JP4945444B2 - Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド - Google Patents
Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP4945444B2 JP4945444B2 JP2007523424A JP2007523424A JP4945444B2 JP 4945444 B2 JP4945444 B2 JP 4945444B2 JP 2007523424 A JP2007523424 A JP 2007523424A JP 2007523424 A JP2007523424 A JP 2007523424A JP 4945444 B2 JP4945444 B2 JP 4945444B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- hla
- prostate cancer
- prostate
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 169
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 title claims description 69
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 title claims description 69
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 title claims description 40
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 title claims description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 17
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 title claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 11
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 title claims description 8
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 title claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 73
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 51
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 31
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 30
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 26
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 23
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 23
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 20
- 108010036972 HLA-A11 Antigen Proteins 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 108010026122 HLA-A*33 antigen Proteins 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 108010018475 HLA-A31 antigen Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical group NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009167 androgen deprivation therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 229940125667 peptide vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Greenlee RT, Murray T, Bolden S, Wingo PA.. Cancer statistics, 2000. CA Cancer J Clin 2000;50:7-33. Renkvist N. Castelli C, Robbins PF, Parmiani G. A listing of human tumor antigens recognized by T cells. Cancer Immunol Immunother 2001;50:3-15. Correale P, Walmsley K, NIeroda C, et al. In vitro generation of human cytotoxic T lymphocytes specific for peptides derived from prostate-specific antigen. J Natl Cancer Inst 1997;89:293-300. Xue BH, Zhang Y, Sosman J, Peace DJ. Induction of human cytotoxic T lymphocytes specific for prostate-specific antigen. Prostate 1997;30:73-78. Correale P, Walmsley K, Zaremba S, Zhu MZ, Schlom J, Tsang KY. Generation of human cytotoxic T lymphocyte lines directed against prostate-specific (PSA) employing a PSA oligoepitope peptide. J Immunol 1998;161:3186-94. Horiguchi Y, Nukaya I, Okazawa K, et al. Screening of HLA-A24-restricted epitope peptides from prostate-specific membrane antigen that induce specific antitumor cytotoxic T lymphosytes. Clin Cancer Res 2002;8:3885-92. Tjoa B, Kenny G, Ragde H, Misrock SL, Murphy G. Presentation of prostate tumor antigens by dendritic cells stimulates T-cell proliferation and cytotoxicity. Prostate 1996;28:65-9. Inoue Y, Takaue Y, Takei M, et al. Induction of tumor specific cytotoxic T lymphocytes in prostate cancer using prostatic acid phosphatase derived HLA-A2402 bindin peptide. J Urol 2001;166:1508-13. Peshwa MV, Shi JD, Ruegg C, Laus R, van Schooten WC. Induction of prostate tumor-specific CD8+ cytotoxic T-pymphocytes in vitro usin antigen-presenting cells pulsed with prostatic acid phosphatase peptide. Prostate 1998;36:129-38. Dannull J, Diener PA, Prikler L, et al. Prostate stem cell antigen is a promising candidate for immunotherapy of advanced prostate cancer Cancer Res 2001;60:5522-8. Matsueda S, Kobayashi K, Nonaka Y, Noguchi M, Itoh K, Harada M. Identification of new prostate stem cell antigen-derived peptides immunogenic in HLA-A2(+) patients with hormone-refractory prostate cancer. Cancer Immunol Immunother 2004;53:479-89. Matsueda S, Yao A, Ishihara Y, et al. A prostate stem cell antigen-derived peptide immunogenic in HLA-A24+ prostate cancer patients. Prostate 2004;60:205-13. Harada M, Noguchi M, Itoh K. Target molecules in specific immunotherapy against prostate cancer. Int J Clin Oncol 2003; 8:193-9. Sette, A., and Sidney, J. Ninemajor HLA class I supertypes account for the vast preponderance of HLA-A and B polymorphism. Immunogenetics, 50:201-212, 1999.
1. 方法
1.1 患者
HLA-A3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者(HLA-A11陽性(n = 5)、-A31陽性(n = 5)および-A33陽性(n = 5))より事前の文書による承諾を得てPBMCを得た。HLA-A3陽性または-A68.1陽性患者は日本人においては極めて頻度が低いため(1.6%および0.5%)(Aizawa M. The Proceedings of the 3rd Asia-Oceania Histocompaatibility Workshop Conference, pp. 1090-1103. Oxford: Oxford University Press, 1986.)、それら由来のPBMCは入手できなかった。PBMCを採取した患者はいずれもHIV非感染であった。末梢血20mlを採取し、フィコール・コンレイ比重遠心法によりPBMCを調製した。試料は全て実験で使用するまで低温にて保存した。癌患者PBMC上のHLA-A11、-A31および-A33分子の発現は、以下の抗体を用いてフローサイトメトリーにより確認した:抗HLA-A11モノクローナル抗体(mAb)(Cat# 0284HA; One Lambda Inc., Canoga, CA, USA);抗HLA-A31 mAb (Cat# 0273HA; One Lambda);抗HLA-A33 mAb (Cat# 0612HA; One Lambda)。なお、本試験開始に当たっては、久留米大学の医療に関する倫理委員会の承認を得て行った。
CIRは、HLAクラスI分子の遺伝子導入に適したBリンパ芽球様細胞株である(CRL-1993)。C1R-A11、-A31および-A33は、それぞれHLA-A1101、-A3101および-A3303遺伝子を安定に発現する亜細胞株であり、これら亜細胞株上のHLA-A11、-A31および-A33分子の発現は以前に報告している(Takedatsu H, Shichijo S, Katagiri K, Sawamizu H, Sata M, Itoh K., Clinical Cancer Reseach 2004;10:1112-20.)。LNCaPはHLA-A*0201陽性前立腺癌細胞株である(CRL-1740)。HLA-A11、-A31および-A33分子をそれぞれ発現するLNCaP亜細胞株を製造するため、既報の方法により、HLA-A1101、-A3101または-A3303プラスミドcDNAを真核細胞発現ベクターであるpCR3.1(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)に挿入した(Yang D, Nakao M, Shichijo S, et al., Cancer Res 1999;59:4056-63.)。ジーン・パルサー(Bio RAD, Richmond, CA, USA)を用いてエレクトロポレーションを行った。LNCaP-A11、-A31および-A33が、それぞれHLA-A1101、-A3101および-A3303遺伝子を安定に発現する亜細胞株である(図1)。これら細胞株は全て10%FCS含有RPMI 1640(Invitrogen)で培養した。
ペプチド反応性CTLは既報の方法に一部変更を加えて検出した(Hida N, Maeda Y, Katagiri K, Takasu H, Harada M, Itoh K., Cancer Immunol Immunother 2002;51:219-28.)。PBMCをin vitroにてPSA、PAPおよびPSMA由来ペプチドまたは対照ペプチドで刺激して、対応ペプチドをパルスしたC1R-A11、C1R-A31またはC1RA33細胞に応答して産生されるIFN-γを測定した。詳細には、U底96ウェルマイクロカルチャープレート(Nunc, Roskilde, Denmark)において培養液200μl中で、PBMC(1 x 105 細胞/ウェル)を各ペプチド(10μl/ml)とquadruplicate(4ウェル一組)にてインキュベートした。本培養液は45% RPMI 1640、45% AIM-V培地(Gibco-BRL, Gaithersburg, MD)、10% FCS、100 U/ml インターロイキン-2(IL-2)および0.1mM MEM 非必須アミノ酸溶液(Gibco-BRL)より構成された。3日毎に培養液の半分を除去して対応ペプチド(10μg/ml)を含む新しい培養液と交換した。培養15日目に、対応ペプチドをパルスしたC1R-A11、-A31または-A33細胞で培養細胞の半分を刺激し、残りの半分は対照ペプチドであるHIVペプチドをパルスしたC1R-A11、-A31または-A33細胞と培養した。18時間インキュベートした後上清を回収し、インターフェロン(IFN)-γのレベルを酵素結合免疫測定法(ELISA)により測定した。ペプチド反応性CTLの誘導は、P値が0.05未満であり、かつHIVペプチドをパルスした細胞と比較して対応ペプチドをパルスした細胞に応答して50 pg/mlを超えるIFN-γが産生された場合に陽性と判断した。
HLA-A3、-A11、-A31、-A33および-A68.1分子に対する結合モチーフに基づき、42種類の前立腺関連蛋白由来ペプチド(PSA由来ペプチド10種類、PAP由来ペプチド12種類およびPSMA由来ペプチド20種類)を調製した(Parker KC, Bednarek MA, Cokigan JE., J Immunol 1994;152:163-75.)。これら5種類のHLA-Aアレルは結合モチーフを共有するがHLA-A3またはHLA-A68.1陽性の日本人は非常に稀なことから、本研究ではHLA-A11、-A31および-A33分子に対する結合能を検討した。各ペプチドのアミノ酸配列は表1に示す。
LNCaP、LNCaP-A11、LNCaP-A31またはLNCaP-A33に対するペプチド刺激PBMCの細胞傷害活性は、標準的6時間51Cr放出測定法により測定した。フィトヘマグルチニン(PHA)活性化T細胞を陰性対照細胞として使用した。丸底96ウェルプレートにおいて各ウェルにつき2000個の51Cr標識細胞を、示したエフェクター細胞/標的細胞の比率でエフェクター細胞とともに培養した。細胞傷害活性測定実験の直前にCD8陽性T細胞を CD8 Positive Isolation Kit (Dynal, Oslo, Norway)により単離した。特異的51Cr放出は、試験におけるc.p.m.から自然放出によるc.p.m.を差し引いて計算した。エフェクター細胞なしでインキュベートした試料の上清より自然放出を決定し、その後試料を1% Triton X(Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan)とインキュベートして全放出を決定した。抗体による阻害実験では、培養開始時にウェルに10μg/mlの抗HLAクラスI mAb(W6/32:マウスIgG2a)、抗クラスII(HLA-DR) mAb(L243:マウスIgG2a)または抗CD14 mAb(H14:マウスIgG2a)を添加した。
ペプチド反応性CTLの特異性は、コールド標的細胞による阻害実験により確認した。詳細には、丸底96ウェルプレートにおいて51Cr標識標的細胞(2 x 103 細胞/ウェル)をコールド標的細胞(2 x 104 細胞)の存在下エフェクター細胞(2 x 104 細胞/ウェル)とともに培養した。対応ペプチドまたHIVペプチドのいずれかでパルスしたC1R-A11、-A31および-A33をコールド標的細胞として使用した。
血漿中のペプチド特異的IgGのレベルは、既報のようにしてELISAにより測定した(Nakatsura T, Senju S, Ito M, Nishimura Y, Itoh K., Eur J Immunol 2002;32:826-36.)。詳細には、20μg/ウェルの濃度でペプチドを固相化したプレートをBlock Ace (Yukijirushi, Tokyo, Japan)でブロッキングし、0.05% Tween-20- Block Aceで希釈した血漿試料(100μl/ウェル)をプレートに添加した。4℃で24時間インキュベートした後プレートを洗浄し、1:1000希釈のウサギ抗ヒトIgG(γ鎖特異的)(Dako, Glostrup, Denmark)とともにさらに2時間インキュベートした。プレートを洗浄し、1:100希釈のヤギ抗ウサギIgG結合西洋ワサビペルオキシダーゼ(En Vision; Dako)(100μl)を各ウェルに添加し、プレートを室温で40分間インキュベートした。プレートを再び洗浄した後テトラメチルベンジジン基質溶液(KPL, Guildford, UK)(100μl/ウェル)を添加し、その後1M リン酸を添加して反応を停止させた。段階希釈した各試料の吸光度(OD値)を比較してペプチド反応性IgGレベルを評価した。値はOD U/mlで示す。1:100希釈の血漿のOD値がコントロールであるHIV ペプチドに対するIgGについてのOD値の平均+3SDを超える場合に、対応ペプチドに反応するIgGが陽性であると判断した。ペプチド反応性IgGの特異性を確認するため、ペプチドを固相化したプレートで試料を培養し、上清中のペプチド特異的IgGのレベルをELISAにより測定した。
データの統計学的有意差は、両側スチューデントt検定により決定した。0.05未満のP値を統計学的に有意であると判断した。
2.1 PSA、PAPおよびPSMA由来ペプチドに反応するIgGの検出
はじめに、42種類の前立腺関連蛋白由来ペプチドが前立腺癌患者のIgGによって認識されるかについて検討した。CTL誘導能を調べるin vitro感作実験を多数のペプチドを用いて行うことは困難であり、また、CTL誘導ペプチドに反応するIgGは幾つかのタイプの癌患者の血漿中に高頻度に検出されることから、我々ははじめにこのスクリーニングを行った。結果は表2に示す。
癌患者のIgGに高頻度に認識される候補ペプチドが、HLA-A11陽性、-A31陽性および−A33陽性前立腺癌患者のPBMCからペプチド反応性CTLを誘導できるかについて検討した。IgGに認識される頻度が低い陰性対照として、PSA 36-45、PAP 19-28およびPSMA 199-207ペプチドを使用した。陽性であった結果を表3に示す。
PSA 16-24、PAP 155-163、PAP 248-257、PSMA 207-215およびPSMA 431-440ペプチドによるin vitro刺激によって誘導されたCTLが前立腺癌細胞に対して細胞傷害活性を示しうるか否かについて検討した。HLA-A11陽性患者2人(#9および#13)、HLA-A11陽性健常人1人(#14)、HLA-A31陽性患者1人(#22)およびHLA-A33陽性患者3人(#14、#15および#19)に由来するPBMCを上記ペプチドで刺激し、これらの患者由来のペプチド反応性CTLがHLA-A11、HLA-A31およびHLA-A33分子を発現する前立腺癌細胞に対して細胞傷害活性を示しうるかについて検討した。結果は図3に示す。PSA 16-24、PAP 155-163、PAP 248-257、PSMA 207-215およびPSMA 431-440ペプチドのそれぞれによりin vitroにおいて刺激したHLA-A11陽性患者および健常人由来のPBMCは、LNCaP-A11細胞に対してLNCaP細胞およびHLA-A11陽性T芽球化細胞に対してよりも高レベルな細胞傷害活性を示した。同様に、これらペプチドはHLA-A31陽性患者およびHLA-A33陽性患者のPBMCから前立腺癌反応性CTLを誘導する能力を有していた。以上の結果は、PSA 16-24、PAP 155-163、PAP 248-257、PSMA 207-215またはPSMA 431-440ペプチドによりin vitroにおいて刺激したPBMCは、HLA-A11、-A31あるいは-A33拘束性に前立腺癌細胞に対して細胞傷害活性を示しうることを示唆する。
ペプチド刺激PBMCの細胞傷害活性に関与する細胞の同定を試みた。図4に示すように、PSA 16-24、PAP 155-163、PAP 248-257、PSMA 207-215またはPSMA 431-440 ペプチドで刺激したHLA-A11陽性患者(#9および#13)、HLA-A11陽性健常人(#10および#14)、HLA-A31陽性患者(#22)およびHLA-A33陽性患者(#19および#14)由来のCD8陽性T細胞の細胞傷害活性は、抗HLAクラスI mAbの添加により有意に阻害されたが、抗HLAクラスII mAb (HLA-DR)またはアイソタイプ適合対照抗体として用いた抗CD14 mAbの添加によっては阻害されなかった。この結果は、前立腺癌細胞に対するペプチド刺激PBMCの細胞傷害活性が、HLAクラスI拘束性CD8陽性T細胞に依存することを示唆する。
あるHLA-A3スーパータイプアレル分子陽性のペプチド刺激PBMCが、他のHLA-A3スーパータイプアレルを発現する前立腺癌細胞に対して細胞傷害活性を示すかについて検討した。図6に示すように、in vitroにおいてPSA 16-24ペプチドで刺激した患者#9(HLA-A11陽性)由来のPBMC、PAP 155-163ペプチドで刺激した患者#2(HLA-A31陽性)由来のPBMC、およびPAP 248-257ペプチドで刺激した患者#22(HLA-A33陽性)由来のPBMCは、LNCaP-A11、LNCaP-A31およびLNCaP-A33細胞のいずれに対してもLNCaP細胞と比較して高レベルな細胞傷害活性を示した。PHA刺激T芽球化細胞に対する細胞傷害活性は観察されなかった。これらの結果は、本発明のペプチドで刺激したPBMCがHLA-A3スーパータイプに属するHLA分子を有する前立腺癌細胞に対して細胞傷害活性を発揮することを示している。即ち本発明のペプチドは、HLA-A3スーパータイプの種類によらず、HLA-A3スーパータイプアレル分子陽性の患者に広く使用できると言える。
Claims (11)
- 配列番号4、15または22のいずれかに示すアミノ酸配列からなるペプチド。
- 請求項1記載のペプチドをコードする核酸分子。
- 請求項2記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項1記載のペプチドまたは請求項3記載のベクターを含む、前立腺癌を処置または予防するための医薬組成物。
- 癌ワクチンである、請求項4記載の医薬組成物。
- HLA-A3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者より採取された末梢血単核細胞を請求項1記載のペプチドと接触させることを含む、前立腺癌反応性細胞傷害性T細胞を誘導する方法。
- 請求項6記載の方法により誘導された細胞傷害性T細胞。
- 請求項1記載のペプチドを含む、前立腺癌反応性細胞傷害性T細胞を誘導するためのキット。
- HLA-A3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者から採取された抗原提示能を有する細胞に、請求項1記載のペプチドを取り込ませるか、または請求項3記載のベクターを導入することを含む、前立腺関連蛋白由来ペプチドとHLA-A3スーパータイプアレル分子との複合体を細胞表面に提示する抗原提示細胞を調製する方法。
- 請求項9記載の方法により調製された抗原提示細胞。
- 請求項1記載のペプチドまたは請求項3記載のベクターを含む、前立腺関連蛋白由来ペプチドとHLA-A3スーパータイプアレル分子との複合体を細胞表面に提示する抗原提示細胞を調製するためのキット。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007523424A JP4945444B2 (ja) | 2005-06-29 | 2006-06-22 | Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005190105 | 2005-06-29 | ||
JP2005190105 | 2005-06-29 | ||
PCT/JP2006/312538 WO2007000935A1 (ja) | 2005-06-29 | 2006-06-22 | Hla-a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド |
JP2007523424A JP4945444B2 (ja) | 2005-06-29 | 2006-06-22 | Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2007000935A1 JPWO2007000935A1 (ja) | 2009-01-22 |
JP4945444B2 true JP4945444B2 (ja) | 2012-06-06 |
Family
ID=37595188
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007523424A Expired - Fee Related JP4945444B2 (ja) | 2005-06-29 | 2006-06-22 | Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20100184699A1 (ja) |
EP (1) | EP1908826A4 (ja) |
JP (1) | JP4945444B2 (ja) |
CA (1) | CA2617222A1 (ja) |
WO (1) | WO2007000935A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050215472A1 (en) | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
EP3184539A3 (en) | 2001-10-23 | 2017-09-13 | PSMA Development Company L.L.C. | Psma antibodies |
KR101294514B1 (ko) * | 2007-09-18 | 2013-08-12 | 가부시키가이샤 그린 펩티드 | Ctl 유도제 조성물 |
JP6918333B2 (ja) * | 2014-09-17 | 2021-08-11 | 学校法人近畿大学 | 細胞性免疫に認識されるペプチド、及びそれを利用した医薬薬剤 |
JP6784964B2 (ja) * | 2014-09-26 | 2020-11-18 | 学校法人近畿大学 | Hla−a3スーパータイプアレル陽性の前立腺癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なezh2由来ペプチド |
CN112852748B (zh) * | 2020-04-16 | 2023-11-21 | 成都仕康美生物科技有限公司 | 靶向HLA-A的嵌合抗原受体、编码基因、CAR-Tregs细胞及其制备方法、用途 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005509404A (ja) * | 2001-04-06 | 2005-04-14 | マンカインド コーポレイション | エピトープ配列 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7252824B2 (en) * | 2001-03-07 | 2007-08-07 | Mannkind Corporation | Anti-neovasculature preparations for cancer |
JP2004000216A (ja) * | 2002-04-26 | 2004-01-08 | Kyogo Ito | 腫瘍抗原 |
-
2006
- 2006-06-22 JP JP2007523424A patent/JP4945444B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-22 CA CA002617222A patent/CA2617222A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-22 US US11/988,042 patent/US20100184699A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-22 WO PCT/JP2006/312538 patent/WO2007000935A1/ja active Application Filing
- 2006-06-22 EP EP06767196A patent/EP1908826A4/en not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005509404A (ja) * | 2001-04-06 | 2005-04-14 | マンカインド コーポレイション | エピトープ配列 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20100184699A1 (en) | 2010-07-22 |
EP1908826A1 (en) | 2008-04-09 |
CA2617222A1 (en) | 2007-01-04 |
EP1908826A4 (en) | 2010-06-02 |
JPWO2007000935A1 (ja) | 2009-01-22 |
WO2007000935A1 (ja) | 2007-01-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2721574C2 (ru) | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли | |
JP5393144B2 (ja) | Hla−a*3303拘束性wt1ペプチド、およびそれを含む医薬組成物 | |
KR101610353B1 (ko) | Cdca1 펩티드 및 이를 포함하는 약학적 조성물 | |
JP5087925B2 (ja) | 新規癌抗原ペプチド及びその用途 | |
JP5114403B2 (ja) | Hla−a3スーパータイプアレル陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なsart3由来ペプチド | |
JP4900884B2 (ja) | 腫瘍抗原 | |
JP2008514208A (ja) | ヒト腫瘍抗原からの免疫原性tヘルパーエピトープおよび前記エピトープを使用する免疫療法の方法 | |
JP4945444B2 (ja) | Hla−a3スーパータイプアレル分子陽性前立腺癌患者に対する癌ワクチン候補となる前立腺関連蛋白由来ペプチド | |
JP4972691B2 (ja) | HLA−A3スーパータイプアレル陽性癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なLck由来ペプチド | |
JP5065273B2 (ja) | Hla−a24分子結合性kif由来ペプチド | |
Yokokawa et al. | Identification of cytotoxic T‐lymphocyte epitope (s) and its agonist epitope (s) of a novel target for vaccine therapy (PAGE4) | |
JP4925033B2 (ja) | ストレス誘導抗アポトーシス分子(iex−1)由来ペプチド | |
Morishita et al. | HLA‐DRB1* 0410‐Restricted Recognition of XAGE‐1b37‐48 Peptide by CD4 T Cells | |
JP6784964B2 (ja) | Hla−a3スーパータイプアレル陽性の前立腺癌患者に対する癌ワクチン療法に有用なezh2由来ペプチド | |
JPWO2003008450A1 (ja) | 腫瘍抗原 | |
US9394352B2 (en) | Immunogenic POTE peptides and methods of use | |
US20040053391A1 (en) | Renal cell carcinoma-antigen G250-derived peptides that elicit both CD4+ and CD8+ T-cell responses | |
AU2002300986A1 (en) | Renal Cell Carcinoma-Antigen G250-derived Peptides that elicit both CD4+ and CD8+T-cell Responses | |
JP2008260689A (ja) | Hla−a24分子結合性副甲状腺ホルモン関連蛋白由来ペプチドを含有する医薬組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090602 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090602 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111025 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120207 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120305 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4945444 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150309 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |