JP4580556B2

JP4580556B2 - 抗腫瘍薬である新規インデノイソキノリン類

Info

Publication number: JP4580556B2
Application number: JP2000575513A
Authority: JP
Inventors: エス．クッシュマン、マーク; エム．ナガフジ、パメラ; ジャヤラマン、ムササミ; ジー．ポーミエ、イヴ
Original assignee: US Government
Current assignee: US Government
Priority date: 1998-10-14
Filing date: 1999-10-14
Publication date: 2010-11-17
Anticipated expiration: 2019-10-14
Also published as: EP1123099B1; AU765135B2; DE69940523D1; AU1204300A; EP1123099A4; WO2000021537A1; CA2347100C; EP1123099A1; ATE424204T1; CA2347100A1; JP2002527396A; EP2050452A1; US6509344B1

Description

【０００１】
発明の分野
本発明は、癌患者を治療するための組成物および方法に関する。より詳細には、本発明は、新規インドノキノリン誘導体および癌治療におけるその使用を教示する。
【０００２】
政府の権利
本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられたＧｒａｎｔＮｏ．ＮＯ１−ＣＭ−６７２６０の下での政府の援助を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
発明の背景と要約
癌のコントロールおよび治療は、我々がもっとも挑戦している健康問題のうちの１つである。癌の治療は、手術、放射、化学療法またはこれらの治療のいくつかを組み合わせたものを含む、幾つかの治療方法で取り組むことができる。化学療法は、手術不能か、または転移した状態の疾患に対する必要不可欠な治療であり続けている。このように、癌細胞を特にターゲットにする化合物または癌細胞の増殖に関与する細胞メカニズムの発見によって、癌の根絶およびコントロールにおける著しい進歩を与えることができる。
【０００４】
有効な抗癌活性を有する化合物の選択は、癌細胞の生物学および生化学の知識が依然として限られているため複雑である。それゆえ、新規で有効な抗癌剤の開発は、細胞毒活性に対する新規化合物のスクリーニングにかなり依存したままである。抗腫瘍薬の候補は、正常細胞と比較して癌細胞に対する高い細胞毒性を示す。抗癌活性に対するスクリーニング方法は、幾つかのターゲットに焦点を合わせている：（１）動物研究における、腫瘍成長および／または悪化を阻害する化合物の能力；（２）癌由来の細胞株における細胞成長／増殖の阻害；および（３）癌細胞の成長または繁殖に必要な分子内プロセスの阻害。
【０００５】
マウスのＬ１２１０白血病細胞株は、初め、抗癌活性に対する化合物のスクリーニングに用いる好適なモデル系であった。しかしながら、Ｐ３８８マウスの白血病系が、Ｌ１２１０よりも感受性が高く、かつ予測に役立つことが見出された。
【０００６】
マウスのＬ１２１０白血病細胞株は、初め、抗癌活性に対する化合物のスクリーニングに用いる好適なモデル系であった。しかしながら、Ｐ３８８マウスの白血病系が、Ｌ１２１０白血病系よりも感受性が高く、かつ予測に役立つことが見出された；それは、過去十年間、主要なスクリーンとして用いられてきた。これらの２つの細胞株に毒性を呈する化合物に対する系統的スクリーニングの結果、多数の活性天然物が単離された。しかしながら、これらの化合物の抗癌活性は、主に白血病、リンパ腫および少数の稀な腫瘍に対するものであった。ゆっくり成長している固形腫瘍に対する公知の化学療法の臨床治療における効果の低さまたは欠如は、重要な関心事である。
【０００７】
細胞のタイプ、形態、成長速度およびその他の細胞特性に関する癌の多様性を考え、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）は、抗癌活性スクリーニングへの「ｄｉｓｅａｓｅ−ｏｒｉｅｎｔｅｄ」アプローチを開発した（Ｍ．Ｒ．Ｂｏｙｄ，“ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ” Ｊ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ，Ｓ．Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（Ｅｄｓ．）Ｖｏｌ．３，ＰＰＯＵｐｄａｔｅ，Ｎｏ．１０，１９８９）。このインビトロプレスクリーニング系は、約６０の主なヒト癌細胞株（白血病、および肺、結腸、乳房、皮膚、腎臓などのような、よりゆっくりと成長している腫瘍細胞を含む）からなるヒト癌細胞株パネルに対する、抗癌細胞毒性の測定に基づいており、以下、ＣＯＭＰＡＲＥスクリーニングという。新規インビトロスクリーニングパネルの重要な利点は、あるタイプの癌細胞に対して選択的により細胞毒性を有する化合物の同定を容易にし得ること、即ち、特定の疾患に関する更なる研究のための化合物を選択できる能力が高くなることである。
【０００８】
本発明の化合物は、ＣＯＭＰＡＲＥスクリーニング方法論を用いて、抗腫瘍活性に対してスクリーニングした。その結果から、該化合物は、ヒト癌を治療する際に用いるための抗腫瘍薬であることが示される。
【０００９】
抗癌剤は、さまざまなメカニズムを通して作用して、癌細胞を撲滅したり、その増殖を阻害することが知られている。例えば、幾つかの薬剤は、癌細胞の生化学プロセスにおける偽基質として作用する代謝拮抗物質である。この作用メカニズムを有する１つの化合物が、葉酸のアナログであるメトトレキサートであり、これは、ジヒドロ葉酸エステルリダクターゼに結合することによって、部分的に機能を果たし、これにより、葉酸前駆体分子からのグアニンおよびアデニンの形成を阻害する。即ち、メトトレキサートは、葉酸の適切な代謝を阻害することによって、ＤＮＡを構成するという癌細胞の能力を抑制する。
【００１０】
他の抗癌剤は、ＤＮＡ鎖のアルキル化によって作用し、これにより、ＤＮＡ分子の正常な二重らせん構造に欠陥が生じる。このアルキル化は、ＤＮＡ鎖間（またはＤＮＡ鎖内）での崩壊および不適切な結合を生じるかもしれない。このようなＤＮＡ構造の破壊は、分子内修復メカニズムによって修復されない場合、そのＤＮＡを複製する細胞の能力を弱める。アルキル化抗癌剤の例は、シクロホスホアミドおよびクロラムブシルである。
【００１１】
幾つかの抗癌剤は、ＤＮＡ鎖自身の複製に関与する分子内メカニズムをターゲットにしている。細胞の遺伝子材料の複製には、ＤＮＡの二重らせんを引っ張って２つの鎖に分離する手段が必要である。この分離は、通常、酵素トポイソメラーゼＩによって成し遂げられる。この酵素機能が破壊すると、分けた細胞でのＤＮＡ鎖切断が生じ、これが分けた細胞の死を引き起こす。癌細胞は、正常細胞よりもずっと速い速度で成長して再生するため、正常細胞よりもトポイソメラーゼ阻害による損傷を受けやすい。即ち、トポイソメラーゼＩを阻害する薬剤は、強力な抗癌剤であることが知られている。薬剤であるカンプトテシンは、トポイソメラーゼＩの阻害剤であることが示され、強力な抗癌剤である；不運なことに、カンプトテシンは毒性のある副作用も生じる。正常細胞に対して低毒性である、トポイソメラーゼＩの強力な阻害剤のサーチが続いている。
【００１２】
本発明化合物の多くは、トポイソメラーゼＩの阻害をさまざまな程度で引き起こす。それゆえ、ＣＯＭＰＡＲＥ試験を通して示された成長阻害の幾つかは、この作用メカニズムを通して生じるように思われる。しかしながら、本発明のインデノイソキノリン類の幾つかは、たとえそれらのトポイソメラーゼＩでの阻害効果がほかの試験薬剤に対して比較的小さくても、驚くほど強力な細胞成長阻害剤であった。これらのデータは、本発明の新規インデノイソキノリン類は、トポイソメラーゼＩの阻害以外の他の作用メカニズムを通して、細胞成長の阻害を少なくとも一部引き起こすことを示している。本発明は、新規インデノイソキノリン化合物を開示しており、その多くは、トポイソメラーゼＩの強力な阻害剤であり、抗癌剤として有用である。さらに、本発明は、細胞成長の強力な阻害剤であり、つまり強力な抗癌剤である新規インデノイソキノリン化合物を開示している。
【００１３】
発明の詳細な説明
本発明化合物は、一般式：
【００１４】
【化３】

【００１５】
（式中、Ｒ₁で示される基は、水素、ホルミル、フェニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニルまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、あるいはＲ₁は、−（ＣＨ₂）_mＺ基（ここで、ｍは、１−６であり、Ｚは、水素、ヒドロキシ、カルボキシ、ホルミル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボ−（Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ）、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、フェニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノおよびＣ₁−Ｃ₆ヒドロキシアルキルアミノからなる群より選ばれる）であり；
Ｒ₂、Ｒ₂’およびＲ₄は、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ₂とＲ₂’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；
Ｒ₃およびＲ₃’は、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；
ｎ＝１または０であり、ｎ＝１の時、結合ａは単結合であり、ｎ＝０の時、結合ａは二重結合である；
ただし、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₄、Ｒ₃およびＲ₃’が水素である時、Ｚは、Ｃ₁−Ｃ₆ヒドロキシアルキルアミノではなく、
さらに、ただし、Ｒ₁がメチルである場合、Ｒ₃およびＲ₃’は、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれる）で表される。
【００１６】
式Ｉの本発明化合物の好適な態様において、縮合結合ａにおける炭素原子上のプロトンは、結合ａでｃｉｓ−配置をとっている。
【００１７】
本発明の１つの態様において、式Ｉの化合物は、以下の置換基を有する：Ｒ₁が−（ＣＨ₂）_mＯ４であり、ｍが３−６であり；ｎがゼロ（０）であり、ａが二重結合であり；かつ、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’およびＲ₄が水素である。
【００１８】
本発明のほかの態様において、式Ｉの化合物は、以下の置換基を有する：Ｒ₁がＣ₂−Ｃ₄アルキルまたはＣ₂−Ｃ₄アルケニルであり；Ｒ₂およびＲ₂’が、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシであり；Ｒ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；かつ、Ｒ₄は水素である。
【００１９】
本発明のほかの態様としては、式Ｉ（式中、Ｒ₁が（ＣＨ₂）_mＯＨであり、ｍが３−６であり；ｎがゼロ（０）であり、ａが二重結合であり；Ｒ₂およびＲ₂’がＣ₁−Ｃ₃アルコキシであり；Ｒ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；かつ、Ｒ₄が水素である）の化合物が挙げられる。
【００２０】
本発明のさらなる態様としては、式Ｉ（式中、Ｒ₁がＣ₁−Ｃ₃アルキルまたはＣ₂−Ｃ₄アルケニルであり；ｎが１であり、ａが単結合であり；Ｒ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；かつ、Ｒ₄が水素である）の化合物が挙げられる。
【００２１】
本発明のほかの態様としては、式Ｉ（式中、Ｒ₁が−（ＣＨ₂）_mＣＯＯＨであり、ｍが１−４であり；ｎがゼロ（０）であり、ａが二重結合であり；かつ、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’およびＲ₄が水素である）の化合物が挙げられる。
【００２２】
他の本発明化合物は、以下の式：
【００２３】
【化４】

【００２４】
（式中、Ｒ₁は、フェニルまたはＣ₁−Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニルまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、あるいはＲ₁は、−（ＣＨ₂）_mＺ基（式中、ｍが１−６であり、Ｚは、水素、ヒドロキシ、カルボキシ、ホルミル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、カルボ−（Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ）、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、フェニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノおよびＣ₁−Ｃ₆ヒドロキシアルキルアミノからなる群より選ばれ、ただし、Ｚが水素である時、ｍは２−６である）であり；
【００２５】
Ｒ₂、Ｒ₂’およびＲ₄は、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ₂とＲ₂’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；
【００２６】
Ｒ₃およびＲ₃’は、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₂−Ｃ₆アルケニル、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂Ｏ−の基を形成し；かつＸは、医薬上許容され得るアニオンである）で表される。
【００２７】
「医薬上許容され得るアニオン」は、無毒性の１−、２−または３価のアニオンとして定義される。その典型は、Ｂｒ^-、Ｃｌ^-、ＳＯ₄ ^-2、ＰＯ₄ ^-3、アセテート、ＣＯ₃ ^-2およびＨＣＯ₃ ^-である。式ＩＩの塩の化学量論は、アニオン成分の価数に依存しており、アニオン成分に対するカチオン成分の比率は、中性塩を与えるようなものである、と解される。
【００２８】
本発明の１つの態様において、式ＩＩの化合物は、以下の置換基を有している：Ｒ₁がＣ₁−Ｃ₄アルキルであり；Ｒ₂およびＲ₂’がＣ₁−Ｃ₃アルコキシであり；Ｒ₃とＲ₃’とが一緒になって、式−ＯＣＨ₂−Ｏ−の基を形成し；かつＲ₄が水素である。
【００２９】
本発明は、さらに、癌患者の治療のための、本発明のインデノイソキノリン化合物の有効量を含有してなる医薬製剤を提供する。ここで用いられているインデノイソキノリン化合物の有効量は、患者に投与することにより、癌細胞の成長を阻害し、悪性細胞を死滅させ、腫瘍の体積または寸法を減少させるか、または治療をうける患者の腫瘍を完全に除去する、化合物の量として定義される。
【００３０】
患者に投与する有効量は、通常、身体の表面積、患者の体重および／または患者の状態に基づく。動物およびヒトへの投与量の相互関係（身体表面の平方メートルごとのミリグラムに基づく）は、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ，Ｅ．Ｊ．，ら，ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．１９６６，５０（４），２１９に開示されている。身体の表面積は、患者の身長と体重からおおよそ決められる（例えば、ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＴａｂｌｅｓ，ＧｅｉｇｙＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａｒｄｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，５３７−５３８頁（１９７０）を参照）。有効量の本発明のインデノイソキノリン化合物は、患者の癌細胞の成長を阻害（または死滅）するのに有用な量として定義されている。通常、そのような有効量は、約５ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇまで、より好ましくは約５ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇまで、もっとも好ましくは、約５から約１５０ｍｇ／ｋｇまでの範囲内である。有効投与量は、当業者に認識されているように、投与ルート、賦形剤の使用量および他の抗腫瘍薬および放射療法を含めた他の治療方法を併用する能力に依存して変化するだろう。
【００３１】
医薬製剤は、皮下注射、腹腔内投与、筋肉内投与および静脈注射を含めた非経口ルートで投与されてもよい。非経口投与形態の例としては、等張食塩水、５％グルコースまたはその他のよく知られた医薬上許容され得る液状担体の活性薬剤の水溶液が挙げられる。本態様の１つの好ましい面では、５％ジメチルスルホキシドおよび１０％ＣｒｅｍｐｈｏｒＥＬ（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）を含有する食塩水に、インデノイソキノリン化合物を溶解する。本発明のインデノイソキノリン化合物と特定のより可溶性のある複合体を形成することができるシクロデキストリン類のような補足の可溶化剤または当業者によく知られたそのほかの可溶化剤は、インデノイソキノリン化合物の輸送のための医薬上の賦形剤として利用することができる。
【００３２】
本発明化合物は、よく知られた方法を利用して、他の投与ルート用の剤形に製剤化することもできる。医薬組成物は、例えば、経口投与用の剤形、カプセル、ゲルシール（ｇｅｌｓｅａｌ）または錠剤に製剤化することができる。カプセルは、ゼラチンまたはセルロース誘導体のようなよく知られた医薬上許容され得る材料をいずれか含んでいてもよい。錠剤は、慣用の方法に従って、活性のあるインデノイソキノリンと固形担体および当業者によく知られた滑沢剤の混合物を圧縮することにより製剤化することができる。固形担体の例としては、スターチ、糖およびベントナイトが挙げられる。本発明の化合物は、また、例えば、バインダーおよび慣用の充填剤および錠剤化剤として、ラクトースまたはマンニトールを含有する、硬殻錠剤またはカプセルの形態で投与することもできる。
【００３３】
提供された実施例は、出願人による発明のさまざまな態様を例示しており、本明細書および特許請求の範囲を説明しており、発明の範囲をいかなる方法でも限定することは意図していない。
【００３４】
インデノイソキノリン１の合成は、これまでも報告されている。化合物１は、その後、ヒト癌細胞培養において細胞毒性を有することが見出された。より最近、ＣＯＭＰＡＲＥ分析によって、１の細胞毒性プロファイルがトポイソメラーゼＩ阻害剤であるカンプトテシンおよびサイントピン（ｓａｉｎｔｏｐｉｎ）のそれと類似していることが示された。化合物１のトポイソメラーゼに対する活性をテストしたところ、実際に、トポイソメラーゼＩの存在下でＤＮＡ切断を引き起こすことが分かった。しかしながら、ＤＮＡ切断部位の幾つかは、化合物１に特有なものであるが、該切断部位の特殊性はカンプトテシンのそれと異なっており、化合物１はカンプトテシン特有の全部位で切断しなかった。さらに、化合物１は、検出可能なＤＮＡの巻き戻しを生じておらず、他の非カンプトテシントポイソメラーゼ阻害剤とは対照的に、ＤＮＡインターカレーターではないということを示唆している。本発明は、新規なトポイソメラーゼＩ阻害剤および化合物１と関連した活性に基づいて開発された強力な抗癌剤の開発を開示している。
【００３５】
化学
１のメチレンジオキシおよびメトキシ置換基を除いた、インデノイソキノリン類３−８の多くは、商業的に入手可能なベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）をさまざまな第１級アミン類と反応させることによって合成された（スキーム１）。反応は、クロロホルム中、室温で行い、収率は通常高かった。
【００３６】
【化５】

【００３７】
インデノイソキノリン系の２つの芳香族環上にさらに置換基を適応させるため、別合成を行った。これは、シッフ塩基類１１と無水ホモフタル酸類１０とを縮合し、ｃｉｓ置換イソキノロン類１２を得、引き続いて、これを塩化チオニルの存在下で所望の生成物１３に変換することに基づいていた（スキーム２）。この方法を用いることにより、一連の１１個の更なるインデノイソキノリン類１３ａ−１３ｋが合成された。これらの化合物は、環系のＣ−２、Ｃ−３、Ｎ−６、Ｃ−８、Ｃ−９およびＣ−１０におけるさまざまな置換基を包含している。
【００３８】
このルートの修飾を、Ｎ−６の位置にあるアルキル鎖の末端にアルコール基を有する化合物を合成するために行った（スキーム３）。ＣｏｒｅｙおよびＶｅｎｋａｔｅｓｗａｒｌｕ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７２，９４，６１９０−６１９１）の製法に従って、４−アミノ−１−ブタノール（１４ａ）または５−アミノ−１−ペンタノール（１４ｂ）を、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライドと反応させることにより、対応の保護された中間体１５ａおよび１５ｂを得た。クロロホルム中、無水硫酸マグネシウムの存在下、Ｏ−ＴＢＤＭＳで保護されたアミノール類１５ａおよび１５ｂをピペロナール（１６）と反応させることにより、イミン類１７ａおよび１７ｂを合成した。シッフ塩基類１７ａおよび１７ｂと４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）との縮合により、ｃｉｓ３，４−ジ置換イソキノロン類１８ａおよび１８ｂを得た。１８ａおよび１８ｂのｃｉｓ立体化学は、Ｃ−３およびＣ−４のメチンシグナルで観察されたカップリング定数６Ｈｚにより確認した。１８ａまたは１８ｂと塩化チオニルとの反応により、末端アルコールが脱保護され、フリーデル−クラフツ反応によって５員環が形成され、脱水素されて１９ａおよび１９ｂを得ることが可能になった。
【００３９】
幾つかのジヒドロ誘導体２０−２３も調製した（スキーム４）。２０および２３の合成は、前記と同様にして行った。化合物２１および２２は、酸１２ｋおよび１２ｃとイートン試薬（Ｅａｔｏｎ’ｓｒｅａｇｅｎｔ）（１０％Ｐ₂Ｏ₅、メタンスルホン酸中）との反応によって調製された。還流しているＴＨＦ中、２１とボラン−テトラヒドロフラン複合体を１時間反応させることにより、ケトンを還元し、２４を得た。還流しているＴＨＦ中、２１を同試薬と１２時間反応させた場合、ケトンとアミドカルボニルがともに還元し、２５を得た。ヒドロキシル基の立体化学は、インデノイソキノリン２１の、立体的にほとんど阻害されていない凸表面への還元剤のアプローチに起因する。
【００４０】
【化６】

【００４１】
【化７】

【００４２】
【化８】

【００４３】
【化９】

【００４４】
アルコール２５の脱水および脱水素は、木炭中のパラジウムの存在下、還流している酢酸中で生じた。生成物とＮａＣｌ水との反応により、インデノイソキノリニウム塩２７を得た。
【００４５】
最後に、我々は、より水溶性である塩に変換されうる、酸性基を有するインデノイソキノリン誘導体を得ることに関心を持った。インデノイソキノリン７をジョーンズ試薬で酸化することにより、カルボン酸２６を得た。
【００４６】
比較目的のため、カンプトテシン（３４）および幾つかのカンプトテシン誘導体３３および３０を、ニチジン（２８）、ファガロニン（２９）、抗癌インデノイソキノリニウム種３１および３２（構造はスキーム５で示す）と同様に、トポイソメラーゼＩ−修飾ＤＮＡ切断を調査する実験および／または細胞成長阻害実験のための対照薬として用いた。
【００４７】
生物学的結果と議論
これらのインデノイソキノリン類について、国立癌研究所スクリーンでヒト癌細胞系に対する抗増殖活性を調べた（ＣＯＭＰＡＲＥスクリーニング）。このスクリーニングでは、各化合物の活性を、種々の腫瘍由来のおよそ５５の異なる癌細胞系について評価した。選択された細胞系で得られたＧＩ５０値（即ち、５０％成長阻害を引き起こす濃度）および平均グラフ中点（ＭＧＭ）値を表１に要約する。ＭＧＭは、試験した全細胞系（およそ５５）の平均ＧＩ５０値の計算に基づいており、ＧＩ５０値において、試験範囲（１０^-4Ｍから１０^-8Ｍ）を下回るものおよび上回るものを、スクリーニング試験で用いた薬物濃度の最小（１０^-8Ｍ）および最大（１０^-4Ｍ）とみなす。加えて、化合物のトポイソメラーゼＩ切断アッセイにおける相対的な活性を表１に記載する。表１では、トポイソメラーゼＩ切断アッセイの結果を、以下のように記載する：
１）“＋＋”は、それらの化合物の活性が１μＭカンプトテシンの５０％を超えていることを意味する；２）“＋”は、それらの化合物の活性が１μＭカンプトテシンの２０％と５０％の間であることを意味する；３）“±”は、それらの化合物の活性が１μＭカンプトテシンの２０％よりも低いことを意味する；４）“０”は、それらの化合物がトポイソメラーゼＩ切断アッセイで不活性であったことを意味する。
【００４８】
【表１】

【００４９】
【表２】

【００５０】
一般に、大半の新規インデノイソキノリン類は、ヒト癌細胞培養において、並の活性（ＭＧＭ２０μＭ）のリード化合物１よりも細胞毒性がさらに低かった。しかしながら、一連のもののうちの幾つかは、Ｎ−アリルアナログ１３ｃ（ＭＧＭ４．２μＭ）、Ｎ−エチルホモログ１３ｋ（ＭＧＭ２．４μＭ）、Ｎ−（４’−ヒドロキシブチル）置換基を有するアナログ１９ａ（ＭＧＭ３．２μＭ）、並びに３つのジヒドロ誘導体２０（ＭＧＭ５．０μＭ）、２１（ＭＧＭ０．８１μＭ）および２２（ＭＧＭ０．９８μＭ）を含めて、１よりも細胞毒性が高いことが判明した。Ｎ−エチルイソキノリニウム種２７（ＭＧＭ１３μＭ）および比較的単純なインデノイソキノリン類７（ＭＧＭ１６μＭ）と８（ＭＧＭ１４μＭ）（どちらも芳香環上に置換基を持っていない）は、わずかに１よりも細胞毒性が高かった。イソキノリニウム塩２７は１に匹敵するトポイソメラーゼＩ切断活性を有するにも関わらず、ほかの大半の細胞毒性アナログは、トポイソメラーゼＩ切断アッセイにおいて、活性が１よりも遙かに低かった。
【００５１】
トポイソメラーゼＩに対する最も強力な新規インデノイソキノリン類は、２６と２７であることが分かった（表１）。これらの化合物がともに、トポイソメラーゼＩの存在下、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（−）ファージミドＤＮＡの３’末端標識したＰｖｕＩＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントでＤＮＡ切断を引きおこすかどうか調べた。その結果をリード化合物１とカンプトテシン（３４）の結果と比較した。２６、２７および１の存在下で検出される切断部位の幾つかは、カンプトテシン（３４）によってもたらされる切断部位とは異なっていた。インデノイソキノリン類２６、２７および１は、カンプトテシン（３４）では観察されなかった幾つかのトポイソメラーゼ切断部位をもたらした。
【００５２】
もっと広い範囲の化合物をさまざまな薬物濃度で試験し、トポイソメラーゼ阻害データを表１に要約する。一般に、活性が非常に弱い１３ｋを除いて、インデノイソキノリン類はよく似た切断パターンをもたらした。いくつかの化合物（例えば、２７）では、初めは薬物濃度が増加するにつれて活性が増加するように思われるが、より高い薬物濃度になると活性は減退する。このことは、最も強力なインデノイソキノリン類の更に詳細な研究によって得られた図１に示されている。濃度に対する活性の増加とそれに続く減少は、これらの化合物がより高い薬物濃度でトポイソメラーゼで仲介されるＤＮＡ切断を阻害することを示しており、その結果は、ＤＮＡの巻戻しやインターカレーションを起こす阻害物質で見られる釣鐘型曲線とよく似ている。最も強力なインデノイソキノリン類の幾つかが、高い薬物濃度でＤＮＡを巻戻し、トポイソメラーゼ活性の阻害を引き起こすかどうかを調査するため、ＤＮＡ巻戻し活性を調べた。トポイソメラーゼＩ存在下での超らせんＤＮＡを用いる巻戻しアッセイは、ＤＮＡインターカレーションを検出するための簡単な手法である。その結果から、インデノイソキノリン２７は、実際に、２６と同様に、高い薬物濃度でＤＮＡの巻戻しを起こすことが示された。一方、リード化合物１と類似のインデノイソキノリン１９ａでは、ＤＮＡの巻戻しは見られなかった。
【００５３】
カンプトテシン（３４）は、切断複合体を安定化し、ＤＮＡの再連結を阻害することにより、ＤＮＡ鎖を崩壊させる。しかしながら、塩濃度が増加すると、カンプトテシンにより誘導される切断複合体は元に戻ることができる。この方法は、カンプトテシン誘導体とトポイソメラーゼＩ切断複合体間の分子間相互作用を比較するために用いられてきた。カンプトテシンとインデノイソキノリン誘導体１、１３ｃ、１９ａ、２６および２７によって引き起こされる切断部位は、塩処理によって元に戻った。この可逆性は、インデノイソキノリン類によるトポイソメラーゼ切断複合体の可逆的なトラッピングと密接に結びついている。
【００５４】
一般に、平面のインデノイソキノリン系は、トポイソメラーゼＩ切断アッセイにおいて強力な活性を有するための、十分ではないが必要な条件であることが分かる。非平面系２０−２５は全て、トポイソメラーゼＩに対して不活性であるか、または弱い活性を示した（表１）。平面のインデノイソキノリン１と対応する非平面のｃｉｓジヒドロ化合物２０とを直接比較することができる。化合物１はトポイソメラーゼＩ切断アッセイで良好な活性を示すが、２０の活性は弱い。一方、インデノイソキノリン類３−６と１３ｆ−１３ｊは全て平面の環系であり、トポイソメラーゼＩ阻害剤として不活性である。
【００５５】
トポイソメラーゼＩ切断アッセイにおいて、Ｎ−（４’−ヒドロキシブチル）化合物７で得られた結果を対応の酸２６の結果と比較することは、興味深い。これらの単純なインデノイソキノリン類はともに芳香環に置換基を有しておらず、Ｎ置換基の末端炭素の酸化状態だけが異なっている。アルコール７から対応するカルボン酸２６となると、トポイソメラーゼＩ阻害活性が顕著に増大する。
【００５６】
表２には、化合物１、カンプトテシン（３４）、いくつかのカンプトテシン誘導体３３と３０、並びにニチジン（２８）、ファガロニン（２９）、抗癌インデノイソキノリニウム種（３１）と（３２）およびいくつかの新規インデノイソキノリン誘導体のＧＩ₅₀値から導いたピアソン相関係数を示す。ピアソン相関係数は、およそ５５の癌細胞系のＮＣＩパネルに挙げられた化合物の細胞毒性プロファイルにおいて類似度を定量化している。分析は、公知の作用メカニズムを有する確立されている抗癌剤に対して、類似もしくは新規な細胞毒性プロファイルを有する化合物の迅速な選別を容易にするために開発されたＣＯＭＰＡＲＥアルゴリズムを用いて行った。目的とする薬剤のデータパターンが、公知の作用メカニズムを有する公知の薬剤のデータパターンと非常に相関性があるならば、目的とする薬剤は公知の薬剤と同じ作用メカニズムを有するかもしれないという仮説が成立する。本件では、ジヒドロインデノイソキノリン誘導体２０は、カンプトテシン類３０、３３および３４と非常に相関性があり、このことは２０の細胞毒性はそのトポイソメラーゼＩ阻害活性によるかもしれないことを示している。
【００５７】
【表３】

【００５８】
多くのトポイソメラーゼＩ阻害物質はトポイソメラーゼＩＩも阻害するので、インデノイソキノリン類によるトポイソメラーゼＩＩ切断複合体がもたらされるかどうかを試験した。その結果、化合物２６により、ＶＰ−１６（エトポシド）によってもたらされるトポイソメラーゼＩＩの部位とほとんど重複しない部位で、トポイソメラーゼＩＩ切断複合体がもたらされる。化合物２７は１００μＭでわずかにトポイソメラーゼＩＩ活性を有するのみであり、化合物１３ｃ、１９ａおよび１はトポイソメラーゼＩＩ切断活性に関する効果を示さなかった。化合物７と８は弱いトポイソメラーゼＩＩ活性も示し、化合物１３ｂ、１３ｋ、２０、２１および２２はトポイソメラーゼＩＩ切断に関する効果を示さなかった。これらの結果は、ＤＮＡの巻き戻しを生じる２つの誘導体２６と２７を除き、インデノイソキノリン類は顕著なトポイソメラーゼＩ阻害剤であることを示している。
【００５９】
インデノイソキノリン化合物の腫瘍や癌細胞系に対する細胞毒性を最大化するという目的は、インデノイソキノリン類７、８、１３ｃ、１３ｋ、１９ａ、２０、２１、２２および２７（これら全てが、リード化合物１より低いＭＧＭを示した）で実現した（表１）。さらに、１のトポイソメラーゼ活性に匹敵する１３ｃ、１９ａ、２６および２７を含めた、いくつかのトポイソメラーゼＩ阻害剤を合成した。更に興味深い明白な点の１つに、１９ａはおそらく別として、同一の化合物中では２つの活性が最大化されることはなかったという点であり、これは、より細胞毒性の高いいくつかの化合物の活性はトポイソメラーゼに対するそれらの活性によるものではないかもしれないということを示している。細胞の取り込みや親化合物のトポイソメラーゼに対する活性を増大しうる代謝産物への可能な転化といった要因により状況は複雑になる。
【００６０】
実施例
以下の実施例は、本発明化合物の幾つかの態様の合成を示す。融点は、毛細管中で測定しており、補正していない。別のやり方で特定する場合を除いて、溶媒としてＣＨＣｌ₃を用いて赤外スペクトルを得た。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、溶媒としてＣＤＣｌ₃を用い、内部標準としてＴＭＳを用いて得た。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは３００ＭＨｚで測定した。化学イオン化質量分析（ＣＩＭＳ）は、試薬ガスとしてイソブタンを用いて測定した。微量分析は、パドゥー大学微量分析研究室で行った。分析用薄層クロマトグラフィはＡｎａｌｔｅｃｈｓｉｌｉｃａｇｅｌＧＦ１０００ミクロンガラスプレート上で行った。化合物は、短波長ＵＶ光またはリンモリブデン酸指示薬を用いて目視した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィは、２３０−４００メッシュシリカゲルを用いて行った。
【００６１】
実施例１：６−エチル−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（３）：エチルアミン（０．２ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（０．４９ｇ，２ｍｍｏｌ）の攪拌したＣＨＣｌ₃（１０ｍＬ）溶液に加えた。明るい橙色混合物を一晩攪拌した。反応混合物にＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）を加え、混合物をＨ₂Ｏ（３ｘ２５ｍＬ）および食塩水（１ｘ２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、橙−赤色固体（０．４３ｇ，７５％）を得た:mp 188-189℃; IR(薄膜) 2986, 1690, 1656, 1611, 1549, 1503, 1430, 1320, 1197, 991 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ 8.66 (d, 1 H, J= 8.3 Hz), 8.32 (d, 1 H, J= 7.9 Hz), 7.69 (dt, 1 H, J= 8.4, 1.4 Hz), 7.60 (dd, 1 H, J= 8.0, 1.4 Hz), 7.52 (d, 1 H, J= 6.9 Hz), 7.40 (m, 3 H), 4.56 (q, 2 H, J= 7.2 Hz), 1.53 (t, 3 H, J= 7.2 Hz); CIMS, m/z (相対強度) 276 (MH⁺, 100). C₁₈H₁₃NO₂の計算値: C, H, N.
【００６２】
実施例２：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−プロピル−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（４）。プロピルアミン（０．３ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（０．４９ｇｍｍｏｌ）の攪拌したＣＨＣｌ₃（１０ｍＬ）溶液に加えた。赤色溶液を一晩攪拌した後、ＣＨＣｌ₃（７５ｍＬ）を加え、混合物をＨ₂Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）および食塩水（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、黄−橙色溶液（０．３２ｇ，５５％）を得た: mp 166-167℃; IR(neat) 2967, 1660,1502,1427,1317, 1193, 959 cm^-1; ¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ8.69 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.33 (d, 1 H, J= 9.0 Hz), 7.70 (td, 1 H, J= 9.0, 3.0 Hz), 7.62 (d, 1H, J= 6.2 Hz), 7.40 (m, 4 H), 4.46 (t, 2 H, J= 8.0 Hz), 1.92 (m, 2 H), 1.12(t, 3 H, J= 7.4 Hz); CIMS m/z (相対強度) 290 (MH+, 100). C₁₉H₁₅NO₂の計算値: C, H, N.
【００６３】
実施例３：６−シクロプロピル−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（５）。シクロプロピルアミン（１０ｍＬ）を、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（０．２８ｇ，１．１ｍｍｏｌ）の攪拌したＣＨＣｌ₃（１０ｍＬ）溶液に加えた。赤色溶液を一晩攪拌後、ＣＨＣｌ₃（５０ｍＬ）を加え、混合物をＨ₂Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）および食塩水（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、赤色固体（０．３ｇ，９１％）を得た: mp 206-208℃; IR (薄膜) 3751, 1665, 1500, 1420, 1311, 1083, 950 cm^-1; ¹H NMR(CDCl₃,300MHz) δ 8.62 (d, 1 H, J= 7.7 Hz), 8.29 (d, 1 H, J= 8.4 Hz), 7.88 (d, 1 H, J= 7.0 Hz), 7.69 (td, 1 H, J= 6.9, 1.2 Hz), 7.59 (dd, 1 H, J= 6.1, 1.3 Hz), 7.40 (m, 3 H), 3.37 (m,1 H), 1.45 (q, 2 H, J= 6.8 Hz), 0.99 (m, 2 H); CIMS m/z (相対強度) 288(MH⁺, 100). C₁₉H₁₃NO₂の計算値: C, H, N.
【００６４】
実施例４：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−（メトキシカルボニルメチル）−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（６）：トリエチルアミン（２．７ｍＬ，１９．４ｍｍｏｌ）を、グリシンメチルエステル塩酸塩（１．５７ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）の攪拌したクロロホルム（３０ｍＬ）溶液に加えた。１時間後、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（１．２４ｇ，５．０ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。赤色混合物をさらに４時間攪拌後、ＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）を加え、混合物をＨ₂Ｏ（３ｘ５０ｍＬ）および食塩水（１ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、橙−赤色固体（１．４８ｇ，９２％）を得た：mp 248-251℃; IR (薄膜) 2956, 1735, 1667, 1609, 1502, 1426, 1227, 981 cm^-1； ¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.68 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.32 (d, 1 H, J= 8.2 Hz), 7.73 (td, 1 H, J= 7.1, 1.3 Hz), 7.61 (m, 1 H), 7.47 (td, 1 H, J= 7.1, 1.1 Hz), 7.37 (m, 2 H), 7.26 (m, 1H), 5.34 (s, 2 H), 3.79 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 320 (MH⁺, 100). C₁₉H₁₃NO₄の計算値: C, H, N.
【００６５】
実施例５：５，６−ジヒドロ−６−（４−ヒドロキシ−１−ブチル）−５，１１−ジケト−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（７）：４−アミノ−１−ブタノール（０．８９１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（２．４８ｇ，１０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３０ｍＬ）溶液に加え、反応混合物を室温で２日間攪拌した。反応混合物は、暗赤色に変わった。反応混合物をクロロホルム（１００ｍＬ）中に取り出し、水（２ｘ５０ｍＬ）、０．５ＮＨＣｌ（５０ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濃縮し、粗生成物を得た。生成物をシリカゲルのショートカラムに通してろ過し、極性フラクションを濃縮し、赤みがかった茶色固体を得た。これをイソプロパノールから結晶化し、生成物（２．５６ｇ，８０％）を得た： mp160-162℃; IR (KBr) 3300, 1695, 1645, 1615 cm^-1; ¹H NMR (CDC1₃) δ 8.63 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 8.26 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 7.70-7.15 (m, 6 H), 4.51 (t, J= 7.8 Hz, 2 H), 3.77 (t, J= 6.1 Hz, 2 H), 1.99 (p, J= 8.0 and 7.5 Hz, 2 H), 1.83 (s, 1 H, D₂O 交換可能). C₂₀H₁₇NO₃の計算値C, H, N.
【００６６】
実施例６：５，６−ジヒドロキシ−６−（５−ヒドロキシ−１−ペンチル）−５，１１−ジケト−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（８）。５−アミノ−１−ペンタノール（１．０３ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、ベンゾ［ｄ］インデノ［１，２−ｂ］ピラン−５，１１−ジオン（２）（２．４８ｇ，１０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２０ｍＬ）溶液に加え、反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物は暗赤色に変化した。反応混合物は、クロロホルム（１００ｍＬ）中に取り出し、水（２ｘ５０ｍＬ）、０．５ＮＨＣｌ（５０ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濃縮し、粗生成物を得た。微量の出発原料がＴＬＣにより示された。生成物は、シリカゲルのショートカラムに通してろ過し、極性フラクションを濃縮し、赤みがかった茶色固体を得、これをイソプロパノールから結晶化し、生成物（２．５３ｇ，７６％）を得た: mp 146-148℃; IR(KBr) 2996, 1698, 1642, 1615 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.63 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 8.27 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 7.67 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.56 (d, J= 6.8 Hz, 1 H), 7.45-7.30 (m, 4 H), 4.47 (t, J= 7.9 Hz, 2 H), 3.71 (t, J= 5.9 Hz, 2 H), 1.92 (p, J= 7.9 and 7.4 Hz, 2 H), 1.82 (s, 1 H, D₂O 交換可能), 1.78- 1.55 (m, 4 H); CIMS m/z(相対強度) 334 (MH⁺, 100). C₂₁H₁₉NO₃の計算値: C, H, N.
【００６７】
実施例７：ｃｉｓ−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−Ｎ−メチル−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ａ）：無水ホモフタル酸（１０ａ）（０．８１ｇ，５ｍｍｏｌ）を、３，４−メチレンジオキシベンジリデンメチルアミン（１１ａ）（０．８２ｇ，５ｍｍｏｌ）の撹拌したクロロホルム（５ｍＬ）溶液に加えた。３０分後、析出した生成物を黄色溶液からろ過し、クロロホルムで洗浄し、淡黄色固体（１−２ｇ，７４％）を得た：mp 165-167℃; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 7.99 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.48 (m, 3 H), 6.76 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 6.52 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 6.43 (s, 1 H), 5.93 (s, 2 H), 5.03 (d, J= 6.2 Hz, 1 H), 4.64(d, J= 6.1 Hz, 1 H), 2.89 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 326 (MH⁺, 100).
【００６８】
実施例８：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−メチル−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ａ）。塩化チオニル（８．１ｍＬ）をｃｉｓ酸１２ａ（０．７ｇ，２．１ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加えた。黄味を帯びた茶色混合物は、１５分以内に橙色になり、３０分後に赤色になった。４時間後、反応混合物をベンゼン（２５ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。茶色がかった赤色固体をメタノールから再結晶し、ショートカラム（ＳｉＯ₂）に通し、クロロホルムで溶出し、茶色固体（０．１４ｇ，２４％）を得た：mp 310-312℃; IR (薄膜) 2358,1652,1540,1506,1292 cm^-1; ¹H NMR(DMSO-d₆) δ 8.43 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.16 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.75 (t, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.56 (s, 1 H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 1 H), 7.15 (s, 1 H), 6.19 (s, 2 H), 3.92 (s, 3 H); CIMS m/z(相対強度) 306 (MH+, 100). C₁₈H₁₁NO₄の計算値: C, H, N.
【００６９】
実施例９：３，４−メチレンジオキシベンジリデンブチルアミン（１１ｂ）：
ピペロナール（７．５ｇ，５０ｍｍｏｌ）およびｎ−ブチルアミン（６ｍＬ，７５ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１００ｍＬ）中、無水ＭｇＳＯ₄（５ｇ）の存在下、室温で４時間撹拌した。混合物をろ過し、残渣をクロロホルム（２０ｍＬ）で洗浄した。合わせたろ液を減圧濃縮し、黄色油状物（９．８ｇ，９６％）を得た：IR (neat) 1649, 1643, 1604 cm^-1; ¹H NMR (CDC1₃) δ 8.11 (s,1 H), 7.31 (d, J= 1.2 Hz, 1 H), 7.06 (dd, J= 1.2 and 7.9 Hz, 1 H), 6.79 (d, J= 7.8 Hz, 1 H), 5.95 (s, 2 H), 3.53 (t, J= 6.6 Hz, 2 H), 1.63(p, J= 7.3 Hz, 2 H), 1.37 (hextet, J= 7.3 Hz, 2 H), 0.91 (t, J= 7.3 Hz, 3 H).
【００７０】
実施例１０：ｃｉｓ−Ｎ−（１−ブチル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）−イソキノロン（１２ｂ）：無水ホモフタル酸（１０ａ）（３．２４ｇ，２０ｍｍｏｌ）を、イミン１１ｂ（４．１ｇ，２０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で４５分間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示した。反応混合物を濃縮し、クロロホルムを完全に除去した。残渣を熱酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、室温で１２時間放置した。分離した無色結晶をろ過し、乾燥し、純粋な１２ｂ（６．５７ｇ，８９％）を得た： mp 178-181℃; IR (KBr) 1712, 1634, 1600 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.08 (dd,J= 1.0 and 7.5 Hz, 1 H), 7.52 (d,J=7.5 Hz, 1 H), 7.40-7.28 (m, 2 H), 6.51-6.45 (m,2 H), 6.37 (s, 1 H), 5.75 (dd, J= 1.1 and 6.4 Hz, 2 H), 4.87 (d, J= 6.2 Hz, 1 H), 4.51(d. J= 6.2 Hz, 1 H), 3.93 (dt, J= 7.2 and 6.6 Hz, 1 H), 2.73 (dt, J= 7.2 and 6.6 Hz, 1H), 1.52(p, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.26 (hextet, J= 7.3) Hz, 2 H), 0.83 (t, J= 7.2 Hz, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 368 (MH⁺, 100); EIMS m/z (相対強度) 367 (M⁺,5), 322 (30), 135 (100). C₂₁H₂₁NO₅の計算値: C, H, N.
【００７１】
実施例１１：６−（１−ブチル）−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｂ）：塩化チオニル（３０ｍＬ）を、酸１２ｂ（３．３５ｇ，０．０８９ｍｌ）に撹拌しながら滴下した。得られた溶液を室温で１２時間撹拌し、その後、溶液は暗桃色に変化した。ベンゼン（２０ｍＬ）を反応混合物に加え、減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（アセトン：ヘキサン，１：４）、続いて結晶化（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、純粋なインデノイソキノリン１３ｂ（１．３７ｇ，４４％）を得た： mp 200-201 ℃; IR (KBr) 1691,1665, 1631 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.50 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 8.21 (d, J= 8 Hz, 1 H), 7.61 (t, J= 8 Hz, 1 H), 7.34 (t, J= 8 Hz, 1 H), 6.98 (s, 1 H), 6.87 (s, 1 H), 6.03 (s, 2 H), 4.34 (t, J= 8 Hz, 2 H), 1.80 (p, J= 8 Hz, 2 H), 1.51 (hextet, J= 8 Hz, 2 H), 1.01(t, J= 8 Hz, 3 Hz); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 189.01, 163.1, 154.85, 151.21, 148.97, 133.58, 132.18, 132.05, 130.50, 128.29, 126.39, 122.82, 122.69, 107.48, 105.12, 104.84, 102.57 ,44.13, 31.33, 20.1, 13.73; CIMS m/z (相対強度) 348 (MH⁺,100); EIMS m/z (相対強度) 347 (M⁺, 60), 330(10), 318 (30), 291(100). C₂₁H₁₇NO₄の計算値: C, H, N.
【００７２】
実施例１２：３，４−ジメトキシベンジリデンアリルアミン（１１ｃ）：無水硫酸マグネシウム（５ｇ）の存在下、アリルアミン（６ｍＬ，８０ｍｍｏｌ）を３，４−ジメトキシベンザルデヒド（８．３ｇ，５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をろ過し、残渣をクロロホルム（１０ｍＬ）で洗浄し、合わせたろ液を減圧濃縮し、１１を黄色油状物（１０．１８ｇ，９９％）として得た： IR (neat) 1692, 1679,1646, 1604 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.14 (s, 1 H), 7.40 (d,J= 1.8 Hz, 1 H), 7.11 (dd, J=1.8 and 8 Hz, 1 H), 6.82 (d, J=8 Hz, 1 H), 6.10-5.90 (m, 1 H), 5.20(dd, J=1.8 and 17.4 Hz, 1 H), 5.10 (dd, J= 1.3 and 10 Hz, 1 H), 4.20 (d, J= 6.3 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.85 (s, 3 H).
【００７３】
実施例１３：ｃｉｓ−Ｎ−アリル−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｃ）。４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（１．１１ｇ，５ｍｍｏｌ）を、イミン１１ｃ（０．９４５ｇ，５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で４５分間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示し、白色析出物が反応混合物中に形成された。析出した生成物をろ去し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、純粋な１２ｃ（１．４３ｇ，７０％）を得た： mp 235-238℃; IR (KBr) 3000, 1736, 1686, 1615 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 13.0 (bs, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 7.13 (s, 1 H), 6.76 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 6.52 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 6.44 (s, 1 H), 5.94 (s, 2 H), 5.85-5.70 (m, 1 H), 5.16 (dd, J= 3.5 & 17.5 Hz, 2 H), 4.92 (d, J= 6.5 Hz, 1 H), 4.57 (d, J= 6.5 Hz, 1 H), 3.82 (s, 3 H), 3.75 (s, 3 H), 3.20-3.10 (m, 2 H). CIMS m/z (相対強度) 412 (MH⁺, 100). C₂₂H₂₁NO₇の計算値: C, H, N.
【００７４】
実施例１４：６−アリル−２，３−ジメトキシ−５，６−ジヒドロ−５，１１−オキソ−８，９−（メチレンジオキシ）−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｃ）：開放フラスコ中、１２ｃ（２．０５ｇ，５ｍｍｏｌ）をイートン試薬（１０％Ｐ₂Ｏ₅，メタンスルホン酸中，６０ｍＬ）と室温で撹拌しながら２４時間反応させ、２２および１３ｃの混合物を得た。ヘキサン：アセトン（４：１）を用いて、２つの生成物をシリカゲル（２３０−４００メッシュ）カラムクロマトグラフィによって分離し、酢酸エチルヘキサンからの再結晶化後、２２（８４２ｍｇ，４３％）および紫色固体生成物として１２ｃ（５８８ｍｇ，３０％）を得た。：mp 290-294℃; IR (KBr) 2370, 1698, 1653, 1551, 1484; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.97 (s, 1 H),7.63 (s, 1 H), 6.99 (s, 1 H), 6.91 (s, 1 H), 6.20-6.05 (m, 1 H), 6.06 (s, 2 H), 5.31 (d, J= 10.5 Hz, 1 H), 5.20-5.00 (m, 3 H), 3.33 (s, 3 H), 3.97 (s, 3 H). C₂₂H₁₇NO₆の計算値: C, 67.52; H, 4.38; N, 3.58. 実測値: C, 67.18; H, 4.32; N, 3.31.
【００７５】
実施例１５：ｃｉｓ−Ｎ−（１−ブチル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−（３’，４’メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｄ）：４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物１０ｂ（２．２２ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、イミン（１１ｂ）（２．１ｇ，１０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で４５分間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示し、白色析出物が反応混合物中に形成した。析出した生成物をろ去し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、純粋な１２ｄ（３．４５ｇ，８１％）を得た：mp 242-244℃; IR (KBr) 1732, 1640, 1610, 1600 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃ + DMSO-d₆) δ 7.56 (s, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 6.55-6.48 (m, 2 H), 6.40 (s, 1 H), 5.79 (d, J= 2.5 Hz, 2 H), 4.86 (d, J= 6.2 Hz, 1 H), 4.45 (d, J= 6.2 Hz, 1 H), 3.88 (dt, J= 7.4 and 6.1 Hz, 1 H), 2.71 (dt, J= 7.5 and 6.1 Hz, 1 H), 1.49 (p, J= 7.3 Hz, 2 H), 1.26 (hextet, J= 7.3 Hz, 2 H), 0.83 (t, J= 7.3 Hz, 3 H). C₂₃H₂₅NO₇の計算値: C, H, N.
【００７６】
実施例１６：６−（１−ブチル）−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｄ）。塩化チオニル（３０ｍＬ）を酸１２ｄ（２．１３５ｇ，５ｍｍｏｌ）に撹拌しながら滴下した。得られた溶液を室温で１２時間撹拌し、その後、溶液は暗桃色に変化した。ベンゼン（２０ｍＬ）を反応混合物に加え、減圧濃縮した。ベンゼン（５０ｍＬ）を得られた残渣に加え、桃色固体をろ去し、純粋なインデノイソキノリン１３ｄ（１．３ｇ，６５％）を得た：mp 280-284℃; IR (KBr) 1699, 1653, 1646, 1578 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.99 (s, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.04 (s, 1H), 6.92 (s, 1 H), 6.07 (s, 2 H), 4.39 (t, J= 7.6 Hz, 2 H), 4.01 (s, 3 H), 3.96 (s, 3 H), 1.82 (p, J= 7.3 Hz, 2 H), 1.68-1.55 (m, 2 H),1.02 (t, J= 7.3 Hz, 3 Hz). C₂₃H₂₁NO₆ 0.1 H₂Oの計算値: C, H, N.
【００７７】
実施例１７：３，４−メチレンジオキシベンジリデンベンジルアミン（１１ｅ）。無水ＭｇＳＯ₄（５ｇ）の存在下、メチレンクロライド（３０ｍＬ）中、ピペロナール（４．５ｇ，３０ｍｍｏｌ）およびベンジルアミン（３．２１ｇ，３０ｍｍｏｌ）を室温で４時間撹拌した。混合物をろ過し、残渣をメチレンクロライド（２０ｍＬ）で洗浄し、合わせたろ液を減圧濃縮し、白色固体（７．０３ｇ，９８％）を得た： mp 69-70℃; IR (KBr) 1638, 1618, 1602 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.18 (s, 1 H), 7.33 (d, J= 1.3 Hz, 1 H), 7.30-7.10 (m, 5 H), 7.06 (dd, J= 1.3 and 8.0 Hz, 1 H), 6.74 (d, J= 8 Hz, 1 H), 5.90 (s, 2 H), 4.69 (s,2 H).
【００７８】
実施例１８：ｃｉｓ−Ｎ−ベンジル−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｅ）：４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（１．１１ｇ，５ｍｍｏｌ）をイミン１１ｅ（１．１９ｇ，５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示し、反応混合物中に白色析出物を形成した。析出した生成物をろ去し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、純粋な１２ｅ（１．８９ｇ，８２％）を得た： mp 262-264℃; IR (KBr) 1736, 1654, 1647, 1618, 1595, 1575 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 7.56 (s, 1 H), 7.35-7.20 (m, 5 H), 7.13 (s, 1 H),6.75 (d, J= 8.3 Hz, 1 H), 6.51 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 6.43 (s, 1 H), 5.93 (s, 2 H), 5.25 (d, J= 15.6 Hz, 1 H), 4.86 (d, J= 5.6 Hz, 1 H), 4.51 (d, J= 5.3 Hz, 1 H), 3.83 (s, 3 H), 3.74 (s, 3 H), 3.39 (d, J= 15.6 Hz, 1 H).
【００７９】
実施例１９：６−ベンジル−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｅ）。塩化チオニル（１０ｍＬ）を酸１２ｅ（１．１５ｇ，１．５ｍｍｏｌ）に撹拌しながら滴下した。得られた混合物を室温で５時間撹拌し、その後、溶液は紫色に変化した。ベンゼン（２０ｍＬ）を反応混合物に加え、減圧濃縮した。四塩化炭素を得られた残渣に加え、不溶固体をろ去し、純粋なインデノイソキノリン１３ｅ（０．７１６ｇ，６５％）を得た。：mp 310-312℃; IR (KBr) 1695, 1652, 1619, 1578 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.02 (s, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.4-7.20 (m, 5 H), 7.02 (s, 1 H), 6.74 (s, 1 H), 5.99 (s, 2 H), 5.69 (s, 2 H), 4.04 (s, 3 H), 3.97 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 162.54, 155.03, 148.72, 135.44, 132.52, 130.22, 129.19, 127.67, 125.64, 108.32, 105.24, 103.03, 102.47, 56.31, 47.80 and 56.03. C₂₆H₁₉NO₆ 0.8 H₂Oの計算値: C, H, N.
【００８０】
実施例２０：３，４−メチレンジオキシベンジリデン−ｐ−アニシジン（１１ｆ）。メチレンクロライド（１００ｍＬ）中、無水ＭｇＳＯ₄（５ｇ）の存在下、ピペロナール（１５ｇ，０．１ｍｏｌ）およびｐ−アニシジン（１２．３０．１ｍｏｌ）を、室温で４時間撹拌した。混合物をろ過し、残渣をメチレンクロライド（２０ｍＬ）で洗浄し、合わせたろ液を減圧濃縮し、黄色固体を得た。粗生成物を９５％エタノールで結晶化し、白色結晶性固体（２２．３８ｇ，８７％）を得た： mp 113-114℃; IR (KBr) 1636 and 1617 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.33 (s, 1 H), 7.51 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 7.25-7.1 0 (m, s), 6.95-6.80 (m, 3 H), 6.01 (s, 2 H), 3.80 (s, 3 H).
【００８１】
実施例２１：ｃｉｓ−Ｎ−（ｐ−アニシル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−（３’，４’−メチレン−ジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｆ）。４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（１．１１ｇ，５ｍｍｏｌ）をイミン１１ｆ（１．２７５ｇ，５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で１２時間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示し、反応混合物中に白色析出物を形成した。析出した生成物をろ去し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、純粋な１２ｆ（１．３６ｇ，６０％）を得た：mp >350℃; IR (KBr) 1644, 1639, 1599 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆,) δ 7.60-7.30 (m, 5 H), 7.20-6.80 (m, 4 H), 6.10 (s, 2 H), 5.30 (d, J= 6 Hz, 1 H), 4.77 (d, J= 6 Hz, 1 H), 3.78 (s, 3 H), 3.71 (s, 3 H), 3.01 (s, 3 H).
【００８２】
実施例２２：６−（ｐ−アニシル）−２，３−ジメトキシ−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｆ）。塩化チオニル（９ｍＬ）を、酸１２ｆ（０．８２２ｇ，２ｍｍｏｌ）に撹拌しながら滴下した。得られた溶液を室温で５時間撹拌し、その後、溶液は紫色に変化した。ベンゼン（２０ｍＬ）を反応混合物に加え、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル（２３０−４００メッシュ）のショートカラムに通し、クロロホルムで溶出した。溶離液の濃縮物は桃色固体となり、これを酢酸エチルから結晶化し、純粋なインデノイソキノリン１３ｆ（０．４３６ｇ，５３％）を得た：mp 360-364℃; IR (KBr) 1692, 1652, 1625 and 1552 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.94 (s, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.34 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 7.24 (s, 1 H), 7.10 (d, J= 8 Hz, 2 H), 6.88 (s, 1 H), 5.90 (s, 2 H), 5.05 (s, 1 H),4.02 (s, 3 H), 3.93 (s, 3 H), 3.91 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 458 (MH⁺,100). C₂₆H₁₉NO₇の計算値: C, H, N.
【００８３】
実施例２３：３，４−ジベンジルオキシベンジリデンメチルアミン（１１ｇ）。３，４−ジベンジルオキシベンザルデヒド（７．９６ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）を、４０％メチルアミン（１０ｍＬ）水溶液に加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物をエーテル（４ｘ７５ｍＬ）で抽出し、エーテル層を合わせ、溶液を飽和塩化ナトリウム水（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、オフホワイト固体（７．７ｇ，９４％）を得た：mp 56-57℃; IR (KBr) 3031, 2936, 2832, 1648, 1600, 1582, 1509, 1454, 1431, 1267, 1171, 113 7, 1017, 735, 696 cm^-1; ¹H NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8.14 (s, 1 H), 7.35 (m, 11 H), 7.1 1 (dd, J= 8.1, 1.0 Hz, 1 H), 6.93 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.18 (s, 4 H), 3.46 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 332 (MH⁺, 100). C₃₁H₂₁NO₂の計算値: C, H, N.
【００８４】
実施例２４：ｃｉｓ−３−（３’，４’−ジベンジルオキシフェニル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−Ｎ−メチル−１−２Ｈ−イソキノロン（１２ｇ）。無水ホモフタル酸（１０ａ）（０．８１ｇ，５ｍｍｏｌ）を、３，４−ジベンジルオキシベンジリデンメチルアミン（１１ｇ）（１．６６ｇ，５ｍｍｏｌ）の撹拌したクロロホルム（５ｍＬ）溶液に加えた。３０分後、エーテルを加え、得られた析出物をろ過し、エーテルで洗浄し、淡黄色固体（０．９ｇ，３６％）を得た： mp 170-172℃; IR (薄膜) 3030, 1731, 1625, 1514, 1263, 1137, 1014 cm^-1; ¹H NMR(CDC1³,300MHz) δ 8.19 (dd, J = 6.5, 1.9 Hz, 1 H), 7.36 (m, 10 H), 7.09 (d, J= 4.9, 1 H), 6.74 (d, J= 8.9, 1 H),6.68 (d, J= 8.9, 1 H), 6.51 (m, 2 H), 5.03) (d, J= 7.2, 2 H), 4.92 (d, J = 6.1, 2 H), 4.8 (d, J= 6.3, 2 H), 4.5 (d, J= 6.2, 2 H), 2.98 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 494 (MH⁺, 100). C₃₁H₂₇NO₅の計算値: C, H, N.
【００８５】
実施例２５：８，９−ジベンジルオキシ−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−メチル−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｇ）。塩化チオニル（８．１ｍＬ）を、ｃｉｓ酸１２ｇ（０．７ｇ，２．１ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加えた。得られたものは黄色がかった茶色混合物であり、１５分以内に橙色になり、３０分後には赤色になった。４時間後、反応混合物をベンゼン（２５ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。茶色がかった赤色固体をメタノールから再結晶化し、ショートカラム（ＳｉＯ₂）に通し、クロロホルムで溶出し、茶色固体（０．１４ｇ，２４％）を得た： MP 198-200℃; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.43 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 8.16 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.75 (t, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.39 (m, 13 H), 5.34 (s, 1 H), 5.29 (s, 1 H), 3.93 (s, 1 H)); CIMS m/z (相対強度) 474 (MH⁺, 100). C₃₁H₂₃NO₄の計算値: C, H, N.
【００８６】
実施例２６：ｃｉｓ−３−（３’，４’−ジベンジルオキシフェニル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−Ｎ−メチル−６，７−ジメトキシ−１−（２Ｈ）−イソキノロン（１２ｈ）。３，４−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（０．５６ｇ，２．５ｍｍｏｌ）を、３，４−ジベンジルオキシベンジリデンメチルアミン（１１ｇ）（０．８３ｇ，２．５ｍｍｏｌ）の撹拌したクロロホルム（３ｍＬ）溶液に加えた。３０分後、黄色混合物は不均一となり、エーテルを加え、さらに生成物を析出させた。明るい黄色析出物を集め、クロロホルムで洗浄し、固体（０．５９ｇ，４４％）を得た：mp 194-196℃; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.49 (s, 1 H), 7.34 (m, 11 H), 7.18 (s, 1 H), 6.91 (d, 1 H, J= 8.3 Hz), 6.79 (s, 1 H), 6.57 (d, 1 H, J= 8.3 Hz), 5.02 (s, 2 H), 4.98 (d, 1 H, J = 6.1 Hz),4.92 (s, 2 H), 4.50 (d, 1 H, J = 5.8 Hz), 3.78 (s, 3 H), 3.74 (s, 3 H), 2.81 (s, 3 H); FABMS (m-NBA) m/z (相対強度) 554 (MH⁺, 100).
【００８７】
実施例２７：８，９−ジベンジルオキシ−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−メチル−２，３−ジメトキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｈ）。塩化チオニル（１５ｍＬ）をｃｉｓ酸１２ｈ（１．２ｇ，２．２ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加えた。得られたものは橙色混合物であり、１５分以内に暗赤色となった。６時間後、反応混合物をベンゼン（２５ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。クロロホルム（７ｍＬ）を紫色固体に加え、その固体を集め、エーテルで洗浄し、明るい紫色固体（０．７５ｇ，６４％）を得た： mp 238-240℃; IR (薄膜) 3027, 2963, 1685, 1649, 1493, 1458, 1252, 1203, 1088, 1014 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 7.96 (s, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.38 (m, 1 H), 7.21 (s, 1 H), 7.11 (s, 1 H), 5.23 (d, 4 H, J=5.2 Hz), 4.02 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H), 3.81 (s, 3 H); CIMS m/Z (相対強度) 534 (MH⁺, 22). C₃₃H₂₇NO₆の計算値: C, H, N.
【００８８】
実施例２８：３，４，５−トリメトキシベンジリデンメチルアミン（１１ｉ）。３，４，５−トリメトキシベンザルデヒド（７．８１−４０．０ｍｍｏｌ）および４０％メチルアミン（２０ｍＬ）水溶液を室温で２．５時間撹拌した。混合物をエーテル（４ｘ７５ｍＬ）で抽出し、エーテル層を合わせ、溶液を飽和塩化ナトリウム水（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）し、減圧濃縮し、無色油状物（７．９４ｇ，９５％）を得た： IR (neat) 2940, 2840, 1646, 1576, 1500, 1453, 1407, 1369, 1323, 1230, 1115, 1013 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.18 (d, 1 H, J = 1.3 Hz), 6.95 (s, 2 H), 3.89 (s, 6 H), 3.87(s, 3 H), 3.50 (d, 3 H, J = 1.3 Hz); CIMS m/z (相対強度) 210 (MH⁺, 100). C₁₁H₁₅NO₃の計算値: C, H, N.
【００８９】
実施例２９：ｃｉｓ−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−Ｎ−メチル−６，７−ジメトキシ−３−（３’，４’，５’−トリメトキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｉ）。３，４−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（０．２２ｇ，ｍｍｏｌ）を、３，４，５−トリメトキシベンジリデンメチルアミン（１１ｉ）（０．２３ｇ，１ｍｍｏｌ）の撹拌したクロロホルム（５ｍＬ）溶液に加えた。３０分後、明るい黄色の均一な溶液は黄褐色となり、固体は観察されなかった。エーテルを滴下し、得られた析出物をろ過し、エーテルで洗浄し、微細な白色固体（０．１ｇ，２０％）を得た：mp, 229-231℃; IR (neat) 2928, 1743, 1593, 1418, 1329, 1241, 1167, 1119 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 3OO MHz) δ 7.5O (s, 1 H), 7.15 (s, 1 H), 6.38 (s, 2 H), 5.O (d, 1 H, J= 5.9 Hz), 4.48 (d, 1 H, J = 5.9 Hz), 3.79 (s, 3 H), 3.72 (s, 3 H), 3.59 (s, 9 H); CIMS m/z (相対強度) 432 (MH⁺, 1OO). C₂₂H₂₅NO₈の計算値: C, H, N.
【００９０】
実施例３０：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−メチル−２，３，８，９，１０−ペンタメトキシ−１１Ｈ−インデノ［１，ｃ］イソキノリン（１３ｉ）。塩化チオニル（１５ｍＬ）を、ｃｉｓ酸１２ｉ（１．２ｇ２．８ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加えた。得られたものは黄色混合物であり、１５分以内に暗赤色になった。４時間後、反応混合物をベンゼン（２５ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。紫色固体をクロロホルムに溶解し、エーテルを加え、析出物を得、これを集めてエーテルで洗浄し、紫色固体（０．７５ｇ，７．１％）を得た：IR (neat) 2944, 1653, 1471, 1255, 1116, 1O19 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 3OOMHz) δ 8.15 (s, 1 H), 7.69 (s, 1H), 7.O2 (s, 1 H), 4.11 (s, 3 H), 4.O5 (s, 3 H), 4.O2 (s, 3 H) 3.99 (s, 6 H), 3.91 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 412 (MH⁺, 1OO).
【００９１】
実施例３１：ｃｉｓ−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−Ｎ−メチル−３−（３’，４’，５’−トリメトキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｊ）。無水ホモフタル酸（１０ａ）（０．３２ｇ，２ｍｍｏｌ）を、３，４，５−トリメトキシベンジリデンメチルアミン（１１ｉ）（０．４６ｇ，２ｍｍｏｌ）の撹拌したクロロホルム（５ｍＬ）溶液に加えた。４５分後、エーテルを均一な混合物に滴下し、得られた析出物を黄色溶液からろ過し、エーテルで洗浄し、淡黄色固体（０．４３ｇ，６０％）を得た：mp 194-195℃; IR (neat) 283O, 162O, 1549, 1459, 1185, 1123 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 3OO MHz) δ 8.13 (s, 1 H), 7.99 (d, 1 H, J= 7.2 Hz), 7.52 (m, 4 H), 6.32 (s, 2 H), 5.O4 (d, 1 H, J = 5.9 Hz), 4.63 (d, 1 H, J = 6.O Hz), 3.58 (s, 3H), 3.55 (s, 6 H), 2.94 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 372 (MH⁺, 1OO). C_2OH₂₁NO₆の計算値: C, H, N.
【００９２】
実施例３２：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−メチル−８，９，１０−トリメトキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｊ）。塩化チオニル（１０ｍＬ）を、１２ｊ（２００ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加えた。４時間後、反応混合物をベンゼン（５０ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。暗橙色固体をクロロホルムに溶解し、エーテルを加え、暗橙色固体（１６ｍｇ，１０％）を得た：mp 194-195℃; IR (neat) 2938, 1665, 1463, 1400,1292, 1125, 1007, 976 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.67 (d, 1 H, J= 7.8 Hz), 8.32 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 7.68 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 7.45 (t, 1 H, J= 7.8 Hz), 7.04 (s, 1 H), 4.09 (s, 3 H), 4.06 (s, 3 H), 3.97 (s, 3 H), 3.89 (s, 3 H); CIMS m/z (相対強度) 352 (MH⁺, 100). C₂₀H₁₇NO₅の計算値: C,H,N.
【００９３】
実施例３３：３，４−メチレンジオキシベンジリデンエチルアミン（１１ｋ）。ピペロナール（２０．１ｇ，０．１４ｍｏｌ）および７０％エチルアミン（２０ｍＬ）水溶液を、室温で３時間撹拌した。混合物をエーテル（４ｘ５０ｍＬ）で抽出した。エーテル層を合わせ、塩化ナトリウム水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、白色結晶性粉末（２４．５６ｇ，９３％）を得た：mp 47-48℃; IR (KBr) 2963, 2836, 1645, 1603, 1498, 1480, 1441, 1252, 1092, 1031, 959, 926 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 8.15 (s, 1H), 7.32 (d, 1 H, J=l.3 Hz), 7.09 (dd, 1H, J= 1.4, 6.0Hz), 6.80 (d, 1 H,J=8.0), 5.98 (s,2 H) 3.59 (qd, 2 H, J = 6.0, 1.2 Hz), 1.26 (t, 3 H, J= 7.3 Hz); CIMS m/z (相対強度) 178 (MH⁺, 100). C₁₀H₁₁NO₂の計算値: C, H, N.
【００９４】
実施例３４：ｃｉｓ−４−カルボキシ−Ｎ−エチル−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−６，７−ジメトキシ３，４−ジヒドロ−１（２Ｈ）イソキノロン（１２ｋ）。３，４−メチレンジオキシベンジリデンエチルアミン（１１ｋ）（０．８９ｇ，５．０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（５．０ｍＬ）中で撹拌し、４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（１．１１ｇ，５．０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、黄色析出物をろ過し、クロロホルムで洗浄し、淡黄色固体（０．５８ｇ，２９％）を得た：mp 231-233℃ (分解); IR (KBr) 2937, 1732, 1615, 1594, 1573, 1254, 1223, 1174, 1089, 1034, 986, 898 cm^-1; ¹H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 7.50 (s, 1H), 7.15 (s, 1 H), 6.76 (d, 1H, J= 7.8 Hz), 6.57 (d, 1H, J= 8.1 Hz), 6.48 (s, 1H), 5.94 (s, 2 H), 5.03 (d, 1 H, J= 6.2 Hz), 4.51 (d, 1 H, J=6.2 Hz), 3.79 (dq, 1 H, J = 6.9 Hz), 3.80 (s, 3 H), 3.73 (s, 3 H), 2.96 (dq, 1H, J = 6.9Hz), 1.01 (t, 3 H, J = 6.9 Hz); FABMS (m-NBA) m/z (相対強度) 400 (MH⁺,100).
【００９５】
実施例３５：６−エチル−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１３ｋ）。塩化チオニル（６．０ｍＬ）を、ｃｉｓ酸１２ｋ（０．５８ｇ，１．５ｍｍｏｌ）に撹拌しながら加え、反応混合物は暗赤色がかった紫色となり、不均一になった。４時間後、反応混合物をベンゼン（５．０ｍＬ）で希釈し、蒸発乾固させた。茶色がかった赤色固体をシリカゲル上に詰め、シリカゲルのショートカラムに通し、クロロホルムで溶出し、茶色がかった赤色固体（０．３４ｇ，６０％）を得た： mp 291-293℃; IR 2969, 1694, 1643, 1613, 1555, 1486, 1393, 1308, 1252 cm^-1; ¹H NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8.02 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 7.01 (s, 1 H), 6.08 (s, 2 H), 4.49 (q, 2 H, J= 7.2Hz), 4.03 (s, 3 H), 3.97 (s, 3 H), 1.50 (t, 3 H, J= 7.2 Hz); CIMS m/z(相対強度) 366 (MH⁺, 4.0). C₂₁H₁₇NO₆の計算値: C, H, N.
【００９６】
実施例３６：イミン類１７の合成のための一般製法。Ｏ−ＴＢＤＭＳで保護されたアミノール類１５を報告された方法で合成した。イミン類１７は、クロロホルム（２０ｍＬ）中、無水硫酸マグネシウム（２ｇ）の存在下、Ｏ−ＴＢＤＭＳで保護されたアミノール類（９ｍｍｏｌ）とピペロナール（９ｍｍｏｌ）とを、室温で３時間反応させることによって合成した。イミン類は、さらに精製することなく次反応に用いた。イミン類１７の粗収率は、定量的であった。
【００９７】
実施例３７：イソキノロン類１８の合成のための一般製法。４，５−ジメトキシホモフタル酸無水物（１０ｂ）（２．２２ｇ，１０ｍｍｏｌ）をイミン１７ａまたは(of)１７ｂ（１０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で１２時間撹拌した。その後、ＴＬＣは出発原料の完全な消失を示し、反応混合物中に白色析出物を形成した。析出した生成物をろ去し、クロロホルム（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、純粋な１８ａまたは１８ｂを得た。
【００９８】
実施例３８：ｃｉｓ−Ｎ−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシブタ−１−イル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７ジメトキシ−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１８ａ）。イソキノロン１８ａを収率３６％で単離した： mp 239-24O℃; IR (KBr) 3O65, 2944, 1737 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 7.51 (s, 1H), 7.11 (s, 1 H), 6.75 (d, J=8.OHz, 1 H), 6.54 (dd, J = 1.3 and 8.1 Hz, 1 H), 6.46 (d, J = 1.2Hz, 1 H), 5.93 (s, 2H), 4.98 (d, J = 6.1 Hz, 1 H), 4.55 (d, J= 6.1 Hz, 1 H), 3.81 (s, 3 H), 3.8O-8.7O (m, 1H), 3.74 (s, 3 H), 3.53 (t, J= 5.78 Hz, 2 H), 2.95-2.8O (m, 1 H), 1.6O-1.35 (m, 4 H), O.88 (s, 9 H), -O.98 (s, 6 H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 17O.64, 162.47, 151.21, 147.65, 147.OO, 146.81, 131.26, 126.84, 121.55, 121.43, 11O.85, 1O9.81, 1O7.87, 1O7.71, 1O1.O6, 62.2O, 61.O1, 55.44, 47.77, 45.25, 29.67, 29.54, 25.81, 24.O7, 17.91, -5.37; CIMS m/z (相対強度) 558 (MH⁺, 8O). C₂₉H₃₉NO₈Siの計算値: C, H, N.
【００９９】
実施例３９：ｃｉｓ−Ｎ−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシペンタ−１−イル）−４−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−６，７ジメトキシ−３−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１（２Ｈ）イソキノロン（１８ｂ）。イソキノロン１８ｂを収率５７％で単離した： mp 24O-242℃; IR (KBr) 3O54, 2933, 1737 cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 12.9O (bs, 1 H), 7.51 (s, 1 H), 7.O9 (s, 1 H), 6.75 (d, J= 8.1Hz, 1 H), 6.55 (dd, J= 1.6 and 8.1Hz, 1 H), 6.47 (d, J= 1.3Hz, 1 H), 5.93 (s, 2 H), 4.97 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.53 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.83-8.7O (m, 1 H), 3.74 (s, 3 H), 3.52 (t, J= 6.2 Hz, 2 H), 2.85-2.73 (m, 1H), 1.6O-1.3O (m, 6 H), O.82 (s, 9 H), -O.99 (s, 6 H). CIMS m/z (相対強度) 572 (MH^-, 1OO). C_3OH₄₁NO₈Siの計算値: C, H, N.
【０１００】
実施例４０：インデノイソキノリン類１９の合成のための一般製法。塩化チオニル（１０ｍＬ）を酸１８（２ｍｍｏｌ）に撹拌しながら滴下した。得られた溶液を室温で５時間撹拌し、その後、溶液は紫色に変化した。ベンゼン（２０ｍＬ）を反応混合物に加え、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル（２３０−４００メッシュ）のショートカラムに通し、クロロホルム：メタノール（９５：５）で溶出した。溶離液の濃縮物は桃色固体になり、これを酢酸エチルから結晶化し、純粋なインデノイソキノリン類１９を得た。反応条件下、Ｏ−ＴＢＤＭＳ基の脱保護が観察され、ヒドロキシ化合物のみが単離された。
【０１０１】
実施例４１：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−６−（４−ヒドロキシブタ−１−イル）−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−（１１Ｈ）インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（１９ａ）。インデノイソキノリン１９ａを収率８４％で単離した： mp 3O4-3O8℃; IR (KBr) 3432, 2929, 1696, 1645, 161O cm^-1; ¹H NMR (DMSO-d₆, 65℃) δ 7.91 (s, 1 H), 7.53 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.O6 (s, 1 H), 6.17 (s, 1 H), 4.43 (t, J= 7.7 Hz, 2 H), 3.9O (s, 3 H),3.86 (s, 3 H), 3.45 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 1.88-1.7O (m, 2 H), 1.6O-1.5O (m, 2 H); CIMS m/z (相対強度) 424 (MH⁺, 1OO). C₂₃H₂₁NO₇ 0.5H₂Oの計算値:C, H, N.
【０１０２】
実施例４２: ５，６−ジヒドロ−６−（４−ヒドロキシ(h,vdroxy)ペンタ−１−イル）−５，１１−ジケト−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−１１Ｈ−インデノイソキノリン（１９ｂ）。インデノイソキノリン１８ｂを収率７９％で単離した: mp 288-290℃; IR (KBr) 3411, 2929, 1698, 1653, 1582, 1550 cm^-1； ¹H NMR (DMSO-d₆, 80℃) δ 7.91 (s, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.21 (s, 1 H), 7.07 (s, 1H), 6.18 (s, 1 H), 4.41 (bs, 2 H), 3.90 (s, 3 H), 3.86 (s, 3 H), 3.60 (bs, 1H), 3.40 (bs, 2 H), 1.88-1.70 (m, 2 H), 1.60-1.40 (m, 4 H); CIMS m/z (相対強度) 438 (MH⁺, 100). C₂₃H₂₁NO₇ 0.3H₂Oの計算値: C, H, N.
【０１０３】
実施例４３：ｃｉｓ−５，６，１２，１３−テトラヒドロ−２，３−ジメトキシ−６−メチル−５，１１−ジオキソ−８，９（メチレンジオキシ）−（１１Ｈ）インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２０）。この化合物は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８４，２７，５４４−５４７に以前開示されたものと同様にして調製した。
【０１０４】
実施例４４：ｃｉｓ−６−エチル−５，６，１２，１３−テトラヒドロ−２，３−ジメトキシ−５，１１−ジオキソ−８，９−（メチレン−ジオキシ）−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２１）。窒素下、酸１２ｋ（３．９９ｇ，３ｍｍｏｌ）を、脱気したイートン試薬（１０％Ｐ₂Ｏ₅ メタンスルホン酸中，１２０ｍｌ）溶液に、撹拌しながら２０分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、その後、混合物を水（６００ｍＬ）に撹拌しながら滴下した。析出した白色固体をろ去し、クロロホルム（１５０ｍＬ）に溶解した。クロロホルム層を飽和ＮａＨＣＯ₃溶液（２ｘ５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、食塩水（６０ｍｌ）で洗浄し、乾燥した（Ｎａ₂ＳＯ₄）。有機層を濃縮することにより、粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィ（４：１，ヘキサン：酢酸エチル）で精製し、純粋な２１を白色固体（２．３９ｇ，６３％）として得た。炭酸水素酸塩層を濃ＨＣｌを用いて中和することにより、未反応の酸（０．８２１ｇ）を白色固体として得た。即ち、回収された出発物の酸に基づく収率は、７９．３％である。分析用サンプルは、ＥｔＯＡｃ−ヘキサン（１：１）から再結晶することにより調製され、白色プリズムを得た：mp 169-170℃; IR (KBr) 3006, 2994, 1706, 1642, 1601 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.59 (s, 1 H), 7.16 (s, 1H), 7.06 (s, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 6.09 (s, 1 H), 6.04 (s, 1 H), 5.04 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 4.70-4.53 (m, 1 H), 4.21 (d, J= 7.0 Hz, 1 H), 3.94 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 3.40-3.26 (m, 1 H), 1.35 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 198-8, 162.0, 154.7, 152.0, 150.6, 149.4, 148.5, 128.8, 126.4, 120.3, 110.2, 108.6, 104.2, 102.6, 56.6, 56.0, 55.8, 50.4, 43.3, 13.2. C₂₁H₁₉NO₆の計算値: C, H, N.
【０１０５】
実施例４５：ｃｉｓ−６−アリル(Allyi)−５，６，１２，１３−テトラヒドロ−２，３−ジメトキシ−５，１１−ジオキソ−８，９−（メチレンジオキシ）−（１１Ｈ）インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２２）。インデノイソキノリン２１の合成のための方法と同様にして、インデノイソキノリン２２を酸１２ｃから収率７２％で合成した。イソキノロン１２ｃ（４．１１ｇ，１０ｍｍｏｌ）とイートン試薬（１２０ｍＬ）との反応により、インデノイソキノリン２２を収率７２％（２．８３ｇ）で得た：mp 178-180℃; IR (KBr) 2990, 1708, 1642, 1600 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.60 (s, 1 H), 7.17 (s, 1 H), 7.07 (s, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 6.09 (s, 1 H), 6.05 (s, 1 H), 6.05-5.90 (m, 1 H), 5.45-5.20 (m, 3 H), 5.16 (d, J = 6.9Hz, 1 H), 4.19 (d, J = 6.9Hz, 1 H), 3.94 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 3.90-3.80 (m, 1 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 198.8, 162.3, 154.8, 152.3, 150.6, 149.5, 148.6, 132.6, 129.0, 126.6, 120.0, 118.0, 110.4, 108.7, 104.4, 102.7, 102.6, 56.3, 56.1, 55.9, 50.3. C₂₂H₁₉NO₆の計算値: C, H, N.
【０１０６】
実施例４６：５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−２，３，８−トリメトキシ−６−メチル−９［（メチルスルホニル）オキシ］−（１１Ｈ）インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２３）。この化合物は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８５，２８，１０３１−１０３６で以前開示されたものと同様にして調製した。
【０１０７】
実施例４７：６−エチル−５，６，１２α，１３α−テトラヒドロ−１１β−ヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−８，９−（メチレンジオキシ）−５−オキソ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２４）。乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、１Ｍボラン−テトラヒドロフラン複合体（４ｍＬ）溶液を用いて、インデノイソキノリン２１（０．３８１ｇ，１ｍｍｏｌ）を１時間加熱還流した。冷却後、反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）に溶解し、氷酢酸をｐＨ５まで滴下した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（２ｘ５０ｍＬ）、食塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濃縮した。残渣をクロマトグラフィ（溶離液：クロロホルム中の２％メタノール）で精製することにより、純粋な生成物２４（０．３６３ｇ，９５％）を得た。分析用サンプルは、ＥｔＯＡｃ−ヘキサン（３：１）からの再結晶化によって調製し、白色プリズムを得た: mp 189-192℃; IR (KBr) 3468, 2919, 1630, 1594 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.62 (s, 1 H), 6.95 (s, 1 H), 6.94 (s, 1 H), 6.74 (s, 1H), 5.99 (s, 1 H), 5.98 (s, 1 H), 4.97 (dd, J = 5.8 and 7.6 Hz, 1 H), 4.89 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 3.94 (s, 3 H), 3.93 (s, 3H), 3.90-3.73 (m, 1H), 3.59 (t, J= 5.8 Hz, 1 H), 3.45-3.30 (m, 1H), 2.03 (d, J= 7.6Hz, 1H, D₂O 交換可能), 1.03 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 162.8, 152.1, 148.5, 148.4, 148.3, 138.7, 135.2, 128.2, 122.8, 110.5, 109.2, 106.6, 106.0, 101.5, 77.4, 60.0, 55.9, 55.8, 48.3, 37.9, 12.0. C₂₁H₂₁NO₆の計算値: C, H, N.
【０１０８】
実施例４８：６−エチル−５，６，１２α，１３α−テトラヒドロ−１１β−ヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−８，９−（メチレンジオキシ）−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２５）。乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中、１Ｍボラン−テトラヒドロフラン複合体（１５ｍＬ）溶液を用いて、インデノイソキノリン２１（２．３９１ｇ，６．２７ｍｍｏｌ）を１２時間加熱還流した。冷却後、反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、氷酢酸をｐＨ５まで滴下した。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム（２Ｘ１００ｍＬ）、食塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濃縮した。残渣をクロマトグラフィ（溶出液：クロロホルム中の５％酢酸エチル）で精製することにより、純粋な生成物２５（２．１３ｇ，９２％）を得た。分析用のサンプルは、イソプロパノールからの再結晶化により調製され、白色結晶を得た：mp 180-184℃; IR (KBr) 3479, 2909, 1605, 1594 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.76 (s, 1 H), 6.90 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.66 (s, 1 H), 6.040 (s, 1 H), 6.02 (s, 1 H), 5.34 (dd, J= 3.1 and 6.6Hz, 1 H), 4.90 (d, J= 8.4Hz, 1 H), 4.15 (d, J= 16.2Hz, 1H), 4.06 (d, J= 16.2 Hz, 1 H), 3.93 (s, 3 H), 3.89 (s, 3 H) 371 (t, J= 7.5 Hz, 1 H), 2.86-2.70 (m, 1 H), 2.20-2.13 (m, 1 H), 2.03 (d, J = 3.1 Hz, 1H, D₂O 交換可能),1.02 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 149.4, 149.3, 148.4, 137.9, 131.2, 124.3, 123.4, 110.4, 110.1, 109.9, 104.7, 101.6, 74.0, 73.6, 58.0, 56.2, 56.0, 46.8, 45.6, 9.00. C₂₁H₁₉NO₆.1.5H₂Oの計算値: C, H, N.
【０１０９】
実施例４９：６−（３−カルボキシ−１−プロピル）−５，６−ジヒドロ−５，１１−ジケト−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン（２６）。インデノイソキノリン７（０．３１９ｇ，１ｍｍｏｌ）をアセトン（５０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却した。ジョーンズ試薬の赤色が残るようになるまで、ジョーンズ試薬を冷アルコール溶液に滴下した。２，３滴イソプロピルアルコールを加えることによって、余分のジョーンズ試薬をクエンチした。反応混合物を小さなパッドのセライトに通してろ過し、残渣をアセトン（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせたろ液を濃縮し、残渣を飽和炭酸水素酸塩（１００ｍＬ）に溶解し、水層をクロロホルム（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。水層を濃ＨＣｌで中和し、ＣＨＣｌ₃（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濃縮し、橙色固体として酸を得た。固体をイソプロピルアルコールから結晶化し、橙色結晶を得た（０．３２０ｇ，９６％）：mp 204-206℃; IR (KBr) 3000 (b), 1708, 1698, 1654 cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.68 (d, J = 8Hz, 1 H), 8.30 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.4Hz, 1 H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.61 (d, J= 7.2 Hz, 1 H), 7.50-7.30 (m, 3 H), 4.60 (t, J = 7.8 Hz, 2 H), 3.71 (s, 1 H), 2.60 (t, J= 7.0Hz, 2 H), 2.19 (p, J= 7.0Hz, 2 H). C₂₀H₁₅NO₄の計算値: C, H, N.
【０１１０】
実施例５０：６−エチル−２，３−ジメトキシ−８，９−（メチレンジオキシ）−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリニウムクロライド（２７）。氷酢酸（１００ｍＬ）中、木炭上の５％パラジウム（０．２６５ｇ）を用いて、アミノアルコール２５（０．７３８ｇ，２ｍｍｏｌ）を２０時間加熱還流した。冷却後、混合物を小さなパッドのセライトに通してろ過し、溶媒を蒸発させ、茶色残渣を得た。残渣を水（５０ｍＬ）およびエタノール（６ｍＬ）に溶解し、明るい茶色溶液を得、これに１５％塩化ナトリウム水（１０ｍＬ）を加えた。黄色生成物がすぐに析出し、これをろ過し、氷冷水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｐ₂Ｏ₅上で一晩真空乾燥し、黄色粉末（０．５５２ｇ，７２％）を得た。分析用サンプルは、メタノールから結晶化した：mp 340-343℃ (分解); IR (KBr) 3382, 1480, 1305 and 1210 cm^-1; H NMR (MeOH-d₄) δ 9.27 (s, 1 H), 7.61 (s, 2 H), 7.46 (s, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.15 (s, 2 H), 5.03 (q, J= 7.2 Hz, 2 H), 4.87 (s, 2 H), 4.15 (s, 3 H), 4.05 (s, 3 H), 1.75 (t, J= 7.2Hz, 3 H). ¹³C NMR (MeOH-d₄) δ 189.5, 162.4, 155.7, 155.0, 152.5, 147.3, 133.4, 130.8, 127.9, 123.6, 107.5, 107.3, 106.6, 105.4, 101.5, 57.7, 57.1, 54.8, 15.7. C₂₁H₂₀NO₄C1.H₂Oの計算値: C, H, N.
【０１１１】
実施例５１：３’末端標識した１６１ＢＰプラスミドＤＮＡを用いる、トポイソメラーゼＩに仲介されるＤＮＡの切断反応。サプライされたＮＥ緩衝液２（１
０μＬ反応）中、制限エンドヌクレアーゼＰｖｕＩＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ社製、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）を用いて、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（−）ファージミドＤＮＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）由来の１６１ｂｐフラグメントを１時間、３７℃で切断し、１ＸＴＢＥ緩衝液中で調製した１％アガロースゲル中の電気泳動により分離した。ゲル片から１６１ｂｐフラグメントを溶出させ（セントリリューターＡｍｉｃｏｎ社製）、セントリコン５０遠心濃縮機（Ａｍｉｃｏｎ社製、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）で濃縮した。そのフラグメントのおよそ２００ｎｇを、反応２緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１００ｍＭＭｇＣｌ、５０ｍＭＮａＣｌ）および０．５ユニットのＤＮＡポリメラーゼＩ（クレノウフラグメント）中で、［アルファ−³²Ｐ］−ｄＣＴＰおよび０．５ｍＭのｄＡＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰを用いたｆｉｌｌ−ｉｎ反応によって、ＨｉｎｄＩＩＩサイトで３’末端標識した。標識反応に続いて、フェノール−クロロホルム抽出とエタノール沈殿を行った。得られた１６１ｂｐ３’末端標識したＤＮＡフラグメントを水に再懸濁させた。指示された薬剤の存在下、アリコート（およそ５０，０００ｄｐｍ／反応）を、３０℃で１５分間、トポイソメラーゼＩとインキュベートした。０．５％ＳＤＳを加えることにより、反応は終了した。エタノール沈殿後、試料はローディング緩衝液（８０％ホルムアミド、１０ｍＭ水酸化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡナトリウム、０．１％キシレンシアノール、０．１％ブロモフェノールブルー、ｐＨ８．０）に再懸濁させ、５１℃で変性ゲル（１６％ポリアクリルアミド、７Ｍ尿素）泳動を行って分離した。ゲルを乾燥してＰｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒとＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウエア（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて視覚化した。
【０１１２】
実施例５２：５’末端標識したヒトＣ−ｍｙｃＤＮＡを用いる、トポイソメラーゼＩＩに仲介されるＤＮＡ切断アッセイ。最初のイントロンと最初のエクソンの間をつないで得たヒトｃ−ｍｙｃ遺伝子の４０３塩基対ＤＮＡフラグメントは、オリゴヌクレオチド５’−ＴＧＣＣＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＡＣＴＴＴＧＣ−３’をセンスプライマーとして用い、かつオリゴヌクレオチド５’−ＧＡＡＣＴＧＴＴＣＡＧＴＧＴＴＴＡＣＣＣＣＧ−３’をアンチセンスプライマーとして用い、位置２６７１と位置３０７３との間のＰＣＲによって調製した。これらのＤＮＡフラグメントのシングル末端標識は、適切なプライマーオリゴヌクレオチドの５’末端標識によって得た。ＸｈｏＩとＸｂａＩで制限されたおよそ０．１μｇのヒトｃ−ｍｙｃＤＮＡをＰＣＲの鋳型として用いた。１％ジメチルスルホキシド、１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５０ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、２ｍＭジチオスレイトール、０．１ｍＭＮａ₂ＥＤＴＡ、１ｍＭＡＴＰおよび１５μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン中、薬物とともにまたは薬物なしで、５’末端標識したＤＮＡフラグメントを５分間平衡化させた後、最終反応液量１０μＬに、精製したヒトのトポイソメラーゼＩＩ（４０〜７０ｎｇ）を加えた。反応は３７℃で３０分間行い、その後１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）および０．４ｍｇ／ｍＬプロテイナーゼＫ（最終濃度）を加えて停止させた。続いて、さらに５０℃で３０分間インキュベートした。試料は、エタノール沈殿を行った後、変性ポリアクリルアミドゲル上でトポイソメラーゼＩＩ切断フラグメントを分離した。シークエンスゲルは、ＩＸＴＢＥ緩衝液（９０ｍＭトリスホウ酸、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８．３）中、７％ポリアクリルアミドからなる。電気泳動は２５００Ｖ（６０Ｗ）で２〜５時間行った。ゲルは乾燥してＰｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒとＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウエアを用いて視覚化した。
【０１１３】
実施例５３：ＳＶ４０ＤＮＡ巻き戻しアッセイ。反応混合物（最終液量１０μＬ）は、反応緩衝液（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５０ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、０．１ｍＭＥＤＴＡ、１５μ／ｍＬウシ血清アルブミン）および１０ユニットの精製ウシ胸腺トポイソメラーゼＩ中、０．３μｇの超らせんＳＶ４０ＤＮＡを含んでいた。反応は、３７℃で３０分間行い、０．５％ＳＤＳを加えて終了させ、その後、１．１μＬの１０Ｘローディング緩衝液（２０％Ｆｉｃｏｌ４００、０．１ＭＮａ₂ＥＤＴＡｐＨ８、１．０％ＳＤＳ．０．２５％ブロモフェノールブルー）を加え、反応混合物をＩＸＴＢＥ緩衝液中で調製した１％アガロースゲル上にロードした。電気泳動後、ＤＮＡバンドを１０μｇ／ｍＬ臭化エチジウムで染色し、ＵＶ光（３００ｎｍ）による徹照で視覚化した。
【図面の簡単な説明】
【図１】一般に、活性が非常に弱い１３ｋを除いて、インデノイソキノリン類はよく似た切断パターンをもたらした。いくつかの化合物（例えば、２７）では、初めは薬物濃度が増加するにつれて活性が増加するように思われるが、より高い薬物濃度になると活性は減退する。このことは、最も強力なインデノイソキノリン類の更に詳細な研究によって得られた図１に示されている。

Claims

式：

（式中、Ｒ _１は、−（ＣＨ_２）_ｍＺ基（ここで、ｍは、１−６であり、Ｚは、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、カルボ−（Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ）、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルアミノおよびＣ_１−Ｃ_６ヒドロキシアルキルアミノからなる群より選ばれる）であり；
Ｒ_２およびＲ _２ ^’ は、独立して、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルおよびＣ_１−Ｃ_６アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ_２とＲ_２ ^’とが一緒になって、式−ＯＣＨ_２Ｏ−の基を形成し；
Ｒ_３およびＲ_３ ^’は、独立して、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ_３とＲ_３ ^’とが一緒になって、式−ＯＣＨ_２Ｏ−の基を形成し；
Ｒ _４は、水素、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキル、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニルおよびＣ _１ −Ｃ _６アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれ；
ｎは、０であり、結合ａは二重結合である；
ただし、Ｒ_２およびＲ_２ ^’がＣＨ_３Ｏであり、かつＲ_３およびＲ_３ ^’が一緒になって、式−ＯＣＨ_２Ｏ−の基を形成し、Ｒ_４が水素である時、Ｒ_１は、ＣＨ_２ＣＨ_３でない）の化合物。
Ｒ _１が、−（ＣＨ _２） _ｍＺ基（ここで、ｍは、１−６であり、Ｚは、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボ−（Ｃ _１ −Ｃ _６アルコキシ）、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニル、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキルアミノおよびＣ _１ −Ｃ _６ヒドロキシアルキルアミノからなる群より選ばれる）である、請求項１の化合物。
Ｒ _４が、水素である、請求項１の化合物。
Ｒ_１が、アリル、−（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨまたは−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ（ここで、ｍは４または５である）であり；
Ｒ_２およびＲ_２ ^’が、それぞれ、メトキシであり；
Ｒ_３およびＲ_３ ^’が、一緒になって−ＯＣＨ_２Ｏ−基を形成し；
Ｒ_４が、水素である、
請求項１の化合物。
請求項１〜４のいずれかの化合物、およびそのための医薬上許容され得る担体、賦形剤もしくは希釈剤を含有してなる、医薬組成物。
式：

（式中、Ｒ _１は、−（ＣＨ _２） _ｍＺ基（ここで、ｍは、１−６であり、Ｚは、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキル、カルボ−（Ｃ _１ −Ｃ _６アルコキシ）、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニル、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキルアミノおよびＣ _１ −Ｃ _６ヒドロキシアルキルアミノからなる群より選ばれる）であり；
Ｒ _２およびＲ _２ ^’ は、独立して、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキル、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニルおよびＣ _１ −Ｃ _６アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ _２とＲ _２ ^’ とが一緒になって、式−ＯＣＨ _２Ｏ−の基を形成し；
Ｒ _３およびＲ _３ ^’ は、独立して、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキル、Ｃ _１ −Ｃ _６アルコキシ、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニル、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれるか、あるいはＲ _３とＲ _３ ^’ とが一緒になって、式−ＯＣＨ _２Ｏ−の基を形成し；
Ｒ _４は、水素、Ｃ _１ −Ｃ _６アルキル、Ｃ _２ −Ｃ _６アルケニルおよびＣ _１ −Ｃ _６アルコキシ、フェノキシおよびベンジルオキシからなる群より選ばれ；
ｎは、０であり、結合ａは二重結合である）の化合物の有効量、およびそのための医薬上許容され得る担体、賦形剤もしくは希釈剤を含有してなる、癌用医薬組成物。