JP5377288B2 - 慢性関節リウマチの治療に有用な、マクロファージの活性を調整するペプチド - Google Patents
慢性関節リウマチの治療に有用な、マクロファージの活性を調整するペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP5377288B2 JP5377288B2 JP2009508423A JP2009508423A JP5377288B2 JP 5377288 B2 JP5377288 B2 JP 5377288B2 JP 2009508423 A JP2009508423 A JP 2009508423A JP 2009508423 A JP2009508423 A JP 2009508423A JP 5377288 B2 JP5377288 B2 JP 5377288B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- citrullinated
- sequence
- residue
- amino acids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
a)抗シトルリン化ペプチド自己抗体(ACPA)を該ACPAと反応性のシトルリン化ペプチド抗原と、該ACPAと該シトルリン化抗原との間の免疫複合体の形成を可能にする条件下で接触させ;
b)a)で形成した前記免疫複合体をマクロファージと、該免疫複合体による該マクロファージの活性化を可能にする条件下で接触させ、該マクロファージにより産生される少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの量を決定し;
c)工程a)及び工程b)を繰返し(ここで、該両工程の一方及び/又は他方は試験分子の存在下で繰り返される);
d)産生される炎症促進性サイトカインの量を前記試験分子の非存在下と該試験分子の存在下とで比較すること
を含んでなることを特徴とする、分子の炎症調整特性をインビトロで評価する方法である。
− 試験分子の各々を用いて、上記のように、該分子の炎症調整特性を評価する方法を実施し;
− マクロファージにより産生される炎症促進性サイトカインの量を改変し得る分子を選択すること
を含んでなることを特徴とする、炎症調整分子を選択する方法である。
−配列X1PAPPPISGGGYX2AX3 (配列番号1)(ここで、X1、X2及びX3は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、残基X2又はX3の少なくとも一方はシトルリル残基である)により規定されるペプチド;
−配列GPX1VVEX2HQSACKDS (配列番号2)(ここで、X1及びX2は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、残基X1又はX2少なくとも一方はシトルリル残基である)により規定されるペプチド;
−配列SGIGTLDGFX1HX2HPD (配列番号3)(ここで、X1及びX2は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、残基X1又はX2少なくとも一方はシトルリル残基である)により規定されるペプチド;
−配列X1GHAKSX2PVX3GIHTS (配列番号5)(ここで、X1、X2及びX3は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、残基X1、X2又はX3の少なくとも1つはシトルリル残基である)により規定されるペプチド;
−上記ペプチドの1つの少なくとも5つの連続アミノ酸、好ましくは少なくとも7つの連続アミノ酸、有利には8〜14の連続アミノ酸(このうちの少なくとも1つはシトルリル残基である)を含んでなるペプチド。この場合、ペプチドは、好ましくは5〜25アミノ酸のサイズ、全く好ましくは10〜20アミノ酸のサイズを有する。
−配列番号1の配列(ここで、少なくともX3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド;
−配列番号2の配列(ここで、少なくともX2はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド;
−配列番号4の配列(ここで、少なくともX1はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド;
−配列番号5の配列(ここで、少なくともX3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド。
−配列番号1の配列(ここで、X1、X2及びX3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列を含んでなる少なくとも16アミノ酸のペプチド;
−配列番号2の配列(ここで、X1及びX2はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド;
−配列番号4の配列(ここで、X1及びX2はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド;
−配列番号5の配列(ここで、X1、X2及びX3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも10連続アミノ酸のフラグメントを含んでなるペプチド。
図1:シトルリン化フィブリノゲン又は非シトルリン化フィブリノゲンと種々の濃度(0、0.28、0.56、1.13、2.25、4.50及び9.00mg/ml)のACPA(IgG ACPA+)又はコントロールIgGとの存在下でマクロファージが分泌するTNF-αの量(pg/ml)の測定。TNF-αの量は、熱凝集IgG(凝集IgG)又は細菌リポ多糖(LPS)の存在下に置いたか、又はマクロファージ-SFM培地単独(培地)中に放置したマクロファージでも測定する。
本実施例は、ACPAと該ACPAと反応性のシトルリン化エピトープとから形成された免疫複合体でのマクロファージのインビトロ刺激用モデルの作製に関する。
健常個体からの血液又は白血球濃縮物のサンプル(フランス血液バンク(Etablissement Francais du Sang), Toulouse, France)を使用し、フィコール(Ficoll 400(登録商標), Biocoll isoton分離溶液1.077g/ml, Biochrom AG, Berlin, Germany)で1200gにて20分間の遠心分離により、0.1%の血清アルブミン(BSA, Sigma-Aldrich Chimie, St Quentin Fallavier, France)及び0.6%のクエン酸ナトリウムを含有するpH7.4のPBS(リン酸緩衝化生理食塩水)(今後、この溶液をPBNaCitと呼ぶ)中50/50に希釈した30mlの細胞懸濁液あたり15mlのフィコールの速度で、残渣及び他の血液細胞から単核細胞を分離する。25mlのPBNaCitでの2回の洗浄後、0.4%トリパンブルーで染色された細胞を数えることにより生存細胞を計数する。磁性ビーズ(CD14 MicroBeads, Miltenyi Biotec, Paris, France)にカップリングした抗ヒトCD14抗体を用いて、単球系統の細胞(CD14マーカーを発現する)のポジティブ選別を行う。140×106の単核細胞あたり140μlの抗CD14抗体と1200μlのPBNaCitの比率で加えた混合物を4℃にて15分間インキュベートする。25mlのPBNaCitでの洗浄後、細胞上清を、1mlのPBNaCitで条件付けし磁界中に配置した強磁性ビーズを含有するカラム(MS column, Miltenyi Biotec)に負荷する。CD14を発現しない細胞を排除するための500μlのPBNaCitでの3回の洗浄後、カラムを磁界から取り出し、抗CD14抗体で標識された細胞を500μlのPBNaCitでフラッシュする。0.4%トリパンブルーで染色された細胞を数えることにより生存細胞を計数する。続いて、単球を、106生存細胞/mlで、テフロン(登録商標)ウェルにおいて、ウシ胎仔血清(10%, v/v, Biowest, Nuaille, France)及び100ng/mlのM-CSF(マクロファージコロニー刺激因子)(Peprotech, Levallois-Perret, France)を補充したマクロファージ-SFM培地(ヒト末梢単球及びマクロファージの培養用に設計された無血清培地;Gibco, Invitrogen, Cergy Pontoise, France)中、5%CO2を含有する雰囲気下37℃にて7日間培養する。このインキュベーションの終時にマクロファージを得る。マクロファージをマクロファージ-SFM培地中で洗浄し、次いで0.4%トリパンブルーで染色された細胞を数えることにより生存細胞を計数する。
Gタンパク質カラム(HiTrap Protein G, GE Healthcare, Orsay, France)での製造業者が推奨する条件に従うアフィニティークロマトグラフィーにより、精製ヒトフィブリノゲン(Calbiochem, Meudon, France)の市販調製物から、残留する夾雑IgGを取り除く。続いて、フィブリノゲンを、10mM CaCl2及び5mMのジチオスレイトールを含有する0.1M Tris-HCl緩衝液(pH7.4)中、7U酵素/mgフィブリノゲンの割合のウサギ骨格筋ペプチジルアルギニンデイミナーゼ(Sigma-Aldrich)の存在下又は非存在下で37℃にて2時間インキュベートする。続いて、(このジスルフィド架橋還元緩衝液中でのインキュベーション後に解離した)フィブリノゲンを構成する種々の鎖を、PBSに対しての透析により再会合させる(当該種々の鎖の完全な再会合が得られるまで行い、再会合は非還元条件下でのSDS-PAGEにより検証する)。こうして2つのフィブリノゲン調製物を得る:シトルリン化フィブリノゲン調製物(酵素の存在下でインキュベート)及び非シトルリン化フィブリノゲン調製物(酵素の非存在下でインキュベート)。
PBS中2mg/mlの健常個体からの精製ヒトIgG(Sigma-Aldrich)の溶液を63℃にて20分間インキュベートすることにより、可溶性の凝集化ヒトIgG(以後、凝集化IgGと呼ぶ)を調製する。12000gでの遠心分離後、可溶性凝集化ヒトIgGを含有する上清を回収し、即時(extemporaneously)に使用する。
5mlのGタンパク質カラム(HiTrap Protein G, GE Healthcare, Orsay, France)でのアフィニティークロマトグラフィーにより、RAに罹患し高い血清ACPA価を有している患者からの38血清の等量混合物のIgG画分を単離することによって、ACPA陽性IgG(以後、IgG ACPA+と呼ぶ)の混合物を調製する。0.02M KH2PO4/K2HPO4緩衝液(pH7.0)中でのカラムの平衡化後、同じ緩衝液中1/4に希釈し0.22μmフィルターを通過させた40mlの血清混合物を、このカラムに2ml/分の速度で負荷する。カラムを、1MのNaClを含有する5容量の0.02M KH2PO4/K2HPO4(pH7.0)で洗浄した後、総IgG ACPA+を、0.2M、pH2.7のグリシン-HCl緩衝液中に溶出させる。2M Trisの添加により、溶出画分を直ぐに中性pHにする。IgGに最も富む画分は、280nmの光学密度(Biophotometer Eppendorf, Eppendorf, Dominique Dutscher, Brumath, France)をモニターすることによって検出し、一緒にして、0.5MのNaClを含有し0.22μmフィルターを通過させた0.02M KH2PO4/K2HPO4(pH7.0)に対して透析し、次いでアリコートに小分けして使用まで−20℃にて保存する。精製の質は、SDS-12.5% PAGEゲル中、PHAST-system automat (GE Healthcare, Orsay, France)での電気泳動後にクーマシーブルーで染色することによって検証する。
全てが2つの参照アッセイ:ラット食道の凍結切片に対する間接免疫蛍光(Vincent Cら, Ann Rheum Dis 48, 712-22, 1989)及びヒトシトルリン化フィブリノゲンに対するELISA(Chapuy-Regaud Sら, Clin Exp Immunol, 139:542-50, 2005)によるACPAのアッセイ後に0の力価を有する20のヒト血清の等量混合物のIgG画分を単離することによって、ACPA陰性IgG(以後、コントロールIgGと呼ぶ)の混合物を調製する。IgG画分の単離は、IgG ACPA+の調製に使用したプロトコルに正確に従って、Gタンパク質カラムでのアフィニティークロマトグラフィーにより行う。
ACPAとシトルリン化フィブリノゲンとが会合するICの再構成は、滅菌条件下で、平底96ウェル培養プレート(Nunclon delta, Nunc, Roskilde, Denmark)を、50μl/ウェルの割合で加え4℃にて一晩インキュベートして10μg/mlのヒトシトルリン化フィブリノゲンでコーティングすることによって行う。続いて、プレートをPBS(pH7.4)、2% BSA(180μl/ウェル)中で1時間4℃にて飽和させる。PBS(pH7.4)、0.1% Tween-20中で3回の洗浄後、ウェルを、2% BSA及び2M NaClを含有するPBS中で希釈した種々の濃度(9〜0.28mg/mlの範囲)の100μlのIgG ACPA+と2時間4℃にてインキュベートする。プレートの底にコーティングする抗原として非シトルリン化ヒトフィブリノゲンを用いるか又は抗体としてコントロールIgGを用い同様にして陰性コントロールを作成する。シトルリン化ヒトフィブリノゲン又は非シトルリン化ヒトフィブリノゲンのみでコーティングし、PBS(pH7.4)、2% BSA中で飽和させたウェルもまた、陰性コントロールとして使用する。
PBS(pH7.4)、0.1% Tween-20中での3回の洗浄、次いでPBS中での3回の洗浄後、200μlの容量中に50000生存細胞/ウェルの割合でマクロファージを加える。5% CO2を含有する雰囲気下で37℃にて24時間のインキュベーション後、上清を回収し(160μl/ウェル)、分析するまで、迅速に−20℃に凍結させる。活性化についての陰性コントロールは、マクロファージ-SFM培地単独中のマクロファージを使用して行う。受動吸着により培養プレートの底に固定化された凝集化IgG(ウェルあたり5μg/mlの溶液100μlの割合で)上に播種されたか、又はリポ多糖(LPS、0.5μg/mlの最終濃度のEscherichia coli 0.55:B5;Sigma-Aldrich Chimie)の存在下で播種されたマクロファージを、TNF-α合成を誘導する刺激に対して応答するマクロファージの能力についてのコントロールとして使用する。
捕捉抗体、検出抗体及び7.8〜500pg/mlの較正範囲を作成するための組換えヒトTNF-αを含んでなるヒトTNF-α用のELISAアッセイキットを使用して、培養上清中のこのサイトカインをアッセイした(human TNF-alpha BD OptEIA(商標) ELISA Set, BD Biosciences Pharmingen, Pont-de-Claix, France)。
得られた結果を図1に示す。これらデータは、異なる個体のマクロファージを用いて行った合計10の実験のうちの7つの異なる実験の結果を表す。
本発明者らは、ACPAにより特異的に認識されるエピトープを有する幾つかのフィブリン由来シトルリン化ペプチドを同定した。
これらペプチドを表1に列挙する。
アミノ酸残基については標準的な一文字表記を使用する。Xはシトルリル残基を示す。
ELISA法によるこの競合アッセイの技術的詳細を下記に示す。
このELISA競合アッセイの結果を図2に示す。データは、IgG ACPA+の2つの異なる調製物を用いて行った3つの実験を代表するものである。結果は、競合ペプチドの存在下で得られた反応性の阻害の程度として表す。
マクロファージの調製及び刺激は、ICの再構成を、培養プレートの底に固定化したシトルリン化フィブリノゲンとのインキュベーションの2時間前に加えた2種類の濃度(0.8及び4mg/ml)の競合ペプチドβ60-74cit60,72,74の存在下又は非存在下、2MのNaCl及び2%のBSAを含有するPBS中1.13mg/mlに希釈したIgG ACPA+を用いて行ったこと以外は、正に実施例1に記載の条件下で行う。シトルリン化フィブリノゲン又は非シトルリン化フィブリノゲン(0.4 mg/ml)及び非シトルリン化ペプチドβ60-74(0.8及び4mg/ml)との競合もまた、コントロールとして行う。
この阻害アッセイの結果を図3に示す。これらデータは、2つの異なる個体からのマクロファージを用いて行った2つの異なる実験の結果を表す。
Claims (10)
- シトルリン化ペプチドが、抗シトルリン化ペプチド自己抗体(ACPA)と該ACPAにより認識されるシトルリン化抗原との免疫複合体でインビトロで活性化されたマクロファージにより産生されるTNF-αの量を減少させることができ、以下のペプチド:
a)フィブリンβ鎖に由来し、配列X1PAPPPISGGGYX2AX3(配列番号1)(ここで、X1及びX2は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、X3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は前記配列のシトルリン残基X3を含む少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;及び
b)フィブリンα鎖に由来し、配列GPX1VVEX2HQSACKDS(配列番号2)(ここで、X1及びX2は各々シトルリル残基又はアルギニル残基を表し、残基X1又はX2の少なくとも一方はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は前記配列のシトルリン残基としてX1及び/又はX2を含む少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
から選択されることを特徴とする、シトルリン化ペプチドを含んでなる炎症性疾患の治療用医薬。 - シトルリン化ペプチドが、以下:
−配列番号1の配列(ここで、X1及びX2は各々アルギニル残基を表し、X3はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号1の配列(ここで、X1はアルギニル残基であり、X2及びX3は各々シトルリル残基を表す)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号1の配列(ここで、X2はアルギニル残基であり、X1及びX3は各々シトルリル残基を表す)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる16〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号1の配列(ここで、X1、X2及びX3は各々シトルリル残基を表す)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる16〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号2の配列(ここで、X1はアルギニル残基であり、X2はシトルリル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号2の配列(ここで、X1はシトルリル残基であり、X2はアルギニル残基である)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
−配列番号2の配列(ここで、X1及びX2は各々シトルリル残基を表す)により規定されるペプチド、又は該配列の前記シトルリル残基を含有する少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントを含んでなる5〜25アミノ酸のペプチド;
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項1に記載の医薬。 - 前記少なくとも5つの連続アミノ酸のフラグメントが、少なくとも7つの連続アミノ酸からなることを特徴とする、請求項1又は2に記載の医薬。
- 末端カルボキシル(COOH)官能基がカルボキサミド(CONH2)官能基で置換されていることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の医薬。
- 前記炎症性疾患が慢性関節リウマチであることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の医薬。
- a)抗シトルリン化ペプチド自己抗体(ACPA)を該ACPAと反応性のシトルリン化ペプチド抗原と、該ACPAと該シトルリン化抗原との免疫複合体の形成を可能にする条件下で接触させ;
b)a)で形成した前記免疫複合体をマクロファージと、該免疫複合体による該マクロファージの活性化を可能にする条件下で接触させ、該マクロファージにより産生される少なくとも1つの炎症促進性サイトカインの量を決定し;
c)工程a)及び工程b)を繰返し(ここで、該両工程の一方及び/又は他方の工程は試験分子の存在下で繰り返される);
d)産生される炎症促進性サイトカインの量を前記試験分子の非存在下と存在下とで比較すること
を含んでなることを特徴とする、分子の炎症調整特性をインビトロで評価する方法。 - − 前記試験分子の各々を用いて請求項6に記載の方法を実施し;
− マクロファージにより産生される炎症促進性サイトカインの量を改変し得る分子を選択すること
を含んでなることを特徴とする、炎症調整分子を選択する方法。 - 抗炎症性分子を選択する方法であり、マクロファージにより産生される炎症促進性サイトカインの量を減少させ得る分子を選択することを含んでなることを特徴とする請求項7に記載の方法。
- 前記シトルリン化ペプチド抗原が、シトルリン化フィブリノゲン、シトルリン化フィラグリン、シトルリン化ビメンチン及びそれらのシトルリン化フラグメント並びにそれらの混合物を含んでなる群より選択されることを特徴とする、請求項6〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 定量される前記炎症促進性サイトカインがTNF-αであることを特徴とする、請求項6〜9のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0603956A FR2900657B1 (fr) | 2006-05-03 | 2006-05-03 | Identification de modulateurs de l'activation des macrophages, utilisables pour le traitement de la polyarthrite rhumatoide |
FR06/03956 | 2006-05-03 | ||
PCT/FR2007/000758 WO2007125226A2 (fr) | 2006-05-03 | 2007-05-03 | Peptides modulateurs de l'activation des macrophages, utilisables pour le traitement de la polyarthrite rhumatoïde |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009536182A JP2009536182A (ja) | 2009-10-08 |
JP2009536182A5 JP2009536182A5 (ja) | 2010-06-17 |
JP5377288B2 true JP5377288B2 (ja) | 2013-12-25 |
Family
ID=37401063
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009508423A Active JP5377288B2 (ja) | 2006-05-03 | 2007-05-03 | 慢性関節リウマチの治療に有用な、マクロファージの活性を調整するペプチド |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9388226B2 (ja) |
EP (1) | EP2026830B1 (ja) |
JP (1) | JP5377288B2 (ja) |
CA (1) | CA2650864C (ja) |
DK (1) | DK2026830T3 (ja) |
ES (1) | ES2392882T3 (ja) |
FR (1) | FR2900657B1 (ja) |
WO (1) | WO2007125226A2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008000714A1 (en) * | 2006-06-26 | 2008-01-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Peptidylarginine deiminase and uses thereof in the production of citrullinated proteins and peptides |
WO2010015633A1 (de) * | 2008-08-04 | 2010-02-11 | Synmed Research Gmbh | Verfahren zur charakterisierung, insbesondere quantifizierung, von durch, aus dem gewebe in die blutbahn rezirkulierten, blutmakrophagen intrazellulär aus gewebe aufgenommenen molekularen markern sowie analyseanordnung zur durchführung des verfahrens |
EP2968435B1 (en) | 2013-03-12 | 2019-01-30 | Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. | Synthetic peptides for the treatment of autoimmune diseases |
FR3120877A1 (fr) * | 2021-03-19 | 2022-09-23 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Cellule immunitaire comprenant un récepteur Fc à sa surface, et sur lequel est greffé une molécule hybride comprenant un fragment Fc d’anticorps et au moins un peptide citrulliné dérivé de la fibrine, et ses utilisations |
WO2024057793A1 (ja) * | 2022-09-13 | 2024-03-21 | 国立大学法人信州大学 | 癌転移を抑制するシトルリン化ペプチド |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1034186A2 (en) * | 1997-11-28 | 2000-09-13 | Innogenetics N.V. | Synthetic peptides containing citrulline recognized by rheumatoid arthritis sera as tools for diagnosis and treatment |
FR2773078B1 (fr) * | 1997-12-30 | 2000-05-26 | Univ Toulouse | Utilisation de peptides citrullines derives de la filaggrine pour le traitement de la polyarthrite rhumatoide |
FR2795735B1 (fr) * | 1999-07-01 | 2001-09-07 | Univ Toulouse | Derives citrullines de la fibrine et leur utilisation pour le diagnostic ou le traitement de la polyarthrite rhumatoide |
GB0030309D0 (en) * | 2000-12-12 | 2001-01-24 | Univ Aberdeen | Antibodies,Peptides,Analogs and uses thereof |
DE50114771D1 (de) * | 2000-12-12 | 2009-04-23 | Fibrex Medical Res & Dev Gmbh | Peptide und/oder Proteine sowie ihre Verwendung zur Herstellung eines therapeutischen und/oder präventiven Arzneimittels |
WO2006048556A1 (fr) | 2004-11-04 | 2006-05-11 | Biomerieux | Peptides citrullines derives de la fibrine reconnus par des auto-anticorps specifiques de la polyartrhite rhumatoide, et leurs utilisations |
-
2006
- 2006-05-03 FR FR0603956A patent/FR2900657B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-05-03 US US12/299,107 patent/US9388226B2/en active Active
- 2007-05-03 EP EP07765933A patent/EP2026830B1/fr active Active
- 2007-05-03 WO PCT/FR2007/000758 patent/WO2007125226A2/fr active Application Filing
- 2007-05-03 JP JP2009508423A patent/JP5377288B2/ja active Active
- 2007-05-03 ES ES07765933T patent/ES2392882T3/es active Active
- 2007-05-03 DK DK07765933.2T patent/DK2026830T3/da active
- 2007-05-03 CA CA2650864A patent/CA2650864C/fr active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20090298778A1 (en) | 2009-12-03 |
FR2900657B1 (fr) | 2009-04-17 |
US9388226B2 (en) | 2016-07-12 |
EP2026830A2 (fr) | 2009-02-25 |
DK2026830T3 (da) | 2012-10-08 |
WO2007125226A2 (fr) | 2007-11-08 |
CA2650864A1 (fr) | 2007-11-08 |
FR2900657A1 (fr) | 2007-11-09 |
ES2392882T3 (es) | 2012-12-14 |
WO2007125226A3 (fr) | 2007-12-27 |
JP2009536182A (ja) | 2009-10-08 |
EP2026830B1 (fr) | 2012-06-27 |
CA2650864C (fr) | 2015-02-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sarfati et al. | Elevation of IgE-binding factors in serum of patients with B cell-derived chronic lymphocytic leukemia | |
Bayne et al. | Immunocytochemical detection of interleukin 1 within stimulated human monocytes. | |
JP4932112B2 (ja) | 診断及び治療用エピトープ並びにトランスジェニック植物 | |
KR20000016414A (ko) | Apl 면역반응성 펩티드, 그것의 콘주게이트 및 apl항체-매개병변의 치료방법 | |
JP5060300B2 (ja) | リウマチ性関節炎特異的自己抗体により認識されるフィブリン由来シトルリンペプチド、及びその使用 | |
JP5377288B2 (ja) | 慢性関節リウマチの治療に有用な、マクロファージの活性を調整するペプチド | |
JP2002371008A (ja) | p43のN末端ペプチドを有効成分とする免疫増強剤 | |
Bond et al. | Multiple Amb a I allergens demonstrate specific reactivity with IgE and T cells from ragweed-allergic patients. | |
JP2003517284A (ja) | 免疫応答を変調する方法及び組成物 | |
RU2199548C2 (ru) | Новые пептиды, которые могут быть использованы в антиген-специфической иммуносупрессорной терапии | |
Rogers et al. | Recombinant Fel d I: Expression, purification, IgE binding and reaction with cat-allergic human T cells | |
JP3778936B2 (ja) | インシュリン依存性糖尿病(iddm)患者に作用する免疫反応および免疫治療分子 | |
EP3294901B1 (en) | Autoantigens for diagnosis of rheumatoid arthritis | |
Korn | Immunologic aspects of scleroderma | |
Svenson et al. | Cytokine vaccination: neutralising IL-1α autoantibodies induced by immunisation with homologous IL-1α | |
US4925920A (en) | Immunosuppressive polypeptides | |
WO2005086578A2 (en) | Anti-inflammatory peptides and methods of use thereof | |
TW581812B (en) | Assay for the diagnosis of schizophrenia based on a new peptide | |
Ellis et al. | Coeliac disease: characterisation of monoclonal antibodies raised against a synthetic peptide corresponding to amino acid residues 206-217 of A-gliadin. | |
RU2233290C2 (ru) | Новые пептиды для применения в иммунотерапии аутоиммунных заболеваний | |
JPH06503647A (ja) | ヒトホスホリパーゼ活性化タンパク質および慢性関節リウマチの診断の方法 | |
FR2908134A1 (fr) | Identification de modulateurs de l'activation des macrophages, utilisables pour le traitement de la polyarthrite rhumatoide | |
JP4557421B2 (ja) | 自己免疫疾患を治療するためのフィラグリン由来シトルリンペプチドの使用 | |
Steinman et al. | Autoimmunity against Fibrinogen | |
MXPA98008866A (en) | Novedosos peptidos suitable for use in antig specific immunosuppressive therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100420 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100420 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120529 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120806 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120813 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121105 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130402 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130611 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130903 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130924 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5377288 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |