JP4554375B2 - 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 - Google Patents
原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4554375B2 JP4554375B2 JP2005004426A JP2005004426A JP4554375B2 JP 4554375 B2 JP4554375 B2 JP 4554375B2 JP 2005004426 A JP2005004426 A JP 2005004426A JP 2005004426 A JP2005004426 A JP 2005004426A JP 4554375 B2 JP4554375 B2 JP 4554375B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oocysts
- oocyst
- antibody
- magnetic
- cryptosporidium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 title claims description 188
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 21
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 title description 2
- 241000223935 Cryptosporidium Species 0.000 claims description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 81
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 42
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 40
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 34
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 21
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims description 8
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 89
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 16
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 16
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 15
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 15
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 14
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 14
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 10
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 8
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 8
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 6
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 6
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 241000223936 Cryptosporidium parvum Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 4
- 229920000208 temperature-responsive polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- -1 drainage Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 2
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229910000975 Carbon steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000008953 Cryptosporidiosis Diseases 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 1
- 230000011681 asexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013465 asexual reproduction Methods 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000010962 carbon steel Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRXDDLFGCDQOTA-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) iron(2+) oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Fe+2].[Co+2].[O-2] QRXDDLFGCDQOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011557 critical solution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229910052595 hematite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011019 hematite Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N iron(3+);oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Fe+3].[Fe+3] LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- RUSRUYULUAYXIP-UHFFFAOYSA-N n-acetylprop-2-enamide Chemical compound CC(=O)NC(=O)C=C RUSRUYULUAYXIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000480 nickel oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- AJCDFVKYMIUXCR-UHFFFAOYSA-N oxobarium;oxo(oxoferriooxy)iron Chemical compound [Ba]=O.O=[Fe]O[Fe]=O.O=[Fe]O[Fe]=O.O=[Fe]O[Fe]=O.O=[Fe]O[Fe]=O.O=[Fe]O[Fe]=O.O=[Fe]O[Fe]=O AJCDFVKYMIUXCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N oxonickel Chemical compound [Ni]=O GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000001612 separation test Methods 0.000 description 1
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56905—Protozoa
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
しかしこの方法ではDNAを増幅させるためのサーマルサイクラーや特異的塩基配列を有するプライマーの使用等、決して安価で簡便な方法とはいえない。
水道のクリプトスポリジウム対策、厚生省生活衛生局水道環境部水道整備課監修、株式会社ぎょうせい発行(1999年12月発刊)、第1〜2頁
すなわち、本発明の上記課題は、下記の構成により達成される。
(3) オーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体が、抗オーシスト抗体を固定化した磁性微粒子を検体に加えることにより形成されるオーシスト−抗オーシスト抗体−磁性微粒子複合体であることを特徴とする上記(1)または上記(2)記載の原虫類オーシストの測定方法。
(4) 結合因子が、抗オーシスト抗体と、該抗体を特異的に認識する結合因子成分(以下、「抗オーシスト抗体結合因子成分」とも称する。)とからなることを特徴とする上記(1)記載の原虫類オーシストの測定方法。
(5) オーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体が、オーシストに対する抗体を検体に加えてオーシスト−抗オーシスト抗体複合体を形成し、次いで該抗体に対する抗オーシスト抗体結合因子成分を固定化した磁性微粒子を加えることにより形成される、オーシスト−抗オーシスト抗体−抗オーシスト抗体結合因子成分−磁性微粒子複合体であることを特徴とする上記(1)記載の原虫類オーシストの測定方法。
(7) 形成されたオーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体が、更に標識されることを特徴とする上記(1)〜(5)のいずれかに記載の原虫類オーシストの測定方法。
(8) 標識が、蛍光標識であることを特徴とする上記(6)または上記(7)記載の原虫類オーシストの測定方法。
(9) 磁性微粒子が、刺激応答性ポリマーが固定化された磁性微粒子である、上記(1)〜(8)のいずれかに記載の原虫類オーシストの測定方法。
(11)検体が、水を溶媒として含有する上記(1)〜(10)のいずれかに記載の原虫類オーシストの測定方法。
(12) 抗オーシスト抗体または抗オーシスト抗体結合因子成分を固定化した、粒子径5〜500nmの磁性微粒子を含有することを特徴とする検体中の原虫類オーシストの検出用試薬。
(13) 前記磁性微粒子が、刺激応答性ポリマーが固定化された磁性微粒子である、上記(12)記載の原虫類オーシストの検出用試薬。
図1Bに、本発明に従う、抗クリプトスポリジウムオーシスト抗体結合因子成分と結合した刺激応答性ポリマーを固定化した磁性ナノ粒子と、抗クリプトスポリジウムオーシスト抗体−クリプトスポリジウムオーシストとの複合体を模式的に示した。
まず、原虫類のオーシストに対する抗体、又は該抗体を特異的に認識する結合因子成分を固定化した磁性ナノ粒子について説明する。
本発明に使用する磁性ナノ粒子の素材は、常温で磁性を示す物質であれば有機物質であっても無機物質であってもよい。特に限定されるものではないが、磁性を示す物質として具体的には、酸化ニッケル粒子、フェライト粒子、マグネタイト粒子、マグヘマイト粒子、コバルト鉄酸化物、バリウムフェライト、炭素鋼、タングステン鋼、KS鋼、希土類コバルト磁石の微粒子及びヘマタイト粒子などを挙げることができる。
また生化学的手法として、ナノ粒子表層にビオチンを予め固定化し、ビオチンと特異的結合能を有するアビジンを結合させておいて、さらに市販のビオチン化キットを用いてビオチン化抗体を作成後、水溶液中で形成するアビジン−ビオチン結合を利用してナノ粒子表層に抗体を固定化する方法等が挙げられる。
本発明において、「環境試料」とは、水道原水、土壌、廃水、下水、プールの水、糞便などである。環境試料は、必要に応じて濃縮工程を施し、本発明の精製・分離工程を施すための検体とすることができる。
例えば、UCSTポリマーを結合した磁性ナノ粒子を用いる場合、室温下、検体中にオーシストに対する抗体が固定化された該磁性ナノ粒子を加え、数十秒間(好ましくは20〜60秒間)ピペッティング操作等で攪拌することにより、オーシストと磁性ナノ粒子が抗体を介して結合した「免疫複合体」を形成させることができる。従来のミクロンサイズの免疫磁気ビーズ法で要する反応時間1時間より、反応時間を格段に短縮できる。
その後、前記免疫複合体を磁気分離により回収する。磁気分離方法としては、従来公知の方法を用いることができる。
本発明では、上記免疫複合体を従来公知の方法により標識することが好ましく、これにより、容易に検鏡によりオーシストを検出することができる。また、本発明では、上記の通り、磁性ナノ粒子を解離させる必要がないため、予め標識された磁性ナノ粒子を用いることにより、一段階で「標識された複合体」を得ることもできる。
UCST型熱応答性磁性ナノ粒子を用いたクリプトスポリジウムオーシストの検出
(i)クリプトスポリジウムオーシストの標準液の調製
市販のクリプトスポリジウムオーシスト(Cryptosporidium parvum Oocysts)標準試薬(WaterborneTM,Inc、1.25×106個/ml)500μlを1.5mlのチューブに取り、5分間室温で遠心分離(10000rpm)を行った。上清を吸引除去後、チューブに0.5mlのTBST緩衝溶液(20mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 0.05質量% Tween20, pH7.5)を加えボルテックス攪拌を行い、さらに、液量の2000分の1の市販の免疫蛍光標識試薬FITC-Anti-Cryptosporidium IgM(mAb)(WaterborneTM,Inc、A400FLR-20X)を添加し、室温で10分間反応させた。その後、市販のビオチン化抗マウスAnti-IgM二次抗体(IgG)を2μl (KPL・0.5ug/μl)添加し、室温で10分反応させた。その後、5μl(10mg/ml)のアビジンを加え室温で10分間放置した後、5分間遠心分離(室温で10000rpm)を行い上清を除去した。0.5mlのTBST緩衝溶液を添加し、未反応のFITC及びAnti-Cryptosporidium一次抗体、Anti-IgM二次抗体、及びアビジンを除去した。FITCで蛍光標識され、蛍光抗体を介してビオチン化抗体、ビオチンを介してアビジンを結合させた、クリプトスポリジウムオーシスト−抗クリプトスポリジウムオーシスト蛍光抗体−抗蛍光抗体ビオチン化抗体−アビジンという複合体が得られた。
上記の操作で調整したクリプトスポリジウムオーシスト−抗クリプトスポリジウムオーシスト蛍光抗体−抗蛍光抗体ビオチン化抗体−アビジンの水溶液500μlに、ビオチンを固定した1質量%のUCST型熱応答性磁性ナノ粒子50μlを添加した。42℃で2分放置した後、磁石盤に試験管をセットし0℃の氷浴中に5分間浸し冷却させ、クリプトスポリジウムオーシストの磁気回収を行った。
磁気分離後、上清をピペットで吸引除去し、TBST緩衝溶液を0.5ml再添加、室温でUCST型熱応答性磁性ナノ粒子を再分散した。2分間放置した後、分散させたUCST型熱応答性磁性ナノ粒子を再度氷浴中に浸すことより再凝集させ、磁石によるUCST型熱応答性磁性ナノ粒子の磁気回収を行った。この操作をあと2回繰り返し、最後に洗浄液を除いたUCST型熱応答性磁性ナノ粒子の凝集体に50μlのTBST緩衝溶液を加え、ピペットでUCST型熱応答性磁性ナノ粒子の凝集体の再懸濁を行い、検体用サンプルを調製した。
調製した検体用サンプルは、UCST型熱応答性磁性ナノ粒子とクリプトスポリジウムオーシストとの溶離操作を行うことなく、そのまま2μl分取してスライドグラス上に滴下し、観測用プレパラートとした。
すなわち、図2AはUCST型熱応答性磁性ナノ粒子で分離したクリプトスポリジウムオーシストの分散状態での免疫蛍光顕微鏡写真であり、図2Cはその明視野顕微鏡写真である。図2Aでは、UCST型熱応答性磁性ナノ粒子の蛍光像は観測されておらず、該磁気ナノ粒子との解離をしなくても、効率のよい観察像が得られていることが分かる。また、図2BはUCST型熱応答性磁性ナノ粒子で分離したクリプトスポリジウムオーシストの凝集状態での免疫蛍光顕微鏡写真である。図2Bの矢印部分はUCST型熱応答性磁性ナノ粒子の凝集体部分であるが、蛍光像は観測されていない。このように凝集している状態でも蛍光が観察されないということは、前記熱応答性磁性ナノ粒子観察の妨げにはなり得ないことを、明確に示している。図2Dは図2Bの明視野顕微鏡写真であり、図2Dの矢印部分はUCST型熱応答性磁性ナノ粒子の凝集体である。
さらに磁気回収後の上清を遠心分離(室温、10000rpm、5min)し、未回収のクリプトスポリジウムオーシストを回収することを試みた。遠心後、上清を静かに吸引し捨て、チューブに50μlの新しいTBST緩衝溶液を加え、オーシストの蛍光検出を行ったところ、上清からは蛍光標識されたクリプトスポリジウムオーシストが観察されなかった。この結果から、検体中からほぼ100%に近い効率で、クリプトスポリジウムオーシストが回収されたことが確認された。
クリプトスポリジウムの従来のミクロンサイズの磁気ビーズによる分離検出試験を試みた。
クリプトスポリジウムオーシストの分離試験の前に、市販品であるミクロンサイズの磁気ビーズの蛍光顕微鏡による観測を行った。
図3Aは市販品磁気ビーズの明視野顕微鏡写真であり、図3Bは図3Aの蛍光顕微鏡写真である。蛍光の色調がFITCで蛍光染色したクリプトスポリジウムオーシストと識別できないことに加え、大きさも極めて類似している。この結果より、クリプトスポリジウムオーシストの回収後、磁気ビーズからクリプトスポリジウムオーシストを溶出させずに蛍光顕微鏡で観測することは困難であることが示された。
市販のクリプトスポリジウムオーシスト(Cryptosporidium parvum Oocysts)標準試薬(WaterborneTM,Inc、1.25×106個/ml)500μlを1.5mlのチューブに取り、5分間室温で遠心分離(10000rpm)を行った。上清を吸引除去後、チューブに0.5mlのTBST緩衝溶液(20mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 0.05質量% Tween20, pH7.5)を加えボルテックス攪拌を行い、Dynabeads Anti-Cryptosporidium(ベリタス社)を5μl添加して、1時間ゆっくりと振とうした。振とう後、試験管を磁石盤にセットして、磁気ビーズを回収し、上清を捨てた。試験管を磁石盤からはずし、再度500μlのTBST緩衝溶液を加え30分間ゆっくり攪拌した後、試験管に磁石盤をセットして免疫磁気ビーズを回収し、上清を捨てた。この操作をあと2回繰り返した後、50μlのTBST緩衝溶液に懸濁して鏡検用プレパラートとした。
また図3の明視野、暗視野(蛍光像)の顕微鏡写真からもわかるように大きさ、形状とも磁性粒子とクリプトスポリジウムオーシストは極めて酷似していることから、磁気ビーズからのクリプトスポリジウムオーシストの溶出操作なしで、蛍光顕微鏡によるクリプトスポリジウムオーシストの検出は極めて困難であることが確認された。
UCST型熱応答性磁性ナノ粒子と従来のミクロンサイズの磁気ビーズの分離効率の比較
(i)サンプルの調製
500μlのTBST緩衝溶液中にそれぞれ、1.68×10個、1.68×102個、1.68×103個及び1.68×104個の市販のクリプトスポリジウムオーシスト(Cryptosporidium parvum Oocysts)標準試薬(WaterborneTM,Inc、1.25×106個/ml)をチューブに添加した後、実施例1に従ってクリプトスポリジウムオーシスト−抗クリプトスポリジウムオーシスト蛍光抗体−抗蛍光抗体ビオチン化抗体−アビジン複合体を形成した。その後、実施例1に従って前記複合体とビオチン化したUCST型熱応答性磁性ナノ粒子とを反応させ、クリプトスポリジウムオーシストを分離した。最後の回収物を50μlのTBST緩衝溶液に懸濁し、それぞれのサンプルについて、回収されたクリプトスポリジウムオーシストの数を調べた。
四つのサンプルとも500μlのTBST緩衝溶液中に添加したオーシストと同等数のクリプトスポリジウムオーシストが計測された。
また、磁気回収した後の上清を更に遠心分離(室温、10000rpm、5min)して、回収されなかったクリプトスポリジウムオーシストの分離を試みたが、確認されなかった。
市販のクリプトスポリジウムオーシスト検出キットを用いて実施例2と同様の実験を試みた。500μlのTBST緩衝溶液中にそれぞれ、1.68×10個、1.68×102個、1.68×103個及び1.68×104個の市販のクリプトスポリジウムオーシスト(Cryptosporidium parvum Oocysts)標準試薬(WaterborneTM,Inc、1.25×106個/ml)を試験管に添加した後、Dynabeads Anti-Cryptosporidium(ベリタス社)を5μl添加した。1時間ゆっくりと振とうした後、試験管を磁石盤にセットして、免疫磁気ビーズを回収し、上清を捨てた。磁石盤をはずしてから、もう一度500μlのTBST緩衝溶液を添加して磁気ビーズを分散させ、さらに磁石盤をセットして磁気ビーズを回収し、上清を捨てる操作を繰り返し、洗浄を行った。回収した磁気ビーズに50μlの0.1N塩酸を添加してクリプトスポリジウムオーシストを磁気ビーズからはずした。解離した液50μlをスライドグラスにとり、1Nの水酸化ナトリウムを5μl加えて中和した。中和液を風乾した後、メタノールを50μl添加して再度風乾させた。風乾させた試料に、2000分の1に希釈した市販の免疫蛍光標識試薬FITC-Anti-Cryptosporidium IgM(mAb)(WaterborneTM,Inc、A400FLR-20X)を50μl添加して、蛍光染色を行った。染色後、蛍光標識抗体溶液を除去し、さらにイオン交換水を50μl添加して除去して洗浄し、風乾して観察用のプレパラートとした。
クリプトスポリジウムオーシストの数を調べたところ、四つのサンプルとも理論量のクリプトスポリジウムオーシスト数より低い蛍光計数結果しか得られなかった。
また、磁気回収してクリプトスポリジウムを解離した磁気ビーズに、更にもう一度塩酸を加えて、同様の方法でクリプトスポリジウムオーシストの検出を試みたところ、四つのサンプルすべての磁気ビーズから蛍光染色されたクリプトスポリジウムオーシストが確認された。この結果は、1回の解離操作ではクリプトスポリジウムオーシストの回収が十分ではないことを示している。理論値より計測数が低かったのは、回収率の低さが原因と考えられた。
UCST型熱応答性磁性ナノ粒子による酵母菌の混合液からのクリプトスポリジウムオーシストの分離
酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)の過剰量存在下でのクリプトスポリジウムオーシストの蛍光染色を試みた。500μlのTBST緩衝溶液中に1×106個の酵母菌(図4A参照。免疫蛍光標識前の酵母菌の明視野顕微鏡写真である)と3×105個(図4B参照。免疫蛍光標識前のオーシストの明視野顕微鏡写真である)のクリプトスポリジウムオーシストを混合後、2000分の1に希釈した市販の免疫蛍光標識試薬FITC-Anti-Cryptosporidium IgM(mAb)(WaterborneTM,Inc、A400FLR-20X)を50μl添加して蛍光染色した。室温で1000rpm、5分間の遠心を行って沈殿を回収して上清を捨て、さらにTBST緩衝溶液を加えて攪拌した後、再度室温で1000rpm、5分間の遠心を行った。この操作をあと2回繰り返した後、沈殿を50μlのTBST緩衝溶液に分散させ、観察用の試料とした。
その結果、図4C〜Fの矢印に示されたように酵母菌だけの免疫蛍光像(図4C及びD参照。Cは免疫標識後の酵母菌の明視野顕微鏡写真、Dはその蛍光顕微鏡写真である)及びクリプトスポリジウムオーシストと混合した場合(図4E及びF参照。過剰量酵母菌とクリプトスポリジウムオーシストを混合後、免疫標識した像である。Eは明視野顕微鏡写真、Fはその蛍光顕微鏡写真である)のいずれにおいても、矢印の酵母菌は蛍光顕微鏡では確認されず、クリプトスポリジウムオーシストの蛍光検出のみが観察された(図4F参照)。
その結果、UCST型熱応答性磁性ナノ粒子の磁性凝集体からクリプトスポリジウムオーシストだけが検出され、酵母菌は検出されなかった(図5A及びB参照。図5AはUCST型熱応答性磁性ナノ粒子で分離した磁性ナノ粒子凝集体の明視野顕微鏡写真であり、図5Bはその蛍光顕微鏡写真である)。
一方、磁気回収した後の上清には酵母菌だけが検出され、クリプトスポリジウムオーシストは検出されなかった(図5CとD参照。図5CはUCST型熱応答性磁性ナノ粒子で分離した後、残った上清の明視野顕微鏡写真であり、図5Dはその蛍光顕微鏡写真である)。
Claims (9)
- 原虫類のオーシストを含有する検体に、該オーシストを特異的に認識するための結合因子を固定した粒子径5〜500nmの刺激応答性ポリマーが固定化された磁性微粒子を加えて、結合因子を介してオーシストと磁性微粒子との複合体を形成させ、該形成されたオーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体を磁気分離により回収し、オーシストの数を測定する原虫類オーシストの測定方法であり、結合因子が、オーシストに対する抗体(以下、「抗オーシスト抗体」と称する。)であることを特徴とする原虫類オーシストの測定方法。
- 結合因子が、抗オーシスト抗体に更に該抗体を特異的に認識する結合因子成分(以下、「抗オーシスト抗体結合因子成分」と称する。)を結合されてなることを特徴とする請求項1記載の原虫類オーシストの測定方法。
- オーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体が、オーシストに対する抗体を検体に加えてオーシスト−抗オーシスト抗体複合体を形成し、次いで該抗体に対する抗オーシスト抗体結合因子成分を固定化した磁性微粒子を加えることにより形成される、オーシスト−抗オーシスト抗体−抗オーシスト抗体結合因子成分−磁性微粒子複合体であることを特徴とする請求項1記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 磁性微粒子が、予め標識されていることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一つに記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 形成されたオーシスト−結合因子−磁性微粒子複合体が、更に標識されることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一つに記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 標識が、蛍光標識であることを特徴とする請求項4または請求項5に記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 原虫類が、クリプトスポリジウム属の原虫類である請求項1〜6のいずれか一つに記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 検体が、水を溶媒として含有する請求項1〜7のいずれか一つに記載の原虫類オーシストの測定方法。
- 抗オーシスト抗体または抗オーシスト抗体結合因子成分を固定化した、粒子径5〜500nmの刺激応答性ポリマーが固定化された磁性微粒子を含有することを特徴とする検体中の原虫類オーシストの検出用試薬。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005004426A JP4554375B2 (ja) | 2005-01-11 | 2005-01-11 | 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 |
PCT/JP2006/300205 WO2006075612A1 (ja) | 2005-01-11 | 2006-01-11 | 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 |
US11/813,563 US9297799B2 (en) | 2005-01-11 | 2006-01-11 | Method for measuring protozoan oocyst and detecting reagent |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005004426A JP4554375B2 (ja) | 2005-01-11 | 2005-01-11 | 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006194635A JP2006194635A (ja) | 2006-07-27 |
JP4554375B2 true JP4554375B2 (ja) | 2010-09-29 |
Family
ID=36677637
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005004426A Expired - Fee Related JP4554375B2 (ja) | 2005-01-11 | 2005-01-11 | 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9297799B2 (ja) |
JP (1) | JP4554375B2 (ja) |
WO (1) | WO2006075612A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5476558B2 (ja) * | 2006-08-02 | 2014-04-23 | 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 水試料中の原虫のろ過回収方法および水道水又は水道原水の水質の管理方法 |
US7981688B2 (en) | 2007-03-08 | 2011-07-19 | University Of Washington | Stimuli-responsive magnetic nanoparticles and related methods |
JP5184072B2 (ja) * | 2007-12-28 | 2013-04-17 | オーソ・クリニカル・ダイアグノスティックス株式会社 | 検出対象の検出方法及び定量方法 |
JP5026251B2 (ja) * | 2007-12-28 | 2012-09-12 | オーソ・クリニカル・ダイアグノスティックス株式会社 | 検出対象の検出方法及び定量方法 |
WO2011022093A2 (en) | 2009-04-13 | 2011-02-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and devices for detecting the presence of an analyte in a sample |
US8426214B2 (en) | 2009-06-12 | 2013-04-23 | University Of Washington | System and method for magnetically concentrating and detecting biomarkers |
US20110117668A1 (en) * | 2009-11-09 | 2011-05-19 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Self-powered smart diagnostic devices |
US9080933B2 (en) | 2009-11-09 | 2015-07-14 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Stimuli-responsive polymer diagnostic assay comprising magnetic nanoparticles and capture conjugates |
CN106198715B (zh) | 2010-03-12 | 2020-01-10 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 基于磁性传感器的定量结合动力学分析 |
KR101349713B1 (ko) | 2012-06-25 | 2014-01-14 | 한국에너지기술연구원 | 아민-자성 나노응집제를 이용한 미세조류의 회수방법 |
JP6762082B2 (ja) * | 2015-03-13 | 2020-09-30 | 静岡県公立大学法人 | 刺激応答性磁性ナノ粒子を用いた検出対象を検出する方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002016571A1 (fr) * | 2000-08-21 | 2002-02-28 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Particules magnetiques ayant une temperature de solution critique de limite inferieure |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11243953A (ja) | 1998-02-27 | 1999-09-14 | Hitachi Chem Co Ltd | クリプトスポリジウム・パルバムを検出するためのプライマdna及びこれを用いるクリプトスポリジウム・パルバムの検出方法 |
WO2002016528A1 (fr) | 2000-08-21 | 2002-02-28 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Particules magnetiques et procede de fabrication correspondant |
-
2005
- 2005-01-11 JP JP2005004426A patent/JP4554375B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-01-11 WO PCT/JP2006/300205 patent/WO2006075612A1/ja not_active Application Discontinuation
- 2006-01-11 US US11/813,563 patent/US9297799B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002016571A1 (fr) * | 2000-08-21 | 2002-02-28 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Particules magnetiques ayant une temperature de solution critique de limite inferieure |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2006075612A1 (ja) | 2006-07-20 |
US9297799B2 (en) | 2016-03-29 |
US20080199884A1 (en) | 2008-08-21 |
JP2006194635A (ja) | 2006-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4554375B2 (ja) | 原虫類オーシストの測定方法及び検出用試薬 | |
Bhardwaj et al. | Fluorescent nanobiosensors for the targeted detection of foodborne bacteria | |
Ramadan et al. | Microfluidic applications of functionalized magnetic particles for environmental analysis: focus on waterborne pathogen detection | |
US7699979B2 (en) | Separation system and efficient capture of contaminants using magnetic nanoparticles | |
Martynenko et al. | Magneto-fluorescent microbeads for bacteria detection constructed from superparamagnetic Fe3O4 nanoparticles and AIS/ZnS quantum dots | |
JP6720138B2 (ja) | 被検物質の検出方法およびその方法に用いられる試薬キット | |
US20060073585A1 (en) | Capture and detection of microbes by membrane methods | |
JP2013503352A (ja) | 統合されたサンプル調製及び検体検出 | |
CN101896599A (zh) | 多靶标检测用微流体平台 | |
CN102590506A (zh) | 一种快速检测筛选金黄色葡萄球菌的方法 | |
CN101432739A (zh) | 超灵敏传感器和分析物的快速检测 | |
CN102928590A (zh) | 一种快速检测沙门氏菌的荧光量子点筛选分离检测试剂盒 | |
Castillo-Torres et al. | Rapid isolation of Escherichia coli from water samples using magnetic microdiscs | |
EP2638399A1 (en) | Stimuli-responsive polymer diagnostic assay comprising magnetic nanoparticles and capture conjugates | |
GB2439846A (en) | Method of assaying protozoan oocyst and detection reagent the refor | |
Nemati et al. | Toward waterborne protozoa detection using sensing technologies | |
WO2007004288A1 (ja) | 細胞標識分離方法および細胞標識分離用剤 | |
WO2008108006A1 (ja) | 細胞分離方法ならびに細胞検査方法とその試薬キット | |
Yakub et al. | Immunomagnetic separation of pathogenic organisms from environmental matrices | |
JP4542502B2 (ja) | 細胞分離方法ならびに細胞検査方法とその試薬キット | |
KR102098030B1 (ko) | 결핵진단용 조성물 및 광학적 특성 변화에 기반한 결핵 진단방법 | |
KR101523822B1 (ko) | 자성 나노입자와 고점성(高粘性) 용액을 이용한 식중독균 검출방법 | |
Chung | Development of fluorescently labelled Cryptosporidium oocyst surrogates to test the efficacy of sand filtration processes | |
JP2002181823A (ja) | 微生物の検出方法 | |
Arona et al. | Comparison of four commercial immunomagnetic separation kits for the detection of Cryptosporidium |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20060424 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071024 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071025 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090929 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091127 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20091202 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100525 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100611 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100706 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100714 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130723 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4554375 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130723 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130723 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |