JP5094850B2 - 酵素活性の促進のための多糖の使用 - Google Patents
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Description
本発明は、特に限定されることはないがヒドロキシエチルデンプンを含む、多糖の使用により酵素活性を促進するための組成物および方法に関する。本発明はさらに、酵素の使用を含む、タンパク質の製造方法に関する。本発明はさらに、酵素および他の生体分子の製造方法および/または調製に関する。
酵素は、多くの産業的応用に使用されることが見出されている。例えば、酵素は、洗剤産業(例えば、アミラーゼおよびバクテリアアルカリ性プロテアーゼ)、青果物ジュース産業(例えば、ペクチナーゼおよびキシラナーゼ)、食肉産業(例えば、キシラナーゼ、フィターゼ、β-グルカナーゼ)、デンプン産業(例えば、アミラーゼ)、パルプおよび製紙産業(例えば、キシラナーゼ)、織物産業(例えば、セルラーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、およびカタラーゼ)および皮革産業(例えば、プロテアーゼおよびリパーゼ)に広く使用される(Cherry et al., Curr. Opin. Biotechnol. 14:438-443 (2003))。
本発明は、(a)標的酵素および(b)非天然多糖を含む組成物を提供する。標的酵素とは、例えば、オリゴ糖/多糖酵素(すなわち、(1つ以上の)オリゴ糖/(1つ以上の)多糖上で作用する酵素)、タンパク質酵素(すなわち、キナーゼ、ホスホリラーゼなどの(1つ以上の)タンパク質上で作用する酵素)、ポリヌクレオチド酵素(すなわち、(1つ以上の)ポリヌクレオチド上で作用する酵素)、またはリパーゼ等を含むその他の産業的もしくは医学的に関連のある酵素のことであり得る。標的酵素は溶液中に存在してもよいか、または固相支持体上に固定されていてもよい。
標的酵素の活性を、特に非ADCで促進して、多岐にわたる応用についてより効果的な標的酵素の使用を可能にするための新規の方法および組成物を提供する必要がある。
本発明の方法は、標的酵素の酵素活性の促進に広く適用可能である。本明細書で使用される場合、用語「標的酵素」とは、本発明の方法による非天然多糖への曝露により活性が促進されるかまたは促進された酵素のことをいう。しかし、全血、血漿、組織プラスミノーゲンアクチベーター、インターロイキン、毒素、インターフェロン、プロテインC、γグロブリンおよびコラーゲンは、「標的酵素」の定義からは、明確に除外される。本発明の方法および組成物と共に、1つ以上の標的酵素を使用してもよい。用語「標的酵素」を使用する場合は、この用語が1つ以上の酵素を包含することを認識すべきである。本発明の特定の局面において、標的酵素は単離または精製される。
多糖は、2つ以上の単糖単位を含む、天然または合成起源の単糖の直鎖または分岐ポリマーである。特定の態様において、本発明の多糖は、少なくとも約5、10、20、30、50、75以上の単位を含む。本発明の特定の局面において、多糖を構成する単糖単位は非同一単位である。多糖加水分解産物および多糖の混合物は本明細書で使用される用語、多糖に包含される。
a) 多糖は、標的酵素を含む液体環境に実質的に可溶性である;
b) 多糖は、標的酵素およびかかる標的酵素の基質を含む液体環境に実質的に可溶性である;
c) 多糖は(酵素活性を促進する以外は)標的酵素とは反応しない;
d) 多糖は(基質が標的酵素である場合に酵素活性を促進する以外は)標的酵素の基質とは反応しない;
e) 多糖は、標的酵素が活性であるかまたは使用される温度および/またはpHで安定である;
f) 多糖は標的酵素とは結合しない;
g) 多糖は標的酵素の基質とは結合しない;
h) 多糖は非動物由来である;
i) 多糖は少なくとも2種類の異なる単糖単位を含む;
j) 標的酵素と組み合わせた多糖は、多糖による酵素活性の促進の少なくとも一部、好ましくは実質的な部分の間、非凍結状態で維持される;
k) 標的酵素(および任意に基質)と組み合わせた多糖は、多糖により酵素活性が促進される少なくとも一部、好ましくは実質的に一部の間、凍結されない;
および/または
l) 特に、標的酵素が治療用タンパク質である場合に、多糖は動物および/またはヒトに対して非毒性である。
本発明は、液体環境下で、(1つ以上の)多糖により、(1つ以上の)標的酵素の酵素活性を促進する方法を提供する。該方法は、標的酵素が活性である温度、例えば、特に限定されないが、約1℃〜40℃、1℃〜20℃、15℃〜35℃、5℃〜30℃、10℃〜30℃、または20℃〜30℃で実施される。特定の態様において、該方法は、室温、すなわち25℃±約5℃の温度で実施される。
(a) 標的酵素と非天然多糖および任意に標的酵素の基質を合わせる工程;ならびに
(b) 工程(a)において調製された組み合わせを、凍結することなく:(i) 多糖非存在下での標的酵素活性などの適切な対照と比較して(非天然多糖と合わされていない標的酵素の活性と比較して)、標的酵素活性を促進するのに充分な時間;および/または(ii) 多糖非存在下で標的酵素活性の実質的な消失に充分な時間維持する工程を含む。本明細書に示されるように、酵素活性および酵素反応は、標準的な方法により測定可能である(例えば、Eisenthal et al., Enzyme Assays: A Practical Approach, Oxford University Press: New York, 2002および実施例の説明を参照)。
(c) 標的酵素により基質を修飾して、修飾基質を生成する工程;および
(d) 修飾基質を回収する工程を含む。
(a) β-グルコセレブロシダーゼと1つ以上のオリゴ糖修飾酵素および約3%〜約7%のHESを合わせて組み合わせを生成する工程;および
(b) オリゴ糖/多糖酵素がHESの存在下でβ-グルコセレブロシダーゼを修飾する条件下で組み合わせを維持して、修飾β-グルコセレブロシダーゼを生成する工程を含む。該方法はさらに修飾β-グルコセレブロシダーゼを回収する工程を含み得る。
本発明はまた、(a)オリゴ糖/多糖酵素、タンパク質酵素、ポリヌクレオチド酵素、リパーゼ、キナーゼおよびリソソームヒドロラーゼからなる群より選択される標的酵素、ならびに(b)非天然多糖を含む組成物を提供し、該組成物は約0.01%〜55%w/v、約0.1%〜50%w/v、約1%〜50%w/v、約5%〜40%w/v、約10%〜40%w/v、約15%〜35%w/v、約20%〜30%w/v、約0.01〜約15%w/v、約0.1%〜15%w/v、約1%〜10%w/v、約5%〜15%w/v、約3%〜7%w/v、または約4%〜6%の多糖を含む。いくつかの態様において、標的酵素はそれ自体治療用タンパク質である。
標的酵素の酵素活性は、当業者によって決定される適切なアッセイによって評価され得る(例えば、Eisenthal et al., Enzyme Assays:A Practical Approach, Oxford University Press:New York, 2002;Freifelder, D., Physical Biochemistry;Applications to Biochemistry and Molecular Biology、第2版、W. H. Freeman & Co., New York, 1982および実施例の記載を参照のこと)。
以下の実施例では、特に記載のない限り、B. Braunのヒドロキシエチルデンプン(HES)を使用した。B. BraunのHESは、450〜700kDaの範囲の表示平均分子量(AMW)および0.70〜0.80の(ヒドロキシエチル)モル置換比(MS)を有する。HESの2つのさらなる供給元(AjinomotoおよびFresenius Kabiから入手)の標的酵素活性を促進する比較可能性を実施例11に示す。
蛍光標識糖質電気泳動法(fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis)(FACE)アッセイ(例えば、Jackson、Biochem. Soc. Trans. 21:121-5(1993);Hu, J. Chromatogr. A 705:89-103(1995);Friedman et al., Anal. Biochem. 228:221-225(1995);Starr et al., J. Chromatogr. A 720:295-321(1996)を参照のこと)は、オリゴ糖を特徴付けおよび測定するための標準アッセイである。また、これは、単糖を特徴付けするためにも使用され得る(Gao et al., Glycobiology 13:1G-3G (2003))。
標的酵素の酵素活性は、当業者によって決定される適切なアッセイによって評価され得る(例えば、Eisenthal et al., Enzyme Assays:A Practical Approach, Oxford University Press:New York, 2002および実施例の記載を参照のこと)。
p-ニトロフェノール(pNP)への合成基質p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシド(pNP-βGlc)(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)の加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のβ-グルコセレブロシダーゼ(β-D-グルコシダーゼ)活性をアッセイした。これらのアッセイでは、10mMのpNP-βGlc 80μlを20μlのβ-グルコシダーゼ試料に添加し、試料を37℃で15分間インキュベートした。反応を800μlの0.1Mのグリシン、pH10.5でクエンチした後、試料の400nmにおける吸光度を測定した。β-グルコシダーゼ試料の活性を、以下の等式:
(式中、A400は、試料の400nmにおける吸光度であり、εは、400nmにおけるpNPのモル吸光係数であり、時間は分単位で測定され、光パス長は1cmであり、試料容量はmL単位で測定される)
に従って計算した。
p-ニトロフェノール(pNP)への合成基質p-ニトロフェニル-α-D-グルコピラノシド(pNP-αGlc)(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)の加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のα-グルコシダーゼ(α-D-グルコシダーゼ)活性をアッセイした。これらのアッセイでは、40mMのpNP-αGlc 225μlを25μlのα-グルコシダーゼ試料に添加し、試料を37℃で15分間インキュベートした。反応を0.25mlの0.3Mのグリシン、pH10.6でクエンチした後、試料の400nmにおける吸光度を測定した。α-グルコシダーゼ試料の活性を、以下の等式:
(式中、A400は、試料の400nmにおける吸光度であり、εは、400nmにおけるpNPのモル吸光係数であり、時間は分単位で測定され、光パス長は1cmであり、試料容量はmL単位で測定される)
に従って計算した。
p-ニトロフェノール(pNP)への合成基質p-ニトロフェニル-α-D-ガラクトピラノシド(pNP-αGal)(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)の加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のα-ガラクトシダーゼ(α-D-ガラクトシダーゼ)活性をアッセイした。これらのアッセイでは、30mMのpNP-αGal 75μlを175μlのα-ガラクトシダーゼ試料に添加し、試料を37℃で10分間インキュベートした。反応を0.25mlの0.5Mのホウ酸ナトリウム、pH9.0でクエンチした後、試料の405nmにおける吸光度を測定した。α-ガラクトシダーゼ試料の活性を、以下の等式:
(式中、ΔODは、試料(または標準(Std))の405nmにおける吸光度とブランクとの差であり、時間は分単位で測定され、試料容量はmL単位で測定される)
に従って計算した。
4-メチルウンベリフェロン(4MU)への合成基質4-メチルウンベリフェリル-N-アセチルノイラミン酸(4MU-NANA)(Sigma Aldrich Company、St. Louis、MO)のシアリダーゼ触媒性加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のシアリダーゼ(ノイラミニダーゼ)活性を測定した。これらのアッセイでは、5〜10uMの4MU-NANA 100μlを10μlの精製シアリダーゼに添加した。15分後、5mlの0.1Mのグリシン、pH10.5を添加することにより反応をクエンチし、蛍光計(励起360nm、発光450nm)により1.5mlの試料を分析した。4MU溶液を用いて作成した標準曲線に結果を外挿し、インキュベーション中に放出された4MUの量を測定した。活性を、以下の等式:
(式中、放出された4MUの量は、nmol単位で測定され、試料容量は、ミリリットル(mL)単位で測定され、時間は分単位で測定される)
に従って計算した。したがって、例えば、上記の計算を使用し、酵素ストック溶液が1000単位/mLの活性を有すると測定され、酵素反応において2000単位の酵素を使用することが所望される場合、かかる反応では、2mLのかかるストック溶液が必要とされ得る。
o-ニトロフェノール(oNP)への合成基質o-ニトロフェニル-β-D-ガラクトピラノシド(oNPGal)(Sigma Aidrich, St. Louis, MO)の加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のβ-ガラクトシダーゼ(β-D-ガラクトシダーゼ)活性をアッセイした。これらのアッセイでは、15mMのoNPGal 400μlを100μlのβ-ガラクトシダーゼ試料に添加し、試料を37℃で15分間インキュベートした。次いで、2.5mlの0.1Mのグリシン、pH10.5の添加によって反応をクエンチし、試料の430nmにおける吸光度を測定した。β-ガラクトシダーゼ試料の活性を、以下の等式:
(式中、A430は、試料の430nmにおける吸光度であり、εは、430nmにおけるoNPのモル吸光係数であり、時間は分単位で測定され、光パス長は1cmであり、試料容量はmL単位で測定される)
に従って計算した。
p-ニトロフェノール(pNP)への合成基質p-ニトロフェニル-β-D-N-アセチルグルコサミニド(pNPGlcNAc)(Sigma Chemical, St Louis, MO)のβ-ヘキソサミニダーゼ触媒性加水分解の速度を測定することにより、ストック溶液のβ-ヘキソサミニダーゼ活性(β-N-アセチルグルコサミニダーゼ)をアッセイした。これらのアッセイでは、4mMのpNPGlcNAc 400μlを100μlのβ-ヘキソサミニダーゼ試料に添加した。試料を37℃で15分間インキュベートした。反応を2.5mlの0.1Mのグリシン、pH10.5でクエンチした後、試料の400nmにおける吸光度を測定した。β-ヘキソサミニダーゼ試料の活性を、以下の等式:
(式中、A400は、試料の400nmにおける吸光度であり、εは、400nmにおけるpNPのモル吸光係数であり、時間は分単位で測定され、光パス長は1cmであり、試料容量は、mL単位で測定される)
に従って計算した。
HESなどの安定剤の非存在下(すなわち、ストレス酵素)、標的酵素酵素活性の損失を促進することが意図された条件下で、標的酵素β-グルコセレブロシダーゼに対するHESの効果を評価するための試験を行なった。具体的には、50mMのリン酸ナトリウム、pH7.5中4mg/mlの濃度のGCRを、適切な容量の50%HESストック溶液を添加することにより、0%、10%または40%HESの溶液に調製した。40℃で、表示した時間、調製物をインキュベートし、次いで、試料を取り出し、-80℃に凍結した。β-グルコセレブロシダーゼ活性の分析のために試料を解凍した。表6は、経時的な酵素活性を示す。図7は、各時点における活性を初期活性(TO;0時間)のパーセントで示す。
標的酵素α-グルコシダーゼに対するHESの効果を評価するための試験を行なった。HESなどの安定剤の非存在下、標的酵素の酵素活性の損失を促進することが意図された条件において、精製α-グルコシダーゼを調製した。具体的には、酵素を50mMの酢酸ナトリウム、pH4.0に調製し、次いで、適切な容量の50%HESストック溶液を添加することにより、0%、10%および40%HESならびにα-グルコシダーゼを含有する溶液を調製した。溶液を40℃でインキュベートし、表示した時点で試料を取り出し、次いで-80℃に凍結した。試料を解凍し、α-グルコシダーゼ活性について分析した。表7は、0〜20日の期間にわたって種々の試料中で測定された活性を示す。図8は、各時点における活性を初期活性(T0;時間ゼロ)のパーセントで示す。
標的酵素α-ガラクトシダーゼを、0%、10%または40%HESを含有する50mMのリン酸ナトリウム、pH7.5バッファー中、同じタンパク質濃度で調製した。調製物を40℃で、表示した時間インキュベートし、次いで、試料を取り出し、-80℃に凍結した。試料を解凍し、α-ガラクトシダーゼ活性について分析した。表8は、経時的な酵素活性を示す。対照試料0%HESは、第3日には本質的に活性を示さなかったが、40%HES試料は、第3日にその初期活性の約35%を示し、第12日に約13%を示した。このデータは、β-ガラクトシダーゼは、HESの存在によって安定化されることを示す。
5つの化合物:(1)グリセロール、(2)プロピレングリコール、(3)ダイズタンパク質加水分解物、HY-SOYTM(Quest International, Chicago, IL)、(4)ヒドロキシエチルデンプン(「HES」)(特に記載のない限りB. Braun, Puerto Rico)および(5)Hmxlを、3つの標的酵素(シアリダーゼ、β-ガラクトシダーゼおよびβ-ヘキソサミニダーゼ)の酵素活性を促進するその能力について評価した。
以下の表10に示す6つの各実験において、同じ量の3つの標的酵素を使用した。
Hmxl(14ml/L sv)もしくはHES(5%w/sv)の存在下のいずれかで調べた。標的酵素カクテルを、5mMの塩化カルシウムを含有する100mMのクエン酸ナトリウムバッファー、pH5.7で予め平衡化したPhenyl SepharoseTMカラムに負荷し、次いで、基質を70〜120U GCR/カラム樹脂mLで負荷した。基質はカラムに結合された。次いで、標的酵素カクテルを室温でおよそ24時間カラム中に再循環させた。およそ24時間後、標的酵素カクテルをカラムから洗浄し、基質を溶出させ、回収し、FACE分析によってアッセイした。結果を表10に示す。
この実施例では、オリゴ糖/多糖の修飾に使用した標的酵素カクテルは、5%w/L sv HESを含んでいたか、HESを含まなかった。
この実施例で使用した条件は、すべての実験がHES 5%w/L svを含んだこと以外は、実施例6に記載のとおりにした。
この実施例で使用した条件は、(標的酵素カクテル、平衡バッファーおよびカラム洗浄液の)pHを表14に指定したpHとし、HESの存在を表14に示したようにした以外は、実施例7に記載のとおりにした。
この実施例で使用した条件は、標的酵素カクテル、平衡バッファーおよびカラム洗浄液のpHをpH5.5とし、標的酵素カクテルが2%または5%いずれかのHES w/L svを含み、両方の実験で標的酵素量を互いに同一としたこと以外は、実施例8に記載のとおりにした。
表15のデータは、HES濃度を2%から5%に増大させると標的酵素の促進が改善されることを示す。この実施例では、HESを2%から5%に増加すると、FACE値が7.7%増大した。
2つのさらなる市販供給元Ajinomoto (Raleigh、North Carolina、USA)、およびFresenius Kabi (Linz、Austria)のHESを、オリゴ糖/多糖の修飾反応における標的酵素活性の促進について、B. Braun製のHESと比較した。
この実施例で使用した条件は、B. BraunのHESのみを実験に使用したこと以外は、実施例10に記載のとおりにした。標的酵素量は、表17の各実験で同一:すなわち、210U/L svのシアリダーゼ、39.6U/L svのβ-ガラクトシダーゼおよび1500U/L svのβ-ヘキソサミニダーゼとした。表示した「倍率(Scale)」は、表17に示した各実験で使用した系の容積(フェニル樹脂およびパイピングに占められる容積を含む)間の比較を反映する。例えば、150O×の系の容積は、系の容積が1×系の容積(sv)より1500倍大きいことを意味する。
α-ガラクトシダーゼ安定性に対するHESの効果を評価するための予言的試験を行なう。0%、10%または40%いずれかのヒドロキシルエチルデンプンを含む、50mMのリン酸ナトリウム、pH7.0中約5.0mg/mlのα-ガラクトシダーゼを無菌的に適切な容器内に濾過し、25℃で12ヶ月まで保持する。滅菌試料を0、3、6、9および12ヶ月のときに取り出し、-80℃に凍結する。試料を分析のために解凍し、α-ガラクトシダーゼ活性アッセイによってアッセイする。表18は、各時点における活性を初期活性(T0)のパーセントで示す。
α-ガラクトシダーゼ安定性に対するHESの効果を評価するための予言的試験を行なう。0%、10%または40%いずれかのHESを含む、50mMのリン酸ナトリウム、3%マンニトール(w/w)、pH7.0中、5.0mg/mlのα-ガラクトシダーゼを無菌的に適切な容器内に濾過し、25℃で12ヶ月まで保持する。滅菌試料を0、3、6、9および12ヶ月のときに取り出し、-80℃に凍結する。試料を分析のために解凍し、α-ガラクトシダーゼ活性アッセイによってアッセイする。表19は、各時点における活性を初期活性(T0)のパーセントで示す。
0%、10%または40%いずれかのHESを含む水中、ならびにベンジルアルコールまたはフェノールなどの適当な保存剤の存在下および非存在下での再構成後の凍結乾燥α-ガラクトシダーゼの安定性を評価するための予言的試験を行なう。50mMのリン酸ナトリウム、3%マンニトール、pH7.0中、5.0mg/mlのα-ガラクトシダーゼを適切な容器(バイアル)内に凍結乾燥する。再構成バイアルを25℃で保持し、試料を0、5、10、20および30日のときに取り出し、pNPアッセイによってアッセイする。表20は、各時点における活性を初期活性(T0)のパーセントで示す。
Claims (12)
- (a)標的酵素を、1%〜50%w/vのヒドロキシアルキルデンプンおよび該標的酵素の基質と合わせ、それにより配合物を作製する工程、ここで、該標的酵素は、
(i)ガラクトシルトランスフェラーゼ、GalNAcトランスフェラーゼ、オリゴサッカリルトランスフェラーゼ、N-アセチルグルコサミニルホスホトランスフェラーゼ、O-結合グリコシルトランスフェラーゼ、N-結合グリコシルトランスフェラーゼ、α-マンノシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、シアリダーゼ(ノイラミニダーゼ)、β-N-アセチルヘキソサミニダーゼ、N-アセチル-グルコサミン-1-ホスホジエステルα-N-アセチルグルコサミニダーゼ、N-グリカナーゼ(N-グリコシダーゼF)、O-グリカナーゼ(エンド-α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ)、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼH、シアレート-O-アセチルトランスフェラーゼ、シアレート-O-アセチルエステラーゼ、およびα-グルコシダーゼからなる群より選択されるオリゴ糖/多糖酵素であるか、または
(ii)α-ガラクトシダーゼA、酸セラミダーゼ、酸α-L-フコシダーゼ、酸β-グルコセレブロシダーゼ(GCR)、酸β-ガラクトシダーゼ、イズロネート-2-スルファターゼ、α-L-イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸α-マンノシダーゼ、酸β-マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N-アセチルガラクトサミン-6-スルフェートスルファターゼ、酸β-ガラクトシダーゼ、酸スフィンゴミエリナーゼ、酸α-グルコシダーゼ、β-ヘキソサミニダーゼB、ヘパランN-スルファターゼ、α-N-アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル-CoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ、N-アセチルグルコサミン-6-スルフェートスルファターゼ、α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ、シアリダーゼ、β-グルクロニダーゼ、およびβ-ヘキソサミニダーゼAからなる群より選択されるリソソームヒドロラーゼである;ならびに
(b)該標的酵素の酵素活性を増強するのに充分な条件下に該配合物を維持する工程、ここで、該条件は、1℃〜40℃である、
を含む、標的酵素の酵素活性を増強する方法。 - 標的酵素が液体環境中にある、請求項1記載の方法。
- 該配合物が、ある時間の間凍結することなく維持される、請求項1または2記載の方法。
- ヒドロキシアルキルデンプンが、ヒドロキシメチルデンプン、ヒドロキシエチルデンプン(HES)、ヒドロキシプロピルデンプン、およびヒドロキシブチルデンプンからなる群より選択される、請求項1〜3いずれか記載の方法。
- ヒドロキシアルキルデンプンがHESである、請求項4記載の方法。
- 基質が酵素である、請求項1〜5いずれか記載の方法。
- 酵素がリソソームヒドロラーゼである、請求項6記載の方法。
- リソソームヒドロラーゼがβ-グルコセレブロシダーゼである、請求項7記載の方法。
- 標的酵素が、シアリダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、β-N-アセチルヘキソサミニダーゼおよびその組合せからなる群より選択され、ヒドロキシアルキルデンプンがHESであり、基質がβ-グルコセレブロシダーゼである、請求項1記載の方法。
- 標的酵素に基質を修飾させ、それにより修飾基質を作製し、修飾基質を回収する工程をさらに含む、請求項1〜9いずれか記載の方法。
- 標的酵素が、シアリダーゼ、β-ガラクトシダーゼおよびβ-ヘキソサミニダーゼの組合せであり、ヒドロキシアルキルデンプンが1%〜12%w/vの量で存在するHESである、請求項1記載の方法。
- 該条件が、6のpHのクエン酸バッファーおよび塩化カルシウムをさらに含む、請求項1〜11いずれか記載の方法。
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FR504653A (fr) | 1918-04-19 | 1920-07-12 | Schneider & Cie | Système de liaison entre l'affut et les chariots de chenilles pour matériels d'artillerie à flèche sur chaines sans fin |
US3937821A (en) | 1971-08-21 | 1976-02-10 | Kyorin Seiyaku Kabushiki Kaisha | Plasma substitute including artificial starch and method for the preparation thereof |
DE2615844A1 (de) * | 1976-04-10 | 1977-10-20 | Knoll Ag | Fibrinogen spaltendes enzymsystem |
JPS5470419A (en) * | 1977-11-16 | 1979-06-06 | Wakamoto Pharma Co Ltd | Stable urokinase powdery preparaton |
US4473552A (en) | 1981-03-16 | 1984-09-25 | Jost Leonora I | Anaerobic method for preserving whole blood, tissue and components containing living mammalian cells |
WO1984000891A1 (en) | 1982-08-30 | 1984-03-15 | Baxter Travenol Lab | Method for making gamma globulin-containing compositions |
JPS60155136A (ja) | 1984-01-23 | 1985-08-15 | Takeda Chem Ind Ltd | γ型インタ−フエロン組成物 |
EP0150067A3 (en) | 1984-01-23 | 1986-12-30 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stable composition of gamma-interferon |
CA1267602A (en) | 1985-09-10 | 1990-04-10 | Fumio Kakimoto | Composition containing tissue plasminogen activator |
US6007978A (en) | 1988-05-18 | 1999-12-28 | Cobe Laboratories, Inc. | Method of freezing cells and cell-like materials |
US6451600B1 (en) | 1989-12-22 | 2002-09-17 | Genzyme Corporation | Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase |
US5723282A (en) | 1991-07-08 | 1998-03-03 | The American National Red Cross | Method of preparing organs for vitrification |
US6627275B1 (en) | 1994-04-19 | 2003-09-30 | Applied Elastomerics, Incorporated | Tear resistant elastic crystal gels suitable for inflatable restraint cushions and other uses |
US5616689A (en) | 1994-07-13 | 1997-04-01 | Collagen Corporation | Method of controlling structure stability of collagen fibers produced form solutions or dispersions treated with sodium hydroxide for infectious agent deactivation |
US6136578A (en) | 1997-03-12 | 2000-10-24 | Novo Nordisk A/S | Storage-stable liquid formulation comprising a laccase |
CA2288143C (en) | 1997-04-28 | 2012-08-21 | Eli Lilly And Company | Activated protein c formulations |
US6630137B1 (en) | 1997-04-28 | 2003-10-07 | Eli Lilly And Company | Activated protein C formulations |
US6433161B1 (en) * | 1997-04-29 | 2002-08-13 | Hercules Incorporated | Galactosylated hydroxyalkyl polysaccharides |
ES2541470T3 (es) | 1999-02-22 | 2015-07-20 | University Of Connecticut | Formulaciones de factor VIII libres de albúmina |
US6458387B1 (en) * | 1999-10-18 | 2002-10-01 | Epic Therapeutics, Inc. | Sustained release microspheres |
DK1666028T3 (da) | 1999-10-29 | 2010-06-21 | Novartis Ag | Tørre pulversammensætninger med forbedret dispersitet |
WO2001049830A2 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Maxygen Aps | Improved lysosomal enzymes and lysosomal enzyme activators |
EP1514556B1 (en) | 2000-02-08 | 2011-08-10 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin pharmaceutical compositions |
US7780967B2 (en) | 2000-02-08 | 2010-08-24 | Allergan, Inc. | Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
US20050169886A1 (en) * | 2001-10-30 | 2005-08-04 | Brody Richard S. | Stabilization of biologically active proteins with mixtures of polysaccharides and amino acid based compounds |
DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
US6982080B2 (en) | 2002-03-15 | 2006-01-03 | Wyeth | Hydroxyethyl starch—containing polypeptide compositions |
WO2006108052A2 (en) * | 2005-04-06 | 2006-10-12 | Genzyme Corporation | Peg and polysialic lysosomal enzyme conjugates via acid labile linkers for therapeutic targeting |
PL2029740T3 (pl) | 2006-05-31 | 2012-11-30 | Genzyme Corp | Zastosowanie polisacharydów do promowania aktywności enzymatycznej |
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