JP5591981B2 - 生乾き臭抑制評価方法 - Google Patents

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Description

本発明は、生乾き臭抑制評価方法に関する。
サニタリー用品（下着、タオル、ハンカチ、寝具等）、衣類等の繊維製品（以下、本明細書において、単に「繊維製品」ともいう）は、清潔に保つことで心地よい使用感・着用感が得られる。また、衣類等の繊維製品は人体に纏うものであり、タオル、寝具等のサニタリー製品は人体に直接接触させて使用するものである。そのため、これらを清潔に保つことは衛生面からも重要である。近年の社会的な衛生志向の高まりに伴い、これら繊維製品を清潔に保つことに関する人々の関心は高まっている。
近年、消費者の生活環境への関心の高まりから、身の回りの不快な臭気を除去することが以前にも増して望まれている。サニタリー用品や衣料等の繊維製品に付着する臭気は、タバコなどの外的要因の他に、繊維製品の使用を繰り返すことにより生じる、人体由来の内的要因が挙げられる。
前述した繊維製品はヒトの皮膚と直接接触するため、皮脂を含んだ汗や角質などを吸収又は付着する可能性がある。そのため、これら繊維製品を洗濯後、被洗物を洗濯槽内等の湿気の多い場所にしばらく放置した場合、室内干しの場合、雨や汗で濡れた場合、又は乾燥が不十分の場合に、特有の臭いを生ずることがある。この臭いは一般に生乾き臭と呼ばれるものであり、十分な乾燥を行うことで発生を回避できる場合もある。しかしながら、十分な乾燥を行い、生乾き臭が感じられなくなった繊維製品であっても、汗や雨などで繊維製品が湿気を帯びると雑巾臭様の生乾き臭が生じることもある。すなわち、繊維製品がこの生乾き臭を一度発生するようになると、洗濯により感じなくなった場合であっても、使用時に雑巾臭様臭の生乾き臭が再発し易くなる。このような再発し易い生乾き臭は、室内干しの場合のみならず、低温乾燥機能を備えた洗濯機又は乾燥機を用いた場合や、室外干し乾燥の場合でさえも湿気を帯びると生じる場合がある。
再発性の生乾き臭の特徴的な点は、湿気を帯びるだけで臭いが発生する点にある。再発性の生乾き臭は、長期間タンスなどに収納した場合に生じることもある。ヒトの肌との接触機会が多く、洗浄−使用サイクルの期間の短い使用頻度の多い繊維製品（下着、ハンカチ、又はタオルなど）においては、一度この生乾き臭が発生するようになると使用中に臭いが再発してくることが多い。これらの生乾き臭を抑制するためには、このような生乾き臭原因物質を産生しないように繊維製品を処理することが重要である。そのための方法として生乾き臭を抑制する基材や素材が求められており、生乾き臭抑制剤をスクリーニングするための生乾き臭抑制評価方法の開発が求められている。
これまでに、生乾き臭は、中鎖アルデヒド、中鎖アルコール、ケトンなどの「黴様の臭い」、短鎖脂肪酸、中鎖脂肪酸などの「酸っぱい臭い」、窒素化合物などの「生臭い臭い」及び硫黄化合物から構成される複合臭であることが報告されている（特許文献１参照）。同報告の中では、特に中鎖脂肪酸の寄与度が大きいこと、生乾き臭の主要成分はヒトの汗等の臭気にも含まれる「炭素数７〜９の分岐構造を有する不飽和脂肪酸の混合物」であることも報告されている。さらに、生乾き臭の指標物質として4-メチル-3-ヘキセン酸を含む数種類の脂肪酸が提案されている（特許文献１参照）。4-メチル-3-ヘキセン酸は、天然では、柚子の成分として知られているとともに（非特許文献２参照）、テルペンより微生物によって生成することも知られている（特許文献２参照）。しかし、これらの文献では、生乾き臭発生のメカニズムについて、何ら記載も示唆されていない。さらに、このようなメカニズムに基づいて生乾き臭抑制作用を評価する方法、及び生乾き臭抑制剤をスクリーニングする方法を考案した例はない。
特開２００９−２４４０９４号公報 特開昭５６−１２４３８７号公報
埴原，園田，「部屋干し臭を抑制する洗剤について」，香料，平成16年9月，No.223，p.109-116 第53回 香料・テルペンおよび精油化学に関する討論会 学会要旨集（2009）p．4-6
本発明は、高精度で簡便に被験物質の生乾き臭抑制作用を評価することができる、生乾き臭抑制評価方法を提供することを課題とする。また、本発明は、高精度で簡便に生乾き臭抑制剤をスクリーニングすることができる、生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法を提供することを課題とする。また、本発明は、環境に存在している生乾き臭原因物質を産生する微生物を迅速かつ正確に検出することができる、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法を提供することを課題とする。また、本発明は、前記評価方法、スクリーニング方法及び検出方法において好適に用いることができるオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を提供することを課題とする。
上記課題に鑑み、本発明者等は、生乾き臭の原因物質、生乾き臭の原因物質を生成する微生物、及び生乾き臭の発生のメカニズムの観点から鋭意検討を行った。その結果、生乾き臭原因物質の１種である4-メチル-3-ヘキセン酸の生成には生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素やβ酸化関連酵素が関連していることを見出した。また、被検物質の存在下でのこれらの酵素遺伝子の発現量の変化を解析することにより、生乾き臭抑制評価及び生乾き臭抑制剤のスクリーニングが可能となることを見出した。さらに、生乾き臭原因物質を産生する特定の微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子やβ酸化関連酵素遺伝子の塩基配列に基づいて設計したオリゴヌクレオチド対を用いることで、タオルや衣類など環境に存在している生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出が可能となることを見出した。
本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
本発明は、皮脂汚れ成分存在下において生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、前記微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現を検知し、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量の変化に基づいて該被験物質の生乾き臭抑制作用を評価する、生乾き臭抑制評価方法であって、下記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに下記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記少なくとも１種の遺伝子の発現を検知する、生乾き臭抑制評価方法に関する。
（ａ）配列番号１３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１３に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｂ）配列番号１４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１４に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｃ）配列番号１５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１５に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｄ）配列番号１６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１６に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｅ）配列番号１７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１７に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｆ）配列番号１８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１８に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｇ）配列番号１９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１９に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｈ）配列番号２０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２０に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｉ）配列番号２１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２１に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｊ）配列番号２２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２２に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｋ）配列番号２３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２３に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｌ）配列番号２４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２４に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｍ）配列番号２５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２５に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｎ）配列番号２６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２６に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｏ）配列番号２７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２７に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｐ）配列番号２８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２８に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｑ）配列番号２９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２９に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｒ）配列番号３０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３０に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｓ）配列番号３１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３１に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｔ）配列番号３２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３２に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｕ）配列番号３３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３３に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｖ）配列番号３４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３４に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｗ）配列番号３５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３５に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｘ）配列番号３６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３６に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｙ）配列番号３７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３７に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｚ）配列番号３８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３８に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ａ１）配列番号３９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３９に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｂ１）配列番号４０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４０に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｃ１）配列番号４１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４１に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
（ｄ１）配列番号４２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４２に記載の塩基配列において１若しくは数個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
また、本発明は、前記評価方法に基づき、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量を低下させる被験物質を選択する、生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法に関する。
また、本発明は、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片を増幅し、増幅断片の有無を確認することにより、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法であって、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法に関する。
また、本発明は、前記オリゴヌクレオチド（ａ）〜（ｚ）及び（ａ１）〜（ｄ１）からなる群より選ばれるオリゴヌクレオチド、又は前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、若しくは前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対に関する。
また、本発明は、生乾き臭原因物質を産生する微生物と、皮脂汚れ成分と、少なくとも１種の、前記オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭抑制評価用キット又は生乾き臭抑制剤のスクリーニング用キットに関する。
さらに、本発明は、少なくとも１種の、前記オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出用キットに関する。
生乾き臭原因物質である4-メチル-3-ヘキセン酸を主とする中級分岐脂肪酸の生成には生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素やβ酸化関連酵素が関連している。さらに、これらの脂肪酸不飽和化酵素やβ酸化関連酵素の各遺伝子の一部の増幅が、前記オリゴヌクレオチド対を用いることにより可能となった。
したがって、前記オリゴヌクレオチド対を用いる本発明の生乾き臭抑制評価方法によれば、被験物質の生乾き臭抑制作用を高精度で簡便に評価することができる。また、前記評価方法を利用した本発明の生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法によれば、高精度で簡便に生乾き臭抑制剤をスクリーニングすることができる。また、前記オリゴヌクレオチド対を用いる本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法によれば、環境に存在している生乾き臭原因物質を産生する微生物を迅速かつ正確に検出することができる。さらに、本発明のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対は、前記評価方法、スクリーニング方法及び検出方法において好適に用いることができる。
本発明の生乾き臭抑制評価方法は、皮脂汚れ成分存在下において生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、前記微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現を検知し、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量の変化に基づいて該被験物質の生乾き臭抑制作用を評価する工程を含んでなり、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて前記少なくとも１種の遺伝子の発現の検知を行う。本発明の生乾き臭抑制評価方法によれば、例えば、生乾き臭抑制剤の候補として選択した物質について、その生乾き臭抑制作用の高精度な評価を簡便に行うことが可能となる。
また、本発明の生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法は、前記評価方法に基づき、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量を低下させる被験物質を選択する。本発明の生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法によれば、原因微生物の殺菌という手段に頼らない高精度な生乾き臭抑制剤のスクリーニングを簡便に行うことが可能となる。
本明細書において「生乾き臭原因物質」とは、4-メチル-3-ヘキサン酸、4-メチル-3-ヘキセン酸、5-メチル-2-ヘキサン酸、5-メチル-2-ヘキセン酸など、生乾き臭の指標物質として特許文献１に記載されているような中級分岐脂肪酸を指す。その中でも、特に4-メチル-3-ヘキセン酸（本明細書において、４Ｍ３Ｈともいう）を特徴的に指す。
本明細書において「生乾き臭原因物質を産生する微生物」とは以下の（１）〜（３）の微生物のいずれをも含むものである。
（１）生乾き臭原因物質の前駆体（本明細書において、「基質」ともいう）から４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質が生成する過程において、基質から中間体を生成することが可能な微生物（例えば、皮脂汚れ成分の不飽和化のみに関連する微生物）
（２）中間体から４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質を生成することが可能な微生物（例えば、不飽和脂肪酸のβ酸化のみに関連する微生物）
（３）基質から中間体を経て４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質を生成することが可能な微生物（皮脂汚れ成分の不飽和化と、不飽和脂肪酸のβ酸化のいずれにも関連する微生物）
本明細書において「生乾き臭」とは、使用済繊維製品を洗濯し乾燥中若しくは乾燥後でも乾燥が不十分な場合、又は繊維製品が湿気を帯びた場合に繊維製品から生じる臭いをいう。繊維製品を十分に乾燥させることにより一時的に生乾き臭を感じない場合においても、乾燥後すぐ若しくは保管後に再び繊維製品を使用すると、雨、汗、空気中の湿気等などにより、繊維製品から雑巾臭様の生乾き臭が再発することがある。繊維製品を十分に乾燥させることにより一時的に生乾き臭を感じない場合においても、保管中に空気中の湿気等により生乾き臭が再発することもある。このように、十分に乾燥させることにより生乾き臭を一時的に除去した繊維製品が湿気を帯びることにより再発する雑巾臭様臭も「生乾き臭」に含める。
繊維製品を洗濯後乾燥中又は乾燥後でも乾燥が不十分なため生じる生乾き臭としては、Ｓ（硫黄）臭、Ｎ（窒素）臭、アルデヒド臭、低級脂肪酸臭、雑巾臭及び４Ｍ３Ｈ臭を主とする中級分岐脂肪酸臭などの複合臭である。一方、十分に乾燥させて生乾き臭が感じられない繊維製品においても、再び雨、汗、空気中の湿気等などにより、繊維製品から再発する雑巾臭様臭の生乾き臭は、４Ｍ３Ｈ臭を主とする中級分岐脂肪酸臭が大部分である。これに対し、その他のＳ臭、Ｎ臭、アルデヒド臭などの揮発性の高い臭いはほとんど発生しない。
また、「生乾き臭抑制」とは、生乾き臭を抑制すること、生乾き臭生成を予防すること、生乾き臭原因物質の生成を抑制することを包含するものである。そして本発明では、生乾き臭として雑巾臭様臭を有する生乾き臭、特には４Ｍ３Ｈ臭の抑制を特徴的に指すものとする。なお、本明細書において「生乾き臭抑制」には、生乾き臭原因物質の生成を抑制することとして以下の（１）〜（３）のいずれをも含むものである。
（１）生乾き臭原因物質の前駆体から中間体の生成の抑制（例えば、皮脂汚れ成分の不飽和化の抑制）
（２）中間体から４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成の抑制（例えば、不飽和脂肪酸のβ酸化の抑制）
（３）基質から４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成の抑制（皮脂汚れ成分の不飽和化、及び不飽和脂肪酸のβ酸化の抑制）
なお、４Ｍ３Ｈには、下記に示すように、シス・トランス異性体が存在し、本発明においては、シス型、トランス型のいずれの構造の化合物も包含するものである。
Figure 0005591981
本発明における「生乾き臭原因物質を産生する微生物」は、生乾き臭原因物質を産生する微生物の菌体自体の他に、破砕菌体、菌体培養液、並びに生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の粗抽出物及び精製酵素等の菌体処理物も含む。
本発明に用いる生乾き臭原因物質を産生する微生物の入手方法について説明する。生乾き臭原因物質を産生する微生物の入手方法に特に制限はないが、以下の（１）〜（４）が例示される。
（１）繊維製品の官能評価を行い、その結果生乾き臭を発した繊維製品から微生物を採取する方法
（２）繊維製品に存在する微生物を採取し、採取した微生物の４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を測定し、生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択する方法
（３）環境より分離した又は微生物供託機関から入手した微生物の４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を測定し、生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択する方法
（４）生乾き臭原因物質を産生する微生物との特定の遺伝子配列の相同性を比較し、相同性の高い微生物を選択する方法
前記方法のうちいずれかの方法により生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択してもよいし、２つ以上の方法を組み合わせて生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択してもよい。
なお、特開２０１１−２５４８０７号公報には、４Ｍ３Ｈなどを生乾き臭原因物質として特定し、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法が記載されており、本発明では当該公報の記載を参考にすることができる。
本発明に用いる生乾き臭原因物質を産生する微生物の入手方法について具体的に説明する。しかし、本発明はこれらに制限するものではない。
まず、前記（１）の方法（繊維製品の官能評価を行い、生乾き臭を発する繊維製品から微生物を採取する方法）の概要について説明する。
家庭等で、洗濯後に使用した、又は洗濯後保管しておいた（洗濯後は未使用）繊維製品（たとえば、タオル、Tシャツ、枕カバー、下着類）を回収し、官能評価により生乾き臭を強く感じる繊維製品を選択する。選択した繊維製品を一定の大きさ（たとえば５×５ｃｍ、２×２ｃｍ）に裁断する。裁断した繊維製品を、レシチン・ポリソルベート（本明細書においてＬＰともいう）希釈液（日本製薬社製）又は生理食塩水等に添加後、攪拌により抽出液を得る。得られた抽出液をレシチン・ポリソルベート添加ソイビーン・カゼイン・ダイジェスト（本明細書においてＳＣＤ−ＬＰともいう）寒天培地（日本製薬社製）やポテトデキストロース・アガー（本明細書においてＰＤＡともいう）培地（ＢＤ社製）などの寒天培地に塗抹して一定時間（たとえば３５℃、２４時間）培養する。培養後、得られたコロニーから微生物を単離する。
単離した各菌株は、滅菌した使用済み繊維製品、たとえば生乾き臭発生が認められたタオルなどを一定の大きさ（たとえば５×５ｃｍ、２×２ｃｍ）に切断したのちに滅菌処理したものに塗布して培養したのちに官能評価により生乾き臭を感知した菌株を選抜する。あるいは、単離した各菌株を皮脂汚れ成分の存在下において固体培養又は液体培養したのちに官能評価により生乾き臭を感知した菌株を選抜する。選抜した各菌株の同定が必要な場合は、その方法に制限はないが、細菌では１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の上流領域約５００ｂｐ、真菌ではＬＳＵ（Ｌａｒｇｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ）のＤ２領域の約２００ｂｐ以上約５００ｂｐ以下の塩基配列を決定し、当該塩基配列と基準株との相同性に基づき行なうことができる。なお、塩基配列の相同性は、遺伝子情報処理ソフトウェアＣｌｕｓｔａｌＷ（http://clustalw.ddbj.nig.ac.jp/top-j.html）等を用いて算出することもできる。
次に、前記（２）の方法（繊維製品に存在する微生物を採取し、採取した微生物の４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を測定し、生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択する方法）の概要について説明する。
家庭などで、洗濯後に使用した、あるいは洗濯後保管しておいた（洗濯後は未使用）繊維製品（たとえば、タオル、Tシャツ、枕カバー、下着類など）を回収し、一定の大きさ（たとえば５×５ｃｍ、２×２ｃｍ）に裁断する。裁断後の繊維製品をＬＰ希釈液（日本製薬社製）、又は生理食塩水などに添加後、攪拌することにより抽出液を得る。得られた抽出液をＳＣＤ−ＬＰ寒天培地（日本製薬社製）やＰＤＡ培地（ＢＤ社製）などの寒天培地に塗抹して一定時間（たとえば３５℃、２４時間）培養後、得られたコロニーから微生物を単離する。
単離した各菌株は、滅菌した使用済み繊維製品、たとえば生乾き臭発生が認められたタオルなどを一定の大きさ（たとえば５×５ｃｍ、２×２ｃｍ）に切断したのちに滅菌処理したものに塗布して培養したのちに官能評価により生乾き臭を感知した菌株を選抜する。あるいは、単離した各菌株を皮脂汚れ成分の存在下において固体培養又は液体培養したのちに官能評価により生乾き臭を感知した菌株を選抜する。選抜した各菌株の同定が必要な場合は、その方法に制限はないが、たとえば、細菌では１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の上流領域約５００ｂｐ、真菌ではＬＳＵのＤ２領域の約２００ｂｐ以上約５００ｂｐ以下の塩基配列を決定し、当該塩基配列と基準株との相同性に基づき行なうことができる。なお、塩基配列の相同性は、遺伝子情報処理ソフトウェアＣｌｕｓｔａｌＷ等を用いて算出することもできる。
次に、前記（３）の方法（環境より分離した、又は微生物供託機関から入手した微生物の４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を測定し、生乾き臭原因物質を産生する微生物を選択する方法）について説明する。
ATCC（American Type Culture Collection）、NBRC（NITE Biological Resource Center）、JCM(Japan Collection of Microorganisms)、NCIMB（National Collection of Industrial，Marine and Food Bacteria）などの菌株分譲機関から菌株を購入する。あるいは、土壌、植物、河川水、住居内など様々な環境より常法によりＳＣＤ−ＬＰ寒天培地（日本製薬社製）やＰＤＡ培地（ＢＤ社製）などに菌株を分離後、単離する。なお、ここでは任意の培地を用いることができる。
購入又は単離した各菌株を、滅菌した使用済み繊維製品、たとえば生乾き臭発生が認められたタオルなどを一定の大きさ（たとえば５×５ｃｍ、２×２ｃｍ）に切断したのちに滅菌処理したものに塗布して培養した後に、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成を検知することにより、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成が認められた菌株を選抜する。あるいは、購入又は単離した各菌株を皮脂汚れ成分の存在下において固体培養又は液体培養したのちに、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成を検知することにより、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成が認められた菌株を選抜する。環境から分離した菌から選抜した各菌株について同定が必要な場合は、その方法に制限はないが、たとえば、細菌では１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の上流領域約５００ｂｐ、真菌ではＬＳＵのＤ２領域の約２００ｂｐ以上約５００ｂｐ以下の塩基配列を決定し、当該塩基配列と基準株との相同性に基づき行なうことができる。なお、塩基配列の相同性は、遺伝子情報処理ソフトウェアＣｌｕｓｔａｌＷ等を用いて算出することもできる。
次に、前記（４）の方法（４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能の有する微生物との特定の遺伝子配列の相同性を比較し、相同性の高い微生物を選択する方法）の概要について説明する。
まず、上記（１）、（２）及び／又は（３）の方法等により選択した４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を有する微生物の特定の遺伝子の塩基配列を決定する。そして、決定した塩基配列と相同性の高い塩基配列を有する微生物を選択することにより、本発明に用いる４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質生成能を有する微生物を入手することができる。例えば、生乾き臭の原因菌の１種であるモラクセラ・エスピー（Moraxella sp.）KMC４−１株（FERM BP-11394株）を基準サンプルとして選択する。次に、基準サンプルの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を決定する。そして、決定した基準サンプルの塩基配列の全部又は一部と相同性の高い塩基配列を有する微生物を選択する。ここで、「相同性の高い」とは、基準サンプルの塩基配列との相同性が好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらに好ましくは９８％以上、特に好ましくは９９％以上であることをいう。
微生物の塩基配列は、通常の方法により決定することができる。また、塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。
本発明に用いる微生物は皮脂成分存在下で４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質を生成する微生物であればよい。例えば、モラクセラ（Moraxella）属細菌が好ましく、モラクセラ・エスピー（Moraxella sp．）及びモラクセラ・オスロエンシス（Moraxella osloensis）からなる群より選ばれる少なくとも１種の微生物であることが最も好ましい。
なお、本発明において「モラクセラ・エスピー」とは、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、配列番号４３又は配列番号４４に記載の塩基配列と９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、特に好ましくは９９．２％以上の相同性を有する塩基配列を含む微生物を意味する。または、配列番号４３又は配列番号４４に記載の塩基配列において1〜75個、好ましくは1〜45個、より好ましくは1〜30個、さらに好ましくは1〜15個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなる１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物を意味する。なお、配列番号４３及び配列番号４４に示す塩基配列は、それぞれ、モラクセラ・エスピーKMC4-1株及びモラクセラ・オスロエンシスATCC19976株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を示す。
本発明の評価方法及びスクリーニング方法で用いる被験物質としては、任意の物質を使用することができ、低分子化合物、高分子化合物のいずれでもよい。被験物質の具体例としては、例えば、無機塩類、界面活性剤、タンパク質、抗体、ペプチド、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、脂質、糖類、多糖類、天然物抽出物等又はこれらの組み合わせが挙げられる。さらに前記被験物質には、生乾き臭抑制効果の期待できる物質（たとえば前述した具体例）で処理（吸着や塗布、練りこみなど）した繊維製品、あるいは繊維の極細化、繊維断面の異型化、繊維側面の溝付与、織り方の工夫等により、生乾き臭原因物質を産生する微生物の代謝を抑えて生乾き臭の発生を抑制させる繊維又は布も含まれる。
本発明の生乾き臭抑制評価方法及び生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法において、皮脂汚れ成分存在下で前記生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、該微生物を該被験物質と共にインキュベートする。インキュベート条件は任意の条件を使用できる。例えば、２５℃以上３５℃以下、３時間以上（好ましくは８時間以上）７２時間以下で加湿条件下でインキュベートすることが好ましい。さらに、微生物と被験物質とを接触させる際及び／又は微生物をインキュベートさせる際には、滅菌水、緩衝液、又はこれらに糖類、カゼイン製ペプトン、大豆製ペプトン、酵母エキス、無機塩類、ｐＨ調整剤、寒天等の培地成分を添加してもよい。あるいは、市販の培地をそのまま若しくは希釈して使用してもよい。また、液体状態でインキュベートをする場合は振とうすることが好ましく、固体状態でインキュベートする際は静置することが好ましい。
本明細書において、「皮脂汚れ」とは、衣類等の繊維製品に付着する最も代表的な汚れであり、遊離脂肪酸、グリセリド等の油分を多量に含有している。それらがほこり中のカーボンや泥、剥離した角質等を閉じ込めたものや、使用後の繊維製品や着用と洗濯を繰り返した繊維製品から抽出したものを皮脂汚れ成分として用いることもできる。
本発明に好ましく用いることができる皮脂汚れ成分としては、衣類等の繊維製品に通常見られる皮脂汚れの成分を使用でき、例えば、繊維製品から生じる生乾き臭原因物質の前駆体となり得る物質が好ましい。繊維製品から生じる生乾き臭原因物質の前駆体となり得る物質としては、例えば炭素数９以上（好ましくは１１以上、より好ましくは１７以上）２１以下（好ましくは１９以下）のアンテイソ脂肪酸が挙げられる。これらの中には、皮脂汚れ中には実際には存在しない化合物も含まれるが、本明細書においてはこれらのアンテイソ脂肪酸も皮脂汚れ成分に含まれるものとする。本発明において、前記皮脂汚れ成分はアンテイソ脂肪酸であることが好ましい。本発明に好ましく用いられるアンテイソ脂肪酸は、飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸のいずれであってもよく、アンテイソ脂肪酸の塩及びエステルも前記アンテイソ脂肪酸に含むものとする。具体的には、6-メチルオクタン酸、8-メチルデカン酸、12-メチルテトラデカン酸、14-メチルヘキサデカン酸、16-メチルオクタデカン酸、14-メチルヘキサデセン酸及び16-メチルオクタデセン酸、並びにこれらの塩やエステルからなる群より選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。本発明において、皮脂汚れ成分は、14-メチルヘキサデカン酸又は16-メチルオクタデカン酸がより好ましい。
本発明に好ましく用いることができるアンテイソ脂肪酸は通常の方法により合成することができる（例えば、特開２００９−１４９５４６号公報参照）。また、シグマアルドリッチ社等から市販のものを入手して用いることもできる。
前記生乾き臭原因物質を産生する微生物と皮脂汚れ成分との接触比（混合比）について適宜設定することができ、例えば、終濃度１０4ＣＦＵ以上１０8ＣＦＵ以下の微生物に対してアンテイソ脂肪酸等の皮脂汚れ成分０．１ｍｇ以上１０ｍｇ以下を接触させるのが好ましい。
本発明において、本発明に用いる生乾き臭原因物質を産生する微生物及び被験物質を皮脂汚れ成分が付着している繊維製品に添加して接触させ、該微生物を該被験物質と共にインキュベートさせてもよい。この場合、インキュベート条件は任意の条件を使用できる。例えば、２５℃以上３５℃以下で、３時間以上（好ましくは８時間以上）４８時間以下静置してインキュベートすることが好ましい。また、皮脂汚れ成分は元々繊維製品に付着していてもよいし、アンテイソ脂肪酸等の皮脂汚れ成分を繊維製品に付着させてもよい。皮脂汚れ成分を繊維製品に付着させる場合、２×２ｃｍの繊維製品に対して０．１ｍｇ以上１ｍｇ以下の割合で皮脂汚れ成分を付着させるのが好ましい。
前記微生物の繊維製品への添加量は適宜設定することができ、例えば、１０2ＣＦＵ/ｃｍ2以上１０5ＣＦＵ/ｃｍ2以下を繊維製品へ添加することが好ましい。
繊維製品の素材は適宜設定することができ、ウール、シルク、木綿等の天然素材、ポリエステル、ポリアミド等の化学繊維、及びこれらの組合せのいずれであってもよい。本発明において、繊維製品の素材は木綿であることが好ましい。さらに、皮脂汚れ成分を添加して使用する場合は、繊維製品は未使用であっても、一度以上使用した使用済のもの（使用後未洗濯の繊維製品、使用後洗濯済みの繊維製品等）でもよい。
本発明の評価方法及びスクリーニング方法において、その遺伝子の発現を検知する、脂肪酸不飽和化酵素及びβ酸化関連酵素について説明する。
脂肪酸不飽和化酵素とは、脂肪酸から２個の水素原子を除去し、炭素−炭素二重結合を形成する、不飽和脂肪酸を生成する酵素である。本発明において、脂肪酸不飽和化酵素は、４Ｍ３Ｈ等の生乾き臭原因物質の生成に関与する酵素であることが好ましく、生乾き臭原因物質の前駆体の不飽和化を行う酵素であることがより好ましく、アンテイソ脂肪酸等の皮脂汚れ成分の不飽和化を行う酵素であることがさらに好ましい。脂肪酸不飽和化酵素の具体例としては、Δ９デサチュラーゼ（Δ9desaturase）、Δ５デサチュラーゼ（Δ5desaturase）、Δ６デサチュラーゼ（Δ6desaturase）等が挙げられる。このうち、Δ９デサチュラーゼが特に好ましい。
脂肪酸不飽和化酵素のうちΔ９デサチュラーゼについて、そのアミノ酸配列、Δ９デサチュラーゼをコードするΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列等が、Human Microbiome project（HMP、http://hmp.jcvi.org/jumpstart/hmp047/index.shtml）で報告・記載されている。その中で、エンハイドロバクター・アエロサックスSK60株のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列（アクセッション番号：NZ_ACYI01000046、遺伝子番号：ENHAE0001_1102）を配列番号１に示す。なお、エンハイドロバクター・アエロサックスSK60株とモラクセラ・オスロエンシスATCC19976との間で16S rRNAの遺伝子配列を比較した結果99.1％の相同性で一致したこと、及びY．Kawamura et al.，Microbiology and Immunology，2012，vol．56，p．21-26の報告より、エンハイドロバクター・アエロサックスSK60株はモラクセラ・オスロエンシスに再分類できる可能性が強く示唆された。また、モラクセラ・オスロエンシスは、脂肪酸組成解析からΔ９デサチュラーゼを持つ可能性が示唆されている（C．Sugimoto et al.，International journal of systematic bacteriology，1983，p．181-187参照）。
本発明におけるΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列は、配列番号１に記載の塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列又はその相補配列であってもよく、相同性が８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましく、９５％以上であることがなお好ましく、９６．１％以上であることがさらになお好ましく、９７％以上であることがさらになお好ましく、９９％以上であることが特に好ましい。また、前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子は、配列番号１に記載の塩基配列において1〜351個、好ましくは1〜234個、より好ましくは1〜117個、特に好ましくは1〜59個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなり、脂肪酸の不飽和活性を有する酵素をコードする遺伝子であってもよい。塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。なお、本発明における好ましいΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列である配列番号１に記載の塩基配列に対する、Δ９デサチュラーゼ遺伝子の他の例として、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）RH4株のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列（配列番号２、アクセッション番号：CP002005、遺伝子番号：MCR_0449、Kyoto encyclopedia of genes and genomes（KEGG，http://www.genome.jp/kegg/kegg2.html）参照）、アシネトバクター・エスピー（Acinetobacter sp.）DR1株のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列（配列番号３、アクセッション番号：CP002080、遺伝子番号：AOLE_06035）、及びサッカロミセス・セルビシエ（Saccaromyces cerevisiae）YGL055W株のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列（配列番号４、アクセッション番号：Z72577、遺伝子番号：YGL055W）の相同性を表１に示す。
Figure 0005591981
β酸化関連酵素とは、脂肪酸のβ位の炭素の酸化反応に関わる酵素である。β酸化関連酵素によるβ酸化が繰り返されることで、脂肪酸の炭素鎖の分解が進行する。本発明において、β酸化関連酵素は、４Ｍ３Ｈ等の生乾き臭原因物質の生成に関与する酵素であることが好ましく、脂肪酸不飽和化酵素により生成した不飽和脂肪酸のβ酸化を行う酵素であることがより好ましく、アンテイソ脂肪酸等の皮脂汚れ成分を脂肪酸不飽和化酵素が不飽和化した不飽和脂肪酸のβ酸化を行う酵素であることがさらに好ましい。β酸化関連酵素の具体例としては、以下の（１）〜（４）の酵素が例示される。
（１）脂肪酸をＡＴＰ依存的にアシルCoAに変換するfadD
（２）脱水素反応によりα、β−trans二重結合を形成するfadE
（３）二重結合の水和でL-3-ヒドロキシアシルCoAを生成し、NAD+依存的な脱水素反応により3-オキソアシルCoAを生成するfadB
（４）CoAと反応してα位の炭素とβ位の炭素間の結合を開裂し、アセチルCoAと炭素原子が２個少ないアシルCoAを生成するfadA
これらの酵素のうち、fadB及びfadDが特に好ましい。
β酸化関連酵素のうちfadBについて、そのアミノ酸配列、fadBをコードするfadB遺伝子の塩基配列等が、HMP（http://hmp.jcvi.org/jumpstart/hmp047/index.shtml）で報告・記載されている。なお、エンハイドロバクター・アエロサックスSK60株のfadB遺伝子の塩基配列（アクセッション番号：NZ_ACYI01000046、遺伝子番号：ENHAE0001_0891）を配列番号５に示す。
本発明におけるfadB遺伝子の塩基配列は、配列番号５に記載の塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列又はその相補配列であってもよく、相同性が８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましく、９５％以上であることがなお好ましく、９５．２％以上であることがさらになお好ましく、９７％以上であることがさらになお好ましく、９９％以上であることが特に好ましい。また、前記fadB遺伝子は、配列番号５に記載の塩基配列において1〜647個、好ましくは1〜431個、より好ましくは1〜216個、特に好ましくは1〜108個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなり、不飽和脂肪酸のβ酸化活性を有する酵素をコードする遺伝子であってもよい。塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。なお、本発明における好ましいfadB遺伝子の塩基配列である配列番号５に記載の塩基配列に対する、fadB遺伝子の他の例として、モラクセラ・カタラーリスRH4株のfadB遺伝子の塩基配列（配列番号６、アクセッション番号：CP002005、遺伝子番号：MCR_0091、KEGG（http://www.genome.jp/kegg/kegg2.html）参照）、アシネトバクター・エスピーDR1株のfadB遺伝子の塩基配列（配列番号７、アクセッション番号：CP002080、遺伝子番号：AOLE_17905）、及び大腸菌（Escherichia coli）K12 MG1655株のfadB遺伝子の塩基配列（配列番号８、アクセッション番号：AP012306、遺伝子番号：b3846）の相同性を表２に示す。
Figure 0005591981
β酸化関連酵素のうちfadDについて、そのアミノ酸配列、fadDをコードするfadD遺伝子の塩基配列等が、HMP（http://hmp.jcvi.org/jumpstart/hmp047/index.shtml）で報告・記載されている。なお、エンハイドロバクター・アエロサックスSK60株のfadD遺伝子の塩基配列（アクセッション番号：NZ_ACYI01000046、遺伝子番号：ENHAE0001_2256）を配列番号９に示す。
本発明におけるfadD遺伝子の塩基配列は、配列番号９に記載の塩基配列に対して７０％以上の相同性を有する塩基配列又はその相補配列であってもよく、８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましく、９５％以上であることがなお好ましく、９５．４％以上であることがさらになお好ましく、９７％以上であることがさらになお好ましく、９９％以上であることが特に好ましい。また、前記fadD遺伝子は、配列番号９に記載の塩基配列において1〜506個、好ましくは1〜377個、より好ましくは1〜169個、特に好ましくは1〜84個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなり、不飽和脂肪酸のβ酸化活性を有する酵素をコードする遺伝子であってもよい。塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。なお、本発明における好ましいfadD遺伝子の塩基配列である配列番号９に記載の塩基配列に対する、fadD遺伝子の他の例として、モラクセラ・カタラーリスRH4株のfadD遺伝子の塩基配列（配列番号１０、アクセッション番号：CP002005、遺伝子番号：MCR_1388、KEGG（http://www.genome.jp/kegg/kegg2.html）参照）、アシネトバクター・エスピーDR1株のfadD遺伝子の塩基配列（配列番号１１、アクセッション番号：CP002080、遺伝子番号：AOLE_18375）、及び大腸菌K12 MG1655株のfadD遺伝子の塩基配列（配列番号１２、アクセッション番号：AP012306、遺伝子番号：b1805）の相同性を表３に示す
Figure 0005591981
一般に、生乾き臭抑制剤の作用機序としては、繊維製品に付着した微生物の殺菌、繊維製品に残存する汗、皮脂等の生乾き臭原因物質への変換を予防、生乾き臭原因物質の無臭物質への分解又は変換、生乾き臭のマスキング等が挙げられる。本発明における生乾き臭抑制剤の作用機序は、繊維製品に残存する汗、皮脂等の生乾き臭原因物質への変換を予防ものである。
生乾き臭原因物質を産生する微生物において、脂肪酸不飽和化酵素により生乾き臭原因物質の前駆体となる脂肪酸の不飽和反応が起こる。そして、この反応により生成した不飽和脂肪酸から、β酸化関連酵素によるβ酸化反応により、生乾き臭原因物質が生成する。
生乾き臭原因物質を産生する微生物による、アンテイソ脂肪酸の１種である16-メチルオクタデカン酸を基質とした生乾き臭原因物質（４Ｍ３Ｈ）生成のメカニズムの１例を下記に示す。
Figure 0005591981
本発明において、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の発現は通常の方法により検知することができる。例えば、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子を検出するための核酸プライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行い増幅産物の有無を確認することにより遺伝子の発現を検知することができる。または、同プライマーを用いて、リアルタイムＰＣＲを行い遺伝子の発現量を定量的に測定することにより遺伝子の発現を検知してもよい。
本発明において、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現の検知を行う。
本発明において、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子はΔ９デサチュラーゼ遺伝子であることが好ましい。Δ９デサチュラーゼ遺伝子を検出する場合、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いるのが好ましい。
前記オリゴヌクレオチド（ａ）〜（ｌ）は、それぞれ配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドが好ましい。また、本発明において脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（特に、Δ９デサチュラーゼ遺伝子）の検出に好ましく用いることができるオリゴヌクレオチドは、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（好ましくはΔ９デサチュラーゼ遺伝子）の検出に使用できる限り配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列に対する相同性が７０％以上であってもよい。相同性は７５％以上であることが好ましく、８０％以上であることがより好ましく、８５％以上であることがさらに好ましく、９０％以上であることがさらに好ましく、９５％以上であることが特に好ましい。また、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（好ましくはΔ９デサチュラーゼ遺伝子）の検出に好ましく用いることができるオリゴヌクレオチドには、配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列において１又は数個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加されており、かつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（好ましくはΔ９デサチュラーゼ遺伝子）の検出に使用できるオリゴヌクレオチドも包含される。また、配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列に、適当な塩基配列を付加してもよい。
塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。
配列番号１に記載の塩基配列又は配列番号１に記載の塩基配列と７０％以上の相同性を有する塩基配列で表される核酸において、配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがストリンジェントな条件でハイブリダイズする。配列番号１に記載の塩基配列における、配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする部位を例として表４に示す。表４に示すように、配列番号１３〜２４のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドは、生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子にストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる。したがって、例えば、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行うと、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の増幅産物が得られる。そのため、塩基配列の解析を行うことなく、前記オリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行って得られる増幅産物を脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の増幅産物と同定することが可能となる。その結果、生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を容易に検知することができる。
なお、本明細書において、「ストリンジェントな条件」としては、例えばMolecular Cloning−A LABORATORY MANUAL THIRD EDITION［Joseph Sambrook，David W．Russell.，Cold Spring Harbor Laboratory Press］記載の方法が挙げられる。例えば、６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成：０.１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、pH７．０）、０．５％ＳＤＳ、５×デンハート及び１００ｍｇ／ｍＬニシン精子ＤＮＡを含む溶液にプローブとともに６５℃で８〜１６時間恒温し、ハイブリダイズさせる条件が挙げられる。
Figure 0005591981
本発明において、β酸化関連酵素遺伝子はfadB遺伝子又はfadD遺伝子であることが好ましい。
fadB遺伝子を検出する場合、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いるのが好ましい。fadD遺伝子を検出する場合、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いるのが好ましい。
前記オリゴヌクレオチド（ｍ）〜（ｚ）及び（ａ１）〜（ｄ１）は、それぞれ配列番号２５〜４２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドが好ましい。また、本発明においてβ酸化関連酵素遺伝子（特に、fadB遺伝子又はfadD遺伝子）の検出に好ましく用いることができるオリゴヌクレオチドは、β酸化関連酵素遺伝子（好ましくはfadB遺伝子又はfadD遺伝子）の検出に使用できる限り配列番号２５〜４２のいずれかに記載の塩基配列に対する相同性が７０％以上であってもよい。相同性は７５％以上であることが好ましく、８０％以上であることがより好ましく、８５％以上であることがさらに好ましく、９０％以上であることがさらに好ましく、９５％以上であることが特に好ましい。また、β酸化関連酵素遺伝子（好ましくはfadB遺伝子又はfadD遺伝子）の検出に好ましく用いることができるオリゴヌクレオチドには、配列番号２５〜４２のいずれかに記載の塩基配列において１又は数個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個の塩基の欠失、置換、挿入又は付加されており、かつβ酸化関連酵素遺伝子（好ましくはfadB遺伝子又はfadD遺伝子）の検出に使用できるオリゴヌクレオチドも包含される。また、配列番号２５〜４２のいずれかに記載の塩基配列に、適当な塩基配列を付加してもよい。
塩基配列の相同性については、Lipman-Pearson法（Science，1985，227，p．1435）等によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyx-Win（ソフトウェア開発製）のホモロジー解析（Search homology）プログラムを用いて、パラメーターであるUnit size to compare（ktup）を２として解析を行うことにより算出することができる。
配列番号５に記載の塩基配列又は配列番号５に記載の塩基配列と７０％以上の相同性を有する塩基配列で表される核酸において、配列番号２５〜３２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがストリンジェントな条件でハイブリダイズする。配列番号５に記載の塩基配列における、配列番号２５〜３２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする部位を例として表５に示す。表５に示すように、配列番号２５〜３２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドは、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子にストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる。したがって、例えば、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行うと、β酸化関連酵素（fadB）遺伝子の増幅産物が得られる。そのため、塩基配列の解析を行うことなく、前記オリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行って得られる増幅産物をβ酸化関連酵素（fadB）遺伝子の増幅産物と同定することが可能となる。その結果、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素（fadB）遺伝子の発現を容易に検知することができる。
Figure 0005591981
配列番号９に記載の塩基配列又は配列番号９に記載の塩基配列と７０％以上の相同性を有する塩基配列で表される核酸において、配列番号３３〜４２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがストリンジェントな条件でハイブリダイズする。配列番号９に記載の塩基配列における、配列番号３３〜４２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする部位を例として表６に示す。表６に示すように、配列番号３３〜４２のいずれかに記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドは、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子にストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる。したがって、例えば、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行うと、β酸化関連酵素（fadD）遺伝子の増幅産物が得られる。そのため、塩基配列の解析を行うことなく、前記オリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いて増幅反応を行って得られる増幅産物をβ酸化関連酵素（fadD）遺伝子の増幅産物と同定することが可能となる。その結果、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素（fadD）遺伝子の発現を容易に検知することができる。
Figure 0005591981
前記オリゴヌクレオチドの結合様式は、天然の核酸に存在するホスホジエステル結合だけでなく、例えばホスホロアミデート結合、ホスホロチオエート結合等であってもよい。
前記オリゴヌクレオチドは、例えばＤＮＡ自動合成機等を用いた化学合成等の通常の合成方法により調製することができる。また、Δ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子又はfadD遺伝子から制限酵素等を用いて直接切り出したり、また遺伝子をクローニングして単離精製した後、制限酵素などを用いて切り出して調製したりすることも可能である。操作の容易さ、大量かつ安価に一定品質のオリゴヌクレオチドを得られる点から化学合成により調製するのが好ましい。
４Ｍ３Ｈを主とする中級分岐脂肪酸は生乾き臭の原因物質である。これらは皮脂汚れ成分を基質とし、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素及びβ酸化関連酵素が関与して生成される。すなわち、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の少なくとも一方の発現量の減少に伴い、生乾き臭の原因物質である４Ｍ３Ｈ等の中級不飽和脂肪酸の生成が抑制される。したがって、被検物質の存在下で、微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の少なくとも１種の発現量の変化を解析することで、生乾き臭抑制評価及び生乾き臭抑制剤のスクリーニングが可能となる。例えば、生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを皮脂汚れ成分存在下で接触させる（例えば、皮脂汚れ成分を含む、使用後未洗濯の衣類等の繊維製品、使用後洗濯済みの衣類等の繊維製品上で、生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させる）。該微生物を該被験物質と共にインキュベートした後、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子又はβ酸化関連酵素遺伝子に基づいて設計した核酸プライマーを用いてＰＣＲ又はリアルタイムＰＣＲを行い、増幅産物の有無又は前記遺伝子の発現量を解析する。被検物質の非存在下で同様の操作を行なったときの前記遺伝子の発現量と比較し、増幅産物が確認できなかった場合又は前記遺伝子の発現量が減少した場合、該被検物質は生乾き臭抑制効果を有するものと評価でき、生乾き臭抑制剤として選択することができる。
本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法では、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う。前記オリゴヌクレオチド対を使用して生乾き臭原因物質を産生する微生物を分離して同定するということにこだわらず、迅速かつ正確な生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出が可能となる。なお、本明細書における「検出」とは、分類学上で使用される「同定」も含むものである。
本発明の検出方法で検出される微生物種としては、本発明の評価方法で用いる微生物種が挙げられる。
本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法に用いる各オリゴヌクレオチド対については、前述の、本発明の生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法及び生乾き臭抑制評価方法に用いる各オリゴヌクレオチド対と同様である。
本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法では、前記オリゴヌクレオチド対を用いて脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片の増幅を行う。また、本発明の生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法及び生乾き臭抑制評価方法においても、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現を検知するために、前記オリゴヌクレオチド対を用いて発現した脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片の増幅を行うことが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド対を用いて増幅反応を行うと、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の少なくとも１種が存在する場合に増幅産物が得られる。したがって、増幅産物が得られることは脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素の少なくとも１種が存在することを示すものである。そのため、増幅産物の塩基配列を解析することなく、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の少なくとも１種の検知や、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子の少なくとも１種を有する微生物、すなわち生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出が可能となる。
脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片を増幅する方法としては、ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＬＣＲ（Ligase Chain Reaction）法、ＳＤＡ（Strand Displacement Amplification）法、ＮＡＳＢＡ（Nucleic Acid Sequence-based Amplification）法、ＲＣＡ（Rolling-circle amplification）法、ＬＡＭＰ（Loop mediated isothermal amplification）法など通常の方法を用いることができる。本発明においては、ＰＣＲ法を用いるのが好ましい。
本発明において、ＰＣＲ法により遺伝子断片を増幅する方法の具体例について詳しく説明する。
本発明において、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（特に、Δ９デサチュラーゼ遺伝子）の断片を増幅するためには、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いてＰＣＲを行い、生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の核酸の一部を増幅するのが好ましい。
前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）は、ＰＣＲによって生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（特に、Δ９デサチュラーゼ遺伝子）の断片（一部）を増幅できる。前述のように、脂肪酸不飽和化酵素は、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成に関連している。したがって、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対は、生乾き臭抑制評価方法やスクリーニング方法における脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現の検知や、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出に好適に用いることができる。
本発明において、β酸化関連酵素遺伝子（特に、fadB遺伝子又はfadD遺伝子）の断片を増幅するためには、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いてＰＣＲを行い、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子の核酸の一部を増幅するのが好ましい。
前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）は、ＰＣＲによって生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子（特に、fadB遺伝子）の断片（一部）を増幅できる。また、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）は、ＰＣＲによって生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子（特に、fadD遺伝子）の断片（一部）を増幅できる。前述のように、β酸化関連酵素は、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成に関連している。したがって、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対は、生乾き臭抑制評価方法やスクリーニング方法におけるβ酸化関連酵素遺伝子の発現の検知や、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出に好適に用いることができる。
ＰＣＲの条件は、目的のＤＮＡ断片を検出可能な程度に増幅するよう適宜設定することができる。
例えば、前記少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を核酸プライマーとして用いてＰＣＲを行う場合、２本鎖ＤＮＡを１本鎖にする熱変性反応を９５℃以上９８℃以下で約５秒（好ましくは５秒）以上約６０秒（好ましくは６０秒）以下行う。次に、プライマー対を１本鎖ＤＮＡにハイブリダイズさせるアニーリング反応を５５℃以上（好ましくは５９℃以上）６５℃以下（好ましくは６２℃）で約５秒（好ましくは５秒）以上約６０秒（好ましくは６０秒）以下、より好ましくは６１℃で６０秒間行う。次に、ＤＮＡポリメラーゼを作用させる伸長反応を約７２℃で約１０秒（好ましくは１０秒）以上約６０秒（好ましくは６０秒）以下行う。これらを１サイクルとしたものを約３０以上（好ましくは３０以上）約３５以下（好ましくは３５以下）のサイクルで行う。
本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法において、遺伝子断片の確認は通常の方法で行うことができる。例えば増幅産物について電気泳動を行い増幅した遺伝子の大きさに対応するバンドの有無を確認する方法、増幅産物量を経時的に計測する方法等が挙げられる。本発明においては、遺伝子増幅処理後に電気泳動を行い、増幅した遺伝子の大きさに対応するバンドの有無を確認する方法が好ましい。また、本発明において、増幅産物の確認は通常の方法で行うことができる。例えば増幅反応時に放射性物質などで標識されたヌクレオチドを取り込ませる方法、蛍光物質などで標識されたプライマーを用いる方法、増幅したＤＮＡ２本鎖の間にエチジウムブロマイドなどのＤＮＡと結合することにより蛍光強度が強くなる蛍光物質を入れ込む方法等が挙げられる。本発明においては、増幅したＤＮＡ２本鎖の間にＤＮＡと結合することにより蛍光強度が強くなる蛍光物質を入り込ませる方法が好ましい。
検体に検出対象微生物が含まれる場合、本発明のオリゴヌクレオチド対をプライマーセットとして使用してＰＣＲを行い、得られたＰＣＲ産物について電気泳動を行うと、特定のサイズでＤＮＡ断片が確認される。
このような操作を行うことにより、検体に検出対象微生物が含まれているかを確認することができる。
本発明において使用される検体としては、繊維、布、土壌、プラスチック、紙、植物、混合菌体、単離菌体、培養菌体等任意の検体を用いることができる。検体からＤＮＡを調製する方法としては、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行うのに十分な精製度及び量のＤＮＡが得られるのであればよく、未精製の状態でも使用できる。あるいは、分離、抽出、濃縮、精製等の前処理をして使用することもできる。例えば、フェノール及びクロロホルムで処理したり、市販の抽出キットを用いて精製して、核酸の純度を高めて使用することができる。また、被検体中のＲＮＡを逆転写して得られるＤＮＡを用いることもできる。
本発明の生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法で検出される微生物としては、モラクセラ・オスロエンシス、モラクセラ・エスピー等のモラクセラ属細菌が挙げられる。
本発明の生乾き臭抑制評価用キット及びスクリーニング用キットは、生乾き臭原因物質を産生する微生物と、アンテイソ脂肪酸などの皮脂汚れ成分を含んでなる。生乾き臭原因物質を産生する微生物及びアンテイソ脂肪酸などの皮脂汚れ成分については、前述の通りである。さらには、生乾き臭原因物質を産生する微生物及び被験物質を接触させる繊維製品（例えば、木綿の使用済繊維製品）や、生乾き臭原因物質を産生する微生物及び被験物質を接触させる溶液（例えば生理食塩水、緩衝液、液体培地など）などを含んでもよい。なお、４Ｍ３Ｈ等の生乾き臭原因物質の検出は、市販のガスクロマトグラフィー等を使用することができる。
また、本発明の生乾き臭抑制評価用キット、スクリーニング用キット及び生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出用キットは、前記オリゴヌクレオチド（ａ）〜（ｚ）及び（ａ１）〜（ｄ１）からなる群より選ばれるオリゴヌクレオチド、又は前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、若しくは前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、の少なくとも１種を含んでなる。
本発明のキットは、目的に応じ、標識検出物質、緩衝液、核酸合成酵素（ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、逆転写酵素等）、酵素基質（ｄＮＴＰ，ｒＮＴＰ等）等、遺伝子の断片の増幅に通常用いられる物質を含んでもよい。さらに、本発明のキットは、本発明のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対によって検出反応が可能であることを確認するための陽性対照（ポジティブコントロール）を含んでいてもよい。陽性対照としては、例えば、本発明の方法により増幅される領域を含んだＤＮＡが挙げられる。
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の生乾き臭抑制評価方法、生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対、生乾き臭抑制評価用キット又はスクリーニング用キット、使用、方法、及び生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出用キットを開示する。
＜１＞皮脂汚れ成分存在下において生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、前記微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現を検知し、前記遺伝子の発現量の変化に基づいて該被験物質の生乾き臭抑制作用を評価する、生乾き臭抑制評価方法であって、
下記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、下記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに下記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記少なくとも１種の遺伝子の発現を検知する、生乾き臭抑制評価方法。
（ａ）配列番号１３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１３に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１３に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｂ）配列番号１４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１４に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１４に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｃ）配列番号１５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１５に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１５に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｄ）配列番号１６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１６に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１６に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｅ）配列番号１７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１７に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１７に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｆ）配列番号１８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１８に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１８に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｇ）配列番号１９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１９に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号１９に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｈ）配列番号２０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２０に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２０に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｉ）配列番号２１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２１に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２１に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｊ）配列番号２２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２２に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２２に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｋ）配列番号２３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２３に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２３に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｌ）配列番号２４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２４に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２４に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｍ）配列番号２５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２５に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２５に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｎ）配列番号２６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２６に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２６に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｏ）配列番号２７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２７に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２７に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｐ）配列番号２８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２８に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２８に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｑ）配列番号２９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２９に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号２９に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｒ）配列番号３０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３０に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３０に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｓ）配列番号３１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３１に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３１に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｔ）配列番号３２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３２に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３２に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｕ）配列番号３３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３３に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３３に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｖ）配列番号３４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３４に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３４に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｗ）配列番号３５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３５に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３５に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｘ）配列番号３６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３６に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３６に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｙ）配列番号３７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３７に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３７に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｚ）配列番号３８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３８に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３８に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ａ１）配列番号３９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３９に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号３９に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｂ１）配列番号４０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４０に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号４０に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｃ１）配列番号４１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４１に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号４１に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
（ｄ１）配列番号４２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４２に記載の塩基配列において１若しくは数個（好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、よりさらに好ましくは１又は２個、特に好ましくは１個）の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド、若しくは配列番号４２に記載の塩基配列との相同性が、８０％以上（好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上）でありかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド。
＜２＞前記生乾き臭原因物質が４Ｍ３Ｈ、4-メチル-3-ヘキサン酸、5-メチル-2-ヘキサン酸、5-メチル-2-ヘキセン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくは４Ｍ３Ｈである、前記＜１＞項記載の評価方法。
＜３＞前記皮脂汚れ成分がアンテイソ脂肪酸、好ましくは炭素数９以上（好ましくは１１以上、より好ましくは１７以上）２１以下（好ましくは１９以下）のアンテイソ脂肪酸、より好ましくは6-メチルオクタン酸、8-メチルデカン酸、12-メチルテトラデカン酸、14-メチルヘキサデカン酸、16-メチルオクタデカン酸、14-メチルヘキサデセン酸及び16-メチルオクタデセン酸、並びにこれらの塩やエステルからなる群より選ばれる１種又は２種以上、さらに好ましくは14-メチルヘキサデカン酸及び16-メチルオクタデカン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞又は＜２＞項記載の評価方法。
＜４＞前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子、Δ５デサチュラーゼ遺伝子及びΔ６デサチュラーゼ遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくはΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、前記＜１＞〜＜３＞項のいずれか記載の評価方法。
＜５＞前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列、配列番号１に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９６．１％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号１に記載の塩基配列に対して1〜351個、好ましくは1〜234個、より好ましくは1〜117個、特に好ましくは1〜59個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜４＞項記載の評価方法。
＜６＞前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の発現を検知する、前記＜４＞又は＜５＞項記載の評価方法。
＜７＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadD遺伝子、fadE遺伝子、fadB遺伝子及びfadA遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくはfadB遺伝子及びfadD遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞〜＜３＞項のいずれか記載の評価方法。
＜８＞前記fadB遺伝子の塩基配列が、配列番号５に記載の塩基配列、配列番号５に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．２％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号５に記載の塩基配列に対して1〜647個、好ましくは1〜431個、より好ましくは1〜216個、特に好ましくは1〜108個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜７＞項記載の評価方法。
＜９＞前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadB遺伝子の発現を検知する、前記＜７＞又は＜８＞項記載の評価方法。
＜１０＞前記fadD遺伝子の塩基配列が、配列番号９に記載の塩基配列、配列番号９に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．４％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号９に記載の塩基配列に対して1〜506個、好ましくは1〜377個、より好ましくは1〜169個、特に好ましくは1〜84個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜７＞項記載の評価方法。
＜１１＞前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadD遺伝子の発現を検知する、前記＜７＞又は＜１０＞項記載の評価方法。
＜１２＞前記微生物が、モラクセラ・エスピー又はモラクセラ・オスロエンシスである、前記＜１＞〜＜１１＞項のいずれか記載の評価方法。
＜１３＞前記モラクセラ・エスピーが、配列番号４３又は配列番号４４の塩基配列と９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、特になお好ましくは９９．２％以上の相同性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列、又は配列番号４３又は配列番号４４に記載の塩基配列において1〜75個、好ましくは1〜45個、より好ましくは1〜30個、さらに好ましくは1〜15個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列からなる１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である、前記＜１２＞項記載の評価方法。
＜１４＞前記微生物及び前記被験物質を、皮脂汚れ成分が付着している繊維製品に添加して接触させる、前記＜１＞〜＜１３＞のいずれか１項記載の評価方法。
＜１５＞皮脂汚れ成分の付着量が繊維製品２×２ｃｍに対して０．１ｍｇ以上１ｍｇ以下である、前記＜１４＞記載の評価方法。
＜１６＞前記微生物の前記繊維製品への付着量が１０2ＣＦＵ/ｃｍ2以上１０5ＣＦＵ/ｃｍ2以下である、前記＜１４＞又は＜１５＞項に記載の評価方法。
＜１７＞前記繊維製品の素材が、ウール、シルク、木綿、ポリエステル、ポリアミド、又はこれらの組合せ、好ましくは木綿である、前記＜１４＞〜＜１６＞のいずれか１項記載の評価方法。
＜１８＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の評価方法に基づき、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量を低下させる被験物質を選択する、生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法。
＜１９＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片を増幅し、増幅断片の有無を確認することにより、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法であって、
前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法。
＜２０＞前記生乾き臭原因物質が４Ｍ３Ｈ、4-メチル-3-ヘキサン酸、5-メチル-2-ヘキサン酸、5-メチル-2-ヘキセン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくは４Ｍ３Ｈである、前記＜１９＞項記載の検出方法。
＜２１＞前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子、Δ５デサチュラーゼ遺伝子及びΔ６デサチュラーゼ遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくはΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、前記＜１９＞又は＜２０＞項記載の検出方法。
＜２２＞前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列、配列番号１に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９６．１％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号１に記載の塩基配列に対して、1〜351個、好ましくは1〜234個、より好ましくは1〜117個、特に好ましくは1〜59個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜２１＞項記載の検出方法。
＜２３＞前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の断片を増幅する、前記＜２１＞又は＜２２＞項記載の検出方法。
＜２４＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadD遺伝子、fadE遺伝子、fadB遺伝子及びfadA遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種、好ましくはfadB遺伝子及びfadD遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１９＞又は＜２０＞項記載の検出方法。
＜２５＞前記fadB遺伝子の塩基配列が、配列番号５に記載の塩基配列、配列番号５に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．２％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号５に記載の塩基配列に対して1〜647個、好ましくは1〜431個、より好ましくは1〜216個、特に好ましくは1〜108個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜２４＞項記載の検出方法。
＜２６＞前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadB遺伝子の断片を増幅する、前記＜２４＞又は＜２５＞項記載の検出方法。
＜２７＞前記fadD遺伝子の塩基配列が、配列番号９に記載の塩基配列、配列番号９に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．４％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号９に記載の塩基配列に対して1〜506個、好ましくは1〜377個、より好ましくは1〜169個、特に好ましくは1〜84個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜２４＞項記載の検出方法。
＜２８＞前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadD遺伝子の断片を増幅する、前記＜２４＞又は＜２７＞項記載の検出方法。
＜２９＞前記微生物が、モラクセラ・エスピー又はモラクセラ・オスロエンシスである、前記＜１９＞〜＜２８＞項のいずれか記載の検出方法。
＜３０＞前記モラクセラ・エスピーが、配列番号４３又は配列番号４４の塩基配列と９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、特に好ましくは９９．２％以上の相同性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列、又は配列番号４３又は配列番号４４に記載の塩基配列において1〜75個、好ましくは1〜45個、より好ましくは1〜30個、さらに好ましくは1〜15個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列からなる１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である、前記＜２９＞項記載の検出方法。
＜３１＞前記オリゴヌクレオチド（ａ）〜（ｚ）及び（ａ１）〜（ｄ１）からなる群より選ばれるオリゴヌクレオチド、又は前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、若しくは前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対。
＜３２＞前記オリゴヌクレオチドが核酸プライマーである、前記＜３１＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３３＞前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）が、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、前記＜３２＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３４＞前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、前記＜３３＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３５＞前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列、配列番号１に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９６．１％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号１に記載の塩基配列に対して、1〜351個、好ましくは1〜234個、より好ましくは1〜117個、特に好ましくは1〜59個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜３４＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３６＞前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）が、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、前記＜３２＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３７＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadB遺伝子である、前記＜３６＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３８＞前記fadB遺伝子の塩基配列が、配列番号５に記載の塩基配列、配列番号５に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．２％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号５に記載の塩基配列に対して1〜647個、好ましくは1〜431個、より好ましくは1〜216個、特に好ましくは1〜108個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜３７＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜３９＞前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）が、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、前記＜３２＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜４０＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadD遺伝子である、前記＜３９＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜４１＞前記fadD遺伝子の塩基配列が、配列番号９に記載の塩基配列、配列番号９に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．４％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号９に記載の塩基配列に対して1〜506個、好ましくは1〜377個、より好ましくは1〜169個、特に好ましくは1〜84個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜４０＞項記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対。
＜４２＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとしての、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜４３＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーの製造のための、前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜４４＞前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対を、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして使用する方法。
＜４５＞前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、前記＜４２＞〜＜４４＞のいずれか１項記載の使用又は方法。
＜４６＞前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列、配列番号１に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９６．１％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号１に記載の塩基配列に対して、1〜351個、好ましくは1〜234個、より好ましくは1〜117個、特に好ましくは1〜59個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜４５＞項記載の使用又は方法。
＜４７＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとしての、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜４８＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーの製造のための、前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜４９＞前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対を、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして使用する方法。
＜５０＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadB遺伝子である、前記＜４７＞〜＜４９＞のいずれか１項記載の使用又は方法。
＜５１＞前記fadB遺伝子の塩基配列が、配列番号５に記載の塩基配列、配列番号５に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．２％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号５に記載の塩基配列に対して1〜647個、好ましくは1〜431個、より好ましくは1〜216個、特に好ましくは1〜108個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜５０＞項記載の使用又は方法。
＜５２＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとしての、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜５３＞生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーの製造のための、前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対の使用。
＜５４＞前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、又は前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対を、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして使用する方法。
＜５５＞前記β酸化関連酵素遺伝子がfadD遺伝子である、前記＜５２＞〜＜５４＞のいずれか１項記載の使用又は方法。
＜５６＞前記fadD遺伝子の塩基配列が、配列番号９に記載の塩基配列、配列番号９に記載の塩基配列に対して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、なお好ましくは９５％以上、さらになお好ましくは９５．４％以上、さらになお好ましくは９７％以上、特に好ましくは９９％以上の相同性を有する塩基配列若しくは配列番号９に記載の塩基配列に対して1〜506個、好ましくは1〜377個、より好ましくは1〜169個、特に好ましくは1〜84個の塩基の欠失、置換、挿入若しくは付加された塩基配列、又はこれらの相補配列である、前記＜５５＞項記載の使用又は方法。
＜５７＞生乾き臭原因物質を産生する微生物と、皮脂汚れ成分と、少なくとも１種の、前記＜３１＞〜＜４１＞のいずれか記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭抑制評価用キット又は生乾き臭抑制剤のスクリーニング用キット。
＜５８＞少なくとも１種の、前記＜３１＞〜＜４１＞のいずれか記載のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出用キット。
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
製造例
特開２００９−１４９５４６号公報に準じて、14-メチルヘキサデカン酸を下記の２工程の反応で合成した。
（ａ）工程
12-ドデカノリド１１．９ｇ（６０．０ｍｍｏｌ）、３２％臭化水素/酢酸溶液２４.３ｇ（９６．０ｍｍｏｌ、１．６当量）を、テフロン（登録商標）で保護された１００ｍＬオートクレーブに入れ、窒素置換した後密閉し、６０℃のオイルバスを用いて、１６時間マグネチックスターラーで攪拌した。冷却後、水１４ｍＬを加え、熱ヘキサン２００ｍＬを用い、分液ロートに移送した。イオン交換水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、n-ヘキサンで晶析することで、12-ブロモドデカン酸１４．４ｇ（収率８６％）を得た。
（ｂ）工程
次に、還流冷却管、５０ｍＬ滴下ロート、マグネチックスターラー、温度センサーを備えた１００ｍＬの４口フラスコに、１２−ブロモドデカン酸５．０ｇ（１７．９ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（関東化学社製）２８．２ｍｇ（０．００６ｅｑ）を入れ、減圧乾燥した。アルゴン雰囲気下、臭化銅（Ｉ）（アルドリッチ社製）７７．１ｍｇ（０．０３当量）、無水テトラヒドロフラン１０ｍＬを加えた。室温下、２−メチルブチルマグネシウムブロミド３９．５ｍＬ（３当量、１．３６Ｎテトラヒドロフラン溶液）を、１時間で滴下した。１時間攪拌した後、１Ｎ塩酸水溶液５０ｍＬを加え、ヘキサン１００ｍＬで２回抽出した。イオン交換水５０ｍＬで２回洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮して、粗生成物３．９ｇを得た。
ガスクロマトグラフィー（カラム：アジレント社製、商品名：Ｕｌｔｒａ−２、３０ｍ×０．２ｍｍ×０．３３μｍ、ＤＥＴ３００℃、ＩＮＪ３００℃、カラム温度１００℃→３００℃、１０℃／分）で、内標にオクタデカンを用い、定量した結果、収率７９％であった。
このようにして、12-ドデカノリドから14-メチルヘキサデカン酸を全収率６８％で得た。また純度は９８％であった。
16-メチルオクタデカン酸を、上記に示す14-メチルヘキサデカン酸の合成工程の（ａ）工程において、12-ドデカノリドを15-ペンタドデカノリドに換え、（ｂ）工程にて2-メチルブチルマグネシウムブロミドをsec-ブチルマグネシウムブロミドに換えて同様の操作で合成し、15-ペンタドデカノリドから16-メチルオクタデカン酸を全収率８４％で得た。また純度は９５％であった。
試験例 皮脂汚れ成分存在下でのΔ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子及びfadD遺伝子の発現変化
４ｍＬのＳＣＤ液体培地（日本製薬）に、前培養したモラクセラ・エスピーKMC4-1株を１白金耳接種し、３５℃で２４時間振とう培養（１６０ｒｐｍ）した。２４時間培養した菌液に、皮脂汚れ成分として１０ｍｇの１６−メチルオクタデカン酸を添加し、さらに３５℃で６時間培養し、菌体を回収した。コントロールとして、皮脂汚れ成分を添加しない系についても同様に培養を行い、菌体を回収した。
RNA Protect Bacteria Reagent（キアゲン社製）を用いてＲＮＡを安定化させた後、Rneasy Mini Kit（キアゲン社製）を用いて、回収した菌体からＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡは、DnaseＩ（タカラバイオ社製）を用いてＤＮａｓｅを除去し、ＲＮＡ濃度を２０ｎｇ/μＬに調整し、SupersprictIII（インビトロジェン社製）で逆転写反応を行い、鋳型を調製した。
配列番号１に記載のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列をもとに、表７に示す、配列番号１３〜２４のいずれかで表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーをそれぞれ合成し、脱塩により精製した。
Figure 0005591981
配列番号５に記載のβ酸化関連酵素遺伝子fadBの塩基配列及び配列番号９に記載のβ酸化関連酵素遺伝子fadDの塩基配列をもとに、表８に示す、配列番号２５〜３２のいずれかで表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（fadB遺伝子検出用）及び配列番号３３〜４２のいずれかで表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（fadD遺伝子検出用）をそれぞれ合成し、脱塩により精製した。
Figure 0005591981
前記鋳型を無菌蒸留水で２０倍希釈した溶液２μＬ、TaKaRa SYBR Premix EX Taq（商品名、タカラバイオ社製）１２．５μＬ、配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des F1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．５μＬ、配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des R1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．５μＬ、無菌蒸留水９．５μＬ混合することで、２５μＬのリアルタイムＰＣＲ反応液を調製した。
陰性対照（ネガティブコントロール）として滅菌蒸留水をＤＮＡテンプレートの代わりに混合したＰＣＲ反応液も同様に調製した。
上記配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーと配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーとからなるプライマーセットに代えて、表９及び１０に示すプライマーセットを用いたこと以外は同様にして、リアルタイムＰＣＲ反応液を調製した。
リアルタイムＰＣＲ反応液について、自動遺伝子増幅装置サーマルサイクラーDICE Real time systemII（タカラバイオ社製）を用いて遺伝子増幅処理を行ない、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（Δ９デサチュラーゼ遺伝子）及びβ酸化関連遺伝子（fadB及びfadD遺伝子）の発現量の測定を行った。ＰＣＲ反応条件は、（i）９５℃、２０秒間の熱変性反応、（ii）６０℃、３０秒間のアニーリング及び伸長反応を１サイクルとしたものを４０サイクル行なった。
試験したすべてのプライマーセットにおいて、皮脂汚れ成分を添加しない場合の遺伝子発現量を基準として皮脂汚れ成分を添加した場合の遺伝子発現量の変化を１６Ｓ ｒＲＮＡの遺伝子発現を内部標準として算出した、各遺伝子の発現量が基準値に対して２倍以上の場合を「Ａ」、１/２以上２倍未満の場合を「Ｂ」、１/２未満の場合を「Ｃ」と評価した。結果を表９及び１０に示す。
さらに、前記培養後の菌体を遠心（８０００×ｇ、１０分）して上清を取り除いた後、生理食塩水５ｍＬに懸濁し、再度遠心（８０００×ｇ、１０分）した後上清を取り除き、生理食塩水を用いてＯＤ600＝１．０となるように菌液を調製した。
２ｃｍ×２ｃｍの正方形に切断した木綿の平織り布に、皮脂汚れ成分として、製造例で合成した１６−メチルオクタデカン酸０．５ｍｇをメタノール０．１ｍＬに溶解した溶液を塗布し、その後メタノールの乾固を行った。
上記木綿の平織り布に、前記各種菌液０．１ｍＬを植菌し、加湿条件下で３７℃で２４時間静置し、生乾き臭の嗅ぎ分けが可能な専門評価者による生乾き臭の官能評価を行った。
評価基準は、生乾き臭があるものを「Ａ」、やや生乾き臭があるものを「Ｂ」、生乾き臭が全くしないものを「Ｃ」として評価した。その結果を表９及び１０に示す。
Figure 0005591981
Figure 0005591981
表９及び１０の結果から、生乾き臭が強く感じられた布ではΔ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子及びfadD遺伝子のすべてのプライマーセットにおいて、皮脂汚れ成分を添加しない場合と比較して、皮脂汚れ成分を添加した場合に各遺伝子の発現量が２倍以上上昇した。これらの結果は、Δ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子及びfadD遺伝子の各遺伝子の発現が生乾き臭原因物質の生成に関与していることを示唆している。したがって、Δ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子及びfadD遺伝子の遺伝子発現量の変化を評価することで生乾き臭抑制評価や生乾き臭抑制剤のスクリーニングが可能となる。
実施例１ 被検物質存在下でのΔ９デサチュラーゼ遺伝子、fadB遺伝子及びfadD遺伝子の発現変化と増殖抑制効果及び殺菌効果の確認
４ｍＬのＳＣＤ液体培地（日本製薬）に、下記に示す被検物質（物質（１）〜（７））を添加した。コントロールとして被検物質を何も添加しない系も作成した培地も用意した。これらの培地に、前培養したモラクセラ・エスピーKMC4-1株を１白金耳接種し、３５℃で２４時間振とう培養（１６０ｒｐｍ）した。
２４時間培養した菌液に、皮脂汚れ成分として１０ｍｇの１６−メチルオクタデカン酸を添加し、さらに３５℃で６時間培養し、菌体を回収した。コントロールとして、皮脂汚れ成分を添加しない系についても同様に培養を行い、菌体を回収した。
Figure 0005591981
回収した菌体から、試験例１と同様にしてＲＮＡサンプルを調製した。
調製した鋳型を無菌蒸留水で２０倍希釈した溶液２μＬ、TaKaRa SYBR Premix EX Taq（商品名、タカラバイオ社製）１２．５μＬ、配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des F1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．５μＬ、配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des R1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．５μＬ、無菌蒸留水９．５μＬ混合することで、２５μＬのリアルタイムＰＣＲ反応液を調製した。
陰性対照（ネガティブコントロール）として滅菌蒸留水をＤＮＡテンプレートの代わりに混合したＰＣＲ反応液も同様に調製した。
上記配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーと配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーとからなるプライマーセットに代えて、表１１〜１３に示すプライマーセットを用いたこと以外は同様にして、リアルタイムＰＣＲ反応液を調製した。
リアルタイムＰＣＲ反応液について、自動遺伝子増幅装置サーマルサイクラーDICE Real time systemII（タカラバイオ社製）を用いて遺伝子増幅処理を行ない、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子（Δ９デサチュラーゼ遺伝子）及びβ酸化関連遺伝子（fadB及びfadD遺伝子）の発現量の測定を行った。ＰＣＲ反応条件は、（i）９５℃、２０秒間の熱変性反応、（ii）６０℃、３０秒間のアニーリング及び伸長反応を１サイクルとしたものを４０サイクル行なった。
１６Ｓ ｒＲＮＡの遺伝子発現を内部標準として、皮脂汚れ成分を添加せず、被検物質も添加しない場合の伝子の発現量を基準値とし、基準値に対する各遺伝子の発現量の変化を算出した。各遺伝子の発現量が基準値に対して１／２以下の場合を「Ａ」、各遺伝子の発現量が基準値に対して１／２より大きく２／３以下の場合を「Ｂ」、各遺伝子の発現量が基準値に対して２／３より大きい場合を「Ｃ」と評価した。結果を表１１〜１３に示す。
Figure 0005591981
Figure 0005591981
Figure 0005591981
続いて、生乾き臭原因物質を産生する微生物の１種であるモラクセラ・エスピーKMC4-1株を用いて、前記被検物質の生乾き臭抑制効果の官能評価と、生乾き臭原因物質の１種である４Ｍ３Ｈの生成量の測定を行った。
ＳＣＤ−ＬＰ寒天培地（和光純薬社製）に、モラクセラ・エスピーKMC4-1株を供試細菌として接種し、常温にて１〜２週間培養し、これを前培養プレートとした。前培養プレートからコンラージでコロニー表面を掻き取り、生理食塩水５ｍＬに懸濁し、ＯＤ600＝１．０（約１０8ＣＦＵ／ｍＬ）に調整した。
滅菌処理し、２５℃、４０％ＲＨで乾燥して一定状態にした綿メリヤス布（色染社、木綿メリヤス、未シルケット加工）を２ｃｍ×２ｃｍの正方形に切断し、皮脂汚れ成分として１４−メチルヘキサデカン酸０．５ｍｇをメタノール０．１ｍＬに溶解した溶液を塗布した。その後メタノールの乾固を行い、モデル試験布を作成した。
各被検物質のメタノール溶液を調製し、モデル試験布１ｇに対して各被検物質の塗布量が１０μｇとなるように、前記メタノール溶液を前記モデル試験布に２０℃で塗布し、室温で２時間乾燥させ、メタノール乾固した。上記モデル試験布に前記細菌懸濁液０．１ｍＬを塗布し、シャーレ中で３７℃、相対湿度７０％の培養庫において２４時間培養を行い、細菌定着布を調製した。
生乾き臭の嗅ぎ分けが可能な専門評価者により、モデル試験布の官能評価を行った。評価基準は、生乾き臭抑制効果のあるものを「Ａ」、判断が難しいもの又は生乾き臭抑制効果が弱いものを「Ｂ」、生乾き臭抑制効果が全くないものを「Ｃ」として評価した。その結果を表１４に示す。
さらに、ＬＣ−ＦＬ（液体クロマトグラフィー装置：HITACHI ELITE LaChrom（商品名、日立社製）、カラム：Lichrospher 100 RP-8(e)（商品名、アジレント社製、５μｍ×１２５ｍｍ×４ｍｍφ）、カラム温度：４０℃、溶離剤：アセトニトリル／水＝７／３（体積比）の混合溶液、流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出器：励起波長（３６５ｎｍ）、測定波長（４１２ｎｍ））を用いて、前記モデル試験布の４Ｍ３Ｈ生成量を定量し、各被検物質を添加しない場合の４Ｍ３Ｈ生成量に対する比を算出し、４Ｍ３Ｈ生成抑制率を測定した。その結果を表１４に示す。
Figure 0005591981
表１１の結果から、試験に供した被検物質のうち、物質（１）と生乾き臭原因物質を産生する微生物とを接触させることで、該微生物のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の発現量が低下した。また、表１２の結果から、物質（２）、物質（３）又は物質（４）と、生乾き臭原因物質を産生する微生物とを接触させることで、該微生物のfadB遺伝子の発現量が低下した。また、表１３の結果から、物質（１）、物質（２）又は物質（３）と、生乾き臭原因物質を産生する微生物とを接触させることで、該微生物のfadD遺伝子遺伝子の発現量が低下した。
一方、表１４の結果から明らかなように、生乾き臭原因物質を産生する微生物の１種であるモラクセラ・エスピーKMC4-1株と、物質（１）、物質（２）、物質（３）又は物質（４）とを接触させた場合、生乾き臭抑制効果が認められ、さらに４Ｍ３Ｈ生成抑制率も高かった。したがって、これらの物質は生乾き臭原因物質の生成に関わる酵素遺伝子の発現を抑制することで、４Ｍ３Ｈ等の生乾き臭原因物質の生成を抑制し、生乾き臭の発生を抑制していることがわかる。
以上の結果から、生乾き臭原因物質を産生する微生物における脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及び／又はβ酸化関連酵素遺伝子の発現が、生乾き臭の発生に関連していることがいえる。
次に、生乾き臭原因物質を産生する微生物に対する、物質（１）〜（７）の増殖抑制効果及び殺菌効果を検討した。
（増殖抑制試験）
４ｍＬのＳＣＤ液体培地（日本製薬）に、物質（１）〜（７）を表１５に記載の終濃度になるように添加した。コントロールとして被検物質を何も添加しない系も作成した培地も用意した。これらの培地に、前培養したモラクセラ・エスピーKMC4-1株を初発が104ＣＦＵ／ｍＬとなるように接種し、３５℃で２４時間振とう培養（１６０ｒｐｍ）後、ＬＰ希釈溶液（日本製薬）を用いて段階希釈後ＳＣＤ−ＬＰ寒天培地（日本製薬）を用いて生残菌数を測定した。
（殺菌試験）
物質（１）〜（７）を表１５に記載の終濃度になるように調製した５ｍＬの試験溶液に、106ＣＦＵ／ｍＬとなるように前培養したモラクセラ・エスピーKMC4-1株を接種し、２５℃で２時間振とう（１６０ｒｐｍ）後、ＬＰ希釈溶液（日本製薬）を用いて段階希釈後ＳＣＤ−ＬＰ寒天培地（日本製薬）を用いて生残菌数を測定した。
増殖抑制効果及び殺菌効果は、コントロールと比較してlog3以上の菌数減少が認められたものをＡ、log1以上、log3未満の菌数減少が認められたものをＢ、log1未満の菌数減少が認められたものをＣとして評価した。結果を表１５に示す。
Figure 0005591981
表１５の結果から、生乾き臭の生成を抑制する物質（１）〜物質（４）は、モラクセラ・エスピーKMC4-1株に対して増殖抑制効果及び殺菌効果のいずれも認められなかった。
このように、本発明によれば、生乾き臭原因物質を産生する微生物に対する増殖抑制効果又は殺菌効果を示す生乾き臭抑制剤だけではなく、４Ｍ３Ｈなどの生乾き臭原因物質の生成に関わる代謝の抑制効果を示す生乾き臭抑制剤についてもスクリーニング又は評価することが可能になる。
実施例２ 生乾き臭原因物質を産生する微生物の菌体からの検出
（１）ゲノムＤＮＡの調製
表１６記載のモラクセラ属細菌及び各種細菌の各菌株を、それぞれＳＣＤ寒天培地（日本製薬社製）に接種して３５℃で２４時間培養後、白金耳を用いて各菌体を寒天培地から回収した。回収した菌体から、ゲノムＤＮＡ調製用キット（アプライドバイオシステムズ社製、PrepMan Ultra Reagent（商品名））を用いてゲノムＤＮＡ溶液を調製した。
さらに、モラクセラ属細菌については、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列について、配列番号４３又は配列番号４４に示す塩基配列との同一性について決定した。なお、配列番号４３又は配列番号４４に示す塩基配列は、それぞれ、モラクセラ・エスピー4-1株及びモラクセラ・オスロエンシスATCC19976株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を示す。さらに、塩基配列の同一性は、遺伝子情報処理ソフトウェアＣｌｕｓｔａｌＷを用いて算出した。
（２）４Ｍ３Ｈ生成量の定量
表１６記載のモラクセラ属細菌及び各種細菌の各菌株をＳＣＤ液体培地（日本製薬社製）５ｍＬに一白金耳接種し、３５℃で２４時間振とう培養（１６０ｒｐｍ）を行なった。培養後の菌体を遠心（８０００×ｇ、１０分）して上清を取り除いた後、生理食塩水５ｍＬに懸濁し、再度遠心（８０００×ｇ、１０分）した後上清を取り除き、生理食塩水を用いてＯＤ600＝１．０となるように菌液を調製した。
２ｃｍ×２ｃｍの正方形に切断した木綿の平織り布に、皮脂汚れ成分として、１６−メチルオクタデカン酸０．５ｍｇをメタノール０．１ｍＬに溶解した溶液を塗布し、その後メタノールの乾固を行った。
上記木綿の平織り布に、前記各種菌液０．１ｍＬを植菌し、加湿条件下で３７℃で２４時間静置し、４Ｍ３Ｈの定量を行った。
２４時間静置後の前記タオルに、メタノール１０ｍＬを添加し、そのうちの１ｍＬとＡＤＡＭ（9-Anthrydiazomethanene、フナコシ社製、０．１ｗ/ｖ％）１ｍＬとを混合し、室温で６０分放置し、誘導体化を行なった。
その後、１０μＬ溶液について、ＬＣ−ＦＬ（液体クロマトグラフィー装置：HITACHI ELITE LaChrom（商品名、日立社製）、カラム：Lichrospher 100 RP-8(e)（商品名、アジレント社製、５μｍ×１２５ｍｍ×４ｍｍφ）、カラム温度：４０℃、溶離剤：アセトニトリル／水＝７／３（体積比）の混合溶液、流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出器：励起波長（３６５ｎｍ）、測定波長（４１２ｎｍ））を用いて解析を行うことで、生成した４Ｍ３Ｈの定量を行った。４Ｍ３Ｈの生成量について、生成した４Ｍ３Ｈの量が１μｇより多かった試料を「Ａ」、０.１μｇより多く１μｇ以下の試料を「Ｂ」、０μｇより多く０．１μｇ以下の試料を「Ｃ」、全く検出されなかった試料を「Ｄ」として評価した。その結果を表１６に示す。
Figure 0005591981
表１６の結果から、試験に供した全てのモラクセラ・オスロエンシス及びモラクセラ・エスピーの株で４Ｍ３Ｈの生成が確認された一方、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）NBRC13275株及びエンテロバクター・クロアカ（Enterobacter cloacae）NBRC3320株においては４Ｍ３Ｈの生成は確認されなかった。
（３）ＰＣＲ反応
ＤＮＡテンプレートとして上記で調製したゲノムＤＮＡ溶液を無菌蒸留水で１００倍希釈した溶液１μＬ、TaKaRa EX Taq HS（商品名、タカラバイオ社製）０．１μＬ、４種類のデオキシリボヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）混合液（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Version（商品名）に付属のｄＮＴＰ混合液）１．６μＬ、１０倍濃縮反応用バッファー（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Version（商品名）に付属のバッファー）２μＬ、配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des F1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des R1、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、無菌蒸留水１４．５μＬ混合することで、２０μＬのＰＣＲ反応液を調製した。
陰性対照（ネガティブコントロール）として滅菌蒸留水をＤＮＡテンプレートの代わりに混合したＰＣＲ反応液も同様に調製した。
上記配列番号１３の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーと配列番号１４の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーとからなるプライマーセットに代えて、表１７〜１９に示すプライマーセットを用いたこと以外は同様にして、ＰＣＲ反応液を調製した。
ＰＣＲ反応液について、自動遺伝子増幅装置サーマルサイクラーＤＩＣＥ（タカラバイオ社製）を用いて遺伝子増幅処理を行なった。ＰＣＲ条件は、（i）９８℃、１０秒間の熱変性反応、（ii）６０℃、３０秒間のアニーリング、及び（iii）７２℃、１分間の伸長反応を１サイクルとしたものを３０サイクル行なった。
（４）アガロースゲル電気泳動
ＰＣＲ後、反応液を２％アガロールゲルにアプライし、ＴＢＡバッファー中、１００ボルトで３０分電気泳動を行った。次いで、ゲルを取り出し、SYBR safe DNA gel stain in 1×TAE（インビトロジェン社製）溶液中に３０分浸漬してＤＮＡ断片を染色後、ＵＶランプ照射の下ポラロイド（登録商標）カメラで撮影し、約120bpのＤＮＡ断片の有無を確認した。ＤＮＡ断片のサイズは、電気泳動時に、塩基対数が既知のＤＮＡ断片を一緒に流しておくことで、移動度の相対的比較によって算出した。目的の遺伝子断片の確認結果を表１７〜１９に示す。
Figure 0005591981
Figure 0005591981
Figure 0005591981
表１７及び１８に示すように、生乾き臭原因菌の１種であるモラクセラ属細菌の様々な株において、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子であるΔ９デサチュラーゼ遺伝子が確認された。一方、表１９に示すように、生乾き臭原因物質を産生しない微生物のゲノムＤＮＡを含む試料では、遺伝子断片は確認されなかった。したがって、特定のオリゴヌクレオチド対を用いることによって、生乾き臭原因物質を産生する微生物を迅速かつ正確に検出することができる。
なお、モラクセラ・エスピーKMC4-1株について、各プライマー対を用いて増幅された遺伝子断片の塩基配列と、配列番号１に記載の塩基配列との相同性を表２０に示す。
Figure 0005591981
表２０に示すように、増幅された各遺伝子断片の塩基配列と配列番号１に記載のΔ９デサチュラーゼ遺伝子の塩基配列とは、９５％以上の相同性で一致していた。
この結果から、本発明のオリゴヌクレオチドを用いることで、生乾き臭原因物質を産生する微生物の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の断片を増幅することができ、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子を迅速かつ正確に検出することができることがわかった。
実施例３ 生乾き臭原因物質を産生する微生物の菌体からの検出
（１）ＰＣＲ反応
ＤＮＡテンプレートとして実施例２で調製したゲノムＤＮＡ溶液を無菌蒸留水で１００倍希釈した溶液）１μＬ、TaKaRa EX Taq HS（商品名、タカラバイオ社製）０．１μＬ、４種類のデオキシリボヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）混合液（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Versionに付属のｄＮＴＰ混合液）１．６μＬ、１０倍濃縮反応用バッファー（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Versionに付属のバッファー）２μＬ、配列番号２５の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（fadB F6、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、配列番号２６の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（fadB R6、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、無菌蒸留水１４．５μＬ混合することで、２０μＬのＰＣＲ反応液を調製した。
陰性対照（ネガティブコントロール）として滅菌蒸留水をＤＮＡテンプレートの代わりに混合したＰＣＲ反応液も同様に調製した。
上記配列番号２５の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーと配列番号２６の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーとからなるプライマーセットに代えて、表２１〜２３に示すプライマーセットを用いたこと以外は同様にして、ＰＣＲ反応液を調製した。
ＰＣＲ反応液について、自動遺伝子増幅装置サーマルサイクラーＤＩＣＥ（タカラバイオ社製）を用いて遺伝子増幅処理を行なった。ＰＣＲ反応条件は、（i）９８℃、１０秒間の熱変性反応、（ii）６０℃、３０秒間のアニーリング、及び（iii）７２℃、１分間の伸長反応を３０サイクル行なった。
（２）アガロースゲル電気泳動
ＰＣＲ後、反応液を２％アガロールゲルにアプライし、ＴＢＡバッファー中、１００ボルトで３０分電気泳動を行った。次いで、ゲルを取り出し、SYBR safe DNA gel stain in 1×TAE（インビトロジェン社製）溶液中に３０分浸漬してＤＮＡ断片を染色後、ＵＶランプ照射の下ポラロイド（登録商標）カメラで撮影し、約150bpのＤＮＡ断片の有無を確認した。ＤＮＡ断片のサイズは、電気泳動時に、塩基対数が既知のＤＮＡ断片を一緒に流しておくことで、移動度の相対比較によって算出した。目的の遺伝子断片の確認結果を表２１〜２３に示す。
Figure 0005591981
Figure 0005591981
Figure 0005591981
表２１及び２２に示すように、生乾き臭原因菌の１種であるモラクセラ属細菌の様々な株において、β酸化関連酵素遺伝子であるfadB遺伝子及びfadD遺伝子が確認された。一方、表２３に示すように、生乾き臭原因物質を産生しない微生物のゲノムＤＮＡを含む試料では、遺伝子断片は確認されなかった。したがって、特定のオリゴヌクレオチド対を用いることによって、生乾き臭原因物質を産生する微生物を迅速かつ正確に検出することができる。
なお、モラクセラ・エスピーKMC4-1株について、各プライマー対を用いて増幅されたfadB遺伝子断片の塩基配列と、配列番号５に記載の塩基配列との相同性を表２４に、各プライマー対を用いて増幅されたfadD遺伝子断片の塩基配列と、配列番号９に記載の塩基配列との相同性を表２５にそれぞれ示す。
Figure 0005591981
Figure 0005591981
表２４に示すように、増幅されたfadB遺伝子断片の塩基配列と配列番号５に記載のfadB遺伝子の塩基配列とは、９５％以上の相同性で一致していた。
また、表２５に示すように、増幅されたfadD遺伝子断片の塩基配列と配列番号９に記載の塩基配列とは、９５％以上の相同性で一致していた。
これらの結果から、本発明のオリゴヌクレオチドも用いることで、生乾き臭原因物質を産生する微生物のβ酸化関連酵素遺伝子の断片を増幅することができ、β酸化関連酵素遺伝子を迅速かつ正確に検出することができることがわかった。
実施例４ 生乾き臭原因物質を産生する微生物の環境からの検出
（１）ゲノムＤＮＡの調製
生乾き臭が発生している３つのタオルＴ１〜Ｔ３及び生乾き臭が発生していない新品のタオル（Ｔ４）を細かく裁断し、ゲノムＤＮＡ調製用キット（アプライドバイオシステムズ社製、PrepMan Ultra Reagent（商品名））を用いてゲノムＤＮＡ溶液を調製した。
（２）ＰＣＲ反応
ＤＮＡテンプレートとして上記で調製したゲノムＤＮＡ溶液を無菌蒸留水で１００倍希釈した溶液５μＬ、TaKaRa EX Taq HS（商品名、タカラバイオ社製）０．１μＬ、４種類のデオキシリボヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）混合液（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Versionに付属のｄＮＴＰ混合液）１．６μＬ、１０倍濃縮反応用バッファー（タカラバイオ社製、TaKaRa EX Taq Hot Start Versionに付属のバッファー）２μＬ、配列番号１５の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des F2、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、配列番号１６の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマー（des R2、２０ｐｍｏｌ／μＬ）０．４μＬ、無菌蒸留水１０．５μＬ混合することで、２０μＬのＰＣＲ反応液を調製した。
陰性対照（ネガティブコントロール）として滅菌蒸留水をＤＮＡテンプレートの代わりに混合したＰＣＲ反応液も同様に調製した。
上記配列番号１５の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーと配列番号１６の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーとからなるプライマーセットに代えて、表２６に示すプライマーセットを用いたこと以外は同様にして、ＰＣＲ反応液を調製した。
ＰＣＲ反応液について、自動遺伝子増幅装置サーマルサイクラーＤＩＣＥ（タカラバイオ社製）を用いて遺伝子増幅処理を行なった。ＰＣＲ反応条件は、（i）９８℃、１０秒間の熱変性反応、並びに（ii）６８℃、１分間のアニーリング及び伸長反応を４０サイクル行なった。
（３）アガロースゲル電気泳動
ＰＣＲ後、反応液を２％アガロールゲルにアプライし、ＴＢＡバッファー中、１００ボルトで３０分電気泳動を行った。次いで、ゲルを取り出し、SYBR safe DNA gel stain in 1×TAE（インビトロジェン社製）溶液中に３０分浸漬してＤＮＡ断片を染色後、ＵＶランプ照射の下ポラロイド（登録商標）カメラで撮影し、約150bpのＤＮＡ断片の有無を確認した。ＤＮＡ断片のサイズは、電気泳動時に、塩基対数が既知のＤＮＡ断片を一緒に流しておくことで、移動度の相対比較によって算出した。目的の遺伝子断片の確認結果を表２６に示す。
Figure 0005591981
生乾き臭が発生した３つのタオル（Ｔ１〜Ｔ３）すべてにおいて、ゲル上の約１５０ｂｐの位置に増幅されたＤＮＡ断片が検出された。一方、生乾き臭が発生した３つのいずれのタオルからも、分離法によりモラクセラ・エスピーが単離された。一方、生乾き臭が発生していない新品のタオル（Ｔ４）からは、遺伝子断片の増幅は確認されなかった。
以上の結果から、本発明のオリゴヌクレオチドを用いることによって、様々な菌種の菌株が存在する環境試料からも生乾き臭原因物質を産生する微生物を検出できる。
このように、生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、前記微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及び／又はβ酸化関連酵素遺伝子の発現を本発明のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を用いて検知し、前記遺伝子の発現量の変化に基づいて評価することで、生乾き臭抑制作用を高精度で簡便に評価することが可能となる。さらには、本発明の生乾き臭抑制評価方法により、脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及び／又はβ酸化関連酵素遺伝子の発現量を低下させる被験物質を選択することで、生乾き臭抑制剤のスクリーニングが可能となる。さらに、本発明のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド対を用いて脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及び／又はβ酸化関連酵素遺伝子の断片を増幅し、増幅断片の有無を確認することにより、タオルや衣類を含む繊維製品など環境に存在している、生乾き臭原因物質を産生する微生物を迅速かつ正確に検出することができる。

Claims (28)

  1. 皮脂汚れ成分存在下において生乾き臭原因物質を産生する微生物と被験物質とを接触させ、前記微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の発現を検知し、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量の変化に基づいて該被験物質の生乾き臭抑制作用を評価する、生乾き臭抑制評価方法であって、
    下記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    下記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記少なくとも１種の遺伝子の発現を検知する、生乾き臭抑制評価方法。
    （ａ）配列番号１３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ）配列番号１４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ）配列番号１５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ）配列番号１６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｅ）配列番号１７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｆ）配列番号１８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｇ）配列番号１９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｈ）配列番号２０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｉ）配列番号２１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｊ）配列番号２２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｋ）配列番号２３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｌ）配列番号２４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｍ）配列番号２５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｎ）配列番号２６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｏ）配列番号２７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｐ）配列番号２８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｑ）配列番号２９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｒ）配列番号３０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｓ）配列番号３１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｔ）配列番号３２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｕ）配列番号３３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｖ）配列番号３４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｗ）配列番号３５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｘ）配列番号３６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｙ）配列番号３７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｚ）配列番号３８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ａ１）配列番号３９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ１）配列番号４０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ１）配列番号４１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ１）配列番号４２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
  2. 前記生乾き臭原因物質が4-メチル-3-ヘキセン酸である、請求項１記載の評価方法。
  3. 前記皮脂汚れ成分がアンテイソ脂肪酸である、請求項１又は２記載の評価方法。
  4. 前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、請求項１〜３のいずれか記載の評価方法。
  5. 前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の発現を検知する、請求項４記載の評価方法。
  6. 前記β酸化関連酵素遺伝子がfadB遺伝子及びfadD遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１〜３のいずれか記載の評価方法。
  7. 前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadB遺伝子の発現を検知する、請求項６記載の評価方法。
  8. 前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadD遺伝子の発現を検知する、請求項６記載の評価方法。
  9. 前記微生物が、モラクセラ・エスピー（Moraxella sp．）又はモラクセラ・オスロエンシス（Moraxella osloensis）である、請求項１〜８のいずれか記載の評価方法。
  10. 請求項１〜９のいずれか記載の評価方法に基づき、前記少なくとも１種の遺伝子の発現量を低下させる被験物質を選択する、生乾き臭抑制剤のスクリーニング方法。
  11. 生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子及びβ酸化関連酵素遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種の断片を増幅し、増幅断片の有無を確認することにより、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法であって、
    下記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    下記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    下記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出を行う、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出方法。
    （ａ）配列番号１３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ）配列番号１４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ）配列番号１５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ）配列番号１６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｅ）配列番号１７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｆ）配列番号１８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｇ）配列番号１９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｈ）配列番号２０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｉ）配列番号２１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｊ）配列番号２２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｋ）配列番号２３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｌ）配列番号２４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｍ）配列番号２５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｎ）配列番号２６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｏ）配列番号２７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｐ）配列番号２８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｑ）配列番号２９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｒ）配列番号３０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｓ）配列番号３１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｔ）配列番号３２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｕ）配列番号３３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｖ）配列番号３４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｗ）配列番号３５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｘ）配列番号３６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｙ）配列番号３７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｚ）配列番号３８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ａ１）配列番号３９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ１）配列番号４０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ１）配列番号４１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ１）配列番号４２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
  12. 前記生乾き臭原因物質が4-メチル-3-ヘキセン酸である、請求項１１記載の検出方法。
  13. 前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、請求項１１又は１２記載の検出方法。
  14. 前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）からなるオリゴヌクレオチド対
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記Δ９デサチュラーゼ遺伝子の断片を増幅する、請求項１３記載の検出方法。
  15. 前記β酸化関連酵素遺伝子がfadB遺伝子及びfadD遺伝子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１１又は１２記載の検出方法。
  16. 前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記（ｑ）及び（ｒ）のオリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadB遺伝子の断片を増幅する、請求項１５記載の検出方法。
  17. 前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）からなるオリゴヌクレオチド対、
    前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）からなるオリゴヌクレオチド対、並びに
    前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対、
    からなる群より選ばれる少なくとも１種のオリゴヌクレオチド対を用いて、前記fadD遺伝子の断片を増幅する、請求項１５記載の検出方法。
  18. 前記微生物が、モラクセラ・エスピー（Moraxella sp．）又はモラクセラ・オスロエンシス（Moraxella osloensis）である、請求項１１〜１７のいずれか記載の検出方法。
  19. 下記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、下記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、下記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、下記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、下記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、下記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）、下記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、下記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、下記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、下記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）、下記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、下記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、下記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、下記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、又は下記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）からなるオリゴヌクレオチド対。
    （ａ）配列番号１３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ）配列番号１４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ）配列番号１５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ）配列番号１６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｅ）配列番号１７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｆ）配列番号１８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｇ）配列番号１９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号１９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｈ）配列番号２０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｉ）配列番号２１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｊ）配列番号２２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｋ）配列番号２３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｌ）配列番号２４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつ脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｍ）配列番号２５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｎ）配列番号２６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｏ）配列番号２７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｐ）配列番号２８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｑ）配列番号２９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号２９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｒ）配列番号３０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｓ）配列番号３１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｔ）配列番号３２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｕ）配列番号３３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３３に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｖ）配列番号３４に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３４に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｗ）配列番号３５に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３５に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｘ）配列番号３６に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３６に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｙ）配列番号３７に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３７に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｚ）配列番号３８に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３８に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ａ１）配列番号３９に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号３９に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｂ１）配列番号４０に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４０に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｃ１）配列番号４１に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４１に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
    （ｄ１）配列番号４２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチド、又は配列番号４２に記載の塩基配列において１個の塩基が欠失、置換、挿入若しくは付加されておりかつβ酸化関連酵素遺伝子の検出に使用できるオリゴヌクレオチド
  20. 前記オリゴヌクレオチドが核酸プライマーである、請求項１９記載のオリゴヌクレオチド対。
  21. 前記オリゴヌクレオチド（ａ）及び（ｂ）、前記オリゴヌクレオチド（ｃ）及び（ｄ）、前記オリゴヌクレオチド（ｅ）及び（ｆ）、前記オリゴヌクレオチド（ｇ）及び（ｈ）、前記オリゴヌクレオチド（ｉ）及び（ｊ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｋ）及び（ｌ）が、ポリメラーゼ連鎖反応法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来の脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、請求項２０記載のオリゴヌクレオチド対。
  22. 前記脂肪酸不飽和化酵素遺伝子がΔ９デサチュラーゼ遺伝子である、請求項２１記載のオリゴヌクレオチド対。
  23. 前記オリゴヌクレオチド（ｍ）及び（ｎ）、前記オリゴヌクレオチド（ｏ）及び（ｐ）、前記オリゴヌクレオチド（ｑ）及び（ｒ）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｓ）及び（ｔ）が、ポリメラーゼ連鎖反応法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、請求項２０記載のオリゴヌクレオチド対。
  24. 前記β酸化関連酵素遺伝子がfadB遺伝子である、請求項２３記載のオリゴヌクレオチド対。
  25. 前記オリゴヌクレオチド（ｕ）及び（ｖ）、前記オリゴヌクレオチド（ｗ）及び（ｘ）、前記オリゴヌクレオチド（ｙ）及び（ｚ）、前記オリゴヌクレオチド（ａ１）及び（ｂ１）、並びに前記オリゴヌクレオチド（ｃ１）及び（ｄ１）が、ポリメラーゼ連鎖反応法によって、生乾き臭原因物質を産生する微生物由来のβ酸化関連酵素遺伝子の発現を検知又は該遺伝子の断片を増幅するための核酸プライマーとして機能し得るものである、請求項２０記載のオリゴヌクレオチド対。
  26. 前記β酸化関連酵素遺伝子がfadD遺伝子である、請求項２５記載のオリゴヌクレオチド対。
  27. 生乾き臭原因物質を産生する微生物と、皮脂汚れ成分と、少なくとも１種の、請求項１９〜２６のいずれか記載のオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭抑制評価用キット又は生乾き臭抑制剤のスクリーニング用キット。
  28. 少なくとも１種の、請求項１９〜２６のいずれか記載のオリゴヌクレオチド対を含んでなる、生乾き臭原因物質を産生する微生物の検出用キット。
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