JP5202180B2 - 保湿剤、免疫賦活剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、皮膚外用剤及び機能性経口組成物 - Google Patents

Description

本発明は、ミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物またはその抽出物を含有する保湿剤、免疫賦活剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、皮膚外用剤及び機能性経口組成物に関する。

従来、皮膚の乾燥を防ぎ、皮膚にうるおいを与える保湿成分を提供するために、様々な有効成分の配合検討がなされてきた。また、加齢、疾患、ストレス、紫外線などによるシワ、シミ、皮膚の弾力低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線等による細胞の酸化障害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索及び配合検討がなされてきた。特に天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などの抽出物の皮膚外用剤、経口組成物への応用が検討されてきた。

例えば、皮膚の保湿効果と安全性に優れた保湿剤としてハリブキ属植物の抽出物（特許文献１参照）、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献２参照）、ツリガネニンジン属植物の抽出物（特許文献３参照）、クロレラ抽出物（特許文献４参照）、ビワ抽出物（特許文献５参照）等が開示されている。美白剤としては、白鶴霊芝の抽出物（特許文献６参照）等が、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献７参照）等が、生体内の脂肪蓄積を抑制する成分としては、哺乳動物の乳由来リン脂質（特許文献８参照）、褐藻の酵素分解物（特許文献９参照）等がそれぞれすでに知られている。

特開２００７−７７０７２号公報 特開２００１−１３１０４５号公報 特開２０００−１７８１９８号公報 特開平１１−３３５２９３号公報 特公平５−１７２０６号公報 特開２００３−８９６３０号公報 特開平１０−１８２４１３号公報

このように、これまでに様々な天然由来成分が応用されている。しかし、天然由来成分の中には、未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、免疫賦活作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用を有する有効成分の開発が期待されていた。

本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、従来はその効果が知られていなかったミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物またはその抽出物に優れた保湿作用、免疫賦活作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は、ミズバショウ属植物より選ばれる少なくとも１種の植物またはその抽出物を含有する保湿剤、免疫賦活剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、皮膚外用剤、機能性経口組成物に関する。

本発明によれば、ミズバショウ属植物より選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物を配合することにより、優れた効果を有する保湿剤、免疫賦活剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、皮膚外用剤、機能性経口組成物を提供することができる。

本発明で用いるミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物は、サトイモ科（Ａｒａｃｅａｅ）属する多年草で、太平洋西岸（東アジア）に分布し、日本では兵庫県以北の多雪地域の水湿地に群生するミズバショウ（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ ｃａｍｔｓｃｈａｔｃｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｓｃｈｏｔｔ）と、太平洋東岸（北アメリカ）に群生するアメリカミズバショウ（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ Ｈｕｌｔｅｎ ｅｔ Ｓｔ．Ｊｏｈｎ）が知られている。

本発明は、ミズバショウ属植物であれば特に限定されないが、本発明の効果の点から、適当なものとして、ミズバショウが挙げられる。

これらミズバショウ属植物を使用する際は、その使用部位には特に制限はなく、葉、肉穂、苞、根、茎、幹、花などの任意の部位を使用することができ、複数の部位を組み合わせて使用してもよい。

抽出の際は、植物を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。

抽出は、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬して行うことができる。抽出溶媒は、必要に応じて加熱してもよい。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。

抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。

ミズバショウ属植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間そのまま静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。或いは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。ミズバショウ属植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。

ミズバショウ属植物またはその抽出物は、優れた保湿作用、免疫賦活作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用を有し、保湿剤、免疫賦活剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、皮膚外用剤、機能性経口組成物として利用することができる。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、優れた保湿効果を発揮する。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする免疫賦活剤は、優れた免疫賦活効果を発揮する。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、優れたヒト真皮線維芽細胞の細胞賦活効果を有し、老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤は、優れたヒト表皮メラニン細胞のチロシナーゼ活性阻害効果を有し、色素沈着、シミ、そばかす等を予防および改善して、優れた美白作用を発揮する。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れたラジカル消去効果、スーパーオキサイドアニオン消去効果および過酸化脂質耐性効果を有し、優れた抗酸化作用を発揮する。

ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分とする痩身剤は、優れたヒト前駆脂肪細胞の中性脂肪蓄積抑制効果を有し、優れた痩身作用を発揮する。

ミズバショウ属植物又はその抽出物を含有する皮膚外用剤は、優れた保湿作用、免疫賦活作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用などを発揮する。

ミズバショウ属植物又はその抽出物を含有する機能性経口組成物は、優れた保湿作用、免疫賦活作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用などを発揮する。

これらの各剤は、ミズバショウ属植物またはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、その他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤、分散剤等）を任意に含むことができる。

ここで、皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品、外用医薬品等の、皮膚または毛髪に外用される全ての外用組成物を意味している。機能性経口組成物についても、医薬品、食品、飲料等の種類を問わず、経口により摂取される全ての組成物を意味する。

皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系やカラミンローション等の分散系、クリームや乳液などの乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤、パップ剤などの種々の剤型で提供することもできる。

具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料、メイクアップ化粧料等の各種化粧料；液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼付剤、パップ剤等の様々な形態の化粧料、医薬部外品や外用医薬品などが例示できる。

機能性経口組成物の形態も任意であり、特に限定されることはない。具体的には、飲料を含む一般食品；錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の健康食品（サプリメント）または機能性食品；錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、エキス等の経口医薬品などが例示できる。

皮膚外用剤または機能性経口組成物には、ミズバショウ属植物またはその抽出物の他に、その用途と必要に応じて、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料等に通常配合される任意の成分、例えば水、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防菌防かび剤、抗酸化剤、アルコール類等を適宜配合することができる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤および痩身剤あるいはミズバショウ属植物以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。

飲食品等の経口組成物の場合も、経口用として通常用いられる各種成分との組み合わせにおいて、特に限定されるものはない。

ミズバショウ属植物またはその抽出物の皮膚外用剤または機能性経口組成物への配合量は、種類や目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、固形分換算で、０．０００１〜１０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜５．０質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５質量％であり、一層好ましくは０．１〜５質量％である。

以下にミズバショウ属植物抽出物の調製例、保湿効果、抗老化効果、美白効果、抗酸化効果、痩身効果を評価するための試験方法、皮膚外用剤、機能性食品としての処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。

［抽出物１］
ミズバショウの葉の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。

［抽出物２］
ミズバショウの肉穂の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物２を得た。

［抽出物３］
ミズバショウの苞の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物３を得た。

［抽出物４］
ミズバショウの全草の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物４を得た。

［抽出物５］
ミズバショウの葉の乾燥粉砕物５ｇに精製水を１００ｇ加え、１２０℃で２０分間抽出した。抽出液をろ過して回収し、凍結乾燥を行い、抽出物５を得た。

［抽出物６］
ミズバショウの肉穂の乾燥粉砕物５ｇに精製水を１００ｇ加え、１２０℃で２０分間抽出した。抽出液をろ過して回収し、凍結乾燥を行い、抽出物６を得た。

［抽出物７］
ミズバショウの苞の乾燥粉砕物５ｇに精製水を１００ｇ加え、１２０℃で２０分間抽出した。抽出液をろ過して回収し、凍結乾燥を行い、抽出物７を得た。

［抽出物８］
ミズバショウ全草の乾燥粉砕物５ｇに精製水を１００ｇ加え、１２０℃で２０分間抽出した。抽出液をろ過して回収し、凍結乾燥を行い、抽出物８を得た。

上記抽出物を用いて、各効果の評価を行った。なお各評価結果に記載した＊及び＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊でそれぞれ表したものである。

＜保湿効果＞
抽出物３もしくは抽出物７を用いて蒸留水により１質量％水溶液を調製し、実施例１（抽出物３）、実施例２（抽出物７）とした。実施例を前腕部、３×４ｃｍ^２ の範囲に２μＬ塗布し、塗布前、塗布後１５、３０、６０、１２０分の角質水分量を測定した。角質水分量は、ＳＫＩＣＯＮ−２００（アイ・ビイ・エス株式会社製）を用い、各塗布部位から５ポイント測定した。５ポイントの測定値の平均値を角質水分量とし、塗布前の角質水分量１とした相対値で表１に示した。なおコントロールとして蒸留水を同量塗布し、同様に角質水分量を測定した。

表１の結果より明らかなように、実施例１、２のミズバショウ属植物抽出物の水溶液は有意な保湿効果が認められた。

＜免疫賦活作用（ヒト急性単球白血病細胞株を用いた細胞賦活作用）＞
ヒト急性単球白血病細胞株（ＴＨＰ−１）を１ウェル当り５．０×１０⁴個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には1質量％のＦＢＳを添加したＲｐｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地（ＲＰＭＩ）を用いた。24時間後、Ｐｈｏｒｂｏｌ １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３−Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）を２０ｎｇ／ｍＬとなるように細胞培養液に添加した。さらに２４時間後、１質量％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ培地にて各濃度に調整した抽出物３を含有するサンプル培養液に交換し、４８時間培養した。次に生細胞数測定試薬ＳＦ（同仁化学研究所）１／１０量を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ培地を、上清を除いた細胞に添加し、２時間培養した。混合後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価結果を試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を100とした時の相対値にて表２に示す。

表２より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物を添加した培地では、有意なヒト急性単球白血病細胞株（免疫細胞)の賦活効果が認められ、優れた免疫賦活作用を発揮する。

＜抗老化作用（細胞賦活作用）＞
クラボウ社（倉敷紡績株式会社）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェル当たり２．０×１０^４ 個となるように９６穴マイクロプレート播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表３に示す各濃度となるように抽出物７を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価では、試料を含む培地の他に、コントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。評価結果を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００とした場合の相対値として表３に示す。

表３より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物を添加した培地では、有意な細胞賦活効果が認められ、優れた抗老化作用を発揮する。

＜美白作用（チロシナーゼ活性阻害作用）＞
クラボウ社製正常ヒト表皮メラニン細胞を、１ウェル当たり３．０×１０^４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、クラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後、Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓによって表４に示す各濃度に調整した抽出物２を添加した培地に交換し、さらに４８時間培養した。次に、１質量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μＬに交換して細胞を完全に溶解させ、内５０μＬを粗酵素液として使用した。粗酵素液に、基質となる０．０５質量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液５０μＬを加え、３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにより、基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、生成されたドーパメラニン量を、式（１）に各測定値を導入して求めた。
式（１）：生成されたドーパメラニン量＝｛（反応後４０５ｎｍ値−反応前４０５ｎｍ値）｝−２．１６６／５．２３８
また、ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔにより各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当たりのドーパメラニン生成量を求めた。コントロールの値を１００とした時の相対値より、チロシナーゼ活性阻害作用を評価した。結果を表４に示す。

表４より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物を添加した培地を用いた場合には、メラニン産生量の低下が認められた。このことより、ミズバショウ属植物抽出物は、有意なチロシナーゼ活性阻害作用を有することが示され、優れた美白効果を発揮する。

＜抗酸化作用（ラジカル消去作用）＞
ミズバショウ属植物抽出物の抗酸化作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法１により製造したミズバショウ属植物抽出物を用いた。
抽出物１を、５０質量％エタノールを用いて表５に示した濃度に調整して試料溶液とし、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジカル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μＬずつ添加し、良く混合後、室温、暗所にて２４時間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料を添加しなかった場合のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率を式（２）に導入して求めた。測定結果を表５に示す。
式（２）：ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）

表５より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物には優れたＤＰＰＨラジカルの消去効果が認められた。

＜抗酸化作用（スーパーオキサイドアニオン消去作用）＞
０．２５ｍＭ ＷＳＴ−１及び１ｍＭ Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅを含むＨａｎｋｓ（＋）溶液７５μＬに、抽出物１を表６に示す濃度となるようにＨａｎｋｓ（＋）溶液で希釈した試料２５μＬを添加し、Ｘａｎｔｈｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ２５μＬ（０．００７５Ｕｎｉｔｓ）を加え、３７℃で１５分間反応後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（３）の値をスーパーオキサイドアニオン消去率とした。評価結果を表６に示した。
式（３）：消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）

表６より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物には有意なスーパーオキサイドアニオンの消去効果が認められた。

＜抗酸化作用（過酸化脂質耐性作用）＞
ヒト表皮細胞株ＨａＣａＴを、１ウェル当たり２．０×１０^４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表７に示す各濃度となるように抽出物３を添加した１０質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。ｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅを添加したＨａｎｋｓ（＋）溶液に交換し２時間培養した。更に、１５０μｇ／ｍＬニュートラルレッドを含有するＰＢＳ（−）に交換し３７℃、２時間培養した。１％酢酸を含む５０質量％エタノール水溶液に交換し、細胞内に取り込まれたニュートラルレッドを抽出し、抽出液の５４０ｎｍの吸光度を測定した。
測定結果を、ｔ−Ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅを添加していないコントロールにおける細胞生存率を１００とした相対値により、表７に示す。

表７より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物には有意な過酸化脂質耐性効果が認められた。

上述のとおり、ミズバショウ属植物抽出物は、ラジカル消去作用、スーパーオキサイドアニオン消去作用、過酸化脂質耐性作用を有し、優れた抗酸化効果を発揮する。

＜痩身作用（中性脂肪蓄積抑制作用）＞
皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞Ｃｒｙｏ・ＨＰＲＡＤ−ＳＱ（三光純薬株式会社）を、１ウェル当り１．０×１０⁴ 個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ＰＧＭ培地（１０質量％ウシ胎児血清（ＦＢＳ），２ｍＭ Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｅ，１００μｇ／ｍＬ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｅ含有）を用いた。細胞が飽和状態になる直前に表８に示す濃度の抽出物１を添加したＰＧＭ分化用培地（１０μｇ／ｍＬ インシュリン，１μＭ Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，２００μＭ Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ，５００μＭ Ｉｓｏｂｕｔｙｌ−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ含有）に交換し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導開始後、コントロール群が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。細胞を回収後、１０％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定した。ＰＢＳにて洗浄の後、０．５ｗ／ｖ％オイルレッドＯ溶液を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳにて洗浄の後、メタノールを添加し、色素を抽出した。抽出後、マイクロプレートリーダーより、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積量を測定した。
測定結果を、試料無添加の培地を用いたコントロールにおける、中性脂肪蓄積量を１００とした相対値により、表８に示す。

表８より明らかなように、ミズバショウ属植物抽出物を添加した培地では、有意な中性脂肪蓄積抑制効果が認められたことから、優れた痩身効果を発揮する。
とが明らかとなった。

続いて、上記各調製方法で得られたミズバショウ属植物抽出物を配合した皮膚外用剤および機能性経口組成物の処方例を示す。

［実施例３］乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（10）精製水 １００とする残部
（11）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（12）抽出物１ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。冷却後４０℃にて、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。

［実施例４］化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残部
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）抽出物２ １．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。さらに（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。

［実施例５］クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（10）精製水 １００とする残部
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（12）抽出物３ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。（11）を添加して攪拌後、冷却し４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。

［実施例６］美容液
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１質量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（11）ベヘニルアルコール ０．７５
（12）ミツロウ １．０
（13）ホホバ油 １．０
（14）１，３−ブチレングリコール １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（16）抽出物４ ３．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。冷却後５０℃にて（15）を、４０℃にて（16）を加え、均一に混合する。

［実施例７］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）抽出物５ ０．５
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。

［実施例８］クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 １００とする残部
（４）抽出物６ ４．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。

［実施例９］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２５．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 １００とする残部
（８）抽出物７ ０．１
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却後４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。

［実施例１０］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．２(質量％)
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 １００とする残部
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（10）黄酸化鉄 ０．４
（11）香料 ０．１
（12）抽出物８ ３．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。

［実施例１１］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０(質量％)
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１，３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残部
（11）酸化チタン ９．０
（12）タルク ７．４
（13）ベンガラ ０．５
（14）黄酸化鉄 １．１
（15）黒酸化鉄 ０．１
（16）香料 ０．１
（17）抽出物１ ０．５
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。冷却後４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。

［実施例１２］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３４．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１，３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）抽出物２ ３．０
（11）精製水 １００とする残部
（12）香料 ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。

［実施例１３］パック
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ９．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）抽出物３ １．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却する。４０℃にて（６）と（７）を加え、均一に混合する。

［実施例１４］入浴剤
（１）香料 ０．３(質量％)
（２）抽出物４ ３．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム ４６．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。

［実施例１５］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸 ３．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）セチルアルコール ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン ２．０
（５）メチルポリシロキサン ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）１，３−ブチレングリコール ７．５
（９）アルギニン ０．７
（10）精製水 １００とする残部
（11）抽出物５ ２．０
（12）香料 ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。

［実施例１６］ヘアートニック
（１）エタノール ５０．０(質量％)
（２）精製水 １００とする残部
（３）抽出物６ ３．０
（４）香料 ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。

［実施例１７］錠剤
（１）コーンスターチ ４４．０（質量％）
（２）結晶セルロース １００とする残部
（３）カルボキシメチルセルロースカルシウム ５．０
（４）無水ケイ酸 ０．５
（５）ステアリン酸マグネシウム ０．５
（６）抽出物７ ５．０
製法：（１）〜（６）を均一に混合し、打錠機にて圧縮成型して、１錠２００ｍｇの錠剤を得る。

［実施例１８］散剤
（１）ケイ酸アルミン酸マグネシウム ９５．３（質量％）
（２）カルボキシメチルセルロースカルシウム １００とする残部
（３）抽出物８ ４．０
製法：（１）〜（３）の粉体を混合後、粉砕機にて粉砕し、均一に分散する。

［実施例１９］キャンデー
（１）白糖 ６０．０（質量％）
（２）水飴 １００とする残部
（３）抽出物１ ５．０
（４）香料 適量
製法：（１）と（２）を加熱混合・均一化した後冷却し、７０℃にて成分（３）と（４）を添加し、混合均一化した後成型する。

［実施例２０］ドリンク剤
（１）アミノエチルスルホン酸 １０００ｍｇ
（２）硝酸チアミン １０ｍｇ
（３）リン酸リボフラビンナトリウム ５ｍｇ
（４）塩酸ピリドキシン １０ｍｇ
（５）無水カフェイン ５０ｍｇ
（６）クエン酸 ２５０ｍｇ
（７）Ｄ−ソルビトール液 ８ｍｇ
（８）抽出物２ １０００ｍｇ
（９）香料 微量
（10）精製水 １００ｍＬとする残部
製法：（１）〜（９）を順次（10）に添加し、均一化する。

実施例３〜実施例１６に示した皮膚外用剤は、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用を有する組成物であった。また実施例１７〜実施例２０に示した機能性経口組成物は抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用を有する組成物であった。

Claims (4)

1. ミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物より選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤。
2. ミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物より選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物を有効成分とする免疫賦活剤。
3. ミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物より選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤。
4. ミズバショウ属（Ｌｙｓｉｃｈｉｔｏｎ）植物より選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物を有効成分とする痩身剤。