JP5685774B2 - メラノコルチン−４受容体に対するモノクローナル抗体およびその結合断片と、悪液質および関連病状および疾患の治療におけるそれらの使用 - Google Patents
メラノコルチン−４受容体に対するモノクローナル抗体およびその結合断片と、悪液質および関連病状および疾患の治療におけるそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5685774B2 JP5685774B2 JP2010540187A JP2010540187A JP5685774B2 JP 5685774 B2 JP5685774 B2 JP 5685774B2 JP 2010540187 A JP2010540187 A JP 2010540187A JP 2010540187 A JP2010540187 A JP 2010540187A JP 5685774 B2 JP5685774 B2 JP 5685774B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- isolated monoclonal
- seq
- binding fragment
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 57
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 54
- 102000001796 Melanocortin 4 receptors Human genes 0.000 title claims description 23
- 108010021436 Type 4 Melanocortin Receptor Proteins 0.000 title claims description 23
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 title claims description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims description 15
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 230000036528 appetite Effects 0.000 claims description 12
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 claims description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 2
- 229940125425 inverse agonist Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 36
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 36
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 28
- 102100023724 Melanocortin receptor 4 Human genes 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- 101710085775 Melanocortin receptor 4 Proteins 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 9
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 8
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 7
- 102400000740 Melanocyte-stimulating hormone alpha Human genes 0.000 description 7
- 101710200814 Melanotropin alpha Proteins 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 7
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 7
- WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N 0.000 description 7
- 238000010152 Bonferroni least significant difference Methods 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 6
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 101000978418 Homo sapiens Melanocortin receptor 4 Proteins 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 102000057094 human MC4R Human genes 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 2
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 2
- 101710085774 Melanocortin receptor 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100023726 Melanocortin receptor 3 Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- MZIYRTZAYQIAHW-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-8-(2-methylpropyl)-3,7-dihydropurine-2,6-dione Chemical compound N1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=C(CC(C)C)N2 MZIYRTZAYQIAHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 241000208199 Buxus sempervirens Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000001134 F-test Methods 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126661 MC4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 239000000637 Melanocyte-Stimulating Hormone Substances 0.000 description 1
- 108010007013 Melanocyte-Stimulating Hormones Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101000978434 Rattus norvegicus Melanocortin receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000978423 Rattus norvegicus Melanocortin receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000589500 Thermus aquaticus Species 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940082988 antihypertensives serotonin antagonists Drugs 0.000 description 1
- 239000003420 antiserotonin agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 1
- 238000013262 cAMP assay Methods 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- JJCFRYNCJDLXIK-UHFFFAOYSA-N cyproheptadine Chemical compound C1CN(C)CCC1=C1C2=CC=CC=C2C=CC2=CC=CC=C21 JJCFRYNCJDLXIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001140 cyproheptadine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000007878 drug screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000003178 glass ionomer cement Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229960002985 medroxyprogesterone acetate Drugs 0.000 description 1
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 1
- 229960004296 megestrol acetate Drugs 0.000 description 1
- RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N megestrol acetate Chemical compound C1=C(C)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229940093430 polyethylene glycol 1500 Drugs 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002469 receptor inverse agonist Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000000211 third ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
- A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本発明は、ヒトメラノコルチン−４受容体に対するモノクローナル抗体およびその結合断片と、このようなモノクローナル抗体および結合断片を使用して悪液質および関連病状および疾患を治療する方法に関し、このようなモノクローナル抗体および結合断片を含む医薬組成物、ならびにこのような組成物の治療上の使用にさらに関する。
癌または感染症などの慢性疾患がある患者は、食欲の低下または減退（食欲不振症）を示すことが多く、それは長時間にわたると、患者が脂肪および骨格筋量を失う病状である悪液質をもたらし、それは炎症状態を伴うことが多い。悪液質はますます、病的状態および死亡の独立した危険因子として認識されようになっている。
悪液質の従来の治療法としては、食生活の改善、およびそのためにプレドニゾロンなどのコルチコステロイド、酢酸メゲストロールや酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲステロン作用薬、およびシプロヘプタジンなどのセロトニン拮抗薬を含むいくつかの薬剤が使用されるかもしれない薬物療法が挙げられる（この点については例えばＣａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６の表１４４−２「癌悪液質の薬物治療（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｃｈｅｘｉａ）」を参照されたい）。しかしこれらの薬剤は、慢性病状の結果としてこのような副作用によって悪化するかもしれない悪液質を示す患者では特に懸念されるかもしれない、既知の副作用を有するので、このような治療法は、理想的とはほど遠い。したがって、悪液質および関連病状の治療で使用される新しい治療薬の開発に対する継続的な必要性がある。
この点において、このような慢性疾患を患っている患者は典型的に、食欲不振症そしてやがては悪液質につながるＭＣＲ４−Ｒを活性化するサイトカイン産生増大を示すことから、中枢食欲低下（食欲抑制）経路の一部であるヒトメラノコルチン−４受容体（「ＭＣ４−Ｒ」）が研究対象の標的であった。例えば国際公開第９７／４７３１６号パンフレットは、ＭＣ４−Ｒに基づく、体重障害を治療するのに有用な治療薬を同定するための薬剤スクリーニングアッセイを開示する。
ＭＣ４−ＲはＧ−タンパク質共役型の受容体（ＧＰＣＲ）であり、それは主として脳内で発現されることが示されており（ガンツ（Ｇａｎｔｚ）ら，１９９３年，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１５１７４〜１５１７９；マウントジョイ（Ｍｏｕｎｔｊｏｙ）ら，１９９４年，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏ．８：１２９８〜１３０８）、エネルギー収支において重要な役割を果たすことが知られている（カウリー（Ｃｏｗｌｅｙ），ＭＡ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４８０：３〜１１、２００３年；エリーズ（Ｅｌｉｅｓ），Ｒ．らＥｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５１：６５９〜６６６，１９９８年）。様々な生物におけるＭＣ４−Ｒの配列が文献で報告されている。この点に関しては、例えば欧州特許出願公開第１１６７３８６号明細書（イヌおよびネコの配列）および米国特許第５，７０３，２２０号明細書、および米国特許第６，１１７，９７５号明細書（ヒトの配列）を参照されたい。
ＭＣ４−Ｒの活性に影響を及ぼす非抗体化合物について報告されている（この点に関しては、例えば米国特許第７，１６９，７７７号明細書、米国特許出願公開第２００４／００８２７７９号明細書、欧州特許出願第１１６７３８６号明細書、および国際公開第０１／０８５９３０号パンフレット、および国際公開第９８／１００６８号パンフレットを参照されたい）。さらにＭＣ４−Ｒに対するポリクローナル抗体が作り出されている（ピーター（Ｐｅｔｅｒ）ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９２：Ｒ２１５１からＲ２１５８，２００７年）が、ＭＣ４−Ｒに対するモノクローナル抗体は報告されていない。
したがって当該技術分野で、治療薬、特にＭＣ４−Ｒ活性を調節するモノクローナル抗体の開発を含む、悪液質および関連病状治療のための新しい改善された治療薬を開発する必要性がある。本発明はこれらの必要性に向けたものである。
メラノコルチン−４受容体およびメラノコルチン−４受容体の部分に対するモノクローナル抗体、それらの治療上の使用、およびこのようなモノクローナル抗体および結合断片を使用して悪液質および関連病状および疾患を治療する方法を提供することが、本発明の目的である。このようなモノクローナル抗体および結合断片を含み、追加的治療薬とも併用される医薬組成物、およびこのような組成物の治療上の使用を提供することもさらなる本発明の目的である。
この点に関して一実施態様では、メラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むメラノコルチン−４受容体の一部に結合する。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、単離されたモノクローナル抗体の重鎖可変領域を含む。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、単離されたモノクローナル抗体の軽鎖可変領域を含む。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、配列番号５、配列番号７、および配列番号９に記載のアミノ酸配列の１つ以上を含む。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、配列番号４、配列番号６、および配列番号８に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の１つ以上を含む。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、メラノコルチン−４受容体の拮抗薬または逆作動薬である。
本発明のいくつかの実施態様では、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、組み換え的に産生される。
本発明のいくつかの実施態様では、前述の実施態様のいずれかに記載の治療的に有効量の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を含む医薬組成物が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、医薬組成物は単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片と併用される、それとは異なる活性治療薬をさらに含む。
本発明のいくつかの実施態様では、前述の実施態様のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を食欲が低下している哺乳類に投与するステップを含む、哺乳類の食欲を刺激する方法が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、悪液質の症状を示す哺乳類において、前述の実施態様のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を哺乳類に投与することにより、このような症状を治療する方法が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、配列番号５、配列番号７、および配列番号９に記載のアミノ酸配列の１つ以上を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、哺乳類の食欲を増大させるのに治療的に効果的な量で組成物中に存在する、配列番号５および配列番号７に記載のアミノ酸配列の１つ以上を含む、治療的に有効量の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を含む医薬組成物が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、医薬組成物は、悪液質の症状を示す患者において、このような症状を治療するのに治療的に有用である。
本発明のいくつかの実施態様では、メラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を哺乳類に投与するステップと含む、哺乳類の食欲を刺激する方法が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、哺乳類の食欲を刺激する方法は、配列番号５、配列番号７、および配列番号９に記載のアミノ酸配列の１つ以上を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を投与するステップを含む。
本発明のいくつかの実施態様では、メラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片を含む、医薬組成物を哺乳類に投与するステップを含む、悪液質の症状を示す哺乳類において症状を治療する方法が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、悪液質の症状を治療する方法は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体結合断片を含む、医薬組成物を哺乳類に投与するステップを含む。
本発明のいくつかの実施態様では、哺乳類において食欲を増大させるのに有用な薬剤を調製するための、メラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合するモノクローナル抗体またはその結合断片の使用が提供される。
本発明のいくつかの実施態様では、悪液質および関連病状を治療するのに有用な薬剤を調製するために、メラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合するモノクローナル抗体またはその結合断片の使用が提供される。
さらなる実施態様では、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、前記単離されたモノクローナル抗体の軽鎖可変領域に由来する環式ペプチドを含む。
別の好ましい実施態様では、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の環式ペプチドを含む。
さらなる実施態様では、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、前記単離されたモノクローナル抗体の重鎖可変領域に由来する環式ペプチドを含む。
さらなる好ましい実施態様では、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその結合断片は、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の環式ペプチドを含む。
上で言及される本発明の環式ペプチドは、約１．５ｋＤａの分子量を有する。モノクローナル抗体が全体として約１５０ｋＤａの分子量を有するのに対し、モノクローナル抗体の可変領域の一本鎖断片（ｓｃＦｖ）は約２６ｋＤａの分子量を有する。
医薬組成物は、前記環式ペプチドおよび／またはモノクローナル抗体の可変領域の一本鎖断片（ｓｃＦｖ）を含んでいてもよい。
本発明のより完全な理解のために、本発明についてさらに説明してその理解を助けるために提示される添付図と併せて、以下のその様々な例示的かつ非限定的実施態様の説明についてここで述べる。本発明の図では、核酸およびアミノ酸配列はそれらの従来の配向で、それらの標準一文字略語によって表される。
本発明は、ヒトメラノコルチン−４受容体（「ＭＣ４−Ｒ」）に対するモノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）、結合断片、およびその誘導体（本発明に関してここで集合的に「モノクローナル抗体」および／または「抗体」と称される）、および悪液質を含む特定の病状および疾患の治療におけるそれらの使用に関し、さらに本発明のｍＡｂを含む医薬組成物にも関する。ここで論じられるように、本発明のｍＡｂは、本発明において、ＭＣ４−Ｒに対して、特にＭＣ４−Ｒの構成的活性Ｎ末端（ＮＴ）領域の短いペプチド配列に対して、薬理学的に活性であることが示されており、食欲を刺激する効果を有することがさらに示されている。
特に断りのない限り、ここで使用される全ての用語には、当業者には見てすぐに分かるそれらの従来技術分野で認められている定義が与えられる。例えばそして限定されずに、「モノクローナル抗体」は、腫瘍細胞と抗体産生細胞とを融合させることで形成されるハイブリドーマによって産生される抗体を含み、したがってそれは同一である。さらにここで述べられているＭＣ４−Ｒの免疫原性構成要素に対する本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、既知の技術によって産生できる。
以下の非限定的実施例は、本発明の抗体産生で利用される材料と方法、およびそれに対して実施される生体外および生体内実験法について述べる。
実施例Ｉ：材料と方法
Ａ．ＭＣ４−Ｒに対するｍＡｂの産生
１．ＮＴ４およびＮＴ３ペプチド合成
図１に示すようにラットＭＣ４−Ｒのアミノ酸配列は３３２個のアミノ酸残基からなる（配列番号１；ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ０３７２３１）。本発明では、ＭＣ４−Ｒ（「ＮＴ４ペプチド」、図２で図示される）のＮ末端領域およびＭＣ３−Ｒ（「ＮＴ３ペプチド」）のＮ末端領域に対応するペプチドを合成した。ＮＴ４ペプチドは、ラットＭＣＲ４−Ｒの残基１１〜２５からなるアミノ酸配列ＴＳＬＨＬＷＮＲＳＳＨＧＬＨＧ（配列番号２）を有する（ピーター（Ｐｅｔｅｒ）ＪＣら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ、ｉｏｌ．２００７；２９２（６）：Ｒ２１５１−８を参照されたい）。ＮＴ３ペプチドは、ラットＭＣ３−Ｒ（配列番号３）の残基２６〜４４からなるアミノ酸配列ＡＳＮＲＳＧＳＧＦＣＥＱＶＦＩＫＰＥＶ（配列番号３）を有する。ペプチドはニーマーク（Ｎｅｉｍａｒｋ）Ｊおよびブリアン（Ｂｒｉａｎｄ）ＪＰ，Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９３；６（４）：２１９〜２８で述べられるようにして合成した。
Ａ．ＭＣ４−Ｒに対するｍＡｂの産生
１．ＮＴ４およびＮＴ３ペプチド合成
図１に示すようにラットＭＣ４−Ｒのアミノ酸配列は３３２個のアミノ酸残基からなる（配列番号１；ＮＣＢＩ登録番号ＮＰ０３７２３１）。本発明では、ＭＣ４−Ｒ（「ＮＴ４ペプチド」、図２で図示される）のＮ末端領域およびＭＣ３−Ｒ（「ＮＴ３ペプチド」）のＮ末端領域に対応するペプチドを合成した。ＮＴ４ペプチドは、ラットＭＣＲ４−Ｒの残基１１〜２５からなるアミノ酸配列ＴＳＬＨＬＷＮＲＳＳＨＧＬＨＧ（配列番号２）を有する（ピーター（Ｐｅｔｅｒ）ＪＣら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ、ｉｏｌ．２００７；２９２（６）：Ｒ２１５１−８を参照されたい）。ＮＴ３ペプチドは、ラットＭＣ３−Ｒ（配列番号３）の残基２６〜４４からなるアミノ酸配列ＡＳＮＲＳＧＳＧＦＣＥＱＶＦＩＫＰＥＶ（配列番号３）を有する。ペプチドはニーマーク（Ｎｅｉｍａｒｋ）Ｊおよびブリアン（Ｂｒｉａｎｄ）ＪＰ，Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９３；６（４）：２１９〜２８で述べられるようにして合成した。
２．免疫化
２５μｇの遊離ペプチドＮＴ４を完全なフロイントアジュバント中に乳化し、皮下注射して、Ｃ５８ＢＬ／６マウスを免疫化した。免疫化の４週間後、不完全なフロイントアジュバント中の２５μｇの追加免疫注射を行った。４週間後、融合のために脾臓細胞を採取する３日前に、０．９％ＮａＣｌ中に溶解した１０μｇのペプチドを静脈内注射した。
２５μｇの遊離ペプチドＮＴ４を完全なフロイントアジュバント中に乳化し、皮下注射して、Ｃ５８ＢＬ／６マウスを免疫化した。免疫化の４週間後、不完全なフロイントアジュバント中の２５μｇの追加免疫注射を行った。４週間後、融合のために脾臓細胞を採取する３日前に、０．９％ＮａＣｌ中に溶解した１０μｇのペプチドを静脈内注射した。
ハイブリドーマ形成
米国セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ（Ｓａｉｎｔ−Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ））からのポリエチレングリコール１５００を用いて、骨髄腫細胞１個あたり脾細胞２個の比率で融合を実施した。Ｃ５８Ｂ１６マウスの腹膜マクロファージによって１０００細胞／ウェルでプレコートした９６ウェルプレート内で、ハイブリドーマを培養した。５％ＣＯ２雰囲気下の３７℃加湿恒温器内で、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、２００ｍＭグルタミン、１００ｍＭナトリウムピルビン酸、スイス国メットメンシュテテンのイムニラブ（Ｏｍｎｉｌａｂ（Ｍｅｔｔｍｅｎｓｔｅｔｔｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの１％ペニシリンストレプトマイシン、スイス国ルツェルンのギブコ（Ｇｉｂｃｏ（Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの３％ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）を添加したＩＭＤＭ培地中の細胞をウェルあたり５×１０５個に分配した。
米国セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ（Ｓａｉｎｔ−Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ））からのポリエチレングリコール１５００を用いて、骨髄腫細胞１個あたり脾細胞２個の比率で融合を実施した。Ｃ５８Ｂ１６マウスの腹膜マクロファージによって１０００細胞／ウェルでプレコートした９６ウェルプレート内で、ハイブリドーマを培養した。５％ＣＯ２雰囲気下の３７℃加湿恒温器内で、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、２００ｍＭグルタミン、１００ｍＭナトリウムピルビン酸、スイス国メットメンシュテテンのイムニラブ（Ｏｍｎｉｌａｂ（Ｍｅｔｔｍｅｎｓｔｅｔｔｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの１％ペニシリンストレプトマイシン、スイス国ルツェルンのギブコ（Ｇｉｂｃｏ（Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの３％ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）を添加したＩＭＤＭ培地中の細胞をウェルあたり５×１０５個に分配した。
スクリーニング
クローンは酵素免疫測定法によってスクリーニングし、オイ（Ｏｉ）ＶＴ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８０；１５１（５）：１２６０〜７４に従って限界希釈によりサブクローニングした。
クローンは酵素免疫測定法によってスクリーニングし、オイ（Ｏｉ）ＶＴ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８０；１５１（５）：１２６０〜７４に従って限界希釈によりサブクローニングした。
４．酵素免疫測定法
デンマーク国ロスキレのヌンク（Ｎｕｎｃ（Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ））からの９６ウェルマキシソープ（ＭＡＸＩＳＯＲＰ）マイクロタイタープレート内で、ＮＴ４ペプチド（２μＭ）を５０μｌ／ウェルで３７℃で２時間インキュベートし、炭酸塩緩衝液（Ｎａ２ＣＯ３ １５ｍＭ、ＮａＨＣＯ３ ３５ｍＭ、ｐＨ９．６）に吸着させた。プレートを米国カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド（Ｂｉｏｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ））からの３％粉乳およびスイス国ブフスのフルカ（Ｆｌｕｋａ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加した、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｎａ２ＨＰＯ４ １０ｍＭ、ＮａＣｌ １５０ｍＭ、ＫＣｌ ２７ｍＭ、ｐＨ７．４）（ＰＢＳ−Ｔミルク）で３７℃で１時間飽和した。
デンマーク国ロスキレのヌンク（Ｎｕｎｃ（Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ））からの９６ウェルマキシソープ（ＭＡＸＩＳＯＲＰ）マイクロタイタープレート内で、ＮＴ４ペプチド（２μＭ）を５０μｌ／ウェルで３７℃で２時間インキュベートし、炭酸塩緩衝液（Ｎａ２ＣＯ３ １５ｍＭ、ＮａＨＣＯ３ ３５ｍＭ、ｐＨ９．６）に吸着させた。プレートを米国カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド（Ｂｉｏｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ））からの３％粉乳およびスイス国ブフスのフルカ（Ｆｌｕｋａ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加した、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｎａ２ＨＰＯ４ １０ｍＭ、ＮａＣｌ １５０ｍＭ、ＫＣｌ ２７ｍＭ、ｐＨ７．４）（ＰＢＳ−Ｔミルク）で３７℃で１時間飽和した。
免疫されたマウス血清または１：１０希釈ハイブリドーマ培養上清をプレートに入れて、３７℃でインキュベートした。次にプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１／５０００希釈のヤギ抗マウス免疫グロブリンＨ＋Ｌホースラディッシュペルオキシダーゼ抱合体（バイオラッド（Ｂｉｏｒａｄ））と共に、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−ＴおよびＰＢＳで洗浄後、０．０４％Ｈ２Ｏ２存在下で、３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）の添加によって、酵素反応を室温で実施した。１５分後にＨＣｌ（１Ｎ）の添加によって反応を停止させた。米国カリフォルニア州フリーモントのパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｉｍｅｒ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ，ＵＳＡ））からのビクター・ワラック（Ｖｉｃｔｏｒ Ｗａｌｌａｃ）マイクロプレートリーダーを使用して、光学濃度を４５０ｎｍで測定した。
Ｂ．ｍＡｂの特性決定
１．ｍＡｂ可変領域のｃＤＮＡクローニング
米国のバイオジェンテクス（Ｂｉｏｇｅｎｔｅｘ（ＵＳＡ））からのＲＮＡｎｏｗキットを使用して、１０７個の新鮮にサブクローニングしたハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを調製し、米国カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド（Ｂｉｏｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ））からのｉＳｃｒｉｐｔＴｍ ｃＤＮＡ合成キットを使用して、第一鎖ｃＤＮＡを合成した。ノバジェン（Ｎｏｖａｇｅｎ）からのＩｇＧプライマーセットを使用して、ＰＣＲによってＶＨおよびＶＬ鎖領域を増幅した。５０μｌのＰＣＲ混合物は、５０ｎｇのハイブリドーマｃＤＮＡ、各２０ｐｍｏｌの適切なプライマー、各２５０μＭのｄＮＴＰ、１×Ｔａｑ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）、および１Ｕのサーマス・アクアティカス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ）（Ｔａｑ）ポリメラーゼを含有した。
１．ｍＡｂ可変領域のｃＤＮＡクローニング
米国のバイオジェンテクス（Ｂｉｏｇｅｎｔｅｘ（ＵＳＡ））からのＲＮＡｎｏｗキットを使用して、１０７個の新鮮にサブクローニングしたハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを調製し、米国カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッド（Ｂｉｏｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ））からのｉＳｃｒｉｐｔＴｍ ｃＤＮＡ合成キットを使用して、第一鎖ｃＤＮＡを合成した。ノバジェン（Ｎｏｖａｇｅｎ）からのＩｇＧプライマーセットを使用して、ＰＣＲによってＶＨおよびＶＬ鎖領域を増幅した。５０μｌのＰＣＲ混合物は、５０ｎｇのハイブリドーマｃＤＮＡ、各２０ｐｍｏｌの適切なプライマー、各２５０μＭのｄＮＴＰ、１×Ｔａｑ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）、および１Ｕのサーマス・アクアティカス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ）（Ｔａｑ）ポリメラーゼを含有した。
増幅は、ＭＪリサーチ（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）からのサーモサイクラー（ＰＴＣ−１５０）内において、９４℃で１．５分間、５５℃で２．５分間、および７２℃で３分間を５０サイクル含んだ。増幅されたＤＮＡを米国ウィスコンシン州マディソンのプロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ））からのｐＧＥＭＴベクターにライゲートし、組み換えプラスミドをキアジェン（Ｑｉａｇｅｎ）からのミニプレップ（ｍｉｎｉｐｒｅｐ）キットを使用して精製した。プリズム・サイクル・シーケンシング（ＰＲＩＳＭ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）キット（ＡＢＩ）とＭ１３順方向および逆方向プライマーを使用して、クローンされたＶＨおよびＶＬ挿入断片のＤＮＡ配列を判定した。Ｖ遺伝子の配列は、独立した２バッチのＲＮＡ調製品上で判定して正確さを確保した。
２．アイソタイプ判定
製造業者（ザイメド・ラブ（Ｚｙｍｅｄ ｌａｂ））の使用説明書に従ってＭｏｎｏＡｂｉＤキットを使用し、選択されたｍＡｂのアイソタイプを判定した。
製造業者（ザイメド・ラブ（Ｚｙｍｅｄ ｌａｂ））の使用説明書に従ってＭｏｎｏＡｂｉＤキットを使用し、選択されたｍＡｂのアイソタイプを判定した。
３．ｍＡｂ精製
製造業者の使用説明書に従って、スウェーデン国ウプサラのアマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ））からの活性化ＣＮＢｒ−セファロース４ＢカラムにＮ末端で結合させたＮＴ４ペプチド上で、抗ＮＴ４ｍＡｂをアフィニティ精製した。培養上清を４℃でカラムに装入した。ｍＡｂを０．２ＭグリシンｐＨ２．７で溶出し、１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ８を含有する試験管に収集し、引き続いてＰＢＳに対して４℃で一晩透析し、最後に−２０℃で保存した。
製造業者の使用説明書に従って、スウェーデン国ウプサラのアマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ））からの活性化ＣＮＢｒ−セファロース４ＢカラムにＮ末端で結合させたＮＴ４ペプチド上で、抗ＮＴ４ｍＡｂをアフィニティ精製した。培養上清を４℃でカラムに装入した。ｍＡｂを０．２ＭグリシンｐＨ２．７で溶出し、１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液ｐＨ８を含有する試験管に収集し、引き続いてＰＢＳに対して４℃で一晩透析し、最後に−２０℃で保存した。
Ｃ．アッセイ
１．細胞培養
３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気内において、スイス国アルシュヴィルのバイオコンセプト（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ（Ａｌｌｓｃｈｗｉｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの１０％ウシ胎仔血清、米国ニューヨーク州グランドアイランドのギブコ（Ｇｉｂｃｏ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ））からの１％ペニシリン／ストレプトマイシン、およびシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの６００μｇ／ｍｌのＧ４１８を含有する、米国ミズーリ州セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ））からのダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、ヒト（ｈ）ＭＣ４−Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞を培養した。
１．細胞培養
３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気内において、スイス国アルシュヴィルのバイオコンセプト（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ（Ａｌｌｓｃｈｗｉｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））からの１０％ウシ胎仔血清、米国ニューヨーク州グランドアイランドのギブコ（Ｇｉｂｃｏ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ））からの１％ペニシリン／ストレプトマイシン、およびシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの６００μｇ／ｍｌのＧ４１８を含有する、米国ミズーリ州セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ））からのダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、ヒト（ｈ）ＭＣ４−Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞を培養した。
２．ｃＡＭＰアッセイ
処置の１２時間前に細胞を２４ウェル培養プレートに移し、次にシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの培養液（ＤＭＥＭ）で３時間洗浄して、０．１％ＢＳＡおよびシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの３−イソブチル−ｌ−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を添加したＰＢＳ中で３０分間インキュベートした。細胞を精製されたｍＡｂの連続希釈物で３０分間処理し、または１００ｎＭのｍＡｂで３０分間プレインキュベートして、次にα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ、１０９〜１０−５Ｍ）の連続希釈物で１５分間処理した。
処置の１２時間前に細胞を２４ウェル培養プレートに移し、次にシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの培養液（ＤＭＥＭ）で３時間洗浄して、０．１％ＢＳＡおよびシグマ（Ｓｉｇｍａ）からの３−イソブチル−ｌ−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を添加したＰＢＳ中で３０分間インキュベートした。細胞を精製されたｍＡｂの連続希釈物で３０分間処理し、または１００ｎＭのｍＡｂで３０分間プレインキュベートして、次にα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ、１０９〜１０−５Ｍ）の連続希釈物で１５分間処理した。
引き続いて細胞をバイオトラック（Ｂｉｏｔｒａｋ）ｃＡＭＰ溶解緩衝液で溶解し、スウェーデン国ウプサラのアマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ））からのバイオトラック（Ｂｉｏｔｒａｋ）ｃＡＭＰ酵素免疫測定システムを使用して、製造業者の使用説明書に従ってｃＡＭＰを測定した。米国イリノイ州リックフォードのピアス（Ｐｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））からのＢＣＡキットを使用してタンパク質濃度を判定した。ｃＡＭＰの濃度はｆｍｏｌ ｃＡＭＰ／μｇタンパク質で表された。
３．脳室内カニューレ挿入
医療用酸素中のイソフルラン（誘導では４％麻酔維持では２％）を用いて、オスのスプラーグドーリーラット（２７５ｇ〜３２５ｇ）を麻酔した。ブレグマに対して以下の座標を使用して、ステンレス鋼カニューレ（２６ゲージ、１０ｍｍ長）を第３の脳室空洞中に埋め込んだ。体軸方向から−２．３ｍｍ、正中線から０ｍｍ側方、および頭蓋表面から−７．５ｍｍ腹側。
医療用酸素中のイソフルラン（誘導では４％麻酔維持では２％）を用いて、オスのスプラーグドーリーラット（２７５ｇ〜３２５ｇ）を麻酔した。ブレグマに対して以下の座標を使用して、ステンレス鋼カニューレ（２６ゲージ、１０ｍｍ長）を第３の脳室空洞中に埋め込んだ。体軸方向から−２．３ｍｍ、正中線から０ｍｍ側方、および頭蓋表面から−７．５ｍｍ腹側。
３個のステンレス鋼スクリューとガラス−イオノマーセメント（３Ｍ）を用いてガイドカニューレを定位置に固定し、吻針を挿入して使用時までカニューレを閉鎖した。外科手術後２日間にわたりテムゲシック（Ｔｅｍｇｅｓｉｃ）（０．０３ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与した。外科手術からの回復の７日後に、５ｐｌの注入量中の２０ｐｍｏｌのアンギオテンシンＩＩのｉｃｖ注射に対する口渇誘発性反応（１５分以内の少なくとも５ｍｌの即時の飲水）を測定することによって、第３脳室中のカニューレ配置の正確さを試験した。
４．脳室内注射
ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）シリンジを使用して９：００ａｍに、容積５ｐｌ中の０．１ｐｇの用量で精製ｍＡｂを緩慢に（１分間）ｉｃｖ注射した。これらの用量は比較生体外研究の結果に基づいて選択された。ラットＡｂの注射に続いて、３日間にわたり１時間間隔で、ドイツ国バートホンブルクのＴＳＥシステムズ（ＴＳＥ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））からの自動食物摂取量装置を使用して、食物摂取量を続く３日間連続的に記録した。ウサギＡｂの注射後、続く３日間食物摂取量を９：００ａｍおよび５：００ｐｍに測定した。
ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）シリンジを使用して９：００ａｍに、容積５ｐｌ中の０．１ｐｇの用量で精製ｍＡｂを緩慢に（１分間）ｉｃｖ注射した。これらの用量は比較生体外研究の結果に基づいて選択された。ラットＡｂの注射に続いて、３日間にわたり１時間間隔で、ドイツ国バートホンブルクのＴＳＥシステムズ（ＴＳＥ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））からの自動食物摂取量装置を使用して、食物摂取量を続く３日間連続的に記録した。ウサギＡｂの注射後、続く３日間食物摂取量を９：００ａｍおよび５：００ｐｍに測定した。
Ｄ．データ分析
全てのデータは、指定のように平均±ＳＤまたはＳＥＭとして表される。ボンフェローニのポストホックテストによる二元配置分散分析反復測定によって、またはグラフパッドプリズム（Ｇｒａｐｈ ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）４ソフトウェアを使用したスチューデントｔ検定によって、データを分析した。ｃＡＭＰ濃度応答実験では、最良適合曲線をそれらの最小、最大、およびＥＣ５０についてＦ検定を使用して比較した。
全てのデータは、指定のように平均±ＳＤまたはＳＥＭとして表される。ボンフェローニのポストホックテストによる二元配置分散分析反復測定によって、またはグラフパッドプリズム（Ｇｒａｐｈ ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）４ソフトウェアを使用したスチューデントｔ検定によって、データを分析した。ｃＡＭＰ濃度応答実験では、最良適合曲線をそれらの最小、最大、およびＥＣ５０についてＦ検定を使用して比較した。
実施例ＩＩ：結果
Ａ．ｍＡｂのペプチド特異性
遊離ペプチドＮＴ４およびＮＴ３について酵素免疫測定を実施した。図３Ａに示すように、ハイブリドーマ産生のために使用したマウスの血清は、ＭＣ４−ＲのＮ末端部分に由来する免疫原性ペプチドＮＴ４に対して高度に特異的かつ明白な応答を示したが、ＭＣ３−ＲのＮ末端部分に由来するＮＴ３ペプチドに対しては示さなかった。ポリクローナル応答は高かったが、どちらもＩｇＭ抗体であるｍＡｂ １Ｅ８ａおよびｍＡｂ ２Ｇ２の２クローンのみが、サブクローニングおよび増幅まで保存できた。図３Ｂに示すように、ｍＡｂ １Ｅ８ａのＮＴ４ペプチドに対する特異性はポリクローナルマウス応答に対応する。
Ａ．ｍＡｂのペプチド特異性
遊離ペプチドＮＴ４およびＮＴ３について酵素免疫測定を実施した。図３Ａに示すように、ハイブリドーマ産生のために使用したマウスの血清は、ＭＣ４−ＲのＮ末端部分に由来する免疫原性ペプチドＮＴ４に対して高度に特異的かつ明白な応答を示したが、ＭＣ３−ＲのＮ末端部分に由来するＮＴ３ペプチドに対しては示さなかった。ポリクローナル応答は高かったが、どちらもＩｇＭ抗体であるｍＡｂ １Ｅ８ａおよびｍＡｂ ２Ｇ２の２クローンのみが、サブクローニングおよび増幅まで保存できた。図３Ｂに示すように、ｍＡｂ １Ｅ８ａのＮＴ４ペプチドに対する特異性はポリクローナルマウス応答に対応する。
Ｂ．パラトープ配列
ｍＡｂ １Ｅ８ａの重鎖および軽鎖可変領域、およびｍＡｂ ２Ｇ２の重鎖可変領域をクローンして配列決定した。
ｍＡｂ １Ｅ８ａの重鎖および軽鎖可変領域、およびｍＡｂ ２Ｇ２の重鎖可変領域をクローンして配列決定した。
ｍＡｂ １Ｅ８ａの重鎖可変領域の核酸およびコードされるアミノ酸配列をそれぞれ図４Ａ（配列番号４）および図４Ｂ（配列番号５）に、相補性決定領域に下線を引いて示す。ｍＡｂ １Ｅ８ａの軽鎖可変領域の核酸およびコードされるアミノ酸配列をそれぞれ図５Ａ（配列番号６）および図５Ｂ（配列番号７）に、相補性決定領域に下線を引いて示す。
ｍＡｂ ２Ｇ２の重鎖可変領域の核酸およびコードされるアミノ酸配列をそれぞれ図６Ａ（配列番号８）および図６Ｂ（配列番号９）に、相補性決定領域に下線を引いて示す。ｍＡｂ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２の定常部は、このサブタイプ中の全てのマウス抗体に共通である。
Ｃ．ｍＡｂ １Ｅ８ａおよびｍＡｂ ２Ｇ２の生体外薬理学的活性
双方のｍＡｂの逆作動活性を検出するために、ＨＥＫ−２９３細胞を精製されたｍＡｂ ２Ｇ２およびｍＡｂ １Ｅ８ａで処理した。図７Ａ（左パネル）の濃度応答曲線で示されるように、ＭＣ４−Ｒで形質移入したＨＥＫ−２９３細胞をｍＡｂ ２Ｇ２の増大する濃度（１ｐＭ〜０．１μＭ）に曝露しても、ｃＡＭＰの減少は測定されなかった。図７Ａ（右パネル）に示すように、ｍＡｂ ２Ｇ２の存在はα−ＭＳＨの濃度応答曲線に影響を与えなかった。
双方のｍＡｂの逆作動活性を検出するために、ＨＥＫ−２９３細胞を精製されたｍＡｂ ２Ｇ２およびｍＡｂ １Ｅ８ａで処理した。図７Ａ（左パネル）の濃度応答曲線で示されるように、ＭＣ４−Ｒで形質移入したＨＥＫ−２９３細胞をｍＡｂ ２Ｇ２の増大する濃度（１ｐＭ〜０．１μＭ）に曝露しても、ｃＡＭＰの減少は測定されなかった。図７Ａ（右パネル）に示すように、ｍＡｂ ２Ｇ２の存在はα−ＭＳＨの濃度応答曲線に影響を与えなかった。
反対に図７Ｂ（左パネル）に示すように、ＭＣ４−Ｒで形質移入したＨＥＫ−２９３細胞をｍＡｂ １Ｅ８ａの増大する濃度（１ｐＭ〜０．１ＭＭ）に曝露すると、濃度に依存してｃＡＭＰ形成が最高４０％減少し、ｍＡｂ ２Ｇ２の存在がα−ＭＳＨの濃度応答曲線を変化させなかったのに対し、１００ｎＭのｍＡｂ １Ｅ８ａの存在は、図７Ｂ（右パネル）に示すようにα−ＭＳＨの最大効果を顕著に（ｐ＜０．００１、Ｆ検定）低下させた。細胞内ｃＡＭＰ含量の濃度依存性減少は、ｍＡｂ １Ｅ８ａの逆作動効果を示す。
ｍＡｂ １Ｅ８ａの存在下で低下した最大有効性からは、それが非競合的拮抗薬として作用することが提案される。データは、３回の独立した実験から計算される平均±ＳＤとして示される。
ｍＡｂ １Ｅ８ａおよびｄｍＡｂ ２Ｇ２の生体内薬理学的活性
０．１μｇの精製されたｍＡｂ ２Ｇ２および１Ｅ８ａＡｂをラットの第３脳室内に注射した。図８Ａに示すように、１μｇのｍＡｂ １Ｅ８ａを投与されたラットは、ＭＣ４−Ｒに対して不活性のｍＡｂ ２Ｇ２を投与されたラットよりも３３％多い食物を９６時間内に摂取した（データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される、＊＊：ｐ＜０．０１、ボンフェローニのポストホックテストによる反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ、ｎ＝５）。
０．１μｇの精製されたｍＡｂ ２Ｇ２および１Ｅ８ａＡｂをラットの第３脳室内に注射した。図８Ａに示すように、１μｇのｍＡｂ １Ｅ８ａを投与されたラットは、ＭＣ４−Ｒに対して不活性のｍＡｂ ２Ｇ２を投与されたラットよりも３３％多い食物を９６時間内に摂取した（データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される、＊＊：ｐ＜０．０１、ボンフェローニのポストホックテストによる反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ、ｎ＝５）。
図８Ｂに示すようにｍＡｂ ＩＥ８ａを投与されたラットの体重は変化しなかったのに対し、ｍＡｂ ２Ｇ２を投与されたラットでは体重が減少した（＊：ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ検定、ｎ＝５）。
図９Ａ〜９Ｃは、ｍＡｂ １Ｅ８ａの特異性を図示する。図９ａは、蛍光標識されたｍＡｂ １Ｅ８ａで染色されたヒトＭＣＲ４を発現する、培養されたＨＥＫ−２９３細胞を示す。顕著なレベルの発現されたｈＭＣＲ４が検出された。図９Ｂおよび９Ｃは、ｈＭＲＣ３を発現するＨＥＫ−２９３細胞図９Ａと同一手順で染色され、またはｈＭＣＲ４を発現する細胞がｍＡｂ ２Ｇ２（対照抗体）で染色された生体外細胞培養を示す。どちらの場合も顕著な染色は起きなかった。
図１０は、ＭＣＲ４またはＭＣＲ３のどちらかを発現し、ｍＡｂ １Ｅ８ＡまたはｍＡｂ ２Ｇ２（対照ｍＡｂ）で染色された細胞の免疫細胞化学的染色を要約する。さらにＮＴ４ペプチドに対するｍＡｂ １Ｅ８ａの結合定数Ｋｄは、２．３×１０−９Ｍと判定された。
図１１は、ｃＡＭＰに対するｍＡｂ １Ｅ８ａおよび対照ｍＡｂ ２Ｇ２の生体外薬理学的効果を示す。増大する量のｍＡｂ １Ｅ８ａの添加が明らかに細胞内ｃＡＭＰレベルの低下をもたらし（左パネル）、α−ＭＳＨに対する濃度応答曲線もまた低下させたのに対し、どちらも対照として使用されたｍＡｂ ２Ｇ２およびＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）は、α−ＭＳＨの濃度応答曲線に顕著な影響を及ぼさなかった（右パネル）。結果は図７Ａおよび７Ｂで示されるものに匹敵する。データは平均±ＳＤとして示される、ｎ＝３；＊＊＊：ｐ＜０．００１、二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定。
図１２は、ｍＡｂの脳室内（ｉｃｖ）注射後のｍＡｂ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２（１μｇ）の生体内効果を示す。モノクローナル抗体はどちらも、上述の通り明期中９：００ａｍに投与された（実験プロトコル）。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される、＊＊：ｐ＜０．０１；二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定、ボンフェローニのポストホック検定；§§：ｐ＜０．０１、スチューデントｔ検定。図１２の左パネルは、ｍＡｂ １Ｅ８ａの投与が、ｍＡｂ ２Ｇ２と比較して、注射後相において測定された食物取り込みの顕著な増大をもたらすことを示す。右パネルは、体重変化を図示する。ｍＡｂ １Ｅ８ａを注射されたラットの体重は、注射後相において減少しなかった。それどころかそれらの体重は増大した。他方ｍＡｂ ２Ｇ２を注射されたラットは、注射後相において顕著な体重減少を示した。
図１３では、ｍＡｂ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２（１μｇ）の脳室内（ｉｃｖ）注射＋ＬＰＳの腹腔内（ｉｐ）注射の生体内効果が示される。ここでも結果は、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される。＊：ｐ＜０．０５、二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定、ボンフェローニのポストホック検定。実験プロトコルは、３日間続けての明期中４：３０ｐｍのｍＡｂ １Ｅ８ａまたは２Ｇ２どちらかの脳室内注射を含んでいた。２日目に、ＬＰＳ（リポ多糖類）を腹腔内（ｉｐ）注射した。（活性）ｍＡｂ １Ｅ８ａを投与されたラットは、２回目のｉｃｖ注射後に測定された食物摂取量の増大を示しただけでなく、さらにそれらの体重減少は、ｍＡｂ ２Ｇ２を注射された対照群ラットと比較して顕著に低下した。
図１４は、ｍＡｂ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２（３００μｇ／ｋｇ）の静脈内（ｉｖ）注射の生体内効果を示す。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される。実験プロトコルは、どちらかのｍＡｂ（１Ｅ８ａまたは２Ｇ２）の静脈内（ｉｖ）注射を含む。注射は明期中の９：００ａｍに実施した。２群間で累積食物摂取量に有意差は検出できなかった。
図１５は、ｃＡＭＰレベルに対する１Ｅ８ａおよび２Ｇ２の一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）生体外効果を示す。ＰＢＳをさらなる対照として使用したところ、それは２Ｇ２のｓｃＦｖと同様に、α−ＭＳＨの濃度応答曲線に影響を与えなかった。結果は図１１に示されるものと同様であった。
図１６は、ｍＡｂ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２の一本鎖断片（ｓｃＦｖ）（１．７μｇ）のｉｃｖ注射の生体内効果を示す。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される。＊：ｐ＜０．０５、二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定、ボンフェローニのポストホック検定、§：ｐ＜０．０５、スチューデントｔ検定。
実験プロトコルに従って、明期中の９：００ａｍにｓｃＦｖを脳室内注射した。１Ｅ８ａのｓｃＦｖの投与は、注射後に測定された累積食物摂取量を顕著に増大させた。しかしどちらのラット群も注射後期に体重減少を示した。しかし１Ｅ８ａのｓｃＦｖを投与されたラットにおける体重減少は、顕著に低下した体重減少を示した。
図１７では、１Ｅ８ａのｓｃＦｖ（３００μｇ／ｋｇ）のｉｖ注射の生体内効果が示される。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定、ボンフェローニのポストホック検定。Ｃｔは不活性溶出液を意味し、１Ｅ８ａはｔｈｅ活性溶出液を表す。実験プロトコルに従って、１Ｅ８ａまたは２Ｇ２のｓｃＦｖを明期中の９：００ａｍに静脈内（ｉｖ）注射した。１Ｅ８ａのｓｃＦｖは、明期中の顕著により高い累積食物摂取量（中央パネル）、ならびに注射後相におけるより高い体重変化を引き起こした。
図１８は、ｓｃＦｖ １Ｅ８ａおよび２Ｇ２のｉｖ注射＋ＬＰＳのｉｐ注射（３００μｇ／ｋｇ）の生体内効果を示す。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される。実験プロトコルは、４：３０ｐｍの１Ｅ８ａまたは２Ｇ２どちらかのｓｃＦｖの静脈内（ｉｖ）注射と、１時間後５：３０ｐｍのＬＰＳの腹腔内（ｉｐ）注射とを含む。１Ｅ８ａのｓｃＦｖで処置されたラットは、ｓｃＦｖ注射後の期間中に観察された累積食物摂取量増大の明らかな傾向を示す。
図１９は、環式ペプチドＨ１（配列番号１０）、Ｈ２（配列番号１１）、Ｈ３（配列番号１２）、Ｌｌ（配列番号１３）、Ｌ２（配列番号１４）、およびＬ３（配列番号１５）のアミノ酸配列を示す。
図２０は、環式ペプチドＬ３およびＨ２（１μｇ）の脳室内（ｉｃｖ）注射の生体内効果を示す。結果は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示される。＊：ｐ＜０．０５、二元配置ＡＮＯＶＡ反復測定、ボンフェローニのポストホック検定。実験プロトコルに従って、ペプチドＬ３およびＨ２を明期中の９：００ａ．ｍに投与した。ＴＲＩＳ緩衝液をさらなる対照として使用した。環式ペプチドＬ３は、注射後相において観察された累積食物摂取量を増大させる傾向を示す。
図２１はｍＡｂ １Ｅ８ａのｍＡｂパラトープのアミノ酸配列を示す。上側パネルは重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１６）を示し、下側パネルは軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１７）を示す。
上の実施例に示すように、ＭＣ４−Ｒに対して産生されたｍＡｂ、特にｍＡｂ １Ｅ８ａは、食欲に対して、結果的には体重減少に対して顕著な効果を有し、悪液質と関連病状および疾患に対するそれらの治療的な用途が示唆される。
本発明の治療的なｍＡｂは、あらゆる既知の適切な方法で投与されてもよい。例えば特定の実施態様では、それらは、臨床状況においてＭＣ４−Ｒを発現する特異的標的細胞にそれらが注入される、標準モノクローナル抗体治療プロトコルに従って投与されてもよい。いくつかの実施態様では、それらはそれぞれこのような投与に適した形態で、非経口的に投与されても、経口的に投与されても、または副鼻腔、喉または肺に投与されてもよい。それらは特定の実施態様では、当該技術分野において承認されている技術に従ってさらに変性されてもよく、例えばそれらは様々な治療的な目的のために、キメラ化されヒト化されてもよい。
さらにそれらは、その他の活性治療薬と組み合わされて提供されてもよく、特定の実施態様では免疫複合体を形成してその他の治療薬をＭＣ４Ｒに方向づけてもよい。ここで提供される教示を与えられると、当業者はこのような投与方法および形態、組み合わせその他を判断できるであろう。
同様に当業者は、当業者に認識された技術を使用して、このような治療薬および製剤の適切な投薬を判断できるであろう（投与計画に影響を与えることが知られている要素としては、例えば限定されずに、特定薬剤の薬力学的特徴およびその投与様式と経路；受容者の生物種、年齢、性別、総体的な健康、疾患、食餌、および体重；症状の性質および程度；併用療法の種類；治療頻度；投与時間；投与経路；患者の腎および肝機能；および所望の効果が挙げられる）。さらにＭＣ４−Ｒに対して所望の治療活性を有する、ここで開示されるｍＡｂの断片および誘導体（相同体、類似体などを含む）は本発明の範囲内であり、治療的な化合物の調合物中で使用できる。
本発明の範囲と趣旨を逸脱することなく、上の組成物および方法には様々な変更を行えるので、上の説明中に含まれ、添付の図面に示され、または添付の特許請求の範囲で定義される全ての主題は、限定を意図しない例示的なものとして解釈されることが意図される。
ここで引用される全ての特許、特許出願、発表論文、書籍、リファレンスマニュアル、教科書および要約書の内容は、本発明が関連する従来技術についてより完全に述べるために、その全体が参照によって援用される。
Claims (18)
- 配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むメラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に特異的に結合し、
配列番号５に記載のアミノ酸配列の２４番目から３１番目、
配列番号５に記載のアミノ酸配列の４９番目から５６番目および
配列番号５に記載のアミノ酸配列の９４番目から１０７番目によってＨ鎖のＣＤＲが規定され、
配列番号７に記載のアミノ酸配列の２４番目から３４番目、
配列番号７に記載のアミノ酸配列の５０番目から５７番目および
配列番号７に記載のアミノ酸配列の８９番目から９７番目によってＬ鎖のＣＤＲが規定される単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。 - 結合断片が単離されたモノクローナル抗体の重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 結合断片が単離されたモノクローナル抗体の軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 配列番号５、配列番号７、および配列番号９に記載のアミノ酸配列の１つ以上を含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 配列番号４、配列番号６、および配列番号８に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の１つ以上を含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 単離されたモノクローナル抗体の軽鎖可変領域に由来する環式ペプチドを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５に記載のアミノ酸配列によってコードされるアミノ酸配列の環式ペプチドを含む、請求項６に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 単離されたモノクローナル抗体の重鎖可変領域に由来する環式ペプチドを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列によってコードされるアミノ酸配列の環式ペプチドを含む、請求項８に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片がメラノコルチン−４受容体の拮抗薬または逆作動薬である、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片が組み換え的に産生される、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 請求項１〜１１のいずれか一項に記載の治療的に有効量の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片を含む医薬組成物。
- 請求項１２に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片を含む医薬組成物。
- Ｈ鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号５であり、Ｌ鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７である、単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片。
- 請求項１４に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片が、哺乳類の食欲を増大させるのに治療的に効果的な量で組成物中に存在する、医薬組成物。
- 前記組成物が悪液質の症状を示す患者において前記症状を治療するのに治療的に有用である、請求項１３に記載の医薬組成物。
- 哺乳類において食欲を増大させるのに有用な薬剤を調製するためのメラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、請求項１〜１１および１４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体または単離されたモノクローナル抗体の抗原結合性断片の使用。
- 悪液質および関連病状を治療するのに有用な薬剤を調製するためのメラノコルチン−４受容体またはメラノコルチン−４受容体の一部に結合する、請求項１〜１１および１４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の抗原結合性断片の使用。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1836007P | 2007-12-31 | 2007-12-31 | |
| US61/018,360 | 2007-12-31 | ||
| US2966108P | 2008-02-19 | 2008-02-19 | |
| US61/029,661 | 2008-02-19 | ||
| PCT/IB2008/003651 WO2009087467A2 (en) | 2007-12-31 | 2008-12-30 | Monoclonal antibodies and binding fragments thereof directed to the melanocortin-4 receptor and their use in the treatment of cachexia and related conditions and diseases |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011508739A JP2011508739A (ja) | 2011-03-17 |
| JP5685774B2 true JP5685774B2 (ja) | 2015-03-18 |
Family
ID=40637117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010540187A Expired - Fee Related JP5685774B2 (ja) | 2007-12-31 | 2008-12-30 | メラノコルチン−４受容体に対するモノクローナル抗体およびその結合断片と、悪液質および関連病状および疾患の治療におけるそれらの使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8252908B2 (ja) |
| EP (1) | EP2227490B1 (ja) |
| JP (1) | JP5685774B2 (ja) |
| AU (1) | AU2008200795A1 (ja) |
| CA (1) | CA2619381A1 (ja) |
| WO (1) | WO2009087467A2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100022442A1 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Ambryx Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for increasing serum antioxidant concentrations, decreasing serum triglyceride levels, inhibiting insulin-receptor signaling activity, increasing serum ghrelin levels, and decreasing serum tnf-alpha levels |
| WO2018105198A1 (ja) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | 富士フイルム株式会社 | ミックスモードアフィニティクロマトグラフィー用担体 |
| US11332499B2 (en) | 2018-08-16 | 2022-05-17 | Regents Of The University Of Minnesota | Cyclic peptides and methods of use thereof |
| WO2023069892A1 (en) * | 2021-10-19 | 2023-04-27 | Short Jay M | Conditionally active proteins for neurodegenerative diseases |
| CN116731184B (zh) * | 2022-11-25 | 2024-06-14 | 厦门康基生物科技有限公司 | 一种特异性结合Taq酶的单克隆抗体F6H12及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5622860A (en) * | 1994-02-17 | 1997-04-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Genes encoding melanocortin receptors |
| US6287763B1 (en) * | 1996-06-10 | 2001-09-11 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight |
| US5908609A (en) * | 1996-06-10 | 1999-06-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight |
| CA2350169A1 (en) * | 1998-11-09 | 2000-05-18 | Merck & Co., Inc. | Dna molecules encoding the melanocortin 4 receptor protein from rhesus monkey |
| US20030032791A1 (en) * | 2000-06-26 | 2003-02-13 | Alan Robertson Scott | Novel melanocortin-4 receptor sequences and screening assays to identify compounds useful in regulating animal appetite and metabolic rate |
| KR100427645B1 (ko) * | 2001-07-24 | 2004-04-28 | 한국생명공학연구원 | 인간 멜라노코틴-4 수용체에 대한 항체와 그 제조방법 |
| AU2008200794A1 (en) | 2007-12-31 | 2009-07-16 | University Of Basel | Methods for diagnosing and treating obesity by modulating the activity of auto-antibodies against the melanocortin-4 receptor |
-
2008
- 2008-02-20 CA CA002619381A patent/CA2619381A1/en not_active Abandoned
- 2008-02-20 AU AU2008200795A patent/AU2008200795A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-30 EP EP08869649.7A patent/EP2227490B1/en not_active Not-in-force
- 2008-12-30 JP JP2010540187A patent/JP5685774B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-12-30 US US12/811,249 patent/US8252908B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-12-30 WO PCT/IB2008/003651 patent/WO2009087467A2/en active Application Filing
-
2012
- 2012-07-27 US US13/560,638 patent/US8703139B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8252908B2 (en) | 2012-08-28 |
| EP2227490A2 (en) | 2010-09-15 |
| US20130058941A1 (en) | 2013-03-07 |
| JP2011508739A (ja) | 2011-03-17 |
| US8703139B2 (en) | 2014-04-22 |
| EP2227490B1 (en) | 2016-05-11 |
| US20110044987A1 (en) | 2011-02-24 |
| AU2008200795A1 (en) | 2009-07-16 |
| CA2619381A1 (en) | 2009-06-30 |
| WO2009087467A2 (en) | 2009-07-16 |
| WO2009087467A3 (en) | 2009-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6321545B2 (ja) | 治療法における使用のための抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場 | |
| JP6224608B2 (ja) | 血液循環を安定化させるための、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場 | |
| JP6193872B2 (ja) | 慢性又は急性疾患に罹患している患者の体液平衡を調整するための抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場 | |
| AU2017206069A1 (en) | Anti-pro/latent myostatin antibodies and methods of use thereof | |
| JP2015003920A (ja) | 治療薬 | |
| WO2022095926A1 (zh) | 靶向于白介素36r的抗体及其制备方法和应用 | |
| US20060233788A1 (en) | Anti-ghrelin antibodies | |
| JP2009515827A5 (ja) | ||
| WO2013072510A1 (en) | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for reducing the risk of mortality in a patient having a chronic or acute disease or acute condition | |
| JP2017093435A (ja) | Ｉｌ−２１抗体 | |
| JP5685774B2 (ja) | メラノコルチン−４受容体に対するモノクローナル抗体およびその結合断片と、悪液質および関連病状および疾患の治療におけるそれらの使用 | |
| JP2008515771A (ja) | 抗グレリン抗体 | |
| CN113637070A (zh) | 抗spike蛋白的抗体或抗原结合片段及其应用 | |
| EP3269735B1 (en) | Anti-sclerostin antibody, antigen binding fragment and medical use thereof | |
| AU2022268305A1 (en) | Methods for treating metabolic diseases by inhibiting myostatin activation | |
| JP2022501319A (ja) | 抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体、それを備える薬学的組成物及びその使用 | |
| US20060269550A1 (en) | Anti-ghrelin fab antibodies | |
| US7479271B2 (en) | Humanized anti-ghrelin antibodies | |
| CN112839672A (zh) | 用于减少脂蛋白a形成以及治疗主动脉瓣硬化和主动脉狭窄的组合物和方法 | |
| TW202317175A (zh) | 用於重量管理及相關代謝病症之療法 | |
| US20230212272A1 (en) | Isolated antigen binding protein and use thereof | |
| US20240254219A1 (en) | Novel wnt agonist antibodies and therapeutic uses thereof | |
| AU2021376241A1 (en) | Novel bifunctional multispecific antagonists capable of inhibiting multiple ligands of tgf-beta family and uses thereof | |
| JP2022523750A (ja) | 抗－ｆｇｆ１９抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20111228 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130307 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130502 |
|
| A072 | Dismissal of procedure [no reply to invitation to correct request for examination] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A072 Effective date: 20130611 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130821 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131121 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131220 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140123 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131217 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140304 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140619 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140919 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20141014 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141022 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141225 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5685774 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |