JP5463109B2 - 抗prrsウイルス剤及びその利用 - Google Patents
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Description
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数6の中鎖脂肪酸、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む。
好ましい態様によれば、本発明の抗PRRSウイルス剤は、産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される。
本発明の好ましい態様によれば、飼料の全質量に対して、0.025〜0.25質量%の炭素数6〜12の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数6の中鎖脂肪酸、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む。
好ましい態様によれば、本発明の豚用飼料は、産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を給与する。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数6の中鎖脂肪酸、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を給与する。
本発明の好ましい態様によれば、PRRSウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の体重減少が抑制される。
1.被験物質
名称:アロマビオティック
種類:炭素数6から10の遊離中鎖脂肪酸を含む混合飼料
製造業者:ベルギー ビタメックス社
輸入販売業者:物産バイオテック株式会社
含有する飼料添加物:着香料
原材料名:ヤシ油中鎖脂肪酸、二酸化ケイ素、小麦粉
(1)ヤシ油からの炭素数6、8及び10の中鎖脂肪酸の分離方法
中鎖脂肪酸トリグリセリドを高圧水蒸気で加水分解し、炭素数6の中鎖脂肪酸(沸点:約205℃)、炭素数8の中鎖脂肪酸(沸点:約235℃)、及び炭素数10の中鎖脂肪酸(約150℃)を沸点の違いによって分留した。
(2)PRRSの予防又は治療用組成物(組成物A)の製造方法
アブラヤシを圧搾してヤシ油を得て、上記1の方法によってヤシ油中の中鎖脂肪酸を分留した。分留して得た炭素数6、8及び10の中鎖脂肪酸を混合し、さらにこの中鎖脂肪酸混合物と二酸化珪素、小麦粉及び着香料とを混合した。この混合物を篩別して、組成物Aを得た。
(1)試験材料及び方法
被験物質としては、上記2で作製した組成物Aを用いた。組成物Aの中鎖脂肪酸の組成は、中鎖脂肪酸100質量%当たり、炭素数6の中鎖脂肪酸が0〜10質量%、炭素数8の中鎖脂肪酸が50〜60質量%、炭素数10の中鎖脂肪酸が20〜40質量%であった。組成物Aは、50質量%の中鎖脂肪酸と50質量%のその他の基材からなる固形物である。
Inoueらの文献(Ryo Inoue et. al., (2007), Journal of Virological Methods, 141(1), pp.102-106)に記載の方法を一部改変して実施した。RNAの抽出は、QIAamp MinElute Virus Spin kit (Qiagen)を使用し、マニュアルに従い実施した。逆転写は、抽出RNA液8μLを使用し、PrimeScript (TaKaRa)を用いて逆転写反応を実施した。逆転写には配列表の配列番号2に記載のプライマーを使用した。プライマー濃度、反応条件等はすべてマニュアルに準拠した。リアルタイムPCRについて、プライマーは配列表の配列番号1及び2に記載のプライマーを使用し、PCRの条件はSYBR_Premix Ex Taq(Perfect Real Time; TAKARA)を使用し、以下の表2の条件で実施した。
1)リアルタイムPC R 測定
試験開始時(給与開始時)、給与開始30日後及び60日後に各群30頭のうち無作為(乱数表使用)に選出した20頭から採血し、血清中のPRRSウイルス量を測定した。さらに、PRRS ELISA抗体価の測定も併せて実施した。
2)体重測定
試験開始時(給与開始時)、給与開始30 日後及び60 日後に全頭の体重を測定した。
体重及び増体量については乱塊法による分散分析により解析を行い、有意差(p<0.05)が認められた場合には、Tukey−Kramerの方法により試験群問の差の検定を、PRRS陽性率、及びPRRS ELISA抗体価についてはχ2検定を行った。
組成物A 0.3%給与群(以下、1群)及び無給与対照群(以下、2群)のPRRSリアルタイムPCR及びPRRS ELISA抗体価を測定した結果を表4〜9に示した。
PCR陽性率では試験開始時(以下、0day)では1群及び2群ともに0.0%であった。試験開始後30 日(以下30 day)では1群で0.0%、2群で26.3%、試験開始後60日(以下60 day)では1群で0.0%、2群で36.8%であった。統計学的解析の結果では、試験開始後30日及び60日では1群で陽性率が低く、2群との間に有意な差が認められた。ELISA抗体価陽性率は、0 dayでは全ての試験群で0.0%、30 day及び60 dayでは1群で0.0%、2群で26.3%及び36.8%であった。統計学的解析の結果では、試験開始後30日及び60日では1群で陽転せず、2群との間に有意な差が認められた。
平均体重、平均増体量及び平均増体量指数を表10、総飼料摂取量、飼料要求率及び飼料要求率指数を表11に示した。
子豚にPRRSの予防又は治療用組成物である組成物Aを飼料添加給与し、離乳期におけるPRRS及び群編成等によるストレス(体重減少等)に対する臨床効果を検討するために、2008年4月から7月にかけて京都府下の養豚場で試験を実施した。試験群は組成物Aを離乳直後の子豚に60日間0.3%飼料添加給与する群、及び無給与で観察する群の2群を設定し、各群に体重及び日齢が均一になるように30頭ずつの離乳豚を割り付けた。観察項目は、リアルタイムPCR測定(PRRS:各群20頭)、PRRS ELISA抗体価測定(各群20頭)、体重測定(全頭)、飼料摂取量測定(全頭)とした。その結果、PRRSにおけるリアルタイムPCR陽性率は試験開始時には2群間に差は認められなかったものの、試験開始30日後及び60日後では組成物A給与群は有意に低値を示し、PRRSウイルスの排泄量を抑制したものと推察された。平均増体量は、組成物A給与群において高値を示したものの、全ての期間において統計学的な差は認められなかった。以上の結果から、組成物Aを離乳直後の子豚に60日間0.3%飼料添加給与することで、PRRSウイルス排泄を抑制する効果が明らかとなり、離乳期の群編成等によるストレスの軽減効果が望めるものと示唆された。
(1)試験材料及び方法
1.被験物質
名称:アロマビオティック:Lot No.080595941
種類:炭素数6から10の遊離中鎖脂肪酸を含む混合飼料
製造業者:ベルギー ビタメックス社
輸入販売業者:物産バイオテック株式会社
含有する飼料添加物:着香料
原材料名:ヤシ油中鎖脂肪酸、二酸化ケイ素、小麦粉
アロマビオティックを分娩予定30日前の母豚の飼料中に添加(妊娠期0.1%、授乳期0.2%)して自由摂餌させることにより経口投与した。観察期間は母豚は投与開始時から離乳時まで、母豚の産子(離乳時に各群30頭選抜)は離乳後30日までとし、検査項目は血清のPPRSウイルス量の測定(リアルタイムPCR)、試験期間中の臨床観察及び体重測定とした。また、無投与の対照群を設け、比較検討した。
PRRS汚染農場の妊娠後期(分娩予定30日前)の母豚10頭を、下記試験群に各5頭ずつ割り付け、これら母豚の産子を離乳までは産子全頭、離乳から離乳後30日までは無作為に各群30頭を選抜し、両群合わせて60頭について観察を行った。
(1)母豚
農場の慣行に従い飼育管理した。
1)母豚
分娩予定の30日前、分娩時、及び離乳時の3回、全頭について採血し、血清中のPRRSウイルス量をリアルタイムPCR測定により測定した。リアルタイムPCRは、実施例1と同様に行った。
離乳時(25日齢)及び離乳後30日(55日齢)に各群30頭のうち無作為に選出した20頭から採血し、血清中のPRRSウイルス量をリアルタイムPCR測定により測定した。リアルタイムPCRは、実施例1と同様に行った。
子豚について、分娩時及び採血時に全頭の体重を測定し、増体重を算出した。
また、子豚の一般状態(死亡その他の特記事項)も観察した。
体重及び増体重についてはt検定により試験群間の差の検定を行った。死亡率、PRRS陽性率、及び離乳時から離乳後30日の期間で体重減少を示した個体の割合についてはχ2検定を行った。
(2−1)PRRSリアルタイムPCR測定
母豚の個体別のPRRSリアルタイムPCR測定結果を表15に示す。産子子豚の個体別のPRRSリアルタイムPCR測定結果を表16に示す。
産子子豚の平均体重、平均増体重、及び平均増体重指数を表17に示し、個体別の体重測定結果を表18及び表19に示す。
子豚の死亡率を表20に示す。死亡率は1群で3.3%、2群で16.7%であり、1群で低い値を示した。
死亡豚の菌分離結果、及び採血可能であった死亡豚のPRRSリアルタイムPCR測定結果を表21に示す。
離乳時の母豚のリアルタイムPCR検査における検出率がアロマビオティック投与群では0%であるのに対し、無投与対照群では40%であり、その検出量は平均で1.E+09(copies/mL)と高い値を示しており、PRRSの感染が確認された。また子豚でのリアルタイムPCR検査における検出率についても、離乳後30日でアロマビオティック投与群が0%であるのに対し、無投与対照群では75%で、その検出量の平均は6.E+08(copies/mL)と高い値を示し、母豚同様にPRRSVの感染が確認された。さらに、対照群では離乳時にPRRSウイルスが検出された母豚(No.245,196)の子豚は検出率100%を示し、当該疾病の母豚から子豚への垂直感染の可能性が示唆され、またウイルス感染が確認されなかった母豚(No.193, 199)の子豚においてもPRRSV検出率が高かったことから、子豚から子豚への水平感染が明らかであった。一方、アロマビオティック投与群では母豚及びその産子とも全頭PRRSVの排泄は認められなかった。これらのことからアロマビオティック投与がPRRSウイルスの排出を抑制し、当該疾病の病勢を軽減させることが判明した。
Claims (10)
- 少なくとも1種の炭素数6〜12の中鎖脂肪酸及び/又はその塩を有効成分として含む、抗PRRSウイルス(豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス)剤。
- 中鎖脂肪酸として、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む、請求項1に記載の抗PRRSウイルス剤。
- 中鎖脂肪酸として、炭素数6の中鎖脂肪酸、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を含む、請求項1に記載の抗PRRSウイルス剤。
- 産まれてくる子豚の死亡率を改善するために使用される、請求項1から3の何れかに記載の抗PRRSウイルス剤。
- 産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される、請求項1から3の何れかに記載の抗PRRSウイルス剤。
- 豚に、少なくとも1種の炭素数6〜12の中鎖脂肪酸及び/又はその塩を給与することを含む、PRRSウイルスを抑制する方法。
- 中鎖脂肪酸として、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を給与する、請求項6に記載の方法。
- 中鎖脂肪酸として、炭素数6の中鎖脂肪酸、炭素数8の中鎖脂肪酸、及び炭素数10の中鎖脂肪酸を給与する、請求項6に記載の方法。
- PRRSウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の死亡率が改善される、請求項6から8の何れかに記載の方法。
- PRRSウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の体重減少が抑制される、請求項6から8の何れかに記載の方法。
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