JP5639736B2 - ポックスウイルスゲノムへの異種遺伝子の組込みのためのベクター - Google Patents
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Description
(a)配列番号1による核酸配列またはその相補鎖;
(b)厳格な条件下で(a)に定義する配列とハイブリダイズする1つの核酸配列;
(c)(a)または(b)に定義される核酸配列のうち少なくとも連続的な30塩基対を含む1つの断片。
(a)前記ベクターを用いて、ホスト細胞を形質導入することと;
(b)上述のホスト細胞をポックスウイルスで感染させることと;
(c)組換え型ポックスウイルスを分離することと
を含む方法。
挿入ベクターの構築
ポックスウイルスゲノムへの組換えに適した配列を得るために、改変されたワクシニアアンカラウイルス(寄託番号V94012707でEuropean Collection of Animal Cell cultures, Salisbury, UKにブタペスト条約により保管された)に由来するDNA断片が、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを使用した通常のPCR法により増幅された。
A27L_1c;5’-AGGCTCGAGTAAGAGCGGCTATGAT-3’, 配列番号3
オリゴヌクレオチドプライマーは、クローニングベクターへの生成した増殖断片のサブクローニングのために、5’端の近くに下線で示された制限酵素HindIII(配列番号2)もしくはXhoI(配列番号3)の認識配列を含んでいる。それにより、1.7kbの特異的に増幅された配列(配列番号1)がpUC19クローニングプラスミド(GenBank Accession No.: X02514)にSalI/HindIIIでサブクローニングされた。生成したプラスミドはpSW1(図2)と名づけられた。
組換え型ウイルスを産生するために、およそ80%コンフルエントの単層培養細胞を有する6ウェルの組織培養プレートが使用された。組換え型MVAを産生するために、ニワトリ胚繊維芽細胞のような許容細胞(permissive cell)が使用された。組換え型WR株ワクシニアウイルスを産生するために、アフリカミドリ猿の細胞(Vero)が使用された。
Claims (18)
- 連続的に5回継代した後にも安定な組込みが得られる、以下からなる群から選択されるポリヌクレオチド:
(a)配列番号1によるポリヌクレオチドまたはその相補鎖;
(b)配列番号1の1063番目の位置におけるEcoRI部位を含む、(a)に定義されるポリヌクレオチドのうち少なくとも連続的な200塩基対を含む1つの断片。 - 請求項1に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 付加的に少なくとも1つの転写制御領域が当該ポリヌクレオチドの中のクローニング部位に導入されている請求項2に記載のベクター。
- 前記転写制御領域がポックスウイルスゲノム由来であるか、またはポックスウイルス由来の転写制御領域のコンセンサス配列である請求項3に記載されたベクター。
- 付加的に少なくとも1つの異種コーディング配列を含み、該異種コーディング配列は請求項3または4に記載された転写制御領域と機能的に関連するものである、請求項2〜4の何れか1項に記載のベクター。
- 2つのORF間の非コーディング領域か、またはATI領域に、付加的に少なくとも1つの異種コーディング配列を含む、請求項2〜5の何れか1項に記載のベクター。
- 前記異種コーディング配列がマーカー遺伝子、治療用遺伝子、ホスト域遺伝子および/または免疫原性抗原決定基のグループから選択される請求項5または6に記載のベクター。
- 1種またはそれ以上のマーカー遺伝子、異種ホスト域遺伝子および/または請求項3〜5に記載の異種の転写制御領域に接している組換え型の配列を含む、請求項3〜7の何れか1項に記載のベクター。
- 請求項3〜8の何れか1項に記載のベクターにより転移された核酸配列をそのゲノム中に含む、組換え型の改変されたワクシニアアンカラ(MVA)ウイルス。
- 改変されたワクシニアアンカラ(MVA)ウイルスゲノムに異種配列を導入する方法であって、
(a)請求項2〜8の何れか1項に記載のベクターを用いて、ホスト細胞を形質導入することと;
(b)上述のホスト細胞をMVAウイルスで感染させることと;
(c)組換え型MVAウイルスを分離することとを含む方法。 - 請求項9に記載の組換え型MVAウイルスを含む標的細胞。
- 請求項2〜8の何れか1項に記載のベクターを含む標的細胞。
- 感染症もしくは増殖性の障害の治療および/または予防のための、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- 感染症もしくは増殖性の障害の治療および/または予防のための、請求項2〜8の何れか1項に記載のベクター。
- 感染症もしくは増殖性の障害の治療および/または予防のための、請求項9に記載の組換え型MVAウイルス。
- 感染症もしくは増殖性の障害の治療および/または予防のための、請求項11または12に記載の標的細胞。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド、請求項2〜8の何れか1項に記載のベクター、請求項9に記載の組換え型MVAウイルス、および/または請求項11または12に記載の標的細胞の使用であって、感染症もしくは増殖性障害の治療および/または予防のための薬物を製造するための使用。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド、請求項2〜8の何れか1項に記載のベクター、請求項9に記載の組換え型MVAウイルス、および/または請求項11または12に記載の標的細胞、並びに薬学的に使用可能な担体および/または希釈剤を含む薬学的組成物。
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