JP4956721B2 - ペニシリン耐性B群連鎖球菌(GroupBstreptococcus)を識別する方法及び識別用キット - Google Patents
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Description
標準微生物学、第八版、p251、医学書院
[1]検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に、オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも1種の薬剤を点在させ、上記固体培地を培養し、培養後、上記薬剤の周囲に形成される阻止円の大きさの基準値との違いにより、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
[2]前記薬剤の少なくとも2種をそれぞれ点在させる[1]に記載の方法。
[3]前記薬剤の3種をそれぞれ点在させる[1]に記載の方法。
[4]前記薬剤は、前記薬剤を含有するディスクを用いて、固体培地の表面に点在させる[1]〜[3]のいずれかに記載の方法。
[5]オキサシリン、セフチゾキシム、またはセフチブテンを含有するディスクであって、検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に配置されて、ペニシリン耐性グループB群連鎖球菌(Group B streptococcus)識別に用いられるディスク。
[6]ストリップ状の基体にオキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンを、距離を置いて配置したことを特徴とするペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)識別用キット。
[7]前記薬剤がそれぞれディスクに含有されており、各薬剤を含有するディスクをストリップ状の基体に距離を置いて配置した、[6]または[7]に記載のキット。
[8]前記薬剤がストリップ状の基体に距離を置いて含浸されている、[6]または[7]に記載のキット。
[9]ストリップ状の基体の表面には、前記薬剤を配置した位置から所定の距離に、阻止円識別用のマークを有する[6]〜[8]のいずれかに記載のキット。
[10]阻止円識別用のマークを設ける位置は、阻止円の大きさの基準値に基づいて決定される[9]に記載のキット。
[11][5]〜[10]のいずれかに記載のキットを検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に置き、培養を行い、培養後、前記薬剤の周囲に形成される阻止円の大きさの基準値との違いにより、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
[12]オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも1種の薬剤を段階的に希釈して含有する複数の液体培地を用意し、各液体培地に、検出対象である菌を接種し、培養を行い、培養後、最小阻止濃度(MIC)の低下の有無および/または程度から、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
[13]最小阻止濃度(MIC)の低下が8倍以上である場合、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であると判定する、[12]に記載の方法。
さらに本発明の方法及びキットを用いることで、病院検査室でのペニシリン耐性B群連鎖球菌の識別も可能である。
本発明は、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法である。この方法は、検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に、オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも1種の薬剤を点在させ、上記固体培地を培養し、培養後、上記薬剤の周囲に形成される阻止円の大きさの基準値との違いにより、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌であるか否かを識別する。
培地の種類:トリプチックソイ羊血液寒天培地プレート
培養温度:37℃
培養時間:16〜20時間
本発明は、ペニシリン耐性グループB群連鎖球菌(Group B streptococcus)識別用キットも包含する。
本発明のキットは、ストリップ状の基体にオキサシリンク、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも2種の薬剤を、距離を置いて配置したものであることができる。
本発明のキットは、好ましくは、ストリップ状の基体にオキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンを、距離を置いて配置したものであることができる。
本発明は、微量液体希釈法を用いた、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法も包含する。微量液体希釈法を用いた識別方法では、オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる1種の薬剤を段階的に希釈して含有する複数の液体培地を用意し、各液体培地に、検出対象である菌を接種し、培養を行い、培養後、最小阻止濃度(MIC)の低下の有無および/または程度から、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌であるか否かを識別する。
ペニシリン耐性B群連鎖球菌の発生
背景:
B群連鎖球菌(GBS)であるストレプトコッカス・アガラクティエ(Streptococcus agalactiae)は、新生児髄膜炎及び敗血症の主要原因であり、また高齢患者に対する重要な病原体である。GBSは一様にペニシリン感受性であるので、ペニシリンはGBS感染の第一選択薬である。肺炎連鎖球菌とは異なり、ペニシリン耐性GBS(PRGBS)の発生はこれまで立証されていない。ここで本発明者らは、PRGBSの臨床的分離及び特性を検討した。さらに本発明者らは、ペニシリン抵抗性がPBP2X遺伝子の変化に起因することを解明した。
本発明者らは、14例のPRGBS臨床分離株を採取した(1995年から1998年まで9例、及び2005年に5例である(B1, B6, B7, B8, B10, B12, B40, B60, B68, B502, B503, B513, B514, B516)。ベータ・ラクタムの最小阻止濃度(MIC)を、CSLIが推奨する寒天希釈法によって定量した。抵抗性のメカニズムの明白な根拠を示すため、分子分析及び生化学的分析を実施した。
MIC測定により、GBS臨床分離株がある種のペニシリン系及びセファロスポリン系に非感受性であることが明らかになった。これらの菌株は、PBP2X遺伝子の保存された活性部位配列に隣接して、いくつかの点突然変異を有する。これらの変化したPBP2Xのペニシリン結合量が減少したことが、蛍光基を結合したペニシリンによって示された。さらに本発明者らは、PBP2Xに対して上昇する抗血清を用いたウエスタンブロットにより、PBP2Xタンパク質の量が減少したことを示す。ペニシリン感受性株へのPRGBS由来のPBP2X遺伝子の導入により、ペニシリン耐性レベルが上昇したが、このことにより、これらの変化したPBP2Xが、PRGBSにおけるペニシリン非感受性(の発生)に十分であることが示される。
本発明者らは、PRGBSの臨床的菌株を分離し、変化したPBP2X遺伝子がペニシリン耐性レベルの上昇の主な原因であることを最初に示した。これらの菌株の発生は、GBS感染の臨床的療法に強い衝撃を与えるものである。
トリプチックソイ羊血液寒天培地プレートから得たコロニーを、2mlのトッド・ヒューウィット培地に接種し、37℃で一晩インキュベーションした。被験生物を一晩培養したトッド・ヒューウィット培地から綿球で取り、トリプチックソイ羊血液寒天培地プレート上に接種した。オキサシリン(1μg力価)、セフチゾキシム(30μg力価)及びセフチブテン(30μg力価)のディスクを、それぞれ各プレート上に置いた。空気中、37℃で20時間インキュベーションした後、阻止円を測定した。結果を図2〜4に示す。これらの結果から、オキサシリン、セフチゾキシム及びセフチブテンを用いることで、ペニシリン耐性B群連鎖球菌とペニシリン感受性B群連鎖球菌とを識別することができることが分かる。ペニシリン耐性B群連鎖球菌は、上記参考例に記載した14株である。ペニシリン感受性B群連鎖球菌は、ATCC BAA-611及びATCC 12403である。
Claims (13)
- 検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に、オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも1種の薬剤を点在させ、上記固体培地を培養し、培養後、上記薬剤の周囲に形成される阻止円の大きさの基準値との違いにより、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
- 前記薬剤の少なくとも2種をそれぞれ点在させる請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤の3種をそれぞれ点在させる請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤は、前記薬剤を含有するディスクを用いて、固体培地の表面に点在させる請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- オキサシリン、セフチゾキシム、またはセフチブテンを含有するディスクであって、検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に配置されて、ペニシリン耐性グループB群連鎖球菌(Group B streptococcus)識別に用いられるディスク。
- ストリップ状の基体にオキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンを、距離を置いて配置したことを特徴とするペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)識別用キット。
- 前記薬剤がそれぞれディスクに含有されており、各薬剤を含有するディスクをストリップ状の基体に距離を置いて配置した、請求項6に記載のキット。
- 前記薬剤がストリップ状の基体に距離を置いて含浸されている、請求項6または7に記載のキット。
- ストリップ状の基体の表面には、前記薬剤を配置した位置から所定の距離に、阻止円識別用のマークを有する請求項6〜8のいずれか1項に記載のキット。
- 阻止円識別用のマークを設ける位置は、阻止円の大きさの基準値に基づいて決定される請求項9に記載のキット。
- 請求項6〜10のいずれか1項に記載のキットを検出対象である菌が塗布された固体培地の表面に置き、培養を行い、培養後、前記薬剤の周囲に形成される阻止円の大きさの基準値との違いにより、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
- オキサシリン、セフチゾキシム、およびセフチブテンから成る群から選ばれる少なくとも1種の薬剤を段階的に希釈して含有する複数の液体培地を用意し、各液体培地に、検出対象である菌を接種し、培養を行い、培養後、最小阻止濃度(MIC)の低下の有無および/または程度から、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であるか否かを識別する方法。
- 最小阻止濃度(MIC)の低下が8倍以上である場合、検出対象である菌がペニシリン耐性B群連鎖球菌(Group B streptococcus)であると判定する、請求項12に記載の方法。
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