JP5614951B2 - Sco2関連遺伝子導入ショウジョウバエ及びその利用方法 - Google Patents
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Description
SCO2とは、好気呼吸を行うミトコンドリア内に存在する、シトクロムCの働きを活性化する酵素であり、生物のエネルギー産生(ATPの産生)等に関わっている蛋白質である。
SCO2の発現によって、ATPの産生が促進され、逆に発現低下によって、ATP産生量が抑制される。
ショウジョウバエモデルの例として、例えば、ヒトの脳神経細胞の長期生存と神経伝達機能に関わるブラディオン遺伝子を、ショウジョウバエの複眼原基にのみ発現させるように組み込み、ラフ・アイ(rough eye)を生じさせたショウジョウバエモデルが既に開発されている(特許文献1)。
1)飼育が容易で、疾患モデル作製や維持等のコストも安い。
2)多数の個体を一度に取り扱うことができる。
3)世代交代が早く、研究の効率化が可能である。
4)薬剤等のスクリーニング効率が良い。
5)ショウジョウバエの場合には、マウスに比べて、時期・特異的なプロモーターの種類が多い等、遺伝子発現も様々な時期・組織に特化させることができるため、使用できる範囲が広汎である。
その一方で、遺伝子発現量の増減によって、表現型が出易い遺伝子ほど、逆に疾患モデル全身で発現させることによって致死(実験系の崩壊)に至る傾向にあり、明瞭な表現型の獲得と、疾患モデルの生存を両立させることは、必ずしも容易では無い。
現に、これまで、ショウジョウバエどころか、モデル開発例の多いマウスやラットでも、SCO2関連遺伝子を利用した疾患モデルについての報告は無かった。
下記(i)又は(ii)が導入されていることを特徴とするショウジョウバエ。
(i)SCO2と同等の構造及び機能を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド
(ii)内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子をコードするポリヌクレオチド
(i)が、(i−1)又は(i−2)であることを特徴とする、第一の発明に記載のショウジョウバエ。
(i−1)SCO2蛋白質をコードするポリヌクレオチド
(i−2)SCO2蛋白質の1乃至数個のアミノ酸が欠失,置換,付加,及び/又は挿入された蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
(ii)の、内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子が、(ii−1)及び(ii−2)によって形成された二本鎖を含むものであることを特徴とする、第一の発明に記載のショウジョウバエ。
(ii−1)SCO2のmRNAの一部に相当する配列を有するRNA
(ii−2)(ii−1)と二本鎖を形成し得る程度に相補的な配列を有するRNA
SCO2が、ショウジョウバエ由来SCO2であることを特徴とする、第一の発明乃至第三の発明のいずれかに記載のショウジョウバエ。
ショウジョウバエ由来SCO2が、キイロショウジョウバエ由来SCO2であることを特徴とする、第一の発明乃至第四の発明のいずれかに記載のショウジョウバエ。
キイロショウジョウバエ由来SCO2のmRNA前駆体が、配列番号1で表される、CG8885であることを特徴とする、第五の発明に記載のショウジョウバエ。
(ii−1)が、CG8885の転写開始点から数えて600〜964番目の塩基(配列番号3)を含む配列であることを特徴とする、第六の発明に記載のショウジョウバエ。
更に、時期及び/又は組織特異的に発現するプロモーターが導入されていることを特徴とする、第一の発明乃至第七の発明のいずれかに記載のショウジョウバエ。
複眼が形態異常を示していることを特徴とする、第八の発明に記載のショウジョウバエ。
複眼の形態異常が、ラフ・アイであることを特徴とする、第九の発明に記載のショウジョウバエ。
下記(A)と(B)を交配することを特徴とする、第八の発明乃至第十の発明のいずれかに記載のショウジョウバエの作製方法。
(A)下記(i)又は(ii)が導入されていることを特徴とするショウジョウバエ
(i)SCO2と同等の構造及び機能を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド
(ii)内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子をコードするポリヌクレオチド
(B)時期及び/又は組織特異的に、(i)又は(ii)に対する転写調節因子を発現し得るショウジョウバエ
(A)及び(B)が、下記のものであることを特徴とする、第十一の発明に記載のショウジョウバエの作製方法。
(A)(i)又は(ii)の上流に、転写活性化因子GAL4の結合領域であるUAS配列を有するショウジョウバエ
(B)時期及び/又は組織特異的に発現するプロモーターが、Glassであり、その下流にGAL4をコードする配列を有するショウジョウバエ
第八の発明乃至第十の発明のいずれかに記載のショウジョウバエを用いることを特徴とする、SCO2の発現異常に起因する疾患の予防又は治療剤のスクリーニング方法。
第八の発明乃至第十の発明のいずれかに記載のショウジョウバエと、他の遺伝的特性を有するショウジョウバエ株を交配し、その表現型を確認することを特徴とする、複眼形態異常の増強又は抑制遺伝子のスクリーニング方法。
また、時期及び/又は組織特異的に発現するプロモーターを含んでいる本発明の第2世代ショウジョウバエは、時期及び/又は組織特異的に、SCO2の発現を促進又は阻害できるため、「対象となるショウジョウバエが発生時から死亡して実験系が崩壊する」という恐れが無い。
本発明の第2世代ショウジョウバエは、肥満や癌,老化等に関係すると思われるSCO2遺伝子の異常発現を、確認が比較的容易な複眼に置いて発現させたモデルであり、肥満,癌,老化等の「SCO2の発現異常に起因する疾患や症状」の診断,予防,又は治療剤の、初期スクリーニングに用いることができると考えられる。
2)多数の個体を一度に取り扱うことができる。
3)世代交代が早く、研究の効率化が可能である。
4)薬剤等のスクリーニング効率が良い。
5)遺伝子発現も様々な時期・組織に特化させることができるため使用できる範囲が広汎である。
6)卵の状態で、保管・運搬することができるため、系統の維持や広範な利用が容易である。
また、本発明のショウジョウバエは、他の遺伝的性質を有するショウジョウバエの他の株と交配することも可能で、交配により、導入されたSCO2遺伝子及び交配に用いた他のショウジョウバエ株の遺伝子が子孫に伝わり、該子孫にSCO2遺伝子導入という形質及び他の株の遺伝形質を伝えることができる。
尚、本発明の図面及び配列表において表されるものがRNAである場合には、図面及び配列表において「t」と記載されているものを「u」と読み替えるものとする。
本発明のショウジョウバエは、下記(i)又は(ii)が導入されていることを特徴とするショウジョウバエである。
(i)SCO2と同等の構造及び機能を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド
(ii)内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子をコードするポリヌクレオチド
尚、以下では、これらの(i)と(ii)を併せて、「SCO2関連遺伝子」と記載することがある。
本発明の第1世代ショウジョウバエとは、(i)又は(ii)が導入されているが、それらを発現させるためのプロモーターが導入されておらず、(i)や(ii)が発現していないショウジョウバエを意味する。
本発明の(I)SCO2過剰発現型ショウジョウバエに導入されている「(i)SCO2と同等の構造及び機能を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド」としては、下記の(i−1)や(i−2)等が挙げられる。
(i−2)SCO2蛋白質の1乃至数個のアミノ酸が欠失,置換,付加,及び/又は挿入された蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
尚、配列番号2は、SCO2の構造遺伝子の、開始コドン(ATG)が省略されたものであるが、これは、SCO2遺伝子の前方に、後述するFlag遺伝子を連結するためである(Flagに開始コドン有り。)。
従って、Flag遺伝子等を共に用いない場合には、「配列番号2の前に、ATG等の開始コドンを付けたもの」と相補的な配列を用いるのが良い。
ストリンジェントな条件とは、特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件を言い、例えば、J. Sambrookら、Molecular Cloning, A Laboratory Mannual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)(特に11.45節“Conditions for Hybridization of oligonucleotide Probes等)に記載されている条件等が挙げられる。
SCO2遺伝子,すなわち「(i−1)SCO2蛋白質をコードするポリヌクレオチド」は、例えば、「SCO2をコードするmRNA(ショウジョウバエ成虫から回収した全RNAの中から精製)」と「逆転写酵素」によって、cDNAとして作製しても良いが、既知のSCO2配列情報をもとに、人工的に合成することもできる。
また、「(i−2)SCO2蛋白質の1乃至数個のアミノ酸が欠失,置換,付加,及び/又は挿入された蛋白質をコードするポリヌクレオチド」は、(i−1)を遺伝子組換する方法,あるいは、一から人工的に合成する方法等によって、作製することができる。
また、ヒトSCO2遺伝子は、かずさDNA研究所より、例えば「Flexi PID:FXC06740L又はFXC06741(Homo sapiens SCO2 full length open reading frame (ORF) cDNA clone (cDNA clone C22ORF:pGEM.SCO2).)」等のようなcDNAとして分譲を受けることが可能である(http://www.kazusa.or.jp/kop/dsearch/)。
次に、上記で得られた例えばcDNAのようなSCO2遺伝子を、それを鋳型としたPCR法等によって増幅する。
その際、プライマーとして、ショウジョウバエへの導入に用いるプラスミドベクター等に連結できるように、適当な制限酵素部位を有するプライマーを用いるのが好ましい。
SCO2のcDNAは、公知の遺伝子導入方法によって、ショウジョウバエに導入することができるが、プラスミド等のベクターを用いることが好ましい。
また、プラスミド導入後、宿主ゲノムに遺伝子を導入する方法としては、トランスポゾンを利用する方法が、ショウジョウバエにおいて汎用されているため好ましい。
増幅されたcDNAを、上記で用いたプライマーと同じ制限酵素部位を有するプラスミドのような適当なベクターに連結し、組換プラスミドを作製する。
P-エレメントプラスミドとは、トランスポゼースの代わりにSCO2のような外来遺伝子を有する、P-エレメントベクター(トランスポゼースを欠くP因子(ベクターP因子))を意味し、プラスミドの導入対象ショウジョウバエに予め導入されていたトランスポゼースが、このP因子中の30塩基の反復配列を認識し、切断・転移を促す。
white遺伝子を持たないショウジョウバエの複眼は白く、white遺伝子の導入された複眼は、赤くなる。そのため、white遺伝子を持たない(whiteマイナス)突然変異型のショウジョウバエを、本発明におけるSCO2遺伝子の導入対象(宿主)として用い、遺伝子導入操作後、眼の赤いショウジョウバエを選ぶことで、形質転換ショウジョウバエを容易に選択できるからである。
得られた組換プラスミドを精製後、遺伝子導入対象であるショウジョウバエ系統の受精卵に、微量注入する(Spradling, A. C. (1986). Drosophila : a practical approach. Roberts, D. B. (ed.). IRL Press : Oxford, pp175-197. )。
本発明の、「I型」の第1世代ショウジョウバエは、上記のプラスミド等によって、SCO2遺伝子が導入された受精卵から得られた成体も含むが、更にもう一度、SCO2遺伝子が導入されていないショウジョウバエ(例えばyw系等)によって、交配したものが好ましい。
SCO2遺伝子の導入先の染色体をコントロールすることは困難であるが、ショウジョウバエへの遺伝子導入においては、一般に、ある程度の数の導入実験を行えば、一定の確率を持って、各染色体に導入することができる。
また、1系統でも遺伝子導入ショウジョウバエを得ることができれば、pUASTを再転移させることによって、他の染色体に導入することができる。
本発明の(II)SCO2発現抑制型ショウジョウバエに導入されている「(ii)内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子をコードするポリヌクレオチド」の、「内因性SCO2遺伝子の発現を阻害するRNA分子」としては、いわゆるアンチセンスRNAや、RNA干渉作用を有する遺伝子(RNAi分子)等が挙げられるが、RNAi分子が、SCO2発現抑制効率が高い点で好ましい。
RNAi分子としては、一般に、(ア)miRNA(microRNA)と呼ばれる短い一本鎖RNAを生じる、短い二本鎖RNA分子と、(イ)ダイサーによって最終的に切断されて、複数のmiRNAを生じる、ヘアピンループ型の分子(shRNA:short hairpin RNA)があるが、その中でもshRNAが、複数のmiRNAを生じるため、発現抑制効率が高いという理由で好ましい。
(ii−2)(ii−1)と二本鎖を形成し得る程度に相補的な配列を有するRNA
配列番号3は、配列番号1(SCO2mRNA前駆体)の、転写開始位置から数えて600〜964番目の365塩基からなる配列である。
このようなmiRNAは、合成したものを、細胞へのトランスフェクトや、胚へのマイクロインジェクト等によって、対象ショウジョウバエに導入することができる。
shRNAの場合には、導入プラスミド中のDNAの時点では(ii−1),(ii−2)は、二本鎖プラスミドのうちの一本鎖中に、ヘアピンループのループをコードする配列を挟んで、逆向きに連結されており((ii−1),(ii−2)は、それぞれ相補対を有する二本鎖としてプラスミド中に連結されているため、「二本鎖」として見た場合には、(ii−1),(ii−2)は、互いにインバートリピート(IR)配列を形成している。)、RNAへの転写後に、互いに相補的に結合することで、へアピンループ構造を形成している。
「(II)SCO2発現抑制型ショウジョウバエ」に、RNAiを導入する具体的な手段としては、例えば、RNAi分子を導入するために開発された、pWIZプラスミドベクター(RNAi, A Guide to Gene Silencing, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2003, chapter17:RNAi Applications in Drosophila melanogaster, Richard W. Carthew, 及び図13参照)等を用いる方法が挙げられる。
従って、pWIZプラスミドを用いた場合も、pUASTプラスミドを用いた「I型」ショウジョウバエの場合と同様に、
第1世代のショウジョウバエへの遺伝子導入でのトランスポゾンの利用,及び
第2世代のショウジョウバエでのGAL4-UAS標的発現系の利用
whiteマーカーによる、形質転換体の選別
が可能であり、それによって、本発明の「II型」についても、第1世代及び、後述する本発明の第2世代のショウジョウバエを作製することができる。
上記のようにして得られた本発明の第1世代のショウジョウバエ(「I型」及び「II型」)は、第2世代のショウジョウバエ作製の材料としての意義を有する。この第1世代を維持・保管することで、種々の第2世代を適宜作製することができる。
このショウジョウバエは、他の株と交配することも可能で、交配により導入されたSCO2遺伝子及び交配に用いた他の株の遺伝子が子孫に伝わり、該子孫にSCO2遺伝子導入という形質及び他の株の遺伝形質を伝えることができる。
このようにして得られた本発明のショウジョウバエ株は、卵の状態で保存・送付が可能である。
本発明の第2世代ショウジョウバエとは、(i)又は(ii)及び、それらを発現させるためのプロモーターが導入されており、(i)や(ii)が時期及び/又は組織特異的に発現しているショウジョウバエを意味する。
時期及び/又は組織特異的にSCO2を発現するショウジョウバエ(本発明の第2世代ショウジョウバエ)は、例えば図1で表されるように、上記の様にして得られた本発明の第1世代ショウジョウバエと、時期及び/又は組織特異的に発現するプロモーターが導入されている別のショウジョウバエとの交配によって、自由に作製することができる。
(Y)目的遺伝子がGAL4結合配列(UAS)の下流に導入されたショウジョウバエ
本発明の第2世代ショウジョウバエは、発生時より、SCO2発現が制御されることによって、複眼に異常(ラフ・アイ)を生じている。
このショウジョウバエは、他の株と交配することも可能で、交配により導入されたSCO2関連遺伝子及び交配に用いた他の株の遺伝子が子孫に伝わり、該子孫にSCO2関連遺伝子導入という形質及び他の株の遺伝形質を伝えることができる。
このようにして得られた本発明のショウジョウバエ株は、卵の状態で保存・送付が可能である。
本発明の第3世代ショウジョウバエとは、本発明の第2世代ショウジョウバエと、他の遺伝的特性を有するショウジョウバエ株を交配して得られたショウジョウバエである。
本発明の第2世代ショウジョウバエを用いることによって、SCO2の発現異常に起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングすることができる。
これによってスクリーニングされた物質は、癌,肥満,老化等の、SCO2が関連すると考えられている疾患や症状等の予防又は治療剤となる可能性が高く、これらの予防又は治療剤の、マウスやヒトで試す前の初期スクリーニング(特に、HTS(ハイ・スループット・スクリーニング)等)に、好適に用いることができる。
以下の方法で、SCO2の過剰発現によってもたらされるラフ・アイ(rough eye)表現型を修飾する遺伝子のスクリーニングを行うことができる。
そして、この第3世代ショウジョウバエの複眼を観察することで、複眼の形態異常を抑圧または、増強する原因となる欠失染色体のスクリーニングを行うことによって、SCO2に起因する疾患の発症又は抑制に関連する遺伝子の候補を選別することができる。
即ち、上記のP-エレメント挿入致死変異系統で表現型の抑圧または、増強の見られるものが得られれば、P-エレメントプラスミドレスキュー法により、P-エレメント挿入によって不活化されている遺伝子をクローン化する。クローン化された遺伝子の部分塩基配列を決定し、データベース検索を行ってその遺伝子産物を同定するとともに、定法を用いてそれらのヒトホモログを同定する。また得られたP-エレメント挿入致死系統を用いて、既知の染色体高次構造制御遺伝子,細胞周期関連遺伝子,アポトーシス関連遺伝子等の変異系統との、遺伝学的相互作用を解析する。
被験ショウジョウバエ成虫の複眼を、顕微鏡で観察し、その形態異常を確認することにより、SCO2発現異常を確認することができる。
SCO2が過剰に発現した場合と、発現が抑制された場合のいずれも、複眼原基の形態異常(ラフ・アイ表現型)が発生する。
以下の方法で、実施例1-(1),(2)〜実施例9-(1),(2)のショウジョウバエを作製した。
尚、(1)は第1世代,(2)は第2世代を表す。
キイロショウジョウバエ成虫を液体窒素で凍結させた後、トリゾール溶液中でホモジナイズし、高速遠心により水層と有機層に分離した後、水層に含まれる全RNAをイソプロパノールに加え沈殿させて回収した。
この全RNAをオリゴ(dT)溶液に混釈し、スピンカラムにかけてmRNA(即ち、poly(A)を有するRNA)を精製した。
次に、mRNAから逆転写酵素の存在下でcDNAを合成した。合成したcDNAのライブラリーから、SCO2のcDNAと相補的な配列を持つ適当な制限酵素部位(BglII-KpnI)を有するプライマーを用いて、配列番号2(mRNA配列)で表されるSCO2遺伝子コード領域(開始コドンATGを省略したもの)と相補的な配列を、PCR法にて増幅した。
Flag遺伝子及び上記で増幅されたcDNAを、pUASTベクター(Brand, A. H. and Perrimon, N. (1993). Development, 118, 401-415.) の、転写活性化因子GAL4結合配列(UAS)を持つプロモーターの下流に存在する、BglII-KpnI切断部位に連結し、組換プラスミドDNA(pUAST-Flag-SCO2)を得た(図12)。
具体的には、「Flag遺伝子」の後に、制限酵素サイトである「BglII」を挟んで、「配列番号2と相補的な配列」を連結したものを、BglII-KpnI切断部位に導入した。
尚、Flag遺伝子は、ショウジョウバエ中で実際にSCO2蛋白質が発現していることを、市販のFlag抗体で簡便に確認できるよう、導入している。
これを大腸菌に遺伝子導入し、形質転換後増殖させた。
増殖させたpUAST-Flag-SCO2組換プラスミド(表1のpUAS-Flag-SCO2 Pエレメントプラスミド)を、キアゲンカラムで精製後、white遺伝子マイナスでかつ、内因性のP-エレメントを持たないがトランスポゼース遺伝子を持つショウジョウバエ系統(DGRCのΔ2,3系統:DGRC number 106416)の受精卵に微量注入した(Spradling, A. C. (1986). Drosophila : a practical approach. Roberts, D. B. (ed.). IRL Press : Oxford, pp175-197. )。
上記操作によって、受精卵中の将来生殖細胞になる細胞のゲノムに、外来遺伝子(Flag-SCO2)を含むP-エレメントを組み込ませることができた。
尚、表1中の株番号は、本発明者等が独自に設定した系統番号である。
配列番号3と相補的なSCO2cDNA(SCO2mRNA 前駆体の600番目の塩基から964番目の塩基に対応する領域)は、まずpWIZベクターの、「white intron 2」の後方部位に存在するNheI-BamHI切断部位に連結し、組み換えプラスミドDNA(pWIZ-SCO2)を得た。
これを大腸菌に遺伝子導入し、形質転換後増殖させた。次にpWIZ-SCO2DNAの「white intron2」の前方部位に存在するBglII-AvrII切断部位に後方に連結した二本鎖DNAと同じ二本鎖SCO2cDNAを逆向きに連結してインバートリピート(IR)配列を形成し、組み換えプラスミドDNA(pWIZ-SCO2IR)を得た(図13)。
尚、IR配列は、一本鎖として見た場合には、前方と後方とでは、互いに相補的な配列が逆向きに連結されているため、転写されたmRNAは、ヘアピンループを形成する。
尚、表2中の株番号は、本発明者等が独自に設定した系統番号である。
本発明の第1世代ショウジョウバエは、上記の本発明の第2世代ショウジョウバエを容易に作製できる材料として有用である。
Claims (10)
- 下記(i−1)又は(i−2)のポリヌクレオチド,あるいは(ii−1)及び(ii−2)を含むRNAi分子をコードするポリヌクレオチドが導入されていることを特徴とするショウジョウバエ。
(i−1)SCO2蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
(i−2)SCO2蛋白質の1乃至数個のアミノ酸が欠失,置換,付加,及び/又は挿入された蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
(ii−1)配列番号3で表されるRNA。
(ii−2)(ii−1)と二本鎖を形成し得る程度に相補的な配列を有するRNA。 - SCO2が、ショウジョウバエ由来SCO2であることを特徴とする、請求項1記載のショウジョウバエ。
- ショウジョウバエ由来SCO2が、キイロショウジョウバエ由来SCO2であることを特徴とする、請求項1又は2に記載のショウジョウバエ。
- キイロショウジョウバエ由来SCO2のmRNA前駆体が、配列番号1で表される、CG8885であることを特徴とする、請求項3記載のショウジョウバエ。
- 導入されているポリヌクレオチドが、更に下記の配列を含むものであることを特徴とする、請求項1乃至4のいずれかに記載のショウジョウバエ。
(a)(i−1)又は(i−2)のポリヌクレオチド,あるいは(ii−1)及び(ii−2)を含むRNAi分子をコードするポリヌクレオチドの上流に、転写活性化因子GAL4の結合領域であるUAS配列を有する。
(b)プロモーターとしてのGlass配列,及びその下流に、転写活性化因子GAL4をコードする配列を有する。 - 複眼が形態異常を示していることを特徴とする、請求項5記載のショウジョウバエ。
- 複眼の形態異常が、ラフ・アイであることを特徴とする、請求項6記載のショウジョウバエ。
- 下記(A)と(B)を交配することを特徴とする、請求項5乃至7のいずれかに記載のショウジョウバエの作製方法。
(A)上流に転写活性化因子GAL4の結合領域であるUAS配列を有する、
下記(i−1)又は(i−2)のポリヌクレオチド,あるいは(ii−1)及び(ii−2)を含むRNAi分子をコードするポリヌクレオチドが導入されていることを特徴とするショウジョウバエ。
(i−1)SCO2蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
(i−2)SCO2蛋白質の1乃至数個のアミノ酸が欠失,置換,付加,及び/又は挿入された蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
(ii−1)配列番号3で表されるRNA。
(ii−2)(ii−1)と二本鎖を形成し得る程度に相補的な配列を有するRNA。
(B)プロモーターとしてのGlass配列,及びその下流に、転写活性化因子GAL4をコードする配列を有するポリヌクレオチドが導入されたショウジョウバエ。 - 請求項8に記載のショウジョウバエを用いることを特徴とする、SCO2の発現異常に起因する疾患の予防又は治療剤のスクリーニング方法。
- 請求項8に記載のショウジョウバエと、他の遺伝的特性を有するショウジョウバエ株を交配し、その表現型を確認することを特徴とする、複眼形態異常の増強又は抑制遺伝子のスクリーニング方法。
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