JP4929458B2 - 熱ショックタンパク質hsp60の分離方法 - Google Patents
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Description
(1)細菌のスフェロプラストを1.5%〜5%の塩溶液中で撹拌処理することを含む、ペリプラズム局在熱ショックタンパク質HSP60の分離方法。
(6)40℃〜45℃の温度下で培養した細菌を使用することを特徴とする、(1)又は(3)記載の方法。
本発明に係るHSP60の分離方法(以下、単に「本発明に係る分離方法」という)により、細菌のペリプラズムからHSP60を分離することができる。
〔実施例1〕大腸菌におけるHSP60のペリプラズム局在の確認及び分離精製
本実施例では、大腸菌において、HSP60がペリプラズムに局在することの確認及び分離精製を行った。
本実施例では、大腸菌のHSP60が熱ショックにより誘導されることを確認した。大腸菌 E.coli B株を、30℃又は45℃で培養したこと以外は、実施例1に記載の方法と同様の方法で撹拌後の上清の濃縮サンプルを調製し、SDS-PAGEに供した。結果を図5に示す。
本発明者は、既にスパイロソームが細菌のペリプラズム内に存在することを見出し、その分離精製方法に関して出願した(特願2005-224021号)。そこで、スパイロソームとHSP60とを個別に分離精製できるか否かを検討した。
本実施例では、HSP60のネガティブ染色による電子顕微鏡観察を行った。
Claims (9)
- (a) 細菌のスフェロプラストを1.5%〜5%の塩溶液中で撹拌処理することで、溶液中に熱ショックタンパク質HSP60を遊離する工程と、
(b) 工程(a)で得られた溶液を固液分離手段に供することで、液相中に熱ショックタンパク質HSP60を分離する工程と、
(c) 工程(b)で得られた液相をタンパク質精製手段に供し、該液相から熱ショックタンパク質HSP60を分離精製する工程と、
を含む、ペリプラズム局在熱ショックタンパク質HSP60の分離方法。 - 上記スフェロプラストが、細菌を細胞壁分解酵素で処理することによって得られるものであることを特徴する、請求項1記載の方法。
- 工程(a)の前に、細菌を細胞壁分解酵素で処理することで、スフェロプラストを形成する工程を含む、請求項1記載の方法。
- 上記細胞壁分解酵素がリゾチームであることを特徴とする、請求項2又は3記載の方法。
- 上記固液分離手段が、遠心分離、濾過及び吸着から成る群から選択されるものであることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか1項記載の方法。
- 工程(c)が、工程(b)で得られた液相を10000〜40000rpmでの遠心分離に供することを含む、請求項1〜5のいずれか1項記載の方法。
- 上記細菌が大腸菌であることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項記載の方法。
- 40℃〜45℃の温度下で培養した細菌を使用することを特徴とする、請求項1〜7のいずれか1項記載の方法。
- 上記塩溶液が塩化ナトリウム溶液であることを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1項記載の方法。
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