JP5600170B2 - Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 - Google Patents
Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5600170B2 JP5600170B2 JP2012525536A JP2012525536A JP5600170B2 JP 5600170 B2 JP5600170 B2 JP 5600170B2 JP 2012525536 A JP2012525536 A JP 2012525536A JP 2012525536 A JP2012525536 A JP 2012525536A JP 5600170 B2 JP5600170 B2 JP 5600170B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- nucleic acid
- dna
- protein
- immunogenic composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/445—Plasmodium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/023—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a poxvirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/04—Uses of viruses as vector in vivo
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
同定配列の解析は、効率的なタンパク質発現プラットフォームを必要とする。この制限は、これまで、抗マラリアワクチンの開発の問題であった。この制限を回避するため、組み換えタンパク質の発現とスクリーニングとを平行して行うことのできる改変コムギ胚芽無細胞系を用いた。生体情報学的解析、並びに、スポロゾイト及び肝臓段階寄生虫のトランスクリプトーム及びプロテオーム発現データベースに基づき、150種類の推定P.falciparum前赤血球段階遺伝子からなるパネルを開発した。このリストにある遺伝子の多くは、機能未知の仮想タンパク質をコードしている。このパネルの遺伝子のいくつかは、照射スポロゾイトワクチン(ISV)接種ボランティアから得られた血清への免疫反応から明らかなように、ワクチン抗原として機能することができるだろうとの仮説を立てた。その他の発現系では、さらに必要な下流の分析及び解析が困難であることが明らかとなっていた。そこで、発現を改善するため、改変コムギ胚芽無細胞発現系を利用した。この系は、評価クローンのうち約90%での発現を可能とした。さらなる発現及び解析のために選択された遺伝子を、前赤血球段階でのそれらの発現により、プロテオーム及び/又はトランスクリプトームデータセットに基づき、同定した。合計155種類のP.falciparum遺伝子を用い、GST融合タンパク質及び6xHis融合タンパク質として、タンパク質発現DNAコンストラクトを作成した。GST融合タンパク質及び6xHis融合タンパク質には、それぞれ、pE−E01−GST−TEV−GW及びpEU−E0l−His−TEV−GWプラスミドを用いた(Tsuboi等、2008年)。
組み換えタンパク質の発現は、コムギ胚芽無細胞系を用いて行った。インビトロの翻訳反応のテンプレートとして用いるための遺伝子特異的RNAを2つの規模で合成した。
a)小規模
RNAseフリーのPCR DNAを作成し、その後、それをテンプレートとして翻訳反応を行うことで、全てのクローンについて、小規模のバッチ反応を行った。各遺伝子を、pEU−E01特異的プライマーとアダプターとを用い、プラスミドミニプレップDNAからPCRで増幅した。用いたプライマーは、
SP6:5’AGAGCGCGCAAGACGCGCAGGACCG3’;
E01:5’AGAGAGAGAGAGAACAACAACACAAACA3’
である。翻訳反応は、PCR DNAテンプレート2μl、dNTPs25mM、RNAse阻害剤1U/μl、SP6ポリメラーゼ1.2U/μl、及び、転写バッファーを用い、37℃、6時間の条件で行った。遺伝子特異的転写産物のサイズはアガロースゲル電気泳動により確認した。RNAは、エタノール沈殿により不要な転写反応試薬を取り除いた後、RNAseフリーの水に溶かし、タンパク質発現反応に用いた。
b)大規模
大規模タンパク質発現に用いるRNAの合成は、RNAseフリープラスミドDNAをテンプレートとして用い行った。該プラスミドDNAは、標準的なDNA単離キットにより精製し、転写反応液に直接添加した。具体的には、プラスミドDNA25μgを、上記の転写バッファー中で、NTPs2.5mM、RNAsin1U/μl、SP6ポリメラーゼ1U/μlと混和した。合計反応液量は250μlであり、37℃で6時間インキュベートした。翻訳反応を準備する前に、発現RNA全ての質をアガロースゲル電気泳動により分析した。
a)小規模
文献(Sawasaki等、2002年b、FEBS Lett、第514巻、102−105頁)に記載のプロトコルを用いて、96ウェルのU底プレート内に、バッチ反応を準備した。簡単に説明すると、反応は、基質混合物(クレアチンキナーゼ0.45mg/ml、RNasin 20U、Hepes/KOH pH7.8 24mM、KOAc 100mM、Mg(OAc) 2.7mM、スペルミジン0.4mM、DTT 2.5mM、ATP 1.2mM、GTP 0.25mM、クレアチンホスフェート16mM、NaN3 0.005%、及び、[14C]ロイシン(2μCi/ml)を含有する各アミノ酸 0.3mM)40μlを、各RNA2μl及びOD240(終濃度ではOD60)のコムギ胚芽抽出物8μlを含む翻訳混合物10μlに重層することで組み立てた。抽出物はCFSciences(日本、横浜)から購入した。しかし、他の同種の供給源を利用することもできる。プレートを、パラフィルムで覆い、26℃で16時間インキュベートした。
b)大規模
大規模量の組み換えタンパク質を、コムギ麦芽抽出物の製造元(即ち、CFSciences、日本、横浜)の推奨する一般的ガイドラインに従って合成した。各タンパク質の個別の必要量に応じて、可変数の反応を、平底6ウェルプレートを用いて準備した。各翻訳反応は、2種の混合物の二重層を含んでいる。下層は、転写RNAとコムギ胚芽抽出物とを合計で500μlを含み、上層は、透析バッファー5.5mlからなる。簡単に説明すると、下層の反応混合物は、RNA反応液250μl、クレアチンキナーゼ40mg/ml、及び、コムギ胚芽抽出物120OD/ml(WGE OD240、CFSciences、日本、横浜)を混和することで調整した。この下層混合物を、6ウェルプレートに移し、二重層の反応液を形成するために、慎重に、製造元(CFSciences、日本、横浜)の提供するSub−admixに重層した。プレートを、パラフィルムで覆い、室温で一晩翻訳を行った。
GSTタグ組み換えタンパク質は、文献(Tsuboi等、2008年、Infect.Immun.、第76巻、1702−1708頁)に記載の手順を用いて、アフィニティー精製した。翻訳反応の完了後、タンパク質を含有する混合物において、タバコエッチウィルスプロテアーゼ(AcTEV(登録商標)、Invitrogen、米国カリフォルニア州カールズバッド)20U及びDTT1mMでタンパク質を溶出させた後に、グルタチオンセファロース4B樹脂(GEヘルスケア、米国ニュージャージー州ピスカタウェイ)に吸収させた。溶出させたタンパク質は、クマシー・ブルー又は銀染色により染色したSDS−PAGEにより確認した。精製したタンパク質の濃度は、ブラッドフォードタンパク質分析キット及び分光光度計の両方で決定し、μg/ml単位で示した。
(間接蛍光抗体アッセイ法(IFA))
全種のタンパク質で接種を行ったマウス及びウサギの両方から採取した血清について、スポロゾイト段階、4日齢及び6日齢赤血球外段階、並びに、無性及び有性赤血球段階のP.falciparumへの免疫応答性を試験した。スポロゾイト段階及び赤血球段階に対する血清の試験のためのIFAプロトコルは、Aguiar等、2001年、Vaccine、第20巻、275−280頁の記載に従った。
Plasmodium抗原発現の電顕的局在を免疫電子顕微鏡法により調べた。簡単に説明すると、赤血球細胞に感染させたP.falciparum、及び、Anopheles stephensiに感染させた唾液腺P.falciparumを、1%のパラホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドを含むPBS中、室温、24時間、固定した。LR−White(登録商標)樹脂(Polyscience社、米国ペンシルベニア州ウォリントン)に埋め込んだ超薄切片を、切断しニッケル格子上に配置した。格子上の切片は、新鮮な飽和メタ過ヨウ素酸ナトリウムで5分間インキュベートした後、脱イオン水で3回洗い、エッチングした。格子は、自由アルデヒド基が一次抗体に結合しないように、0.1Mグリシンを含有するホスフェートバッファーで20分間クエンチした。格子は1%BSA、5%フィッシュゼラチンのPBS中で30分間インキュベートしてブロックした。
組み換えタンパク質を、2種の方法を用いたウェスタンブロッティングで分析した。2種の方法を簡単にまとめると以下のとおりである。
a)ハイスループット発現用に、SDS−PAGEにより[4C]ロイシンラベルタンパク質を3つの分画、全量2μlの翻訳反応液(T)、96ウェルプレートを遠心した後の2μlの上澄み(S)分画、そして、最後に、沈殿(P)をサンプルバッファーに再懸濁し分離した沈殿分画、に分離した。組み換えタンパク質は、画像分析器を用いてオートラジオグラフィーにより同定した。
b)精製した組み換えタンパク質を、通常のウェスタンブロットのプロトコルに従ってスクリーニングした。各タンパク質10μgを、予め成型しておいた4−20%勾配のSDSポリアクリルアミドゲル上で分離し、PVDF膜に電気移動させた。タンパク質又はヒト免疫血清で免疫付与したウサギ抗血清の1:500希釈物でウェスタンブロットした。2次抗体として、ペルオキシダーゼ結合ヒツジ抗ウサギ又はヒトIgG抗体を、1:10000の希釈率で用いた。次に、反応を、製造元の指示に従い、ELC−Plus(登録商標)(General Electric Healthcare、米国ニュージャージー州ピスカタウェイ)ウェスタンブロット検出システムを用いて進めた。
ISV接種ボランティアから採取したヒト血清を1:100の希釈率で試験し、抗原特異的反応性を、実施例1に記載したように小規模及び大規模の両方の方法で発現した組み換えタンパク質を用いたELISAにより測定した。ネガティブ(GST及びコムギ胚芽抽出物)及びポジティブ(CSP及びSSP2/Trap)コントロールのタンパク質も、同様の規模で発現させた。Immunolon II(登録商標)ELISAプレート(Dynatech Laboratory社、米国バージニア州シャンティイー)に2〜5μlの組み換えタンパク質及びコムギ胚芽抽出物を含有するPBSを塗布し、室温で一晩放置した。ウェルを、0.05%Tween20(ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート)を含有するPBS(洗浄バッファー)で3回洗い、5%脱脂粉乳PBS溶液100μl(ブロッキングバッファー)で、4℃、2時間、ブロックした。3回の洗浄の後、ウェルを被験対象のヒト血清の1:100希釈物50μlで2時間インキュベートした。ウェルを、再び3回洗浄し、ペルオキシダーゼでラベルしたヒツジ抗ヒトIgG(KPL)で1時間インキュベートした。3回の洗浄後、ウェルを、ABTS基質[2,2’−アジノ−ジ−(3エチルベンゾチアゾリン スルホネート]及びH2O2を含有する溶液100μlで20分間インキュベートした。呈色反応は、マイクロELISA自動読み取り機中OD410nmで測定した。ELISAデータは、被験対象の血清希釈物毎のOD読み取り値の平均として表した。これらのヒト血清中のスポロゾイト特異的抗体は、前述のとおり、間接蛍光抗体試験(IFAT)により評価した。結果は、終点希釈率(蛍光がポジティブであると記録された血清希釈率のうち最後のもの)で示した。
マルチスクリーンMAIPS4510(登録商標)プレート(Millipore、米国マサチューセッツ州ビルリカ)に、抗ヒトINFγ mAb 1−D1K(Mabtech、米国オハイオ州シンシナティ、より購入)15μg/mlを含有する殺菌済みカーボネート/バイカーボネートバッファー100μg/ウェルを塗布し、4℃で一晩放置した。プレートを、25mMのHEPESバッファー及びL−グルタミン酸を含有するRPMI培地100μl/ウェルで5回洗浄した。
表1に、22種類の遺伝子の発現及び反応性の概要を示す。表1のタンパク質の重要な点は、これらがIVSを接種されたボランティアから採取したヒト抗体及び/又はT細胞により認識されるという点である。そこで、マラリアスポロゾイトに対する生来の免疫応答の範疇で認識されることから、これらのタンパク質はマラリアに対する免疫を付与する際に価値があるものと考えられる。
表1に列記したP.falciparum遺伝子にオルソロガスなP.yoelii遺伝子について、マウスを攻撃接種から予防する能力を評価した。予防効果研究のため、CD1マウスに、前脛骨筋での筋肉注射で、100μlのワクチン(各脚で50μl)を注射した。DNAワクチンベクターは、1×リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で調整し、ワクチン接種に適した濃度まで1×PBSで希釈した。ワクシニアワクチンベクターは、1mM Tris(9.0)で調整し、ワクチン接種に適した濃度まで1×PBSで希釈した。マウスへの攻撃接種は300匹のP.yoelii(17XNL)スポロゾイトを尾の血管に静脈注射することで行った。スポロゾイトは、感染蚊の唾液腺から手作業で摘出し、攻撃接種のために5%の正常マウス血清を含有するM199培地で希釈した。
P.yoeliiの感染予防データから、オルソロガスなP.falciparum遺伝子を同定し、さらに、それらの細胞性免疫を付与する能力を評価した。図3に示すのは、PY3424に対するP.falciparumオルソログPF106をT細胞応答誘導のための抗原として利用した場合の結果を、ELISpotアッセイ法におけるPBMCでのIFN−γ誘導能により明らかにしたものである。結果はスポット形成細胞(SPC)/100万で示した。
この実施例は、表2の抗原の1つ以上又は該抗原をコードする核酸をワクチン製剤に組み込むことによる、新規抗原をコードする組み換え遺伝子の理論的な使用例を例示する。表2の抗原の免疫原性断片又は抗原の誘導体を代わりに利用することもできる。抗原はDNAワクチンの成分として発現することもできるしその他のプラットフォーム系の成分として発現することもできると考えられる。考えられる発現系の例としては、これらに限定されるものではないが、複製性のベクターあるいは非複製性のベクターを含むウィルス系などが挙げられる。考えられるウィルスベクターの例としては、アデノウィルス、アルファウィルス、ポックスウイルス、サイトメガロウィルス、イヌジステンパーウィルス、及び、黄熱病ウィルスが挙げられる。抗原は、単一又は複数プロモーターに由来する単一抗原又は複数抗原発現システムのいずれかであるDNA又はその他のワクチン発現系のインサートとして組み込むことができる。
[付記1]
1種以上の単離ポリペプチド及び薬理学的に許容可能な担体からなり、
前記単離ポリペプチドは、配列番号2、4、6、8、10、12及び14、並びに、それらの免疫原性誘導体からなる群より選択されるアミノ酸配列を備えることを特徴とする免疫原性組成物。
[付記2]
1種以上のポリペプチドをコードする1種以上の単離核酸分子からなり、
前記ポリペプチドは、配列番号1、3、5、7、9、11及び13からなる群より選択される核酸配列によりコードされていることを特徴とする免疫原性組成物。
[付記3]
前記ポリペプチドはHLAクラスIエピトープを含む、付記1に記載の免疫原性組成物。
[付記4]
前記核酸配列はHLAクラスIエピトープをコードする1種以上の領域を含む、付記2に記載の免疫原性組成物。
[付記5]
前記核酸配列及び前記ポリペプチドは、DNAプラスミド又はウィルス発現系により、挿入及び発現され、
このとき、前記ウィルス発現系は、複製性又は非複製性である、
付記2に記載の免疫原性組成物。
[付記6]
前記ウィルス発現系は、アルファウィルスレプリコン、アデノウィルス、ポックスウィルス、アデノ随伴ウィルス、サイトメガロウィルス、イヌジステンパーウィルス、黄熱病ウィルス、及び、レトロウィルスからなる群より選択される、付記5に記載の免疫原性組成物。
[付記7]
単離マラリアポリペプチドをコードしており、適切な発現ベクターに挿入されている1種以上の単離核酸分子からなる組成物を哺乳動物に投与することを含み、
前記単離核酸分子は付記2に記載されたものであることを特徴とする哺乳動物においてマラリアに対する免疫応答を誘導する方法。
[付記8]
前記適切な発現ベクターは、DNAプラスミド、あるいは、複製性又は非複製性ウィルスベクターである、付記7に記載の方法。
[付記9]
前記単離核酸分子のエンコードはHLAクラスIエピトープを含む、付記7に記載の方法。
[付記10]
1回以上の初回免疫付与及び1回以上の追加免疫付与をさらに含む方法であって、
前記初回免疫付与は、付記1に記載の1種以上のマラリアポリペプチドからなり、又は、適切な発現ベクターに挿入された付記2に記載の1種以上の前記単離核酸分子からなる組成物からなり、
前記追加免疫付与は、付記1に記載のマラリアペプチドからなり、又は、適切な発現ベクターに挿入された付記2に記載の1種以上の単離核酸分子からなる組成物からなる、付記7に記載の方法。
[付記11]
前記適切な発現ベクターは、DNAプラスミド、アルファウィルスレプリコン、アデノウィルス、ポックスウィルス、アデノ随伴ウィルス、サイトメガロウィルス、イヌジステンパーウィルス、黄熱病ウィルス、及び、レトロウィルスからなる群より選択される、付記7に記載の方法。
[付記12]
前記適切な発現ベクターは、DNAプラスミド、アルファウィルスレプリコン、アデノウィルス、ポックスウィルス、アデノ随伴ウィルス、サイトメガロウィルス、イヌジステンパーウィルス、黄熱病ウィルス、及び、レトロウィルスからなる群より選択される、付記10に記載の方法。
[付記13]
前記初回免疫付与のベクターはアルファウィルスベクターであり、且つ、前記追加免疫付与のベクターは非アルファウィルスベクターである、付記10に記載の方法。
[付記14]
前記初回免疫付与は、DNAプラスミド又はアデノウィルスである発現ベクターからなり、
前記追加免疫付与は、アデノウィルス、前記初回アデノウィルスとは異種のアデノウィルス、ポックスウィルス、及び、付記1に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、付記10に記載の方法。
[付記15]
アルファウィルスレプリコンのプリパレーションは、RNAレプリコン、DNAレプリコン、及び、アルファウィルスレプリコン粒子からなる群より選択される、付記12に記載の方法。
[付記16]
前記アルファウィルスは、ベネズエラ馬脳炎ウィルス、セムリキ森林ウィルス、及び、シンドビスウィルスからなる群より選択される、付記12に記載の方法。
[付記17]
前記非アルファウィルスのウィルス発現系は、ポックスウィルス、アデノウィルス、アデノ随伴ウィルス、及び、レトロウィルスからなる群より選択される、付記13に記載の方法。
[付記18]
前記ポックスウィルスは、牛痘、カナリア痘、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ、又は、鶏痘からなる群より選択される、付記17に記載の方法。
本出願は、2009年11月5日に出願された米国特許仮出願第61/272,809号の利益を主張するものである。当該仮出願を参照して本願明細書に取り込む。
Claims (8)
- 単離ポリペプチド及び薬理学的に許容可能な担体を含み、
前記単離ポリペプチドは、配列番号2、6、及び10のアミノ酸配列を備えるポリペプチドを含むことを特徴とする免疫原性組成物。 - ポリペプチドをコードする単離核酸分子を含み、
前記ポリペプチドは、配列番号1、5、及び9の核酸配列によりコードされているポリペプチドを含むことを特徴とする免疫原性組成物。 - 前記ポリペプチドはHLAクラスIエピトープを含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 配列番号3、7、11、及び、13からなる群より選択される核酸配列によってそれぞれコードされる配列番号4、8、12、及び、14からなる群より選択される少なくとも1つのポリペプチドをさらに含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列はHLAクラスIエピトープをコードする1種以上の領域を含む、請求項2に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列及び前記ポリペプチドは、DNAプラスミド又はウィルス発現系により、挿入及び発現され、
このとき、前記ウィルス発現系は、複製性又は非複製性である、
請求項2に記載の免疫原性組成物。 - 前記ウィルス発現系は、アルファウィルスレプリコン、アデノウィルス、ポックスウィルス、アデノ随伴ウィルス、サイトメガロウィルス、イヌジステンパーウィルス、黄熱病ウィルス、及び、レトロウィルスからなる群より選択される、請求項6に記載の免疫原性組成物。
- 1回以上の初回免疫付与及び1回以上の追加免疫付与をさらに含む方法であって、
前記初回免疫付与は、請求項1に記載のポリペプチドを含み、又は、適切な発現ベクターに挿入された請求項2に記載の前記単離核酸分子からなる組成物を含み、
前記追加免疫付与は、請求項1に記載のポリペプチドを含み、又は、適切な発現ベクターに挿入された請求項2に記載の単離核酸分子からなる組成物を含む、方法に用いるための、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US27280909P | 2009-11-05 | 2009-11-05 | |
US61/272,809 | 2009-11-05 | ||
US12/938,448 | 2010-11-03 | ||
PCT/US2010/002886 WO2011056216A1 (en) | 2009-11-05 | 2010-11-03 | Plasmodium falciparum sporozoite and liver stage antigens |
US12/938,448 US20110104195A1 (en) | 2009-11-05 | 2010-11-03 | Plasmodium falciparum sporozoite and liver stage antigens |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014047538A Division JP5844403B2 (ja) | 2009-11-05 | 2014-03-11 | Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013502417A JP2013502417A (ja) | 2013-01-24 |
JP5600170B2 true JP5600170B2 (ja) | 2014-10-01 |
Family
ID=43925684
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012525536A Active JP5600170B2 (ja) | 2009-11-05 | 2010-11-03 | Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 |
JP2014047538A Active JP5844403B2 (ja) | 2009-11-05 | 2014-03-11 | Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014047538A Active JP5844403B2 (ja) | 2009-11-05 | 2014-03-11 | Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20110104195A1 (ja) |
EP (2) | EP2451478A4 (ja) |
JP (2) | JP5600170B2 (ja) |
AU (1) | AU2010315868B2 (ja) |
CA (2) | CA3002946C (ja) |
WO (1) | WO2011056216A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013209291A (ja) * | 2010-07-21 | 2013-10-10 | Cellfree Sciences Co Ltd | マラリアワクチン |
US20210260176A1 (en) * | 2017-03-30 | 2021-08-26 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods and Compositions for Vaccinating Against Malaria |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9340577B2 (en) * | 1992-08-07 | 2016-05-17 | Epimmune Inc. | HLA binding motifs and peptides and their uses |
GB9616351D0 (en) * | 1996-08-02 | 1996-09-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
PL349861A1 (en) * | 1999-02-18 | 2002-09-23 | Rmf Dictagene Sa | Malaria vaccine |
EP1544211A1 (en) * | 2003-12-15 | 2005-06-22 | Institut Pasteur | LSA-5 pre-erythrocytic stage antigen of plasmodium falciparum, immunogenic composition comprising said antigen, and vaccines against malaria |
WO2006088492A2 (en) * | 2004-07-01 | 2006-08-24 | The Regents Of The University Of Califorrnia | High throughput proteomics |
US20080260763A1 (en) * | 2004-07-01 | 2008-10-23 | The Regents Of The University Of California | High Throughput Proteomics |
EP2264058A3 (en) * | 2005-09-30 | 2011-03-23 | Seattle Biomedical Research | Plasmodium liver stage antigens |
US8026354B2 (en) * | 2005-11-23 | 2011-09-27 | Institut Pasteur | Recombinant plasmodium falciparum merozoite surface proteins 4 and 5 and their use |
KR20090024292A (ko) * | 2006-06-28 | 2009-03-06 | 스태튼스 세룸 인스티튜트 | 단백질 단편 또는 펩타이드 혼합물로서 전달되는 항원을 가진 백신접종에 의해 준우성 항원결정기를 포함하는 t세포 레퍼토리 확장 |
CA2675022A1 (en) | 2007-01-09 | 2008-07-17 | Genvec, Inc. | Adenoviral vector-based malaria vaccines |
GB0706914D0 (en) * | 2007-04-10 | 2007-05-16 | Isis Innovation | Novel adenovirus vectors |
EP2190470B1 (en) * | 2007-08-13 | 2017-12-13 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Vaccines |
-
2010
- 2010-11-03 EP EP10828659.2A patent/EP2451478A4/en not_active Ceased
- 2010-11-03 US US12/938,448 patent/US20110104195A1/en not_active Abandoned
- 2010-11-03 JP JP2012525536A patent/JP5600170B2/ja active Active
- 2010-11-03 EP EP17001031.8A patent/EP3351266A1/en not_active Ceased
- 2010-11-03 WO PCT/US2010/002886 patent/WO2011056216A1/en active Application Filing
- 2010-11-03 CA CA3002946A patent/CA3002946C/en active Active
- 2010-11-03 CA CA2769996A patent/CA2769996C/en active Active
- 2010-11-03 AU AU2010315868A patent/AU2010315868B2/en active Active
-
2014
- 2014-03-11 JP JP2014047538A patent/JP5844403B2/ja active Active
- 2014-03-19 US US14/219,390 patent/US9694062B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2010315868A1 (en) | 2012-03-08 |
CA2769996C (en) | 2018-06-12 |
AU2010315868B2 (en) | 2012-12-20 |
CA3002946C (en) | 2021-11-02 |
JP2014169291A (ja) | 2014-09-18 |
JP2013502417A (ja) | 2013-01-24 |
EP3351266A1 (en) | 2018-07-25 |
CA2769996A1 (en) | 2011-05-12 |
US20110104195A1 (en) | 2011-05-05 |
EP2451478A1 (en) | 2012-05-16 |
CA3002946A1 (en) | 2011-05-12 |
WO2011056216A1 (en) | 2011-05-12 |
EP2451478A4 (en) | 2013-11-20 |
US20150265690A1 (en) | 2015-09-24 |
US9694062B2 (en) | 2017-07-04 |
JP5844403B2 (ja) | 2016-01-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2640417B1 (en) | Multivalent vaccine for filariasis | |
Noe et al. | A full-length Plasmodium falciparum recombinant circumsporozoite protein expressed by Pseudomonas fluorescens platform as a malaria vaccine candidate | |
Charest et al. | Recombinant attenuated Toxoplasma gondii expressing the Plasmodium yoelii circumsporozoite protein provides highly effective priming for CD8+ T cell-dependent protective immunity against malaria | |
JP5844403B2 (ja) | Plasmodiumfalciparumスポロゾイト及び肝臓段階抗原 | |
Mehrizi et al. | Immune responses elicited by co‐immunization of Plasmodium vivax and P. falciparum MSP‐1 using prime‐boost immunization strategies | |
KR20210018295A (ko) | 면역 반응을 유도하기 위한 조성물 | |
US10548960B2 (en) | Malaria vaccines based on pre-erythrocytic antigens from P. falciparum | |
US20170051026A1 (en) | Plasmodium falciparum antigens | |
KR102059855B1 (ko) | 재조합 아데노 바이러스주 및 이를 이용한 삼일열 말라리아 백신 조성물 | |
Regis et al. | Transcriptionally active PCR for antigen identification and vaccine development: in vitro genome-wide screening and in vivo immunogenicity | |
US20110229514A1 (en) | Vaccine and immunization method using plasmodium antigen 2 | |
JP5813854B2 (ja) | 熱帯熱マラリア原虫抗原 | |
Dobano et al. | Identification of minimal CD8+ and CD4+ T cell epitopes in the Plasmodium yoelii hepatocyte erythrocyte protein 17 kDa | |
WO2011059482A1 (en) | Plasmodium falciparum hla class i restricted t-cell epitopes | |
WO2023126882A1 (en) | Denv ediii-ns1 consensus sequence-based dengue dna vaccine | |
Lee et al. | Trials for the co-expression of the merozoite surface protein-1 and circumsporozoite protein genes of Plasmodium vivax | |
WO2020229805A1 (en) | Vaccine immunogens | |
US20150004631A1 (en) | Plasmodium falciparum HLA class I restricted T-cell epitopes | |
Grubb | A genomic approach to the identification of novel malaria vaccine antigens | |
Hirota et al. | A Baculovirus Dual Expression | |
Yoshida et al. | Baculovirus Dual Expression System in vaccine development: A baculovirus-based |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130709 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131008 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20131112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140311 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140409 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140514 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140715 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140814 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5600170 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |