JP4508656B2 - 腫瘍を死滅させるための組成物および方法 - Google Patents
腫瘍を死滅させるための組成物および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4508656B2 JP4508656B2 JP2003579860A JP2003579860A JP4508656B2 JP 4508656 B2 JP4508656 B2 JP 4508656B2 JP 2003579860 A JP2003579860 A JP 2003579860A JP 2003579860 A JP2003579860 A JP 2003579860A JP 4508656 B2 JP4508656 B2 JP 4508656B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tumor
- prostate
- promoter
- gene
- fludarabine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/761—Adenovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/66—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid the modifying agent being a pre-targeting system involving a peptide or protein for targeting specific cells
- A61K47/67—Enzyme prodrug therapy, e.g. gene directed enzyme drug therapy [GDEPT] or VDEPT
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10111—Atadenovirus, e.g. ovine adenovirus D
- C12N2710/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10111—Atadenovirus, e.g. ovine adenovirus D
- C12N2710/10141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
(i)固形腫瘍に遺伝子操作したヒツジのアタデノウイルスを含む組成物を送達する工程;および
(ii)被験体にプロドラッグを投与する工程;
を含む、被験体の固形腫瘍を治療する方法であって、
前記遺伝子操作したヒツジアタデノウイルスが、プロモーター、および前記プロドラッグを細胞傷害性代謝産物に変換する酵素をコードする遺伝子を含み、前記遺伝子が前記プロモーターの制御下にある、前記方法を提供する。
(i)遺伝子操作したヒツジアタデノウイルス;および
(ii)脂質;
を含む組成物であって、
前記遺伝子操作したヒツジアタデノウイルスがプロモーター、およびプロドラッグを細胞傷害性代謝産物に変換する酵素をコードする遺伝子を含み、
前記遺伝子が前記プロモーターの制御下にある、前記組成物を提供する。
(i)固形腫瘍に遺伝子操作したヒツジのアタデノウイルスを含む組成物を送達する工程;および、
(ii)被験体にプロドラッグを投与する工程;
を含む、被験体の固形腫瘍を治療する方法であって、
前記遺伝子操作したヒツジアタデノウイルスが、プロモーター、およびプロドラッグを細胞傷害性代謝産物に変換する酵素をコードする遺伝子を含み、前記遺伝子が前記プロモーターの制御下にある、前記方法を提供する。好ましくは、プロモーターは、特定の組織において選択的に活性である。固形腫瘍は前立腺癌であることが好ましい。
analysis of the human prostate-specific membrane antigen gene」、Biochimica Et Biophysica Acta 1443:113〜27頁)。
(i)遺伝子操作したヒツジアタデノウイルス;および、
(ii)脂質;
を含む組成物であって、
前記遺伝子操作したヒツジアタデノウイルスがプロモーター、およびプロドラッグを細胞傷害性代謝産物に変換する酵素をコードする遺伝子を含み、前記遺伝子が前記プロモーターの制御下にある、前記組成物を提供する。好ましくは、プロモーターは、特定の組織において選択的に活性である。プロモーターは好ましくは前立腺特異的膜抗原プロモーターである。さらに好ましくは、プロモーターはプロバシンプロモーターである。
OAdVがin vivoにおいて遺伝子を腫瘍に送達し得るかどうかを判断するために、ヒト前立腺癌、アンドロゲン非依存性細胞系PC3由来の細胞(1.5×106細胞/腫瘍)をBALB/c(nu/nu)「[ヌード]」マウスの皮下(sc)に移植した。直径で約5mmに増殖するまで、腫瘍を3〜6週間増殖させた。次いで、腫瘍に、ヒト胎盤アルカリフォスファターゼ遺伝子を発現するヒツジアタデノウイルスベクターであるOAdV216を1.2×108プラーク形成単位(pfu)注入した。腫瘍を注入後4日目に回収し、凍結して切片化し、リポーター遺伝子活性について染色した。代表的な腫瘍切片を広くアルカリフォスファターゼで染色することにより、腫瘍内にウイルスが広範囲に行き渡り、腫瘍細胞の感染が生じたことを示すことが認められた。
RM-1は、ras発癌遺伝子およびmyc発癌遺伝子を有するC57BL/6マウス胚の生殖隆起から細胞の形質転換によって誘導されたアンドロゲン非依存性細胞系である。これらの細胞は、適当な位置でC57BL/6マウスへ移植された場合、皮下または前立腺のいずれかに腫瘍を形成し得る。また、細胞が尾部静脈を経由して静脈内注射(iv)された場合には肺偽転移も形成し得る(Hallら、1997年、「Adenovirus-mediated herpes simplex virus thymidine kinase gene and ganciclovir therapy leads to systemic activity against spontaneous and induced metastasis in an orthotopic mouse model of prostate cancer」、Int J Cancer 70、183〜187頁;Hallら、1998年、「Induction of potent antitumor natural killer cell activity by herpes simplex virus thymidine kinase and ganciclovir therapy in an orthotopic mouse model of prostate cancer」、Cancer Res 58:3221〜3225頁)。
動物モデルと臨床試験における本発明者らの研究の橋渡しとして、本発明者らは、ウイルス系ベクターが手術後のヒト前立腺組織にリポーター遺伝子を送達し得るかどうかについて調べた。組織薄片(前立腺の経尿道的切除術(TURP)から得たもの、または前立腺の様々な症状に対して手術を受けている患者由来の前立腺全摘出術標本から得られたもの)を小さな断片に切断した。前立腺組織のこれらの断片を組織培養ウェルの数個のゲルフォーム(gel foam)の上のマトリゲルに置き、培地(T-培地(Thalmann GN、Sikes RA、Chang F-M、Johnston DA、von Eschenbach ACおよびChung LWK、「Suramin-introduced decrease in prostate specific antigen expression with no effect on tumour growth in the LNCaP model of human prostate cancer」、J. Nat. Cancer Inst. 88:794〜801頁)をウェル中、ゲルフォームの高さまで入れた(しかし組織にはかからないようにした)。一晩インキュベーションした後、この組織に、OAdV217A(サイトメガロウイルス(CMV)前初期プロモーターの制御下に緑色蛍光タンパク質(GFP)リポーター遺伝子を含有するウイルス)を形質導入した。組織の緑色蛍光はウイルス形質導入を立証する証拠として提供された。組織の生存率は、ヨウ化プロピジウム排除によって判断した。これは定量的アッセイでないが、得られた結果からは、組織が生存可能であった場合に、OAdVベクターが首尾よく主要なヒト前立腺組織に形質導入されたことが明らかになった。サンプルは、良性の増殖性炎から高度の腫瘍組織に至るまで、首尾よく形質導入された。
PNPベースのGDEPT系がin vivoにおける腫瘍増殖を抑制する能力については、ヌードマウス中で増殖させた皮下ヒトPC3腫瘍を用いて試験した。腫瘍を一度確立し(実施例1を参照)、0日目に、2群のマウスに1×1010VPのOAdV220を腫瘍内注入した。さらなる2群にはウイルス保存バッファーのみを与えた。この治療後、ウイルス群のうちの1群のすべての動物と、ウイルス無の群のうちの1群のすべての動物に、次の5日間、フルダラビン(75mg/m2/日)を毎日腹腔内(ip)注射した。動物の重量と腫瘍体積は週に2回記録した。ベクターのみの群を、ウイルス無の群、プロドラッグ無の群と比較した。ベクターおよびフルダラビンを投与された群をフルダラビンのみを投与された群と比較した。OAdV220ベクター単独の場合、腫瘍増殖は30%低減した。しかし、フルダラビンと共にウイルスを用いた場合には腫瘍全体の増殖抑制は71%まで高まった。
機能している免疫系の存在下、GDEPT治療が腫瘍増殖を抑制し得ることを確認するため、C57BL/6マウスに5日前に2.5×105個のRM-1腫瘍細胞を皮下注射し、腫瘍を増殖させた。0日目に、OAdV220を6×109VP/腫瘍でこれらの腫瘍に注入した。1〜5日に、マウスにフルダラビン600mg/m2/日、または同容量の生理的食塩水を腹腔内投与した。動物の重量と腫瘍体積は週に2回記録した。図4は、コントロールと比較した場合、フルダラビンおよびOAdVが腫瘍全体の増殖を35%低減したことを示している。12日目(群比較がまだ可能だった時期(すなわち、コントロールマウスがまだ生存していた時期)に、フルダラビン単独と比較して、OAdV220/フルダラビン群では平均腫瘍体積に59%の低減が認められた。図5は、OAdV220/フルダラビン治療マウスの30%は、16日目までにすべて死亡したコントロールマウスと比較すると、3日以上長く生存していたことを示している。これらの結果から、特にこの特定の腫瘍モデルに攻撃性を付与することが期待される。
RM-1腫瘍は非常に攻撃性のある癌モデルを提供する。したがって、実施例5で示した効果によりヒト疾患の治療において期待され得る効果の評価が見込めそうである。注射後5日よりも前に腫瘍にウイルスを形質導入することができる場合には、前立腺癌が比較的ゆっくりと増殖し、ヒトの疾患を治療するための良好なモデルが得られるであろうと考えられた。しかし実際には、このモデルで5日よりも前に腫瘍を正確に注入することは非常に困難である。したがって、マウスへの注入に先立って、in vitroにおいてRM-1腫瘍細胞をウイルスで形質導入する選択的手法を採用した。
ヒト前立腺癌細胞のウイルス形質導入を亢進するのにカチオン性脂質を使用できるかどうかについて調べるため、2種類のヒト前立腺癌細胞系(PC3およびLNCaP)を96ウェルプレートで培養し、ヒトマストアデノウイルス(AdV5)またはリポーター遺伝子を含有するヒツジアタデノウイルスを用いて治療し、カチオン性脂質の有無とリポーター遺伝子発現の相対量を検出した。PC3細胞は10%FCSを添加したRPMI培地で培養した。LNCaP細胞についてはすでに報告されているようにして培養した(Thalmann GNら、1996年、「Suramin-induced decrease in prostate-specific antigen expression with no effect on tumour growth in the LNCaP model of human prostate cancer」、J Nat. Cancer Inst 88:794〜801頁)。試験前日に細胞を96ウェル培養トレーのウェルへ分注した(両細胞系に対し、1ウェル当たり2×104細胞とした;LNCaP細胞については、細胞の添加の30分前に培養トレーのウェルを10%フィブロネクチンで前処理し、細胞培養と酵素アッセイに含まれる多数の洗浄ステップにおける細胞のトレーへの付着を高めた)。0日目に、血清非含有培地中のウイルス4種類の一連の同一希釈液をマイクロタイタープレートの縦の列にわたって調製した(100μl当たり50、25、12.5および6.25×108VP)。別のマイクロタイタートレーでは、4種類のトリス結合カチオン性脂質(CS60またはCS87、図7を参照)の一連の同一希釈液をプレートの横の列に調製して入れた(21、10.5、5.25、および0μM、容量100μl)。脂質トレー中の対応するウェルにウイルス希釈液(100μl)を移した。この混合物を15分間室温にて静置した後、細胞へ用いた。ウイルスを形質導入させるため、4時間CO2インキュベーターに培養物を戻した。次いで、10%の最終濃度までウシ胎仔血清を添加し、そのプレートをインキュベーターに戻した。ウイルス感染の2日後、MTSアッセイを用いて培養物の生存率を試験した。次いで、PBSで2回ウェルを洗浄し、各ウェルに溶菌バッファー(50μl、10mMトリス、0.2%トリトンX100、pH8.0)を添加し、プレートを-70℃で凍結させた。
免疫能が正常な動物モデル内の臨床的前立腺癌を模倣するために、RM-1腫瘍は、1日目にマウス1匹当たり5×103個のRM-1細胞(〜50μl細胞懸濁液)を前立腺内注入することによってC57BL/6マウスの前立腺内に確立した。4日目に、これらのマウスに1腫瘍当たり1×1010VPのOAdV220を単独、あるいは10μMのCS87と一緒に製剤化したものを前立腺内に注入した(下記の群を参照)。次いで、5日〜10日に、フルダラビンを適当な群に600mg/m2/日で前立腺内注射(ip)した。6日目に、マウス1匹当たり2.5×105個のRM-1細胞(〜50μl細胞懸濁液)を静脈注射することによって、肺中に偽転移を誘導した。外科手術の制限に基づいて、1日当たり30回しか前立腺内注射は実施することができない。したがって、実験のタイミングを混乱させないために注意したが、異なる4日の日に実験をセットアップした。マウスを週に2回体重測定し、18日目に殺した。分析(前立腺体積および前立腺重量)のために組織を回収した。
A群 OAdV220単独±フルダラビン、
B群 治療無(保存バッファー)±フルダラビン、
C群 OAdV220と10μMのCS87±フルダラビン、
D群 10μMのCS87単独±フルダラビン。
ラットプロバシン遺伝子(PSM/PB)由来の430bpプロキシマルプロモーターに結合されている1kbのPSMエンハンサーを含有するキメラプロモーターを、PNP遺伝子/ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列に結合した。異なる2つの挿入部位(部位Iおよび部位III)でOAdVゲノム内へこの発現カセットを組み入れ、それぞれウイルスOAdV223およびOAdV623を得た(図1を参照)。異なる細胞タイプをOAdV223、OAdV623、または構成的RSVまたはCMVプロモーターの制御下にPNP遺伝子が存在するウイルス(それぞれ、OAdV220、OAdV222と称する)に感染させた。この適切なウイルスによる感染の2日後に細胞抽出物を調製し、基質として6MPDRを用いる以外は実施例2に記載されているとおりにPNP活性を測定した。
OAdV623は、前立腺特異的プロモーター、PSM/Pbの制御下にPNP遺伝子を含有する発現カセットを含有している。このプロモーターはヒト前立腺細胞においてのみ活性である。脂質とプロドラッグとを組み合わせたこのウイルスがヒト前立腺癌に対する高腫瘍反応を誘導し得るかどうかを試験するため、ヌードマウスにヒト前立腺癌細胞系LN3由来の腫瘍を確立した、以下のようにして治療した。
Claims (2)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AUPS1456A AUPS145602A0 (en) | 2002-03-28 | 2002-03-28 | Composition and method for killing tumours |
PCT/AU2003/000381 WO2003082323A1 (en) | 2002-03-28 | 2003-03-28 | A composition and method for killing of tumours |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005531525A JP2005531525A (ja) | 2005-10-20 |
JP4508656B2 true JP4508656B2 (ja) | 2010-07-21 |
Family
ID=3835044
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003579860A Expired - Fee Related JP4508656B2 (ja) | 2002-03-28 | 2003-03-28 | 腫瘍を死滅させるための組成物および方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20060177423A1 (ja) |
EP (1) | EP1494705B1 (ja) |
JP (1) | JP4508656B2 (ja) |
AT (1) | ATE493144T1 (ja) |
AU (2) | AUPS145602A0 (ja) |
CA (1) | CA2519642A1 (ja) |
DE (1) | DE60335535D1 (ja) |
WO (1) | WO2003082323A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8771679B2 (en) * | 2008-08-13 | 2014-07-08 | The John Hopkins University | Prodrug activation in cancer cells using molecular switches |
US10357577B2 (en) | 2010-07-16 | 2019-07-23 | Auckland Uniservices Limited | Bacterial nitroreductase enzymes and methods relating thereto |
CN103501824A (zh) * | 2011-02-18 | 2014-01-08 | Uab研究基金会 | 与嘌呤核苷磷酸化酶或核苷水解酶的前体药物的改进的治疗用途相关的应用 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5583198A (en) * | 1989-12-22 | 1996-12-10 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization | Amino acids, peptides or derivatives thereof coupled to fats |
US7037712B2 (en) * | 1994-07-26 | 2006-05-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | DNA encoding ovine adenovirus (OAV287) and its use as a viral vector |
AUPM710194A0 (en) * | 1994-07-26 | 1994-08-18 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Virus vector |
AUPM747694A0 (en) * | 1994-08-16 | 1994-09-08 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Delivery of nucleic acids and peptides |
US6197293B1 (en) * | 1997-03-03 | 2001-03-06 | Calydon, Inc. | Adenovirus vectors specific for cells expressing androgen receptor and methods of use thereof |
AUPN477695A0 (en) * | 1995-08-14 | 1995-09-07 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Gene therapy |
AUPN741696A0 (en) * | 1996-01-05 | 1996-01-25 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Delivery of nucleic acids ii |
CZ299810B6 (cs) * | 1996-08-12 | 2008-12-03 | Celgene Corporation | Substituovaná aromatická sloucenina a její použití pro snížení hladiny cytokinu |
US5772993A (en) * | 1997-01-21 | 1998-06-30 | The University Of Virginia Patent Foundation | Osteocalcin promoter-based toxic gene therapy for the treatment of calcified tumors and tissues |
CA2364492C (en) * | 1999-03-01 | 2014-08-19 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Regulatory constructs comprising intron 3 of prostate specific membrane antigen gene |
JP4550421B2 (ja) * | 2001-12-12 | 2010-09-22 | メイン・ファ−マ・インタ−ナショナル・プロプライエタリ−・リミテッド | ウイルスの保存のための組成物 |
-
2002
- 2002-03-28 AU AUPS1456A patent/AUPS145602A0/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-03-28 AT AT03745189T patent/ATE493144T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-03-28 DE DE60335535T patent/DE60335535D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-03-28 AU AU2003215419A patent/AU2003215419B2/en not_active Ceased
- 2003-03-28 CA CA002519642A patent/CA2519642A1/en not_active Abandoned
- 2003-03-28 JP JP2003579860A patent/JP4508656B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-03-28 WO PCT/AU2003/000381 patent/WO2003082323A1/en active Application Filing
- 2003-03-28 US US10/509,513 patent/US20060177423A1/en not_active Abandoned
- 2003-03-28 EP EP03745189A patent/EP1494705B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-11-20 US US12/292,499 patent/US20090104154A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE60335535D1 (de) | 2011-02-10 |
CA2519642A1 (en) | 2003-10-09 |
ATE493144T1 (de) | 2011-01-15 |
JP2005531525A (ja) | 2005-10-20 |
WO2003082323A1 (en) | 2003-10-09 |
AU2003215419A1 (en) | 2003-10-13 |
EP1494705A1 (en) | 2005-01-12 |
EP1494705B1 (en) | 2010-12-29 |
AU2003215419B2 (en) | 2008-10-30 |
AUPS145602A0 (en) | 2002-05-09 |
US20060177423A1 (en) | 2006-08-10 |
US20090104154A1 (en) | 2009-04-23 |
EP1494705A4 (en) | 2006-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6096718A (en) | Tissue specific adenovirus vectors for breast cancer treatment | |
Witlox et al. | Evolving gene therapy approaches for osteosarcoma using viral vectors | |
WO1994010323A1 (en) | Virus with modified binding moiety specific for the target cells | |
JPH11506302A (ja) | 組織特異的低酸素で調節される治療用構築物 | |
EP1301612A2 (en) | Method and composition for targeting an adenoviral vector | |
JP2002516568A (ja) | α−フェトタンパク質を発現する細胞に特異的なアデノウイルスベクターおよびその使用の方法 | |
Mabjeesh et al. | Gene therapy of prostate cancer: current and future directions. | |
US7871819B2 (en) | Regulatory constructs comprising intron 3 of prostate specific membrane antigen gene | |
JP2002511751A (ja) | スプライシング配列を含んでなる組換えアデノウイルスベクター | |
Martiniello-Wilks et al. | Transcription-targeted gene therapy for androgen-independent prostate cancer | |
US20110178282A1 (en) | Methods and compositions for cancer therapy using a novel adenovirus | |
JP4508656B2 (ja) | 腫瘍を死滅させるための組成物および方法 | |
Alt et al. | Liver-directed gene therapy: molecular tools and current preclinical and clinical studies | |
Schmidt-Wolf et al. | Human cancer and gene therapy | |
Fu et al. | Potential adenovirus-mediated gene therapy of glioma cancer | |
JP5550803B2 (ja) | 新規アデノウイルスを用いた癌治療方法及び組成物 | |
US20020025307A1 (en) | Bone sialoprotein based toxic gene therapy for the treatment of calcified tumors and tissues | |
US7011976B1 (en) | Adenovirus vectors specific for cells expressing alpha-fetoprotein and methods of use thereof | |
JP2003527128A (ja) | 治療のためのオステオカルシンプロモーター指令型アデノウイルスの複製 | |
RU2447150C1 (ru) | Средство для генной терапии злокачественных опухолей | |
CN113521310A (zh) | 一种杀伤基因突变肿瘤细胞药物及其制备方法和应用 | |
Carroll et al. | Gene therapy for liver tumors | |
Friedmann | Recombinant Protein Drugs 169 ed. by P. Buckel© 2001 Birkhäuser Verlag/Switzerland | |
Weiss et al. | THE DEVELOPMENT OF TARGETTABLE VECTORS FOR THE LIVER AND PROSPECTS FOR TREATMENT | |
Liu et al. | Problems, Side Effects, and Disappointments in Clinical Cancer Gene Therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051228 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090203 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090501 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090513 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090707 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090707 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090901 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20091120 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20091130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100301 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100330 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100427 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |