JP5262725B2 - 核酸検出方法及び核酸検出用チップ - Google Patents
核酸検出方法及び核酸検出用チップ Download PDFInfo
- Publication number
- JP5262725B2 JP5262725B2 JP2008557124A JP2008557124A JP5262725B2 JP 5262725 B2 JP5262725 B2 JP 5262725B2 JP 2008557124 A JP2008557124 A JP 2008557124A JP 2008557124 A JP2008557124 A JP 2008557124A JP 5262725 B2 JP5262725 B2 JP 5262725B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- solution
- detection method
- reference solution
- measuring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3277—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a redox reaction, e.g. detection by cyclic voltammetry
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6825—Nucleic acid detection involving sensors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
本願は、2007年2月6日に出願された日本国特願2007−27222号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
本発明は、また、電気化学的応答の測定により核酸を検出する核酸検出方法であって、核酸に対して直接的あるいは間接的に結合性を有する電気化学的活性物質を含む基準溶液の前記電気化学的応答を測定する基準溶液測定ステップと、前記基準溶液測定ステップで測定の終了した前記基準溶液に前記核酸を含む被検試料を加え被検溶液を調製する被検溶液調製ステップと、前記核酸を一本鎖にする反応を行って被検試料を得る変性ステップと、前記被検溶液の前記電気化学的応答を測定する被検溶液測定ステップと、前記基準溶液の前記電気化学的応答の測定結果と前記被検溶液の前記電気化学的応答の測定結果とを比較して比較結果を導出する比較ステップと、前記比較結果を基に前記被検溶液中の前記核酸の含有情報を検出する核酸含有情報検出ステップとを含む核酸検出方法を提供する。
が可能となる。
また、本発明の核酸検出方法によれば、必ずしも検出対象核酸を増幅するステップを経ずに測定ができるため、迅速で低コストな測定が可能であり、増幅に適さない分子や増幅の必要のない場合も含め、広い範囲の対象分子に応用できる。
また、二本鎖の核酸鎖を一本鎖にさせる変性により検出を容易にすることもできる。
上記の方法によれば、核酸検出を行った後に、同じ反応槽で電気化学的活性物質を含む基準溶液を用いた電気化学的測定を行うことによりキャリブリレーションが可能となるので、センサ部等の異常を検知することができ、信頼性の高い検出を行うことができる。
上記の方法によれば、核酸検出を行った後に、同じ反応槽で電気化学的活性物質を含む基準溶液を用いた電気化学的測定を行うことによりキャリブリレーションが可能となるので、センサ部等の異常を検知することができ、信頼性の高い検出を行うことができる。
電気化学的応答の測定では、溶液の電流値及び電圧値を測定する。このとき電気化学的活性物質(酸化還元試薬)の特性により、特異な電圧領域(電位領域)に電流ピークが現れる。そこで、例えば、複数の異なる核酸にそれぞれ特異的に結合し、かつ、それぞれ特有の電位活性を有する電気化学的活性物質を用いれば、各核酸に特異的な電流ピークが現れ、そのときの電位領域より定性が可能となり、また、そのときの電流値より定量も可能となる。すなわち、一度の測定で複数の異なる検出対象核酸の含有情報を同時に検出することが可能となる。
また、前記電気化学的活性物質は、FND(Ferrocenyl naphthalene diimide)、Hoechst
(Hoechst33258、Hoechst33342等を含む)、Distamycin、Nuclear yellow、DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、Berenil、Methylene blue、Mitoxantrone、Daunomycin、Ethidium bromide、Propidium iodide、9-Aminoacridine、Ellipticine、Amsacrine、Hycanthone、Actinomycin D、Chromomycin、Mithramycin A、Echinomycin、Quinacrine、Nogalamycin、Proflavine、Amiloride、Trioxalen、Chloroquineからなる群より選択される一の物質であってもよい。
また、本発明の核酸検出方法では、電荷あるいは電気陰性度を有する分子を検出対象としてもよく、さらに、一本鎖又は二本鎖の核酸、蛋白質、脂質や糖質を検出対象としてもよい。
によりその増幅量が異なる。したがって、正常遺伝子を増幅した試料が含まれる被検溶液と基準溶液とを比較測定し、未知の遺伝子を増幅反応させた試料が含まれる被検溶液を測定し、先の比較測定結果と相対評価することで、未知の遺伝子が正常なものか、変異を起こしているものかを判別することが可能となる。
また、基準溶液及び被検溶液の電気化学的応答の測定は、同一の電極で検出しても、異なる電極で検出してもよく、さらに、測定を複数回行ってもよい。測定方法は、対極及び作用極の2極からなる2電極法、これらに参照電極を加えた3電極法、これら3電極法のうち対極及び作用極が電界トランジスタとなる電気検出法などを利用することができる。
上記の核酸検出用チップによれば、基準溶液と被検溶液を同一のチャンバに順次送液し、電気化学的応答を測定して比較できるため、迅速、かつ安価に検出対象核酸を検出できる。
さらに、上記の構成によれば、検出対象核酸を変性させることによって、検出の感度を上げることができる。
図1Aに示すような電極センサ部を備えた反応槽に、基準溶液として対象生体分子に結合できる酸化還元試薬を含む電解溶媒を充填し、電圧を掃引して電流測定を行う。すると酸化還元試薬が電解溶媒中にほぼ均一に拡散しているので、酸化還元試薬の濃度に応じた拡散電流が測定される。
一方、図1Bに示すように、上記同様の反応槽に対象生体分子が存在する場合には、酸化還元試薬はその生体分子にトラップされるため、酸化還元試薬が電解溶媒中に不均一に拡散された状態となる。このとき、図1Aに示す状態に比べると、電極センサ部近傍に存在する酸化還元試薬の量は減少しているため、電圧を掃引して電流測定を行うと、酸化還元試薬の濃度に応じた拡散電流よりも低い電流値が測定されることになる(電気化学的応答の測定)。
尚、上記の生体分子検出方法で、基準溶液測定ステップを終えたあと、この基準溶液測定ステップで使用した基準溶液に、検出対象試料を加えて被検溶液を調製してもよい(被検溶液調製ステップ)。
尚、対象試料中に含まれる生体分子の量が少ない場合には、増幅反応を利用することができる(たとえば、標的生体分子が核酸の場合には、LAMP法、ICAN法、PCR法、NASBA法などが挙げられる)。この場合、酸化還元試薬を含む電解溶媒と、酸化還元試薬、増幅反応試薬、対象試料を含む電解溶媒とについて拡散電流値を測定し、両測定値を比較することにより生体分子の検出を行うことができる。また、これらの測定後に、再度、酸化還元試薬を含む電解溶媒の拡散電流値を測定し(第2の基準溶液測定ステップ)、先に同様の電解溶媒について測定した拡散電流値と比較することにより、電極センサのキャリブレーション(較正ステップ)や異常検知(異常検知ステップ)を行うこともできる。
本発明の生体分子検出方法で、生体分子として核酸を用いる場合には、使用する電気化学的活性物質は核酸に直接的又は間接的に結合する物質であれば特に限定はされず、例えば、FND(Ferrocenyl naphthalene diimide)、Hoechst (Hoechst33258、Hoechst33342等を含む)、Distamycin、Nuclear yellow、DAPI、Berenil、Methylene blue、Mitoxantrone、Daunomycin、Ethidium bromide、Propidium iodide、9-Aminoacridine、Ellipticine、Amsacrine、Hycanthone、Actinomycin D、Chromomycin、Mithramycin A、Echinomycin、Quinacrine、Nogalamycin、Proflavine、Amiloride、Trioxalen、Chloroquine等を用いることができる。この中でも特に、FND又はHoechst33258を用いることが好ましい。
<電極調製>
単電極(金電極/直径1mm/BAS社製)の電極表面をダイヤモンド研磨(4〜6μmダイヤモンドスラリー)し、次いでALS650(BAS社製)を用いて、硫酸水溶液中にて電解研磨(サイクリック・ボルタンメトリー)を行った。研磨終了後、蒸留水にて流水洗浄した。この電極表面に、メルカプトヘキサノール溶液2μLを滴下し、保湿箱に入れ、2時間インキュベーションした。電極は、使用直前に蒸留水にて流水洗浄し、実験に共試した。
フェロセンナフタレンジイミドに酢酸を加えて攪拌溶解し、本溶液中に酢酸カリウム、塩化カリウムを加え、十分に攪拌溶解後、蒸留水を用いて適当な濃度に調製した。
測定環境:測定器/ALS650(BAS社製)
三電極法測定/作用電極=単電極、対電極=白金線、参照電極=銀・塩化銀
測定条件:DPV(Differential Pulse Voltammetry)
初期電位=0mV、最終電位=600mV、電位増加=20mV、振幅=50mV、パルス幅=0.05sec、
サンプリング幅=0.0167sec、パルス時間=0.2sec、静止時間=2sec、感度=1e-6A/V
マスキング処理(電極調製)が施された単電極2本を用いて、下記の3種類の調製溶液(300μL)のFND拡散電流をDPVにて測定した。
1.FND溶液270μL+DDW 30μL
2.FND溶液270μL+10pmol/μL 一本鎖オリゴDNA(120mer) 30μL
3.FND溶液270μL+100pmol/μL一本鎖オリゴDNA(120mer) 30μL
DDWは再蒸留水(Double Distilled Water)。一本鎖オリゴDNAはオペロン社製のものを用いた。
この実験の結果を図2に示す。このグラフから、調製溶液中の一本鎖オリゴDNAの濃度が高くなるに従って、拡散電流値が減少する傾向にあることが確認された。
マスキング処理が施された単電極2本を用いて、下記の8種類の調製溶液(300μL)のFND拡散電流をDPVにて測定した。
1.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(0 copy)溶液150μL
2.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(10 copies)溶液150μL
3.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(102 copies)溶液150μL
4.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(103 copies)溶液150μL
5.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(104 copies)溶液150μL
6.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(105 copies)溶液150μL
7.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(106 copies)溶液150μL
8.FND溶液150μL+ヒトゲノムDNA(107 copies)溶液150μL
ヒトゲノムDNA溶液は、ロッシュ社製のHuman Genome DNAを用いた。
この実験の結果を図3A,3Bに示す。
図3Bは、ゲノムDNA分子数が0コピーの調製溶液の拡散電流値を基準拡散電流値i0とし、各ゲノム分子数存在下における拡散電流値をiとするとき、以下の式で算出される各調製溶液の拡散電流値変化率Δi(%)を示す。
Δi(%) = [ (i0 − i) / i0 ] × 100
これらのグラフから、ヒトゲノムDNAの濃度が10〜105copies/300μLの調製溶液(上記2〜6)について測定された拡散電流値は、ヒトゲノムDNAを含まない調製溶液の測定値とほぼ同じである。一方、ヒトゲノムDNAの濃度が106 copies/300μLを超える調製溶液(上記7,8)については、濃度にしたがって拡散電流値が減少することが確認された。これにより、本発明の生体分子検出方法によりヒトゲノムDNAを検出する際の検出限界が明らかとなった。
マスキング処理が施された単電極2本を用いて、下記の3種類の調製溶液(300μL)のFND拡散電流をDPVにて測定した。
1.FND溶液270μL+DDW 30μL
2.FND溶液270μL+PCR反応前溶液 30μL
3.FND溶液270μL+PCR反応後溶液 30μL
PCR反応前溶液は、増幅対象のヒトゲノムDNA及びPCR試薬を下記の通り調製した溶液である。PCR反応後溶液は、このPCR反応前溶液に対して下記の条件でPCR反応を行って得られた溶液である。
この実験の結果を図4A,4Bに示す。なお、図4Bは図3Bと同様の方法で算出された、拡散電流値変化率Δi(%)を示す。これらのグラフから、FND溶液にPCR反応前溶液を加えた調製溶液(上記2)の拡散電流値は、FND溶液に蒸留水を加えた調製溶液(上記1)の拡散電流値とほぼ同じである一方で、これらに比べて、FND溶液にPCR反応後溶液を加えた調製溶液(上記3)の拡散電流値は顕著に低いことが確認された。これにより、FND溶液のみを用いた調製溶液の拡散電流値と、FND溶液にPCR反応後溶液を加えた調製溶液の拡散電流値とを比較することにより、調製溶液中の対象生体分子の検出を行うことができることが分かった。
マスキング処理が施された単電極1本を用いて、下記の3種類の調製溶液(300μL)のFND拡散電流を氷温下(4℃)にてDPV測定した。
1.FND溶液200μL+DDW 100μL
2.FND溶液200μL+200ng/μL ヒトゲノムDNA溶液 100μL
3.FND溶液200μL+200ng/μL 変性ヒトゲノムDNA溶液 100μL
上記1〜3の調製溶液は、それぞれ4℃下で10分間放置した後にDPV測定を行った。ここで、2の調製溶液には二本鎖のヒトゲノムDNAを用いている。一方、3の調製溶液は2と同じ二本鎖のヒトゲノムDNAを含む溶液100μLを95℃で5分間加熱した直後に氷水に3分間浸して急冷却処理を施した後に、200μLのFND溶液と混合して得た。この処理により、3の調製溶液中のヒトゲノムDNAは一本鎖に変性されている。
この実験の結果を図5A,5Bに示す。なお、図5Bは図3Bと同様の方法で算出された、拡散電流値変化率Δi(%)を示す。これらのグラフから、FND溶液に蒸留水を加えた調製溶液(上記1)に比べて、ヒトゲノムDNA、変性ヒトゲノムDNA溶液を含む調製溶液(上記2,3)は拡散電流値が低いこと、さらには、二本鎖ヒトゲノムDNAを含む調製溶液(上記2)に比べて、この二本鎖ヒトゲノムDNAを一本鎖に変性させたものを含む調製溶液(上記3)の方が、FND溶液のみを含む調製溶液に対する拡散電流値の変化率が高いことが確認された。
また、上記のチャンバは、前記被検溶液中の検出対象生体分子を直接的あるいは間接的に増幅又は変性させる変性装置を備えてもよく、変性装置は温度調節装置であってもよい。
このようなチップを用いれば、温度調節装置による検出対象生体分子の増幅と電気化学的測定とを1つのチャンバ内で行うことができるため、実験作業が簡略化され、試薬の使用量を最低限に抑えることが可能である。
Claims (10)
- 電気化学的応答の測定により核酸を検出する核酸検出方法であって、
前記核酸に対して直接的あるいは間接的に結合性を有する電気化学的活性物質を含む基準溶液の前記電気化学的応答を測定する基準溶液測定ステップと、
試料に含まれる前記核酸を一本鎖にする反応を行って被検試料を得る変性ステップと、
前記核酸を含む被検試料と前記電気化学的活性物質とを含む被検溶液の前記電気化学的応答を測定する被検溶液測定ステップと、
前記基準溶液の前記電気化学的応答の測定結果と前記被検溶液の前記電気化学的応答の測定結果とを比較して比較結果を導出する比較ステップと、
前記比較結果を基に前記被検溶液中の前記核酸の含有情報を検出する核酸含有情報検出ステップとを含む核酸検出方法。 - 電気化学的応答の測定により核酸を検出する核酸検出方法であって、
核酸に対して直接的あるいは間接的に結合性を有する電気化学的活性物質を含む基準溶液の前記電気化学的応答を測定する基準溶液測定ステップと、
前記基準溶液測定ステップで測定の終了した前記基準溶液に前記核酸を含む被検試料を加え被検溶液を調製する被検溶液調製ステップと、
前記核酸を一本鎖にする反応を行って被検試料を得る変性ステップと、
前記被検溶液の前記電気化学的応答を測定する被検溶液測定ステップと、
前記基準溶液の前記電気化学的応答の測定結果と前記被検溶液の前記電気化学的応答の測定結果とを比較して比較結果を導出する比較ステップと、
前記比較結果を基に前記被検溶液中の前記核酸の含有情報を検出する核酸含有情報検出ステップとを含む核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記被検溶液が、前記核酸の濃度が未知な2以上の前記被検溶液からなり、
前記被検溶液測定ステップが、未知濃度の2以上の前記被検溶液の各々の前記電気化学的応答の測定を含み、
前記比較ステップが、前記基準溶液の前記電気化学的応答の測定結果と各前記被検溶液の前記電気化学的応答の測定結果とを相対比較して比較結果を導出するステップであり、
前記核酸含有情報検出ステップが、前記比較結果を基に各前記被検溶液中の前記核酸の含有情報を検出するステップである核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記被検溶液測定ステップの後に、
前記基準溶液又は前記基準溶液と同組成の基準溶液の前記電気化学的応答を測定する第2の基準溶液測定ステップと、
前記基準溶液測定ステップの測定結果と、前記第2の基準溶液測定ステップの測定結果とを比較した結果に基づいて、前記電気化学的応答の測定の較正を行う較正ステップとを含む核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記被検溶液測定ステップの後に、
前記基準溶液又は前記基準溶液と同組成の基準溶液の前記電気化学的応答を測定する第2の基準溶液測定ステップと、
前記基準溶液測定ステップの測定結果と、前記第2の基準溶液測定ステップの測定結果とを比較した結果に基づいて、前記電気化学的応答の測定手段の異常を検知する異常検知ステップとを含む核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記被検溶液が複数種の前記核酸及び複数種の前記電気化学的活性物質を含む核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記基準溶液測定ステップ又は前記被検溶液測定ステップにおける前記電気化学的応答の測定が、基準溶液又は被検溶液の拡散電流値の測定である核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記電気化学的活性物質は、FND(Ferrocenyl naphthalene diimide)、Hoechst、Distamycin、Nuclear yellow、DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)、Berenil、Methylene blue、Mitoxantrone、Daunomycin、Ethidium bromide、Propidium iodide、9-Aminoacridine、Ellipticine、Amsacrine、Hycanthone、Actinomycin D、Chromomycin、Mithramycin A、Echinomycin、Quinacrine、Nogalamycin、Proflavine、Amiloride、Trioxalen、Chloroquineからなる群より選択される一の物質である核酸検出方法。 - 請求項1又は2に記載の核酸検出方法であって、
前記核酸は、電荷あるいは電気陰性度を有する分子である核酸検出方法。 - 電気化学的応答の測定により核酸を検出する核酸検出用チップであって:
前記核酸に対して結合性を有する電気化学的活性物質を含む基準溶液、又は被検試料と前記電気化学的活性物質とを含む被検溶液を収容可能なチャンバと;
前記チャンバに前記基準溶液又は前記被検溶液を送る送液装置と;
前記チャンバに収容されている前記基準溶液又は前記被検溶液の電気化学的応答を測定する電気化学的応答測定装置と;
前記チャンバから前記基準溶液又は前記被検溶液を排液する排液装置と;を備え、
前記チャンバは、前記被検溶液中の前記核酸を一本鎖に変性させる温度調節装置を更に備える核酸検出用チップ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008557124A JP5262725B2 (ja) | 2007-02-06 | 2008-02-05 | 核酸検出方法及び核酸検出用チップ |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007027222 | 2007-02-06 | ||
JP2007027222 | 2007-02-06 | ||
JP2008557124A JP5262725B2 (ja) | 2007-02-06 | 2008-02-05 | 核酸検出方法及び核酸検出用チップ |
PCT/JP2008/051867 WO2008096757A1 (ja) | 2007-02-06 | 2008-02-05 | 生体分子検出方法及び生体分子検出用チップ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2008096757A1 JPWO2008096757A1 (ja) | 2010-05-20 |
JP5262725B2 true JP5262725B2 (ja) | 2013-08-14 |
Family
ID=39681665
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008557124A Expired - Fee Related JP5262725B2 (ja) | 2007-02-06 | 2008-02-05 | 核酸検出方法及び核酸検出用チップ |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20100320096A1 (ja) |
EP (1) | EP2110662A4 (ja) |
JP (1) | JP5262725B2 (ja) |
CN (1) | CN101606057A (ja) |
WO (1) | WO2008096757A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20140154668A1 (en) | 2010-05-21 | 2014-06-05 | The Trustees Of Princeton University | Structures for Enhancement of Local Electric Field, Light Absorption, Light Radiation, Material Detection and Methods for Making and Using of the Same. |
JP6301311B2 (ja) * | 2012-04-10 | 2018-03-28 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシティThe Trustees Of Princeton University | 超高感度センサ |
CN102621133B (zh) * | 2012-04-17 | 2016-08-03 | 北京师范大学 | 一种基于光学dna生物传感器的1,8-二氨基萘的检测方法 |
US20230054407A1 (en) * | 2020-01-13 | 2023-02-23 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Optical biopsy stain panels and methods of use |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3511596B2 (ja) * | 2001-01-25 | 2004-03-29 | 栄一 民谷 | 遺伝子の検出方法及び検出用チップ |
JP2005090976A (ja) * | 2003-09-12 | 2005-04-07 | Zoegene Corp | 電気泳動用ゲル層担持プレート用アダプタ及び該アダプタを用いた半自動試料分注方法 |
JP2005518810A (ja) * | 2002-03-07 | 2005-06-30 | モレキュラ センシング ピーエルシー | 核酸プローブとその合成および使用 |
JP2006504936A (ja) * | 2002-10-30 | 2006-02-09 | ラジオメーター・メディカル・アー・ペー・エス | センサーの較正及び品質制御を実行する方法、並びに、該方法を実行する装置 |
JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化2次元電気泳動装置および装置構成器具 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU1911795A (en) * | 1994-02-09 | 1995-08-29 | Abbott Laboratories | Diagnostic flow cell device |
EP1333089A4 (en) * | 2000-10-27 | 2005-03-16 | Eiken Chemical | SYNTHESIS METHOD FOR SINGLE STRANDED NUCLEIC ACID |
US6960466B2 (en) * | 2001-05-31 | 2005-11-01 | Instrumentation Laboratory Company | Composite membrane containing a cross-linked enzyme matrix for a biosensor |
US7198754B2 (en) * | 2001-08-31 | 2007-04-03 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Biological material detection element, biological material detection method and apparatus, charged material moving apparatus |
US7338760B2 (en) * | 2001-10-26 | 2008-03-04 | Ntu Ventures Private Limited | Sample preparation integrated chip |
US20030175947A1 (en) * | 2001-11-05 | 2003-09-18 | Liu Robin Hui | Enhanced mixing in microfluidic devices |
EP1500933A1 (en) * | 2002-04-22 | 2005-01-26 | Hokuto Scientific Industry, Co., Ltd. | Device, method, and kit for gene detection |
US7338802B2 (en) * | 2002-10-30 | 2008-03-04 | Radiometer Medical Aps | Method of performing calibration and quality control of a sensor and apparatus for performing the method |
JP2006145342A (ja) * | 2004-11-18 | 2006-06-08 | Eiichi Tamiya | ポリヌクレオチドの分析方法 |
JP4692816B2 (ja) | 2005-07-13 | 2011-06-01 | 住友ベークライト株式会社 | フレキシブルプリント基板 |
JP2009000044A (ja) * | 2007-06-21 | 2009-01-08 | Hitachi High-Technologies Corp | 核酸増幅法 |
-
2008
- 2008-02-05 JP JP2008557124A patent/JP5262725B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-02-05 US US12/449,373 patent/US20100320096A1/en not_active Abandoned
- 2008-02-05 WO PCT/JP2008/051867 patent/WO2008096757A1/ja active Application Filing
- 2008-02-05 EP EP08710799A patent/EP2110662A4/en not_active Withdrawn
- 2008-02-05 CN CNA2008800040247A patent/CN101606057A/zh active Pending
-
2011
- 2011-12-12 US US13/323,107 patent/US20120080312A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3511596B2 (ja) * | 2001-01-25 | 2004-03-29 | 栄一 民谷 | 遺伝子の検出方法及び検出用チップ |
JP2005518810A (ja) * | 2002-03-07 | 2005-06-30 | モレキュラ センシング ピーエルシー | 核酸プローブとその合成および使用 |
JP2006504936A (ja) * | 2002-10-30 | 2006-02-09 | ラジオメーター・メディカル・アー・ペー・エス | センサーの較正及び品質制御を実行する方法、並びに、該方法を実行する装置 |
JP2005090976A (ja) * | 2003-09-12 | 2005-04-07 | Zoegene Corp | 電気泳動用ゲル層担持プレート用アダプタ及び該アダプタを用いた半自動試料分注方法 |
JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化2次元電気泳動装置および装置構成器具 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6012007948; 小林正昭,草川貴史,梶佐規子,森田資隆,民谷栄一: 'DNA stick 〜POC 対応型DNA センサーの開発〜' Chemical Sensors Vol.18 Supplement B (2002), 20020912, P.55-57 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2008096757A1 (ja) | 2010-05-20 |
US20120080312A1 (en) | 2012-04-05 |
US20100320096A1 (en) | 2010-12-23 |
EP2110662A1 (en) | 2009-10-21 |
CN101606057A (zh) | 2009-12-16 |
WO2008096757A1 (ja) | 2008-08-14 |
EP2110662A4 (en) | 2012-11-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101454511B1 (ko) | 표적물질 검출용 헤어핀형 프로브 및 이를 이용한 표적물질 검출방법 | |
CN101180403A (zh) | 作为用于生物传感器的对照溶液的内部参考的可氧化的物质 | |
US10465244B2 (en) | Electrochemical DNA biosensor using graphene biochip for species identification | |
US20230074766A1 (en) | Method of Measuring the pH of a Sample | |
KR20130092164A (ko) | 신호물질의 이동현상 조절을 이용한 전기화학적 원―스탭 핵산 검출 및 정량방법 | |
WO2015137356A1 (ja) | 微生物夾雑物の濃度検出方法、電極チップおよびオリゴペプチド | |
Zhan et al. | Electroactive crown ester-Cu2+ complex with in-situ modification at molecular beacon probe serving as a facile electrochemical DNA biosensor for the detection of CaMV 35s | |
JP5262725B2 (ja) | 核酸検出方法及び核酸検出用チップ | |
US7851160B2 (en) | Method for determination of amount of double-stranded DNA and kit for the determination | |
JP4765813B2 (ja) | 二重鎖dna量の電気化学的測定方法 | |
Munirah et al. | Rapid detection of pork DNA in food samples using reusable electrochemical sensor | |
Shamsi et al. | Electrochemical identification of artificial oligonucleotides related to bovine species. Potential for identification of species based on mismatches in the mitochondrial cytochrome C 1 oxidase gene | |
Sun et al. | Hybridization-induced Ag (I) dissociation from an immobilization-free and label-free hairpin DNA: toward a novel electronic monitoring platform | |
García et al. | Electrochemical DNA base pairs quantification and endonuclease cleavage detection | |
Li et al. | Sensitive mutant DNA biomarker detection based on magnetic nanoparticles and nicking endonuclease assisted fluorescence signal amplification | |
WO2016190727A1 (en) | An electrochemical dna biosensor for gender and variety identification | |
JP6803629B2 (ja) | 溶液中に存在する対象物質の検出方法および検出するためのシステム | |
JP4908182B2 (ja) | 核酸増幅の有無の判定方法、標的核酸の検出方法及びそれらに用いられる装置 | |
JP4040834B2 (ja) | 2本鎖dnaの分析方法 | |
Nguyen et al. | Identification of bacteria strains using the Recombinase Polymerase Amplification assay on a miniaturized solid-state pH sensor | |
CN110596219B (zh) | 检测肺癌标志物的光电化学基因传感器及其制备方法和应用 | |
Yamanaka et al. | Rapid Detection of Food Pathogens by Portable and On-Site Electrochemical DNA Sensors | |
JP2006145342A (ja) | ポリヌクレオチドの分析方法 | |
CN102401810B (zh) | 准微电极的制备方法及准微电极在同时检测肾上腺素和尿酸中的应用 | |
US20020177146A1 (en) | Method of analyzing double stranded DNA |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120104 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120117 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120221 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120423 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120424 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121218 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130213 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130402 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130415 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |