JP5283335B2 - 各種癌の治療を目的とした腫瘍関連抗原の組合せ - Google Patents

Description

本明細書には、さまざまな組合せの腫瘍関連抗原に対する免疫応答を誘導する方法及び組成物が開示されており、それらにより発病過程において効果的な免疫学的介入を促進することができる。

[関連技術の説明]
米国癌学会は、年間、百万を超える人々が癌にかかり、米国人男性の約２人に１人及び米国人女性の約３人に１人が、人生のある時点で何らかの種類の癌を有するであろうと推定している。

癌は通常、体の一部の細胞が制御不能に増殖し始めると成長する。さまざまな種類の癌があるが、これらは大抵、異常細胞の制御不能な成長によって始まる。

正常な体細胞は、規則的な様式で成長し、分裂し、死ぬ。癌細胞は、成長及び分裂し続けるとういう点で異なっている。死ぬ代わりに、癌細胞は正常細胞よりも長く生き、且つ新たな異常細胞を形成し続ける。

癌に対する通常の治療の選択としては、手術、放射線療法及び化学療法が挙げられる。第四の治療分野が開発されており、免疫療法と呼ばれる。免疫療法は、免疫系が癌細胞を認識することを助け、且つ／又は癌を消滅させるために癌細胞に対する応答を強めることを試みている。免疫療法には、能動的免疫療法及び受動的免疫療法が含まれる。能動的免疫療法は、体自体の免疫系を刺激して病気と戦わせる。受動的免疫療法は、通常、体が病気を攻撃することを当てにはしておらず、代わりに、体の外で作られた免疫系成分（抗原等）を用いる。

各種の治療法があるにもかかわらず、さらに他の治療法の選択肢が引き続き必要とされている。

本明細書中に開示される本発明の実施の形態は、各種癌を有する患者の免疫療法のための、ＴｕＡＡの効果的な組合せの使用を目的とする。これらの抗原の組合せに対する免疫応答を誘導する免疫原性組成物、及びその使用方法の両方が開示される。

いくつかの実施の形態は、腫瘍性疾患（neoplastic diseases）を治療する方法に関する。これらの方法には、例えばＰＲＡＭＥ、及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を患者に与える工程を含ませることができる。抗原（例えばＰＲＡＭＥ）に対する免疫を患者に与えることは、該抗原に対する特異的免疫応答を誘導することができる、該抗原のいくつかの部分又はいくつかの他の免疫原性の薬剤を患者に投与することを意味する。したがって、いくつかの実施の形態においては、ＰＲＡＭＥに対する免疫化は、完全且つ無傷なＰＲＡＭＥ抗原を患者に投与することを含むことができ、一方、他の実施の形態においては、ＰＲＡＭＥの１以上のエピトープ、１以上のエピトープクラスタ及び１以上の断片等を投与すること、及び／又は、例えば、上記のエピトープ（複数可）、クラスタ（複数可）及び断片（複数可）等のいずれかをコードする核酸を投与することを含むことができる。本考察においては、ＰＲＡＭＥは簡単のため例として使用されるが、患者がいかなる抗原に対して免疫を与えられたとしても原則は適用できる。

一つの実施の形態は、卵巣癌又は結腸直腸癌を治療する方法に関する。本方法は、患者に、例えばＰＲＡＭＥ、及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原としては、例えばＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＰＳＭＡ等を挙げることができる。好ましくは、本方法は、例えば、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫化を含むことができる。より好ましくは、本方法は、例えば、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＰＳＭＡに対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、本方法は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

一つの実施の形態において、卵巣癌又は結腸直腸癌の治療において細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導する方法が開示される。本方法は、例えば、患者に、ＰＲＡＭＥ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原としては、例えばＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＰＳＭＡ等を挙げることができる。例えば本方法は、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、ＰＳＭＡに対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

他の実施の形態は、膵臓癌を治療する方法に関する。本方法は、例えば、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍関連抗原は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１であり得る。好ましくは、本方法は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫を与えることを含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、本方法は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

さらに、一つの実施の形態において、膵臓癌の治療において細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導する方法が開示される。本方法は、例えば、患者に、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原としては、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を挙げることができる。例えば本方法は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

さらに他の実施の形態は、非小細胞肺癌を治療する方法に関連する。本方法は、患者に、例えば、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。例えば、腫瘍関連抗原は、ＭＡＧＥ−３、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等であり得る。好ましくは、本方法は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫を与えることを含むことができる。より好ましくは、本方法は、例えば、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＭＡＧＥ−３に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、本方法は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

さらなる実施の形態において、非小細胞肺癌の治療において細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導する方法が開示される。本方法は、例えば、患者に、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍関連抗原としては、例えばＭＡＧＥ−３、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を挙げることができる。例えば本方法は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＭＡＧＥ−３に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

別の実施の形態は、腎細胞癌を治療する方法に関連する。本方法は、患者に、例えば、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍関連抗原は、例えば、ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２等であり得る。好ましくは、本方法は、例えばＰＳＭＡ、ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２に対する免疫を与えることを含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、本方法は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

さらに、一つの実施の形態において、腎細胞癌の治療において細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導する方法が開示される。本方法は、例えば、患者に、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原は、例えばＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２等であり得る。例えば本方法は、ＰＳＭＡ、ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２に対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

いくつかの実施の形態は、メラノーマを治療する方法に関連する。本方法は、患者に、例えば、以下の２群からそれぞれ選択される少なくとも１つの腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。第一群は、例えばチロシナーゼ及びＭｅｌａｎ−Ａ等を含み得る。第二群は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を含み得る。好ましくは、本方法は、例えばＭｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯに対する免疫を与えることを含むことができる。より好ましくは、本方法は、例えばＭｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びチロシナーゼに対する免疫を与えることを含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、本方法は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

一つの実施の形態において、メラノーマの治療において細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導する方法が開示される。本方法は、以下の２群からそれぞれ選択される少なくとも１つの腫瘍関連抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。第一群は、例えばチロシナーゼ及びＭｅｌａｎ−Ａ等を含み得る。第二群は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を含み得る。例えば本方法は、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯに対する免疫化を含むことができる。あるいは、本方法は、例えば、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びチロシナーゼに対する免疫化を含むことができる。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

いくつかの実施の形態は、卵巣癌又は結腸直腸癌を治療するための薬剤の調製における、例えばＰＲＡＭＥ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原を含む組成物の使用に関する。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原は、例えばＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＰＳＭＡ等であり得る。好ましくは、腫瘍関連抗原は、例えばＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２であり得る。より好ましくは、腫瘍関連抗原は、例えばＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＰＳＭＡであり得る。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫を与える工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、該薬剤は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

一つの実施の形態は、膵臓癌を治療するための薬剤の調製における、例えばＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原を含む組成物の使用に関する。腫瘍関連抗原は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１であり得る。該薬剤は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２を含むことが好ましい。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、該薬剤は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

さらに他の実施の形態は、非小細胞肺癌を治療するための薬剤の調製における、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原を含む組成物の使用に関する。いくつかの実施の形態において、腫瘍関連抗原は、ＭＡＧＥ−３、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１であり得る。組成物は、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２を含むことが好ましい。組成物は、例えばＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＭＡＧＥ−３を含むことがより好ましい。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、該薬剤は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

別の実施の形態は、腎細胞癌を治療するための薬剤の調製における、ＰＳＭＡ及び少なくとも１つの他の腫瘍関連抗原を含む組成物の使用に関する。腫瘍関連抗原は、例えばＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２等であり得る。組成物は、例えばＰＳＭＡ、ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２を含むことが好ましい。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、薬剤は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

さらに他の実施の形態は、メラノーマを治療するための薬剤の調製における、以下の２群からそれぞれ選択される少なくとも１つの腫瘍関連抗原を含む組成物の使用に関する。第一群は、例えばチロシナーゼ及びＭｅｌａｎ−Ａ等を含み得る。第二群は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を含み得る。該組成物は、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯを含むことが好ましい。該組成物は、例えばＭｅｌａｎ−Ａ、ＳＳＸ−２及びチロシナーゼを含むことがより好ましい。本方法はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原に対する免疫化の工程を含むことができる。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。好ましい実施の形態において、薬剤は細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することができる。

他の実施の形態は、例えば、卵巣癌又は結腸直腸癌を治療するための、又は卵巣癌又は結腸直腸癌に対するＴ細胞応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。該組成物は、例えば、１）全抗原、２）抗原の断片、３）抗原由来のエピトープクラスタ、４）抗原由来のエピトープ、５）１〜４のいずれかをコードする核酸等、を個々に又は組合せて含む
ことができ、ここで該抗原はＰＲＡＭＥ及び腫瘍関連抗原（例えばＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＰＳＭＡ等を含む）を含むことができる。該組成物はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原を含み得る。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

さらに他の実施の形態は、膵臓癌を治療するための、又は膵臓癌に対するＴ細胞応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。組成物は、例えば、１）全抗原、２）抗原の断片、３）抗原由来のエピトープクラスタ、４）抗原由来のエピトープ、５）１〜４のいずれかをコードする核酸、を個々に又は組合せて含むことができ、ここで該抗原はＰＳＭＡ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原を含むことができる。好ましい実施の形態において、腫瘍関連抗原は、例えばＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１から選択することができる。該組成物はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原を含み得る。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

別の実施の形態は、非小細胞肺癌を治療するための、又は非小細胞肺癌に対するＴ細胞応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。該組成物は、例えば、１）全抗原、２）抗原の断片、３）抗原由来のエピトープクラスタ、４）抗原由来のエピトープ、５）１〜４のいずれかをコードする核酸、を個々に又は組合せて含むことができ、ここで該抗原はＰＳＭＡ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原（例えばＭＡＧＥ−３、ＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１を含む）を含むことができる。組成物はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原を含み得る。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

いくつかの実施の形態は、腎細胞癌を治療するための、又は腎細胞癌に対するＴ細胞応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。該組成物は、例えば、１）全抗原、２）抗原の断片、３）抗原由来のエピトープクラスタ、４）抗原由来のエピトープ、５）１〜４のいずれかをコードする核酸、を個々に又は組合せて含むことができ、ここで該抗原はＰＳＭＡ及び少なくとも１つの腫瘍関連抗原を含むことができる。好ましい実施の形態において、腫瘍関連抗原はＰＲＡＭＥ又はＳＳＸ−２であり得る。該組成物はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原を含み得る。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

さらに他の実施の形態は、メラノーマを治療するための、又はメラノーマに対するＴ細胞応答を誘導するための免疫原性組成物に関する。該組成物は、例えば、１）全抗原、２）抗原の断片、３）抗原由来のエピトープクラスタ、４）抗原由来のエピトープ、５）１〜４のいずれかをコードする核酸、を個々に又は組合せて含むことができ、ここで該抗原は以下の２群からそれぞれ選択することができる。ここで、第一群は、例えばチロシナーゼ及びＭｅｌａｎ−Ａを含み、第二群はＳＳＸ−２及びＮＹ−ＥＳＯ−１等を含む。該組成物はさらに、腫瘍の血管新生に関連する少なくとも１つの抗原を含み得る。腫瘍の血管新生に関連する抗原は、例えばＰＳＭＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＴｉｅ−２であり得る。

さらなる実施の形態は、腫瘍関連抗原（腫瘍関連抗原の断片、クラスタ及びエピトープを含む）の組合せを用いた、ＣＴＬ応答を誘導する組成物及び方法に関する。該組成物は、核酸構築物、例えば全ての所望の抗原をコードする単一の構築物を含むことができる。他の実施の形態においては、単一の構築物は単一の抗原をコードする。一方、その他の実施の形態においては、１個の構築物は類似の免疫原性を有するエピトープの組合せを有することができ、且つ別の構築物は類似の免疫原性を有するエピトープを有することができる。

さらに他の実施の形態は、免疫原性組成物を設計及び作成する方法に関し、本方法は腫
瘍上の１以上の抗原の有無を決定する工程、及びＣＴＬを誘導する組成物中に含めるための１以上の抗原を得る工程を含むことができる。

多くの腫瘍関連抗原（ＴｕＡＡ）の、さまざまな種類の癌における発現頻度が知られている。しかし、ある抗原の出現頻度、特にさまざまな種類の癌におけるＴｕＡＡの特定の組合せの出現頻度は報告されていない。腫瘍組織におけるＴｕＡＡの存在を正確に測定することは、特定の種類の癌の治療に対してどのＴｕＡＡが有用であるかを決定する手助けになる。

癌に対する能動的免疫療法を開発する多くの試みにおいて、単一抗原が利用されてきた。これは、２つの明確な理由により問題がある。第一に、癌におけるあらゆる特定のＴｕＡＡの発現はモザイク様であり得る（その抗原の発現は、腫瘍中のいくつかの細胞においては高いが、他の細胞においては全く無い）。さらに、ＴｕＡＡはいくつかの病巣において発現され得るが、その他では発現されない。２以上の抗原に対して免疫応答を導くことにより、適切に選択すれば、認識できる腫瘍細胞の数を最大化できる。第二に、免疫化の後に、腫瘍がＴｕＡＡ発現を失い、耐性集団を生じさせる例も観察された。免疫応答が２以上のＴｕＡＡに対して導かれた場合、それを回避するには各抗原の発現を同時に失わなければならないため、耐性の腫瘍が生じるのははるかに難しくなる。このように、免疫療法を用いた癌の治療において、使用したＴｕＡＡの少なくとも２つに対して腫瘍が陽性であるならば、ＴｕＡＡの組合せを用いることは、腫瘍細胞の集団をより完全にカバーできること、及び抗原のＴｕＡＡ発現の消失で抗原が消失することにより腫瘍が免疫を回避する機会が少なくなると考えられること、の２つの理由により有利であり得る。

定義：
以下に列挙された用語は、通常、本明細書の目的にふさわしい、以下に示された意味を有するべきである。ただし、本明細書中における文脈からそのような意味ではないことが明らかである場合は除く。

プロフェッショナル抗原提示細胞（ｐＡＰＣ）：Ｔ細胞共刺激（costimulatory）分子を有し、且つＴ細胞応答を誘導することができる細胞。特性がかなり明らかにされているｐＡＰＣとしては、樹状細胞、Ｂ細胞及びマクロファージが挙げられる。

周辺細胞：ｐＡＰＣではない細胞。

ハウスキーピングプロテアソーム：通常は周辺細胞中で活性化しているプロテアソームであって、かつ、通常はｐＡＰＣ中には存在しないか、又はｐＡＰＣ中では強い活性を示さない。

免疫プロテアソーム：通常はｐＡＰＣ中で活性化しているプロテアソーム。免疫プロテアソームも、感染組織において、又はその後のインターフェロンへの暴露によって周辺細胞中でも活性化していることがある。

エピトープ：免疫応答を刺激することができる分子又は物質。好ましい実施形態において、本定義によるエピトープは、ポリペプチド又はポリペプチドをコードする核酸（ここで、該ポリペプチドは免疫応答を刺激することができる）を含むが、必ずしもこれらに限定されない。他の好ましい実施形態において、本定義によるエピトープは、細胞表面に提示されたペプチド（該ペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と相互作用できるように、クラス１ＭＨＣの結合溝（cleft）に非共有結合的に結合している）を含むが、必ずしもこれらに限定されない。クラス１ＭＨＣにより提示されるエピトープは、未成熟型でも成熟型でもよい。「成熟」としては、あらゆる前駆体（「未成熟」）と区別されるＭＨＣエピ
トープ（これはハウスキーピングエピトープを含んでも良く、又は本質的にハウスキーピングエピトープから構成されていても良い）が挙げられるが、プロセッシング（プロテアソーム消化、Ｎ末端トリミング、又は外来性酵素活性の作用を、単独で、又は任意の組合せで含むが、それらに限定されない）により除去される一次翻訳産物中の他の配列も含まれる。このように、成熟エピトープは若干長いポリペプチド中に埋め込まれていてもよいが、その免疫学的な潜在能力は、少なくとも部分的には、埋め込まれたエピトープに起因するものである。同様に、成熟エピトープは、ＭＨＣ結合溝に結合してＴＣＲにより認識され得る最終的な形態として提供され得る。

ＭＨＣエピトープ：哺乳類のクラス１又はクラス２主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に対する、既知の又は予測された結合親和力を有するポリペプチド。

ハウスキーピングエピトープ：好ましい実施形態において、ハウスキーピングエピトープは、ＭＨＣエピトープであり、且つハウスキーピングプロテアソームが優勢に活性化している細胞上に提示されるポリペプチド断片として定義される。別の好ましい実施形態においては、ハウスキーピングエピトープは、１〜複数個の付加的なアミノ酸が隣接している、上述の定義によるハウスキーピングエピトープを含有するポリペプチドとして定義される。別の好ましい実施形態において、ハウスキーピングエピトープは、上述の定義によるハウスキーピングエピトープをコードする核酸として定義される。例示的なハウスキーピングエピトープは、２００２年４月４日付で出願された米国出願第１０／１１７，９３７号（公開番号２００３０２２０２３９ Ａ１）及び同１０／６５７，０２２号、２００３年５月９日付で出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２７７０６（公開番号ＷＯ０４０２２７０９Ａ２）、２００１年４月６日付で出願された米国仮出願第６０／２８２，２１１号、２００１年１１月７日付で出願された同６０／３３７，０１７号、２００２年７月３日付で出願された同６０／３６３２１０号、及び２００２年９月５日付で出願された同６０／４０９，１２３号中に提供される。列挙された各出願は、「エピトープ配列」と題されている。

免疫エピトープ：好ましい実施形態において、免疫エピトープは、ＭＨＣエピトープであり、且つ免疫プロテアソームが優勢に活性化している細胞上に提示されるポリペプチド断片として定義される。別の好ましい実施形態において、免疫エピトープは、１〜複数個の付加的なアミノ酸が隣接した、上述の定義による免疫エピトープを含むポリペプチドとして定義される。別の好ましい実施形態において、免疫エピトープは、クラス１ＭＨＣに対する既知の又は予測された親和力を有する少なくとも２つのポリペプチド配列を有する、エピトープクラスタ配列を含むポリペプチドとして定義される。さらに別の好ましい実施形態において、免疫エピトープは、上述のいずれかの定義による免疫エピトープをコードする核酸として定義される。

標的細胞：好ましい実施形態において、標的細胞とは、免疫系要素の作用を受け得る発病状態と関連した細胞、例えば、ウイルス若しくは他の細胞内寄生生物に感染した細胞、又は腫瘍細胞である。別の実施形態において、標的細胞は本発明のワクチン及び方法により標的とされる細胞である。本定義による標的細胞の例として、腫瘍細胞及び細胞内寄生生物（例えばウイルス、細菌又は原生生物）を保持する細胞が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。また、標的細胞は、免疫プロテアソームを発現している細胞による適切なエピトープの遊離及びプロセッシングを判断又は確認するための検定の一部として、ＣＴＬにより標的とされる細胞も含み、これにより所望のエピトープに対するＴ細胞の特異性又は免疫原性を判断できる。そのような細胞を形質転換して遊離配列を発現させることができ、あるいは、該細胞をペプチド／エピトープとともに単に電気パルスすることもできる。

標的関連抗原（ＴＡＡ）：標的細胞中に存在するタンパク質又はポリペプチド。

腫瘍関連抗原（ＴｕＡＡ）：標的細胞が腫瘍細胞であるＴＡＡ。

ＨＬＡエピトープ：ヒトのクラス１又はクラス２のＨＬＡ複合体分子に対して、既知の又は予測される結合親和力を有するポリペプチド。

抗体：天然免疫グロブリン（Ｉｇ）、ポリ又はモノクローナル、又はＩｇ結合ドメインの全て若しくは一部から成る任意の分子であって、生化学的に又は組み換えＤＮＡを用いて、又は任意の他の手段を用いて得られる分子。例として、特に、Ｆ（ａｂ）、単鎖Ｆｖ及びＩｇ可変領域−ファージコートタンパク質融合体が挙げられる。

実質的類似性：本用語は、配列の調査によって判断する場合に、参照配列と重要ではない点において異なる配列を示すために用いられる。同じアミノ酸配列をコードする核酸配列は、縮重位置の違い、又は任意の非コード領域の長さ又は組成におけるわずかな違いがあるにもかかわらず、実質的に類似している。保存的置換又はわずかな長さの変異のみにより異なるアミノ酸配列は、実質的に類似している。さらに、Ｎ末端に隣接している残基の数が異なるハウスキーピングエピトープ、又は両末端において隣接している残基の数が異なる免疫エピトープ及びエピトープクラスタを含むアミノ酸配列は、実質的に類似している。実質的に類似しているアミノ酸配列をコードする核酸も、それら自体が実質的に類似している。

機能的類似性：本用語は、配列が実質的に類似していなくとも、生物学的又は生化学的特性の検査から判断する場合に、参照配列と重要ではない点において異なる配列を示す。例えば、２つの核酸が、同一の配列に対するハイブリダイゼーションプローブとして有用であるが、異なるアミノ酸配列をコードすることもあり得る。交差反応性ＣＴＬ応答を誘導する２つのペプチドは、それらが非保存的アミノ酸置換により異なっていても（したがって、実質的類似性の定義の範囲ではない）、機能的に類似である。同じエピトープを認識する一対の抗体又はＴＣＲは、どのような構造的差異が存在しようとも、互いに機能的に類似であり得る。免疫原性の機能的類似性の試験は、「改変」抗原で免疫化すること及び誘発された応答（抗体応答、ＣＴＬ応答及びサイトカイン応答等を含むが、これらに限定されない）の標的抗原を認識する能力を調べることにより実施できる。したがって、２つの配列は、同じ機能を有しながら、ある観点では異なるように設計されてもよい。このように設計された、本願明細書中に開示される配列又は本願請求項の配列の配列変異体は、本発明の実施態様の一つである。

発現カセット：プロモータ並びに他の転写及び翻訳制御要素と操作可能に連結された、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列であって、エンハンサー、終止コドン、内部リボソーム侵入部位及びポリアデニル化部位を含むが、これらに限定されない。該カセットは、１つの宿主分子から別の分子への移動を容易にする配列も含むことができる。

埋め込みエピトープ：いくつかの実施形態において、埋め込みエピトープとは、より長いポリペプチド内に完全に含まれているエピトープである。他の実施形態において、本用語は、Ｎ末端又はＣ末端のみが埋め込まれたエピトープ（エピトープが、より長いポリペプチドに対して完全に内側にはない）も含むことができる。

成熟エピトープ：エピトープがＭＨＣペプチド結合溝中に結合する際に、その配列以外の付加的配列が存在しないペプチド。

エピトープクラスタ：ポリペプチド又はこれをコードする核酸配列であって、天然のタ
ンパク質を含むタンパク質配列の断片であり、共通のＭＨＣ拘束要素に対する結合親和力を有する、２以上の既知の又は予測されるエピトープを含む。好ましい実施形態において、クラスタ中のエピトープの密度は、完全なタンパク質配列中の共通のＭＨＣ拘束要素に対する結合親和力を有する、全ての既知の又は予測されるエピトープの密度よりも大きい。エピトープクラスタは、「エピトープクラスタ」と題される米国出願第０９／５６１，５７１号に開示され、且つより完全に定義されている。

遊離配列：より大きな配列中に埋め込まれたハウスキーピングエピトープを含むあるいはコードするように設計又は遺伝子操作された配列であって、プロセッシング活性（免疫プロテアソーム活性、Ｎ末端トリミング、及び／又はその他の過程又は作用を、単独で、又は任意の組合せで含む）によりハウスキーピングエピトープが遊離される状況をもたらす。

ＣＴＬｐ：ＣＴＬ前駆体は、細胞溶解活性の発現が可能なＴ細胞である。二次的なｉｎ
ｖｉｔｒｏ溶解活性（通常、この活性によりＣＴＬｐが観察される）は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ナイーブ、エフェクター及びメモリーＣＴＬの任意の組合せから得られる。

メモリーＴ細胞：体内の位置に関係なく、抗原により事前に活性化されたＴ細胞であるが、エフェクター機能を獲得するためには抗原への再暴露が必要な静止生理的状態にある。これらは通常、表現型としてはＣＤ６２Ｌ^-、ＣＤ４４^hi、ＣＤ１０７α^-、ＩＧＮ−γ^-、ＬＴβ^-及びＴＮＦ−α−であり、細胞周期のＧ０にある。

エフェクターＴ細胞：抗原と接触すると直ちにエフェクター機能を示すＴ細胞。エフェクターＴ細胞は、通常リンパ系から出て、周囲の免疫系に入ることができる。表現型としては、これらは通常、ＣＤ６２Ｌ^-、ＣＤ４４^hi、ＣＤ１０７α⁺、ＩＧＮ−γ⁺、ＬＴβ⁺及びＴＮＦ−α⁺であり、活発に循環（cycling）している。

エフェクター機能：通常、細胞溶解活性及び／又はサイトカイン分泌の獲得を含む、Ｔ細胞の活性化。

Ｔ細胞応答の誘導：多くの実施形態において、ナイーブ細胞、又は状況によっては静止細胞から、Ｔ細胞応答を生じさせる過程を含む；Ｔ細胞を活性化すること。

Ｔ細胞応答の増幅：多くの実施形態において、細胞数、活性化細胞数、活性のレベル、増殖速度、又は特定の反応に関与するＴ細胞の同様のパラメータを増加させる過程を含む。

同調：多くの実施形態において、誘導されたＴ細胞系統の免疫プロファイルに特定の安定性を与える誘導を含む。

トール様受容体（ＴＬＲ）：トール様受容体（ＴＬＲ）は、微生物の特異的成分及び特定の宿主分子により活性化される、パターン認識受容体である。先天性免疫系の一部として、これらは多くの病原体に対する防御の第一線に寄与するが、適応免疫においても役割を果たす。

トール様受容体（ＴＬＲ）リガンド：トール様受容体に結合し、且つ活性化することができる任意の分子。例として、インターフェロンを誘導することで知られる、ポリＩＣ Ａ合成二本鎖ＲＮＡが挙げられるが、これに限定されない。上記ポリマーは、ポリイノシン酸及びポリシチジル酸の各一本鎖、二本鎖ＲＮＡ、非メチル化ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチド又は他の免疫刺激配列（ＩＳＳ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、β−グルカン類
、及びイミダゾキノリン類、並びにこれらの誘導体及び類似体から成る。

免疫強化アジュバント：ｐＡＰＣ又はＴ細胞を活性化するアジュバントであって、例えばＴＬＲリガンド、エンドサイトーシスパターン認識受容体（ＰＲＲ）リガンド、キラヤサポニン類（quillaja saponins）、ツカレソール（tucaresol）及びサイトカイン等を含む。いくつかの好ましいアジュバントが、Marciani, D. J. Drug Discovery Today 8: 934-943, 2003に開示されている。

免疫刺激配列（ＩＳＳ）：通常は、非メチル化ＣｐＧ配列を含有するオリゴデオキシリボヌクレオチドである。該ＣｐＧは、細菌により生産されたＤＮＡ（特にプラスミド）中に埋め込まれてもよい。さらなる実施形態は、さまざまな類似体を含み、好ましい実施形態として、ホスホロチオエート結合又は非生理的塩基を１以上有する分子が挙げられる。

ワクチン：好ましい実施形態において、ワクチンは、病気の予防あるいはその手助けとなる免疫原性組成物であり得る。他の実施形態において、ワクチンは、病気の治療あるいはその手助けとなる組成物である。その他においては、ワクチン組成物は、病気の改善あるいはその手助けとなり得る。ワクチン免疫原性組成物のさらなる実施形態は、治療薬及び／又は予防薬として使用することができる。

免疫化：病気に対して、部分的な又は完全な防御を誘導する過程。あるいは、抗原に対する免疫系応答を誘導又は増幅する過程。第二の定義では、防御免疫応答、特に炎症誘発性又は能動的免疫を暗示し得るが、調節的応答（regulatory response）も含み得る。したがって、いくつかの実施形態においては、免疫化は寛容化（免疫系が、炎症誘発性又は能動的免疫を生成することを回避する過程）とは区別される一方、他の実施形態においてはこの用語は寛容化を含む。

コードする：ある特定のアミノ酸配列をコードする核酸が、その（ポリ）ペプチドを特定するコドンからなり得るが、翻訳可能な、又は転写、翻訳若しくは複製を制御するために、又はある宿主核酸構築物の取り扱いを容易にするために、付加的な配列も含み得るような、制約のない用語。

カバー率（coverage）：ある特定のＴｕＡＡ、又は選択された一連のＴｕＡＡに由来する少なくとも１つのＴｕＡＡを発現している腫瘍細胞の比又は割合。

重複性（redundancy）：腫瘍細胞集団又はそれらのサブセットが、選択された一連のＴｕＡＡのうち２以上のＴｕＡＡを発現する程度。

腫瘍関連抗原
本明細書中に開示される実施形態において有用なＴｕＡＡの例として、チロシナーゼ（配列番号１）、Ｍｅｌａｎ−Ａ（配列番号２）、ＳＳＸ−２（配列番号３）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）（配列番号４）、ＭＡＧＥ−１（配列番号５）、ＭＡＧＥ−３（配列番号６）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（配列番号７）、ＰＲＡＭＥ（配列番号８）及びＨｅｒ２／Ｎｅｕ（配列番号９）が挙げられる。これら９個のタンパク質に対する天然のコード配列、又はこれらの任意の断片は、これらのｃＤＮＡ又は完全コード配列（ｃｄｓ）（それぞれ配列番号１０〜１８）より決定することができる。

チロシナーゼは、メラニン細胞分化の最も特異的なマーカーの一つであると考えられているメラニン生合成酵素である。チロシナーゼはわずかな細胞型（主にメラニン細胞）で発現しており、しばしばメラノーマにおいて高レベルであることが分かった。ＴｕＡＡとしてのチロシナーゼの有用性は、「異常細胞がＨＬＡ−Ａ２／チロシナーゼ由来ペプチドの複合体を提示する細胞異常を患う個体を識別する方法、及び該個体を治療する方法」と題される米国特許第５，７４７，２７１号に教示されている。

ＰＭｅｌ１７としても知られているＧＰ１００も、メラノーマにおいて高レベルで発現するメラニン生合成タンパク質である。ＴｕＡＡとしてのＧＰ１００は、「メラノーマ抗原及び診断並びに治療方法におけるその使用」と題される米国特許第５，８４４，０７５号に開示されている。

ＭＡＲＴ−１（Ｔ細胞により認識されるメラノーマ抗原）とも呼ばれるＭｅｌａｎ−Ａは、メラノーマにおいて高レベルで発現する別のメラニン生合成タンパク質である。ＴｕＡＡとして有用なＭｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１は、「メラノーマ抗原及び診断並びに治療方法におけるその使用」と題される米国特許第５，８７４，５６０号及び５，９９４，５２３号の両方、さらに「ＨＬＡ−Ａ２により提示される、少なくとも１つの腫瘍拒絶抗原へとプロセッシングされる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする単離された核酸分子」と題される米国特許第５，６２０，８８６号に教示されている。

Ｈｏｍ−Ｍｅｌ−４０としても知られているＳＳＸ−２は、高度に保存された癌・精巣抗原のファミリーの一員である（Gure, A. O.他、Int. J. Cancer 72: 965-971, 1997）。ＳＳＸ−２のＴｕＡＡとしての識別は、「メラノーマ特異的抗原をコードする単離された核酸分子及びその使用」と題される米国特許第６，０２５，１９１号に教示されている。癌・精巣抗原は、さまざまな腫瘍において見られるが、通常は、精巣以外の正常な成人組織には存在しない。ＳＳＸファミリーの種々のメンバーの発現は、さまざまな腫瘍細胞系において見られる。ＳＳＸファミリーのメンバー間の高度の配列同一性によって、ファミリーの２以上のメンバーから類似したエピトープが生じ、且つＭＨＣ分子に結合することができ、その結果このファミリーの１メンバーに対して作られたいくつかのワクチンは交差反応することができ、且つこのファミリーの他のメンバーに対しても有効である。

ＭＡＧＥ−１（メラノーマ関連抗原−１）、ＭＡＧＥ−２（メラノーマ関連抗原−２）及びＭＡＧＥ−３（メラノーマ関連抗原−３）は、癌・精巣抗原の別のファミリーのメンバーであり、もともとはメラノーマ中で発見されたが、さまざまな腫瘍中に見られる。ＴｕＡＡとしてのＭＡＧＥタンパク質の識別は、「腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする核酸配列（ＭＡＧＥ−１）」と題される米国特許第５，３４２，７７４号及びそれに続く多数の特許に教示されている。現在、ＳＷＩＳＳタンパク質データベースには、（ヒト）ＭＡＧＥに関して１７個の登録がある。これらのタンパク質には広範な類似性があり、多くの場合、あるものからのエピトープは、ファミリーの他のメンバーに交差反応応答を誘導することができる。少数のＭＡＧＥファミリーのメンバー、とりわけ、それぞれ精巣及び脳、並びに骨髄間質細胞において発現しているＭＡＧＥ−Ｈ１及びＭＡＧＥ−Ｄ１は腫瘍中では観察されていない。これらが、他のＭＡＧＥタンパク質と非常に類似性が低いものの一つであるという事実により、正常組織における交差反応の可能性は改善される。

ＧＡＧＥ−１は、癌・精巣抗原のＧＡＧＥファミリーの１メンバーである（Van den Eynde, B.他、J. Exp. Med. 182: 689-698, 1995；米国特許第５，６１０，０１３号；同５６４８２２６号；同５，８５８，６８９号；同６，０１３，４８１号；及び同６，０６９，００１号）。ＰｕｂＧｅｎｅデータベースは現在、１２個の異なったアクセス可能な成員を列挙しており、そのうちのいくつかはＰＡＧＥ又はＸＡＧＥというシノニムで知られている。ＧＡＧＥ−１からＧＡＧＥ−８は、非常に高度の配列同一性を有し、それゆえほとんどのエピトープがファミリーの複数のメンバーによって共有され得る。

ＢＡＧＥは、一般に、メラノーマ、特に転移性メラノーマ、並びに肺、乳房、膀胱及び頭部及び頚部の扁平上皮細胞の癌腫において発現する癌・精巣抗原である。そのＴｕＡＡとしての有用性は、「腫瘍拒絶抗原前駆体ＢＡＧＥ中のアミノ酸配列に対応する腫瘍拒絶抗原、及びその使用」と題される米国特許第５，６８３，８８号、及び「ＢＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする単離された核酸分子」と題される同５，５７１，７１１号に、それぞれ教示されている。

ＣＴＡＧ−１（癌・精巣抗原−１）及びＣＡＧ−３（癌抗原−３）としても知られているＮＹ−ＥＳＯ−１は、多種多様な腫瘍において見られる癌・精巣抗原である。ＴｕＡＡとしてのＮＹ−ＥＳＯ−１は、「食道癌関連抗原をコードする単離された核酸分子、抗原自体、及びそれらの使用」と題される米国特許第５，８０４，３８１号に開示されている。広範な配列同一性を有する抗原をコードするパラロガス(paralogous)な遺伝子座であるＬＡＧＥ−１ａ／ｓ及びＬＡＧＥ−１ｂ／Ｌは、公的に入手可能なヒトゲノムのアセンブリ中に開示されており、選択的スプライシングを介して生じると結論付けられている。さらに、ＣＴ−２（又はＣＴＡＧ−２、癌・精巣抗原−２）は、ＬＡＧＥ−１ｂ／Ｌの対立遺伝子、突然変異体又は配列の不一致のいずれかであるように思われる。広範な配列同一性により、ＮＹ−ＥＳＯ−１からの多くのエピトープはまた、これら他の抗原を発現している腫瘍に対する免疫も誘導することができる。図１を参照。ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＬＡ
ＧＥは、アミノ酸７０までは事実上同一である。アミノ酸７１からアミノ酸１３４では、２つのタンパク質間で同一の箇所は最長でも６残基であるが、潜在的に交差反応可能な配列が存在する。アミノ酸１３５からアミノ酸１８０では、ＮＹ−ＥＳＯ及びＬＡＧＥ−１ａ／ｓは、ただ一つの残基以外は同一であるが、ＬＡＧＥ−１ｂ／Ｌは選択的スプライシングにより関連性がない。ＣＡＭＥＬ及びＬＡＧＥ−２抗原は、ＬＡＧＥ−１のｍＲＮＡ由来とは思われるものの、別のリーディングフレームに由来し、その結果関連性のないタンパク質配列が生じるものと思われる。つい最近、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ２７７３１５．５（ヒト染色体ＸのクローンであるＲＰ５−８６５Ｅ１８及びＲＰ５−１０８７Ｌ１９、完全配列）は、この領域内の３つの独立遺伝子座を報告しており、ＬＡＧＥ１（ゲノムアセンブリ中のＣＴＡＧ−２に相当）、ＬＡＧＥ２−Ａ及びＬＡＧＥ２−Ｂ（両者ともゲノムアセンブリ中のＣＴＡＧ−１に相当）と名づけられている。

ＭＡＰＥ、ＤＡＧＥ及びＯＩＰ４としても知られているＰＲＡＭＥは、もともとはメラノーマ抗原として観察された。その後、これは癌・精巣（ＣＴ）抗原として認識されたが、多くのＣＴ抗原（ＭＡＧＥ、ＧＡＧＥ及びＢＡＧＥ等）とは異なり、ＰＲＡＭＥは急性骨髄性白血病において発現する。ＰＲＡＭＥは、その大部分が仮想タンパク質から構成されるＭＡＰＥファミリーの一員であって、それらとの配列類似性は限定的である。ＴｕＡＡとしてのＰＲＡＭＥの有用性は、「腫瘍拒絶抗原前駆体ＤＡＧＥをコードする単離された核酸分子、及びその使用」と題される米国特許第５，８３０，７５３号に教示されている。

「前立腺特異的膜抗原」と題される米国特許第５，５３８，８６６号に記載されるＴｕＡＡであるＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）は、正常な前立腺上皮により発現され、前立腺癌中において高レベルである。これは、非前立腺腫瘍の新生血管系においても見られる。したがって、ＰＳＭＡは前立腺癌及び他の腫瘍の両者の新生血管系に対して作られたワクチンの基礎となり得る。後者の概念は、２００１年３月７日付で出願された「癌に対する抗血管新生ワクチン」と題される米国仮出願第６０／２７４，０６３号、及び２００２年３月７日付で出願された「癌に対する抗血管新生製剤」と題される米国出願第１０／０９４，６９９号（公開番号２００３００４６７１４ Ａ１）により完全に記載されている。要約すると、腫瘍はその成長に従い、新たな血管の内部成長を強化する。このことは成長の維持にとって必要であると理解されているが、その理由としては、血管を発達させていない腫瘍の中心は通常壊死すること、また、血管形成阻害剤は腫瘍退縮を起こすと報告されてきたことがある。このような新たな血管すなわち新生血管系は、既に存在している血管には認められない抗原を発現しているため、それを特異的に標的化することができる。新生血管系抗原に対するＣＴＬを誘導することにより、該血管を崩壊させることができ、腫瘍への栄養分の流れ及び腫瘍からの老廃物の除去を妨げ、腫瘍の退縮につなげられる。

ＰＳＭＡｍＲＮＡの選択的スプライシングによって、見かけ上Ｍｅｔ₅₈から始まるタンパク質が生じ、「選択的にスプライシングされた前立腺特異的膜抗原をコードする単離された核酸分子、及びその使用」と題される米国特許第５，９３５，８１８号に記載されるように、ＰＳＭＡの推定膜アンカー領域を欠失する。ＰＳＭＡ様タンパク質と称されるタンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２６１７１５）はＰＳＭＡのアミノ酸３０９〜７５０とほぼ同一であるが、異なる発現プロファイルを有する。したがって、最も好ましいエピトープは、アミノ酸５８〜３０８に位置するＮ末端を有するものでる。

ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）は、カリクレインファミリーのペプチダーゼであり、前立腺の分化抗原である。乳房組織における発現も報告されている。別名として、γ−セミプロテイン、カリクレイン３、セミノゲラーゼ（seminogelase）、セミニン及びＰ−３０抗原が挙げられる。ＰＳＡは、さまざまな選択的スプライシング産物（前立腺／腺カリクレ
イン−１及び−２、並びにカリクレイン−４）と高度の配列同一性を有し、前立腺及び乳房組織においても発現する。他のカリクレインは、通常、配列同一性はより低く、且つ異なる発現プロファイルを有する。とはいえ、ワクチンの設計時には、任意の特定のエピトープにより引き起こされ得る交差反応性の他、そのエピトープが非標的組織中におけるプロセッシング（最も一般的には、ハウスキーピングプロテアソームによる）により遊離される可能性についても考慮されるべきである。

ＳＣＡＨ−２としても知られているＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）は、前立腺上皮細胞において選択的に（preferentially）発現し、且つ前立腺癌において過剰発現する分化抗原である。低レベルの発現は、消化管及び腎臓の集合管の神経内分泌細胞を含むいくつかの正常細胞において見られる。ＰＳＣＡは、「ヒト幹細胞抗原」と題される米国特許第５，８５６，１３６号に記載されている。

ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４としても知られているシナプトネマ構造タンパク質１（ＳＣＰ−１）は、減数分裂関連タンパク質であり、癌・精巣抗原でもある（Tureci, O.他、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 5211-5216, 1998）。癌抗原としては、その発現は細胞周期により制御されてはおらず、しばしばグリオーマ、乳房、腎細胞及び卵巣癌において見られる。ミオシンといくらかの類似性を有するが、交差反応性エピトープを即座に生じさせないには十分な程度に同一性は低い。

フィブロネクチンのＥＤ−Ｂドメインもまた、潜在的標的である。フィブロネクチンは、ＥＤ−Ｂドメインが、主として腫瘍胎児組織中で使用される単一エクソンにコードされる、発生学的に制御される選択的スプライシングを受けやすい（Matsuura, H.及びS. Hakomori、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 6517-6521, 1985；Carnemolla, B.他、J. Cell
Biol. 108: 1139-1148, 1989；Loridon-Rosa, B.他、Cancer Res. 50: 1608-1612, 1990；Nicolo, G.他、Cell Differ. Dev. 32: 401-408, 1990；Borsi, L.他、Exp. Cell Res.
199: 98-105, 1992；Oyama, F.他、Cancer Res. 53: 2005-2011, 1993；Mandel, U.他、APMIS 102: 695-702, 1994；Farnoud, M. R.他、Int. J. Cancer 61: 27-34, 1995；Pujuguet, P.他Am. J. Pathol. 148:579-592, 1996；Gabler, U.他、Heart 75: 358-362, 1996；Chevalier, X. Br. J. Rheumatol. 35: 407-415, 1996；及びMidulla, M. Cancer Res. 60:164-169, 2000）。

ＥＤ−Ｂドメインは、新生血管系のフィブロネクチンにおいても発現する（Kaczmarek,
J.他、Int. J. Cancer 59: 11-16, 1994；Castellani, P.他、Int. J. Cancer 59: 612-618, 1994；Neri, D.他、Nat. Biotech. 15: 1271-1275, 1997；Karelina, T. V.及びA. Z. Eisen, Cancer Detect. Prev. 22: 438-444, 1998；Tarli, L.他、Blood 94: 192-198, 1999；及びCastellani, P.他、Acta Neurochir. (Wien) 142: 277-282, 2000）。腫瘍胎児性ドメインとして、ＥＤ−Ｂドメインは一般に、新生血管系により発現されるのに加えて、腫瘍細胞により発現されるフィブロネクチンにおいて見られる。したがって、ＥＤ−Ｂドメインを標的とするＣＴＬ誘導ワクチンは、２つの作用機構を示すことができる：腫瘍細胞の直接的溶解、及び腫瘍に関連した新生血管系の崩壊による腫瘍への血液供給の阻害である。ＣＴＬ活性はワクチンの使用中止後迅速に減衰するため、正常な血管形成への干渉は最小化され得る。新生血管系を標的とするワクチンの設計及び試験は、２００１年３月７日付で出願された「癌に対する抗新生血管系ワクチン」と題される米国仮出願第６０／２７４，０６３号、及び２００２年３月７日付で出願された「癌に対する抗新生血管系製剤」と題される米国出願第１０／０９４，６９９号（公開番号２００３００４６７１４ Ａ１）に記載されている。腫瘍細胞系統は、２００２年３月７日付けで出願された「ＨＬＡトランスジェニックマウス腫瘍細胞系統」と題される米国仮出願第６０／３６３，１３１号に記載されている。

癌胎児性抗原（ＣＥＡ）は、１９６５年に始めて記載された例証的な（paradigmatic）腫瘍胎児タンパク質である（Gold及びFreedman, J. Exp. Med. 121: 439-462, 1965）。より詳細な参考文献は、「オンライン・人類のメンデル遺伝；登録番号１１４８９０（the Online Medelian Inheritance in Man; record* 114890）」に見出すことができる。これは、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）と公式に改名された。その発現は、消化管及び胎児の結腸の上皮層の腺癌と、最も強く関連する。ＣＥＡは免疫グロブリン超遺伝子ファミリーの一員であって、且つＣＥＡサブファミリーを特徴付ける一員である。

バキュロウイルスＩＡＰリピート含有タンパク質５（ＢＩＲＣ５）としても知られているスルビビンは、腫瘍胎児発現パターンを有する別のタンパク質である。これはアポトーシス阻害タンパク質（ＩＡＰ）遺伝子ファミリーの一員である。これは癌において広範に過剰発現され（Ambrosini, G.他、Nat. Med. 3: 917-921, 1997；及びVelculiscu V. E.他、Nat. Genet. 23: 387-388, 1999）、アポトーシス阻害剤としてのその機能は、悪性の表現型に寄与すると信じられている。

ＨＥＲ２／ＮＥＵは上皮成長因子受容体に関係する癌遺伝子であり（van de Vijver他、New Eng. J. Med. 319: 1239-1245, 1988）、ｃ−ＥＲＢＢ２癌遺伝子とおそらく同一である（Di Fiore他、Science 237: 178-182, 1987）。ＥＲＢＢ２の過剰発現は、前立腺癌の腫瘍化形質転換に関係があるとされてきた。ＨＥＲ２に関しては、発現レベルが腫瘍の悪性度と相関する他の腫瘍の内では、乳癌の２５〜３０％において増幅且つ過剰発現される（Slamon他、New Eng. J. Med. 344: 783-792, 2001）。より詳細な記載は、オンライン・人類のメンデル遺伝；登録番号１６４８７０において入手可能である。

腫瘍関連抗原のさらなる例として、Ｍｅｌａｎ−Ａ（ＭＡＲＴ−１）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＣＥＡ、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ（ＬＡＧＥ）、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ−Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプステイン・バー・ウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ １９−９、ＣＡ ７２−４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、β−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α−フェトプロテイン、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ １２５、ＣＡ １５−３（ＣＡ ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ並びにＴＰＳ等が挙げられる。

さらなる腫瘍関連抗原は、www.cancerimmunotherapy.org/SEREX/における「血清学的発現クローニングによるヒト腫瘍抗原の同定：ＳＥＲＥＸについてのオンラインレビュー（"Identification of human tumor antigens by serological expression cloning: an online review on SEREX"）」、Chen, YT、Cancer Immun. 2004（２００４年３月１０日更新；２００４年４月１日引用）；及び「Ｔ細胞によって認識される腫瘍抗原の列挙（"A listing of tumor antigens recognized by T cells"）」、Renkvist, N.他、Cancer Immunology Immunotherapy, 50: 3-15 (2001)に記載されている。

Scanlan他、「癌／精巣遺伝子：レビュー、標準化及び論評（"The cancer/testis genes: Review, standardization, and commentary"）」、Cancer Immunity 4: 1（２００４年１月２３日）を出典とする表２は、ＣＴ抗原のリストを提供する。表３は、表２のＣＴ抗原に対する、さまざまな腫瘍型におけるｍＲＮＡの発現頻度を提供する。Scanlan他、「癌／精巣遺伝子：レビュー、標準化及び論評」、Cancer Immunity 4: 1（２００４年１月２３日）。

腫瘍の血管新生と関連するさらなる抗原は、米国特許第６，３４２，２２１号に記載さ
れているＶＥＧＦＲ２（血管内皮成長因子受容体２）；及び国際特許ＷＯ９９４３８０１に記載されている内皮特異的受容体トリプシンキナーゼであるＴｉｅ−２である。

当業者は、血管細胞に関連する任意の他の抗原又はタンパク質（現在知られているもの及び未同定のものを含む）が、本願の免疫原性組成物の標的になり得ることを理解するであろう。

組成物
例えばワクチンを含む免疫原性組成物は、完全な抗原又はエピトープ性ペプチドを用いて調製することができる。ペプチド免疫原は、例えば、当業者に既知である標準的ペプチド合成手段を用いて容易に調製することができる。免疫原は、化学合成を行う多数の企業のいずれかにより商業的に作製することができる。このような企業の例として、アメリカン・ペプチド社（American Peptides, Inc.）があり、その販売業者はクリナルファＡＧ（CLINALFA AG）（Laufelfingen、スイス）である。抗原あるいは免疫原はＧＭＰスタンダードに基づいて調製することができ、ＨＰＬＣ解析により純度を評価することができる。該産物は、アミノ酸解析により特徴付けることができ、無菌性及び発熱物質の不在を検査することができる。

抗原は、直接的に又は間接的に動物の系に送達されてもよい。例えば、ポリペプチドは、ポリペプチドとして直接的に送達されてもよく、又は例えばＤＮＡ構築物又はベクター若しくは所望の抗原をコードする組み換えウイルスを用いて、間接的に送達されてもよい。プロフェッショナル抗原提示細胞中における発現を促すベクターであれば、いずれもこの目的に好適であり得る。間接的送達において、抗原は細胞中で発現され、次いで細胞表面上のＭＨＣクラス１により提示され、ＣＴＬ応答を刺激する。抗原の分泌型の発現は、膜タンパク質である抗原を認識する抗体応答を誘導するのに有用であり得る。

好ましい実施形態において、コードされた抗原は、裸のプラスミド発現ベクターの型で送達されることができる。特に有用な構築物は、「標的関連抗原のエピトープをコードする発現ベクター」と題される米国出願第０９／５６１，５７２号、「標的関連抗原のエピトープをコードする発現ベクター及びその設計方法」と題される米国出願第１０／２９２，４１３号（公開番号２００３０２２８６３４ Ａ１）、米国出願第１０／２２５，５６８号（公開番号２００３−０１３８８０８）、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２６２３１（公開番号ＷＯ２００４／０１８６６６）、「プラスミド増殖における望ましくない複製中間産物の回避」と題される米国特許第６，７０９，８４４号、及び「抗原提示細胞におけるエピトープ同調」と題される米国出願第１０／０２６，０６６号（公開番号２００３０２１５４２５ Ａ１）に開示されている。付加的な方法論、組成物、ペプチド及びペプチド類似体が、「ＳＳＸ−２ペプチド類似体」と題される本願と同じ日付で出願された米国仮出願 ／ , （代理人整理番号 MANNK. 038PR）に開示されている。さらなる方法論、組成物、ペプチド及びペプチド類似体が、「ＮＹ−ＥＳＯペプチド類似体」と題される当該出願と同じ日付で出願された米国仮出願 ／ , （代理人整理番号 MANNK. 039PR）に開示されている。免疫化に対する裸ＤＮＡの使用の実行可能性及びそれに関連した一般的手順は、「ＤＮＡ配列の注射による哺乳類における防御免疫応答の誘導」と題される米国特許第５，５８９，４６６号、及び「腫瘍関連抗原ペプチドをコードする裸ポリヌクレオチドの投与による、腫瘍関連抗原に対して宿主を免疫化する方法及び装置」と題される米国特許第５，６７９，６４７号に記載されている。前者は、筋肉内又は皮内注射のみを教示し、後者は皮膚又は粘膜への投与のみを教示する。

好ましい実施形態において、抗原は、直接的にリンパ系に投与することができる。ＣＴＬ産生を目的とした節内投与が、それぞれ「ＣＴＬ応答を誘導する方法」と題される、米国出願第０９／３８０，５３４号及び同０９／７７６，２３２号（公開番号２００２００
０７１７３ Ａ１）並びに国際出願ＰＣＴＵＳ９８／１４２８９（公開番号ＷＯ９９０２１８３ Ａ２）に教示されている。リンパ節内（ｉ．ｌｎ．）への単回ボーラス注射は、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によって同レベルのＣＴＬ応答を得るために必要な用量の０．１％しか必要としなかった。したがって、ｉ．ｌｎ．送達される単回ボーラスによって全身ウイルス感染に対する防御応答を確立することができるが、これは実用上の限界に近い用量のｉ．ｍ．送達では不可能である。ｉ．ｍ．ボーラス注射を繰り返しても末梢ウイルス感染又は移植腫瘍に対する防御応答を確立することに失敗した一方で、低用量をｉ．ｌｎ．投与すると十分に効果的であった。特に有用な節内免疫化プロトコルは、「ＭＨＣクラス１拘束性免疫応答の規模及び質を制御する方法」と題される米国仮出願第６０／４７９，３９３号、及び本願と同日付で出願された「予防又は治療を目的とした、ＭＨＣクラス１拘束性エピトープに対する免疫応答を誘発、増強及び維持する方法」と題される米国出願 ／ , （代理人整理番号、MANNK. 034A）（公開番号 ）に教示されている。

抗癌性免疫原性組成物において有利であり得るエピトープクラスは、ハウスキーピングエピトープである。これらはハウスキーピング（すなわち標準的な）プロテアソームの作用により生成される。ハウスキーピングエピトープは、プロフェッショナル抗原提示細胞（ｐＡＰＣ）の免疫プロテアソームによるタンパク質分解プロセッシングを介して、発現ベクターの翻訳産物から遊離され得る。本発明の一実施形態においては、ハウスキーピングエピトープ（複数可）に隣接している配列を、所望の位置（複数可）で免疫プロテアソームによる切断を促進するように改変することができる。ハウスキーピングエピトープ、その使用及び同定は、２０００年４月２８日付で出願された米国出願第０９／５６０，４６５号、及び２００１年１２月７日付で出願された「抗原提示細胞におけるエピトープ同調」と題される米国出願第１０／０２６，０６６号（公開番号２００３０２１５４２５ Ａ１）、並びに２０００年４月２８日付で出願された「エピトープの発見方法」と題される米国出願第０９／５６１，０７４号に記載されている。

ハウスキーピングエピトープの例は、２００１年４月６日付で出願された米国仮出願第６０／２８２，２１１号；２００１年１１月７日付で出願された同６０／３３７，０１７号；２００２年３月７日付で出願された同６０／３６３２１０号；及び２００２年９月５日付で出願された同６０／４０９，１２３号；２００２年４月４日付で出願された米国出願第１０／１１７，９３７号（公開番号２００３０２２０２３９Ａ１）；並びに両者とも「エピトープ配列」と題される米国出願第１０／６５７，０２２号及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２７７０６（公開番号ＷＯ０４０２２７０９Ａ２）に開示されている。

本発明の他の実施形態において、ハウスキーピングエピトープ（複数可）は、任意の配列、又は免疫プロテアソーム切断部位の中で好ましいことが知られている残基を組込んだ配列に隣接していても良い。本明細書中で使用する場合、「任意の配列」とは、エピトープの天然の配列関係、それらのプロセッシングを促進する能力又は免疫学的機能を考慮せずに選択される配列を意味する。本発明のさらなる実施形態において、複数のエピトープを、頭−尾状に配置させることができる。これらの配置は、全体をハウスキーピングエピトープから構成することができる。同様に、該配置は、ハウスキーピングエピトープ及び免疫エピトープの交互配列を含むことができる。あるいは、該配置は、完全であるか、又は末端が切断されているかによらず、免疫エピトープに隣接するハウスキーピングエピトープを含むことができる。さらに、該配置は、任意の他の類似した配置であり得る。該配置の末端位置にハウスキーピングエピトープを置くことになんら制限はない。ベクターは、免疫エピトープ源としてのエピトープクラスタを含有する、真正のタンパク質コード配列又はそのセグメントを付加的に含有することができる。「真正の」という用語は、天然のタンパク質配列を示す。

エピトープクラスタ及びその使用は、２０００年４月２８日付で出願された「エピトー
プクラスタ」と題される米国出願第０９／５６１，５７１号；２００１年１１月７日付で出願された「抗原提示細胞におけるエピトープ同調」と題される同１０／００５，９０５号；及び２００１年１２月７日付で出願された同じく「抗原提示細胞におけるエピトープ同調」と題される同１０／０２６，０６６号に記載されている。

本発明の別の実施形態において、コードされた抗原は、ウイルスベクターの型で送達することができる。挿入されたリーディングフレームを発現するが、ウイルスタンパク質をしばしば全く発現しないよう、あるいは少なくともより少数を発現するよう改変したゲノムを有する多彩なウイルスが当業者には知られている。このようなものとして、レンチウイルスを含むレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルスを含むパルボウイルス、ヘルペスウイルス、及びワクシニアウイルスを含むポックスウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。このようなウイルスベクターは、細胞内への核酸成分の送達を容易にし、発現を可能にする。これらベクターのサブセット（例えばレトロウイルスとパルボウイルス）は、これらの核酸成分の宿主ゲノム内への取り込みを促進するが、他のものはそうではない。

また、細菌もベクターとして働くことができる。すなわち抗原の発現を起こすことができる核酸分子を送達するのに用いることができる。例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの株は、マクロファージ（その通常の標的）の細胞質に進入する際、それ自体が溶解するように工夫されており、その結果、プラスミドが放出されて次いで抗原が発現する（Dietrich, G.他、Biotechnology 16: 181-185, 1998）。Ｓｈｉｇｅｌａ
ｆｌｅｘｎｅｒｉ及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉも同様に使用されてきた（それぞれ、Sizemore, D. R.他、Science 270: 299-302, 1995、及びCourvalin, P.他、Life
Sci. 318: 1207-1212, 1995）。

核酸送達を目的とした微生物ベクターの使用は、ベクター自体が招く免疫反応によって複雑化され得る。長期又は繰り返しの投与が必要な場合、早い時期の治療によって誘発された抗体は、有用な量のベクターが、意図された宿主に届くのを妨げる。しかし、リンパ節への直接投与により、例えば、宿主細胞の近傍に非常に少なくした有効量を投与する組合せにより、存在する抗体力価を避ける又は圧倒することができる用量を投与することが可能になる。

ベクターという単語は、本明細書中及び他において、いくつかの様相で、且つさまざまに変更されて使用されてきた（例えば、発現ベクター、ウイルスベクター、送達ベクター等）。根底にある原理は、抗原自体よりもむしろ、抗原の発現を生じさせることが可能な核酸が最終的にＡＰＣに到達するということである。はっきりと、又は特定の文脈により修正されない限り、本明細書中で使用されるベクターという用語は、このような可能性全てを包含することが意図される。

上記で論じられた技術は、抗原が微生物の成分として生成され、次いでそれ自体が免疫原として投与されるような、微生物ゲノムを修飾する手法（染色体外ＤＮＡを含む）からは明確に区別される。ゲノム修飾手法において使用される微生物の例として、ウイルス、細菌、菌類及び原生生物が挙げられる。本明細書中で記載される本発明の実施形態において、ワクチンを含む組成物は、合成済み抗原又はｉｎ ｖｉｖｏで抗原を発現するＡＰＣを生じることができる核酸を含むことができる。別の実施形態において、これら２つの技術の組合せが使用される。例えば、一実施形態では、上記で論じられたような、カプシド又はエンベロープタンパク質中に標的エピトープも組込むウイルスベクターの使用が意図される。

抗原は、単独で使用してもよく、他の抗原又はサイトカインのような他の化合物と組み
合わせて送達してもよい。サイトカインは、ＣＴＬ応答の免疫刺激を増強することが知られており、例えばＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、ＴＮＦ、ＩＦＮ、ＩＬ−１８、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１０、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＳＣＦ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＩＦＮガンマ、ＴＧＦアルファ及びＴＧＦベータ等を含む。サイトカインは当業者に既知であり、文献的に又は商業的に入手可能である。多くの動物及びヒトの腫瘍は、免疫応答の強力な調節因子で且つ免疫介在性の破壊から腫瘍を防御するサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−Ｂ等）を生成することが示されている。腫瘍によるＩＬ−４、ＩＬ−１０又はＴＧＦ−Ｂの生成は、ＣＴＬ応答の確立を含む細胞性免疫の誘導を抑制することにより、この防御効果を達成しているかもしれない。あるいは、ＣＴＬ応答を助けるサイトカインは、抗腫瘍細胞介在性応答と非腫瘍破壊性の体液性応答との間の調和を助けるため、外来的に添加することができる。いくつかのこのような外来性サイトカインは、ＣＴＬ応答（ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ及びＩＦ−２を含む）が強いことが知られている実験的マウスワクチン接種モデルにおいて、有用性を示した。使用され得る効果的な外来性サイトカインの例は、ＧＭ−ＣＳＦである。ＧＭ−ＣＳＦは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＢ７−１又はＢ７−２のようないわゆる「共刺激」分子の発現を増強することが報告されている。これらの共刺激分子は、ＡＰＣによるＣＴＬの刺激中に起こるさまざまな相互作用において、重要な役割を演じる。また、ＧＭ−ＣＳＦはＡＰＣの活性化を誘導すること、及びＡＰＣの成長及び分化を促進することが知られており、重要なＣＴＬ刺激細胞であるこれらＡＰＣの、数及び潜在能力の両方を増大する。

抗原の送達
いかなる特定の仮説によっても縛られたくはないが、Ｔ細胞は長命の機能的な記憶を有さないと考えられている。一方、抗体介在性Ｂ細胞記憶は、長命のエフェクター記憶を有するように思われる。したがって、標的細胞を攻撃するように患者の免疫系が適切に刺激される状態を保持するためには、ＣＴＬ応答を誘導する抗原を長期にわたって送達することが最も好ましい。一手法において、「ＣＴＬ応答を誘導する方法」と題される米国出願第０９／７７６，２３２号（公開番号２００２０００７１７３ Ａ１）（参照により本明細書中に明確に援用される）に開示されているように、エフェクターＣＴＬの機能を維持するために、抗原は事実上、リンパ系中に継続的に維持される。別の手法では、「ＭＨＣクラス１拘束性免疫応答の規模及び質を制御する方法」と題される米国仮出願第６０／４７９，３９３号、及び本願と同じ日付で出願された「予防又は治療の目的で、ＭＨＣクラス１拘束性エピトープに対する免疫応答を誘発、増強及び維持する方法」と題される米国出願 ／ , （代理人整理番号、番号MANNK. 034A）（公開番号 ）に記載されているように、Ｔ細胞記憶は繰り返し誘導され、再増幅且つ再活性化される。抗体及びアジュバントは、生分解性ミクロスフェア又はリポソームとして調製され得ることが示唆される一方、これらの製剤のどれもが、これまでは、癌細胞又は病原体を長期間にわたって攻撃するに有用なＣＴＬ応答を提供しなかった。好ましくは、抗原の送達は、所望の期間を通じて、所望の応答を得るための抗原レベルを維持するに十分なレベルに維持される。一実施形態においては、液体の抗原組成物を入れた容器（reservoir）を、該抗原を動物のリンパ系に到達するように送達するために用いることができる。以下の考察のほとんどは、抗原を送達するための注入(infusion)の使用に焦点を当てているが、リンパ系へ直接的にボーラス注射を用いることも可能である（その回数及び頻度は、使用する抗原の特定の型及び配合により授与される抗原の持続性に依存するだろう）。

最終的には、抗原は、ＣＴＬを最も効果的に刺激するために、リンパ系への道を見つける。抗原の送達は、体のさまざまな区画への注入を包含し得る（皮下、静脈内、腹腔内及びリンパ管内が含まれ、後者が好ましいが、これらに限定されない）。これらの箇所への注入はそれぞれ、リンパ系への抗原取り込みにつながるが、有益なＣＴＬ応答を誘導するのに必要な抗原の相対量は注入部位に応じて変化する。一般的に、リンパ系への抗原の直
接的注入は、ＣＴＬ応答を誘導する最も効果的な手段であると見なされるが、いかなる送達経路を使用してもよい。ポンプシステムは、体の全区画への送達を介して、実質的な量の抗原を、ＣＴＬ応答を誘導するのに好適な範囲で送達することが可能である。さまざまな経路を介した抗原の送達に続くＣＴＬ刺激は、種々の抗原の特性に応じて変化するであろう（体液中での抗原の安定性、体液中での抗原の溶解性、ＨＬＡへの結合親和力及びＣＴＬ刺激物質としての能力などの、体内での抗原の挙動やリンパ液との平衡に達する速度（すなわちリンパ液中での寿命）に影響する因子を含む）。

好ましい実施形態において、抗原の導入は、体内での代謝による抗原の崩壊を回避するため、可能な限りリンパ系へ直接的に行われる。液体抗原を皮下に導入する場合、十分な抗原を確実にリンパ系へ到達させるために、より大量の抗原が必要である。このような皮下注入は本明細書中に開示される発明により意図されるが、コスト、抗原の安定性、どれくらいの速さで抗原がリンパ系へ到達するか、これがどの程度リンパ液により平衡化されるか、及び主治医又は担当の専門家が認識すると思われる他の因子等に依存するものである。皮下送達は、通常、リンパ系への直接送達よりも１００〜１，０００倍多い抗原を必要とし得る。したがって、抗原組成物は、局所投与用装置を通じてリンパ系（例えば脾臓、リンパ節又はリンパ管）に導入されることが好ましい。局所投与用装置は、患者の体外に設置されるか、患者の体内に移植され得る。どちらの場合においても、液体抗原を含有する組成物を入れた容器、上記組成物を輸送するポンプ、及び患者の体の好ましい投与領域に直接的に向けられた、上記容器に通じる伝送路を有し得る。どちらの場合においても、携帯可能であることが好ましい。

患者の体外に設置された装置（外部装置）としては、糖尿病患者にインスリンを送達するのに用いられる数々の装置があり、これらは本明細書中に記載の実施形態による抗原を送達するのに有用である。一般的に、これらの装置は、抗原組成物（インスリンの代わり）を保持する容器、容器から上記組成物を送り出すプログラム制御可能なポンプ、伝達路あるいは上記組成物を伝達するライン（line）、及び上記組成物を動物の体内に導入し、最終的にリンパ系に到達させる手段を有し得る。

好ましくは、抗原組成物のための容器は、長期にわたって所望量の抗原を送達するに十分な大きさを有するべきであって、かつリンパ系へ抗原組成物を導入する手段を使用者が再度挿入することなく、容易に詰め替え可能又は入れ替え可能であるべきである。

本明細書中に開示される発明の実施形態の抗原組成物の調製において、組成物（好ましくは水性）は、リンパ系と適合性であり、且つ治療される動物に対して生理学的に許容可能であるように調製され得る。これに関連して、例えば抗原の物理化学的特性（等電点、分子量、グリコシル化又は他の翻訳後修飾及び全アミノ酸組成等）を考慮することになる。これらの特性と、種々の溶液（例えば、種々の緩衝液、補因子等）中での該薬剤のあらゆる既知の挙動、並びにそのｉｎ ｖｉｖｏでの挙動とをあわせて、処方成分の選択の手助けとすることができる。全ての主要な分解経路に影響を与える一つのパラメータは、溶液のｐＨである。したがって、初期の処方（initial formulations）では、分解反応のｐＨ依存性及び分解のメカニズム（これらは各溶液中でのタンパク質の安定性を決定するために、ｐＨ依存性からしばしば決定できる）も評価する。迅速なスクリーニング方法としては、通常、当該分野で既知の技術を用いた、高温条件（例えば４０℃）での、安定性に関する加速試験の利用が挙げられる。

一般に、本明細書中に記載される実施形態において有用である抗原組成物は、極少量での非経口注射に好適であり得る。このような組成物としては、汚染物を含まず、且つリンパ系のｐＨに適合性であるべきである。しかし、上記抗原組成物は非常に少量が送達されることになるため、血液又はリンパ液と同じｐＨである必要はなく、且つ水性（aqueous-
based）である必要もない。適合性である好ましいｐＨ範囲は、約６．７〜７．３であり、ＵＳＰ規格を満たすため、注射用水を用いて調製することができる（Remington：「薬学の科学及び実践」１９版；８６〜８８章（The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Edition; Chapters 86-88）参照）。溶解しにくい抗原に対しては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はＰＬＵＲＯＮＩＣブランドの界面活性剤等の、適当な補助溶剤又は界面活性剤を使用してもよい。一般的に、生理学的に許容可能な弱酸及びその共役塩基（base conjugate）で緩衝された標準生理食塩溶液（例えば、リン酸塩又はクエン酸緩衝系）が、抗原組成物の基材となるであろう。いくつかの場合において、少量の抗酸化剤が、組成物を安定化し、且つ酸化を防止するのに有用であり得る。抗原組成物の調製において考慮すべき因子は、Jeffery L. Cleland及びRovert Langer（編集者）による「タンパク質及びペプチドの処方及び送達（"Formulation and Delivery of Proteins and Peptides"」（Acs Symposium Series, No. 567）と題される米国化学会の本（１９９４年
）に見出され得る。

ポリペプチドで問題となるさまざまな物理化学的特性は存在しないが、核酸にコードされた抗原に関しても同様に考えて、許容可能な処方をほぼ普遍的に適用可能にすることができる。実施例６から実施例１０に示すように、標準的なリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のプラスミドＤＮＡは、許容可能且つ効果的な配合物である。本発明のいくつかの実施形態において、ＤＮＡは、患者の体に装着又は移植された容器から、連続的に又は短い間隔で断続的に投与される。ＤＮＡは、溶解した安定的な形態に、体温で又は体温近くで、最低でも数日間にわたって維持されることが好ましい。配合された核酸が数日の期間又はそれ以上にわたって容器から送達されるような用途において、その期間における室温又は体温での核酸の安定性は、その滅菌性の持続と同様に重要である。静菌剤（例えばベンジル又はエチルアルコール）及びキレート剤（例えばＥＤＴＡ）の添加は、これらの目的に対して有用である。約０．５〜２％のエチルアルコール、０．２５〜０．５ｍＭＥＤＴＡを含有する配合物は、通常うまく機能する。このような配合物はボーラス注射にも適切である。

一般的に、抗原組成物中の抗原の量は、患者ごと及び抗原ごとに異なることになるが、これは抗原が応答を誘導する活性及び患者の系をリンパ液が流れる速度等の因子に依存する。一般に、抗原組成物は、約１〜約５００μｌ／時、又は約２４〜１，２０００μｌ／日の速度で送達されればよい。抗原の濃度は、約０．１μｇ〜約１０，０００μｇの抗原が２４時間中に送達される濃度である。流速は、１分間に約１００〜約１，０００μｌのリンパ液が成人の鼠径リンパ節を流れるという知見に基づいている。目的は、ワクチン配合物のリンパ系における局所濃度を最大化することである。患者に関する一定量の実験的調査が、特定のワクチン製剤に対する、ヒトにおける最も有効な注入レベルを決定するのに必要であろう。

患者のリンパ系内に抗原組成物を導入するために、組成物はリンパ管、リンパ節、脾臓又はリンパ系の他の適切な部分に向けられることが好ましい。好ましくは、組成物は、鼠径部又は腋下の節等のリンパ節に向けられるが、これはカテーテル又は針をリンパ節に挿入し、カテーテル又は針を送達の間維持することによって行われる。好適な針又はカテーテルは、金属又はプラスチック（例えばポリウレタン、ポリ塩化ビニル[ＰＶＣ]、テフロン（登録商標）、ポリエチレン等）から作製することが可能である。カテーテル又は針を鼠径節に挿入する際に、例えば、鼠径節は、Ｖｉａｌｏｎ（商標）Ｉｎｓｙｔｅ−Ｗ（商標）カニューレ及びＴｅｇａｄｅｒｍ（商標）透明包帯（transparent dressing）（Ｔｅｇａｄｅｒｍ（商標）１６２４、３Ｍ、St. Paul, MN 55144, USA）で固定された２４Ｇ３／４（Beckton Dickinson, USA）のカテーテルを用いて、超音波診断装置の制御下で穿刺される。この手順は、通常熟練した放射線医により行われる。鼠径リンパ節内のカテーテルチップの位置は、最低容量の生理食塩水の注射（これにより、直ちに且つ可視的に、
リンパ節の大きさが増す）により確認される。後者の手順により、チップが節内にあることを確認できる。この手順は、チップがリンパ節から滑り出ないことを保証するのに実行することができ、且つカテーテルの移植後さまざまな日に繰り返すことができる。チップがリンパ節内の位置から滑り出てしまった場合、新たなカテーテルを移植することができる。

処方及び治療プロトコル
ＴｕＡＡとＤＮＡワクチンとの組合せを利用するいくつかのアプローチがある。第一のアプローチは、単一のＤＮＡ発現ベクター中に、所定の組成物中の全ての抗原又は全ての抗原由来のエピトープを含めることである。このアプローチは、製造及び患者への投与に関する簡便性という利点を有する。しかし、場合によっては、エピトープの競合がこのアプローチの有用性を限定し得る。すなわち、複数のエピトープが該組成物中の全てのＴｕＡＡを提示しているワクチンを患者に与えたとき、最も免疫原性が強いエピトープのみが免疫応答を誘発する可能性がある。また、全てのエピトープが高い有効性で発現するＤＮＡワクチンを設計且つ構築することは、より難しい。それにもかかわらず、各種類の癌において患者を治療する手順が簡便且つ均一であるため、そのコストは以下に記載される他のアプローチよりも低くなる見込みがある。

別のアプローチは、１つの抗原のみ、又は１つの抗原のエピトープのみをＤＮＡ発現ベクター中に含むものである。このアプローチは、ＤＮＡベクターを設計且つ構築することにおける簡便性、柔軟性、及び患者へのカスタマイズされた投与といった利点を有する。多数の単一のＴｕＡＡワクチンが入手できれば、各患者個人のＴｕＡＡ発現プロファイルを基に、彼又は彼女の腫瘍に対する治療をカスタマイズできる。例えば、所定の種類の癌を治療する標準的な組合せがＴｕＡＡ−Ａ、Ｂ及びＣ（ここでＡ、Ｂ及びＣは外なる腫瘍関連抗原を意味する）であって、患者の腫瘍はＴｕＡＡ−Ａ、Ｃ及びＺ（Ｂではない）を発現している場合、Ａ、Ｃ及びＺのそれぞれに対する別個のワクチンで患者を治療することができる。抗原の重複性が各患者に対して達成され得るため、この柔軟性及びカスタマイズの可能性（customizability）は、免疫療法の成功率を改善するであろうと期待される。しかし、患者を治療する手順は、より複雑であってもよい。例えば、このアプローチを用いた送達は、逐次的投与スキーム（１度に１抗原）、又は患者の複数の解剖学上別個の部位への、ほぼ同時の注射を含んでもよい。

さらに別のアプローチは、ＤＮＡ発現ベクター（いくつかの組合せに関して、２以上のベクターを使用してもよい）中に、類似した免疫原性を有する複数のＴｕＡＡ由来のエピトープを組み合わせて含めることである。このアプローチは、上記した２つのアプローチのいくつかの利点を有し得るが、前述の２つの不利点も被り得る。

特定の腫瘍の抗原発現のプロファイルは、どの抗原あるいは抗原の組合せを用いるかを決定するために用いることができる。例示的な方法論は、本願と同日付で出願された、「さまざまな種類の癌の診断における腫瘍関連抗原の組合せ」と題される米国出願 ／ ,
（代理人整理番号：MANNK. 035PR2）に見出される。

このような免疫化の方法により利益を受け得る患者は、彼等のＭＨＣタンパク質発現プロファイル及び免疫応答性の全般的なレベルを決定する方法を用いて募ることができる。さらに、彼等の免疫化のレベルは、末梢血の利用を伴った標準的技術を用いてモニターすることができる。最終的に、治療プロトコルは、誘導又は増幅相への応答性及び抗原発現の変動に基づいて調整することができる。例えば、決められた回数の同調用量を投与した後に増幅用量を投与するのではなく、検出可能な応答が得られるまで同調用量を繰り返して投与し、次いで、増幅用量のペプチドを投与する（複数回可）ことができる。同様に、増幅用量又は維持用量のペプチドの有効性が衰退し、抗原特異的制御性Ｔ細胞数が増加し
、又はいくつかの他の寛容化の証拠が観察されたら、予定されていた（scheduled）それらペプチドの投与は中断することができ、且つ該ペプチドによる増幅を再開する前にさらに同調用量を投与することができる。免疫応答性を評価且つモニターする診断技術と免疫化の方法との統合は、本出願と同じ日付で出願された、「診断と治療方法との統合による、能動的免疫療法の改善された効果」と題される米国仮出願 ／ , （代理人整理番号、No. MANNK. 040PR）に、より完全に記載されている。

本発明の多くのバリエーション及び代替的要素が開示されてきた。さらなるバリエーション及び代替的要素は、当業者には明白であろう。本発明のさまざまな実施形態は、これらのバリエーション又は要素のいずれかを明確に含むか、あるいは除外し得る。

以下の実施例は、例示的な目的のみを意図したものであって、本実施形態の範囲を限定することを決して意図しない。

ＴｕＡＡの解析及び組合せの選択
ＴｕＡＡの存在を、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）により測定した。要約すると、全ＲＮＡを標準的な方法によって腫瘍検体から単離し、ｃＤＮＡを標準的な逆転写手順を用いて調製した。相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、ｃＤＮＡのみとアニールするがゲノムＤＮＡとはアニールしない、特異的に設計された遺伝子特異的プライマーを用いて増幅した。１２個の卵巣腫瘍検体及び７個の結腸直腸腫瘍検体のＴｕＡＡ発現パターンを、ＲＴ−ＰＣＲにより解析した。以下の表４に結果をまとめた。

＜実施例１＞
卵巣癌
卵巣癌の場合、解析したすべてのサンプルはＰＲＡＭＥに対して陽性であった。したがって、該組合せへのＰＲＡＭＥの包含は、卵巣癌の症例におけるカバー率を改善する。

抗原の重複性を達成するため、及び大集団のカバー率を改善するため、他の抗原の組合せが、ＰＲＡＭＥに加えて考慮された。ＳＳＸ−２並びにＰＳＭＡは、それぞれ、１２の症例のうち６の症例に存在したが、ＳＳＸ−２とＰＳＭＡとの組合せについては１２の症例のうち９の症例のカバー率であった。ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２はそれぞれ１２の症例のうち５及び６の症例にしか存在しないにもかかわらず、ＮＹ−ＥＳＯ−１又はＳＳＸ−２のどちらかであれば、１２の症例のうち７の症例で検出された。

したがって、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２及びＰＳＭＡ、又はＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２の組合せは、ＰＲＡＭＥ及びＰＳＭＡの組合せ又はＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２の組合せと比較して、好ましいカバー率及び重複性を示した。解析した卵巣腫瘍サンプルの大部分は、本願組成物中の４つのＴｕＡＡのうち少なくとも２つを有していたため、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２及びＰＳＭＡの組合せは、優れたカバー率及び良好な抗原の重複性をもたらした。ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ−２、ＰＳＭＡ及びＮＹ−ＥＳＯ−１の組合せは、より好ましい抗原の重複性をもたらしたため、腫瘍の逃避の可能性が低くなった。

＜実施例２＞
結腸直腸癌
結腸直腸癌の場合、ＰＲＡＭＥ及びＰＳＭＡはそれぞれ、解析された７サンプルのうち５サンプルで検出された。７症例のうち６症例で、ＰＲＡＭＥ又はＰＳＭＡのいずれかが検出された。ＳＳＸ−２は７症例のうち２症例でしか検出されなかったが、ＳＳＸ−２−ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ−２−ＰＳＭＡの組合せの両方で、カバー率が７症例のうち６症例に増加した。同様に、ＮＹ−ＥＳＯ−１は７症例のうち１症例のみで検出されたが、ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＰＲＡＭＥの組合せ、並びにＮＹ−ＥＳＯ−１−ＰＳＭＡの組合せでは、カバー率が７症例のうち６症例に増加した。ＰＲＡＭＥ及びＰＳＭＡの組合せに、ＳＳＸ−２又はＮＹ−ＥＳＯ−１を加えると、カバー率が、７症例のうち７症例へと改善した。したがって、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ及びＮＹ−ＥＳＯ−１の組合せ、又はＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ及びＳＳＸ−２の組合せは、患者の大部分に対して良好なカバー率及び抗原の重複性をもたらした。ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２の組合せはさらなる重複性をもたらした。

＜実施例３＞
膵臓癌
膵臓癌検体において、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２の存在はそれぞれ、検体の４０％及び２０％で検出された。ＰＳＭＡ、及びＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現がそれぞれ、膵臓腫瘍の１００％及び２１％に存在すると報告された（Chang SS他、Cancer Res 1999, 59: 3192；Safran H他、Am J Clin Oncol. 2001, 24: 496）。ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は、癌組織を好ましい標的たらしめ、免疫療法に対するいくらかの特異性を提供するが、正常組織でのＨＥＲ２／ｎｅｕの低レベルの発現が懸念される。したがって、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２及びＰＳＭＡの組合せは、膵臓癌の治療にふさわしい優れたカバー率及びいくらかの重複性をもたらす。

＜実施例４＞
非小細胞肺癌
非小細胞肺癌に関しては、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥの存在、Ｈｅｒ２／ｎｅｕの過剰発現、及びＰＳＭＡの存在は、それぞれ、２１、１５、６０、６、１６及び１００％であったと報告されている（Scanlan MJ他、Cancer lett 2000, 150: 155；Chang SS他、Cancer Res 1999, 59: 3192；Selvaggi G他、Cancer 2002, 94: 2669）。したがって、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥ−３及びＰＳＭＡは、非小細胞肺癌の免疫療法にふさわしいカバー率及び抗原の重複性をもたらす。

＜実施例５＞
腎細胞癌
腎細胞癌に関しては、ＳＳＸ−２、ＰＳＭＡ及びＰＲＡＭＥがそれぞれ、５、１００及び４０％の頻度で検出された（Sahin, U他、Clin Cancer Res. 2000, 6: 3916；Chang SS他、Urology 2001, 57: 801；Neumann E他、Cancer Res. 1998, 58: 4090）。したがって、ＰＳＭＡ及びＰＲＡＭＥの組合せは、腎細胞癌に対して優れたカバー率及び重複性を提供する。ＰＳＭＡ及びＰＲＡＭＥの組合せにＳＳＸ−２を加えると、重複性が改善される。

＜実施例６＞
メラノーマ
メラノーマに関しては、Ｍｅｌａｎ−Ａ、チロシナーゼ、ＮＹＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２がそれぞれ、腫瘍検体の９２、９２、４１及び３５％に存在すると報告された（Fetsch
PA他、Cancer 1999, 87: 37；Fetsch PA他、Cancer 2000, 90: 252；Schultz-Thater E
他、Br J Cancer 2000, 83:204；Sahin, U他、Clin Cancer Res. 2000, 6: 3916）。したがって、Ｍｅｌａｎ−Ａ、チロシナーゼ、ＮＹＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２の組合せは、メラノーマの免疫療法にふさわしい優れたカバー率及び抗原の重複性をもたらす。有意な重複性が、チロシナーゼ及びＭｅｌａｎ−Ａを共に使用すること、又はＮＹＥＳＯ−１及びＳＳＸ−２とチロシナーゼ又はＭｅｌａｎ−Ａのいずれかを組み合わせることにより達成される。

＜実施例７＞
２つの抗原からのエピトープ発現プラスミドを用いた免疫化のスケジュール
２群のＨＨＤマウス（ｎ＝４）を、図１に示されるように、Ｍｅｌａｎ−Ａ_26-35Ａ２７Ｌ（ＥＬＡ）発現ｐＳＥＭ及びＳＳＸ−２_41-49発現ｐＣＢＰを混合物として、又はｐＳＥＭを左の鼠径リンパ節に、かつｐＣＢＰを右の鼠径リンパ節に２回（０日目及び４日目）、リンパ節内注射により免疫化した。プラスミド量は２５μｇ／プラスミド／１回量であった。２週間後、動物を屠殺し、ペプチドとともに電気パルスをかけた、あるいはパルスをかけないＴ２細胞に対する細胞傷害性を計測した。

＜実施例８＞
相異なる（distinct）抗原を担持する異なるベクターの同時投与
実施例７に記載されたように免疫化した動物を屠殺し、各群からの腎細胞をプールし、２つのペプチド（ＥＬＡ又はＳＳＸ−２_41-19）で並行して刺激した。細胞傷害性を、Ｃｒ⁵¹で標識された、ペプチドを負荷したＴ２標的細胞とインキュベートすることにより計測した。図２のデータは、さまざまな標的細胞に対する特異的細胞傷害性の平均（ｎ＝４／群）を示す。

上記の結果から、プラスミド混合物の使用は、ｐＣＢＰプラスミドにより誘発された応答を妨げることが示されるが、２つのプラスミドの投与部位を隔離すると、ｐＣＢＰの活性が回復する。したがって、異なる抗原を担持する異なるベクターの同時投与は、免疫原性に関する序列を確立し得る。ベクターの隔離により、非優性成分の免疫原性を取り戻すことができ、多面的な（multivalent）応答を生じさせることができる。

＜実施例９＞
ペプチドによる追加免疫工程の付加による多面的応答の回復
４群のＨＨＤマウス（ｎ＝６）を、図３に示されるように、ｐＳＥＭ及びｐＣＢＰを混合物として、又はｐＳＥＭを左の鼠径リンパ節に、かつｐＣＢＰを右の鼠径リンパ節に２回（０日目及び４日目）、リンパ節内注射により免疫化した。対照として、ｐＳＥＭ又はｐＣＢＰＰプラスミドのいずれかでマウスを免疫化した。プラスミド量は２５μｇ／プラスミド／１回量であった。２週間後、プラスミドでの免疫化用量及び組合せに基づき（mirroring）、該動物をＭｅｌａｎ−Ａ及び／又はＳＳＸ−２ペプチドで追加免疫した。２週間後、該動物を、ＣＦＳＥで染色し、且つＭｅｌａｎ−Ａ又はＳＳＸ−２ペプチドを負荷した又は負荷しないＴ２細胞脾臓細胞でチャレンジし、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞傷害性を評価した。

＜実施例１０＞
ペプチドによる増幅は、非優性エピトープの免疫原性を回復させる
実施例９に記載されたようにマウスを免疫し、ＥＬＡ又はＳＳＸ−２ペプチドでコートしたＨＨＤ同腹子脾臓細胞でチャレンジした。同時に２つの抗原標的の特異的な溶解を評価することが可能な３ピークＣＦＳＥ ｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性検定を採用した。同数の対照ＣＦＳＥ^lo、ＳＳＸ−２_41-49−ＣＦＳＥ^med、及びＥＬＡ−ＣＦＳＥ^hi細胞を、免疫化マウスに静脈内注入し、１８時間後にマウスを屠殺し、脾臓における標的細胞の消失を、フローサイトメトリーを用いて、ＣＦＳＥ蛍光により計測した（図４）。図４は、個
々のマウスからのＳＳＸ−２及びＭｅｌａｎ−Ａ抗原標的の特異的な溶解割合、並びに各群に対する平均及びＳＥＭを示す。

結果から、プラスミドを含む２つのワクチンの混合物に続けてペプチドで動物を免疫すると、両方の抗原に対する免疫を生じ、最も高い免疫応答を起こすことが示され、脾臓におけるＳＳＸ−２特異的溶解の割合は平均で３０＋／−１１、及びＭｅｌａｎ−Ａ特異的溶解の割合は平均で９７＋／−１であることが示された。

＜実施例１１＞
同調−及び−増幅免疫化に関する実際の臨床
図２及び図４のデータは、図５に示されるように、臨床における強い多面的応答を達成する２つのシナリオを示唆する。第一のシナリオ（Ａ）では、追加免疫のためのペプチドの使用により、プラスミド及びペプチドが混合物として使用された場合であっても、多面的免疫応答が回復する。第二のシナリオ（Ｂ）では、各プラスミド及びペプチド成分の隔離により、多面的免疫応答の誘導が可能になる。

＜実施例１２＞
抗原配列
以下は、表１に記載された抗原の配列である。

２つのプラスミド（ＳＳＸ２ ４１−４９を発現するｐＣＢＰ及びＭｅｌａｎＡを発現するｐＳＥＭ）を用いた免疫化のスケジュールを示す図である。 図１のプロトコルを用いて得られたＣＴＬ活性を示す棒グラフである。 ２つのエピトープを提示しているプラスミド及びペプチドを用いた同調−及び−増幅免疫化プロトコルの、免疫化のスケジュールを示す図である。 図３のプロトコルに従って免疫化したマウスにおける、エピトープをパルス導入した細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの除去を示す表である。 多面的応答を誘導する好ましい免疫化プロトコルを示す図である。 多面的応答を誘導する好ましい免疫化プロトコルを示す図である。

Claims (13)

1. 腎細胞癌を治療するための薬剤であって、
   第一の抗原及び第二の抗原を少なくとも含み、前記第一の及び第二の抗原は個々に又は組合せて含まれ、各々の抗原は１）全抗原、２）抗原由来のエピトープクラスタ、３）抗原由来のエピトープ、又は４）１）〜３）のいずれかをコードする核酸であり、
   前記第一の抗原はＰＲＡＭＥであり、前記第二の抗原はＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される抗原である、薬剤。
2. 前記請求項１に記載の薬剤であって、少なくとも、該薬剤が第一及び第二の抗原を含む、１回の処方用である、薬剤。
3. 前記薬剤は各々が、前記第一及び第二の抗原の一方を含む、少なくとも２回の別個の処方用である、請求項１に記載の薬剤。
4. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、
   第一の抗原及び第二の抗原を少なくとも含み、前記第一の及び第二の抗原は個々に又は組合せて含まれ、各々の抗原は１）全抗原、２）抗原由来のエピトープクラスタ、３）抗原由来のエピトープ、又は４）１）〜３）のいずれかをコードする核酸であり、
   前記第一の抗原はＰＲＡＭＥであり、前記第二の抗原は、ＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される抗原であり、前記薬剤はリンパ節内投与により投与されることを特徴とする、薬剤。
5. 前記第二の抗原が腫瘍関連抗原を含む、請求項４に記載の薬剤。
6. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、ＰＲＡＭＥと、ＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される少なくとも１つの他の抗原を含む、少なくとも第一の抗原及び第二の抗原に対するＴ細胞応答が誘導される薬剤を含み、
   各々の抗原は１）全抗原、２）抗原由来のエピトープクラスタ、３）抗原由来のエピトープ、又は４）１）〜３）のいずれかをコードする核酸である、免疫原性の薬剤。
7. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、
   ＰＲＡＭＥと、ＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される腎細胞癌に関連する少なくとも１つの他の抗原を含む、少なくとも第一の抗原及び第二の抗原に対するＴ細胞応答が誘導される成分を含み、
   前記薬剤はさらに生理学的に許容される緩衝液を含む、薬剤。
8. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、
   前記薬剤が、ＰＲＡＭＥと、ＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される腎細胞癌に関連する少なくとも１つの他の抗原を含む、少なくとも第一の抗原及び第二の抗原に対するＴ細胞応答を誘導する、薬剤。
9. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、少なくとも第一の抗原及び第二の抗原を含み、
   前記第一の抗原及び第二の抗原は個々に又は組合せて含まれ、各々の抗原は１）全抗原、２）抗原由来のエピトープクラスタ、３）抗原由来のエピトープ、又は４）１）〜３）のいずれかをコードする核酸であり、
   前記薬剤はＰＲＡＭＥ並びにＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される少なくとも１つの他の抗原を含み、
   前記薬剤はリンパ内投与で処方されることを特徴とする、免疫薬剤。
10. 腎細胞癌を治療するための免疫原性の薬剤であって、ＰＲＡＭＥと、ＳＳＸ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、及びＰＳＭＡからなる群から選択される腎細胞癌に関連する少なくとも１つの他の抗原を含む、少なくとも第一の抗原及び第二の抗原に対するＴ細胞応答を誘導する成分を含み、前記Ｔ細胞応答が腫瘍の血管新生に応答することを含む、生理学的に許容される緩衝液を含む、免疫原性の薬剤。
11. 前記第一の抗原がＰＲＡＭＥであり、第二の抗原がＰＳＭＡである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の薬剤。
12. ＳＳＸ−２をさらに含む、請求項１１に記載の薬剤。
13. 前記第一の抗原がＰＲＡＭＥであり、前記第二の抗原がＳＳＸ−２である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の薬剤。

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