって、対象にIL−17BRに結合する抗体分子を投与することを含む方法を提供する。他のIL−25に仲介される病気にはアレルギーおよび結腸炎が含まれ、それには潰瘍性結腸炎およびクローン病が含まれる。喘息にはアレルギー性喘息が含まれる。
療法的利益を提供するために抗IL−17BR抗体分子が用いられて良い臨床的適応症には、IL−17BR/IL−25結合が病理学的重要性を有するあらゆる病気が含まれる。従って、一般に、本明細書で記述される抗体分子は、例えば望ましくないTh2応答または2型応答と関係するあらゆるIL−25に仲介される病気の処置において用いられてよい。一部の態様において、本発明の抗体分子はアレルギーおよび喘息、特に喘息の処置のために用いられてよい。一部の態様において、本発明の抗体分子はIBDの処置、特にUCおよび/またはCDの処置のために用いられてよい。
一部の態様における抗体分子はF(ab)またはscFvのような単量体断片であってよい。そのような抗体断片は、半減期が比較的短い、および受容体のクラスター化により引き起こされる可能性のある血小板活性化の危険性がより低いという利点を有する可能性がある。血小板活性化を引き起こすクラスター化は、例えばIL−17BR分子またはFcγRIIを有するIL−17BR分子のどちらかのクラスター化である可能性がある。
従って、本発明に従う、および本発明に従う使用のための医薬組成物は、有効成分に加えて、医薬的に許容できる賦形剤、キャリヤー、緩衝剤、安定剤または当業者に周知の他の物質を含んでいてよい。そのような物質は非毒性であるべきであり、有効成分の有効性を妨げるべきでは無い。キャリヤーまたは他の物質の正確な性質は投与経路に依存すると考えられ、それは経口であってよく、または注射、例えば静脈内注射によるものであってよい。
試料に対する抗体分子の反応性は、あらゆる適切な手段により決定されてよい。放射免疫アッセイ(RIA)は1つの可能性である。放射性標識された抗原を標識されていない抗原(試験試料)と混合し、抗体分子に結合させる。結合した抗原を結合していない抗原から物理的に分離し、抗体に結合した放射性抗原の量を測定する。試験試料中に存在する抗原が多ければ多いほど、抗体分子に結合する放射性抗原は少なくなるであろう。レポーター分子に連結された抗原またはアナログを用いて、非放射性抗原での競合的結合アッセイを用いることもできる。レポーター分子は、スペクトル的に孤立した吸収または発光特性を有する蛍光色素、リン光体(phosphor)またはレーザー色素であってよい。適当な蛍光色素には、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリンおよびTexas Redが含まれる。適当な色原体色素には、ジアミノベンジジンが含まれる。
結合を決定する方式は本発明の特徴では無く、当業者は彼らの好みおよび一般的知識に従って適切な方式を選択することができる。
元の親抗体の解離定数よりも低い(標識された)標的抗原の濃度の使用;
Hawkins et al. (1992)において示されたような、競合相手としての過剰量の標識されていない標的抗原の使用。しかし、それらは、“向上した”抗体が親と同じエピトープを置き換え/占有するに違いないことを必ずしも明確に示さない。溶出工程の組み込みは、親と置き換わるより高い割合の娘抗体分子をもたらすはずである。この方法で選択された娘抗体分子は、親抗体分子に非常に類似したエピトープに結合するが、より大きな親和性を有する可能性がある。
“および/または”は、本明細書で用いられる場合、2つの明記された特徴または構成要素のそれぞれの、他方を含む、または含まない、具体的な開示として受け取られるべきである。例えば“Aおよび/またはB”は、(i)A、(ii)Bならびに(iii)AおよびBのそれぞれの具体的な開示として、まさにあたかも本明細書においてそれぞれを個別に述べたかのように受け取られるべきである。
ELISAによる上清のスクリーニング
96ウェルイムノプレート(Nunc)を、50μl/ウェルの0.1M NaHCO3中1μg/mlのマウスまたはヒトのIL−17Br−Fc融合タンパク質で、4℃において一夜または室温でにおいて3時間コートした。次の日に、ウェルをPBS 0.05% tweenで5回洗浄し、次いでPBS 10% FCS中で室温において4時間ブロッキングした。その同じ4時間の期間の間に、ハイブリドーマ細胞培養からの上清を50μg/ml hIgGと共に保温した。これは、融合タンパク質のFc部分に対して産生された上清中のあらゆる抗体をブロッキングするためのものであった。それぞれの試料中の抗Fc抗体の量の指標を与えるために、この処置を受けなかった上清もELISAに含められた。
マウスおよびヒトのIL−17BR遺伝子に関するcDNAをpME18S発現ベクターの中に別々にクローニングし、これをそれぞれmIL17BR−pME18SおよびhIL17BR−pME18Sと名付けた。
ELISAプレートを、2μg/mlのIL−17RファミリーのメンバーであるIL−17RA、IL−17BR、IL−17RC、もしくはIL−17RD、またはIL−13Rα対照(R&D Systems)で、4℃において一夜コートした後、PBS/0.05% tweenで洗浄し、PBS/10%FCSで室温において4時間ブロッキングした。ビオチン化D9.2をPBS/10%FCS中1μg/mlで添加し、4℃において一夜インキュベートした。次いでプレートを洗浄した後、ストレプトアビジン−HRPを添加し、室温で1時間インキュベートした。次いでプレートを最後に洗浄した後、ELISA現像溶液を添加し、405nmにおける吸光度を測定した。
ヒトIL−25(hIL17e)(R&D sys)をNunc Maxisorpマイクロウェルプレート上に0.5μg/mlでコートし、室温で1時間30分インキュベートした。プレートを3回洗浄し、次いでTris/1% BSAで1時間ブロッキングした。hIL17Br/Fcキメラ(R&D sys)を100ng/mlに希釈した。それぞれの精製されたマウスモノクローナル抗体をhIL17Br/Fc(100ng/ml)中で希釈し(×100)、100ng/mlのhIL17Br/Fc溶液中で1μg/mlの終濃度にした。[抗体×hIL17Br/Fc]混合物を室温で1時間30分インキュベートした。[抗体×hIL17Br/Fc]混合物をhIL17eでコートされたプレートに添加して1時間30分インキュベートした後、3回洗浄した。抗hIgG(Fc)−HRPコンジュゲート(Serotec)をプレートに添加し、室温で45分間インキュベートした後、3回洗浄し、TMBで現像した。反応を1M HCLで止めた。光学密度を450nmにおいて読み、全ての読みから試薬ブランクの読みを引いた。
腸間膜(Mysenteric)リンパ節を未処置のBALB/cマウスから取り出し、70μmのセルストレーナーを通過させて単一細胞懸濁液を得た。細胞をPBS 2%FCS中で洗浄し、次いでT細胞およびB細胞を激減させた。これは、細胞を5μg/mlのビオチン化抗CD19および抗CD3抗体と共に氷上で30分間インキュベートし、次いで抗ビオチンDynabeads(Invitrogen)と共に細胞あたりビーズ4個の濃度で4℃で20分間インキュベートすることにより達成された。次いで混合物を洗浄した後、磁石の上を通過させて標識されたTおよびB細胞を標識されていない非B非T(NBNT)細胞画分から分離した。NBNT画分の純度をFACSにより試験し、B220、CD4およびCD8に関して染色した。
ヒトTK−10腎癌細胞を国立癌研究所(NCI)から得た。RENCA細胞をCentocor R&Dの細胞生物学部門から得た。両方の細胞株を、10% FCSを含むDMEM増殖培地中で、37℃、5%CO2において加湿した雰囲気中で維持した。細胞を96ウェル平底組織培養処理プレートにおいて完全増殖培地100μlの総体積中で2.5×104細胞/ウェルの密度で蒔いた。一夜培養した後、細胞を1×PBSで洗浄し、次いでOptiMEM減少血清培地中で100ng/mlのIL−25および10ng/mlのTNF−α、または培地のみの対照と共に24時間培養した。細胞上清をIL−25刺激の20〜24時間後に集め、その後のKCに関するマウスQuantikine ELISAまたはIL−8に関するヒトQuantikine ELISA(R&D Systems)を用いた可溶性KC/IL−8の放出の分析のために−20℃で保管した。
アレルギー性喘息の実験モデルにおける使用のためのBALB/cマウスはHarlan UKから得て、IBDの実験モデルにおける使用のためのBALB/cマウスはCharles Riverから得た。マウスはSABU/CBS/Ares−MRCまたは国立心臓・肺研究所の施設で特定病原体除去環境において維持された。この報告で概説されている全ての動物実験は、英国内務省の認可を得て行われた。
アレルギー性喘息の実験モデルに関して、BALB/cマウスの野生型マウスまたはBALB/cバックグラウンドでのIL−17BRノックアウトマウスを、0日目および12日目において、ミョウバンと複合体化したOVA(20μg/注入)または1:1 PBS:ミョウバン(対照)の腹腔内投与により感作した。19、20、21日目に、1日あたり20分間のPBSまたは1%OVAのエアロゾル投与を行った。22日目に動物を屠殺し、組織を収集した。
アレルギー性喘息の実験モデルにおいて、抗体処置を受けるマウスに関して、PBS中250μgのD9.2または抗c−mycマウスIgG1対照抗体(クローン9E10.2)の腹腔内注入を、それぞれの噴霧の2時間前に与えた。それぞれのマウスは3用量の抗体を与えられた。
図8(e)に関して、マウスを低エンドトキシンオボアルブミンの腹腔内(i.p.)投与により感作し、6日間毎日エアロゾル化したPBS(対照)またはOVAを用いた噴霧により負荷をかけた。
PBSまたはOVAで処理されたマウスからの縦隔リンパ節を70μmのセルストレーナーを押し通して単一細胞懸濁液を得た。細胞を計数し、丸底96ウェルプレート上に3×105細胞/ウェルで蒔いた。細胞をRPMI 10%FCS単独中で、または100μg/ml OVAの存在下で72時間培養した。次いで上清を集め、IL−13濃度に関してQuantikine ELISAキット(R&D Systems)を用いてアッセイした。
図9に関して、マウスを0日目においてオキサゾロンのエタノール中における溶液の皮膚適用により感作し、7日目にオキサゾロンのエタノール中における溶液で負荷をかけた。対照はエタノールのみを与えられた。抗体処置を受けたマウスは、D9.2または抗KLHマウスIgG1抗体(対照)の腹腔内注入を、−1日目および6日目に与えられた。9日目において動物を屠殺し、組織を収集した。(図9(a)および9(b)において、7、8および9日目はそれぞれ0、1および2日目と番号を付けられている)。
我々は初めに、マウスをヒトIL−17BRのアミノ酸配列に由来する合成ペプチドで免疫することにより抗体を生成することを試みた。モノクローナル抗ペプチド抗体が生成されたにも関わらず、我々は成熟したヒトIL−17BRタンパク質を認識するであろう抗体を生成できなかった。次に我々は、野生型のマウスを免疫することによりヒトIL−17BRタンパク質の融合タンパク質に対する抗体を生成することを試みた。多数の免疫処置およびハイブリドーマ融合にも関わらず、我々はIL−17BRに対する高親和性交代を生成できなかった。
D9.2の特異性を、D9.2と他のIL−17受容体ファミリーのメンバーとの相互作用をアッセイすることにより試験した。D9.2はIL−17A受容体(IL−17RA)、IL−17C受容体(IL−17RC)またはIL−17D受容体(IL−17RD)と交差反応しなかった(図3)。
意味深いことに、D9.2はヒトIL−25の生物学的活性も阻害することができた。D9.2はヒトTK−10細胞によるIL−25依存性のIL−8の分泌を用量依存的様式で阻害した(図7)。
実施例3:アレルギー性喘息の実験モデル
BALB/cマウスをまず抗原OVAで感作した後、エアロゾル化したOVAで負荷をかけた。感作し、負荷をかけたBALB/cマウスは特徴的な喘息の表現型を発現する。これは、PBSで負荷をかけた対照BALB/cマウスと比較した、誘発剤メタコリンへの曝露の後のAHRの増大、気道の好酸球浸潤、杯状細胞過形成および血清IgEの分泌を特徴とする。
BALB/cマウスをまずハプテンオキサゾロン(OXA)で感作した後、同じ化学物質の直腸内注入により負荷をかけた。感作し、負荷をかけたマウスは、(エタノールのみの対照と比較して)体重の減少、糞便中の血を伴う結腸の短縮および大腸における炎症を特徴とする、特徴的なIBDの表現型を発現する。
D9.2から免疫グロブリン配列をクローニングするため、D9.2細胞クローンからRNAを単離し、逆転写反応によりcDNAを調製した。
D9.2のVH2+MHCG1による増幅産物をpCRII(登録商標)Blunt−TOPO(登録商標)ベクターの中に、TOPO−blunt cloning(登録商標)キット(Cat 45−0245)を用いて直接ライゲーションし、軽鎖の増幅反応の増幅産物も同様にした。ライゲーションされたpCRII−bluntベクター構築物で形質転換した大腸菌TOP10細菌を、LB−アンピシリン−XGal寒天プレート上で、白いコロニーを選んで寒天の格子の上に移し、PCRスクリーニング混合物の中に入れることによりクローニングした。クローニングされたプラスミド挿入断片をPCRで増幅した。増幅産物をゲル電気泳動し、予想された産物を同定した。正しい大きさのPCR増幅産物を生成するそれぞれのクローンの一夜培養物(5ml)をQIAprep Spin Miniprep Kit Protocol(cat 27106)を用いて処理し、DNAプラスミドのミニプレップを生成した。それぞれの選択されたプラスミドを、M13順方向および逆方向プライマーを用いて両方向で配列決定した。
VHおよびVカッパ遺伝子の完全な推測されたヌクレオチド配列を、それぞれSEQ ID NO:1およびSEQ ID NO:3として示す。これらの配列はそれぞれの可変遺伝子分節の開始部分においてリーダー配列を含んでおり、それは新しく合成された抗体鎖を小胞体の中に輸送するために用いられるシグナル配列をコードしている;それらは最終的な重鎖および軽鎖には存在しない。
AHR 気道反応性亢進
℃ 摂氏温度
bp 塩基対
CD クローン病
CDR 相補性決定領域
DMEM ダルベッコ変法イーグル培地
DNA デオキシリボ核酸
ELISA 酵素結合免疫吸着検査法
FACS 蛍光活性化細胞選別
FCS ウシ胎児血清
g グラム
hr 時間
HRP ホースラディッシュペルオキシダーゼ
IBD 炎症性腸疾患
Ig 免疫グロブリン
i.p. 腹腔内
KLH キーホールリンペットヘモシニアン
mAb モノクローナル抗体
min 分
NBNT マウス腸間膜リンパ節から単離された非B/非T細胞
nm ナノメートル
OD 光学密度
OVA オボアルブミン
OXA オキサゾロン
PBS リン酸緩衝生理食塩水
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
RENCA 腎癌
RH 組み換え重鎖
RK 組み換えカッパ鎖
TMB 3,3’,5,5’テトラメチルベンジジン
UC 潰瘍性結腸炎
VH 免疫グロブリン重鎖可変領域
VL 免疫グロブリン軽鎖可変領域
VK 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
配列
SEQ ID NO:1 D9.2 VHをコードするヌクレオチド配列
Claims (24)
- IL−17BRに結合し、かつ、以下の:
SEQ ID NO:5のアミノ酸配列からなるCDR1、SEQ ID NO:6のアミノ酸配列からなるCDR2、およびSEQ ID NO:7のアミノ酸配列からなるCDR3を含むVHドメイン;ならびに、
SEQ ID NO:8のアミノ酸配列からなるCDR1、SEQ ID NO:9のアミノ酸配列からなるCDR2、およびSEQ ID NO:10のアミノ酸配列からなるCDR3を含むVLドメイン
を含む、抗体分子であって、
当該抗体は、ヒト及びマウスIL−17BRと交差反応し、そして、ヒトIL−25のヒトIL−25受容体への結合を阻害する、
前記抗体分子。 - VHドメインがヒトのフレームワーク領域を含む、請求項1に記載の抗体分子。
- VHドメインがSEQ ID NO:2を含む、請求項1に記載の抗体分子。
- VLドメインがヒトのフレームワーク領域を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗体分子。
- VLドメインがSEQ ID NO:4を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体分子。
- Fab、F(ab’)2、scFv抗体断片である、請求項1〜5のいずれか1項のいずれか1項に記載の抗体分子。
- 抗体定常領域を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の抗体分子。
- 定常領域がIgG1またはIgG4の定常領域である、請求項7に記載の抗体分子。
- 完全抗体を含む、請求項7に記載の抗体分子。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の抗体分子の発現のための発現ベクターであって、発現ベクターがプロモーターに操作できるように連結された請求項10に記載の核酸を含む、前記発現ベクター。
- 請求項11に記載の発現ベクターを保持する宿主細胞。
- 抗体分子を生成する方法であって、その方法が請求項12に記載の宿主細胞を前記の抗体分子の産生のための条件の下で培養することを含む、前記方法。
- さらに前記の抗体分子を単離することを含む、請求項13に記載の方法。
- さらに抗体分子を少なくとも1種類の追加の構成要素を含む組成物の中に配合することを含む、請求項13または請求項14に記載の方法。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗体分子および医薬的に許容できるキャリヤーを含む組成物。
- 凍結乾燥された粉末の形である、請求項16に記載の組成物。
- 喘息の処置または予防のための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗体分子を含む医薬組成物。
- 炎症性腸疾患の処置または予防のための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗体分子を含む医薬組成物。
- 炎症性腸疾患が潰瘍性結腸炎またはクローン病である、請求項19に記載の医薬組成物。
- IL−17BRに対する抗体分子を生成する方法であって、以下の:
(a)実質的にSEQ ID NO:7で述べられている通りであるアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体VHドメインを提供し;
(b)前記のVHドメインを複数の抗体VLドメインと組み合わせて抗体分子を提供し;
(c)前記の抗体分子をIL−17BRへの結合に関してスクリーニングし;そして
(d)IL−17BRに結合する抗体分子を選択する
ことを含む、前記方法。 - VHドメインが請求項2または3において定義されている通りである、請求項21に記載の方法。
- IL−17BRに対する抗体分子を生成する方法であって、以下の:
(a)置き換えられるCDR3を含むか、またはCDR3をコードする領域を欠いているかのどちらかであるVHドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供し;
(b)前記のレパートリーを、実質的にSEQ ID NO:7で述べられている通りであるアミノ酸配列を有するVH CDR3をコードするドナー核酸と、前記のドナー核酸がレパートリー中のCDR3領域の中に挿入されるように組み合わせて、VHドメインをコードする核酸の生成物レパートリーを提供し;
(c)前記の生成物レパートリーの核酸を発現させ;
(d)IL−17BRに特異的な抗体分子を選択し;そして
(e)前記の抗体分子またはそれをコードする核酸を回収する
ことを含む、前記方法。 - 前記の生成物レパートリーをVLドメインと共発現させる、請求項23に記載の方法。
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