JP5718815B2 - 重合可能なアルキレングリコール(メタ)アクリレートモノマーから調製されるポリマー粒子 - Google Patents
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Description
本発明では、容易に調製できる新しい表面処理された「スマート」微粒子を提供する。この微粒子は、37℃以下の温度では細胞と共に分散して流動性懸濁液を形成し、体温では細胞増殖を支持する空間充填型ゲルを形成する。このような微粒子は、新規な生体適合性熱応答性ポリマーを含む。このようなポリマーは、粒子調製中に生分解性ポリマー球体の表面に分配されることで、単純な単一工程手順で高度に制御可能なコロイド安定性と生体材料特性を有する微粒子が生成され得るよう設計される。
(発明の要旨)
本発明は、第1局面において、水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すポリマーの調製方法を提供する。本方法は、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマー及び重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される1つ以上のモノマーを重合反応のモノマーとして使用することを含む。
重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される1つ以上のモノマーを提供する工程と、
モノマーの重合を行い、水媒体中の下限臨界共溶温度が10〜90℃のポリマーを生成する工程と、を含む。
従って、本発明は、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される1つ以上のモノマーの重合生成物である、水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すポリマーを提供する。
上記ポリマーのモル質量は、1〜1000kDa超であり得る。好ましくは、生物医学的用途では、上記ポリマーのモル質量は25〜75kDa、多分散性(Mw/Mn)指数は1〜2.5である。
上記ポリマーは、適切には、体温直下の温度では鎖延長し高い水溶性を示すが、37℃では不溶性である、生体適合性両親媒性コポリマーである。このように、本ポリマーは、第一条件下ではコロイド粒子を安定化するが第二条件下では粒子を凝集する機能を有し得る。
−第2局面による1つ以上のポリマーを提供すること、及び
−乳化法、拡散法及び蒸着法から選択される方法でポリマー粒子を調製するための反応混合物に、表面処理界面活性剤として上記ポリマーを添加すること、
を含むポリマー粒子調製方法もさらに提供する。
従って、本発明は、第2局面による1つ以上のポリマーである表面処理界面活性剤の存在下で行われる乳化法、拡散法及び蒸着法から選択される方法で得られるポリマー粒子を提供する。
本発明のポリマー粒子は、任意の有機組成物のバルク相/コアを有し得るが、特に好ましいのはポリ乳酸−コ−グリコール酸(PLGA)又はその成分であるホモポリマー等の生分解性ポリマーである。従って、本発明のポリマー粒子は、ポリ乳酸−コ−グリコール酸、ポリ(乳酸)又はポリグリコール酸のバルク相/コアを有することが好ましい。
本発明の主な用途は、香味/芳香放出等の放出制御、及び特に生物医学分野である。ポリマー粒子バルクは、活性物質を取り込み得る。この活性物質は、生物医学的用途では、従来の薬物送達用の小分子薬剤及び生物薬剤、又は、組織成長、臓器修復及び再生医療のための緩効性成長因子およびその他の可溶性分子であろう。
上記用途は、例えば、香味放出用途、芳香放出用途、及び従来の薬物送達用途等の生物医学的用途から選択されてもよい。詳細には、上記用途は、従来の薬物送達用の小分子薬剤又は生物薬剤の放出、あるいは、組織成長、臓器修復及び再生医療のための緩効性成長因子等の可溶性分子の放出に関与してもよい。
従って、第7局面において、本発明は、第5局面のポリマー粒子と細胞等の生体材料を含む生成物を提供する。
かかる生成物を用いて、第2局面のポリマーの下限臨界共溶温度を超えた場合には細胞等の生体材料をカプセル化することができる。前記生成物は、かかる温度では、細胞等の生体材料の成長を支持する空間充填型ゲルを形成する。
本質的に、粒子とともに細胞が提供される場合、粒子は細胞増殖中に細胞のための多孔性繭(cocoon)を形成し得る。これにより、細胞と細胞の接触を促進し組織生成の拡大を助長し得るマトリックス構造が生成される。
また、本発明は、第8局面において、細胞支持体マトリックスとしての第5局面のポリマー粒子の使用を提供する。
また、本発明は、第10局面において、37℃以下の温度で(i)細胞と(ii)第5局面のポリマー粒子を含む流動性懸濁液を提供する。
また、本発明は、37℃以下の温度では細胞と共に分散して流動性懸濁液を形成し、体温では細胞増殖を支持する空間充填型ゲルを形成する微粒子を調製するために、第2局面のポリマーを単一で又は組み合わせて使用することを提供する。
図1の(a)は、微粒子の立体安定化の基礎をなす概念を示している。即ち、水和PEGMA−コ−PPGMAコロナの鎖延長により、粒子間引力が支配的になることが回避される。図1の(b)では、LCSTを超えた温度では、PEGMA−コ−PPGMA層は崩壊してコロイド安定性が減少し、粒子間の引力相互作用により凝集している様子がわかる。
本発明において、調製が簡単で、十分に制御された熱応答性挙動を示し、且つ生体適合性及び生分解性を有する、表面処理されたスマート粒子が提供される。このような材料により、細胞送達及び組織工学の用途で数多くの可能性が提供される。
本発明の実施例は、以下のように調製された。
<材料>
使用材料は以下の通りであった。
−PLGA(モル比75/25のラクチド/グリコリド、分子量Mn=12,000、PDI=1.50)をアストラゼネカ(AstraZeneca)社から購入し、供給されている通りに使用した。
−ポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA、Mn=475、Aldrich社製)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA、Mn=430、Aldrich社製)の共重合により、後述するように、ポリマー(界面活性剤−コポリマー又はLCSTポリマー)PEGMA−コ−PPGMA(PEGMA/PPGMA=25:75、分子量Mn=15,500、PDI=1.61)を調製した。
−酢酸エチル、アゾビスイソブチロニトリル(AIBN)及び1−ドデカンチオールは、Aldrich社製の分析グレードのものであり、供給されている通りに使用した。
−臭化銅(I)(Aldrich社製、98%)及び塩化銅(I)(Acros社製、95%)は、いかなる可溶性の酸化種も除去するため、氷酢酸で洗浄し、濾過し、エタノールで洗浄し、乾燥した。
1.LCSTコポリマー:PEGMA−コ−PPGMAの調製
a)従来のフリーラジカル重合
三方活栓に取り付けた丸底フラスコに、脱酸素ブタノン(deoxygenated butanone)(30ml)中AIBN(0.957g、6.1ミリモル)、PEGMA(5.532g、11.6ミリモル)、PPGMA(15g、34.9ミリモル)及び1−ドデカンチオール(0.38g、1.86ミリモル)を添加した。得られた溶液を内容物が完全に溶解するまで10分間撹拌し、それから凍結融解サイクル(×3)とその後の窒素パージにより内容物から酸素を除去した。フラスコを油浴に浸漬し、70℃で8時間、重合を行った。得られた溶液をアセトンで希釈し、大過剰のヘキサン中に沈殿させた。上部溶媒層を除去した後、沈殿したポリマーを真空中で乾燥し、残留溶媒を取り除いた。それから、ポリマーを脱イオン水中に溶解し、引き続いて新鮮な脱イオン水に対する透析(分画分子量:6000)で精製した。最後に、エタノールを使った共沸蒸留で水を除去し、両親媒性コポリマーが残った。
b)原子移動ラジカル重合
三方活栓に取り付けた丸底フラスコに、CuBr(64.5mg、0.448ミリモル)、ビピリジン(139mg、0.891ミリモル)を添加し、その後窒素ライン又は真空ポンプのいずれかに接続した。真空−窒素サイクルを繰り返して酸素を除去した。フラスコが窒素で満たされたら、脱気したPEGMA(5.532g、11.6ミリモル)、PPGMA(15g、34.9ミリモル)及びブタノン(30ml)を充填した。室温で1時間撹拌した後、ブタノン(0.42M)中メチル 2−ブロモプロピオネート溶液(1.1mL)を加え、所望の温度(典型的には60℃)で10時間重合を行った。重合の後、得られた溶液をアセトンで希釈し、シリカカラムを通過させて銅触媒を除去し、大過剰のヘキサン中に沈殿させた。上述のように、再沈殿及び透析の後、凍結乾燥を行い、さらに精製した。
2.ダンシル−コポリマーPEGMA−コ−PPGMAの調製
1gのPEGMA−コ−PPGMA(Mn=15,500)をTHF(15ml)中に溶解した。得られた溶液に、トリエチルアミン(0.0139g、0.137ミリモル)及び塩化ダンシル(0.037g、0.137ミリモル)を加えた。その後室温で一晩、暗所で撹拌しながら反応させた。反応溶液を濾過し、その後激しく撹拌しながらヘキサン中に滴加した。その後得られた溶液を30分間静置し、沈殿したポリマーのサンプルを収集した。3回沈殿させてポリマーを精製し、最後に真空オーブン中で、室温で乾燥した。
3.コポリマーPEGMA−コ−PPGMAでコーティングされたPLGA微粒子の調製
乳化−蒸着−拡散法(図2に例示)によりPLGA微粒子を調製した。典型的には、PLGA(200mg)を酢酸エチル(5mL)中で溶解し、水中コポリマーPEGMA−コ−PPGMA溶液(10mL、2mg.mL-1)に加えた。得られた乳化液を11000rpmで45秒間均質化し、第2のPEGMA−コ−PPGMA溶液(15ml、2mg.mL-1)に加え、さらに1100rpmで45秒間均質化を行った。真空中で粒子コアから有機溶媒を除去した。遠心分離(2500rpm)で水相から微粒子を分離し、凍結乾燥の前に水中で再懸濁した。
<分析技術の説明>
i.下限臨界共溶温度(LCST)の決定
PBS中PEGMA−コ−PPGMAポリマー溶液(pH7.4、3mg.mL-1)をBeckman製DU−640分光光度計内にて1.0℃.min-1で加熱した。550nmで吸光度が急激に増加し始める温度を、コポリマーシステムのLCSTと見なした。
ii.ゲル浸透クロマトグラフィー
三重検出のゲル浸透クロマトグラフィー(PL−120及びPL−50、Polymer Labs製)で、数平均分子量(Mn)、重量平均分子量(Mw)及び多分散性(Mw/Mn)を得た。カラム(30cm PLgel Mixed−C、直列で2本)をTHFとともに溶出し、ポリスチレン標準で較正した。較正及び分析は全て40℃及び流量1mL/minで行った。このような条件下では、全ての生成物は完全にTHF中に溶解し、背圧をほとんど又は全く観察することなく注入前に0.2μmフィルターを通過した。
iii.粒径の測定
Malvern Zetasizer Nano及びCoulter LS 230(Beckman Coulter製)の装置を使って、ミセル及び微粒子の粒径と分布を測定した。動的光散乱実験では、DI水(脱イオン水)中でPEGMA−コ−PPGMA溶液(1mg.mL-1)を調製し、測定前に0.45umの使い捨てフィルター(PTPE Acrodisc CR)を使って12.5×12.5mmポリスチレン使い捨てキュベット中で濾過した。Coulter LS230を用いた微粒子の粒径の測定では、不透明値(obscuration value)8%〜12%で、サンプルをDI水中で再懸濁した。
iv.一軸圧縮試験
テクスチャーアナライザー(TA HDPlus、Stable Micro Systems製)を使って周囲条件で一軸圧縮試験を行った。注射器ノズル(1mlのBD Plastipak(登録商標))を介して2mm/secで注入性(Injectability)を決定した。直径4.5mmの注射筒内でゲルが形成された後、37℃で30分間、足場の圧縮強度(湿潤時及び乾燥時)を0.01mm/secで決定した。
v.走査電子顕微鏡法
JEOL製JSM−6060LVの機器を使って、走査電子顕微鏡写真を記録した。ポリマー微粒子を白金製スタブ(stubs)上に置き、4分間スパッタリングでコーティングした。この際、複雑な回転惑星(planetary)運動により、不規則な表面を均一にコーティングすることができる。
vi.細胞培養
37℃及び5%CO2の加湿したインキュベーター内にて、10%ウシ胎仔血清(FBS)、1%グルタミン及び2.5mg/mLアンホテリシンB(抗生物質/抗カビ剤溶液)を補充したダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)中で、細胞株C2C12から細胞を培養した。2〜3日おきにPBS中0.25%トリプシン/0.02%EDTAを用いて細胞を継代培養し、使用前に再び種をまいた。顕微鏡実験では、PLGA微粒子をEppendorf製バイアル管に入れ、2時間紫外線で殺菌した。C2C12細胞をトリプシン処理し、DMEM中で再懸濁し、その後蛍光染料(C34551、Cell Tracker Orange CMRA)を含むDMEM中で45分間遠心分離及び再懸濁を行った。それから、標識細胞を遠心分離し、ハンクス緩衝液(HBSS)に加えた。約500000細胞(0.25mlのHBSS緩衝液中)をPLGA微粒子(150mg)と混合した。得られた混合物を6ウェルの非組織培養プレート内にて37℃で30分間培養して足場を形成し、続いてDMEMを追加してさらに培養した。細胞を無菌PBSで洗浄して6ウェルの新しい非組織培養プレートに移した後、蛍光画像を得た。アラマーブルー(AlamarBlue)アッセイ(Biosource Europe社製)を用いて細胞生存率を評価した。
A.PEGMAとPPGMAのコポリマーの特徴
上述の方法により様々なモノマー比率のポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA)の重合によって合成された新しい生体適合性応答性ポリマーを表1に示している。
(モノマー成分が同じであるコポリマーを用いて、)分子量がポリマーのLCSTに与える効果を評価した。その結果を図9のAに示している。図9のBは、コポリマーPEGMA−コ−PPGMAの加熱時と冷却時のLCSTを示している。図9のCは、pHがコポリマーのLCSTに与える効果を示している。図9のDは、NaCl濃度がLCSTに与える効果を示している。全ての図において、PEGMA−コ−PPGMA(25/75)を使用し、コポリマーの濃度は各ケースで3mg/mlであった。
B.熱応答性生分解性微粒子の合成及び特性
図2の(i)にはモノマーPEGMA及びPPGMAが示されている。これらのモノマーは、フリーラジカル又は制御ラジカル(ATRP)の技術で共重合され、図2の(ii)に示すようなくし状コポリマーが生成される。
PLGAコア内の疎水性が「有効」であることを示すナイルレッド(NileRed)のカプセル化は、PLGA成分の検出を容易にした。また、顕微鏡の選択フィルターは、カプセル化された染料と表面封入PEGMA−PPGMA層の両方の存在を示した。
図11は、20℃〜45℃でのPLGA微粒子(PLGA微粒子の濃度、25% w/v)のレオロジー・データを示している。
従って、モル質量の高いポリマーは、図1に示すように、立体遮へい層のさらなる拡張により、大きな粒子のコロイド安定性を維持することができる。
C.コロイド性懸濁液及び熱可逆性ゲルの注入性及び機械的特性
ポリマー粒子から形成されたコロイド性懸濁液及び熱可逆性ゲルの注入性及び機械的特性を、テクスチャーアナライザーを使って調査した(図3)。
37℃で30分間培養した後の湿潤時及び乾燥時のゲル強度を比較した結果、それぞれ17N及び19Nと同様の数値を示した。これは、構造形成が、短い培養期間内に生じていることを示すものである。
D.細胞の生体内原位置でのカプセル化及び組織足場の形成
方法の項目3で上述した乳化/拡散/蒸着法により調製された、本発明による表面処理された微粒子を、モデル細胞株であるC2C12筋芽細胞と混合し、PEGMA25PPGMA75のLCST以下で流動性懸濁液を形成した。
Claims (30)
- 安定したポリマー粒子であって、各ポリマー粒子が、直径が500nm〜100μmの範囲内のサイズを有するよう形成され、該ポリマー粒子は、
(a)水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示す1つ以上のポリマーである表面処理界面活性剤の存在下で行われる乳化法、拡散法及び蒸着法から選択される方法で得られるポリマー粒子であって、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーとから選択される1つ以上のモノマーの重合生成物であるか、あるいは、
(b)生分解性ポリマーコアと熱応答性生体適合性コポリマーコロナを有するポリマー粒子であって、
前記コポリマーは、水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すポリマーであり、
前記ポリマーは、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される1つ以上のモノマーの重合生成物である、
ポリマー粒子。 - 前記ポリマーは、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される2つ以上のモノマーの重合生成物である、請求項1に記載のポリマー粒子。
- 前記ポリマーは、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される2つ以上のモノマーの重合生成物であって、
前記重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーは、ジ(エチレングリコール)−アクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−アクリレート、ポリ(エチレングリコール)−アクリレート、ジ(エチレングリコール)−メタクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(プロピレングリコール)−アクリレート、及びポリ(プロピレングリコール)−メタクリレートから選択される、請求項2に記載のポリマー粒子。 - 前記ポリマーは、ポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA)との重合生成物である、請求項3に記載のポリマー粒子。
- 前記ポリマー粒子は、直径が500nm〜5μmの安定したポリマー粒子である、請求項1〜4の何れか1項に記載のポリマー粒子。
- 前記ポリマー粒子は、ポリ(乳酸−コ−グリコール酸)、ポリ(乳酸)及びポリ(グリコール酸)から選択される生分解性ポリマーのバルク相又はコアを有する、請求項1から5の何れか1項に記載のポリマー粒子。
- 前記ポリマーは、25〜75kDaのモル質量を有し、該ポリマーの多分散性(Mw/Mn)指数は1〜2.5である、請求項1〜6の何れか1項に記載のポリマー粒子。
- 前記ポリマー粒子は、そのバルク相又はコア内に、香味剤、芳香剤、小分子薬剤及び生物薬剤、並びに、組織成長、臓器修復及び再生医療のための緩効性成長因子およびその他の可溶性分子から選択される活性成分を含む、請求項1〜7の何れか1項に記載のポリマー粒子。
- 放出制御用途、あるいは、細胞支持体マトリックスとして使用される、請求項1〜8の何れか1項に記載のポリマー粒子。
- 請求項1〜9の何れか1項に記載のポリマー粒子と、生体材料とを含む生成物。
- 前記生体材料は細胞である、請求項10に記載の生成物。
- 請求項1〜9の何れか1項に記載のポリマー粒子を含む細胞支持体マトリックス。
- 37℃以下の温度で、(i)細胞と、(ii)請求項1〜9の何れか1項に記載のポリマー粒子を含む、流動性懸濁液。
- 体温で、(i)細胞と、(ii)請求項1〜9の何れか1項に記載のポリマー粒子を含む、細胞増殖を支持する空間充填型ゲル。
- ポリマー粒子の調製方法であって、
前記ポリマー粒子は、安定したポリマー粒子であって、各ポリマー粒子が、直径が500nm〜100μmの範囲内のサイズを有するよう形成されており、
−水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すポリマーである1つ以上のポリマーであって、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーとから選択される1つ以上のモノマーの重合生成物であるポリマーを提供すること、及び、
−乳化法、拡散法及び蒸着法から選択される方法により、500nm〜100μmの直径を有するポリマー粒子を調製するために、表面処理界面活性剤として前記ポリマーを反応混合物に添加すること、
を含む方法。 - 前記ポリマーは、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される2つ以上のモノマーの重合生成物である、請求項15に記載の方法。
- 前記ポリマーは、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーから選択される2つ以上のモノマーの重合生成物であって、
前記重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーは、ジ(エチレングリコール)−アクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−アクリレート、ポリ(エチレングリコール)−アクリレート、ジ(エチレングリコール)−メタクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(プロピレングリコール)−アクリレート、及びポリ(プロピレングリコール)−メタクリレートから選択される、請求項15または16に記載の方法。 - 前記ポリマーは、ポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA)との重合生成物である、請求項17に記載の方法。
- 前記ポリマー粒子は、ポリ(乳酸−コ−グリコール酸)、ポリ(乳酸)及びポリ(グリコール酸)から選択される生分解性ポリマーのバルク相又はコアを有する、請求項15〜18の何れか1項に記載の方法。
- 前記ポリマーは、25〜75kDaのモル質量を有し、該ポリマーの多分散性(Mw/Mn)指数は1〜2.5である、請求項15〜19の何れか1項に記載の方法。
- 前記ポリマー粒子は、そのバルク相又はコア内に、香味剤、芳香剤、小分子薬剤及び生物薬剤、並びに、組織成長、臓器修復及び再生医療のための緩効性成長因子およびその他の可溶性分子から選択される活性成分を含む、請求項15〜20の何れか1項に記載の方法。
- 水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すコポリマーであって、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーとから選択される2つ以上のモノマーの重合生成物であるコポリマーであり、
前記重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーは、ジ(エチレングリコール)−アクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−アクリレート、ポリ(エチレングリコール)−アクリレート、ジ(エチレングリコール)−メタクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(プロピレングリコール)−アクリレート、及びポリ(プロピレングリコール)−メタクリレートから選択される、コポリマー。 - 前記コポリマーは、ポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA)との重合生成物である、請求項22に記載のコポリマー。
- 前記コポリマーは、25〜75kDaのモル質量を有し、該ポリマーの多分散性(Mw/Mn)指数は1〜2.5である、請求項22または23に記載のコポリマー。
- 水媒体中で10〜90℃の下限臨界共溶温度を示すコポリマーの調製方法であって、重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーとから選択される2つ以上のモノマーを重合反応でのモノマーとして使用することを含み、
前記重合可能なアルキレングリコールアクリレートモノマーと重合可能なアルキレングリコールメタクリレートモノマーは、ジ(エチレングリコール)−アクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−アクリレート、ポリ(エチレングリコール)−アクリレート、ジ(エチレングリコール)−メタクリレート、オリゴ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(エチレングリコール)−メタクリレート、ポリ(プロピレングリコール)−アクリレート、及びポリ(プロピレングリコール)−メタクリレートから選択される、方法。 - 使用する重合技術は、フリーラジカル法及び制御フリーラジカル法から選択される、請求項25に記載の方法。
- 前記モノマーは、ポリ(エチレングリコール)メタクリレート(PEGMA)とポリ(プロピレングリコール)メタクリレート(PPGMA)である、請求項25または26に記載の方法。
- 乳化法、拡散法及び蒸着法から選択される方法によるポリマー粒子の調製方法であって、
表面処理界面活性剤として、請求項22に記載のコポリマーの単一での又は組み合わせての使用を含む、方法。 - 37℃以下の温度では細胞とともに分散して流動性懸濁液を形成し、体温では細胞増殖を支持する空間充填型ゲルを形成する微粒子を調製する調製方法であって、
請求項22に記載のコポリマーの単一での又は組み合わせての使用を含む、方法。 - 粒子調製中に生分解性ポリマー球体の表面内に分配し、これにより、高度に制御可能なコロイド安定性及び生体材料特性を有する微粒子を生成する方法であって、
請求項22に記載のコポリマーの単一での又は組み合わせての使用を含む、方法。
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