JP4671721B2 - 皮膚への作用の鑑別法 - Google Patents
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Description
への作用の鑑別法であって、動物の真皮内に注射した透過・拡散性の比較をすることを特徴とする、被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
(2)前記ダメージが、紫外線照射による皮膚の障害であることを特徴とする、(1)に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
(3)前記透過・拡散性の比較に於いて、被検試料の投与による透過性マーカーの透過・拡散性の低下度合いが大きい程、被検試料が皮膚に対してより好ましい作用を有するものであると鑑別することを特徴とする、(1)又は(2)に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
(4)前記被検試料の投与による透過性マーカーの透過・拡散性の低下が、角層細胞に存在するタイトジャンクションタンパクの結合強化によるものであることを特徴とする、(3)に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
ルコール類及び/又は水との混合溶媒などに被検物質を添加したもの、ジメチルスルホキシド及び/又は水に被検物質を添加したものが好適である。
(評価基準の一例)
タイトジャンクション機能強化度(%)=(組織切片単位長さ当たりの透過性マーカーがタイトジャンクション部分で堰きとめられている箇所数/組織切片単位長さ当たりのオクルーディン染色で認識されるタイトジャンクション箇所数)×100
一群5匹で評価し、その平均値をランク分けする(表1)。
++:90%以上(UV−B非照射群と同等)
+ :50%以上90%未満
± :10から50%未満
− :0から10%未満(UV−B照射のみの群と同等)
ディン一次抗体(ザイメッド社製:ZYMED)とFITC標識二次抗体処理による蛍光抗体染色によって皮膚タイトジャンクションを染色した。次いで、ストレプトアビジンテキサスレッド(オンコジーン社製:ONCOGENE)により透過性マーカーであるビオチン誘導体の蛍光染色をした。これらを、落射蛍光顕微鏡にて観察し、FITCの緑の蛍光で示される皮膚タイトジャンクション部位とテキサスレッドの赤の蛍光で示される透過性マーカーを検出し、画像として撮影した。この画像を重ね合わせることにより、皮膚タイトジャンクションの位置と透過性マーカーの状態を評価した(図1、図2、図3)。同時に、紫外線照射などの処置を何ら施さないヘアレスマウスにおいても透過性マーカーの皮内注射およびその後の皮膚採取を行い、未処置の皮膚でのタイトジャンクション位置及び透過性マーカーの状態を評価した(図4,図5、図6)。オクルーディン抗体によるタイトジャンクション部分の認識と透過性マーカーのよる透過性の評価は、以下のような基準によって行った。それぞれ、一群5匹で評価し、その平均値で判断した。
タイトジャンクション機能強化度(%)=(組織切片1cm当たりの透過性マーカーがタイトジャンクション部分で堰きとめられている箇所数/組織切片1cm当たりのオクルーディン染色で認識されるタイトジャンクション箇所数)×100
一群5匹で評価し、その平均値をランク分けした(表3)。
++:90%以上(UV−B非照射群と同等)
+ :50%以上90%未満
± :10から50%未満
− :0から10%未満(UV−B照射のみの群と同等)
Claims (4)
- 予め皮膚にダメージを与えた群の動物の皮膚と、皮膚にダメージを与える前及び/又は後に皮膚上に被検試料を投与した群の動物の皮膚とを比較する、被検試料の皮膚への作用の鑑別法であって、動物の真皮内に注射した透過性マーカーの真皮側から角層側への透過・拡散性の比較をすることを特徴とする、被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
- 前記ダメージが、紫外線照射による皮膚の障害であることを特徴とする、請求項1に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
- 前記透過・拡散性の比較に於いて、被検試料の投与による透過性マーカーの透過・拡散性の低下度合いが大きい程、被検試料が皮膚に対してより好ましい作用を有するものであると鑑別することを特徴とする、請求項1又は2に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
- 前記被検試料の投与による透過性マーカーの透過・拡散性の低下が、角層細胞に存在するタイトジャンクションタンパクの結合強化によるものであることを特徴とする、請求項3に記載の被検試料の皮膚への作用の鑑別法。
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