JP5756290B2 - 大環状化合物および治療方法 - Google Patents

Description

（関連出願の相互参照）
本願は、２００７年９月９日出願の米国仮特許出願第６０／９７０，９８６号、２００８年１月３日出願の同第６１／００９，９０３号、２００８年２月２４日出願の同第６１／０３０，９９３号、２００８年４月２４日出願の同第６１／１２５，５４２号、及び２００８年８月１５日出願の同第６１／１８９，０９３号（この出願番号はまだ割り当てられていない）の利益を主張するものであり、これら出願の全教示内容は、参照することで本明細書に組み入れられる。

（連邦政府後援の研究によってなされた発明に対する権利に関する申立て）
本研究は、部分的に米国商務省ＮＯＡＡ海洋大気圏局、助成金番号：ＮＡ０６ＯＡＲ４１７００１４の支援を受けた。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。

新規ファーマコフォアの同定は、生物医学的に極めて重要であり、近年、この試みにおいて天然産物が再び注目されている。^１この復興は、おそらく、化学的多様性に付随した比類なき生物学的多様性をはぐくむ海洋環境の開発に成功していることと密接につながっている。^２特に、海洋シアノバクテリアは、生物活性の二次代謝産物の大量生産者であり、^３該代謝産物の多くは、ドラスタチン１０、^４クラシンＡ、^５およびアプラトキシンＡなどの、有望な抗腫瘍活性をもつ修飾ペプチドまたはペプチド−ポリケチド融合化合物である。^６フロリダにおけるシアノバクテリアからつながる新薬を同定するための進行中の調査結果から、新規の化学的足場とナノモル抗増殖作用とをもつ海洋シアノバクテリア代謝産物の構造決定と予備的生物学的特徴とについて報告する。これらの知見により、増殖性疾病および疾患の治療におけるアンメットニーズに対応するための新たな選択肢をもたらす。本明細書の化合物は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）プロセス（例：阻害）を媒介することも分かっており、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害により媒介される疾病、疾患、またはその症状の治療に有用である。これらの知見により、ＨＤＡＣ介在性疾病および疾患の治療におけるアンメットニーズに対応するための新たな選択肢をもたらす。

本発明は、大環状化合物と、該化合物およびその組成物を用いて、増殖性疾病および疾患や、ＨＤＡＣ介在性疾病および疾患を含む疾病および疾患の治療方法とに関する。

本発明は、大環状化合物と、増殖活性の調節方法と、増殖性疾病および疾患の治療方法とに関する。

一実施態様では、本発明は、式Ｉによる化合物：

式中：
各Ｒは独立して、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルキルであり；
各Ｒ^１は独立して、Ｈまたは置換基を有していてもよいアルキルであり；
各Ｒ^２は独立して、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒであり；
各Ｒ^３は独立して、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＣ（Ｏ）ＮＲＲであり；
各Ｒ^４は独立して、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＣ（Ｏ）ＮＲＲであり；
およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物を提供する。

別の態様では、式Ｉａの化合物（およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物）であり、式中、Ｒ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、およびＲ^４は式Ｉで定義される通りである：

他の実施形態では、本明細書のいずれの式の化合物を含み、式中、Ｒ^３およびＲ^４はＨであり；Ｒ^１はイソプロピルであり；Ｒ^２はアルキルであり；Ｒ^２はアルキルＣ（Ｏ）−であり；Ｒ^２はＨであり；該化合物は表１の化合物１〜８のいずれかであり；あるいは、該化合物はラルガゾールである。

ある例では、本発明の化合物は、該構造を有する次の式（Ｉ）（式Ｉａを含む）から選択される：

別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

他の態様では、本発明は、本明細書のいずれの式（例：式Ｉ、式Ｉａ）の化合物を対象に投与する工程を含む、対象内の疾病、疾患、またはその症状の治療方法を提供する。別の態様では、対象内の疾病、疾患、またはその症状を改善するのに十分な量および条件下で化合物を投与する。

他の態様では、本発明は、ＨＤＡＣ活性を調節するのに十分な量および条件下で、本明細書のいずれの式（例：式Ｉ、式Ｉａ）の化合物を対象に接触させる工程を含む、対象内のＨＤＡＣ活性を調節する方法を提供する。別の態様では、調節は阻害である。

他の態様では、本発明は、増殖活性を調節するのに十分な量および条件下で、式Ｉの化合物を対象に接触させる工程を含む、対象内の増殖活性を調節する方法を提供する。

一態様では、本発明は、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物を対象に投与する工程を含む、増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法を提供する。

別の態様では、本発明は、増殖関連疾患または疾病に対する治療が必要であると見なされた、増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法であって、前記対象が前記疾患に対して治療されるように、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、細胞増殖関連疾患または疾病に対する治療が必要であると見なされた、細胞増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法であって、前記対象内の細胞増殖を調節（例：下方調節）するように、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。別の態様では、本明細書に記載の化合物は、非形質転換細胞における癌細胞を優先的に標的にする。

特定の態様では、本発明は、有効量の本明細書に記載の化合物（例：式Ｉ）と、その薬学的に許容される塩とを、それを必要とする前記対象に投与する工程を含む、癌、腫瘍増殖、大腸癌、乳癌、骨癌、脳腫瘍、および他の疾患（例：骨肉腫、神経芽細胞腫、結腸腺癌）の治療方法を提供する。本発明の組成物および方法により治療され得る他の癌としては、噴門癌（例：肉腫、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、および奇形腫）；肺癌（例：気管支原生癌、細気管支肺胞上皮癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫）；種々の消化管癌（例：食道癌、胃癌、膵臓癌、小腸癌、および大腸癌）；尿路性器癌（例：腎臓癌、膀胱癌、尿道癌、前立腺癌、および精巣癌）；肝臓癌（例：肝癌、胆管癌、肝芽細胞腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫）；骨癌（例：骨原性肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、多発骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫（ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｆｒｏｍａ）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液繊維腫、類骨骨腫、及び巨細胞腫）；神経系の癌（例：頭蓋骨、髄膜、脳、および脊髄の癌）；婦人科癌（例：子宮、子宮頸部、卵巣、外陰部、膣）；血液癌（例：血液に関する癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫）；皮膚癌（例：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫、モルス異形成性母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚繊維腫、ケロイド、乾癬）；および副腎の癌（例：神経芽細胞腫）が挙げられる。治療可能な他の疾病および疾患としては、炎症性疾患、神経変性疾患、原虫感染並びにウィルス潜伏感染、および（線維）増殖性疾患の治療が挙げられる。

別の態様では、本発明は、有効量の本明細書に記載の化合物（例：式Ｉ）と、その薬学的に許容される塩とを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、前記対象内のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）を阻害する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、有効量の本明細書に記載の化合物（例：式Ｉ）と、その薬学的に許容される塩とを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、前記対象内のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害により媒介される疾病、疾患、またはその症状の治療方法を提供する。近年、ＨＤＡＣ阻害剤は、マウスモデルにおいて脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、運動ニューロン疾患、およびハンチントン舞踏病の進行を改善することが分かっている。ＨＤＡＣ阻害剤のニューロン保護の役割は、酸化ストレス、炎症、及びニューロン細胞アポトーシスの機構を共有する他の疾病にまで及ぶと思われる。ＨＤＡＣ阻害剤は、免疫系内の遺伝子発現においても広範囲にわたる調節効果があり、狼瘡および慢性関節リウマチ自己免疫疾患のモデルにおいてうまく用いられている。近年、ＨＤＡＣ阻害剤であるトリコスタチンＡが、多発硬化症（ＭＳ）の動物モデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の疾患改善に有効であることが立証された。態様では、本明細書の化合物は、ＭＳ、自己免疫、およびヒト中枢神経系（ＣＮＳ）の脱髄疾患ならびに変性疾患の治療に有用である。態様では、本明細書の化合物は、卒中の治療に有用である。他の態様では、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、記憶喪失を治療または予防する、神経形成を誘発する、記憶保持を高める、記憶形成を高める、シナプス電位またはシナプス伝達を増加させる、あるいは長期増強（ＬＴＰ）を増加させるのに有用である。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は、細胞分化および細胞増殖を制御する種々の転写レプレッサとも関連している。ＨＤＡＣ阻害による遺伝子発現の調節は、幹細胞運命を制御し、分化、脱分化、または分化転換に影響を及ぼし得る。従って、本明細書の化合物は、再プログラム化効率を改善する；多能性幹細胞の効率的な誘発を可能にする；多能性幹細胞の増殖を停止させ、終末分化経路に入らせる；乏突起膠細胞への分化を阻害する、ここで、ＨＤＡＣ２活性は星状膠細胞への分化を特異的に阻害するが、ＨＤＡＣ１活性はニューロンへの分化に必要である；培養中のプライマリ細胞の表現型を安定化させる培地サプリメントとして用いる幹細胞治療において分化を高める；骨芽細胞成熟を促進する；骨組織工学を実施する；筋原性分化を誘発する；ＭｙｏＤ応答レポーターから転写の定常活性を上方制御する；および、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）のｅｘ ｖｉｖｏ増幅を誘発するのに有用である。態様では、本明細書の化合物は、限定的ではないが、筋形成、神経形成、骨形成、および骨芽細胞成熟を含む、対象内の疾患の治療に有用である。

別の態様では、本発明は、有効量の本明細書に記載の化合物（例：式Ｉ）と、その薬学的に許容される塩とを、それを必要とする対象に投与することを含む、前記対象内の疾病、疾患、または症状の治療方法を提供する。かかる方法は、記憶喪失を治療する、神経形成を誘発する、記憶保持を高める、記憶形成を高める、シナプス電位またはシナプス伝達を増加させる、あるいは長期増強（ＬＴＰ）を増加させるのに有用である。かかる方法は、幹細胞運命に関連し、かつ、分化、脱分化、または分化転換によって影響を受ける疾病および疾患の治療にも有用である。該疾患としては、限定的ではないが、筋形成、神経形成、骨形成、および骨芽細胞成熟が挙げられる。

別の態様では、本明細書のいずれの式（例：式（Ｉ））の化合物は、クラスＩのＨＤＡＣ選択性を有する化合物である。従って、これらは、抗癌剤として有用である。さらに、クラスＩのＨＤＡＣ対クラスＩＩのＨＤＡＣの選択性も有しており、ある特異のクラスＩＩのＨＤＡＣの阻害が、例えば、心肥大の促進などの望ましくない結果をもたらし得ることが示されているため、より望ましい治療治療プロファイルももたらす。Ｆｕｒｕｍａｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００２，６２，４９１６−４９２１；Ｙｕｒｅｋ−Ｇｅｏｒｇｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７，５０，５７２０−５７２６を参照されたい。従って、一態様では、本明細書の化合物および方法は、化合物がクラスＩ／クラスＩＩのＨＤＡＣ選択性において選択性（例：少なくとも２倍、少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、少なくともＸ倍、ここで、Ｘは、１以上１００，０００以下の任意の数である）を示すものである。

本明細書に記載の方法としては、対象が特定の治療の必要であると見なされているものが挙げられる。かかる治療が必要である対象の同定は、対象または医療専門家の判断であってよく、主観的（例：意見）または客観的（例：試験又は診断法により測定可能）であってもよい。

以下の非限定的な例および図面を参照しながら本発明についてさらに説明する。

ラルガゾールの解離経路と、生成物イオンの構造とを示す。 ＨＤＡＣ阻害結果を示す。 ＨＤＡＣ阻害結果を示す。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。 ラルガゾールのＮＭＲスペクトルである。

（定義）
本発明をより容易に理解できるようにするために、特定の用語を最初に定義し、便宜上ここにまとめる。

本明細書で使用される、疾患を「治療する」という用語は、疾患、および／または、疾患を引き起こし得る状態を予防する、改善する、和らげる、および／または、管理することを包含する。「治療する」および「治療」という用語は、疾病、および／または、その付随症状を緩和する、または寛解する方法のことを言う。本発明によれば、「治療する」ことは、例えば、疾患による悪影響の発生を予防する、遮断する、阻害する、軽減する、該影響から保護する、調節する、該影響を反転させる、および減らすことを含む。

本明細書で使用される「阻害する」は、進行を予防する、軽減する、および止めることを包含する。

「調節する」という用語は、本発明の化合物への暴露に反応して細胞の活性を増減させることを言う。

「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、本来の状態で見出されるような通常付随する成分を実質的にまたは本質的に含まない物質をことを言う。純度および均一性は、通常、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を用いて判断される。特に、実施形態では、化合物は、少なくとも純度８５％、より好ましくは少なくとも純度９０％、より好ましくは少なくとも純度９５％、最も好ましくは少なくとも純度９９％である。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書ではどれも同じ意味で使用し、アミノ酸残基のポリマーのことを言う。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学模倣体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーに対して適用する。

「ペプチド」は、少なくとも２つのアミノ酸の配列である。ペプチドは、短いアミノ酸配列のみならず、タンパク質を含む長いアミノ酸配列からなり得る。

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸のみならず、天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸アナログとアミノ酸ミメティックのことを言う。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされたアミノ酸のみならず、後から修飾されたアミノ酸（例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、Ｏ−ホスホセリン）である。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を有する（即ち、水素、カルボキシル基、アミノ基、Ｒ基にα炭素が結合している）化合物のことを言い、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムである。かかるアナログは、修飾されたＲ基を備えること（例：ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸ミメティックは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物のことを言う。

「タンパク質」という用語は、α−アミノと隣接する残基のカルボキシ基間のペプチド結合により互いに連結した一連のアミノ酸残基のことを言う。

アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。

アミノ酸配列について、当業者であれば、単一アミノ酸、または、コード化配列内の僅かな比率のアミノ酸を変える、付加する、または削除する、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加は、「保存的に修飾された変異体」であり、該変化により、アミノ酸を化学的に類似したアミノ酸に置換させることが分かるであろう。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的な置換表は、当該技術分野では周知である。

ポリペプチド構造などの高分子構造は、種々の構成レベルで記載可能である。このような構成に関する一般的な考察については、例えば、Ａｌｂｅｒｔｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ（３ｒｄ ｅｄ．，１９９４）ａｎｄ Ｃａｎｔｏｒ ａｎｄ Ｓｃｈｉｍｍｅｌ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｐａｒｔ Ｉ．Ｔｈｅ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（１９８０）を参照されたい。「一次構造」とは、特定のペプチドのアミノ酸配列のことを言う。「二次構造」とは、ポリペプチド内部の局所的に規則立った三次元構造のことを言う。これらの構造は一般にドメインとして知られている。ドメインは、ポリペプチドの密集単位を形成するポリペプチドの部分であり、一般に５０〜３５０アミノ酸長である。典型的なドメインは、β−シートおよびα−ヘリックスの連鎖などのより小規模な構成物から構成される。「三次構造」とは、ポリペプチド単量体の完全な三次元構造のことを言う。「四次構造」とは、独立した三次単位の非共有的な会合によって形成される三次元構造のことを言う。異方性の項はエネルギー項としても知られている。

「投与」または「投与する」という用語は、目的の機能を実行するため化合物（単数または複数）を対象に導入する経路のことを言う。使用できる投与経路の例としては、注射（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）、局所、経口、吸入、直腸、および経皮が挙げられる。

「有効量」という用語は、所望の結果を達成するために必要な投与量および期間にわたって有効な量のことを含む。化合物の有効量は、対象の病状、年齢、および体重などの要素、ならびに対象において所望の反応を引き起こすための化合物の能力に応じて変えることができる。投与計画は、最適な治療反応をもたらすように調整することができる。有効量はまた、治療に有効な作用がエラスターゼ阻害剤化合物のあらゆる毒性作用または有害作用（例：副作用）を上回る量である。

本明細書で使用される「全身投与」、「全身に投与した」、「末梢投与」、「末梢に投与した」という字句は、患者の体内に入れることで、代謝や他の同様のプロセスが施されるように、化合物（単数または複数）、薬剤、または他の材料を投与することを意味する。

「治療に有効な量」という用語は、治療中の疾患または疾病の１つ以上の症状の進行を防ぐ、または、該症状をある程度軽減させるのに十分な化合物の投与量のことを言う。

化合物の治療に有効な量（即ち、有効投与量）は、体重１ｋｇ当たり、約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。他の実施形態では、治療に有効な量は、約１．０ｐＭ〜約５００ｎＭの範囲であってもよい。限定的ではないが、疾病または疾患の重症度、前に行われた治療、対象の全身状態および／または年齢、存在している他の疾病を含む一定の要因が、対象を効果的に治療するのに必要な投与量に影響を及ぼし得ることは当業者であれば分かるであろう。さらに、化合物の治療に有効な量による対象の治療は、単一の治療であってもよく、好ましくは、一連の治療であってもよい。一例において、対象は、体重１ｋｇ当たり、約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲で、週一回で約１〜１０週間、好ましくは、２〜８週間、より好ましくは、約３〜７週間、さらにより好ましくは、約４、５、または６週間にわたり化合物で治療される。治療に使用される化合物の有効投与量は、特定の治療の経過と共に増減できることが分かるであろう。

「キラル」という用語は、鏡像パートナーの非重畳可能性の特性を有する分子のことを言い、「アキラル」という用語は、鏡像パートナーに重畳可能な分子のことを言う。

「ジアステレオマー」という用語は、２つ以上の非対称中心をもち、その分子は互いに鏡像ではない立体異性体のことを言う。

「鏡像異性体」という用語は、互いに非重畳可能な鏡像である、化合物の２つの立体異性体のことを言う。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ化合物」と呼ばれる。

「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、空間における原子または基の配置に関して異なっている化合物のことを言う。

「プロドラッグ」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝することができる部分をもつ化合物のことを言う。一般に、プロドラッグは、エステラーゼあるいは他の機構によりｉｎ ｖｉｖｏで実薬に代謝される。プロドラッグおよびそれらの使用例は、当該技術分野では周知である（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。プロドラッグは、化合物の最終単離および精製中にｉｎ ｓｉｔｕで調製することができる、あるいは、その遊離酸形態あるいはヒドロキシルの精製化合物を適当なエステル化剤と別々に反応させることで調製することができる。ヒドロキシル基は、カルボン酸による治療を介してエステルに変換することができる。プロドラッグ部分の例としては、置換および未置換の、分枝または非分枝の低級アルキルエステル部分（例：プロピオン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルエステル（例：ジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステル（例：アセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例：ピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール−低級アルキルエステル（例：ベンジルエステル）、置換（例：メチル、ハロ、またはメトキシ置換基で置換）アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ−低級アルキルアミド、およびヒドロキシアミドが挙げられる。好ましいプロドラッグ部分は、プロビオン酸エステルおよびアシルエステルである。ｉｎ ｖｉｖｏで他の機構を通じて活性型に変換されるプロドラッグも含む。態様では、本発明の化合物は、本明細書のいずれの式のプロドラッグである。

「対象」という用語は、哺乳類などの動物のことを言い、限定的ではないが、霊長類（例：ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ネズミ、マウスなどが挙げられる。ある実施形態では、対象はヒトである。

さらに、本発明の化合物は、いずれかの配置を有するオレフィンを含む：「Ｚ」は、「シス」（同じ側）と呼ばれる配座のことを言い、「Ｅ」は、「トランス」（反対側）と呼ばれる配座のことを言う。キラル中心の命名に関して、「ｄ」および「ｌ」配置という用語は、ＩＵＰＡＣ勧告の定義による。用語の使用について、ジアステレオマー、ラセミ体、エピマー、および鏡像異性体は、製剤の立体化学を説明するため通常の文脈で使用する。

本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素基のことを言う。「低級アルキル」という用語は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル鎖のことを言う。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびｎ−ペンチルが挙げられる。アルキル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

「アルケニル」という用語は、２〜１２個の炭素原子と、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合とを含む直鎖または分枝鎖であってもよい不飽和炭化水素鎖のことを言う。アルケニル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

「アルキニル」という用語は、２〜１２個の炭素原子と、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合とを含む直鎖または分枝鎖であってもよい不飽和炭化水素鎖のことを言う。アルキニル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

アルケニル基およびアルキニル基のｓｐ^２炭素またはｓｐ炭素は、それぞれ、必要に応じて、アルケニル基またはアルキニル基の結合点であってもよい。

「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキルラジカルのことを言う。

本明細書で使用される「ハロゲン」、「ハル（ｈａｌ）」、または「ハロ」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉを意味する。

「シクロアルキル」という用語は、少なくとも１つの飽和環、または少なくとも１つの非芳香族環を有する炭化水素３〜８員の単環または７〜１４員の二重環系のことを言い、非芳香族環は、ある程度の不飽和度を有してもよい。シクロアルキル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。一実施態様では、シクロアルキル基の各環の０、１、２、３、または４個の原子は、置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の代表的な例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロブチル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニルなどが挙げられる。

「アリール」という用語は、炭化水素の単環、二環、または三環式芳香環系のことを言う。アリール基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。一実施態様では、アリール基の各環の０、１、２、３、４、５、または６個の原子は、置換基で置換されていてもよい。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニルなどが挙げられる。

「ヘテロアリール」という用語は、単環であれば１〜４個の環ヘテロ原子、二環であれば１〜６個のヘテロ原子、または三環であれば１〜９個のヘテロ原子を有し、前記ヘテロ原子はＮ、Ｏ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素（特に指示がなければ適当な水素原子をもつ）である、芳香族の５〜８員の単環、８〜１２員の二環、または１１〜１４員の三環系のことを言う。ヘテロアリール基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。一実施態様では、ヘテロアリール基の各環の０、１、２、３、または４個の原子は、置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、イソキノリニル、インダゾリルなどが挙げられる。

「ヘテロシクロアルキル」という用語は、単環であれば１〜３個のヘテロ原子、二環であれば１〜６個のヘテロ原子、または三環であれば１〜９個のヘテロ原子を有し、前記ヘテロ原子はＯ、Ｎ、Ｓ、Ｂ、Ｐ、またはＳｉから選択され、非芳香族環系は完全に飽和している、非芳香族の３〜８員の単環、７〜１２員の二環、または１０〜１４員の三環系のことを言う。ヘテロシクロアルキル基は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。一実施態様では、ヘテロシクロアルキル基の各環の０、１、２、３、または４個の原子は、置換基で置換されていてもよい。ヘテロシクロアルキル基の代表的な例としては、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、チイレニルなどが挙げられる。

「アルキルアミノ」という用語は、１つまたは２つのアルキル基でさらに置換されるアミノ置換基のことを言う。「アミノアルキル」という用語は、１つ以上のアミノ基でさらに置換されるアルキル置換基のことを言う。「ヒドロキシアルキル」または「ヒドロキシルアルキル」という用語は、１つ以上のヒドロキシル基でさらに置換されるアルキル置換基のことを言う。アルキルアミノ、アミノアルキル、メルカプトアルキル、ヒドロキシアルキル、メルカプトアルコキシ、スルホニルアルキル、スルホニルアリール、アルキルカルボニル、およびアルキルカルボニルアルキルのアルキル部分またはアリール部分は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

本明細書の方法に有用な酸および塩基は、当該技術分野では周知である。酸触媒は任意の酸性化合物であり、本質的に、無機（例：塩酸、硫酸、硝酸、三塩化アルミニウム）であっても、有機（例：カンファースルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、イッテルビウムトリフラート）であってもよい。酸は、化学反応を容易にするため触媒量であっても化学量論量であっても有用である。塩基は任意の塩基性化合物であり、本質的に、無機（例：重炭酸ナトリウム、水酸化カリウム）であっても、有機（例：トリエチルアミン、ピリジン）であってもよい。塩基は、化学反応を容易にするため触媒量であっても化学量論量であっても有用である。

アルキル化剤は、問題となる官能基（例：アルコールの酸素原子、アミノ基の窒素原子）のアルキル化をもたらすことが可能な任意の試薬である。アルキル化剤は、当該技術分野では周知であり、本明細書で引用した参照文献にあるものや、ハロゲン化アルキル（例：ヨウ化メチル、臭化ベンジル、または塩化ベンジル）、硫酸化アルキル（例：硫酸メチル）、または、当該技術分野では周知の他のアルキル基−離脱基の組み合わせが挙げられる。離脱基は、反応（例：脱離反応、置換反応）中に分子から離脱することができる任意の安定種である。離脱基は、当該技術分野では周知であり、本明細書で引用した参照文献にあるものや、ハロゲン（例：Ｉ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｆ−）、ヒドロキシ、アルコキシ（例：−ＯＭｅ、−Ｏ−ｔ−Ｂｕ）、アシルオキシアニオン（例：−ＯＡｃ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ_３）、スルホネート（例：メシル、トシル）、アセトアミド（例：−ＮＨＣ（Ｏ）Ｍｅ）、カルバメート（例：Ｎ（Ｍｅ）Ｃ（Ｏ）Ｏｔ−Ｂｕ）、ホスホネート（例：−ＯＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）_２）、水またはアルコール（プロトン性条件）などが挙げられる。

ある実施形態では、任意の基（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルなど）上の置換基は、その基の任意の原子であってよく、置換可能な任意の基（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルなど）は、必要に応じて、１つ以上の置換基（同一であっても異なっていてもよい）で置換されていてもよい。ここで、各々は、水素原子を置換する。適当な置換基の例としては、限定的ではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アリールオキシ、ヒドロキシル、ヒドロキシルアルキル、オキソ（即ち、カルボニル）、カルボキシル、ホルミル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールオキシカルボニル、チオ、メルカプト、メルカプトアルキル、アリールスルホニル、アミノ、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルキルカルボニル、またはアリールアミノ−置換アリール；アリールアルキルアミノ、アラルキルアミノカルボニル、アミド、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、イミノ、カルバミド、カルバミル、チオウレイド、チオシアナト、スルホアミド、スルホニルアルキル、スルホニルアリール、またはメルカプトアルコキシが挙げられる。

本発明の化合物および構造解明
Ｓｙｍｐｌｏｃａ ｓｐ．の試料は、フロリダキーズ、キーラーゴから集め、有機溶媒で抽出した。溶媒分配、シリカゲルクロマトグラフィー、および逆相ＨＰＬＣにより、得られた細胞毒性の粗抽出物にバイオアッセイ誘導分画を施し、無色の非晶質固体としてラルガゾール（１）を得た｛［α］^２０ _Ｄ＋２２（ｃ０．１、ＭｅＯＨ）｝。

１のＨＲ−ＥＳＩ／ＡＰＣＩ−ＭＳにおいてｍ／ｚ ６２３．２３９７にピークがある［Ｍ＋Ｈ］^＋と組み合わせた^１Ｈおよび^１３ＣのＮＭＲデータにより、分子式はＣ_２９Ｈ_４２Ｎ_４Ｏ_５Ｓ_３（Ｃ_２９Ｈ_４３Ｎ_４Ｏ_５Ｓ_３に対する計算値、６２３．２３９６）であると示唆された。^１ＨのＮＭＲスペクトルは、二級アミドを特徴づける２本のシグナル（δ_２−ＮＨ ７．１５、δ_{１４−ＮＨ} ６．４５）を示した。さらに、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、およびＨＭＢＣデータを用いたＣＤＣｌ_３の二次元ＮＭＲ解析により、これらの交換性プロトンは、それぞれ、バリン残基および修飾されたグリシン残基に属することが示された（表２および補足情報）。推定グリシンカルボニル（δ_Ｃ−１３ １６７．９）は、唯一の芳香族メチン（δ_Ｈ−１２ ７．７６、δ_Ｃ−１２ １２４．２）からＣ−１３および別の第４級ｓｐ^２炭素であるＣ−１１（δ_Ｃ １４７．４）までのＨＭＢＣにより、２，４−二置換チアゾールユニットの一部であることが証明された。さらに、Ｈ−８ａ（δ_Ｈ ４．０４）からＣ−１０（δ_Ｃ １６４．６）までのＨＭＢＣと組み合わせた、メチル一重線（δ_Ｈ−９ １．８７）からカルボニルＣ−６（δ_Ｃ １７３．５）、第４級炭素Ｃ−７（δ_Ｃ ８４．４）、およびメチレン炭素Ｃ−８（δ_Ｃ ４３．３）までのＨＭＢＣにより、２−置換チアゾリン−４−メチル−４−カルボン酸ユニット（Ｃ−６〜Ｃ−１０）の存在が示唆された。Ｃ−１０までの唯一の他のＨＭＢＣはチアゾールプロトンＨ−１２からのものであり、Ｃ−１０がチアゾール置換基を有することが示された。バリン残基のメチルチアゾリンカルボン酸末端とアミノ末端とは、ＨＭＢＣデータ（表２）に基づき、アミド結合を介して明確に結合していた。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルの残りのシグナルは、ＣＯＳＹ分析（補足情報）から結論を下したように、２スピン系に属した。ユニットの１つは、１５．６Ｈｚの^３Ｊ_{Ｈ−１８，Ｈ−１９}に対する大きなカップリング定数に基づいて、二重結合のＥ−配置をもつ７−置換３−ヒドロキシ−ヘプタ−４−エン酸部分（Ｃ−１５〜Ｃ−２１）であり、Ｈ−１８とＨ_２−２０間のＮＯＳＥＹ交差ピークと一致していた。このユニットは、１４−ＮＨおよびＨ−１４ａ／ｂからＣ−１５までのＨＭＢＣと同様に、１４−ＮＨとＨ−１６ａおよびＨ−１６ｂとの間のＲＯＥＳＹ交差ピークに示されるように、グリシン−誘導ユニットのアミノ末端に結合していた。最後のユニットは、ｎ−オクタノイル基（Ｃ−２２〜Ｃ−２９）であり、これは、Ｈ_２−２１からＣ−２２までのＨＭＢＣに基づいて、Ｃ−２１と結合していた。１つの硫黄原子がまだ割り当てられていないという事実によるＣ−２２（δ_Ｃ １９９．４）に対する低磁場化学シフトは、チオエステル官能性の強力な証拠であった。最後に、分子式要件、およびアシルオキシ置換基を示唆するＨ−１７（δ_Ｈ ５．６６）の低磁場化学シフトを説明するには、Ｃ−１７はバリンのカルボキシル末端にエステル結合していなくてはならなかった。これはさらに、Ｈ−１７とＨ_３−５（δ_Ｈ ０．５０）間の弱いＮＯＥにより支持され、１に示す平面環状構造となった。

３つのキラル中心の絶対配置を割り当てるため、我々の方策は、基準となる鏡像異性体が容易に入手可能な光学活性断片を生成することであった（スキーム１）。すなわち、オゾン分解、続いて、酸化的後処理および酸加水分解により、２−メチルシステイン酸、バリン、リンゴ酸を生成した。正基準のものと滞留時間を比較しながら、生成物混合物についてキラルＨＰＬＣ分析を行った。この分析によりＬ−バリン、（Ｒ）−２−メチルシステイン酸、およびＬ−リンゴ酸が同定され、１の絶対配置は２Ｓ、７Ｒ、１７Ｓであると立証された。

^ａプロトンは、指示炭素へのＨＭＢＣ相関を示している。^ｂ他に指示されない限り、^ｎＪ＝７Ｈｚに最適化。^ＣｎＪ＝３．５Ｈｚに最適化。

ａ）Ｏ_３、ＣＨ_２Ｏ_２、２５℃、３０分：ｂ）Ｈ_２Ｏ_２−ＨＣＯ_２Ｈ（１：２）、７０℃、２０分：ｃ）６Ｎ ＨＣｌ、１１０℃、２４時間

ラルガゾール（１）は、チアゾールに直線状に縮環した置換４−メチルチアゾリンを含む、異常な構造的特徴の密集した組み合わせを有しており、これは、固形腫瘍選択性をもつＳｃｙｔｏｎｅｍａ ｍｉｒａｂｉｌｅから陸生シアノバクテリアの細胞毒性の群の一員であるジデヒドロミラバゾール^７でしか以前は見られなかった。別の顕著な構造要素は、チオエステル部分である。チオエステル含有二次代謝産物は、海綿動物^９、真核性藻類^１０、およびバクテリア^１１から以前に報告されていたが、シアノバクテリアからは報告されていなかった。１の３−ヒドロキシ−７−チオ−ヘプタ−４−エン酸ユニットは、天然産物では前例がないものである。最も重要なことは、癌細胞に対する強力な生物活性および選択性については、作用機序、癌化学療法に使える可能性、およびラルガゾール（１）の生合成に関してさらなる調査を必要としていることである。

本発明の化合物は、有機合成の技術分野では周知の手段により作製できる。反応条件を最適化する方法、必要に応じて、競合する副生成物を最小限にすることは、当該技術分野では周知である。反応の最適化やスケールアップには、高速パラレル合成機器やコンピュータ制御式マイクロリアクタを利用することが有利である（例えば、Ｄｅｓｉｇｎ Ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｒｌｓｏｎ Ｒ，Ｅｄ，２００５；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．；Ｊａｈｎｉｓｃｈ，Ｋら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．２００４ ４３：４０６；およびそれらに記載の参照文献）。追加の反応スキームや反応プロトコルは、市販の構造解析データベースソフトウェア、例えば、ＳｃｉＦｉｎｄｅｒ（登録商標）（米国化学会のＣＡＳ部門）やＣｒｏｓｓＦｉｒｅ Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ（登録商標）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ＭＤＬ）を用いて、または、Ｇｏｏｇｌｅ（登録商標）などのインターネット検索エンジン、あるいは、米国特許商標局テキストデータベースなどのキーワードデータベースを用いた適当なキーワード検索で、当業者によって決定できる。

本明細書の化合物は、リンケージ（例：炭素−炭素結合）を含んでもよく、結合回転は、例えば、環または二重結合が存在することによる制限で、その特定のリンケージを中心にして制限されている。従って、シス／トランスおよびＥ／Ｚ異性体は全て本発明に明示的に含まれる。本発明の化合物は、多数の互変異性型で表すこともでき、そのような場合、本発明は、互変異性型が１つしか表わされていなくても、本明細書に記載された化合物の全ての互変異性型を明示的に含む。本明細書のかかる化合物の全てのかかる異性体は、本発明に明示的に含まれる。本明細書に記載された化合物の全ての結晶体および多形体は、本発明に明示的に含まれる。本発明の化合物を含む抽出物および画分も具現化される。「異性体」という用語は、ジアステレオマー、鏡像異性体、位置異性体、構造異性体、回転異性体、互変異性体などを含むものとする。１つ以上の立体中心を含む化合物、例えば、キラル化合物において、本発明の方法は、鏡像異性的に濃縮された化合物、ラセミ化合物、またはジアステレオマーの混合物で行うことができる。

鏡像異性的に濃縮された化合物は、５０％以上の鏡像体過剰率を有するのが好ましい。化合物は、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％以上の鏡像体過剰率を有するのがより好ましい。好適な実施形態では、本発明のキラル化合物の１つの鏡像異性体またはジアステレオマーのみを細胞または対象に投与する。

治療方法
本発明は、大環状化合物と、本明細書に記載の該化合物およびその組成物を用いた疾病および疾患の治療方法とに関する。

他の態様では、本発明は、ＨＤＡＣ関連疾患または疾病に対する治療が必要であると見なされた、ＨＤＡＣ関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法であって、前記対象が前記疾患に対して治療されるように、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。かかる治療が必要である対象の同定は、対象または医療専門家の判断であってよく、主観的（例：意見）または客観的（例：試験又は診断法により測定可能）であってもよい。

一態様では、本発明は、細胞増殖活性を調節するのに十分な量および条件下で、式Ｉの化合物を対象に接触させる工程を含む、対象内の細胞の増殖活性を調節する方法を提供する。

一実施態様では、調節は阻害である。

別の態様では、本発明は、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物を対象に投与することを含む、細胞増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法を提供する。

他の態様では、本発明は、細胞増殖関連疾患または疾病に対する治療が必要であると見なされた、細胞増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象の治療方法であって、前記対象が前記疾患に対して治療されるように、有効量の式Ｉの化合物または医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。

ある実施形態では、本発明は、前述の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物はラルガゾールである。

ある実施形態では、本発明は、疾患の治療方法を提供し、ここで、疾患は癌（例：乳癌、大腸癌）または固形腫瘍である、

ある実施形態では、対象は哺乳類であり、霊長類またはヒトが好ましい。

別の実施形態では、本発明は、前述の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物の有効量は、約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲である。ある実施形態では、式Ｉの化合物の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲である。別の実施形態では、式Ｉの化合物の有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。

他の実施形態では、本発明は、前述の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物の有効量は、約１．０ｐＭ〜約５００ｎＭの範囲である。ある実施形態では、有効量は、約１０．０ｐＭ〜約１０００ｐＭの範囲である。別の実施形態では、有効量は、約１．０ｎＭ〜約１０ｎＭの範囲である。

別の実施形態では、本発明は、前述の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物は、静脈内、筋肉内、皮下、脳室内、経口、または局所に投与される。

別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物は、細胞増殖活性（例：形質転換／非形質転換、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１／ＮＭｕＭＧ、Ｕ２ＯＳ／ＮＩＨ３Ｔ３細胞）において選択性（例：少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくともＸ倍、ここで、Ｘは、１以上２０以下の任意の数である）を示す。別の態様では、式Ｉの化合物は、別の標準的な抗癌治療（例：パクリタキセル、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン）に対して、細胞増殖活性を調節する選択性（例：少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくともＸ倍、ここで、Ｘは、１以上２０以下の任意の数である）を示す。

他の実施形態では、本発明は、前述の方法を提供し、ここで、式Ｉの化合物は、単独または１つ以上の他の治療と併用して投与される。別の実施形態では、追加治療薬は、抗癌剤、化学療法剤、抗血管形成剤、細胞毒性剤、または抗増殖剤である。かかる化学療法剤の例としては、限定的ではないが、ダウノルビシン、ダウノマイシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、エソルビシン、ブレオマイシン、マホスファミド、イホスファミド、シトシンアラビノシド、ビス−クロロエチルニトロソウレア、ブスルファン、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、プレドニソン、ヒドロキシプロゲステロン、テストステロン、タモキシフェン、ダカルバジン、プロカルバジン、ヘキサメチルメラミン、ペンタメチルメラミン、ミトキサントロン、アムサクリン、クロラムブシル、メチルシクロヘキシルニトロソウレア、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、シクロホスファミド、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン（ＣＡ）、５−アザシチジン、ヒドロキシウレア、デオキシコホルマイシン、４−ヒドロキシペルオキシシクロホスホルアミド、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、５−フルオロデオキシウリジン（５−ＦＵｄＲ）、メトトレキセート（ＭＴＸ）、コルヒチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、トリメトレキセート、テニポシド、シスプラチン、およびジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）が挙げられる。一般には、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１５ｔｈ Ｅｄ．，ｐｐ．１２０６−１２２８，Ｂｅｒｋｏｗら、ｅｄｓ．，Ｒａｈａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９８７を参照されたい。

本発明の別の目的は、細胞増殖疾患または疾病の治療に用いる薬剤の製造において、または、細胞分化、脱分化、または分化転換に影響を及ぼすために、本明細書に記載の化合物（例：本明細書のいずれの式）を使用することである。本発明の別の目的は、細胞増殖疾患または疾病の治療に用いる、または、細胞分化、脱分化、または分化転換に影響を及ぼすために、本明細書に記載の化合物（例：本明細書のいずれの式の化合物）を使用することである。

医薬組成物
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

一実施態様では、本発明は、式Ｉの化合物がラルガゾールと薬学的に許容される担体とである医薬組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、追加治療薬をさらに含む医薬組成物を提供する。別の実施形態では、追加治療薬は、抗癌剤、化学療法剤、抗血管形成剤、細胞毒性剤、または抗増殖剤である。

一態様では、本発明は、記憶喪失、神経形成を誘発する、記憶保持を高める、記憶形成を高める、シナプス電位またはシナプス伝達を増加させる、あるいは長期増強（ＬＴＰ）を増加させることなどを含むＨＤＡＣ介在性疾病または疾患を患っているまたは該疾患に罹り易い対象に化合物を投与するための説明書と共に、単位投与剤形で有効量の式Ｉの化合物を含むキットを提供する。

一態様では、本発明は、癌、固形腫瘍、血管形成などを含む細胞増殖性疾病または疾患を患っているまたは該疾患に罹り易い対象に化合物を投与するための説明書と共に、単位投与剤形で有効量の式Ｉの化合物を含むキットを提供する。

「薬学的に許容される塩」または「薬学的に許容される担体」という用語は、本明細書に記載された化合物に見られる特定の置換基に応じて、比較的非毒性である酸または塩基で調製される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が比較的酸性の官能性を含む場合、塩基付加塩は、塩基が純粋なものかまたは適当な不活性溶媒中の何れかで、十分な量の所望の塩基と中性のかかる化合物とを接触させることにより得られ得る。薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウム塩、あるいは同様の塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能性を含む場合、酸付加塩は、酸が純粋なものかまたは適当な不活性溶媒中の何れかで、十分な量の所望の酸と中性の化合物とを接触させることにより得られ得る。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨー化水素酸、または亜リン酸などの無機酸から誘導されるもののみならず、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような比較的非毒性の有機酸から誘導される塩が挙げられる。アルギニン酸などのようなアミノ酸の塩、およびグルクロン酸、またはガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ ａｃｉｄ）などのような有機酸の塩も挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１−１９（１９７７）を参照されたい）。本発明の特定の特異的化合物は、化合物を塩基または酸付加塩の何れにも変換し得る塩基および酸官能性の両方を含む。当業者に周知の他の薬学的に許容される担体は本発明に適する。

中性の化合物は、通常の方法で、塩と塩基または酸と接触させ、親化合物を単離することにより再生し得る。親型の化合物は、極性溶媒中での溶解性のような特定の物理的特性において種々の塩形態と異なるが、他の点については、塩は、本発明の目的の親型の化合物と等価である。

塩形態に加えて、本発明はプロドラッグ形態で化合物を提供する。本明細書に記載された化合物のプロドラッグは、生理条件下で容易に化学変化を受け、本発明の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、ｅｘ ｖｉｖｏ環境で化学的または生化学的方法によって本発明の化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬と共に経皮貼付容器内に配置された場合、徐々に本発明の化合物に変換され得る。

本発明の特定の化合物は、非溶媒型のみならず、水和型を含む溶媒型で存在し得る。一般に、溶媒型は非溶媒型と等価であり、それは本発明の範囲内に含まれるものとする。本発明の特定の化合物は、多結晶または非結晶質形で存在し得る。一般に、すべての物理的形態は、本発明により意図される使用に適当（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）であり、本発明の範囲内にあると意図している。

本発明は、有効量の本明細書に記載された化合物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。一実施形態では、化合物は、薬学的に許容される製剤、例えば、薬学的に許容される製剤を対象に投与した後、少なくとも１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、または４週間にわたって化合物を対象に徐放する薬学的に許容される製剤を用いて対象に投与される。

本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルおよび投与の時間経過は、患者にとって毒性（許容できないほど毒性）ではない限り、特定の患者、組成物および投与様式に対する所望の治療反応を達成するのに効果的な活性成分の量を得るように変更することができる。

使用時、本発明による少なくとも１つの化合物は、静脈内、筋肉内、皮下、または脳室内への注射、あるいは、経口投与または局所塗布により、薬学的担体でそれを必要とする対象に薬学的に有効な量で投与される。本発明によれば、本発明の化合物は、単独または第２の異なる治療と併用して投与してもよい。「と併用する」とは、実質的に同時または連続的に一緒であることを意味する。一実施態様では、本発明の化合物は急性投与される。従って、本発明の化合物は、約１日〜約１週間などの短期間の治療で投与してもよい。別の実施形態では、本発明の化合物は、例えば、治療される状態に応じて約１週間〜数ヶ月など、慢性疾患の改善により長期間にわたって投与してもよい。

本明細書で使用される「薬学的に有効な量」とは、信頼しうる医療的判断の範囲内にあって、治療される状態を大幅によい方向に改善するのに十分な量であるが、重篤な副作用を（合理的な受益性／危険性比率で）回避するよう十分に少ない量である、本発明の化合物の量のことを意味する。本発明の化合物の薬学的に有効な量は、達成すべき特定の目標、治療中の患者の年齢および健康状態、基礎疾患の重症度、治療期間、併用療法の性質、および使用する特定の有機亜鉛化合物に応じて変えてもよい。例えば、小児または新生児に投与する本発明の化合物の治療に有効な量は、信頼しうる医療的判断に応じて、比例的に減らされるであろう。従って、本発明の化合物の有効量は、所望の作用をもたらす最小量となる。

本発明の明確な実用面での利点は、静脈内、筋肉内、皮下、経口、または脳室内への注入経路、あるいは、クリーム剤またはゲル剤などの局所塗布により、従来の方法で化合物を投与できる点である。投与経路に応じて、本発明の化合物を含む有効成分を、化合物を不活性化するであろう酵素や酸や他の自然条件の作用から化合物を保護するための物質でコーティングすることが必要とされる。非経口投与以外で本発明の化合物を投与するために、化合物を不活性化を防ぐ物質でコーティングしてもよいし、該物質と併用投与してもよい。

化合物は、非経口または腹腔内投与してもよい。分散液は、例えば、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物、ならびに油中で調製できる。

注射用途に適した製薬学的形態としては、無菌の水溶液（水溶性）または分散液および、無菌の注射用溶液または分散液を即席に製造するための無菌の粉末が挙げられる。すべての場合において、形態は無菌でなければならず、シリンジによる扱いが容易な程度に流動的でなければならない。形態は、製造及び保存の条件下で安定でなければならない。担体は、例えば、水、ＤＭＳＯ、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物、および植物油を含む溶剤または分散媒体であってもよい。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用や、分散液の場合は必要な粒径の保持により維持することができる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むのが好ましい。注射用組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンを組成物中に用いることにより行うことができる。

無菌の注射用溶液は、適当な溶媒中で必要量の本発明の化合物を上記で挙げた必要な他の種々の成分と混合し、続いて濾過滅菌することにより調製される。一般に、分散液は、種々の滅菌化合物を塩基性（ｂａｓｉｃ）分散媒体および上記で挙げた成分から必要な他の成分を含む無菌の賦形剤中に組み込むことにより調製される。無菌の注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製法は、真空乾燥および凍結乾燥法であり、それにより、あらかじめ無菌濾過されたその溶液から有効成分および他の追加の所望の成分の粉末を得る。

経口治療投与においては、化合物は、賦形剤と混合して、服用可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、ウェーハ剤等の形で使用し得る。本発明による組成物または製剤は、経口単位投与量形態が対象内の疾患の治療に十分な化合物濃度を含むように調製される。

薬学的担体として機能できるいくつかの材料の例としては、ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖類；コーンスターチおよびジャガイモでんぷんなどのでんぷん類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ステアリン酸；ステアリン酸マグネシウム；硫酸カルシウム；ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、および大豆油などの植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール類；寒天；アルギン酸；発熱物質なしの水；等張食塩水；リン酸緩衝液；脱脂粉乳；のみならず、例えば、ビタミンＣ、エストロゲン、およびエキナシアなどの医薬製剤に使用される他の非毒性の適合性物質が挙げられる。ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤や潤滑剤、ならびに、着色剤、着香料、潤滑剤、賦形剤、錠剤形成剤、安定剤、酸化防止剤、および防腐剤も存在していてもよい。

本明細書の変数の定義における化学基のリストの列挙は、任意の単一基またはリストされた基の組み合わせとしての変数の定義を含むものである。本明細書の変数における実施形態の列挙は、任意の単一実施形態、あるいは、任意の他の実施形態またはその一部と組み合わせたものとしての実施形態を含むものである。

実施例
特定の実施例を用いて本発明について説明するが、本発明を限定するものとみなすべきではない。

一般的な実験手順
^１Ｈおよび^１３ＣのＮＭＲデータは、それぞれ、６００ＭＨｚと１５０ＭＨｚで動作する５ｍｍプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ６００ＭＨｚスペクトロメータで取得した。２Ｄ ＮＭＲデータは、内標準として残渣溶媒シグナル（δ_Ｈ ７．２６ｐｐｍ、δ_Ｃ ７７．０ｐｐｍ）を用いて、１ｍｍ三重共鳴高温超電導低温プローブを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩ ６００ＭＨｚ上で記録した。ＨＳＱＣ実験は^１Ｊ_ＣＨ＝１４５Ｈｚに対して最適化し、ＨＭＢＣ実験は^ｎＪ_ＣＨ＝７または３．５Ｈｚに対して最適化した。ＥＳＩ（正モード）により、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００を用いてＬＣ−ＭＳデータを入手した。ＥＳＩ／ＡＰＣＩマルチモードイオン源検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣ−ＴＯＦ質量分析計を用いてＨＲＭＳデータを入手した。ＲｅｓＣｏｍ（ＤＳＭ Ｐｈａｒｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）によって提供された（Ｒ）−および（Ｓ）−２−メチルシステイン（下記参照）を酸化させることで、２−メチルシステイン酸の鏡像異性体標準物を得た。バリン、グリシン、およびリンゴ酸の標準物はＳｉｇｍａから入手した。パクリタキセル、アクチノマイシンＤ、およびドキソルビシンはＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから入手した。

実施例１：抽出および単離
Ｓｙｍｐｌｏｃａ ｓｐ．の試料は、２００３年８月にＰｉｌｌａｒｓ、キーラーゴ（フロリダキーズ、ＵＳＡ）から集めた。試験体は、この属と一致した直立の、琥珀色の、羽毛状のフィラメントを有していた。測定したフィラメントは、微細な鞘を含む、幅が５〜６μｍ、長さが８〜９μｍであった。Ｓｙｍｐｌｏｃａ ｓｐ．をフリーズドライし、ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ（１：１）で抽出した。得られた親油性抽出物（０．２９ｇ）をヘキサンと２０％ＭｅＯＨ水溶液との間に分画した。ＭｅＯＨ水層を濃縮し、増量したｉ−ＰｒＯＨとそれに続いてＭｅＯＨとを含むＣＨ_２Ｃｌ_２を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより分画した。ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ直線勾配（４０〜１００％で７５分間、その後、１００％ ＭｅＯＨで１０分間）を用いて、５％ ｉ−ＰｒＯＨで溶離した画分に逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ−ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ、２５０×１０ｍｍ、２．０ｍＬ／分；２２０ｎｍおよび２５４ｎｍで検出）を行った。化合物１はｔ_Ｒ６１．５分で溶離した（１．２ｍｇ）。

ラルガゾール（１）：無色の非晶質固体；［α］^２０ _Ｄ＋２２（ｃ０．１、ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）（ｌｏｇ ε）２１０（４．０７）、２６０（ｓｈ）（３．６１）；ＩＲ（フィルム）ｖ_ｍａｘ ２９２４、２８５３、１７２５、１６９４、１６１１、１６５９、１６４１、１６３０、１５９６、１５１２、１２４９、１１１７、１０６７、１０３４、８９４ｃｍ^−１；^１Ｈ ＮＭＲ、^１３Ｃ ＮＭＲ、およびＨＭＢＣデータについては表２を参照；ＨＲ−ＥＳＩ／ＡＰＣＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋６２３．２３９７（Ｃ_２９Ｈ_４３Ｎ_４Ｏ_５Ｓ_３に対する計算値：６２３．２３９６）。

ＬＣ−ＭＳ^ｎ分析：化合物１の試料は、直線勾配（５〜９５％で６５分間）を用いて、ＬＣ−ＭＳ［カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．，Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８ ３μｍ、２．１×１５０ｍｍ；移動相：（Ａ）ＭｅＯＨ中の０．５％ＨＣＯＯＨ、（Ｂ）Ｈ_２Ｏ中の０．５％ＨＣＯＯＨ；流量：０．１５ｍＬ／分］によって分析した。
ＭＳ範囲（ｔ_Ｒ５１．１分、ｍ／ｚ６２３）の最も強力なイオンの（＋）ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ２００〜１６００）のみならず、ｍ／ｚ６２３［Ｍ＋Ｈ］^＋イオンのＭＳ／ＭＳおよび依存性ＭＳ／ＭＳ／ＭＳについても行った（図１を参照）。

実施例２：（Ｒ）−および（Ｓ）−２−メチルシステイン酸の合成
（Ｒ）−２−メチルシステイン（５．０ｍｇ）の試料をＨ_２Ｏ_２−ＨＣＯ_２Ｈ（１：９）の混合物２ｍＬで０℃にて２時間処理した。生成物混合物を濃縮し、蒸発により乾燥させ、（Ｒ）−２−メチルシステイン酸を得た。次いで、残渣を２５０μＬのＨ_２Ｏ中で再構成し、キラルＨＰＬＣによりアミノ酸分析を行った。同様に、（Ｓ）−２−メチルシステインを反応させ、（Ｓ）−２−メチルシステイン酸を得た。

実施例３：絶対配置の決定
化合物１（〜１００μｇ）の試料を４ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解させ、室温で３０分間オゾン分解を行った。溶媒を蒸発させ、残渣を０．６ｍＬのＨ_２Ｏ_２−ＨＣＯ_２Ｈ（１：２）で７０℃にて２０分間処理した。溶媒を蒸発させ、得られた酸化生成物を０．５ｍＬの６Ｎ ＨＣｌで１１０℃にて２４時間加水分解した。加水分解生成物を乾燥させ、キラルＨＰＬＣ（カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃｈｉｒｅｘ相３１２６ Ｎ，Ｓ−ジオクチル−（Ｄ）−ペニシラミン、４．６０×２５０ｍｍ、５μｍ；溶媒１、Ｈ_２Ｏ／ＭｅＣＮ（９５：５）中の２ｍＭ ＣｕＳＯ_４、ｐＨ４．５０；溶媒２、Ｈ_２０／ＭｅＣＮ（８５：１５）中の０．５ｍＭ Ｃｕ（ＯＡｃ）_２／０．１Ｍ ＮＨ_４ＯＡｃ、ｐＨ４．６；流量１．０ｍＬ／分；２５４ｎｍで検出）により分析した。水解物中のアミノ酸の絶対配置は、正基準の滞留時間と直接比較して決定した。溶媒１の滞留時間（ｔ_Ｒ、分）は以下の通りであった：Ｇｌｙ（５．３）、Ｌ−Ｖａｌ（１２．６）、Ｄ−Ｖａｌ（１６．４）、（Ｓ）−２−Ｍｅ−システイン酸（２０．０）、および（Ｒ）−２−Ｍｅ−システイン酸（２３．９）。水解物成分の滞留時間（ｔ_Ｒ、分）は、５．３、１２．６、２３．９であり、生成物混合物中にＧｌｙ、Ｌ−Ｖａｌ、および（Ｒ）−２−Ｍｅ−システイン酸が存在することを示した。溶媒２を用いてリンゴ酸を検出した。標準となるＬ−リンゴ酸をｔ_Ｒ７．６分で溶離し、Ｄ−リンゴ酸をｔ_Ｒ２０．４分で溶離した。水解物内のリンゴ酸は７．６分後に溶離し、Ｌ異性体が存在することを示した。Ｇｌｙ、Ｌ−Ｖａｌ、および（Ｒ）−２−Ｍｅ−システイン酸は、それぞれ、４．０分、５．８分、および６．５分後に溶離した。

実施例４：細胞培養
細胞培地はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入し、胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）はＨｙｃｌｏｎｅから購入した。細胞を増殖させ、１０％ＦＢＳで補充したＤＭＥＭ培地（高グルコース）で３７℃の加湿空気および５％ＣＯ_２にて維持した。

実施例５：細胞生死判別アッセイ
１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに懸濁させた細胞を９６ウエルプレートに載置し（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１：１２，０００細胞；ＮＭｕＭＧ：５，０００細胞；Ｕ２ＯＳ：５，０００細胞；ＨＴ２９：１０，０００細胞；ＩＭＲ−３２：３０，０００細胞；ＮＩＨ３Ｔ３：５，０００細胞）、インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ_２）、２４時間後に種々の濃度の化合物１または溶媒対照（１％ＥｔＯＨ）で処理した。さらに４８時間のインキュベーションの後、取扱説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従ってＭＴＴを用いて細胞生死判別を測定した。

実施例６：抗癌治療活性
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞およびＮＭｕＭＧ細胞についても同様に、パクリタキセル（ＤＭＳＯ中）、アクチノマイシンＤ（ＤＭＳＯ中）、およびドキソルビシン（Ｈ_２Ｏ中）、ならびに対応する溶媒対照（１％）で処理した。ＧＩ_５０およびＬＣ_５０値を前述のように算出した（Ｋ．Ｄ．Ｐａｕｌｌ，Ｅ．Ｈａｍｅｌ，Ｌ．Ｍａｌｓｐｅｉｓ，Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ，Ｗ．Ｅ．Ｆｏｙｅ，Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９９５，ｐｐ．１０−１１）。
−ＧＩ_５０：濃度、ここで、１００×（Ｔ−Ｔ_０）／（Ｃ−Ｔ_０）＝５０；
−ＬＣ_５０：濃度、ここで、１００×（Ｔ−Ｔ_０）／Ｔ_０＝−５０
［Ｔ＝処理ウエルの吸光度（４８時間）；Ｔ_０＝時間０での吸光度；Ｃ＝対照ウエルの吸光度（４８時間）］

実施例７：ラルガゾール活性
ラルガゾール（１）は、用量依存的に、浸潤性の高い形質転換ヒト乳房上皮細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）の増殖を強力に阻害し（ＧＩ_５０ ８ｎＭ）、ＭＴＴアッセイに基づいて、より高濃度で細胞毒性を誘発した（ＬＣ_５０ １１７ｎＭ）。これに対し、非形質転換マウス乳房上皮細胞（ＮＭｕＭＧ）は、化合物１（ＧＩ_５０ １２２ｎＭ、ＬＣ_５０ ２７２ｎＭ）に著しく影響を受け難かった。同様に、線維芽細胞性骨肉腫Ｕ２ＯＳ細胞は、ＧＩ_５０が５５ｎＭ、ＬＣ_５０が９４ｎＭとラルガゾール（１）に非常に影響を受け易かったが、１による治療時の非形質転換線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３の生存度については、明確な毒性がなく、障害が著しく少なかった（ＧＩ_５０ ４８０ｎＭ）。形質転換および非形質転換の線維芽細胞または上皮細胞間の増殖阻害活性が、それぞれ、８〜１５倍異なっていることと、非形質転換線維芽細胞死と形質転換線維芽細胞死との選択性とにより、癌細胞が１によって優先的に標的にされていることを示唆している。大腸（ＨＴ２９）および神経芽細胞腫（ＩＭＲ−３２）由来の癌細胞株の増殖についても、細胞毒性（両細胞株に対してＬＣ_５０ ２２ｎＭ）を伴い、１によって強力に阻害された（ＧＩ_５０値は、それぞれ、１２ｎＭ、１６ｎＭ）。

ラルガゾール（１）は、並行して試験した他の有効な抗腫瘍天然産物では観察されない顕著な選択性も実証している。例えば、表３のＭＤＡ−ＭＢ−２３１／ＮｍｕＭＧ細胞やＵ２ＯＳ／ＮＩＨ３Ｔ３細胞を参照されたい。

実施例８：ＨＤＡＣ阻害
この仮説を試験するため、ＨＣＴ−１１６細胞でラルガゾールによる治療時にＨＤＡＣ細胞活性を確認し、高いＨＤＡＣ内因活性を有することが分かった。細胞透過性の蛍光性のＨＤＡＣ人工基質（ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ（登録商標）、ＢＩＯＭＯＬ）とラルガゾール（１）とを共インキュベートし、８時間のラルガゾール治療によってＨＤＡＣ活性が用量依存的に低下した（図２Ａ）ことを確認した。重要なことは、ＨＤＡＣ阻害のＩＣ_５０がこの細胞株のラルガゾールのＧＩ_５０と密接に対応していることであった（図２Ａ、表４）。この相関により、ＨＤＡＣがラルガゾールの増殖抑制作用に関与する関連標的であることが示唆された。確認のための、内因性ＨＤＡＣ基質、アセチル化ヒストンＨ３のイムノブロット解析も同様の用量反応関係を示した（図２Ｂ）。

ラルガゾール（１）は、クラスＩ ＨＤＡＣ１、２、および３（ＢＩＯＭＯＬ）を多く含むＨｅＬａ細胞核タンパク質抽出物からのＨＤＡＣ活性を阻害したが、アッセイ条件下でチオエステルを開裂することができる。チオール９が反応種であるか調査するため、ラルガゾール（１）のアセチル類似体８から９を遊離させ、酵素活性を直接計測すると、チオール９は同様のＩＣ_５０値（表４）をもつＨｅＬａ細胞の核抽出物でＨＤＡＣを阻害した。ラルガゾール（１）およびチオール９は、ＨｅＬａ核抽出物由来のＨＤＡＣに対して同様の細胞活性のみならず、増殖抑制作用を示した。

Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ＨＤＡＣ活性アッセイ。ウエル１枚当たり３．５×１０^３細胞／ウエルの密度の培地１００μＬでＨＣＴ−１１６細胞を播種し、無菌の９６ウエルソリッドボトムプレートで２４時間増殖させた。取扱説明書（ＢＩＯＭＯＬ）に従ってアッセイを行った。簡潔に言えば、２４時間後に、その培地を２００μＭ ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ（登録商標）基質と、１μＭトリコスタチンＡ（陽性対照）と、１μＭ〜３．２ｎＭ（ｌｇ／２倍希釈）の範囲の試験化合物（ラルガゾール、アセチル誘導体）と、１０μＭ〜３００ｐＭの範囲のチオール化合物とを含む５０μＬ／ウエルの培地に交換した。プレートを３７℃で８時間インキュベートする。処理時間の後、２μＭのＴＳＡを含む１Ｘ ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ（登録商標）展開剤を１ウエル当たり５０μＬ添加する。展開剤の添加後、プレートを３７℃で１５分間インキュベートし、蛍光を読み取る（Ｅｘ３６０ｎｍ、Ｅｍ４６０ｎｍ）。

イムノブロット解析。ＨＣＴ−１１６細胞（６５０，０００ 細胞／皿）を１０ｃｍ皿に播種し、２４時間後に、種々の濃度のラルガゾール、トリコスタチン、または溶媒対照（ラルガゾールにはＥｔＯＨ、トリコスタチンにはＤＭＳＯ）で処理した。８時間インキュベーションした後、ＰｈｏｓｐｈｏＳａｆｅリシス緩衝液（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いて全細胞溶解物を調製し、タンパク質を抽出し、ＢＣＡ方法（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてタンパク質濃度を測定した。等量のタンパク質を含む細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦ膜に転移させ、抗体でプローブし、Ｓｕｐｅｒｓｉｇｎａｌ Ｆｅｍｔｏウェスタンブロッティングキット（Ｐｉｅｒｃｅ）で検出した。抗アセチルヒストンＨ３（Ｌｙｓ９／１８）および抗ヒストンＨ３一次抗体はＭｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、抗ウサギ二次抗体と共役させた西洋ワサビペルオキシダーゼはＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入した。

無細胞酵素アッセイ。アッセイ緩衝液（ブランクでは２５ｕｌ、対照では１０ｕｌ）と、１μＭトリコスタチンと、試験阻害剤（１０μＭ〜３００ｐＭの範囲）とをマイクロタイタプレートの実験試料ウエルに添加する。ＨｅＬａ細胞（ＢＩＯＭＯＬ）から抽出したＨＤＡＣ富化核タンパク質抽出物（１５ｕＬ中に５μｇ）を、酵素を含まない対照を除いた全てのウエルに添加する。アッセイプレートを３７℃で平衡化した後、２５μｌの基質ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ（登録商標）基質を添加し、１１６μＭの最終濃度にした。ＨＤＡＣ反応を１５分間進行させた後、２μＭのＴＳＡを含む１Ｘ ｆｌｕｏｒ ｄｅ Ｌｙｓ（登録商標）展開剤を１ウエル当たり５０μＬ添加して反応を停止させた。展開剤の添加後、プレートを３７℃で１５分間インキュベートし、蛍光を読み取る（Ｅｘ３６０ｎｍ、Ｅｍ４６０ｎｍ）。

精製酵素を用いたＨＤＡＣアッセイ。ＨＤＡＣ活性源としてＨｅＬａ核抽出物を用いた上記と同様にして、クラスＩおよびクラスＩＩの異なる純度のＨＤＡＣを用いてアッセイを実行し、特異性を評価することができる。

細胞分化／脱分化／分化転換アッセイ。当該技術分野では周知のプロトコル、例えば、Ｗｕら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，１４５２０−１４５２１；Ｄｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００３，１００，７６３２−７６３７；およびＣｈｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００４，１２６，４１０−４１１に本質的に記載されているアッセイ条件を施すことにより、本明細書の化合物が細胞分化／脱分化／分化転換を誘発する能力について評価する。

参照文献
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（８）Ｃａｒｍｅｌｉ，Ｓ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｅ．；Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｇ．Ｍ．Ｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９０，１１２，８１９５−８１９７。
（９）Ｈｏｒｔｏｎ，Ｐ．；Ｉｎｍａｎ，Ｗ．Ｄ．；Ｃｒｅｗｓ，Ｐ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９０，５３，１４３−１５１。
（１０）（ａ）Ｒｏｌｌｅｒ，Ｐ．；Ａｕ，Ｋ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｅ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９７１，５０３−５０４。（ｂ）Ｓａｔａ，Ｎ．；Ａｂｉｎｓａｙ，Ｈ．；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｗ．Ｙ．；Ｈｏｒｇｅｎ，Ｆ．Ｄ．；Ｓｉｔａｃｈｉｔｔａ，Ｎ．；Ｋｅｌｌｙ，Ｍ．；Ｓｃｈｅｕｅｒ，Ｐ．Ｊ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２００５，６８，１４００−１４０３。
（１１）（ａ）Ｐｅｒｅｚ Ｂａｚ，Ｊ．；Ｃａｎｅｄｏ，Ｌ．Ｍ．；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｐｕｅｎｔｅｓ，Ｊ．Ｌ．；Ｓｉｌｖａ Ｅｌｉｐｅ，Ｍ．Ｖ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）１９９７，５０，７３８−７４１。（ｂ）Ｂｏｇｅｒ，Ｄ．Ｇ．；Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０００，１２２，２９５６−２９５７。

引例による組み込み
本明細書に引用した全ての引例（参照文献、発行済み特許、公開特許出願、および同時係属特許出願）の内容は、参照によってそれらの内容全体を本明細書に明確に引用したものとする。

均等物
当業者であれば、本明細書に具体的に記載されている本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を、通常のルーチン実験以上のことをすることなく、認識し、確認することができるであろう。かかる均等物も、本特許請求の範囲に含まれるものとする。

Claims (31)

1. 式Ｉによる化合物：
   

   

   （式中：
   Ｒ^１は、イソプロピルであり；
   Ｒ^２は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒであり；
   Ｒ^３は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＣ（Ｏ）ＮＲＲであり；
   Ｒ^４は、Ｈ、置換基を有していてもよいアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＣ（Ｏ）ＮＲＲであり；
   各Ｒは、独立してＨ、または置換基を有していてもよいアルキルである。）
   およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物。
2. Ｒ^３およびＲ^４がＨである請求項１に記載の化合物。
3. 前記化合物が以下の表の化合物のいずれかである請求項１に記載の化合物。
   

   
4. 前記化合物がラルガゾールである請求項１に記載の化合物。
5. Ｒ^２がアルキルである請求項１に記載の化合物。
6. Ｒ^２がアルキルＣ（Ｏ）−である請求項５に記載の化合物。
7. ａ）請求項１に記載の化合物と、ｂ）薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
8. 前記化合物が、請求項３に記載の化合物のいずれかである、請求項７に記載の医薬組成物。
9. 追加治療薬をさらに含む請求項８に記載の医薬組成物。
10. 前記追加治療薬が、抗癌剤、化学療法剤、抗血管形成剤、細胞毒性剤、または抗増殖剤である請求項９に記載の医薬組成物。
11. 細胞増殖疾患を患っているまたは前記疾患に罹り易い対象に前記化合物を投与するための説明書と共に、単位投与剤形で有効量の請求項１の化合物を含むキット。
12. 対象において細胞増殖を阻害する量で、請求項１に記載の式Ｉの化合物を含む、組成物。
13. 前記細胞が癌細胞である請求項１２に記載の組成物。
14. 前記細胞が腫瘍細胞である請求項１２に記載の組成物。
15. 細胞増殖関連疾患または疾病に対する治療が必要であると見なされた、細胞増殖関連疾患または疾病を患っているまたは該疾患に罹り易い対象を治療するための、請求項３に記載の化合物のいずれかの有効量を含む組成物。
16. 前記疾患が、癌、固形腫瘍、大腸癌、乳癌、骨癌、脳腫瘍、骨肉腫、神経芽細胞腫、または結腸腺癌である請求項１５に記載の組成物。
17. 前記疾患が血管形成疾患である請求項１５に記載の組成物。
18. 前記疾患が固形腫瘍である請求項１５に記載の組成物。
19. 前記対象が哺乳類である請求項１２または請求項１５に記載の組成物。
20. 前記対象が霊長類またはヒトである請求項１２または請求項１５に記載の組成物。
21. 式Ｉの前記化合物の有効量が、０．００５μｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である請求項１２に記載の組成物。
22. 式Ｉの前記化合物の有効量が、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である請求項２１に記載の組成物。
23. 式Ｉの前記化合物の有効量が、１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である請求項２２に記載の組成物。
24. 式Ｉの前記化合物の有効量が、１．０ｐＭ〜５００ｎＭの範囲である請求項１２に記載の組成物。
25. 式Ｉの前記化合物を静脈内、筋肉内、皮下、脳室内、経口、または局所に投与することを特徴とする請求項１２に記載の組成物。
26. 式Ｉの前記化合物を単独または１つ以上の他の追加治療薬と併用して投与することを特徴とする請求項１２に記載の組成物。
27. 前記追加治療薬が、抗癌剤、化学療法剤、抗血管形成剤、細胞毒性剤、または抗増殖剤である請求項２６に記載の組成物。
28. 癌または腫瘍の治療のための、有効量の請求項３に記載の化合物のいずれかまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物。
29. それを必要とする対象における、癌、固形腫瘍、大腸癌、乳癌、骨癌、脳腫瘍、骨肉腫、神経芽細胞腫、結腸腺癌、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、運動ニューロン疾患、ハンチントン舞踏病、狼瘡、関節リウマチ、または多発硬化症（ＭＳ）の治療のための、有効量の請求項３に記載の化合物のいずれか、またはその薬学的に許容される塩。
30. それを必要とする対象における、皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療のための、有効量の請求項３に記載の化合物のいずれか、またはその薬学的に許容される塩。
31. それを必要とする対象において、記憶喪失を治療する、神経形成を誘発する、記憶保持を高める、記憶形成を高める、シナプス電位またはシナプス伝達を増加させる、あるいは長期増強（ＬＴＰ）を増加させるための、有効量の請求項３に記載の化合物のいずれか、またはその薬学的に許容される塩。

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