JP4960368B2 - ククルビットウリル誘導体とリガンドとの非共有結合を利用した応用 - Google Patents
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Description
本発明は、ククルビットウリル誘導体と、これと相互非共有結合できるリガンドとがそれぞれ特定物質に結合された成分を含むキットを提供する。
本発明者らは、ククルビットウリルと特定リガンドとの非共有結合を利用したさまざまな応用手段を確立することによって、本発明を完成するに至った。
前記本発明の一様態によって、下記(a)及び(b)成分を含むキットが提供される:(a)第1物質に結合された式(1)の化合物である第1成分と、(b)第2物質に結合されたリガンドである第2成分とであり、第1物質及び第2物質はそれぞれ独立的に、固相、生体分子、抗酸化剤、化学治療剤、抗ヒスタミン剤、ククルビットウリル・デンドリマー、シクロデキストリン誘導体、クラウンエーテル誘導体、カリックスアレン誘導体、シクロファン誘導体、環状ペプチド誘導体、金属イオン、発色団、蛍光物質、リン光体、放射性物質及び触媒からなる群より選択され、前記リガンドは、式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、一つ以上のアミン基を有する、C1-C20アルキル基;C2-C20アルケニル基;C2-C20アルキニル基;C1-C20アルコキシ基;C1-C20アミノアルキル基;C4-C20シクロアルキル基;C4-C7ヘテロアリールシクロ基;C6-C20アリール基;C5-C20ヘテロアリール基;C1-C20アルキルシリル基;C6-C20アリール基;C5-C20ヘテロアリール基;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するシクラム(cyclam)またはクラウンエーテル;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するローダミン;及びC1-C20アルキル基、C6-C20アリール基またはC5-C20ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択され、
式中、nは6から10の整数であり、XはO、SまたはNHであり、A1及びA2は、それぞれ独立的にH、OR、SRまたはNHRであり、Rは、H、置換または非置換のC1-C30アルキル基、置換または非置換のC2-C30アルケニル基、置換または非置換のC2-C30アルキニル基、置換または非置換のC2-C30カルボニルアルキル基、置換または非置換のC1-C30チオアルキル基、置換または非置換のC1-C30アルキルチオール基、置換または非置換のC1-C30ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のC1-C30アルキルシリル基、置換または非置換のC1-C30アミノアルキル基、置換または非置換のC1-C30アミノアルキルチオアルキル基、置換または非置換のC5-C30シクロアルキル基、置換または非置換のC2-C30ヘテロシクロアルキル基、置換または非置換のC6-C30アリール基、置換または非置換のC6-C30アリールアルキル基、置換または非置換のC4-C30ヘテロアリール基、及び置換または非置換のC4-C30ヘテロアリールアルキル基からなる群から選択され、ただしA1及びA2は、同時に水素ではない。
硫酸(9M)20mLにグリコウリル(5.7g、40mmol)を溶かした後、ホルムアルデヒド水溶液(7.0mL、91mmol)を添加した。反応混合液を75℃で24時間撹拌し、95〜100℃に温度を上昇させ、7時間反応をさらに進めた。反応混合液を水200mLに素早く注き、アセトン1Lを加えた。その結果として生成された沈殿は減圧下でフィルタリングし、水:アセトン(1:4)溶液で洗浄した。フィルタリングされた固体に水:アセトン(1:1)溶液200mLを加えて溶液状態にした後、まだ沈殿として残っている物質(ククルビット[6]ウリル)を減圧濾過で除去した。
前記実施例1で収得されたククルビット[7]ウリル(10g、8.6mmol)及びK2S2O8(39g、145mmol)を蒸溜水450mLに加え、10分間超音波処理を行った。その後、85℃に温度を上げて12時間反応を進めた。反応混合液を常温に冷却させて白色の沈殿物を収得し、この沈殿物を減圧濾過で除去した。濾過液の溶媒を蒸発させて沈殿物を収得したところ、この沈殿物がヒドロキシククルビット[7]ウリルであった。ヒドロキシククルビット[7]ウリルの置換度は約0.8であった。前記置換度は、ククルビット[7]ウリル中の水素(式(1)でのA1及びA2)がヒドロキシ基に置換された比率を意味する。
実施例2で製造されたヒドロキシククルビット[7]ウリル(1.2g、0.92mmol)を無水DMSO溶液(150mL)に加えて溶かした後、NaH(0.89g、22.4mmol)を添加した。反応混合液をアルゴン環境及び常温で1時間撹拌し、撹拌を続けつつ臭化アリール(2.0mL、22.0mmol)を0℃でゆっくり加えた。反応混合液をさらに常温で12時間撹拌した後、過量の水を加えてアリルオキシククルビット[7]ウリルの沈殿として収得した。その置換度は約0.7であった。
ポリマー樹脂であるアミン基を有するポリスチレン-co-ジビニルベンゼン(DVB、アミン官能基化;ポリスチレン-co-DVB-NH2)(Aldrich社、30〜60メッシュ、2.5mmol N/g、5.0g、12.5mmol)をジクロロメタン50mLに加えた後、トリエチルアミン(9.6mL、69mmol)とトリフォスゲン(2.7g、9.1mmol)を添加し、常温で36時間振盪した。その後、減圧濾過してジクロロメタン、クロロホルム、エーテル、テトラヒドロフランを順々に使用して洗浄した後、24時間真空乾燥することによって、アミン基がイソシアネート基に置換されたイソシアネートメチルポリマー樹脂であるポリスチレン-co-ジビニルベンゼン(polystyrene-co-DVB-NCO)を収得した(図2)。
IR(KBr):3027、2929、2264、1659、1602、1494、1452、1269、1116、1029cm-1。
前記実施例4で製造された固相であるポリスチレン-co-DVB-NCOポリマー樹脂(2.0g、約2.5mmolN/g)をジメチルスルホキシド8mLに加えて膨らませた後、ここにジメチルスルホキシド/ピリジン(37mL/3mL)溶液中の実施例2で製造されたヒドロキシククルビット[7]ウリル(1.44g、1.2mmol)を加え、均一に混合されるようにアルゴン環境下で60℃で120時間撹拌した(図2)。その後、反応混合物を減圧濾過し、ジメチルスルホキシド、メタノール、水そしてエーテルを利用して順々に数回洗浄した後、50℃で24時間真空乾燥することによって、ヒドロキシククルビット[7]ウリルが前記固相に固定化され、そのIRスペクトルの結果は、下記の通りである(図5参照)。
IR(KBr):3026、2920、1755、1689、1602、1493、1452、1272、1115、1028cm-1。
(1)多孔性ポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)のクロロメチル化
多孔性ポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)のCombiGel XE-305(Aldrich社)3.0g及びクロロメチルメチルエーテル(29.90g、0.38mmol)を混合した後、SnCl4(0.90mL)を0℃で一滴ずつ添加した。反応混合物を59℃で4.5時間還流させた(図6)。CombiGel XE-305が徐々に無色で赤色に変化した。メタノール水溶液を入れて反応混合物を中和させ、赤色が消えることを確認した。ポリマー樹脂をガラスフィルタを介してメタノール、テトラヒドロフラン(THF)、水で濾過することによって、クロロメチル化されたポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)を白色のパウダーで収得し、その分析結果は、次の通りである。
元素分析:C、68.68;H、6.01;Cl、18.35%
IRスペクトル:2928、1725、1612、1510、1445、1422、1265cm-1。
前記(1)で収得したクロロメチル化されたポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)(2.0g)をトルエン20mLに加えて膨らませた。そして、プロパン-1,3-ジチオール(2mL、20mmol)を加え、ゆっくり振盪して15分間撹拌した。反応混合物に、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデク-7-エン(DBU:1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene)(0.9mL、6mmol)を一滴ずつ添加し、反応混合液を常温で24時間撹拌した(図6)。収得された樹脂を減圧濾過した後、CH2Cl2及びDMF(ジメチルホルムアミド)で順々に洗浄した。その後、12時間真空乾燥することによって、クロロメチル化されたCombiGel XE-305上にジチオールを固定化した。元素分析の結果、チオール基の固定化程度は、1.9mmol/g(固相1g当たりチオール基が1.9mmol)であることが分かった。
IRスペクトル:2918、2850、2563、1727、1509、1423、1238cm-1
実施例6で製造されたジチオールの固定化されたポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)1.5g及び実施例3で製造されたアリルオキシククルビット[7]ウリル(1.1g、0.68mmol)を16mLメタノールに加えた。その後、アルゴン環境で120時間(5日)300nmの紫外線を照射した(図10参照)。反応終結後、アリルオキシククルビット[7]ウリルの連結されているポリマー樹脂を減圧濾過し、メタノール、クロロホルム、アセトン、エーテルを使用して順々に洗浄した。その後、12時間真空乾燥した。
IRスペクトル:2917、2852、1753、1725、1510、1425、1238cm-1。
(1)(N-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)の製造
20mlのDMF溶液に1.38g(6.4mmol)のフェロセン-アルデヒド(Aldrich社)を溶解させた後、5mlのNaOH(2M)中の0.75g(5.7mmol)の6-アミノカプロン酸(Merck社)と混合し、80℃で2時間還流した。この反応混合物を常温に冷却した後、この反応混合物に、5mlの水の中のNaBH4(0.63g、16.5mmol)を少しずつ加えた(図11参考)。その後、12時間が過ぎた後、酢酸水溶液(10%)をゆっくり加えてpHが5になるようにした。酢酸エチルを利用した抽出過程を介し、有機層に溶けている反応副生成物であるフェロセン-CH2OHと未反応の6-アミノカプロン酸とを除去し、水層を50℃で減圧蒸留することによって、黄褐色の結晶を収得した。この黄褐色結晶を高温のエタノールに溶かし再結晶することにより、標題化合物である板状の黄色い結晶であるN-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸を収得した。
前記(1)で製造されたN-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)15mg、N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS、Fluka社)6mg、及びN-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-エチルカルボジイミドヒドロクロライド(EDC、Fluka社)9mgを無水DMF溶液0.3mlに溶かし、窒素雰囲気下で90℃に温度を上げて30分間撹拌した(図11参照)。溶液の温度を80℃に維持しつつ、30分間反応をさらに進め、常温に冷却させた。30μLの反応混合液を2分間隔で、1mlのリン酸緩衝溶液(100mM)中の牛血清アルブミン(7mg)溶液に加えた。常温で一日振盪し、遠心分離機で沈殿を分離した後、50mMリン酸緩衝溶液(pH7.4)で30時間透析することによって、N-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)の連結されている牛血清アルブミン(フェロセンの連結されているBSA)を製造した。
本実施例では、実施例5で製造されたヒドロキシククルビット[7]ウリルの結合された固相を利用し、フェロセン誘導体の連結されているBSAを精製した。
本実施例では、フェロセンの連結されている固相を利用し、ククルビットウリルが連結されている蛋白質を精製した。
実施例6の(1)で製造されたクロロメチル化されたCombiGel XE-305(1.5g)を、DMF(14mL)に2時間浸して膨らませた。次に、フェロセンメチルアミン(1.35g、6.3mmol)の溶解されたDMF-ピリジン(1:2v/v、9.0mL)溶液に、前記DMF中のクロロメチル化されたCombiGel XE-305を添加し、この溶液を55℃で43時間撹拌した。反応混合物を減圧濾過した後、DMF、CH2Cl2、メタノール、エーテルなどの溶媒で洗浄し、真空下で乾燥させ、フェロセンメチルアミン化されたCombiGel XE-305を得た。
元素分析:C、64.52;H、6.72、N、5.10%
FT-IR:3419、3020、2936、1627、1485、1210、1151、1025cm-1。
石英チューブにDMF(2mL)を入れ、アリルオキシククルビット[7]ウリル((Aaryl-O)14-CB[7]、35mg、0.018mmol)と3-メルカプトプロピオン酸(70mL、0.78mmol)を添加し、紫外線(254nm)下で36時間反応させた。その後、減圧蒸留法を介してDMFを除去し、反応混合物をジエチルエーテル15mLで4回洗浄した後、減圧条件で乾燥させ、[3-(2-カルボキシエチルスルファニル)プロピル-O]14ククルビット[7]ウリルを37mg、60%収得率で収得した。
前記(2)で製造された[3-(2-カルボキシエチルスルファニル)プロピル-O]14ククルビット[7]ウリル37mg、N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS、Fluka社)6mg及びN-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-エチルカルボジイミドヒドロクロライド(EDC、Fluka社)9mgを無水DMF溶液0.3mlに溶かし、窒素雰囲気下で90℃に温度を上げて30分間撹拌した。
本実施例では、実施例7で製造されたアリルオキシククルビット[7]ウリルの結合された固相と、フェロセン誘導体の結合された抗体とを利用し、前記抗体と特異的に結合する抗原を精製した。
実施例7で製造されたアリルオキシククルビット[7]ウリルの固定化された固相300mgを、過量の50mMのHEPES溶液(pH8.5)と共に5分間10,000rpmで遠心分離した後、200μLピペットを利用して上澄液を除去することによって、固相を2回洗浄した。
下記のような方法を行い、フェロセン誘導体の連結されている抗BSA蛋白質溶液を下記のように製造した。
前記(1)で準備されたアリルオキシククルビット[7]ウリルの結合された固相に、500μLの50mMのHEPES(pH7.4)溶液を添加して懸濁させた後、これに前記(2)で100μg/mLに希釈されたフェロセンの連結されている抗BSAの抗体蛋白質溶液500μLを添加した。
フェロセン誘導体の連結されている抗BSA蛋白質と、アリルオキシククルビット[7]ウリルの結合された固相との結合体を2つのチューブに分けて入れ、チューブのうち一つには、対照群としてリゾチームを含んだ(1mg/mL)緩衝溶液500μLを添加し、他の一つには、BSAを含んだ(1mg/mL)緩衝溶液500μLを添加した。
(1)金表面へのアリルオキシククルビット[7]ウリルの固定化
平らな金表面(2cmx1cm)を1mMの1,8-オクタンジチオールの溶けているエタノール溶液に2時間浸し、チオール基を金表面に導入した。金表面を実施例3で製造されたアリルオキシククルビット[7]ウリル(1mM)の溶けているDMF溶液に浸し、254nm及び300nmの紫外線を同時に1時間照射した後、金表面を取り出してDMFで洗浄することによって、アリルオキシククルビット[7]ウリルが共有結合で連結された金表面を製造した(図14参照)。
本実施例では、フェロセン分子がアリルオキシククルビット[7]ウリルのキャビティに包接されうるか否かを確認した。
フェロセントリメチルアンモニウムヨードに対するFTIRスペクトル(図15):1483、1473、1459、1445、1409、1386、1247cm-1;
アリルオキシククルビット[7]ウリルに対するFTIRスペクトル(図16):1756、1471、1377、1322、1255cm-1;
アリルオキシククルビット[7]ウリルが共有結合された金表面とフェロセントリメチルアンモニウムヨードとの反応物にするFTIRスペクトル(図17):1755、1483、1473、1459、1409、1386、1317、1247cm-1。
まず、フェロセンの連結されているグルコースオキシダーゼ(Fc-GOx)酵素溶液を製造したが、その製造方法は、BSAの代わりにグルコースオキシダーゼを使用した点を除いては、実施例8の(2)に記載された方法と同一に行った。
試料中のグルコース濃度を測定するために、グルコースを消耗して起こる酵素反応の結果物であるH2O2の量を測定した。前記(1)で製造された金電極を、H2O2の濃度を測定するのに使用した。0.1Mのリン酸緩衝溶液にグルコースオキシダーゼを溶かし、10〜120mM濃度の溶液を製造して測定した。あらゆる実験は、25℃の恒温槽でなされた。
(1)N-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)の連結されているリパーゼの製造
実施例8の(1)で製造されたN-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)15mg、N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS、Fluka社)6mg、及びN-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-エチルカルボジイミドヒドロクロライド(EDC、Fluka社)9mgを無水DMF溶液0.3mlに溶かし、窒素雰囲気下で90℃に温度を上げて30分間撹拌した(図15参照)。溶液の温度を80℃に維持させつつ30分間反応をさらに進め、常温に冷却させた。30μLの反応混合液を2分間隔で1mlのリン酸緩衝溶液(100mM)中のリパーゼ(7mg)溶液に加えた。常温で一日振盪し、遠心分離機で沈殿を分離した後、50mMリン酸緩衝溶液(pH7.4)で30時間透析することによって、N-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)の連結されているリパーゼ(フェロセンの連結されているリパーゼ)を製造した。
実施例6で製造されたポリマー樹脂に固定化されたヒドロキシククルビット[7]ウリル1.0gを10mL容量の使い捨て注射器に込め、CH2Cl2(40mL)を1.3mL/分の流速で継続的に流した。その後、DMF(50mL、流速:0.7mL/min)を利用して樹脂を洗浄した。前記(1)で製造されたフェロセンの連結されているリパーゼ2mgをリン酸緩衝溶液(0.1MpH6.0)に溶解させ、カラムに0.7ml/分の流速でゆっくり流した後、50mlの水(流速:2ml/分)で注射器を洗浄した。その後、注射器中の固体支持体に固定化されたヒドロキシククルビット[7]ウリルに、フェロセンの連結されているリパーゼが包接された形態のポリマー粒子を集め、真空乾燥した。
8mLのトルエンにα-ピネン(2.38mL、15mmol)及びオクタン酸(2.37mL、15mmol)を溶かした後、前記(2)で収得された触媒150mgを加えた。反応は、常温で撹拌してH2O2(23mmol、2.6mL)を順次に加えることによって始まった。
トルエン20mLにメチルアセトアセテート(2.1mL、20mmol)及びn-ブタノール(1.8mL、20mmol)を入れ、30℃で15分間400rpmで撹拌した。そして、前記(2)で製造された触媒(FerlipaseCB[7] polymer beads)115mgを添加して反応を開始した。澄んだ液体サンプルを周期的に取り出し、生成物であるn-ブチルアセトアセテートを確認した。
死滅した細胞の表面と選択的に結合すると知られている蛋白質アネキシンVに結合されたフェロセン誘導体(アネキシンV-フェロセン誘導体)を、抗ガン剤により細胞死滅が誘導された細胞に処理した後、FITCに結合されたククルビットウリル誘導体(FITC-ククルビットウリル誘導体)を処理した後、遊細胞分析機(Flow cytometry)を介して細胞死滅程度を確認した。
2mLのRPMI-1640培養液(10%FCS含む)を、37℃及び5%CO2条件でKB細胞(口腔ガン細胞)(韓国細胞株銀行、KCLB)106個ほどを2つの6ウェル細胞培養皿で48時間培養した。
実施例8の(1)で製造されたN-(フェロセニルメチル)-6-アミノカプロン酸(Fc-aca)15mg、N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS、Fluka社)6mg、及びN-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-エチルカルボジイミドヒドロクロライド(EDC、Fluka社)9mgを無水DMF溶液0.3mlに溶かし、窒素雰囲気下で90℃に温度を上げて30分間撹拌した(図15参照)。
石英チューブにDMF3mL、実施例3で製造されたアリルオキシククルビット[7]ウリル50mg(0.025mmol)、2-アミノエタンチオールヒドロクロライド87mg(0.77mmol)、AIBN 0.32mg(0.002mmol)を置いて密封した。フリーズ-ポンプ-ソー排ガス法(freeze-pump-thaw degassing method)を利用し、前記チューブ内部を窒素環境にした後、チューブを254nmの紫外線が照射される反応器に位置させて36時間放置した。反応が終結した後、減圧条件で溶媒を除去し、トリエチルアミン0.5mLを添加した後、ジエチルエーテル15mLで4回洗浄する。洗浄後、減圧条件で化合物を乾燥し、48mg、62%の収得率で最終化合物を得た。
DMSO(5mL)に[3-(アミノエチルスルファニル)プロピル-O]14ククルビット[7]ウリル(100mg、0.033mmol)と、1M NaOH1mLとを添加し、DMSO(8mL)に溶かしたFITC(28.26mg、0.072mmol)を入れた後、12時間常温で撹拌した。
2つの細胞培養皿から既存の緩衝溶液を除去し、PBS緩衝溶液(simga社)9mLで2回洗浄した後、二ヵ所の細胞培養皿に同一に前記で収得したFITC-ククルビットウリル誘導体45μgの溶けているPBS緩衝溶液(sigma社)9mLに15分間浸漬させた。
PBS緩衝溶液に含まれている細胞をそれぞれ遠心分離用チューブに移した後、遠心分離を介してそれぞれの細胞のみを取った後、500μlのPBS緩衝溶液にさらにそれぞれ懸濁させた。
(1)クロロメチル化されたポリスチレンのアダマンチルアミン化
前記実施例6の(1)で製造されたクロロメチル化されたポリスチレン(1%ジビニルベンゼンで架橋化)(クロロメチル化されたCombiGel XE-305)(2.0g)をDMF(17mL)に2時間十分に浸した。1-アダマンタンアミンヒドロクロライド(TCI、1.59g、8.5mmol)をDMF-ピリジン(1:2v/v、12.0mL)溶液に徐々に入れた後、前記DMF中のクロロメチル化されたCombiGel XE-305を添加し、55℃で43時間撹拌した。反応混合物をDMF、CH2Cl2、メタノール及びジエチルエーテルの順に濾過した後で洗浄した。その後、真空状態で乾燥し、アダマンチルアミン化されたCombiGel XE-305のポリマー粒子を収得した。
元素分析:C、61.73;H、6.87、N、5.43%(この元素分析の結果から、収得されたアダマンチルアミン化されたCombiGel XE-305 1g当たり3.88mmolのアダマンチルアミンの含まれていることを確認した)。
IRスペクトル(図21参照):3417、3022、2935、1630、1483、1213、1153cm-1。
前記(1)で製造されたアダマンチルアミン化されたCombiGel XE-305(クロロメチル化されている)1.0gを10mL使い捨て注射器に込め、CH2Cl2溶媒(約20mL)を流した。樹脂が多少膨らめば、CH2Cl2/トリフルオロ酢酸(TFA)(45mL/5mL)を1.3mL/分の速度で流した(流率(FR):1.3mL/min)。これは、アダマンチルアミンを水素化するためのものである。その後、50mLのCH2Cl2を2mL/分の速度で流して樹脂を洗浄し、次に、50mLのDMFを0.7mL/minで流し、再び樹脂を膨らませた。未精製のククルビット[7]ウリルの混合物1gを30mLの水に溶かした後、前記の樹枝状に溶液を0.7mL/分の速度でゆっくり流した。その後、50mLの水を2mL/分で流して樹脂を洗浄した後、50mLメタノールを0.7mL/分の速度で流して洗浄した。樹脂に結合されたCB[7]は、DMF/TEA(トリエチルアミン)(40mL/20mL)を2mL/分の速度で、またはアンモニウムバイカーボネート溶液を流して樹脂から脱着させた。次に、60mLの水を2mL/分の速度で流して溶液と共に分離した。上記の2つの分類液を濃縮させれば、白色固体物質が生じ、最終的にメタノールで洗って白色固体(240mg)を得た。
ククルビット[7]ウリル:
合成により製造されたヒドロキシククルビット[7]ウリルは、多量のカルシウム塩を含む。ヒドロキシククルビット[7]ウリルを含む混合物から純粋なヒドロキシククルビット[7]ウリル(式(1)でA1及びA2がいずれもOHであり、XはOであり、nは7である化合物)を得るために、前記混合物を水に溶かした後、アダマンチルアミン化されたCombiGel XE-305樹脂状に通過させた。そして、前記(2)に記載された方法と同一に行い、ヒドロキシククルビット[7]ウリルを分離した。
ヒドロキシククルビット[7]ウリル:
パーヒドロキシククルビット[7]ウリル、ジ-メタ-アミノフェニルククルビット[7]ウリル、ジ-パラ-アミノフェニルククルビット[7]ウリル、ジメチルククルビット[7]ウリル、ククルビット[8]ウリル、ヒドロキシククルビット[8]ウリル、シクロヘキサノククルビット[7]ウリル、ジ-p-メトキシフェニルククルビット[7]ウリル及びジ-p-ヒドロキシフェニルククルビット[7]ウリルそれぞれを含む混合物を、前記(2)でククルビット[7]ウリルの精製に使われた親和性クロマトグラフィーを行った結果、前記ククルビットウリルそれぞれが精製されたことを確認した。
Claims (29)
- 下記a)、及びb)成分:
a)第1物質に結合された下記化学式(1)の化合物の第1成分、及び
b)第2物質に結合されたリガンドの第2成分、
を含むキットであって、
前記第1物質及び第2物質はそれぞれ独立的に、固相、生体分子、抗酸化剤、化学治療剤、抗ヒスタミン剤、ククルビトゥリル・デンドリマー、シクロデキストリン誘導体、クラウンエーテル誘導体、カリックスアレン誘導体、シクロファン誘導体、環状ペプチド誘導体、金属イオン、発色団、蛍光物質、リン光体、放射性物質及び触媒からなる群から選択され、
前記リガンドは、化学式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、かつ一つ以上のアミン基を有する、
C1−C20アルキル基;C2−C20アルケニル基;C2−C20アルキニル基;C1−C20アルコキシ基;C1−C20アミノアルキル基;C4−C20シクロアルキル基;C4−C7ヘテロアリールシクロ基;C6−C20アリール基;C5−C20ヘテロアリール基;C1−C20アルキルシリル基;C6−C20アリール基;C5−C20ヘテロアリール基;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するシクラムまたはクラウンエーテル;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するローダミン;及びC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択される、キット:
(式中、
nは6ないし10の整数であり、
XはO、SまたはNHであり、
A1及びA2はそれぞれ独立的にH、OR、SRまたはNHRであり、ただしA1及びA2は、同時にHではなく、
前記Rは、H、置換または非置換のC1−C30アルキル基、置換または非置換のC2−C30アルケニル基、置換または非置換のC2−C30アルキニル基、置換または非置換のC2−C30カルボニルアルキル基、置換または非置換のC1−C30チオアルキル基、置換または非置換のC1−C30アルキルチオール基、置換または非置換のC1−C30ヒドロキシアルキル基、置換または非置換のC1−C30アルキルシリル基、置換または非置換のC1−C30アミノアルキル基、置換または非置換のC1−C30アミノアルキルチオアルキル基、置換または非置換のC5−C30シクロアルキル基、置換または非置換のC2−C30ヘテロシクロアルキル基、置換または非置換のC6−C30アリール基、置換または非置換のC6−C30アリールアルキル基、置換または非置換のC4−C30ヘテロアリール基、及び置換または非置換のC4−C30ヘテロアリールアルキル基からなる群から選択される。)。 - 第1物質及び第2物質のうちの一つは生体分子であり、他の一つは、発色団、蛍光物質またはリン光体であることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 前記固相がそれぞれ独立的に、高分子、樹脂、磁性物質、シリカゲル、高分子または金のコーティングされたシリカゲル、ジルコニウム酸化物、モノリシック高分子、及び高分子のコーティングされた磁性粒子、金薄膜、銀薄膜、ガラス、ITOのコーティングされたガラス、シリコン、金属電極、ナノロッド、ナノチューブ、ナノワイヤ、カードラン・ガム(curdlan gum)、セルロース、ナイロン膜、セファロース及びセファデックスからなる群より選択される固体支持体であることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 前記固相が、ポリスチレン樹脂、またはポリマーでコーティングされたシリカゲルであることを特徴とする請求項3に記載のキット。
- 前記生体分子が、酵素、核酸、蛋白質、アミノ酸、抗体、抗原、阻害剤、ビタミン、補助因子、脂肪酸、細胞、細胞膜、基質、基質類似物、抑制剤、助酵素、ウイルス、レクチン、多糖、糖蛋白、受容体、ヒストン、ATP、ADP、ホルモン、受容体及びグルタチオンからなる群より選択されることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 前記酵素が、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペロキシダーゼ、プロテアーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ケラチナーゼ、還元酵素、酸化酵素、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルノニダーゼ及びその組合わせからなる群より選択されることを特徴とする請求項5に記載のキット。
- 前記触媒が、グラブス触媒、ラジカル開始剤またはその組合わせであることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 化学式(1)のA1及びA2がそれぞれ独立的にH、OHまたはORであり、Rが、置換または非置換のC2−C30アルケニルであることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 化学式(1)のnが7であり、XがOであることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- 前記リガンドが、一つ以上のアミン基を有し、かつ置換もしくは非置換のC1−C20アルキル基、C6−C20アリール基またはC5−C20ヘテロアリール基を有するアダマンタン、フェロセンあるいはメタロセンであることを特徴とする請求項1に記載のキット。
- アミン基が1級アミン、2級アミンまたは水素化されたアミンであることを特徴とする請求項10に記載のキット。
- 前記リガンドが、アダマンタンアミンまたはフェロセンメチルアミンであることを特徴とする請求項10に記載のキット。
- リガンドに結合された物質を分離及び精製する方法であって、
下記段階:
a)固相に結合された下記化学式(1):
(式中、n、X、A 1 及びA 2 は、それぞれ請求項1で定義された通りである。)
で表される化合物が静止相で充填された親和性クロマトグラフィー・カラムを提供する段階と、
b)リガンドに結合された物質を含む混合物を、前記カラムに提供する段階と、
c)前記カラムを洗浄液で洗浄する段階と、
d)移動相溶媒を前記カラムに提供し、リガンドに結合された物質を分離及び精製する段階
を含み、
前記物質が、生体分子、抗酸化剤、化学治療剤、抗ヒスタミン剤、ククルビトゥリル・デンドリマー、シクロデキストリン誘導体、クラウンエーテル誘導体、カリックスアレン誘導体、シクロファン誘導体、環状ペプチド誘導体、金属イオン、発色団、蛍光物質、リン光体、放射性物質及び触媒からなる群より選択され、ならびに
前記リガンドが、化学式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、かつ一つ以上のアミン基を有する、C 1 −C 20 アルキル基;C 2 −C 20 アルケニル基;C 2 −C 20 アルキニル基;C 1 −C 20 アルコキシ基;C 1 −C 20 アミノアルキル基;C 4 −C 20 シクロアルキル基;C 4 −C 7 ヘテロアリールシクロ基;C 6 −C 20 アリール基;C 5 −C 20 ヘテロアリール基;C1−C20アルキルシリル基;C6−C20アリール基;C5−C20ヘテロアリール基;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシクラムまたはクラウンエーテル;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するローダミン;及びC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択される
方法。 - 前記段階a)以前に、化学式(1)の化合物と固相とを結合する段階をさらに含むことを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記段階a)とb)との間に、前記リガンドと前記物質とを結合する段階をさらに含むことを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記移動相溶媒が、メタノール、トリフルオロ酢酸、トリエチルアミン、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、アセトニトリル、キシレン、クロロベンゼン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、エタノール、ジグリコールエーテル、シリコン、超臨界二酸化炭素、イオン液体、N−メチルピロリジン、ピリジン、水、水酸化アンモニウム、及びジオキサンからなる群より選択されることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記洗浄液が、メタノール、トリフルオロ酢酸、トリエチルアミン、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、アセトニトリル、キシレン、クロロベンジン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、エタノール、ジグリコールエーテル、シリコン、超臨界二酸化炭素、イオン液体、N−メチルピロリジン、ピリジン、水、水酸化アンモニウム、及びジオキサンからなる群より選択されることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 下記化学式(1):
(式中、n、X、A1及びA2は、それぞれ請求項1で定義された通りである。)
で表される化合物、または前記化合物に結合された物質を分離、及び精製する方法であって、
下記段階:
a)リガンドに結合された固相が静止相で充填された親和性クロマトグラフィ・カラムを提供する段階と、
b)化学式(1)の化合物または前記化合物に結合された物質を含む混合物を、前記カラムに提供する段階と、
c)前記カラムを洗浄液で洗浄する段階と、
d)移動相溶媒を前記カラムに提供し、化学式(1)の化合物または前記化合物に結合された物質を分離及び精製する段階
を含み、
前記物質が、生体分子、抗酸化剤、化学治療剤、抗ヒスタミン剤、ククルビトゥリル・デンドリマー、シクロデキストリン誘導体、クラウンエーテル誘導体、カリックスアレン誘導体、シクロファン誘導体、環状ペプチド誘導体、金属イオン、発色団、蛍光物質、リン光体、放射性物質、及び触媒からなる群より選択され、ならびに
前記リガンドが、化学式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、かつ一つ以上のアミン基を有する、C 1 −C 20 アルキル基;C 2 −C 20 アルケニル基;C 2 −C 20 アルキニル基;C 1 −C 20 アルコキシ基;C 1 −C 20 アミノアルキル基;C 4 −C 20 シクロアルキル基;C 4 −C 7 ヘテロアリールシクロ基;C 6 −C 20 アリール基;C 5 −C 20 ヘテロアリール基;C1−C20アルキルシリル基;C6−C20アリール基;C5−C20ヘテロアリール基;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシクラムまたはクラウンエーテル;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するローダミン;及びC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択される
方法。 - 前記段階a)以前に、リガンドと固相とを結合する段階をさらに含むことを特徴とする請求項18に記載の方法。
- 前記段階a)とb)との間に、化学式(1)の化合物と前記物質とを結合する段階をさらに含むことを特徴とする請求項18に記載の方法。
- 前記移動相溶媒が、メタノール、トリフルオロ酢酸、トリエチルアミン、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、アセトニトリル、キシレン、クロロベンゼン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、エタノール、ジグリコールエーテル、シリコン、超臨界二酸化炭素、イオン液体、N−メチルピロリジン、ピリジン、水、水酸化アンモニウム、及びジオキサンからなる群より選択されることを特徴とする請求項18に記載の方法。
- 前記洗浄液は、メタノール、トリフルオロ酢酸、トリエチルアミン、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、アセトニトリル、キシレン、クロロベンゼン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、エタノール、ジグリコールエーテル、シリコン、超臨界二酸化炭素、イオン液体、N−メチルピロリジン、ピリジン、水、水酸化アンモニウム、及びジオキサンからなる群より選択されることを特徴とする請求項18に記載の方法。
- 第1物質に結合された下記化学式(1):
(式中、n、X、A 1 及びA 2 は、それぞれ請求項1で定義された通りである。)
で表される化合物、及び第2物質に結合されたリガンドの結合体を含むセンサチップであって、
前記第1物質及び第2物質のうちの一つは固相であり、他の一つはヒスチジン、システインまたはトリプトファンを含む酵素、基質、基質類似物、サプレッサー、助酵素、抗体、抗原、ウイルス、細胞レクチン、多糖、糖蛋白、細胞表面受容体、核酸、相補塩基配列、ヒストン、核酸ポリメラーゼ、核酸結合蛋白質、ATP、ADP、ホルモン、ビタミン、受容体、担体蛋白質、グルタチオン、GST融合蛋白質、金属イオン、ポリHIS融合蛋白質、天然蛋白質及びその組合わせからなる群より選択され、ならびに
前記リガンドは、下記化学式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、かつ一つ以上のアミン基を有する、C 1 −C 20 アルキル基;C 2 −C 20 アルケニル基;C 2 −C 20 アルキニル基;C 1 −C 20 アルコキシ基;C 1 −C 20 アミノアルキル基;C 4 −C 20 シクロアルキル基;C 4 −C 7 ヘテロアリールシクロ基;C 6 −C 20 アリール基;C 5 −C 20 ヘテロアリール基;C 1 −C 20 アルキルシリル基;C 6 −C 20 アリール基;C 5 −C 20 ヘテロアリール基;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシクラムまたはクラウンエーテル;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するローダミン;及びC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択される、
センサチップ。 - 前記固相が、金薄膜、銀薄膜またはITOでコーティングされたガラスであることを特徴とする請求項23に記載のセンサチップ。
- 第1物質に結合された下記化学式(1):
(式中、n、X、A 1 及びA 2 は、それぞれ請求項1で定義された通りである。)
で表される化合物と第2物質に結合されたリガンドとからなる固体−触媒複合体であって、
前記第1物質及び第2物質のうちの一つは固相であり、他の一つは触媒であり、
前記リガンドは、化学式(1)の化合物と相互非共有結合を行うことができ、かつ一つ以上のアミン基を有する、C 1 −C 20 アルキル基;C 2 −C 20 アルケニル基;C 2 −C 20 アルキニル基;C 1 −C 20 アルコキシ基;C 1 −C 20 アミノアルキル基;C 4 −C 20 シクロアルキル基;C 4 −C 7 ヘテロアリールシクロ基;C 6 −C 20 アリール基;C 5 −C 20 ヘテロアリール基;C1−C20アルキルシリル基;C6−C20アリール基;C5−C20ヘテロアリール基;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアダマンタン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフェロセンまたはメタロセン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するカルボラン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するフラーレン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシクラムまたはクラウンエーテル;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有する酸素が保護されたアミノ酸;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するペプチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するアルカロイド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するシスプラチン;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するオリゴヌクレオチド;置換または非置換のC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するロダミン;及びC 1 −C 20 アルキル基、C 6 −C 20 アリール基またはC 5 −C 20 ヘテロアリール基を有するナノ粒子からなる群より選択される
固体−触媒複合体。 - 前記固相が、ポリマー、樹脂、磁性物質、シリカゲル、ポリマーまたは金でコーティングされたシリカゲル、ジルコニウム酸化物、モノリシックポリマー、ポリマーでコーティングされた磁性粒子、金薄膜、銀薄膜、ガラス、ITOでコーティングされたガラス、シリコン、金属電極、ナノロッド、ナノチューブ、ナノワイヤ、カードラン・ガム、セルロース、ナイロン膜、セファロース、及びセファデックスからなる群より選択されることを特徴とする、請求項25に記載の固体−触媒複合体。
- 前記固相が、ポリスチレン樹脂、またはポリマーでコーティングされたシリカゲルであることを特徴とする請求項26に記載の固体−触媒複合体。
- 前記触媒が、グラブス触媒、ラジカル開始剤またはその組合わせであることを特徴とする請求項25に記載の固体−触媒複合体。
- 前記触媒が、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペロキシダーゼ、プロテアーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ケラチナーゼ、還元酵素、酸化酵素、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルノニダーゼ及びその組合わせからなる群より選択される酵素であることを特徴とする、請求項25に記載の固体−触媒複合体。
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