JP4452346B2

JP4452346B2 - Method for eradication of Staphylococcus aureus and novel microorganisms belonging to the genus Brachybacterium

Info

Publication number: JP4452346B2
Application number: JP20104099A
Authority: JP
Inventors: 栄三伊東; 直樹伊東
Original assignee: 株式会社伸栄フェルメンテック
Priority date: 1999-07-14
Filing date: 1999-07-14
Publication date: 2010-04-21
Anticipated expiration: 2019-07-14
Also published as: JP2001031514A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、黄色ブドウ球菌の除菌方法及びブラキバクテリウム（Brachybacterium）属に属する新規微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ブラキバクテリウム属に属する細菌としては、現在のところ下記のようなものが知られている。
Brachybacterium conglomeratum
Brachybacterium faecium
Brachybacterium nesterenkovii
Brachybacterium paraconglomeratum
Brachybacterium rhamnosum
しかしながら、これらのブラキバクテリウムについては、その産業的利用性については、全く研究がなされていないのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本願の発明者らは、ブラキバクテリウムについて鋭意研究を重ねたところ、ブラキバクテリウムは、黄色ブドウ球菌に対する抗菌性を持つことを知見した。
本発明の課題は、この知見に基づくものであり、上記ブラキバクテリウムを用いた黄色ブドウ球菌の除菌方法を提供することにある。
さらに、本発明者らは、ブラキバクテリウム属に属する有用な新菌株を求めて鋭意探索したところ、他のブラキバクテリウムと同様に黄色ブドウ球菌に対して抗菌機能を有する一菌株を土壌から分離することに成功した。
本発明の他の課題は、ブラキバクテリウム属に属する新規微生物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、下記構成（１）および２によって達成することができる。
（１）寄託番号：FERM P-１６９５１として独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託されているものであって、黄色ブドウ球菌に対する抗菌性、脱臭機能および鮮度保存作用を備えたバクテリウム属に属する新規微生物。
（２）上記（１）に記載されたブラキバクテリウム属に属する微生物を黄色ブドウ球菌に接種して、黄色ブドウ球菌を除菌することを特徴とする黄色ブドウ球菌を除菌方法。
【０００５】
▲１▼ インターナショナルジャーナルシステマティックバクテリオロジー（International Journal Systematic Bacteriology）、第３８巻、第４５〜４８ページ（１９８８）
▲２▼ インターナショナルジャーナルシステマティックバクテリオロジー（International Journal Systematic Bacteriology）、第４２巻、第７４〜７８ページ（１９９２）
▲３▼ インターナショナルジャーナルシステマティックバクテリオロジー（International Journal Systematic Bacteriology）、第４６巻、第８１〜８７ページ（１９９６）
▲４▼ インターナショナルジャーナルシステマティックバクテリオロジー（International Journal Systematic Bacteriology）、第４５巻、第１６０〜１６８ページ（１９９５）
【０００６】
その結果、その微生物は、多形成を示す無芽胞のグラム陽性桿菌であることからブラキバクテリウムであると同定されたが、菌体成分の分析結果が、上記の文献に記載されているいずれの菌種とも一致せず、ブラキバクテリウムに属する新菌であることが確認された。当該微生物は、ブラキバクテリウム（Brachybacterium）菌株AAA−a（寄託番号：ＦＥＲＭＰ−１６９５１）として工業技術院生命工学工業技術研究所微生物寄託センターに寄託されている。
【０００７】
以下、本発明のブラキバクテリウムに属する新規微生物の菌学的性質を説明する。
【０００８】

【０００９】
本発明の新規微生物は一般栄養培地であるならいかなる培地でも良好に成育する。
【００１０】
培養は、好ましくは５〜３０℃、最も好ましくは１８〜２７℃程度で良好に増殖する。
【００１１】
本発明の新規微生物の形態的性質は下記の通りである。
（１）細胞の形及び大きさ：
▲１▼ 肉汁寒天培地を用いて培養した場合
・３０℃、６時間培養では１．２〜１．４×１．５〜１．９ミクロンの多形性の短桿菌である。
・３０℃、２４時間培養では１．２〜１．４×１．２〜１．５ミクロンの球菌様を示す。
▲２▼ 肉汁液体培地を用いて培養した場合
３０℃、２４時間培養で１．０〜１．２×１．３〜１．４ミクロンの球菌様を示す。
（２）細胞の多形性：
多形性、及び、桿状−球状サイクルを認める（図１および２を参照）。
（３）運動性は認められない。
（４）胞子の形成は認められない。
【００１２】
各培地における本発明の新規微生物の培養的性質は下記の通りである。
（１）肉汁寒天平板培地を用いて培養した場合：
・集落は平滑、全縁で光沢が認められる。
・黄色系の集落色素の生成が認められる。
（２）肉汁液体培地を用いて培養した場合：
・培地全体における生育及び沈殿が認められる。
・表面皮膜の形成は認められない。
（３）肉汁ゼラチン穿刺を用いて培養した場合：
・培地の上部に生育が認められるが、液化は認められない。
（４）リトマス・ミルクを用いて培養した場合：
・培地全体に生育が認められるが、凝固及び液化は認められない。
・酸の生成がわずかに認められる。
本発明の新規微生物は、水や液体培地に分散させ分散液の状態で各種用途に用いることができるが、好ましくは微生物群を担体に固定し、取扱を容易にした担体固定化微生物群として用いる。
【００１３】
微生物群を固定する担体としては、微生物の保持容量が大きく、また微生物の活性化が容易であることが好ましい。
【００１４】
担体としては、岩石（例えば、真珠岩、珪藻土）またはその粉砕物、砂利、砂、プラスチックス、セラミックス（例えば、アルミナ、シリカ、天然ゼオライト、合成ゼオライト）、タルク等も好ましく、特に、多孔質セラミックス、多孔質プラスチックスのような連続通気孔を有する多孔質材料が好ましい。例えば、真珠岩の粉砕物を高温高圧で保持し熱処理した後、急激に減圧して多孔質にした微細粉（商品名：パーライト）は、菌類を着生させる性質があるため、好適である。このような多孔質材料において、通気孔の径は、２〜１０μｍ程度であることが好ましい。また、このような担体の性状（形状）としては、塊状物、粒体、粉体、微粉末または板状物、針状物等いかなるものでもよいが、好ましくは平均粒径が２ｍｍ以下、特に５０μｍ〜１ｍｍ程度の粉粒体がよい。なお、このような担体固定化微生物群は、必要に応じて、布やネット等の通水性や通気性のよい容器に収納して使用してもよい。
【００１５】
上記担体としては、これらの他、リボン状やシート状の織布や不織布を用いることができる。
【００１６】
このような担体に微生物群を担持させるには、担体と本発明の微生物群分散液とを混合した後、乾燥すればよいが、担体で直接微生物群を培養してもよい。
【００１７】
担体の微生物群の担持量は、担持させるときの条件によっても異なるが、好ましくは、５個〜２００億個／ｃｍ^３、更に好ましくは１０個〜１００億個／ｃｍ^３である。
【００１８】
本発明の担体固定化微生物群は、黄色ブドウ球菌の除菌に有効である。また、本発明の新規微生物は、養豚所、公衆便所等に用いて、脱臭効果が確認された。
【００１９】
なお、本発明の新規微生物は、マウスによる経口投与試験によりその安全性が確認された。
【００２０】
【実施例】
次に、本発明の実施例について説明する。
まず、次のような組成の培地を作成した。
【００２１】
培地
ペプトン５ｇ
肉エキス５ｇ
水５００ｍ１
培地のｐＨ６．８±０．２
以上の組成の培地にブラキバクテリウム菌株AAA−aを接種し、３０℃にて振とう培養を行った。対数期に達した培地を滅菌した生理食塩水にて希釈し、生菌数約１×１０^８／ｍｌになるように調整し、この調整液を直接ブドウ球菌に振り掛けることにより接種したところ、ハローの特性が認められた。上記の他のブラキバクテリウムについても同様の実験を行ったところ、上記新規菌株よりは機能が劣るものの、黄色ブドウ球菌に対してハローの特性が認められた。
【００２２】
一方、得られた調整液を遠心分離機にかけ、菌体を分離し、これをよく洗浄し、担体に付着させてパウダーとした。担体としては、珪藻土を焼いて粉砕したものを用いた。
【００２３】
このパウダー状のブラキバクテリウム菌株AAA−aを、１本のままの腐った鰯に振りかけ２５℃で保管した。２時間経過後にその臭いをかいだところ、明らかに臭気が減少していた。また、ブラキバクテリウム菌株AAA−aを、新鮮な鰯に振りかけ２５℃で保管したところ、４８時間を経過しても腐臭はしなかった。一方、ブラキバクテリウム菌株AAA−aを振りかけずにそのままの状態で２５℃で保管した鰯は、２４時間経過でかなり臭いがきつくなった。
【００２４】
このように、本発明のブラキバクテリウム菌株AAA−aは、脱臭作用および鮮度保存作用も備えている。
【図面の簡単な説明】
【図１】図面代用写真であって、本発明による新規微生物の形態を示す顕微鏡写真である。
【図２】図面代用写真であって、本発明による新規微生物の形態を示す顕微鏡写真である。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a method for sterilizing Staphylococcus aureus and a novel microorganism belonging to the genus Brachybacterium.
[0002]
[Prior art]
At present, the following bacteria are known as bacteria belonging to the genus Brachybacterium.
Brachybacterium conglomeratum
Brachybacterium faecium
Brachybacterium nesterenkovii
Brachybacterium paraconglomeratum
Brachybacterium rhamnosum
However, there is currently no research on the industrial applicability of these Brachybacterium.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
Thus, the inventors of the present application conducted extensive research on Brachybacterium and found that Brachybacterium has antibacterial properties against Staphylococcus aureus.
The object of the present invention is based on this finding, and is to provide a method for sterilizing Staphylococcus aureus using Brachybacterium.
Furthermore, the present inventors have eagerly searched for useful new strains belonging to the genus Brachybacterium, and isolated one strain having antibacterial function against Staphylococcus aureus as well as other Brachybacterium from the soil. Succeeded in doing.
Another object of the present invention is to provide a novel microorganism belonging to the genus Brachybacterium.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
The above object can be achieved by the following configurations (1) and 2.
(1) Deposit number: FERM P-16951, deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Biological Deposit Center, which has antibacterial properties against staphylococcus aureus, deodorizing function and freshness preservation A new microorganism belonging to the genus.
(2) A method for sterilizing Staphylococcus aureus, comprising inoculating Staphylococcus aureus with a microorganism belonging to the genus Brachybacterium described in (1 ) above, and sterilizing Staphylococcus aureus.
[0005]
(1) International Journal Systematic Bacteriology, Volume 38, pages 45-48 (1988)
(2) International Journal Systematic Bacteriology, Volume 42, Pages 74-78 (1992)
(3) International Journal Systematic Bacteriology, Vol. 46, 81-87 (1996)
(4) International Journal Systematic Bacteriology, Volume 45, pages 160-168 (1995)
[0006]
As a result, the microorganism was identified as Brachybacterium because it is a spore-free gram-positive gonococcus showing polyplasia, but the analysis result of the bacterial cell component is any of those described in the above documents. It did not agree with the bacterial species, and was confirmed to be a new bacterium belonging to Brachybacterium. The microorganism is deposited in the Microorganism Deposit Center of the Biotechnology Institute of Industrial Science and Technology as the Brachybacterium strain AAA-a (deposit number: FERM P-16951).
[0007]
Hereinafter, the mycological properties of the novel microorganism belonging to Brachybacterium of the present invention will be described.
[0008]

[0009]
The novel microorganism of the present invention grows well in any medium that is a general nutrient medium.
[0010]
The culture preferably grows well at about 5 to 30 ° C., most preferably about 18 to 27 ° C.
[0011]
The morphological properties of the novel microorganism of the present invention are as follows.
(1) Cell shape and size:
(1) When cultivated using a broth agar medium • When cultured at 30 ° C. for 6 hours, it is a polymorphic short bacillus having a size of 1.2 to 1.4 × 1.5 to 1.9 microns.
-It shows 1.2-1.4x1.2-1.5 micron-like cocci in the culture at 30 ° C for 24 hours.
{Circle around (2)} When cultured using a broth liquid medium, it shows a cocci-like shape of 1.0 to 1.2 × 1.3 to 1.4 microns when cultured at 30 ° C. for 24 hours.
(2) Cell polymorphism:
A polymorphism and a saddle-spherical cycle are observed (see FIGS. 1 and 2).
(3) No motility is observed.
(4) Spore formation is not observed.
[0012]
The culture properties of the novel microorganism of the present invention in each medium are as follows.
(1) When cultured using a broth agar plate medium:
・ The village is smooth and glossy at all edges.
・ Yellow colony pigment formation is observed.
(2) When cultured using a broth liquid medium:
-Growth and precipitation in the whole medium are observed.
・ Surface film formation is not observed.
(3) When cultured using gravy gelatin puncture:
・ Growth is observed at the top of the medium, but no liquefaction is observed.
(4) When cultured using litmus milk:
・ Growth is observed throughout the medium, but coagulation and liquefaction are not observed.
-Slight acid formation is observed.
The novel microorganism of the present invention can be dispersed in water or a liquid medium and used for various purposes in the form of a dispersion. Preferably, the microorganism group is immobilized on a carrier and used as a carrier-immobilized microorganism group that facilitates handling. .
[0013]
As a carrier for immobilizing a microorganism group, it is preferable that the retention capacity of the microorganism is large and the activation of the microorganism is easy.
[0014]
As the carrier, rocks (for example, pearlite, diatomaceous earth) or a pulverized product thereof, gravel, sand, plastics, ceramics (for example, alumina, silica, natural zeolite, synthetic zeolite), talc and the like are also preferable. A porous material having continuous ventilation holes such as porous plastics is preferred. For example, a fine powder (trade name: pearlite) obtained by holding a pearlite pulverized product at a high temperature and high pressure and heat-treating and then rapidly reducing the pressure to make it porous is preferable because it has the property of causing fungi to grow. In such a porous material, the diameter of the vent is preferably about 2 to 10 μm. In addition, the property (shape) of such a carrier may be any of agglomerates, granules, powders, fine powders or plates, needles, etc., preferably an average particle diameter of 2 mm or less, particularly A granular material of about 50 μm to 1 mm is preferable. Such a carrier-immobilized microorganism group may be housed and used in a container having good water permeability or air permeability such as cloth or net as necessary.
[0015]
In addition to these, a ribbon-like or sheet-like woven fabric or non-woven fabric can be used as the carrier.
[0016]
In order to support the microorganism group on such a carrier, the carrier and the microorganism group dispersion of the present invention are mixed and then dried, but the microorganism group may be directly cultured on the carrier.
[0017]
The loading amount of the microorganism group on the carrier varies depending on the loading condition, but is preferably 5 to 20 billion / cm ³ , more preferably 10 to 10 billion / cm ³ .
[0018]
The carrier-immobilized microorganism group of the present invention is effective for sterilization of Staphylococcus aureus. Moreover, the deodorizing effect was confirmed by using the novel microorganism of the present invention in pig farms, public toilets, and the like.
[0019]
The safety of the novel microorganism of the present invention was confirmed by an oral administration test using mice.
[0020]
【Example】
Next, examples of the present invention will be described.
First, a medium having the following composition was prepared.
[0021]
Medium Peptone 5g
5g meat extract
Water 500m1
Medium pH 6.8 ± 0.2
The medium having the above composition was inoculated with Brachybacterium strain AAA-a and cultured with shaking at 30 ° C. The medium that reached the logarithmic phase was diluted with sterilized physiological saline, adjusted to a viable cell count of about 1 × 10 ⁸ / ml, and inoculated by directly sprinkling this adjusted solution on staphylococci, A halo characteristic was observed. When the same experiment was conducted on the other Brachybacterium, a halo characteristic was observed against Staphylococcus aureus, although the function was inferior to that of the new strain.
[0022]
On the other hand, the obtained adjustment liquid was subjected to a centrifuge to separate the bacterial cells, which were thoroughly washed and adhered to a carrier to obtain a powder. As the carrier, a material obtained by baking and pulverizing diatomaceous earth was used.
[0023]
This powdery Brachybacterium strain AAA-a was sprinkled on a single rotten cocoon and stored at 25 ° C. When the odor was smelled after 2 hours, the odor was clearly reduced. Moreover, when Brachybacterium strain AAA-a was sprinkled on fresh strawberries and stored at 25 ° C., it did not odor even after 48 hours. On the other hand, the strawberry stored at 25 ° C. without being sprinkled with Brachybacterium strain AAA-a became quite odorous after 24 hours.
[0024]
Thus, the Brachybacterium strain AAA-a of the present invention also has a deodorizing action and a freshness preserving action.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a drawing-substituting photograph and a micrograph showing the morphology of a novel microorganism according to the present invention.
FIG. 2 is a photo, which substitutes for a drawing, showing a form of a novel microorganism according to the present invention.

Claims

Deposit number: FERM P-16951, deposited at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Biological Deposit Center, which possesses antibacterial properties against staphylococcus aureus, deodorizing function, and freshness-preserving activity New microorganism belonging to

A method for disinfecting Staphylococcus aureus, comprising inoculating Staphylococcus aureus with a microorganism belonging to the genus Brachybacterium according to claim 1 to disinfect Staphylococcus aureus.