JP5345677B2 - 血液を分離および分析する装置並びにその方法 - Google Patents
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Description
a)血漿と赤血球とを分離する分離手段であって、
血液試料を受け入れかつ前記血液試料に対する希釈液を備えるチャンバと、
希釈された血液試料からの血漿と、任意に抗体と複合化されるFABPとが通過することができるが、少なくとも赤血球は通過することができないフィルタと、
分離された血漿を提供するために、前記血液試料の少なくとも一部を押圧して前記フィルタに通す押圧手段と、
が設けられた分離手段と、
b)分離された血漿を採集する採集手段と、
を備え、
前記分離手段および/または前記採集手段は、
FABPの第1エピトープに対する検出抗体であって、検出可能な標識と結合されかつ分離された血漿と接触することができる検出抗体と、
前記第1エピトープとは異なるFABPの第2エピトープに対する捕捉抗体であって、前記採集手段に固定化形態で提供されることが可能でありかつ分離された血漿と接触することができる捕捉抗体と、
のうちの少なくとも一方を備える、装置に関するものである。
上述した本発明の装置を提供するステップと、
前記チャンバ内の前記希釈液に既知の量の血液を投入し、それにより、任意に、所定量の血液を希釈液に提供するために一定量の血液を吸収することができる多孔質体が適用され、血液を希釈液と混合させるステップと、
装置の分離手段を作動させることにより血漿から赤血球を分離するステップと、
前記血液または血漿中のFABPを、前記検出抗体および前記捕捉抗体のうちの少なくとも一方と、抗体とFABPとの間に特定の結合が発生する条件下で接触させるステップと、
特定の結合を検出するステップと、
を含む方法に関するものである。
本発明の装置に、検出のため、すなわち血漿内の化学的物質または生物学的物質あるいは微生物等の被分析物の定量的、半定量的または定性的存在の確定のために試料を提供することができる。
−心臓型FABP(H−FABPまたは心臓型)
−肝臓型FABP(L−FABPまたは肝臓型)
−腸型FABP(I−FABPまたは小腸型)
−回腸型FABP(ILBPまたは回腸型)
−脳型FABP(B−FABPまたは脳型)
−脂肪細胞型FABP(A−FABPまたは脂肪細胞型)
−上皮/表皮型FABP(E−FABPまたは上皮細胞型)
−精巣型FABP(H−FABPまたは精巣型)および
−ミエリン型FABP(M−FABPまたは神経細胞型)。
−希釈液を含む管(図1に示す本発明による装置1の第1部品2であり、上述した希釈液11を含むチャンバ10を備え、好ましくは図に示す外側ねじ山7を有する)。
−任意に、装置1のチャンバ10内の希釈液11に投入する既知の量の血液を採取することを可能にするスポンジ(図示せず)。この要素を適用して、装置のチャンバ内の希釈液に既知の量の血液試料(通常、約60μLの血液、ただしこの量は変動してもよい)を投入することができ、それにより、血液成分が希釈液内で希釈される。
−血液フィルタ(開放下端部14を有する少なくとも部分的に透明な管状要素13を備えるピストン部品12であり、そこには、少なくとも血漿が通過することができるが、赤血球は通過することができないフィルタ26が提供され、ピストン部品を、チャンバ10内に挿入することができ、かつ底部4に向かってチャンバ10の壁に沿って密封して摺動させることができる)。
−キャップ(図1に示す心棒18を有するフランジ部品19であり、それにより、心棒18の下端部24に、図3に示すようにフィルタ26の上方で開放端部を有する管状要素13を密封することができる止め具25が提供され、それにより、第1採集手段27からの血漿28の戻りが防止され、図1に示すように本発明により、頂部のフランジ部品19が、外側に延在するエプロン21に連結し、エプロン21に、装置1の第1部品2の外側ねじ山7と嵌合することができる内側ねじ山22が設けられる)。
−特にFABPの第1エピトープに結合することができる捕捉抗体(試薬30)。捕捉抗体は、有利には、空間27を制限しかつ装置の外側から観察することができる要素の空間27に面する側の表面内またはその上において固体化する形態であり得る。H−FABPの検出のために捕捉抗体として使用されるのに好適な抗体は、抗ヒトモノクローナル抗体H−FABP 67D3(オランダ、UdenのHycult Biotechnology BVから入手可能)である。好適な表面は、毛細管作用を有する多孔質部品であり、それをたとえば、側方流検出に適用することができる。
−任意に、特に、第1エピトープとは異なるFABPの第2エピトープと結合することができる検出抗体であって、両抗体は、実質的に、FABPに対する互いの結合に対し好ましくないように影響を与えることはない。検出抗体は、有利には、希釈液に適用され得る。希釈液における検出検体の適切な濃度は、5μg/L〜20μg/Lである。H−FABPの検出用の検出抗体として使用されるのに好適な抗体は、抗ヒトモノクローナル抗体H−FABP 66E2(オランダ、UdenのHycult Biotechnology BVから入手可能)である。
本発明による装置および検出システムの適用により、ポイント・オブ・ケア(point−of−care)迅速検査、すなわち、血漿中のFABPの検出のために、一般開業医により、救急車で、病院で、または家庭用検査として使用される迅速検査が提供される。
上述した本発明の装置を提供するステップと、
前記チャンバ内の前記希釈液に既知の量の血液を投入し、それにより、任意に、所定量の血液を希釈液に提供するために一定量の血液を吸収することができる多孔質体が適用され、血液を希釈液と混合させるステップと、
装置の分離手段を作動させることにより血漿から赤血球を分離するステップと、
前記血液または血漿中のFABPを、前記検出抗体および前記捕捉抗体のうちの少なくとも一方と、抗体とFABPとの間に特定の結合が発生する条件下で接触させるステップと、
特定の結合を検出するステップと、
を含む。
本検査は、血漿中の心臓型脂肪酸結合蛋白質(H−FABP)の濃度の増大(>6μg/L)の存在の免疫化学的確定を可能にし、本明細書で説明した装置と組み合わされる。血液試料を採取して検査結果が得られるまでの時間は90秒間未満である。
−血液試料を提供するために指先に切込みを入れるランセット(指先採血器(finger pricker)、
−希釈液(100mM HEPES EDTA(pH7.4)および0.9%NaCl)を含む管(チャンバ)、
−規定量の血液を採集するためのスポンジ、
−管状要素の先端にある、血漿および血球の分離のための血液フィルタ、
−止め具を有する心棒が取り付けられたキャップであり、それにより、チャンバ(キャップ)の頂部側および血液フィルタ(止め具)を通る戻りを封止することができる。
Claims (18)
- 患者からの血液試料におけるFABPを検出する装置であって、以下の要素、すなわち
a)血液を血漿と赤血球とに分離する分離手段であって、
血液試料を受け入れかつ前記血液試料に対する希釈液を収容するチャンバと、
希釈された血液試料からの血漿と、FABPとが通過することができるが、少なくとも赤血球は通過することができないフィルタと、
分離された血漿を提供するために、前記血液試料の少なくとも一部を押圧して前記フィルタに通す押圧手段と、
が設けられた分離手段と、
b)分離された血漿を採集する採集手段と、
を具備し、
前記採集手段が、
i)FABPの第1エピトープに対する検出抗体であって、検出可能な標識と結合されかつ分離された血漿と接触することができる検出抗体と、
ii)前記第1エピトープとは異なるFABPの第2エピトープに対する捕捉抗体であって、分離された血漿と接触することができる捕捉抗体と、
を備え、
それにより、検出抗体および捕捉抗体が前記採集手段に備えられ、かつ、少なくとも捕捉抗体が前記採集手段に固定化されている、装置。 - 前記フィルタが、前記チャンバに挿入することができる管状要素の端部にまたはその近くに設けられ、前記採集手段が、前記管状要素の内部部品によって形成される、請求項1に記載の装置。
- 前記捕捉抗体が、前記採集手段に挿入することができる挿入要素の上または中で固定化される、請求項1または2に記載の装置。
- 前記検出抗体が前記希釈液に提供される、請求項3に記載の装置。
- 前記FABPが、H−FABP、L−FABP、I−FABP、ILBP,B−FABP、A−FABP、E−FABP、T−FABPおよびM−FABPからなる群から選択される、請求項1から4のいずれか一項に記載の装置。
- 前記検出可能な標識が、金コロイドまたは銀コロイド、ストレプトアビジン、ビオチン、ミクロスフェア、ラテックスビーズ、ペルオキシダーゼ、ストレプトアビジン標識西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、ホスファターゼ、アルカリホルファターゼ(AP)、発色標識、蛍光標識、燐光標識、化学発光標識および二次抗体からなる群から選択される、請求項1から5のいずれか一項に記載の装置。
- 前記採集手段が、血漿が、血漿の汚染、コンタミネーションまたは漏出が起こり得ないように外部環境から分離された空間の形態で設けられる、請求項1から6のいずれか一項に記載の装置。
- 前記採集手段が、少なくとも部分的に透明であり、それにより、前記固定化捕捉抗体の付着部分が、装置の外側から少なくとも部分的に視認可能である、請求項1から7のいずれか一項に記載の装置。
- 請求項1−8のいずれかに記載の装置を用いて、FABPの存在について血液を分析する方法であって、ある量の血液が少なくとも血漿および赤血球に分離され、少なくとも前記血漿が採集手段に採集され、前記血液中に存在するFABPが、特にFABPと反応する少なくとも1つの抗体と接触することが可能であり、前記抗体と前記FABPとの結合を、前記採集手段の外側から観察することができる、方法。
- 所定量の血液が、血液試料から取得され装置に投入され、所望の希釈を得るために所定量の希釈液と混合され、その後、前記希釈血液がフィルタに対して押圧され、それにより血漿が強制的に前記フィルタに通され前記採集手段に入り、赤血球が前記フィルタによって阻止される、請求項9に記載の方法。
- 前記血漿が前記採集手段において前記抗体と接触する、請求項9または10に記載の方法。
- FABPの第1エピトープに対して検出抗体が使用され、前記検出抗体が、検出可能な標識と結合されかつ前記分離された血漿と接触することができる、請求項9−11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1エピトープとは異なるFABPの第2エピトープに対して捕捉抗体が使用され、前記捕捉抗体が、前記採集手段において固定化されることが可能であり、かつ前記分離された血漿と接触することができる、請求項9−12のいずれか一項に記載の方法。
- 患者からの血液試料におけるFABPの存在について血液を分析する方法であって、
前記チャンバ内の前記希釈液に提供される所定量の血液を吸収することができる多孔質体を使用することにより、所定量の血液を前記チャンバ内の前記希釈液に投入し、前記血液を前記希釈液と混合させるステップ、
を含む、請求項9に記載の方法。 - 前記FABPが、H−FABP、L−FABP、I−FABP、ILBP、B−FABP、A−FABP、E−FABP、T−FABPおよびM−FABPからなる群から選択される、請求項9−14のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1−8のいずれかに記載の、血液を少なくとも血漿および赤血球に分離する少なくとも1つの装置を備え、前記装置が、前記分離された血漿を採集する採集空間と、前記採集空間に投入されるために適用できるFABPと反応する少なくとも1つの特定の抗体とを備える、部品キット。
- 所定量の血液を取り込みかつ解放する要素をさらに有する、請求項16に記載の部品キット。
- 請求項9−15のいずれかに記載の方法を行うために適用される、請求項16または17に記載の部品キット。
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