JP5325447B2 - 低塩条件下での、固相への核酸の吸着 - Google Patents
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Description
1.核酸の固相への結合のためのビスカチオン性有機化合物の使用。
2.グアニジニウム塩の非存在下におけるポイント1に記載の使用。
3.ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸グアニジニウム、イソチオシアン酸グアニジニウム、グアニジニウム塩酸塩および尿素からなる群から選択される1つ以上の化合物の非存在下におけるポイント1記載の使用。
4.エタノールおよびイソプロパノールの非存在下におけるポイント1〜3のいずれか1つに記載の使用。
5.C1〜C5脂肪族アルコールの非存在下におけるポイント1〜3のいずれか1つに記載の使用。
6.核酸がDNAまたはRNAであることを特徴とするポイント1〜5のいずれか1つに記載の使用。
7.1つ以上の塩の存在下におけるポイント1〜6のいずれか1つに記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が500mM未満の濃度で存在する使用。
8.1つ以上の塩の存在下におけるポイント1〜6のいずれか1つに記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が1mM〜400mMの間の濃度で存在する使用。
9.1つ以上の塩の存在下におけるポイント8に記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が5mM〜300mMの間の濃度で存在する使用。
10.1つ以上の塩の存在下におけるポイント9に記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が10mM〜250mMの間の濃度で存在する使用。
11.1つ以上の塩の存在下におけるポイント10に記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が20mM〜150mMの間の濃度で存在する使用。
12.1つ以上の塩の存在下におけるポイント10に記載の使用であって、それにより該1つ以上の塩が25mM〜100mMの間の濃度で存在する使用。
13.ビスカチオン性化合物が、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオン、およびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されることを特徴とするポイント1〜12のいずれか1つに記載の使用。
14.核酸を固相に吸着させるための水性組成物であって、該組成物が、
(a)緩衝塩、
(b)ビスカチオン性有機化合物、
(c)核酸
を含む化合物の溶液であり、それによりビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、500mM未満であることを特徴とする水性組成物。
15.組成物が、グアニジニウム塩を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント14の水性組成物。
16.前記組成物が、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸グアニジニウム、イソチオシアン酸グアニジニウム、グアニジニウム塩酸塩および尿素からなる群から選択される1つ以上の化合物を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント14の水性組成物。
17.前記組成物が、1つ以上のカオトロピック剤を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント14の水性組成物。
18.前記組成物が、エタノールおよびイソプロパノールを除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント14〜17のいずれか1つに記載の水性組成物。
19.前記組成物が、C1〜C5脂肪族アルコールを除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント14〜17のいずれか1つに記載の水性組成物。
20.前記核酸が、DNAまたはRNAであることを特徴とするポイント14〜19のいずれか1つに記載の水性組成物。
21.前記ビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、1mM〜400mMであることを特徴とするポイント14〜20のいずれか1つに記載の水性組成物。
22.前記ビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、5mM〜300mMであることを特徴とするポイント21に記載の水性組成物。
23.前記ビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、10mM〜250mMであることを特徴とするポイント22に記載の水性組成物。
24.前記ビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、20mM〜150mMであることを特徴とするポイント23に記載の水性組成物。
25.前記ビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、25mM〜100mMであることを特徴とするポイント24に記載の水性組成物。
26.前記ビスカチオン性化合物が、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオン、およびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されることを特徴とするポイント14〜25のいずれか1つに記載の水性組成物。
27.核酸の精製方法であって、
(a)以下の成分
(i)核酸に可逆的に結合可能な固相
(ii)核酸およびビスカチオン性有機化合物を含む水性緩衝溶液
を提供する工程、
(b)固相に核酸を吸着させるために好適な条件下で、提供された成分を接触させる工程、
(c)吸着核酸を含む固相を、溶液から分離する工程、
(d)固相から核酸溶出する工程、
を含み、それによって核酸を精製することを特徴とする方法。
28.工程(a)において、(ii)の水性緩衝溶液が、500mM未満の濃度の1つ以上の塩を含むことを特徴とするポイント27に記載の方法。
29.水性緩衝溶液中の塩濃度が、1mM〜400mMの間にあるポイント28に記載の方法。
30.水性緩衝溶液中の塩濃度が、5mM〜300mMの間にあるポイント29に記載の方法。
31.水性緩衝溶液中の塩濃度が、10mM〜250mMの間にあるポイント30に記載の方法。
32.水性緩衝溶液中の塩濃度が、20mM〜150mMの間にあるポイント31に記載の方法。
33.水性緩衝溶液中の塩濃度が、25mM〜100mMの間にあるポイント32に記載の方法。
34.工程(a)において、(ii)の水性緩衝溶液が、グアニジニウム塩を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント27〜33のいずれか1つに記載の方法。
35.工程(a)において、(ii)の水性緩衝溶液が、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸グアニジニウム、イソチオシアン酸グアニジニウム、グアニジニウム塩酸塩および尿素からなる群から選択される1つ以上の化合物を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント27〜33のいずれか1つに記載の方法。
36.工程(a)において、(ii)の水性緩衝溶液が、1つ以上のカオトロピック剤を除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント27〜33のいずれか1つに記載の方法。
37.前記組成物が、エタノールおよびイソプロパノールを除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント27〜36のいずれか1つに記載の方法。
38.前記組成物が、C1〜C5脂肪族アルコールを除く化合物の溶液であることを特徴とするポイント27〜36のいずれか1つに記載の方法。
39.前記核酸が、DNAまたはRNAであることを特徴とするポイント27〜38のいずれか1つに記載の方法。
40.前記ビスカチオン性化合物が、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオン、およびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されることを特徴とするポイント27〜39のいずれか1つに記載の方法。
41.核酸に可逆的に結合可能な固相と、ビスカチオン性化合物の緩衝溶液を含むバイアルとを含む、核酸を単離するための構成部分のキット。
42.前記固相が、シリカフリースまたはシリカでコーティングされた磁気粒子であることを特徴とするポイント41に記載のキット。
43.前記ビスカチオン性化合物が、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオン、およびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されることを特徴とするポイント41および42のいずれか1つに記載のキット。
ガラスフリースへの核酸の吸着
ガラスフリースが、市販のHIGH PURE(登録商標)スピンカラム(ロッシュ ディアグノスティクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング、アプライド サイエンス(Appliced Science)、カタログ番号11796828001、マンハイムのロッシュ ディアグノスティクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングのキットから)中、固相として提供された。ガラスフリースへ吸着した核酸は、仔ウシ胸腺(Calf Thymus)DNA(ドイツのロッシュ ディアグノスティクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングによって流通される、異なるキットの一部でもあるロッシュ ディアグノスティクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング、アプライド サイエンス、識別番号10041785)であった。吸着溶液は別として、核酸精製のためのすべての工程を、製造業者によって推奨された通りに実施した。
Claims (8)
- 核酸のシリカ基体である固相への結合のためのビスカチオン性有機化合物の使用であって、ビスカチオン性有機化合物が、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオンおよびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択される使用。
- 前記シリカ基体が、シリカゲル、ガラス繊維、石英繊維およびセライトからなる群から選択されることを特徴とする請求項1記載の使用。
- 核酸をシリカ基体である固相に吸着させるための水性組成物であって、該組成物が、
(a)緩衝塩、
(b)ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオンおよびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されるビスカチオン性有機化合物、
(c)核酸
を含む化合物の溶液であり、それによりビスカチオン性化合物とその1つ以上のカウンターイオンを除いた組成物中の塩濃度が、5mM〜300mMの間であることを特徴とする水性組成物。 - 前記シリカ基体が、シリカゲル、ガラス繊維、石英繊維およびセライトからなる群から選択されることを特徴とする請求項3記載の水性組成物。
- 核酸の精製方法であって、
(a)以下の成分
(i)核酸に可逆的に結合可能なシリカ基体である固相
(ii)核酸、およびビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオンおよびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されるビスカチオン性有機化合物を含む水性緩衝溶液
を提供する工程、
(b)核酸をシリカ基体である固相に吸着させるための好適な条件下で、提供された成分を接触させる工程、
(c)吸着核酸を含むシリカ基体である固相を、溶液から分離する工程、
(d)シリカ基体である固相から核酸を溶出する工程、
を含み、それによって核酸を精製することを特徴とする方法。 - 前記シリカ基体が、シリカゲル、ガラス繊維、石英繊維およびセライトからなる群から選択されることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 核酸に可逆的に結合可能なシリカ基体である固相と、ビス−ベンズイミダゾリウムカチオン、ビス−イミダゾリウムカチオンおよびビス−グアニジニウムカチオンからなる群から選択されるビスカチオン性化合物の緩衝溶液を含むバイアルとを含む、核酸を単離するための構成部分のキット。
- 前記シリカ基体が、シリカゲル、ガラス繊維、石英繊維およびセライトからなる群から選択されることを特徴とする請求項7記載のキット。
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