JP5105435B2 - タンパク質を保持するための人工骨格材料及びその利用 - Google Patents
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Description
前記第1の骨格タンパク質はセルロソームのタイプIスキャホールディンタンパク質又はその改変体とすることができる。前記第1の骨格タンパク質は、クロストリジウム・サーモセラム(Clostridium thermocellum)のセルロソームのタイプIスキャホールディンタンパク質又はその改変体であってもよい。
本発明の人工骨格材料は、細胞と、骨格タンパク質(以下、第1の骨格タンパク質という。)とを備えることができる。本人工骨格材料は、1種又は2種類以上のタンパク質を効率的にかつ機能的に配置可能な骨格材料であり、特に、多数個又は複数種類のタンパク質を保持して機能させるための骨格材料に適している。
本人工骨格材料において保持しようとするタンパク質は特に限定されない。タンパク質としては1種類のみならず2種類以上を同時に保持することができる。好ましくは、協同的又は段階的に機能する多数個又は複数種類のタンパク質である。こうしたタンパク質としては、その構造の観点からは、ペプチド鎖を有していれば足り、糖タンパク質、脂質タンパク質などのタンパク質と他の生体成分等とのタンパク質複合体であってもよい。また、その機能の観点からは、特に限定されないが、例えば、酵素、抗体、受容体、抗原として機能するものが挙げられる。
本人工骨格材料は、第1の骨格タンパク質の支持体として細胞を用いることができる。細胞を支持体とすることのメリットは、第1の骨格タンパク質を細胞に生産させることができる点、生産させた第1の骨格タンパク質を適当な手法により容易に細胞の表層に支持できる点、こうした細胞を増殖できる点及びこうした細胞をさらに他の担体に固定化も可能である点及び有用物質の分解、利用及び生産する酵素等を発現する細胞を選択したりそうした改変を細胞に施したりすることにより、効率的に各種反応を実施できる点等が挙げられる。
本人工骨格材料は、第1の骨格タンパク質を細胞の表層側に備えることができる。換言すれば、細胞の表層において露出された状態で第1の骨格タンパク質を備えている。第1の骨格タンパク質は、1種類又は2種類以上備えることができる。1種類の第1の骨格タンパク質を用いるのであれば、この骨格タンパク質上に配列するタンパク質を容易に近接して配置することができ、2種類以上の第1の骨格タンパク質を用いるのであれば、異なる骨格タンパク質上に配列される異なる種類、組み合わせ、個数のタンパク質を容易に近接配置することができる。なお、第1の骨格タンパク質は、そのタンパク質結合ドメインの種類、個数及びこれらの組み合わせ並びにセルロース結合ドメインの有無等によって区別することが可能である。
セルロソームは、セルロース分解性嫌気性微生物が菌体外に形成するセルラーゼ複合体である。セルロソーム又はその一部を外来性のセルラーゼとして備えることで、リグノセルロース系材料等、複合的なセルロース系材料も効率的に分解することができる。また、セルロソームを介してより容易にセルロースに結合することができるようになる。
第1の骨格タンパク質が細胞の表層に備える他の一つの形態は、第1の骨格タンパク質が細胞の表層に結合した第2の骨格タンパク質と非共有結合により結合した結果、細胞の表層側に保持される形態である。第2の骨格タンパク質は、細胞にとって異種タンパク質であって、第1の骨格タンパク質を非共有結合で結合可能な骨格タンパク質結合ドメインを有して細胞の表層側に配置されている。
また、複数個のタンパク質結合ドメインは、1種類のアミノ酸配列からなる同一種類のドメインであってもよいし、2種類以上の異なるアミノ酸配列からなるドメインであってもよい。異なる種類の骨格タンパク質結合ドメインを用いることで、異なる第1の骨格タンパク質を第2の骨格タンパク質上に配列させることができる。
このような人工骨格材料は、例えば、第1の骨格タンパク質を直接細胞表層に結合させる場合には、細胞表層結合ドメインを有する第1の骨格タンパク質を細胞に自己生産させ、細胞表層に結合可能な状態で細胞外に分泌させるようにすればよい。第1の骨格タンパク質は細胞にとって異種タンパク質である。通常、遺伝子組換えの手法によりこうした異種タンパク質をコードするDNAを発現可能に細胞に導入することにより、第1の骨格タンパク質を細胞にて発現させればよい。
本発明のタンパク質複合材料は、細胞と、該細胞にとって異種タンパク質であって、非共有結合性の複数個のタンパク質結合ドメインをタンデムに備えて該細胞の表層側に互いに近接配置される第1の骨格タンパク質と、前記タンパク質結合ドメインに非共有結合で結合された1種又は2種類以上のタンパク質とを備えることができる。
本複合材料は、タンパク質として酵素を結合保持していることが好ましい。酵素を多数個又は複数種類近接配置することにより、酵素反応の速度等においてメリットが大きいからである。特に、複数種類の酵素が協同的又は段階的に作用する酵素反応系を構成する酵素の一部又は全部を結合保持することが好ましい。こうした酵素反応系においては、関連する酵素を近接配置することが全体の反応速度を速めることができるからである。
本複合材料がセルラーゼを結合保持するものであるとき、本複合材料をセルロースの分解用の複合材料として用いることができる。セルロースは複数の酵素が協同的及び段階的に作用することで初めて効率的に分解される。特に不溶性セルロース及び結晶性セルロースにおいてその傾向がある。本複合材料は、複数種類のセルラーゼを近接して備えることができるため、セルロースを効率的に分解することができる。特に、第1の骨格タンパク質のタンパク質結合ドメインとしてタイプIコヘシン又はこれを含むタイプI骨格タンパク質を用いたり、これらに加えて第2の骨格タンパク質としてタイプIIコヘシン又はこれを含むタイプII骨格タンパク質を用いたりすることでセルロースの分解に好適化することができる。また、第1の骨格タンパク質においてCBDを有して、細胞がセルロースに対して吸着等が可能な場合には、一層効率的にセルロースを分解することができる。
例えば、硫酸、塩酸、リン酸、硝酸などの無機酸による酸性条件下、セルロースを部分加水分解することにより、セルロースを非晶質化あるいは低分子化できる。この他、超臨界水、アルカリ、加圧熱水などの処理によってもセルロースの非晶質化又は低分子化を行うことができる。
本発明のタンパク質複合材料の製造方法は、人工骨格材料に、第1の骨格タンパク質上のタンパク質結合ドメインに結合可能な相互作用ドメインを有する1種又は2種以上のタンパク質を細胞内から分泌させて又は細胞外から供給する工程を備えており、タンパク質結合ドメインに1種又は2種以上のタンパク質を結合させることにより、本複合材料を得ることができる。本製造方法によれば、細胞表面上においてタンパク質を結合保持するための人工骨格を備える人工骨格材料に結合保持させようとする所望のタンパク質を細胞内又は細胞外から供給することで、容易に細胞の表層において所望のタンパク質を近接保持させることができる。また、この方法によれば、複数種類の酵素が協同的又は段階的に作用する反応系の反応速度を向上させることができるタンパク質複合材料を容易に提供できる。
セルラーゼ及び/又はセルロソームが保持された細胞(微生物)を回収するには、水性媒体を公知の固液分離手段により固液分離して菌体画分を回収すればよい。例えば、遠心分離によりペレットとしてセルラーゼ等が保持された微生物を回収することができる。
本発明のセルロースの分解方法は、セルロース系材料のセルロースと1種又は2種以上のセルラーゼを結合保持する本複合材料とを接触させて、前記セルラーゼにより前記セルロースを分解する工程、を備えることができる。この分解方法によれば、細胞の表面において1種又は2種以上のセルラーゼが近接して配置されているため、セルロースを効率的に分解することができる。この分解方法においては、セルロースを分解するための複合材料における各種構成要素の実施態様を本発明においても適用できる。特に、セルロースの分解にあたっては、複数種類の酵素の協同的又は段階的な作用が必要であるが、本発明の分解方法によれば効率的にセルロース系材料を分解することができる。
本発明のセルロースを利用する有用物質を生産方法は、セルロース系材料中のセルロースとセルラーゼを結合保持する本複合材料とを接触させて、前記セルロースを分解する工程と、前記セルラーゼによって分解されたセルロース分解産物を前記複合材料の前記細胞によって資化し有用物質に変換する工程と、を備えることができる。この生産方法によれば、セルロース系材料中のセルロースを複合材料の細胞表層に結合保持されたセルラーゼが分解するとともに、その分解産物をその細胞が資化して有用物質に変換することができる。このため、効率的にセルロースを利用することができる。特に、従来セルロースを直接利用困難であった細胞であっても、セルロースを利用して有用物質に変換することができるようになる。なお、本複合材料及びその構成要素である細胞、第1の骨格タンパク質、第2の骨格タンパク質及びセルラーゼ等については既に説明した態様を全て本発明の生産方法についても適用することができる。また、上記分解工程については、セルロース系材料の分解方法に記載した形態をそのまま適用することができる。
本実施例では、クロストリジウム・サーモセラム(C.thermocellum、以下、単にCtともいう。)由来の骨格タンパク質をコードするDNA断片のクローニングを行った。まず、Ct ATCC27405からゲノムを抽出した。タイプI骨格タンパク質(本発明の第1の骨格タンパク質に相当する。)であるCipAタンパク質をコードするCipA遺伝子(NCBIのホームページ、アクセッション番号:L08665)の構造を図3に示す。このCipA遺伝子につき、図3に示すようなゲノムの各部分(CBD(セルロース結合ドメイン)+タイプIコヘシン1個(Coh3)、2個(Coh3,4)、7個(Coh3〜Coh9)の各部分)を含むDNA断片を合成した。すなわち、これらのゲノムの各部分のDNA配列(前記データーベース及びアクセッション番号)に基づいて、適切なプライマーを設計してPCR法により常法に従い増幅し各種DNA断片を取得した。また、同一遺伝子におけるCBD+タイプIコヘシン4個(Coh3〜Coh6)部分については遺伝子合成により取得した。なお、タイプIコヘシン7個を備えるDNA断片にあっては、タイプIIドックリンを保持している。
本実施例では、Ct ATCC27405のゲノムからエンドグルカナーゼ遺伝子であるCelA遺伝子のDNA配列(NCBIのホームページ、アクセッション番号:K03088)に基づいて適当なプライマーを設計してPCR法により常法に従い増幅後、CelA遺伝子断片をクローニングした。なお、CelA遺伝子はそのC末端側にタイプIコヘシンとの相互作用ドメインであるタイプIドックリンを有している。クローニングしたCelA遺伝子断片をpET-23bベクター(Novagen)に挿入し、PCR法によりCelA遺伝子を含むT7プロモーターからターミネーターの領域を増幅し、無細胞合成における鋳型とした。無細胞溶液中で、25℃,5時間反応させることによりCelAの合成を行った。なお、無細胞合成は、WAKO PURE system(和光純薬株式会社製)を用い、そのプロトコールに従い行った。
本実施例では、実施例1で取得した各遺伝子断片をそれぞれのC末端にHis-tagが付加する形でpYD1ベクター(Invitrogen)に挿入し、これらを用いて酵母S.cerevisiae EBY100の形質転換を行った。形質転換した各株をYNB+0.5%カザミノ酸+2%グルコース培地を用いて30℃で培養し、OD600=2を超えたところで集菌後、OD600=0.5となるようにYNB+0.5%カザミノ酸+2%ガラクトース培地に植菌し、30℃、48時間誘導発現を行った。その後、OD600=1,1mlの菌体を、PBS1mlで洗浄し、125μlのPBSに懸濁した。この懸濁液に、一次抗体として抗His-tag抗体0.5μgとBSA最終濃度1mg/mlとを添加し、氷中30分静置し、時々懸濁を行った。次に遠心後、PBS1mlで洗浄を行い125μlのPBSに懸濁し、二次抗体としてCy5標識の抗IgG抗体0.5μgとBSA最終濃度1mg/mlとを添加し、氷中30分静置し、時々懸濁を行った。その後、遠心し、PBS1mlで洗浄して50μlのPBSで懸濁後、蛍光顕微鏡にてCy5の蛍光を測定した。その結果を図4に示す。
本実施例では、実施例3においてタイプIコヘシンを1個提示した酵母に対して、外部から実施例2において無細胞系で合成したエンドグルカナーゼCelAを供給して骨格タンパク質の機能を確認した。CBD+タイプIコヘシン1個提示酵母OD600=5,1mlを用いて20mM Tris-HCl pH8.0,10mM CaCl2で洗浄後、20mM Tris-HCl pH8.0, 0.15M NaCl, 10mM CaCl2, 10mg/ml BSA 溶液で4℃,1hrブロッキング操作を行い、20mM Tris-HCl pH8.0, 0.1M NaCl, 10mMCaCl2, 0.05%tween20 溶液で3回洗浄後、20mM Tris-HCl pH8.0, 0.15M NaCl, 10mM CaCl2, 10mg/ml BSA溶液中でCelA無細胞合成液50μlと混合、4℃,1時間反応を行った。次に20mM Tris-HCl pH8.0, 0.1M NaCl, 10mMCaCl2, 0.05%tween20 溶液で4回洗浄を行い、CelAが結合した酵母を1%CMC, 20mM 酢酸緩衝液pH6.0, 10mM CaCl2溶液に混合し、60℃で反応を行った。この反応液につき、TZ−アッセイ法にてCMC分解活性を測定した。なお、対照としてなんらタンパク質を提示していない酵母S.cerevisiae EBY100についても同様にCelAを供給し、同様に操作した。これらの結果を図5に示す。
本実施例では、タイプI骨格タンパク質を表層提示した酵母の凝集性を確認した。CBDに加えてType1コヘシン1個、2個、4個及び7個をそれぞれ表層提示した酵母S.cerevisiae EBY100に対して、誘導発現72時間後に各培養液(なお、培地は、誘導時の培地:YNB+0.5%カザミノ酸+2%グルコース培地である。)10mlを試験管に回収し、良く懸濁した後、5分静置した。何らタンパク質を表層提示させない酵母S.cerevisiae EBY100についても、同様にして凝集性を確認した。結果を表3に示す。
まず、第2の骨格タンパク質であるCt ATCC27405のSdbA遺伝子におけるタイプIIコヘシン1個の表層提示を酵母(S.cerevisiae)MT8-2で行った。まず、Ct ATCC27405のSdbA遺伝子のDNA配列(NCBIのホームページ、アクセッション番号:L08665)に基づいて、タイプIIコヘシンのC末端側に酵母表層結合ドメインであるSAG1、N末端側にHis-tagを融合した融合タンパク質をコードするDNA断片を取得した。このDNA断片について染色体導入用ベクターを構築し、この染色体導入用ベクターを用いてタイプIIコヘシン1個を含むDNA断片を酵母染色体に組み込んだ。導入操作後の酵母をYPD培地で24時間培養後、実施例3で示した方法でHis-tagを用いた蛍光染色を行った。結果は、図6に示すように、細胞表層において蛍光を示し、表層でのタイプIIコヘシンの発現が認められた。
結果を図7に示す。
結果を図8に示す。
この結果から、酵母表層上でタイプIコヘシン及びタイプIIコヘシンからなる人工骨格にタイプIドックリンを有する酵素が結合保持された酵素複合材料が構築できることがわかった。
実施例3を参考にして、目的の蛋白質がN末端側になるようpYD1ベクターを改良し、pYD5ベクターを作製した。このベクターではセルロース結合部位CBDが最も外側に配置し、それよりも酵母表層側にタイプIコヘシンを提示することが可能となる(図11参照)。本ベクターに図11に示すようにCBDとタイプIコヘシン4個とを保持する第1の骨格タンパク質を発現可能に導入した。実施例3に準じ、このベクターを用いてS.cerevisiae EBY100を形質転換して酵母表層に上記第1の骨格タンパク質の提示を行った。
本実施例では、コヘシンを細胞表層に提示させた遺伝子組換え酵母を作製し、この酵母に対してセルラーゼを供給したときのセルロース分解能を、コヘシンを提示しない親株酵母を比較した。具体的には、HOR7プロモーターの下流にCtのCipAタンパク質をコードするCipA遺伝子(NCBIのホームページ、アクセッション番号:L08665)のCBDとコヘシン4個とを含むコード領域を有するDNAを導入し、このコード領域のアミノ酸配列のC末端に相当する下流側にAGA2遺伝子を融合させたDNA断片を作製した。このDNA断片を、HOR7プロモーターによりAGA1が発現する酵母(親株:BY4741)の染色体に常法に従い導入し、コヘシン提示酵母とした。コヘシン提示酵母、CelA分泌酵母、通常酵母(BY4741株)を試験管にて前培養後、それぞれを2Lバッフルフラスコにて約36時間培養した。
実施例9と同様に、HOR7プロモーターの下流にCBDを含むコヘシン4個遺伝子とその下流側にさらにAGA2遺伝子を含む融合タンパク質をコードするDNA断片を作製した。このDNA断片をHOR7プロモーターによりAGA2遺伝子が発現する酵母BJ−AGA1(親株:BJ5465)の染色体に常法に従い導入し、上記融合タンパク質をAGA1及びAGA2を介して表層提示する改変酵母BJ004を作製した。
本実施例では、骨格タンパク質材料を細胞表層に提示する酵母BJ104株に対して、2μプラスミドを用いてクロストリジウム・サーモセラム由来のCelA(CelA遺伝子のDNA配列(NCBIのホームページ、アクセッション番号:K03088))を導入し、セルロソーム再構成酵母BJ104pA株を作製した。この株を、SD−Ura培地で24時間培養した後、さらに、SD−Ura+2%CAA(カザミノ酸)培地で24時間培養した。菌体100D、1mlを集菌した後、10mM塩化カルシウム存在下において20mMトリス塩酸緩衝液(pH8.0)で二回洗浄を行い、1%CMC分解試験を60℃で行った。結果を図16に示す。
Claims (34)
- タンパク質を保持するための人工骨格材料であって、
細胞と、
該細胞にとって異種タンパク質であって、4個以上7個以下のセルロソームのタイプIコヘシンドメインをタンデムに備えて前記細胞の表層側に配置される第1の骨格タンパク質と、
を、備え、
前記第1の骨格タンパク質を備えることで前記細胞が互いに凝集性を有している、材料。 - 前記骨第1の骨格タンパク質は、セルロース結合ドメインを含む、請求項1に記載の材料。
- 前記第1の骨格タンパク質は、セルロソームのタイプIスキャホールディンタンパク質又その改変体である、請求項1又は2に記載の材料。
- 前記第1の骨格タンパク質は、クロストリジウム・サーモセラム(Clostridium thermocellum)のセルロソームのタイプIスキャホールディンタンパク質又はその改変体である、請求項3に記載の材料。
- 前記第1の骨格タンパク質を発現する、請求項1〜4のいずれかに記載の材料。
- さらに、前記細胞にとって異種タンパク質であって、前記第1の骨格タンパク質を結合可能なセルロソームのタイプIIコヘシンドメインを有して前記細胞の表層に配置される第2の骨格タンパク質と、
を備え、
前記第1の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIIドッケリンドメインを備え、前記第2の骨格タンパク質に結合されている、請求項1〜5のいずれかに記載の材料。 - 前記第2の骨格タンパク質は、前記細胞の表層に共有結合で結合されている、請求項6に記載の材料。
- 前記第2の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインを複数個タンデムに有している、請求項6又は7に記載の材料。
- 前記第2の骨格タンパク質は、セルロソームのタイプIIスキャホールディンタンパク質又はその改変体である、請求項6〜8のいずれかに記載の材料。
- 前記2の骨格タンパク質は、クロストリジウム・サーモセラム(Clostridium thermocellum)のセルロソームのタイプIIスキャホールディンタンパク質又はその改変体である、請求項9に記載の材料。
- 前記細胞は、前記第2の骨格タンパク質を発現する、請求項6〜10のいずれかに記載の材料。
- 前記タイプIコヘシンドメインはセルロソームのタイプIドッケリンドメインを備える酵素を結合可能である、請求項1〜11のいずれかに記載の材料。
- 前記酵素はセルロースを分解する酵素群から選択される、請求項12に記載の材料。
- 前記細胞は微生物である、請求項1〜13のいずれかに記載の材料。
- 前記微生物は酵母である、請求項14に記載の材料。
- 前記微生物はアルコール生産酵母又は有機酸生産酵母である、請求項15に記載の材料。
- タンパク質複合材料であって、
細胞と、
該細胞にとって異種タンパク質であって、4個以上7個以下のセルロソームのタイプIコヘシンドメインをタンデムに有して該細胞の表層側に配置される第1の骨格タンパク質と、
前記タイプIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIドッケリンドメインを備える1種又は2種以上のタンパク質と、
を備え、
前記第1の骨格タンパク質に前記1種又は2種以上のタンパク質が結合されている、材料。 - さらに、前記細胞にとって異種タンパク質であり、セルロソームのタイプIIコヘシンドメインを有して前記細胞の表層に配置される第2の骨格タンパク質を備え、
前記第2の骨格タンパク質は、セルロソームのタイプIIスキャホールディンタンパク質であり、
前記第1の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIIドッケリンドメインを備え、前記第2の骨格タンパク質に結合されている、請求項17に記載の複合材料。 - 前記第2の骨格タンパク質は、前記細胞の表層に共有結合で結合されている、請求項18に記載の材料。
- 前記第2の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインを複数個タンデムに有している、請求項18又は19に記載の材料。
- 前記第1の骨格タンパク質は、セルロース結合ドメインを有する少なくとも一つの第1の骨格タンパク質を含む、請求項17〜20のいずれかに記載の複合材料。
- 前記タンパク質は、セルロースを分解する酵素群から選択される、請求項17〜21のいずれかに記載の複合材料。
- 前記タンパク質は、少なくともβ−グルコシダーゼ、エンドグルカナーゼ及びセロビオヒドロラーゼからなる群から選択される2種以上を含む、請求項22に記載の複合材料。
- 不溶性セルロース資化能を備える、請求項22又は23に記載の複合材料。
- 前記細胞はアルコール生産酵母又は有機酸生産酵母である、請求項18〜24のいずれかに記載の複合材料。
- 前記細胞は、前記タンパク質の生産能を有していない、請求項18〜25のいずれかに記載の複合材料。
- タンパク質複合材料の製造方法であって、
細胞と、該細胞にとって異種タンパク質であって、4個以上7個以下のセルロソームのタイプIコヘシンドメインをタンデムに備えて該細胞の表層側に互いに近接配置される第1の骨格タンパク質と、を備える人工骨格材料に、前記タイプIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIドッケリンドメインを有する1種又は2種以上のタンパク質を前記細胞外から供給する工程を備え、
前記人工骨格材料の前記タイプIコヘシンドメインに前記1種又は2種以上のタンパク質を結合させる、製造方法。 - さらに、前記人工骨格材料は、前記細胞にとって異種タンパク質であり、セルロソームのタイプIIコヘシンドメインを有して前記細胞の表層に配置される第2の骨格タンパク質を備え、
前記第1の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIIドッケリンドメインを備えて前記第2の骨格タンパク質に結合されている、請求項27に記載の製造方法。 - 前記タンパク質は、セルロースを分解する酵素群から選択される2種以上である、請求項27に記載の製造方法。
- 前記細胞は酵母である、請求項27〜29のいずれかに記載の製造方法。
- セルロースの分解方法であって、
セルロース系材料中のセルロースと、
細胞と、該細胞にとって異種タンパク質であって4個以上7個以下のセルロソームのタイプIコヘシンドメインをタンデムに有して該細胞の表層側に互いに近接配置される第1の骨格タンパク質と、
前記タイプIコヘシンドメインに結合されたセルロースを分解する酵素群から選択される1種又は2種以上の酵素と、を備える酵素複合材料と、
を接触させて、前記酵素によりセルロースを分解する工程、を備える、分解方法。 - さらに、前記酵素複合材料は、前記細胞にとって異種タンパク質であり、前記第1の骨格タンパク質を結合可能なセルロソームのタイプIIコヘシンドメインを有して前記細胞の表層に配置される第2の骨格タンパク質を備え、
前記第1の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインに結合可能なセルロソームのタイプIIドッケリンドメインを有して、前記第2の骨格タンパク質に結合されている、請求項31に記載の分解方法。 - セルロースを利用する有用物質の生産方法であって
セルロース系材料中のセルロースと、細胞と、該細胞にとって異種タンパク質であって、4個以上7個以下のセルロソームのタイプIコヘシンドメインをタンデムに有して該細胞の表層側に互いに近接配置される第1の骨格タンパク質と、を備え、前記タイプIコヘシンドメインに結合されたセルロースを分解する酵素群から選択される1種又は2種以上の酵素と、を備える酵素複合材料と、を接触させて、前記酵素によりセルロースを分解する工程と、
前記酵素によって得られるセルロース分解産物を前記複合材料の前記細胞によって資化し有用物質に変換する工程と、を備える、生産方法。 - さらに、前記人工骨格材料は、前記細胞にとって異種タンパク質であり、セルロソームのタイプIIコヘシンドメインを有して前記細胞の表層に配置される第2の骨格タンパク質を備え、
前記第1の骨格タンパク質は、前記タイプIIコヘシンドメインに結合可能なタイプIIドッケリンドメインを備えて前記第2の骨格タンパク質に結合されている、請求項33に記載の生産方法。
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