JP5468543B2

JP5468543B2 - アセトアミド立体異性体

Info

Publication number: JP5468543B2
Application number: JP2010523136A
Authority: JP
Inventors: アール．アボリン，クレイグ; スコットウィルキンソン，エイチ．; マッグリン，ポール; ケー．マックヴィカー，ウィリアム
Original assignee: Sunovion Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Sunovion Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2007-08-28
Filing date: 2008-08-28
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2028-08-28
Also published as: US20140135300A1; EP2195285B1; US8664441B2; WO2009032764A1; CA2696943A1; AU2008296458B2; US9499476B2; US8501994B2; CA2696943C; TW200913984A; NZ583462A; ES2684125T3; US9040588B2; KR20100047333A; AR072943A1; MX2010001978A; KR101398775B1; US20150225334A1; JP2010538010A; AU2008296458A1

Description

関連出願に対する相互参照

本出願は、米国仮出願第６０／９６６，４３８号（２００７年８月２８日出願）の優先権を主張する。前記出願の全開示は参照することにより本明細書に組み込まれる。

発明の分野

本発明は、新規なアセトアミド立体異性体と、アセトアミド立体異性体を製造する方法と、アセトアミド立体異性体を含む医薬組成物と、療法における、特に可逆性閉塞性気道疾患（喘息、嚢胞性線維症及び慢性閉塞性肺疾患（慢性気管支炎及び気腫を含む）が含まれるがこれに限定されるものではない）と関連する気管支収縮の治療におけるアセトアミド立体異性体の使用とに関するものである。

発明の背景

可逆性閉塞性気道疾患と関連する気管支収縮にかかっている患者は、気管支平滑筋をリラックスさせるために、一般に気管支拡張薬を用いて治療される。

今日一般に使われている気管支拡張薬は、２つに分類される。すなわち、β_２−選択的アドレナリン受容体アゴニスト（例えば、アルブテロール（サルブタモール）、サルメテロール、及びフォルモテロール）、並びに、ムスカリン受容体アンタゴニスト（例えば、イプラトロピウム及びチオトロピウム）である。

β_２−選択的アドレナリン受容体アゴニストは、副作用を引き起こすことがあり、これらの副作用は、一部分はβ_１−アドレナリン受容体の活性化によることがある。従って、β_２−アドレナリン受容体に対するアゴニストの選択性は、非常に重要である。なぜなら、それにより、与えることができる用量が制限され、その結果、気管支拡張の大きさ及び投与の頻度が影響されるからである。

作用時間が長いことが、薬を飲むのに使う時間を最小限に抑えるためだけでなく、不都合な時間（例えば、仕事中、授業中又は夜間）に、薬を飲まなければならないのを避けるためにも、患者にとって重要である。つい最近のβ_２−選択的アドレナリン受容体アゴニストのいくつか（特に、サルメテロール及びフォルモテロール）は、通常、約１２時間という長い作用時間を有する。フォルモテロールは、作用発現が速いという特別な利点も有する。しかしながら、フォルモテロールは、極めて良く効くために、このことが、エーロゾル投与により投与後の均一な薬物送達をもたらすような方法（すなわち、用量含量均一性）で、定量吸入器を用いる投与に対しては特に、製剤化を非常に困難にしている。更に、フォルモテロールは、水溶液中で不安定であり、このことは、その製造後の貯蔵寿命の大部分の間、ネブライザー（噴霧器）を用いる投与用液剤を冷蔵保存しなければならないということを意味する。

フォルモテロールは、α−アミノメチルベンジルアルコール誘導体のグループの中の一つである。これについては、１９７０年代の初期に、特許出願が提出されており、例えば、ＧＢ１４１５２５６がある。恐らくは、この化合物の製剤化に伴う困難のために、商品化するのに長い時間がかかったのである。化合物は、２つのキラル中心を含有し、従って、４つの立体異性体形態で存在し、単離することができる。この化合物は、最初、活性（Ｒ，Ｒ）−及び不活性（Ｓ，Ｓ）−異性体のラセミ混合物として、乾燥粉末製剤で商品化され、次に、最近では、活性（Ｒ，Ｒ）−異性体として、ネブライザー溶液で商品化された。フォルモテロールの（Ｓ，Ｒ）異性体が活性であることは、例えば、米国特許第６，３０３，１４５号明細書からも知られている。しかしながら、（Ｒ，Ｒ）−異性体のように、この化合物は、周囲温度では、水溶液中で不安定であり、従ってネブライザー溶液は、冷蔵保存する必要があるだろう。

発明の要約

驚くべきことには、（Ｓ，Ｒ）−フォルモテロール中のメトキシ基をヒドロキシ基で置き換え、且つホルミル基の水素原子をメチル基で置き換えることにより、特に魅力的な組み合わせの特性を有する異性体が得られることが、今や見出された。

従って、或る観点によれば、本発明は、式（Ｉ）：

で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

式（Ｉ）で表される化合物は、化学名Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミドで表すこともできる。

式（Ｉ）で表される異性体は、特に有利な特性を所有することが見出されている。特に、それは、β_２−アドレナリン受容体に対しては良好だがあまり高くない親和性、β_１−アドレナリン受容体を超えてβ_２−アドレナリン受容体に対する高い選択性、長い作用時間、及び周囲温度の水溶液中での良好な安定度を有する。

アセチルコリンの影響に関して、Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミドの気道抵抗に対する効果を示す図である。

発明の詳細な説明

本発明により提供される化合物が異性体であることは理解されるであろう。この異性体は、鏡像異性体的に純粋な形態で、又はそれの１以上の他の異性体との混合物の状態で存在し、単離することができる。本発明は、ＧＢ１，４１５，２５６に記載されるラセミ混合物以外の、任意の異性体混合物中の本異性体を提供するものである。特定の実施態様においては、異なる効力を示す可能性があり結果的に混合物の効力に著しい変形形態をもたらす（Ｒ，Ｒ）−鏡像異性体を、本異性体は実質的に含まない。本異性体は、（Ｒ，Ｓ）−異性体との１：１ジアステレオマー混合物として存在することができるが、しかし最も好ましくは鏡像異性体的に純粋な（すなわち、実質的にその他のすべての異性体を含まない）ものである。例えば、本異性体は、存在するすべての３−アセチルアミノ−４−ヒドロキシ−α−フェニルエチル）アミノメチルベンジルアルコールのうちの、重量で少なくとも５０％を含むことができ、好ましくは少なくとも７５％、例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％を含むことができる。

本明細書で使用する用語「薬学的に許容可能な塩」は、無機酸及び有機酸を含む薬学的に許容可能な比較的非毒性の酸から調製される塩を指す。適切な酸としては、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、炭酸、クエン酸、リン酸二水素（dihydrogenphosphoric acid）、エテンスルホン酸、フマル酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、イソ酪酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、炭酸一水素（monohydrogencarbonic acid）、リン酸一水素（monohydrogenphosphoric acid）、硫酸一水素（monohydrogensulfuric acid）、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、フタル酸、プロピオン酸、スベリン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、トルエンスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、ｍ−トルエンスルホン酸及びｏ−トルエンスルホン酸）などが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６：１−１９（１９７７）；ＳｔａｈｌａｎｄＷｅｒｍｕｔｈ，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ，ＷｉｌｅｙＶＣＨ，（２００２）を参照のこと）。更に挙げられるのは、酸性の性格を所有するその他の比較的非毒性の化合物の塩、例えば、アミノ酸（例えば、アルギニン）及びその他の化合物（例えば、アスピリン、イブプロフェン、及びサッカリン）の塩である。酸付加塩は、そのような化合物の中性形態を、所望の酸そのままか又は適切な不活性溶媒中の所望の酸の十分な量と接触させることにより得ることができる。固体としては、塩は、結晶形変態又は無定形変態で存在することができる。

本発明の化合物は、重水素化形態で、すなわち、例えばアセチル基にある１以上の水素原子が、重水素で置き換えられている形態で製造することもできる。

更に、式（Ｉ）で表される化合物のアセチル基を、フルオロアセチル基（すなわちアセチル基の水素原子のうちの１、２又は３個が、フッ素原子で置き換えられている）で置き換えることができることも考えられる。そのような化合物は、アセチル化合物の製造のための本明細書に記載する方法に似た方法により製造することができる。

アセトアミド異性体及び薬学的に許容可能なその塩は、一般式（ＩＩ）：

（式中、Ｐ^１は、水素原子又はヒドロキシル保護基を表す）
で表される化合物を、一般式（ＩＩＩ）：

（式中、Ｐ^２は、水素原子又はヒドロキシル保護基を表し、Ｐ^３は、ベンジル型アミン保護基を表す）
で表される化合物と反応させて、一般式（ＩＶ）：

で表される化合物又はその塩を得て、次に、任意の保護基Ｐ^１、Ｐ^２及びＰ^３を除去して、必要な場合には、薬学的に許容可能な酸付加塩を形成させることを含む方法により製造することができる。

保護基は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅｔａｌ．，“ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，”（Ｗｉｌｅｙ，２^ｎｄｅｄ．１９９１）に記載されている、任意の適切な保護基であることができる。ヒドロキシル保護基の例としては、アラルキル基（例えば、ベンジル基）、及びトリアルキルシリル基（例えば、ｔ−ブチル−ジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ））が挙げられる。ベンジル型アミン保護基の例は、場合により１個以上の、例えば、１、２又は３個の置換基（例えば、ハロ基、（１〜４Ｃ）アルキル基及び（１〜４Ｃ）アルコキシ基から選択される置換基）によりベンゼン環上に場合により置換されているベンジル基；又は、例えば、置換されていないベンジル基である。

式（ＩＩ）で表される化合物と式（ＩＩＩ）で表される化合物との間の反応は、便利には、２つの化合物を一緒に融解することにより、例えば、１１０〜１３０°Ｃの範囲で加熱することにより行なわれる。

Ｐ^１、Ｐ^２及びＰ^３により表される任意の保護基は、従来の手順を用いて除去することができる。例えば、ベンジル基は、パラジウム炭素の存在下に接触水素化することにより除去することができ、トリアルキルシリル基は、テトラブチルアンモニウムフルオリドで処理することにより除去することができる。

式（ＩＩ）で表される化合物は、式（Ｖ）：

（式中、Ｚは、臭素原子などの脱離原子又は脱離基を表す）
で表される化合物を、塩基、例えば、炭酸アルカリ金属（例えば、炭酸カリウム）と反応させることにより製造することができる。

式（Ｖ）で表される化合物は、式（ＶＩ）：

で表される化合物を、キラル補助基（例えば、（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−インダノール）の存在下に、例えば、ボランを用いて立体選択的に還元し、次に、ニトロ基をアミノ基に還元して、得られたアミノ基を、アセチル化することにより製造することができる。

一般式（ＩＩＩ）で表される化合物は、一般式（ＶＩＩ）：

で表される化合物を、三臭化ホウ素と反応させて、式（ＶＩＩＩ）：

で表される化合物を得ることにより製造することができる。
次いでヒドロキシル基を、ハロゲン化トリアルキルシリル（例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド）との反応により、保護することができる。

前記方法の最終生成物中に存在するすべての３−アセチルアミノ−４−ヒドロキシ−α−フェニルエチル）アミノメチルベンジルアルコールのうちで、式（Ｉ）で表される化合物が占める重量パーセンテージが、用いる出発物質の鏡像異性体純度及び用いる任意の鏡像異性体精製工程（例えば、キラル液体クロマトグラフィー）に依存するものであることは理解されるであろう。

一般式（ＩＶ）で表される中間体は、新規であると考えられ、本発明の更なる観点として提供される。

従って、別の観点によれば、本発明は、本明細書に記載する式（Ｉ）で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩を、薬学的に許容可能な担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。

本発明による医薬組成物は、経口投与、粘膜投与（例えば、鼻、舌下、膣、頬又は直腸）、非経口投与又は経皮投与の任意の都合のよい経路による患者への投与に適合させることができる。前記組成物は、例えば、溶液、懸濁液、粉末、錠剤、エーロゾル製剤、ロゼンジ、坐剤、エマルジョン、硬若しくは軟ゼラチンカプセル又はシロップ剤の形態であることができる。式（Ｉ）で表される化合物は、担体に溶解されるか、担体により希釈されるか、あるいは、担体により支持されることができる。従って、担体は、式（Ｉ）で表される化合物のための支持体、例えばカプセル、小袋（sachet）、紙又はその他の製薬容器であることができる。

或る実施態様においては、医薬組成物は、ネブライザーを用いる投与に適合した水溶液である。水性製剤は、等張性であることができ、安定のために最適ｐＨで緩衝化することができる。噴霧療法のための水性製剤は、遊離塩基若しくは不溶性塩若しくはシクロデキストリン付加物のナノ粒子懸濁液又は微粉化懸濁液であることもできる。

別の実施態様においては、医薬組成物は、定量吸入器を用いる投与に適合したエーロゾル製剤であり、前記エーロゾル製剤が、適当な噴射剤、複数の噴射剤の組み合わせ、又は噴射剤（単数又は複数）と許容可能な共溶媒若しくは他の可溶化剤との組み合わせを有する溶液中に、結晶形態のアセトアミド異性体及び噴射剤を含むものである。

噴射剤は、エーロゾル製剤に使用される任意の適切な噴射剤、例えば、ヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ；例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４）若しくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ２２７））、又は、複数の噴射剤の組み合わせであることができる。ＨＦＡ１３４が好ましい。噴射剤は、エーロゾル製剤の少なくとも９０重量％を占めることができ、エーロゾル形成を促進するために、更に、とりわけ不活性ガスを含むこともできる。

エーロゾル製剤は、更に界面活性剤を含むことができる。界面活性剤は、懸濁液にアセトアミド異性体を安定化して分散するのに役立ち、定量吸入器中の弁潤滑剤としても役立ち得る。それは、エーロゾル製剤に使用される任意の適切な界面活性剤であることができる。エーロゾル製剤に使用される界面活性剤の例は、米国特許第５，２２５，１８３号明細書に記載されている。前記明細書は、参照することにより本明細書に組み込まれる。好ましい界面活性剤は、オレイン酸である。界面活性剤は、それが存在する場合、一般に、１：１００〜１：１０（界面活性剤：アセトアミド異性体）の量で、好ましくは約１：２０の量で、存在することができる。

エーロゾル製剤は、更に共溶媒を含むことができる。エーロゾル製剤中の共溶媒の機能は、噴射剤への溶解度が乏しい可能性がある界面活性剤の溶解を促進することである。それは、エーロゾル製剤に使用される任意の適切な担体であることができる。グリセリン又はエタノールのような共溶媒を使用することができる。好ましい共溶媒は、エタノールであり、特に脱水エタノールである。エタノール含量は、便利には、重量でエーロゾル製剤の最大３０％まで、例えば２〜６％であることができる。

定量吸入器は、通常、エーロゾル製剤を含有するキャニスター（入れ物）、絞り弁、弁軸、及び弁軸を受け入れるアクチュエータを備える。使用にあたり、患者は、キャニスターをアクチュエータ中に押し下げて、吸入する。それにより、所定の製剤用量が投与され、患者の肺中に取り込まれる。

従って、更なる観点によれば、本発明は、本明細書に記載するエーロゾル製剤を含有するキャニスター、絞り弁、及びアクチュエータを備える定量吸入器を提供する。

好ましくは、キャニスター内側は、例えば保護ポリマーでコーティングされるか、又はそうでない場合には、製剤とキャニスターとの間の化学的・物理的相互作用を最小化するように処理される。吸入器は、好ましくは、０．２〜０．６０ｍｍの範囲の直径を有する開口部を有する。

更に別の実施態様においては、医薬組成物は、吸入法又はガス注入法（inhalation or insufflation）に適した乾燥粉末形態にある。組成物は、アセトアミド異性体結晶単独（例えば、空気動力学的中央粒子径（mass median aerodynamic diameter）１〜１０ミクロン、好ましくは２〜７ミクロンを有する）を含むか、あるいは、適切な薬学的に許容可能な担体（単数）又は担体（複数）と一緒にブレンド、共沈殿、共結晶化若しくは噴霧乾燥したアセトアミド異性体を含むことができる。適切な薬学的に許容可能な担体としては、無制限に、１以上の天然の若しくは合成の炭水化物（例えば単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖）、ポリオール、アミノ酸、及びタンパク質、の溶媒和物、及び／又はそれらの薬学的に許容可能なエステル、アセタール、若しくは塩の形態にあるもの（そのような誘導体が存在する場合）が挙げられる。担体は、好ましくはラクトース、より好ましくはラクトース一水和物である。乾燥粉末組成物は、吸入器若しくは注入器（inhaler or insufflator）によってそこから投与することができる単位投薬形態（例えば、カプセル若しくはカートリッジ（例えばゼラチンの）、又はブリスターパック中の単位投薬形態）で存在することができる。乾燥粉末組成物は、吸入器若しくは注入器によって計量される複数回投薬形態（multi dose form）、又は連続投与デバイス内で所定の個別用量に予め計量される複数回投薬形態で存在することができる。

便利には、乾燥粉末製剤は、複数回用量（multidose）乾燥粉末吸入器を用いて投与する。

従って、本発明は、複数回用量乾燥粉末吸入器も提供するものであって、前記アセトアミド異性体の乾燥粉末エーロゾル製剤を含有する乾燥粉末リザーバー、及び計量室を備える、前記吸入器を提供する。

本発明による式（Ｉ）で表される化合物は、ステロイド類（例えば、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、モメタゾン、ブデソニド又はフルチカゾン）、及び、ムスカリン受容体アンタゴニスト（例えば、イプラトロピウム、チオトロピウム又はグリコピロレート）から選択される１以上の他の活性成分とともに共投与することができる。従って、或る実施態様においては、本発明による医薬組成物は、更にステロイド及び／又はムスカリン受容体アンタゴニスト及び／又は新規なメカニズムを有するコントローラー薬又は気管支拡張薬を含むことができる。

別の実施態様においては、本発明による医薬組成物は、更に抗炎症薬（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の阻害薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶの阻害薬、並びに炎症誘発性インターロイキン（例えば、ＩＬ４及びＩＬ１３）に対する抗体）を含むことができる。

別の実施態様においては、本発明による医薬組成物は、更に粘液溶解薬（例えば、クロモグリケート、アセチルシステイン、アルギニン、又は２−メルカプトエタンスルホネート）を含むことができる。

別の観点によれば、本発明は、気管支収縮性疾患（bronchoconstrictive disease）を治療する方法、すなわち式（Ｉ）で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩の有効量を治療の必要な患者に投与することを含む、前記方法を提供する。

気管支収縮性疾患は、例えば、慢性閉塞性肺疾患（例えば、気腫又は気管支炎）、嚢胞性線維症、又は喘息であることができる。

患者は、ヒト、あるいは、ヒト以外の哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、メウシ、ヒツジ又はブタ）であることができ、好ましくは、患者は、ヒトである。

投与する化合物の量は、種、患者の体重及び年齢、及び治療される病態の重症度など多くの因子に依存するであろう。例えば、ヒトに投与する用量は、アセトアミド異性体７５〜５，０００μｇ（遊離塩基として計算する）を含有することができる。前記用量は、例えば、１日につき１回又は２回投与することができる。

別の観点によれば、本発明は、治療に使用するための式（Ｉ）で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。

更に別の観点によれば、本発明は、慢性閉塞性肺疾患の治療のための医薬の製造における、式（Ｉ）で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。

なお、更なる観点によれば、本発明は、慢性閉塞性肺疾患の治療のための、又は気管支拡張薬として使用するための、式（Ｉ）で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩及び薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。

前述の発明は、説明の目的のためにいくつか詳細に記載してきたが、本明細書に記載する発明の範囲から逸脱することなく変更及び修正がなされ得ることは、当業者には容易に明らかであろう。

以下の実施例は、本発明を説明する。

ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチル表し、Ｅｔ_２Ｏはジエチルエーテルを表す。

実施例１
《Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］−フェニル］アセトアミド》

《工程Ａ）（１Ｓ）−１−（３−ニトロ−４−ベンジルオキシフェニル）−２−ブロモエタン−１−オール》

ＴＨＦ（１６０ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−インダノール（４００ｍｇ，２．６８ｍｍｏｌ）の冷（５℃）溶液を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のボラン−ジエチルアニリン錯体（７．０ｇ，４３ｍｍｏｌ）の冷（０℃）溶液に滴下した。全部添加後、得られた溶液を、（０℃）で３０分間撹拌し、次いで２−ブロモ−４’−ベンジルオキシ−３’−ニトロアセトフェノン（２０．０ｇ，５７．１ｍｍｏｌ）を、３０分間にわたり３回に分けて添加した。得られた溶液を、＜５℃で１時間撹拌し、アセトン（１７ｍＬ）の滴下によりクエンチし、次いで一晩放置して周囲温度まで温めた。反応混合物を真空中で濃縮して残渣を得、これをトルエン（１００ｍＬ）に溶解して、連続的に１０％Ｈ_２ＳＯ_４（２ｘ４５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（２ｘ４５ｍＬ）及び飽和ブライン（１ｘ４０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、清澄化し、次いで〜４０ｍＬの容積まで真空中で濃縮した。ヘプタン（４５ｍＬ）をゆっくり添加して、濃厚スラリーを得た。固体をフィルター上に集めて、ヘプタン（２ｘ５ｍＬ）で洗浄した。この物質を温トルエン（〜５０ｍＬ）に溶解して、溶液を清澄化し、次いでヘプタン（５０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を３０分間撹拌して、固体を集め、ヘプタン（２ｘ５ｍＬ）で洗浄し、次いで真空中で恒量まで乾燥して、１８．９ｇ（９４．０％）の表題化合物を得た。

《工程Ｂ）（１Ｓ）−１−（３−アミノ−４−ベンジルオキシフェニル）−２−ブロモエタン−１−オール》

トルエン（４０ｍＬ）及びＴＨＦ（４０ｍＬ）中の工程Ａ）の生成物（１８．７ｇ，５３．１ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｔ_２Ｏ（３７０ｍｇ）を含有するパルシェーカーボトルに添加した。この混合物を、Ｈ_２（５０ｐｓｉ，３４４．７４ｋｐａ）雰囲気下に振盪して、反応を完結させた（１８時間）。触媒を濾過により除去して、濾液を濃縮して、油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（１ｋｇシリカゲル，ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ，１９：１で充填し溶離する）により、１１．９ｇ（６９．６％）の表題化合物を得た。

《工程Ｃ）（１Ｓ）−１−（３−アセトアミド−４−ベンジルオキシフェニル）−２−ブロモエタン−１−オール》

ピリジン（１００ｍＬ）中の工程Ｂの生成物（１０．０ｇ，３１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、周囲温度で１０分間撹拌した。無水酢酸（３．１６ｇ，３０．９ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、次いで４０℃で４．５時間撹拌した。反応混合物を周囲温度まで冷却し、次いで真空中で濃縮して、残渣を得た。この物質をＣＨ_２Ｃｌ_２（１２０ｍＬ）と１０％ＨＣｌ水溶液（５０ｍＬ）に分配した。水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を連続的にＨ_２Ｏ（１ｘ１００ｍＬ）及びブライン（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、清澄化し、次いで真空中で濃縮して、濃厚スラリーを得た。ヘキサン（６０ｍＬ）で希釈後、固体をフィルター上に集め、ヘキサン（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、次いで真空中で恒量まで乾燥して、９．４ｇ（８３％）の物質を白色固体として得た。

《工程Ｄ）（１Ｓ）−１−（３−アセトアミド−４−ベンジルオキシフェニル）−エポキシエタン》

ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）及びＴＨＦ（１５ｍＬ）中の工程Ｃの生成物（２．５ｇ，６．９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｋ_２ＣＯ_３（１．３ｇ，９．４ｍｍｏｌ）で処理して、得られた混合物を周囲温度で２．５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、残渣を得、これをＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に分配した。水層を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ，ひとつまみのＫ_２ＣＯ_３で処理して塩基性にする）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、清澄化し、次いで真空中で濃縮して、残渣を得、これを真空中で恒量まで乾燥して、１．８４ｇ（９４％）を得た。この物質を、更に精製することなく次の反応工程に使用した。

《工程Ｅ）［（１Ｒ）−Ｎ−ベンジル−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］−アミン》

ＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍＬ）中の［（１Ｒ）−Ｎ−ベンジル−２−（４−メトキシフェニル）−１−メチルエチル］アミン（５．３０ｇ，２０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＢｒ_３／ＣＨ_２Ｃｌ_２（２５．０ｍＬ，１．０Ｍ，２５．０ｍｍｏｌ）溶液を０．５時間にわたりゆっくり添加した。添加後、混合物を周囲温度で２２時間撹拌した。水（１２５ｍＬ）を添加し、続いて２．５ＭＮａＯＨ水溶液（１５ｍＬ）をｐＨ６まで添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（４ｘ２００ｍＬ）で抽出し、有機層を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）して、濃縮した。残渣（３．９ｇ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１２０ｍＬ）とともに摩砕し、次いで濃縮乾固して、表題化合物（３．８ｇ，７６％）を得た。

《工程Ｆ）［（１Ｒ）−Ｎ−ベンジル−２−（４−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシフェニル）−１−メチルエチル］アミン》

ＤＭＦ（３０．０ｍＬ）中の工程Ｅ）の生成物（３．２０ｇ，１３．３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（３．５９ｇ，２３．８ｍｍｏｌ）、及びイミダゾール（２．８６ｇ，４２．０ｍｍｏｌ）の溶液を、周囲温度で１８時間撹拌した。混合物を濃縮乾固して、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）とＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２００ｍＬ）に分配した。水層を分離して、再びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮して、油状物を得た。油状物をシリカゲル（１００ｇ，１：１ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離する）によりクロマトグラフを行ない、表題化合物（４．０ｇ，８５％）を黄褐色油状物として得た。

《工程Ｇ）Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［Ｎ’−ベンジル−［（１Ｒ）−２−（４−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］−フェニル］アセトアミド》

工程Ｄ）の生成物（１．７５ｇ，６．１８ｍｍｏｌ）及び工程Ｆ）の生成物（２．２０ｇ，６．１９ｍｍｏｌ）の混合物を、ゆっくり１１０℃まで加熱して、完全な溶液を得た。反応溶液を１２０℃で２０時間加熱した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：１）で、推定５％の出発物質の残存が示された。加熱を１２０℃で５時間継続し、次いで溶液を周囲温度まで冷却して、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（２：１）で充填し溶離するシリカゲル（２００ｇ）カラム上でクロマトグラフを行なった。精製された物質を含有する画分を合わせて、清澄化し、次いで真空中で濃縮して、表題化合物を黄色油状物、３．４ｇ（８６％）として得た。

《工程Ｈ）Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［Ｎ’−ベンジル−［（１Ｒ）−２−（４−ｔ−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミド》

５〜１０℃のＴＨＦ（２２ｍＬ）中の工程Ｇ）の生成物（２．２０ｇ，３．４４ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド／ＴＨＦ（１．０Ｍ，４．５０ｍＬ，４．５０ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌してから（注記２）、ＴＬＣ（１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で、８の完全消費が示された。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈して、Ｈ_２Ｏ（４ｘ２００ｍＬ）で脱イオン化し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、濾過し、濃縮して、粗製９（２．３ｇ）を得た。粗製物質を、１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで充填し溶離するフラッシュシリカゲル（８２ｇ，２．７ｘ３５ｃｍ）カラムにより精製した。精製された生成物を含有する画分を合わせて、濃縮して、無色粘性油状物を得た。油状物をＥｔ_２Ｏ（３ｘ２５ｍＬ）と共蒸発させて、表題化合物（９１９ｍｇ，５１％）を白色固体として得た。

《工程Ｉ）Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミド》

工程Ｈ）の生成物（９００ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素（５００ｍｇの１０ｗｔ％Ｐｄ）及びＥｔＯＨ（４５ｍＬ）の混合物を、Ｈ_２（５０ｐｓｉ，３４４．７４ｋｐａ）雰囲気下に２２時間振盪した。混合物を清澄化し、次いで真空中で濃縮して、油状残渣を得た。残渣を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（１：１，１００ｍＬ）と共蒸発させて、白色固体（５３６ｍｇ）を得た。固体のＴＬＣ（４：１ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ）は、いくらかの上位Ｒｆ不純物を示した。固体をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）／ＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解し、次いで低温度で〜１０ｍＬまで濃縮した。ヘキサン（〜２０ｍＬ）を添加して、混合物を再び低温度で濃縮して、懸濁液を得た。Ｅｔ_２Ｏ（５ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）及びヘキサン（５ｍＬ）の混合物を添加して、混合物を濃縮して、スラリーを得た。このスラリーをヘキサン（２５ｍＬ）で希釈して、懸濁液を室温で０．５時間激しく撹拌した。固体を集めて、ヘキサン（２５ｍＬ）で洗浄して、表題化合物（３１８ｍｇ，５４％）を得た；ｍ．ｐ．９７−１００℃，前軟化しながら融解（補正なし）。ＭＳｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］３４５．１。１ＨＮＭＲスペクトルは帰属した構造と一致した。

β _１及びβ _２放射性リガンド結合アッセイ
アドレナリンβ_１及びβ_２受容体に対する試験化合物の親和性を、それぞれヒト組換えβ_１及びβ_２受容体（ＣＨＯ細胞に発現する）において、［^１２５Ｉ］−シアノピドロール又は［^３Ｈ］−ＣＧＰ−１２１７７の特異的結合を置換する化合物の能力を評価することにより調べる。ＩＣ_５０は、放射性リガンドの特異的結合を５０％阻害する濃度として定義する。Ｋ_ｉは、ＩＣ_５０及び放射性リガンドの既知のＫ_Ｄから計算される（ＣｈｅｎｇａｎｄＰｒｕｓｏｆｆの式）。

この試験において、実施例１の化合物は、β_１受容体に対しては２０μＭの濃度においても特異的結合を３０％しか阻害せず、＞２０μＭのＫ_ｉを与え、β_２受容体に対しては２．２１μＭのＫ_ｉを与えることが分かった。β_１／β_２結合比は、＞９であることが分かった。

比較として、アルフォルモテロール、及びフォルモテロールの（Ｓ，Ｒ）異性体に対して見出された値は、それぞれ、０．１５５μＭ（β_１）、０．００４μＭ（β_２）及び４１（β_１／β_２）、並びに２．５０μＭ（β_１）、０．０７５μＭ（β_２）及び３３（β_１／β_２）であった。

固有活性アセスメント（β _２）
試験化合物の固有活性は、ＣＨＯ細胞に発現するヒト組換えβ_２受容体からのｃＡＭＰ産生を増加させる、その能力を評価することにより算定する。データは、プロカテロール誘発性ｃＡＭＰ増加に比較して、応答％として表す。

実施例１の化合物は、７１％の固有活性を有することが分かった。

比較として、アルフォルモテロール及び（Ｓ，Ｒ）−フォルモテロールは、それぞれ９８％及び９１％の固有活性を有することが分かった。

β _１及びβ _２アドレナリン作動活性（機能）

アドレナリンβ_１受容体における機能作動性は、ＤｕｎｋｉｎＨａｒｔｌｅｙモルモットから単離した右心房の陽性周期変動効果により証明される。５０％最大効果を与える濃度がＥＣ_５０である。

アドレナリンβ_２受容体における機能作動性は、ＤｕｎｋｉｎＨａｒｔｌｅｙモルモットから単離した気管の自発性緊張の弛緩により証明される。５０％最大効果を与える濃度がＥＣ_５０である。

これらの試験において、３０μＭの濃度でも心拍数の３２％増加しか見られなかったので、β_１機能アッセイについては実施例１の化合物に対するＥＣ_５０は測定できなかった。しかしながら、実施例１の化合物は、β_２受容体については１２０ｎＭのＥＣ_５０を有することが分かった。β_１／β_２機能比は、＞２５０であることが分かった。

比較として、アルフォルモテロールについて見出された値は、３ｎＭ（β_１）、０．０４１ｎＭ（β_２）及び７５であった。

緩衝水溶液中の安定度
溶液の調製：各試験化合物について、次の溶液を調製する。
・溶液Ａは、〜３０ｍｇの試験化合物から、１５０ｍＬの０．００５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）（〜０．２ｍｇ／ｍＬ）中に調製する。
・溶液Ｂは、次のように調製する：溶液Ａの約３０ｍＬ分割量を、分離した容器に移して、溶液のｐＨを１ＮＨＣｌ（〜０．２ｍＬ）でｐＨ３．０に調整する。
・溶液Ｃは、次のように調製する：溶液Ａの約３０ｍＬ分割量を、分離した容器に移して、溶液のｐＨを１ＮＮａＯＨ（〜０．２ｍＬ）でｐＨ〜８．０に調整する。
注記：ｐＨ調整に使用する１ＮＨＣｌ又は１ＮＮａＯＨの容積は無視できるので、溶液Ａ、Ｂ及びＣ中の試験化合物濃度は同じであった。

保存計画
・上の溶液を調製したらすぐに、各溶液の分割量を１１個のバイアル中に移した。そのうち、９個のバイアルを−２０℃で保存して、各１個をそれぞれ３０℃及び４０℃で保存する。
・下のリストに記載する間隔毎に、２個のバイアルを−２０℃の貯蔵庫から取り出して、それぞれ３０℃及び４０℃で保存する。
・対応する保存条件下（３０℃又は４０℃）の週を下の表に示す。
《表》

１２週目に、−２０℃で保存した最後のバイアルを取り出して、室温まで加温した。これが０日目の溶液である。

試料の分析：１２週目に、すべての溶液を、ｐＨ５における０日目の溶液を標準溶液として用いるＨＰＬＣ方法によりアッセイする。試験化合物を、ＵＶ検出器を備えるＨＰＬＣによりアッセイする（方法条件については表１を参照のこと）。

結論：ｐＨ３又は５においては、実施例１の化合物は、３０℃で保存するとき、少なくとも１２週間は非常に安定であることが分かった。

表３の化合物

表３において、Ｋｉ値は、Ｒｅｘ１６細胞（β１）又はＣＨＯ細胞（β２）に発現する組換えヒト輸送体を用いて確かめた。β２におけるアルフォルモテロールに対するＫｉは、３．７６ｎＭであった。Ｋｉ値が与えられない化合物については、検討した最高濃度における特異的結合の阻害パーセンテージを括弧に入れる。β_１機能活性ＥＣ_５０は、ＤｕｎｋｉｎＨａｒｔｌｅｙモルモットから単離した心房における５０ｎＭイソプロテレノールの応答に比較して、結果的に心房拍動数において５０％増加をもたらす濃度である。括弧内の値は、３０μＭの濃度における心房拍動数の増加％である。化合物Ａ（３５％）、及び化合物Ｂ（３１％）は、３０μＭ濃度においてβ_１拮抗作用の兆候を示した。β_２機能活性ＥＣ_５０は、ＤｕｎｋｉｎＨａｒｔｌｅｙモルモットから単離した気管における１５ｎＭイソプロテレノールにより誘発される応答に比較して、結果的に自発性緊張の５０％弛緩をもたらす濃度である。固有活性は、ヒトβ２アドレナリン受容体を発現するＣＨＯ細胞におけるプロカテロールの応答に比較して、ｃＡＭＰの増加を表す。表３においては、α１＝α１アドレナリン受容体、ＳＥＲＴ＝５−ＨＴ輸送体、及びＮＴ＝試験せず、を表す。二次スクリーニングの結果においては、化合物を、７２アッセイのパネルにおいて、特異的結合又は活性（ＣＹＰ４５０ｓ；シトクロムＰ４５０類）を阻害する、その能力について評価した。表示した対象は、＞５０％の特異的結合又は活性が測定されたものだけである。

図１は、アセチルコリン（Ａｃｈ）誘発性の影響に関して、式１：

で表される化合物、すなわち、Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミドの気道抵抗に対する効果を示す。図１において、Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−［［（１Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］フェニル］アセトアミドが、気管支収縮に対して有効であることを理解することができる。

Claims

式（Ｉ）：

で表される化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
Ｎ−［２−ヒドロキシ−５−［１−ヒドロキシ−２−［［（２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−メチルエチル］アミノ］エチル］−フェニル］アセトアミドの異性体混合物であって、少なくとも９０重量％の異性体：

を含む、前記異性体混合物。
一般式（ＩＶ）：

（式中、Ｐ^１及びＰ^２はそれぞれ、水素原子、又はヒドロキシル保護基としてのアラルキル基若しくはトリアルキルシリル基を表し、Ｐ^３は、水素原子、又はベンジル型アミン保護基としての、１個以上の置換基によりベンゼン環上に置換されているベンジル基若しくは置換されていないベンジル基を表すが、但し、Ｐ ^２が水素原子を表すときは、Ｐ ^３は前記ベンジル型アミン保護基であり、又は、Ｐ ^３が水素原子を表すときはＰ ^２は前記ヒドロキシル保護基を表すものとする）
で表される化合物又はその塩。
請求項１に記載の化合物若しくは薬学的に許容可能なその塩又は請求項２に記載の異性体混合物及び薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
ステロイドを更に含む、請求項４に記載の医薬組成物。
ステロイドが、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、モメタゾン、ブデソニド又はフルチカゾンである、請求項５に記載の医薬組成物。
ムスカリン受容体アンタゴニストを更に含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
ムスカリン受容体アンタゴニストが、イプラトロピウム又はチオトロピウムである、請求項７に記載の医薬組成物。
抗コリン作用薬を更に含む、請求項４〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
抗コリン作用薬がグリコピロレートである、請求項９に記載の医薬組成物。
粘液溶解薬を更に含む、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
粘液溶解薬が、クロモグリケート、アセチルシステイン、アルギニン、又は２−メルカプトエタンスルホネートである、請求項１１に記載の医薬組成物。
抗炎症薬を更に含む、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
抗炎症薬が、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）又はジペプチジルペプチダーゼＩＶの阻害薬、及び／又は、炎症誘発性インターロイキン（例えば、ＩＬ４及びＩＬ１３）に対する抗体である、請求項１３に記載の医薬組成物。
請求項１に記載の化合物の有効量を有効成分として含む、可逆性閉塞性気道疾患と関連する気管支収縮を治療するための医薬組成物。