JP4723384B2 - 動物血中の白血球の分類方法及び試薬 - Google Patents
動物血中の白血球の分類方法及び試薬 Download PDFInfo
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Description
アルキルジメチルエチルアンモニウム塩と、アンモニウム塩を溶解する水系溶媒と、を含むことを特徴とする動物血中の白血球の分類試薬を提供する。
ラウリルトリメチルアンモニウムクロライド 7.9g/L(30mM)
ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド 0.84g/L(2,4mM)
塩化ナトリウム 4.13g
コハク酸 3.0g
EDTA-2K 2.5g
水酸化ナトリウム 1.55g
精製水 1L
pH5.3
(1) 測定用試料中の赤血球を十分に溶解する濃度。
(2) 大きさに基づいて、白血球を、リンパ球を含む第1の集団、好中球及び単球を含む第2の集団及び好酸球を含む第3の集団、の3つの亜集団に分類可能とするように白血球を収縮させる濃度。
具体的に、四級アンモニウム塩の濃度としては、赤血球を十分に溶解するために1.5mM以上にすることが好ましい。また、白血球を上述したように分類するために20mM以下にすることが好ましく、14.5mM以下にすることがより好ましい。
前記溶血剤1の組成について、四級アンモニウム塩の濃度や組み合わせやが異なる溶血剤2〜6を調製し、各溶血剤を用いてイヌやネコの白血球を測定した。使用した四級アンモニウム塩は以下の通りである。
・デカントリメチルアンモニウムブロマイド(DTAB):アルキル基の炭素数は10
・ラウリルトリメチルアンモニウムクロライド(LTAC):アルキル基の炭素数は12
・ミリスチルトリメチルアンモニウムブロマイド(MTAB):アルキル基の炭素数は14
・ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド(STAC):アルキル基の炭素数は18
アルキルジメチルエチルアンモニウム塩
・セチルジメチルエチルアンモニウムブロマイド(CDMEB):アルキル基の炭素数は16
非イオン性界面活性剤を添加した以下の組成の溶血剤7を用いて、イヌ及びネコの血液試料を測定した。溶血剤7には、非イオン性界面活性剤としてエマルジット9(第一工業製薬(株))が含有されている。エマルジット9は、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル型の非イオン性界面活性剤であり、HLB17〜20の非イオン性界面活性剤に該当する。
カチオン-AB 2.16g
(日本油脂(株)、ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド23%含有)
ラウリルトリメチルアンモニウムクロライド 2.39g
セチルジメチルアンモニウムブロマイド 0.2g
ミリスチルトリメチルアンモニウムブロマイド 0.2g
エマルジット9 1.0g
(第一工業製薬(株)、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル)
塩化ナトリウム 4.13g
コハク酸 3.0g
EDTA-2K・2H2O 2.5g
水酸化ナトリウム 1.55g
亜硝酸ナトリウム 0.69g
精製水 1L
pH5.3、浸透圧280mmol/kg
イヌの血液試料を測定した場合の粒度分布の一例を図11に示す。図11において、一番左の集団は溶血した赤血球の集団である。次いで、大きさの小さい方から第1の集団(小型白血球)、第2の集団(中型白血球)、第3の集団(大型白血球)である。
ネコの血液試料を測定した場合の粒度分布の一例を図22に示す。図22において、一番左の集団は溶血した赤血球の集団である。次いで、大きさの小さい方から第1の集団(小型白血球)、第2の集団(中型白血球)、第3の集団(大型白血球)である。
イヌの血液試料及びネコの血液試料について、溶血剤7と、従来品であるストマトライザ-WH(シスメックス株式会社)とを用いて、pocH-100iVでヘモグロビン濃度の測定を行って比較したところ、相関は良好であった。これより、溶血剤7でヘモグロビン濃度の測定が可能であることが確認できた。
Claims (17)
- イヌ科又はネコ科の血液試料と、溶血剤を混合して前記血液試料中の赤血球を溶解し、白血球を収縮させて測定用試料を調製する工程、
前記測定試料中の白血球の大きさに関係する情報を測定する工程、
測定された情報に基づいて、前記白血球を、リンパ球を含む第1の集団、好中球及び単球を含む第2の集団及び好酸球を含む第3の集団に分類する工程、を含み、
前記溶血剤が、
炭素数10〜12のアルキル基を有する第1のアルキルトリメチルアンモニウム塩と、
炭素数16〜18のアルキル基を有する第2のアルキルトリメチルアンモニウム塩と、
アルキルジメチルエチルアンモニウム塩と、
を含有することを特徴とする、動物血中の白血球の分類方法。 - 測定試料中の白血球の大きさに関係する情報を測定する工程において、電気抵抗法により、測定用試料中の白血球の大きさに関係する情報を測定する請求項1に記載の方法。
- 測定用試料を調製する工程において、白血球を、収縮後の大きさが、小さい方からリンパ球、好中球及び単球、好酸球、となるように収縮させる請求項1又は2に記載の方法。
- 前記の集団は、白血球の大きさに関係する情報の小さい方から、第1の集団、第2の集団、第3の集団である請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記溶血剤に含まれるアンモニウム塩の濃度が、
(1)赤血球を十分に溶解する、
(2)大きさに基づいて、白血球を前記第1の集団、前記第2の集団、前記第3の集団に分類可能とするように白血球を収縮させる、
という条件を満たす濃度である請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。 - 前記アンモニウム塩の濃度が1.5mM〜20mMである請求項5に記載の方法。
- 前記第1のアルキルトリメチルアンモニウム塩は、ラウリルトリメチルアンモニウム塩から選択され、前記第2のアルキルトリメチルアンモニウム塩は、ステアリルトリメチルアンモニウム塩及びセチルトリメチルアンモニウム塩からなる群より選択される請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ラウリルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、8〜20mMであり、前記ステアリルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、0.4〜2mMであり、前記セチルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、1.5〜3mMである請求項7に記載の方法。
- 前記溶血剤が、さらにミリスチルトリメチルアンモニウム塩を含有する請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記溶血剤が、さらにHydrophilic-Lipophilic-Balance(HBL)17〜20の非イオン性界面活性剤を含有する請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記溶血剤のpHが4〜9である請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- イヌ科又はネコ科の血液試料中の白血球を、リンパ球を含む第1の集団、好中球及び単球を含む第2の集団及び好酸球を含む第3の集団に分類するための試薬であって、
炭素数10〜12のアルキル基を有する第1のアルキルトリメチルアンモニウム塩と、
炭素数16〜18のアルキル基を有する第2のアルキルトリメチルアンモニウム塩と、
アルキルジメチルエチルアンモニウム塩と、
アンモニウム塩を溶解する水系溶媒と、
を含むことを特徴とする動物血中の白血球の分類試薬。 - 前記アンモニウム塩の濃度が1.5mM〜20mMである請求項12に記載の試薬。
- 前記第1のアルキルトリメチルアンモニウム塩は、ラウリルトリメチルアンモニウム塩から選択され、前記第2のアルキルトリメチルアンモニウム塩は、ステアリルトリメチルアンモニウム塩及びセチルトリメチルアンモニウム塩からなる群より選択される請求項12又は13に記載の試薬。
- 前記ラウリルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、8〜20mMであり、前記ステアリルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、0.4〜2mMであり、前記セチルトリメチルアンモニウム塩の濃度が、1.5〜3mMである請求項14に記載の試薬。
- さらにHydrophilic-Lipophilic-Balance(HLB)17〜20の非イオン性界面活性剤を含む請求項12〜15のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記水系溶媒が、pHを4〜9に維持する緩衝液である請求項12〜16のいずれか一項に記載の試薬。
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