JP4991352B2 - 培養袋及び培養装置 - Google Patents
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Description
この様な問題を解決するために、袋状の培養槽が提案されている(特許文献1)。しかしながら、この培養槽は、培養液や培養体の収納後に蓋体で袋の開放部を封止するものであり、培養器の組立時、あるいは培養液や培養体の収納時に雑菌が混入するおそれがあり、培養器内部の無菌状態の保持には限界があった。また、ガゼット袋よりなる振盪培養用容器(特許文献2)や自立包装袋よりなる培養容器(特許文献3)が提案されているが、これらの容器も給気効率などにおいて改善の余地があった。
ここで、前記培養袋を自立させた時に、前記給気管の一部が前記培養袋の底面に接地するように重りが付加されたものあることが好ましく、前記給気管が複数の給気孔を備えると共に、複数の給気孔を有する部分が底面に横たわるように、給気管に沿って棒状の重りが付加されたものであることがより好ましい。
そして、前記包装袋はガゼット袋であることが好ましい。
本発明の培養袋は、さらに、前記包装袋が上部に吊し部を備えることが好ましい。
本発明の培養装置は、さらに、温度センサーを備えることが好ましい。
本発明の培養装置は、さらに、加温装置を備えることが好ましい。
本発明はさらに、前記培養袋を用いて培養された培養体を培養袋から取り出すことなく輸送する培養体の輸送方法を提供する。
本発明の培養袋は折り畳み可能であり、また、軽いので、運搬や滅菌などの取り扱いが容易である。
また、前記包装袋がガゼット袋であると、収容効率が高く、かつ自立性があるので好ましい。
また、前記包装袋が上部に吊し部を備えると、支持部材に安定に支持させることができる。
また、前記培養装置が温度センサーを備えると、温度管理が可能となる。
また、前記培養装置が加温装置を備えると、加温して培養の促進が可能となる。
本発明の培養体の輸送方法は、本発明の培養袋を用いて培養された培養体を培養袋から取り出すことなく輸送する方法であり、培養体を別の運搬容器に詰め替えたりすることなく培養袋ごと運搬できるので好ましい。
ンディングパウチ、四角筒状のフィルムに四角の底面フィルムを熱溶着した四角底袋などが挙げられる。これらの内、製造が容易で、より多くの培地を安定に収容でき、均一に培養できることからガゼット形状の包装袋が好ましく、下部の隅部が斜めに熱溶着されていると隅部に収容物が入り込まないのでより好ましい。
その様なフィルムを構成する合成樹脂としては、例えば、ポリエチレン(PE)やポリプロピレン(PP)などのポリオレフィン、軟質塩化ビニルなどが挙げられる。特に高い強度が要求される場合は、二軸延伸ナイロンフィルムや二軸延伸ポリエチレンテレフタレート(PET)フィルムを補強層として積層しも良い。酸素などのガスバリア性が必要な場合は、シリカやアルミナの蒸着層やエチレン−ビニルアルコール共重合体層等が積層されたフィルムを使用しても良い。これらのフィルムが複数層積層されたり、重畳されていても良い。
培養袋の容量は特に制限されないが、例えば、5〜1000Lの容量とすることができる。
蓋を成型する際に連通部材を蓋の内外に形成してもよい。このような蓋の連通部材は、複数設けられることが好ましく、これらの連通部材に給気管はもとより、排気管や培地のpHや温度をモニターしたり、サンプリングしたりするための管を接続することができる。
給気管の長さは、培養袋を自立させた時に、給気管の一部が前記培養袋の底面に接地するように設定する。好ましくは所定の長さで底に横たわるように設定する。
)滅菌などが挙げられる。これらのうち、装置が簡易で操作が容易なAC滅菌が好ましい。EOG滅菌を行う場合は、容器本体の少なくとも一部をフィルターとすることが好ましい。この場合、フィルターは、PEやPPなどのポリオレフィン系不織布であると、熱溶着が可能となり好ましい。なお、本発明の培養袋を折り畳んで外装袋や外装箱に収容した後に滅菌してもよい。複数個の培養袋を折り畳んで1つの外装袋あるいは外装箱にまとめて収容して滅菌してもよいが、例えば、クリーンベンチ等で無菌的に連通部材との接続作業を行うような場合は、一体ずつ外装袋あるいは外装箱に入れて滅菌することが好ましい。
また、本発明の培養装置によって微生物等を培養した後、微生物等を培養袋の中で担体に固定化してバイオリアクターとすることも可能である。例えば、培養袋にて微生物を培
養した後に、微生物固定化用担体を適量培養袋に加え、攪拌装置や振盪装置にて攪拌しながら微生物を固定化すればよい。固定化に際し、さらに本発明の培養袋内で攪拌しつつ、給気管から空気を導入することにより好気的条件としたり、窒素ガスやアルゴン等の不活性ガスを導入することにより嫌気的条件としたりして目的の反応を行うことが可能である。この場合、使用される担体は特に限定されないが、例えば、クラレ株式会社のクラゲールや日清紡績株式会社のAPG等が使用可能である。
図1は、本発明の培養袋10が折り畳まれた状態の平面図である。図2は、本発明の培養袋10が膨らんだ状態の斜視図である。
図1および図2に示す本発明の培養袋10は、特開2003−191967に開示されたガゼット形状のBIB内袋で、呼び容量20Lの藤森工業株式会社製Zテーナーの仕様を一部変更したものを有底の包装袋として用いたものである。
給気管11は培養袋内の先端が封止され、培養袋の底面に接する部分に沿って複数の孔が開口されている。そして、給気管11の給気孔を有する部分に沿ってステンレス製の棒
状の重り15が2個の留め具16で給気管11に固定されている。
本実施態様では、得られた培養袋10の注出口を蓋14で液密に封止して、さらにγ線で滅菌し、内部全体を無菌状態とした。
図3は、本発明の培養装置100の斜視図である。図3に示す培養装置100は、以下のような構成である。まず、モーターとクランクを組み合わせて水平方向に揺動する揺動装置を有する支持装置20の天面に、培養袋10の下部が収まる浅い箱型のステンレス製の載置板32を設置した。そして、載置板32の底面に図示しない面状ヒーターを敷き、第一の実施態様で得られた培養袋10を載せた。なお、面状ヒーターは、ニクロム線の回路をシリコーンゴムで被覆したヒーターを用いた。他に面状ヒーターとしては、アルミ箔回路を合成樹脂シートで挟んだものやカーボンを包装袋に封入したものなども使用可能である。
内部が滅菌された培養袋10の給気管11が接続された連通部材の外側を向く端部をクリーンベンチ内で開放し、内外が無菌状態に保持され、端部に図示しないフィルターを有するシリコーンラバー製の給気用チューブを外嵌して培養袋10の外側に給気管を延設した。同様にして連通部材12の外側端部に、図示しないシリコーンラバー製の給液用チューブを外嵌して給液管とし、端部に図示しない滅菌された培養液が収容された培養液容器を無菌的に接続した。同様にして連通部材13の外側端部に、内外が無菌状態に保持され、端部に図示しないフィルターを有するシリコーンラバー製の排気用チューブを外嵌して排気管とした。
培養液および培養体が収納された培養袋10をTAITEC社製のレシプロシェーカー(支持装置20)の浅底のステンレス容器(載置板32)に載置した。延設した給気管のフィルターにエアーコンプレッサを接続し、給気管11を介してフィルターで濾過された空気を培養袋10内に圧送し、培養液中に沈んでいる給気管11に設けられた給気孔より泡を発生させた。支持装置20の揺動装置を始動させ、載置板32を水平方向に揺動し、給気しながら振盪培養を行った。
合してポンプで吸引し、サンプルを採取して培養体の濃度のチェックを行い、培養体が所定の濃度に達したところで培養を終了した。
そして、Zテーナーの外装箱を用いた場合には、上フラップに注出口取り出し用の扉および固定用の孔を開口できるようにミシン目が形成されているので、ミシン目を破断して、固定用の孔および扉を開け蓋14を摘んで注出口とともに引っ張り出し、扉を閉めて注出口を固定させることができる。これにより、ダンボール箱を開けることなく、培養袋10内の培養体などの内容品を注出することができる。
この実施態様では、第一の実施態様で得られる培養袋10に培地を充填した後に、培地とともに培養袋10を滅菌する。
すなわち、外側端部が封止された連通部材12、13および外側端部が封止された連通部材の内側端部に接続された給気管11を有する蓋14と培養袋10の本体となる包装袋がセットになった培養袋10の充填口から培地を培養袋10に充填し、蓋14で培養袋10を液密に封止し、その後、滅菌する。この場合、培地が充填される培養袋10の内部は、予め滅菌されていなくてもよい。このようにして、本発明の培地収容培養袋を得ることができる。
なお、培地が収容された培養袋10の滅菌方法は、培地の内部まで滅菌される必要があることから、γ線滅菌またはレトルト滅菌やAC滅菌等の加熱滅菌が挙げられる。これらの内、加熱滅菌が簡便であり、急速冷却が可能で、このような滅菌について実績も多いので、信頼性が高く、装置が充実していることから、レトルト滅菌が好ましい。レトルトの条件は、培地の性状によって様々であるが、培地の性状および滅菌すべき菌の種類が判れば、F値モニターでテストすることにより容易に設定することができる。
注出口の蓋14の天面にPP製の3本のノズル(連通部材)を接着剤で固着してノズル以外からは外気が侵入しないようにしたこと以外は、第一の実施態様と同様にして図1に示す内部が滅菌されていない培養袋10を作製した。
を培養袋10に注入して播種した。
図4に結果を示す。
図4に示す通り、既存のフラスコ、さらには酸素取り込み量が大きいバッフルフラスコと比較しても本発明の培養袋の方が僅かではあるが高増殖であることが示された。さらに、培地組成の変更や酸素を直接バブリングすることでさらに高い収量が得られると期待される。
Claims (14)
- 充填口を液密に封止可能な蓋を有して液体を液密に収容することができ、液体収容時に自立可能な有底の包装袋よりなる培養袋であって、その培養袋内に、前記蓋に設けた連通部材に接続され、重りが付加された給気管を備える培養袋。
- 前記培養袋を自立させた時に、前記給気管の一部が前記培養袋の底面に接地するように重りが付加された、請求項1に記載の培養袋。
- 前記給気管が複数の給気孔を備えると共に、複数の給気孔を有する部分が底面に横たわるように、給気管に沿って棒状の重りが付加された、請求項2に記載の培養袋。
- 前記包装袋がガゼット袋である、請求項1ないし3のいずれか一項に記載の培養袋。
- 前記包装袋が上部に吊し部を備える、請求項1ないし4のいずれか一項に記載の培養袋。
- 請求項1ないし5のいずれか一項に記載の培養袋を、該培養袋の少なくとも底面を支持する支持装置に支持させてなる培養装置。
- 前記支持装置がさらに培養袋の上部を支持する、請求項6に記載の培養装置。
- 前記支持装置が水平方向に揺動可能な揺動装置を備える、請求項6または7に記載の培養装置。
- 前記培養装置が温度センサーを備える、請求項6ないし8のいずれか一項に記載の培養装置。
- 前記培養用装置が加温装置を備える、請求項6ないし9のいずれか一項に記載の培養装置。
- 請求項1ないし5のいずれか一項に記載の培養袋を使用して前記給気管から気体を供給して細胞または微生物を培養する細胞または微生物の培養方法。
- 前記培養袋を振盪して細胞または微生物を振盪培養する請求項11に記載の細胞または微生物の培養方法。
- 請求項1ないし5のいずれか一項に記載の培養袋に培地を密封して無菌状態に保持した培地収容培養袋。
- 請求項1ないし5のいずれか一項に記載の培養袋を用いて培養された培養体を培養袋から取り出すことなく輸送する、培養体の輸送方法。
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