JP5084428B2 - アミノ酸分析方法 - Google Patents
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Description
rf={100−(溶出時間/流量0.1mL/minの溶出時間}×100
各成分について、この溶出時間変化率rfは緩衝液の流量の変更量に依存し、各成分間で溶出時間変化率rfに有意差は見られない。つまり、どの成分についても、緩衝液流量の変化による溶出時間への影響はほぼ同様であり、成分による特徴は見出されない。
rt={100−(溶出時間/温度60℃の溶出時間}×100
表3に示すように、カラム温度一定で緩衝液の流量を変更した場合においては、各成分の溶出時間変化率に差は見られなかったが、表4のようにカラム温度を変更した場合、アンモニア(NH3)および隣接する任意のアミノ酸成分の溶出時間変化率に差が見られた。特に、アンモニア(NH3)は任意のアミノ酸と比較して溶出時間変化率が小さい。つまり、カラム温度を変更してもアンモニア(NH3)の溶出時間は変化しにくく、アンモニア(NH3)の溶出時間はカラム温度の変更の影響を受けにくいことがわかる。
緩衝液の流量223を、時点0分から34.6分まで0.300mL/minとし、アンモニア(NH3)の溶出時間に対応する35.6分から42.2分までの間、0.275mL/minに減少させ、45.2分以降は0.300mL/minに増加させている。ここで、緩衝液の流量変更に加え、アンモニア(NH3)溶出前にカラム温度を33分から80℃に上昇させるとともに緩衝液をB4(pH4.9)からB5(pH6.2)に切り替え、緩衝液のpHを上昇させる。
Claims (7)
- アンモニアを含むアミノ酸溶液を緩衝液とともに分離カラムに送液してアンモニアおよび各種アミノ酸を分離し、該アミノ酸溶液を反応装置内で反応した後、検出器によって前記アンモニアおよび前記各種アミノ酸を検出するアミノ酸分析方法であって、
前記緩衝液の流量、及び分離カラム温度と、緩衝液のpH値と、緩衝液の有機溶媒濃度と、緩衝液のナトリウムイオン濃度と、緩衝液のリチウムイオン濃度とからなる群から選ばれた少なくとも1つのパラメータを、グリシンまたはアラニンが溶出した後で、かつ、アンモニアが溶出する前の任意の時点で変更し、緩衝液の流量及び前記パラメータの変更前の前記アミノ酸溶液中のグリシンまたはアラニンが溶出した後で溶出するアミノ酸成分またはアンモニアの溶出時間t1(i)を、緩衝液の流量及び前記パラメータの値の変更後の前記アミノ酸溶液中のグリシンまたはアラニンが溶出した後で溶出するアミノ酸成分またはアンモニアの溶出時間t2(i)に変更させ、グリシンまたはアラニンが溶出した後で溶出するアミノ酸成分の前記緩衝液の流量及び前記パラメータの値の変更による溶出時間変化率R(j)よりも前記緩衝液の流量及び前記パラメータの値の変更によるアンモニアの溶出時間変化率R(NH3)を大きくし、アンモニアとグリシンまたはアラニンが溶出した後で溶出するアミノ酸成分が分離されたクロマトグラムを形成することを特徴とするアミノ酸分析方法。 - 前記パラメータは、分離カラム温度であることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
- 前記パラメータは、緩衝液のpH値であることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
- 前記パラメータは、緩衝液の有機溶媒濃度であることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
- 前記パラメータは、分離カラム温度及び緩衝液のpH値であることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
- 前記パラメータは、分離カラム温度、緩衝液のpH値及び緩衝液の有機溶媒濃度であることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
- グリシンまたはアラニンが溶出した後、アンモニアが溶出する前に前記緩衝液の流量を増加させ、その後アンモニアの溶出時間に近い時点で前記緩衝液の流量を低下させることを特徴とする請求項1に記載のアミノ酸分析方法。
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