JP4541635B2

JP4541635B2 - Thromboxane A2 synthase inhibitor

Info

Publication number: JP4541635B2
Application number: JP2002204204A
Authority: JP
Inventors: 一真吉積
Original assignee: Fancl Corp
Current assignee: Fancl Corp
Priority date: 2002-07-12
Filing date: 2002-07-12
Publication date: 2010-09-08
Anticipated expiration: 2022-07-12
Also published as: JP2004043380A

Description

【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、トロンボキサンＡ２合成酵素阻害作用を有し、血栓、気管支喘息、心筋梗塞、脳梗塞、狭心症の予防又は／及び治療に有効な剤、それらを含有する経口用組成物又は非経口用組成物、それらを含有する食品又は医薬に関する。
【０００２】
【従来技術】
アラキドン酸の代謝産物の一つであるトロンボキサンＡ２（以下、ＴＸＡ２と略す）は、ＴＸＡ２合成酵素の作用により生成され、血小板凝集作用や血管平滑筋収縮（血管収縮、気管支収縮）作用などの強力な生理活性を有する。
【０００３】
ＴＸＡ２が体内で過剰に産生されると、血小板凝集、血管閉塞、血管れん縮又は気管支収縮などを引き起こし、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞又は狭心症などの発症原因となることが知られている。
【０００４】
従って、ＴＸＡ２合成酵素の阻害剤は、ＴＸＡ２の産生を選択的に抑制することにより、前記の血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞又は狭心症などに対する予防剤又は治療剤として有用性を期待することができる。
【０００５】
従来、ＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有する化合物としては、塩酸オザクレル（製品名：ベガ、ドメナン）やセラトロダスト（製品名：ブロニカ）、ラマトロバン（製品名：バイナス）などが知られている。
【０００６】
しかし、これらの化合物は、血清ビリルビン値の上昇を伴う重篤な肝機能異常が稀に見られるなどの副作用を示すことが報告されている。
【０００７】
そこで、安全で副作用の無い天然物由来のＴＸＡ２合成酵素阻害剤の開発が強く求められているが、本発明者の知る限りでは、安全で副作用の無い天然物由来のＴＸＡ２合成酵素阻害剤は全く報告されていないのが現状である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、安全で、副作用の無い天然物由来のＴＸＡ２合成酵素阻害剤、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞又は狭心症の予防又は治療剤、それらを含有する経口用あるいは非経口用組成物、それらを含有する食品又は医薬を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上述した課題を解決するために鋭意研究を行った結果、抗癌作用や免疫賦活作用などの目的で健康補助食品に利用されているプロポリスにＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は、プロポリス又はその抽出物を含有するＴＸＡ２合成酵素阻害剤血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞又は狭心症などに対する予防又は治療剤、これらを含有する経口用組成物、非経口用組成物、これらを含有する食品、医薬に関する。
【００１１】
【発明の実施形態】
本発明で使用するプロポリスは、蜂が集めた樹脂状の黒い塊であり、ブラジル産プロポリス、中国産プロポリス、オーストラリア産プロポリス、ウルグアイ産プロポリス、日本産プロポリスなど何れの産地のものでもよく、特に限定されるものではないが、汎用性の面から見て、ブラジル産プロポリス、中国産プロポリスが好ましい。
【００１２】
本発明におけるプロポリスは、プロポリス自体を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、超臨界抽出物、水あるいはアルコール、エーテル、アセトンなどの有機溶媒による粗抽出物、および粗抽出物を分配、カラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分など、全てを含む。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
【００１３】
例えば、ブラジル産プロポリスの原塊乾燥物１Ｋｇに９９．５％エタノール抽出液３Ｌを加え、室温で一晩浸漬することにより得た抽出液を、そのまま使用しても良いし、各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
【００１４】
抽出されたプロポリス抽出物の溶液中のプロポリス抽出物濃度は特に制限はないが、１５〜７０質量％、好ましくは２０〜６０質量％程度が好ましい。この濃度が１５質量％未満では、乾燥時に多量のエタノールや水などの溶液を蒸発させる必要があり、７０質量％超えると溶液の粘度が高くなり過ぎ、加工適性が悪くなる恐れがある。
【００１５】
これらの本発明によるプロポリスの乾燥物又は抽出物にＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有することは、従来から全く知られておらず、本発明により得られた新知見である。
【００１６】
本発明によるプロポリスは、卓越したＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有しており、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞あるいは狭心症などに対する予防又は治療を目的とした食品又は医薬として使用可能である。
【００１７】
本発明のプロポリスをＴＸＡ２合成酵素阻害剤、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞又は狭心症などに対する予防又は治療剤含有食品又は医薬として製造することができる。
【００１８】
本発明のＴＸＡ２合成酵素阻害剤、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞あるいは狭心症などに対する予防又は治療剤のような医薬の適用方法としては、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１９】
本発明のプロポリス又はその抽出物を含有することを特徴とするトロンボキサンＡ２合成酵素阻害剤は、食品に添加して用いることもできる。
食品としては、本発明のトロンボキサンＡ２合成酵素阻害剤に種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、ＴＸＡ２合成酵素阻害、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞あるいは狭心症などに対する症状改善、予防又は治療に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、茶、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
【００２０】
本発明のプロポリスの有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、経口投与の場合、一般に乾燥重量として１日当たり１０〜５００ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは、１日当たり１５０〜３５０ｍｇ／ｋｇ体重程度とされ、１日に数回に分けて投与してもよい。
【００２１】
プロポリス又はその抽出物の毒性は低く、例えばブラジル産プロポリスのエタノール抽出物を毎日１０００ｍｇ／ｋｇ、１００日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【００２２】
【実施例】
以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
【００２３】
［製造例］プロポリス抽出物の製造
ブラジル産及び中国産プロポリス原塊それぞれ１０ｇに９９．５％エタノール（和光純薬工業）３Ｌを加え、５０℃で一晩浸漬した後、ロータリーエバポレーターにてエタノールを除去することにより、プロポリス抽出物をそれぞれ３２４ｍｇ、２１６ｍｇを得た。
【００２４】
［実施例］ＴＸＡ２合成酵素阻害活性試験
ＴＸＡ２合成酵素阻害活性試験は、ＷＡＤＥ，Ｍ．Ｌ．とＦＩＴＺＰＡＴＲＩＣＫ，Ｆ．Ａ．の方法（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，３４７，１７４−１８０，１９９７）を一部改変して、ヒト血小板ミクロソームのトロンボキサン合成酵素阻害活性を調べた。
【００２５】
すなわち、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に、血小板ミクロソーム（０．５ｍｇタンパク質）、１０μＭプロスタグランジンＨ２（以下、ＰＧＨ２と略す）、５ｍＭエピネフリン、２μＭヘミン、及び前記製造例で調製した各プロポリス抽出物を含む反応液（全量０．２ｍｌ）を用いた。各プロポリス抽出物と血小板ミクロソームを２２℃で３分間プレインキュベーションした後、基質として１０μＭＰＧＨ２を添加して２２℃で２分間反応させた。その後、塩化スズ溶液を添加して反応を停止し、生成したトロンボキサンＢ２（以下、ＴＸＢ２と略す）の量を、ＴＸＢ２ＥＩＡ（ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ）キット（アマシャムファルマシアバイオテク社製）を用いて測定し、次式にて阻害率（％）を算出した。その結果を表１に示した。
【００２６】
【数１】

（ここで、Ａは阻害剤を含まない場合のＴＸＢ２量を表わし、Ｂは阻害剤を添加した場合のＴＸＢ２量を表わす。）
【００２７】
なお、本反応系におけるポジティブコントロールとしてのＴＸＡ２合成酵素阻害剤であるフレグラレート（ｆｕｒｅｇｒｅｌａｔｅ）のＩＣ５０値（酵素活性を５０％阻害する濃度）は０．２１μＭであった。
【００２８】
表１から、本発明のプロポリス抽出物は、強力なＴＸＡ２合成酵素阻害活性を有することが分かる。
【００２９】
【表１】

【００３０】
以下に処方例を示す。
［錠剤の製造］
製造例で得られたブラジル産プロポリスのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。

【００３１】
［ジュースの製造］
製造例で得られた中国産プロポリスのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。

【００３２】
【発明の効果】
プロポリス又はその抽出物がＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有することから、これを含有するＴＸＡ２合成酵素阻害剤は、血栓、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、心筋梗塞、脳梗塞あるいは狭心症などに対する予防又は治療剤、それらを含有する経口用組成物、非経口用組成物、それらを含有する食品又は医薬として有用である。このような組成物は、長期間服用しても安全で、確実な治療を行うことができる。[0001]
[Technical field to which the invention belongs]
The present invention has a thromboxane A2 synthase inhibitory action and is an agent effective for the prevention or / and treatment of thrombus, bronchial asthma, myocardial infarction, cerebral infarction, angina pectoris, an oral composition containing them, or The present invention relates to oral compositions, foods or medicines containing them .
[0002]
[Prior art]
Thromboxane A2 (hereinafter abbreviated as TXA2), which is one of the metabolites of arachidonic acid, is produced by the action of TXA2 synthase and has strong effects such as platelet aggregation and vascular smooth muscle contraction (vasoconstriction, bronchoconstriction). Has a good physiological activity.
[0003]
When TXA2 is excessively produced in the body, it causes platelet aggregation, vascular occlusion, vasospasm, bronchoconstriction, etc., and causes of thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina It is known to be.
[0004]
Therefore, the inhibitor of TXA2 synthase selectively suppresses the production of TXA2, thereby preventing or treating the thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina. Usefulness can be expected.
[0005]
Conventionally, as a compound having a TXA2 synthase inhibitory action, ozacrel hydrochloride (product names: Vega, Domenan), seratrodast (product name: Bronica), ramatroban (product name: Binath), and the like are known.
[0006]
However, these compounds have been reported to exhibit side effects such as rare occurrence of severe liver dysfunction accompanied by increased serum bilirubin levels.
[0007]
Therefore, development of a natural product-derived TXA2 synthase inhibitor that is safe and has no side effects is strongly demanded. However, as far as the present inventors know, no natural product-derived TXA2 synthase inhibitor is safe. The current situation is not reported.
[0008]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is a safe, natural side effect-derived TXA2 synthase inhibitor, a prophylactic or therapeutic agent for thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina, and the like It is to provide an oral or parenteral composition, a food or medicament containing them .
[0009]
[Means for Solving the Problems]
As a result of earnest research to solve the above-mentioned problems, the present inventor has shown that propolis used for health supplements for the purpose of anticancer action and immunostimulatory action has a TXA2 synthase inhibitory action. The headline and the present invention were completed.
[0010]
That is, the present invention provides a preventive or therapeutic agent for TXA2 synthase inhibitor thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina pectoris containing propolis or an extract thereof, and for oral use containing these The present invention relates to a composition, a parenteral composition, a food containing the same , and a medicine.
[0011]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The propolis used in the present invention is a resinous black lump collected by bees, and may be from any origin, such as Brazilian propolis, Chinese propolis, Australian propolis, Uruguay propolis, Japanese propolis, etc. However, Brazilian propolis and Chinese propolis are preferable from the viewpoint of versatility.
[0012]
The propolis in the present invention is a dried product obtained by drying the propolis itself, a pulverized product thereof, a supercritical extract, a crude extract with water or an organic solvent such as alcohol, ether, acetone, etc., and a crude extract. All the extract fractions obtained by stepwise purification by various chromatographic methods are included. These may be used alone or in combination of two or more.
[0013]
For example, you can use an extract obtained by adding 3L of 99.5% ethanol extract to 1Kg of propolis from Brazil, and immersing it overnight at room temperature. The purified product may be used.
[0014]
The concentration of the propolis extract in the solution of the extracted propolis extract is not particularly limited, but is preferably 15 to 70% by mass, and preferably about 20 to 60% by mass. If this concentration is less than 15% by mass, it is necessary to evaporate a large amount of a solution such as ethanol or water at the time of drying. If it exceeds 70% by mass, the viscosity of the solution becomes too high, and the processability may be deteriorated.
[0015]
It has not been known at all that the dried product or extract of propolis according to the present invention has a TXA2 synthase inhibitory activity, and is a new finding obtained by the present invention.
[0016]
The propolis according to the present invention has an excellent TXA2 synthase inhibitory action, and is used as a food or medicine for the prevention or treatment of thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction, angina, etc. It can be used.
[0017]
The propolis of the present invention can be produced as a food or medicine containing a preventive or therapeutic agent for a TXA2 synthase inhibitor, thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina.
[0018]
As a method for applying a pharmaceutical agent such as a preventive or therapeutic agent for the TXA2 synthase inhibitor, thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction or angina pectoris of the present invention, oral administration or parenteral administration Either can be adopted. In administration, the active ingredient can be mixed with a solid or liquid nontoxic pharmaceutical carrier suitable for administration methods such as oral administration, rectal administration, and injection, and administered in the form of a conventional pharmaceutical preparation. Examples of such preparations include solid preparations such as tablets, granules, powders and capsules, solutions such as solutions, suspensions and emulsions, freeze-dried preparations, and the like. It can be prepared by conventional means. Non-toxic pharmaceutical carriers include, for example, glucose, lactose, sucrose, starch, mannitol, dextrin, fatty acid glycerides, polyethylene glycol, hydroxyethyl starch, ethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, amino acids, gelatin, albumin, Water, physiological saline, etc. are mentioned. Further, if necessary, conventional additives such as a stabilizer, a wetting agent, an emulsifier, a binder, and an isotonic agent can be appropriately added.
[0019]
The thromboxane A2 synthase inhibitor characterized by containing the propolis of the present invention or an extract thereof can also be added to foods.
As a food , various nutritional ingredients are added to the thromboxane A2 synthase inhibitor of the present invention or it is contained in foods and drinks to inhibit TXA2 synthase, thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, brain It is eaten as a health food or food material useful for symptom improvement, prevention, or treatment for infarction or angina. For example, after adding the above-mentioned appropriate auxiliaries, it may be used for edible by using conventional means, forming into an edible form, for example, granular, granular, tablet, capsule, paste, etc. It can also be used in various foods such as processed foods such as ham and sausage, processed fish foods such as kamaboko and chikuwa, bread, confectionery, butter, milk powder, fermented milk products, water, fruit juice, milk, You may add and use for drinks, such as tea and a soft drink.
[0020]
The effective dose of the propolis of the present invention is appropriately selected and determined according to the patient's age, body weight, symptoms, patient grade, administration route, administration schedule, formulation form, strength of the inhibitory activity of the material, etc. In the case of oral administration, the dry weight is generally about 10 to 500 mg / kg body weight per day, preferably about 150 to 350 mg / kg body weight per day, and may be divided into several times a day.
[0021]
The toxicity of propolis or its extract is low. For example, even if ethanol extract of Brazilian propolis is orally administered to rats over a long period of 1000 mg / kg daily for 100 days, no deaths are observed and body weight changes are not observed. Not observed.
[0022]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
[0023]
[Production Example] Production of propolis extract 3 g of 99.5% ethanol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to 10 g each of Brazilian and Chinese propolis ingots, soaked overnight at 50 ° C., and then ethanol was added on a rotary evaporator. Removal of propolis extract yielded 324 mg and 216 mg, respectively.
[0024]
[Example] TXA2 synthase inhibitory activity test The TXA2 synthase inhibitory activity test was conducted according to WADE, M. et al. L. And FITZPATRICK, F.M. A. (Arch. Biochem. Biophys., 347, 174-180, 1997) was partially modified to examine the thromboxane synthase inhibitory activity of human platelet microsomes.
[0025]
Specifically, platelet microsomes (0.5 mg protein), 10 μM prostaglandin H2 (hereinafter abbreviated as PGH2), 5 mM epinephrine, 2 μM hemin in 10 mM phosphate buffer (pH 7.4). A reaction solution (total amount 0.2 ml) containing each propolis extract was used. Each propolis extract and platelet microsomes were preincubated at 22 ° C. for 3 minutes, and then 10 μM PGH2 was added as a substrate and reacted at 22 ° C. for 2 minutes. Thereafter, the reaction was stopped by adding a tin chloride solution, and the amount of thromboxane B2 (hereinafter abbreviated as TXB2) was measured using a TXB2EIA (Enzyme Immuno Assay) kit (Amersham Pharmacia Biotech), The inhibition rate (%) was calculated by the following formula. The results are shown in Table 1.
[0026]
[Expression 1]

(Here, A represents the amount of TXB2 when no inhibitor is contained, and B represents the amount of TXB2 when an inhibitor is added.)
[0027]
In addition, the IC50 value (concentration that inhibits enzyme activity by 50%) of a furegrate, which is a TXA2 synthase inhibitor as a positive control in this reaction system, was 0.21 μM.
[0028]
From Table 1, it can be seen that the propolis extract of the present invention has strong TXA2 synthase inhibitory activity.
[0029]
[Table 1]

[0030]
A prescription example is shown below.
[Manufacture of tablets]
Using the ethanol extract of Brazilian propolis obtained in Production Example, tablets having the following composition were produced according to a conventional method.

[0031]
[Manufacture of juice]
Using the ethanol extract of Chinese propolis obtained in the production example, a juice having the following composition was produced according to a conventional method.

[0032]
【The invention's effect】
Since propolis or an extract thereof has a TXA2 synthase inhibitory action, TXA2 synthase inhibitors containing the propolis can prevent or treat thrombus, bronchial asthma, allergic rhinitis, myocardial infarction, cerebral infarction, angina, etc. agents, oral compositions containing them, parenteral compositions are useful as food or pharmaceutical containing their these. Such a composition can be safely and reliably treated even when taken for a long period of time.

Claims

A thromboxane A2 synthase inhibitor characterized by containing propolis or an extract thereof.