JP4341891B2 - 血糖降下組成物 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血糖降下作用を有する血糖降下組成物、即ち、血糖値の上昇を抑制する効果、高血糖状態から血糖値を低下させる効果、及び前糖尿病又は糖尿病状態での高血糖状態から引き起こされる合併症の治療及び／又は予防に効果を有する血糖降下組成物に関するものであり、更に詳しくは、棘皮動物門に属する生物から精製されるα−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格、並びにα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質を有効成分として含有する血糖降下組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
一般に、棘皮動物門に属するヒトデ等は、珊瑚等を食餌とし、漁場の生態系を破壊することが懸念され、日本の沿岸域で大量に捕獲されて廃棄されていることから、水産業の現場において環境上の重大な問題として捉えられている。そのような棘皮動物においては、未だ有効な利用方法が見出されておらず、資源としての価値を探求する研究が各方面において盛んに行われている。
【０００３】
一方、近年、スフィンゴ脂質に関する研究が種々行われている。スフィンゴ脂質は、細胞の重要な膜成分として、自然界に広く存在しており、その大部分がスフィンゴ糖脂質や、スフィンゴリン脂質として存在している。スフィンゴ脂質は、細胞の増殖・分化における調節作用（例えば、非特許文献１参照）、アポトーシス誘発（例えば、非特許文献２参照）等、生命現象において重要な役割を果たしていることが知られている。そして、これらの現象には、サイトカインであるＴＮＦ（例えば、非特許文献３参照）、ＩＬ−１（例えば、非特許文献４参照）、及びＦａｓリガンド（例えば、非特許文献５参照）が関与していることが明らかになっている。また、スフィンゴ脂質は、ＥＧＦレセプターの活性化調節（例えば、非特許文献６参照）、カルシウムイオンの細胞内の流動化（例えば、非特許文献７参照）、及びプロテインキナーゼＣの活性抑制・活性化等に関与していることも知られている。
【０００４】
前記スフィンゴ脂質のうち、スフィンゴ糖脂質には、長鎖塩基と脂肪酸よりなるセラミドをアグリコンとし、このアグリコンの部分に、ガラクトースやグルコース等の単糖が結合したセレブロシド、乳糖が結合したラクトシルセラミド、糖（単糖又はオリゴ糖）と硫酸基が結合したスルファチド、オリゴ糖とシアル酸等が結合したガングリオシドなどが含まれる（例えば、非特許文献８参照）。その中でも、シアル酸を含むガングリオシドは、細胞間の相互認識（例えば、非特許文献９参照）、接着（例えば、非特許文献１０参照）、増殖（例えば、非特許文献１１参照）、又は分化誘導（例えば、非特許文献１２参照）等、生体内での様々な重要な現象に関与していると言われている。また、この化合物は、虚血障害やパーキンソン病による脳障害の治療（例えば、非特許文献１３参照）にも用いられている。
【０００５】
これらのスフィンゴ糖脂質の化学構造については、海洋無脊椎動物である棘皮動物門に属する生物（例えば、ヒトデ類、クモヒトデ類、ウニ類、ナマコ類、ウミユリ類等）由来のスフィンゴ糖脂質は、その主要骨格が、ほとんどα−オキシ脂肪酸と、スフィンゴシン型長鎖塩基又はフィトスフィンゴシン型長鎖塩基から構成されたセラミド部（アグリコン部）を有しており、α位がオキシ化されていない脂肪酸（無置換脂肪酸）とスフィンゴシン型長鎖塩基から構成される哺乳類由来のスフィンゴ糖脂質とは構造的に異っている（例えば、非特許文献８、及び非特許文献１４参照）。
【０００６】
フィトスフィンゴシン骨格は、スフィンゴシン骨格中の４位と５位の二重結合部分が４位に水酸基、５位に水素がそれぞれ飽和された構造を取っており、この構造上の違いから、これらの異なる骨格を有するスフィンゴ糖脂質は、それぞれ、異なる作用を持つことが期待されている。
前記棘皮動物由来のスフィンゴ糖脂質の中でも、ウミユリ類（とりわけ、ウミシダ類）から得られる糖脂質は、基本構造にイノシトールホスホセラミドを含むスフィンゴリン糖脂質である。このイノシトールホスホセラミドは、植物や前口動物から見出されているが、後口動物からは、この棘皮動物由来のものでしか発見されていない。セラミド部も、これまでの棘皮動物スフィンゴ糖脂質とは異なり、無置換脂肪酸とスフィンゴシン型長鎖塩基から構成されることから、ウミシダ類のスフィンゴ糖脂質は、他の棘皮動物のものとは相当異なったものと位置付けられている。
【０００７】
ところで、糖尿病とは、高血糖の状態が持続することによってさまざまな疾患が併発してくる代謝疾患群の総称である。この糖尿病は、インシュリンの分泌の低下や、インシュリンの感受性の低下が組み合わさって発症するといわれており、重度になると腎臓障害や、神経障害、網膜症などの重篤な症状が出てくる。
糖尿病は、成因分類上、１型糖尿病〔インシュリン依存型：Insulin Dependent Diabates Mellitus （IDDM）〕と２型糖尿病〔インシュリン非依存型：Non-Insulin Dependent Diabates Mellitus （NIDDM ）〕に分けられる。１型糖尿病は、自己免疫機序によって膵臓β細胞が壊死又は機能停止することで絶対的にインシュリンが欠乏することが原因とされるタイプである。一方、２型糖尿病は、生活習慣病のひとつといわれ、例えば、過食、ストレス、運動不足など多様な要因により起こるインシュリン分泌不全やインシュリン抵抗性による相対的なインシュリン不足が原因とされる、高血糖を示すタイプであると考えられている。
【０００８】
糖尿病の恐ろしさは、高血糖症もさることながら、その多彩、かつ重篤な合併症にあり、死因の主なものは合併症である。糖尿病の人は、高血糖だけでなく、その合併症で健康生活がむしばまれ、放置すると身体障害、更には、多くの臓器障害の合併で死に至る。
細小血管症は、糖尿病の最も特有とする合併症であり、その網膜症、神経障害、腎障害は、最も早期から出現し、頻度も最も高い。また、近年、糖尿病患者の高齢化とともに動脈硬化症の増加が目立ち、糖尿病合併症の中でも大きな位置を占めるようになってきた。このように、糖尿病における合併症は、ＱＯＬの著しい低下をもたらすことから、糖尿病治療の主な目的は、この合併症を予防することにもある（例えば、非特許文献１５、及び非特許文献１６参照）。
【０００９】
現在の糖尿病に対する治療では、１型糖尿病をはじめとして、体重減少等を伴う高血糖症等の場合には、一般的に、合成ヒトインシュリン製剤等が用いられ、経口血糖降下薬は、用いるべきではないとされている。一方、２型糖尿病の治療では、食事療法、運動療法、経口血糖降下薬投与、インシュリン治療が挙げられ、１型あるいは２型のいずれかによって、糖尿病の治療には異なった方法が取られている（例えば、非特許文献１６参照）。
２型糖尿病は、糖尿病患者の約９０％を占めると言われており、このタイプの中でも軽度の症状に対しては、食事療法や、運動療法が取り入れられている。特に、食後の過血糖の抑制は、２型糖尿病の発症の抑制に効果があると言われており、糖吸収の抑制剤としてα−グルコシダーゼ阻害剤、インシュリン分泌促進剤としてスルホニルウレア薬、及びインシュリン抵抗性改善薬としてチアゾリシン誘導体等が医薬品として用いられている。
【００１０】
血糖値が高めの状態の人に推奨される食品の中には、例えば、現在、特定保健用食品に利用されている成分である、難消化性デキストリン、グアバ葉ポリフェノール、小麦アルブミン、又はＬ−アラビノース等を含むお茶やスープ等の食品が市販されている。しかしながら、いずれにおいても、安全性は高いものの、食品であるがゆえに、その効果は、期待されたものに到底及ばないのが現状である。
従来、先行技術文献には、血糖値の上昇を抑制する効果を有するものとして、例えば、乳酸菌菌体を有効成分とする血糖降下剤（例えば、特許文献１参照）、キノコ由来の糖尿病予防・改善剤及びそれを含む機能性食品（例えば、特許文献２参照）、コラーゲン及びゼラチンの加水分解物ペプチドを有効成分とする血糖値上昇抑制剤（例えば、特許文献３参照）等が開示されている。
【００１１】
また、先行技術文献には、スフィンゴ糖脂質等を含む糖尿病に対する医薬等に関する技術として、例えば、硫酸化糖脂質類（スルファチド）及びその抗体による糖尿病及び関連合併症に対する医薬製剤並びにそれら疾病に関連する島細胞抗体（ＩＣＡ）を検出する方法（例えば、特許文献４参照）、ガラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ラクトシルセラミド及びその抗体による糖尿病及び関連合併症に対する医薬製剤（例えば、特許文献５参照）が開示されている。更に、先行技術文献には、α−グリコシルセラミドを含有するＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患治療剤（例えば、特許文献６参照）が開示されている。
【００１２】
【特許文献１】
特開平１０−７５７７号公報
【特許文献２】
特開２００２−１８７８５１号公報
【特許文献３】
特開２００２−３２６９５１号公報
【特許文献４】
特表平６−５０６９４３号公報
【特許文献５】
特開２００１−５２７０４６号公報
【特許文献６】
国際公開第９８／０４４９２８号パンフレット
【非特許文献１】
フェブス・レター（FEBS Lett.）、オランダ、第５２４巻、２００２年、ｐ．１０３−１０６
【非特許文献２】
フェブス・レター（FEBS Lett.）、オランダ、第５２６巻、２００２年、ｐ．１５−２０
【非特許文献３】
イー・エム・ビー・オー ジャーナル（EMBO J. ）、イギリス、第１９巻、第１３号、２０００年、ｐ．３３０４−３３１３
【非特許文献４】
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、アメリカ、第２７５巻、第４５号、２０００年、ｐ．３５６１７−３５６２３
【非特許文献５】
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、アメリカ、第２７６巻、第２６号、２００１年、ｐ．２３９５４−２３９６１
【非特許文献６】
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、アメリカ、第２７７巻、第１２号、２００２年、ｐ．１０１０８−１０１１３
【非特許文献７】
プロシーディング・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）、アメリカ、第９８巻、第１号、２００１年、ｐ．３０７−３１２
【非特許文献８】
伏谷伸宏・廣田洋監著、「天然有機化合物の構造解析」、シュプリンガー・フェアラーク東京、１９９４年、ｐ．８１−１４０
【非特許文献９】
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、アメリカ、第２６４巻、１９８９年、ｐ．２０１５９−２０１６２
【非特許文献１０】
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、アメリカ、第２６６巻、１９９１年、ｐ．１７５５２−１７５５８
【非特許文献１１】
デベロップメンタル・ブレイン・リサーチ（Developmental Brain Res.）、オランダ、第２８４巻、１９８３年、ｐ．２１５−２２１
【非特許文献１２】
プロシーディング・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）、アメリカ、第７６巻、１９７９年、ｐ．３３６７−３３７１
【非特許文献１３】
ニューロロジー（Neurology ）、アメリカ、第５０巻、１９９８年、ｐ．１６３０−１６３６
【非特許文献１４】
ファルマシア、第３８巻、第９号、２００２年、ｐ．８５１−８５５
【非特許文献１５】
橘敏也著、「生活習慣病とその治療薬」、株式会社じほう、２００１年、ｐ．３９−６８
【非特許文献１６】
矢崎義雄監修、「分子糖尿病学の進歩」、金原出版株式会社、２００２年、ｐ．１３４−１３８
【００１３】
前記従来技術を示す先行技術文献のうち、特許文献４又は特許文献５は、実質的には１型糖尿病患者由来の島細胞抗体の検出法に関する発明を開示するものであって、スルファチド、ガラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ラクトシルセラミド等のスフィンゴ糖脂質による１型糖尿病患者に対する治療効果（特に、血糖降下作用）を示すデータ等は何も教示されていない。また、特許文献６には、α−グリコシルセラミドによる、１型糖尿病のモデルマウスであるＮＯＤマウスにおける糖尿病の自然発症を抑制する効果が開示されているが、この発明において、α−グリコシルセラミドによる効果は、自己免疫疾患に対する効果である。この文献は、具体的には、ＮＫＴ細胞の活性化を促すことによって、膵臓ランゲルハンス島β細胞の特異的な破壊を抑制し、インシュリン産生が維持されることから、結果として、血糖値の上昇が抑制されて糖尿病の発症を抑えるという効果を示すものであって、この文献には、高値な血糖状態に直接的に作用して血糖値を低下させる効果は一切記載されていない。
更に、現在、糖尿病の臨床において使用されている経口血糖降下剤であるスルホニルウレア薬による治療では、急激な血糖値の低下による低血糖ショック等の副作用が懸念されている。従って、当該技術分野においては、血糖値をより安全に、かつ確実にコントロールできる新規な血糖降下組成物の開発が、特に、糖尿病の治療における医療現場で切に待望されていた。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
このような状況の中で、本発明者等は、上記従来技術に鑑みて、珊瑚を食餌とし、漁場の生態系を破壊することが懸念され、大量に捕獲されて廃棄されている、棘皮動物門に属するヒトデなどの有効利用法を種々検討する中で、これらから抽出精製される、α−オキシ脂肪酸、及びスフィンゴシン骨格又はフィトスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質が、高血糖状態から血糖値を低下させる作用を有することを見出し、更に研究を重ねて、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、血糖値の上昇を抑制する効果、高血糖状態から血糖値を低下させる効果、及び前糖尿病もしくは糖尿病状態での高血糖状態から引き起こされる合併症に対する治療及び／又は予防効果、を有する血糖降下組成物を提供することを目的とするものである。
また、本発明は、水産業の現場において、環境上の重大な問題として捉えられ、日本の沿岸域で大量に捕獲されるにもかかわらず未だ有効な利用方法が見出されていない棘皮動物を有効利用して、血糖降下剤として使用できる医薬組成物を製造し、提供すること、更に、それによって、環境問題を解決するだけでなく、水産業の発展に寄与する技術を提供すること、を目的とするものである。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決するための本発明の第一の発明は、棘皮動物門に属する生物から精製されるα−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有するセラミド及び／又はガングリオシドを有効成分とすることを特徴とする血糖降下作用を有する血糖降下組成物である。
前記課題を解決する本発明の第二の発明は、棘皮動物門に属する生物から精製されるα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するセラミド及び／又はガングリオシドを有効成分とすることを特徴とする血糖降下作用を有する血糖降下組成物である。
前記課題を解決する本発明の第三の発明は、前記組成物が、医薬組成物である前記第一又は二の発明に記載の血糖降下組成物である。
【００１６】
【発明の実施の形態】
次に、本発明を更に詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の好ましい実施の態様に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において、百分率は、特に断りのない限り質量による表示である。
本発明において、血糖降下組成物とは、血糖値の上昇を制御（例えば、抑制）する作用を有する組成物であり、より具体的には、糖尿病発症時、又は血糖値が正常値よりも高い状態（血液中のグルコースが高血糖状態。例えば、空腹時１１０ｍｇ／ｄｌ以上。）の血糖値を、正常レベル又はほぼ正常レベル（１１０ｍｇ／ｄｌ未満）にまで低下させる作用（以下、前記作用を単に血糖降下作用と記載する場合がある。）、若しくは、ホルモンバランスの乱れ等に起因する血糖値の上昇を抑制する作用、を有する薬剤である。
【００１７】
本発明の血糖降下組成物の有効成分は、好適には、棘皮動物門に属する生物から精製される。本発明において、棘皮動物門に属する生物としては、具体的には、分類上の海星〔ヒトデ〕綱（例えば、ホシヒトデ、アオヒトデ、ヤツデスナヒトデ、オニヒトデ、ムラサキヒトデ等）、蛇尾〔クモヒトデ〕綱（例えば、スナクモヒトデ、ニホンクモヒトデ等）、海胆〔ウニ〕綱（例えば、ムラサキウニ、バフンウニ等）、海鼠〔ナマコ〕綱（例えば、クロナマコ、シロナマコ等）、及び海百合〔ウミユリ〕綱（例えば、トリノアシ、ニッポンウミシダ、コアシウミシダ、オオウミシダ等）が例示される。
【００１８】
一般的に、スフィンゴ糖脂質とは、図１に示すように、スフィンゴシン骨格又はフィトスフィンゴシン骨格を有する長鎖塩基と脂肪酸よりなるセラミドをアグリコンとし、このアグリコン部に中性糖とアミノ糖（含まれない場合もある）とシアル酸が結合したものであり、ガングリオシドとして分類されている。尚、海洋無脊椎動物である棘皮動物門に属する生物由来のスフィンゴ糖脂質では、図１に示す脂肪酸部のα位がオキシ化されている化合物が存在する。
【００１９】
本発明の血糖降下組成物の有効成分であるスフィンゴ糖脂質としては、具体的には、分子内の脂肪酸のα位がオキシ化されたスフィンゴシン骨格を有する、それぞれセラミド、及びガングリオシド、あるいは、分子内の脂肪酸のα位がオキシ化されたフィトスフィンゴシン骨格（スフィンゴシン骨格中の４位と５位の二重結合部分が４位に水酸基、５位に水素がそれぞれ飽和された構造）を有する、それぞれセラミド、及びガングリオシドが例示される。尚、α−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有するセラミドの基本構造（Ｒ₂ −Ｃｅｒ１）を化１、α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するセラミドの基本構造（Ｒ₂ −Ｃｅｒ２）を化２にそれぞれ示す。尚、本明細書において、特段の分類や説明がなされる場合を除いて、前記のα−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質、及びα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質を総称してスフィンゴ糖脂質と記載する。
【００２０】
【化１】

【００２１】
【化２】

【００２２】
ここで、「有効成分」とは、本発明の血糖降下組成物における前記に定義した作用を有する成分を意味し、本発明の血糖降下組成物の主たる有効成分が前記スフィンゴ糖脂質でなければならない必要は無く、また、本発明の血糖降下組成物にはスフィンゴ糖脂質以外に血糖低下作用又は血糖上昇抑制効果を有する成分が含まれていても良い。
【００２３】
本発明の血糖降下組成物の有効成分は、棘皮動物であれば何れを抽出原料として用いて抽出精製しても製造することが可能であり、その有効成分には、棘皮動物を抽出原料として得られる抽出物、該抽出物の希釈液又は濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、あるいはこれらの粗精製物又は精製物のいずれも含まれる。棘皮動物としては、具体的に、海星〔ヒトデ〕綱（例えば、ホシヒトデ、アオヒトデ、ヤツデスナヒトデ、オニヒトデ、ムラサキヒトデ等）、蛇尾〔クモヒトデ〕綱（例えば、スナクモヒトデ、ニホンクモヒトデ等）、海胆〔ウニ〕綱（例えば、ムラサキウニ、バフンウニ等）、海鼠〔ナマコ〕綱（例えば、クロナマコ、シロナマコ等）、及び海百合〔ウミユリ〕綱（例えば、トリノアシ、ニッポンウミシダ、コアシウミシダ、オオウミシダ等）等が例示され、これらから、本発明の血糖降下組成物の有効成分を抽出精製することが可能である。
【００２４】
本発明の血糖降下組成物の有効成分の製造方法に関する一例としては、稲垣らの方法（〔ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オルガニック・ケミストリー［Eur. J. Org. Chem.］、１９９８年、ｐ．１２９−１３１〕、〔ケミカル・ファーマシューティカル・ブレチン［Chem. Pharm. Bull.］、第４９巻、第１２号、２００１年、ｐ．１５２１−１５２５〕）、に基づいた、図２に示すフローチャートの方法が例示され、具体的には、次に記載するとおりである。即ち、棘皮動物をホモジナイズし、これを、有機溶媒、特に好ましくはクロロホルム・メタノール又は塩化メチレン・メタノール混合比が１：１から１：１０、好ましくは１：２から１：３のいずれかの混合比である混合溶液で抽出処理する。この抽出液を濃縮した後、酢酸エチル・ブタノール混合比が５：１から１：１、好ましくは３：１から２：１のいずれかの混合比である混合液、及び水を添加して、分配操作を行った後、酢酸エチル・ブタノール層（α層）と水層（β層）を分取する。このうち、酢酸エチル・ブタノール層（α層）を濃縮した後、アセトンを添加し、アセトン可溶性画分（セラミド混合物）を得る。また、水層（β層）に水飽和ブタノール（ｎ−ブタノールを使用することが好ましい。）を添加して分配操作を行い、ブタノール層と水層（δ）に分画する。このうち、水層（δ）を濃縮後、逆相カラムを用いて以下の条件で分離を行う。即ち、まず、溶出液であるメタノール又はエタノールの濃度を６０％から１００％まで、段階的に上昇させて溶出させるステップワイズグラジエント法により分離を行う。メタノール濃度が１００％の画分を回収し、濃縮してガングリオシド混合物を得る。
【００２５】
前記、中間精製物として調製したセラミド混合物は、有効成分であるセラミドを１〜１０％含有していることが好ましく、少なくとも前記範囲を含有していれば、そのまま、本発明の血糖降下組成物の有効成分として使用することができる。
また、前記中間精製物として調製したガングリオシド混合物は、有効成分であるガングリオシドを２０〜６０％含有していることが好ましく、少なくとも前記範囲のガングリオシドを含有していれば、そのまま、本発明の血糖降下組成物の有効成分として使用することができる。
【００２６】
前記、セラミド混合物、及びガングリオシド混合物は、それぞれ引き続き順相カラムクロマトグラフィー等による分離を行うことによって、セラミド混合物からセラミド精製標品、同様にガングリオシド混合物からガングリオシド精製標品をそれぞれ精製することが可能であり、これらについても、本発明の有効成分として使用することができる。セラミド精製標品及びガングリオシド精製標品の純度は、薄層クロマトグラフィー等により決定することができ、それぞれ９０％以上、特に９５％以上であることが好ましい。
【００２７】
本発明の血糖降下組成物の有効成分を抽出精製する際に使用する溶媒は、特に限定されるものではないが、水、有機溶媒又はこれらの混合物を使用することが好ましい。抽出溶媒として使用し得る水には、水に各種処理（例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等）を施したもの、例えば、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。抽出溶媒として使用し得る有機溶媒としては、酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル、メタノール、エタノール、ブタノール、イソプロピルアルコールなどのアルコール、ヘプタン、ヘキサン、イソオクタンなどの脂肪族炭化水素、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン、ベンゼン、トルエンなどの芳香族化合物、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタンなどの低級脂肪族炭化水素化合物等が例示され、中でも、メタノール、ｎ−ブタノール、クロロホルムを使用することが好ましい。本発明では、製造に使用する原料の棘皮動物の種類や、製造する有効成分（スフィンゴ糖脂質）の種類に応じて、有機溶媒を選択し、濃度を調整することができる。また、数種の有機溶媒を混合して使用することもでき、その混合比等は、適宜調整することが可能である。
【００２８】
また、本発明の血糖降下組成物の製造方法の中で使用される有効成分の分離法は、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル充填のカラムクロマトグラフィー等を１種又は数種を組合わせて使用することが可能である。
本発明の血糖降下組成物の有効成分としては、前記製造方法によって棘皮動物から得られたものの他に、同様の構造を有する化合物を化学合成によって製造したものを使用することも可能である。
【００２９】
本発明の血糖降下組成物の有効成分であるスフィンゴ糖脂質の中で、α−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有する化合物、及びα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有する化合物は、それぞれ単独で使用することも、複数種の化合物を選択して混合物として使用することも可能である。
本発明の組成物は、棘皮動物から抽出精製されるスフィンゴ糖脂質それ自体であっても良く、スフィンゴ糖脂質以外の成分を含有していても良い。スフィンゴ糖脂質以外の成分は、組成物の形態に応じて適宜選択できる。
本発明の組成物の形態は、特に限定されるものではなく、本発明の血糖降下組成物を、例えば、医薬組成物の形態として使用することが可能である。
【００３０】
これらのうち、医薬組成物は、例えば、スフィンゴ糖脂質を薬学的に許容され得る賦形剤、その他、任意の添加剤を用いて製剤化することにより製造でき、製剤化したスフィンゴ糖脂質は、血糖降下組成物として使用できる。製剤化する場合、製剤中のスフィンゴ糖脂質の含有量は、通常、０．００１〜１．０質量％、好ましくは０．０１〜０．１質量％である。製剤化にあたっては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射用溶剤等の添加剤を使用することが可能である。
【００３１】
また、賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシ澱粉、馬鈴薯澱粉、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等のケイ酸塩誘導体；リン酸ナトリウム、リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸ナトリウム、硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体が挙げられる。
【００３２】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ビーガム、ゲイロウ等のワックス類；ホウ酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水ケイ酸、ケイ酸水和物等のケイ酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。注射用溶剤としては、例えば、水、エタノール、グリセリン等が挙げられる。
【００３３】
医薬組成物の投与経路としては、例えば、経口投与、経腸投与等の非経口投与が挙げられる。医薬組成物の投与剤形としては、例えば、注射剤、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、坐剤、軟膏、テープ剤等が挙げられる。また、前記医薬組成物は、飲食品、又は飼料等に配合して投与することもできる。投与量及び投与回数は、目的とする作用効果、投与方法、治療期間、年齢、性別、体重等により異なるが、投与量は、成人１日当たり、通常、０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇの範囲から適宜選択でき、投与回数は、１日１回から数回の範囲から適宜選択できる。
【００３４】
次に、参考例として、飲食品組成物について説明すると、飲食品組成物は、例えば、本発明の血糖降下組成物又は有効成分であるスフィンゴ糖脂質に、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、カゼイン、ホエー、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、グアガム、ジェランガム、アラビアガム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより製造できる。飲食品組成物の形態としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、シャーベット、氷菓等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、餃子及びしゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、錠菓等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳、調製粉乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；パン類；経腸栄養食；機能性食品等が例示される。尚、飲食品組成物を製造する際に添加する血糖降下組成物又は有効成分であるスフィンゴ糖脂質の含有量は、０．００１〜１０質量％の範囲から適宜選択することができる。
【００３５】
次に、参考例として、飼料組成物について説明すると、飼料組成物は、例えば、スフィンゴ糖脂質に、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエー、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等を配合することにより製造することができる。飼料組成物の形態としては、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が例示される。尚、飼料組成物を製造する際に添加する血糖降下組成物又は有効成分であるスフィンゴ糖脂質の含有量は、０．００１〜１０質量％の範囲から適宜選択することができる。
【００３６】
本発明の組成物は、単独で使用しても良いが、その他の血糖降下組成物等と併用して使用しても良い。それらの併用によって、高血糖状態での血糖値低下作用を高めることができる。また、本発明の組成物を併用する血糖降下組成物の組成物中に有効成分として含有させても良いし、組成物中には含有させずに別個の薬剤として組み合わせて製品として良い。
【００３７】
本発明の血糖降下組成物は、血糖値の診断基準（前記、非特許文献１６：橘敏也著、「生活習慣病とその治療薬」、株式会社じほう、２００１年、ｐ．４２−４３）に区分された境界領域（空腹時：１１０〜１２６ｍｇ／ｄｌ、又は７５ｇブドウ糖負荷試験［ＯＧＴＴ］２時間後：１４０〜２００ｍｇ／ｄｌ、のいずれかの状態）、もしくは糖尿病領域（空腹時：１２６ｍｇ／ｄｌ以上、又は７５ｇブドウ糖負荷試験［ＯＧＴＴ］２時間後：２００ｍｇ／ｄｌ以上のいずれかの状態）の状態から、正常領域（空腹時：１１０ｍｇ／ｄｌ以下、又は７５ｇブドウ糖負荷試験［ＯＧＴＴ］２時間後：１４０ｍｇ／ｄｌ以下のいずれかの状態）に血糖値を低下させる作用、及び、正常領域から境界領域、正常領域から糖尿病領域、又は境界領域から糖尿病領域のいずれかの場合の血糖値の上昇を抑制する作用によって、前糖尿病もしくは糖尿病状態での高血糖状態における治療や、高血糖状態から引き起こされる合併症の治療及び／又は予防に有用である。
【００３８】
一般的に、高血糖状態から血糖値を低下させる作用、及び血糖値の上昇を抑制する作用は、糖尿病モデルマウスを使用したin vivo による効果として、該マウスに血糖降下剤等の投与を開始し、一定期間投与をした段階での血糖値及び糖化ヘモグロビン量を測定することによって評価することができる。糖化ヘモグロビンは、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロビンＡ１ｃの３つの成分から構成され、長時間にわたって血液中に残留する傾向をもっているので、血液中の糖化蛋白質の優れた指標となる。中でも、ヘモグロビンＡ１ｃ（HbA1c）のレベルは、測定の前の６〜８週間の平均的血糖コントロールレベルの指標として血中グルコース治療の有効性を反映するので、糖尿病の診断に有効なマーカーであり、血糖値の測定と併用して糖尿病の診断及び進行度の測定に利用されている〔ディアベティック・メディシン（Diabetic Medicine ）、アメリカ、第１４巻、１９９７年、ｐ．５８４−５８８〕。これらのことから、本発明の血糖降下組成物の血糖低下作用については、その検討方法として、前記血糖値及び糖化ヘモグロビン量を測定することによって評価した。
【００３９】
尚、本発明において、血糖値の測定については、固定化ブドウ糖酸化酵素膜・過酸化水素電極法（基礎と臨床、第３０巻、第５号、１９９６年５月、ｐ．１１２５−１１３２）に基づいた血糖測定装置（例えば、バイエル・三共社製：アントセンスII）等により測定した。また、糖化ヘモグロビン量の測定については、ラテックス凝集阻止反応に基づくHbA1c の簡易測定法（医学と薬学、第３７巻、第４号、１９９７年４月、ｐ．１０２３−１０２８）による測定装置（例えば、バイエル・三共社製：ＤＣＡ２０００）等により測定した。
【００４０】
次に、本発明の血糖降下組成物の有効成分であるスフィンゴ糖脂質の製造例を説明する。尚、各スフィンゴ糖脂質の構造は、マススペクトル法（ＭＳ）、核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）等を利用して決定した。
製造例１
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するセラミドの製造）
ヤツデスナヒトデ（学名：Luidia maculata ）１ｋｇをミキサーに投入し、次いで、クロロホルム／メタノール（クロロホルム：メタノール＝1 ：2 ）の混合液２リットルをミキサーに添加し、ホモジナイズして抽出を行い、ろ過した後に抽出液を濃縮した。該濃縮画分（４１．４ｇ）に水を２５０ｍｌ加えて懸濁した後、酢酸エチル／ｎ−ブタノール（酢酸エチル：ｎ−ブタノール＝３：１）の混合液２５０ｍｌを添加して、分配操作を行い、酢酸エチル／ｎ−ブタノール層と水層を分取した。このうち、酢酸エチル／ｎ−ブタノール層を濃縮し、この濃縮画分（９．９ｇ）にアセトンを加えて混合し、アセトン可溶性画分を回収した後に有機溶媒を揮発させてセラミド混合物約５．３ｇを得た。次いで、該セラミド混合物をクロロホルム５ｍｌに溶解して順相カラム（Silica gel 60 ：メルク社製）に添加し、溶出溶媒にクロロホルム／メタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝１００：０、９８：２、９５：５、９：１、８５：１５、７：３、及び６：４の各混合比）を使用し、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジエント法により溶出した。順相薄層クロマトグラフィーにおいて既存のセラミドと同様の挙動を示す画分について回収し、該画分について、更に、順相カラムに添加してクロロホルムメタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝９７：３→９５：５）で溶出させ、順相薄層クロマトグラフィーにおいて単一物質の挙動を示すＬＭＣｅｒ−１（３ｍｇ）及びＬＭＣｅｒ−２（４ｍｇ）の２種類のセラミドをそれぞれ製造した。ＬＭＣｅｒ−１の構造式を化３、及びＬＭＣｅｒ−２の構造式を化４にそれぞれ示す。
（化３）
Ｈ−Ｃｅｒ１
（化４）
Ｈ−Ｃｅｒ２
【００４１】
製造例２
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
ヤツデスナヒトデ１ｋｇをミキサーに投入し、次いで、クロロホルム／メタノール（クロロホルム：メタノール＝１：２）の混合液２リットルをミキサーに添加し、ホモジナイズして抽出を行い、ろ過した後に抽出液を濃縮した。これに水を２５０ｍｌ加えて懸濁した後、酢酸エチル／ｎ−ブタノール（酢酸エチル：ｎ−ブタノール＝３：１）の混合液２５０ｍｌを添加して、分配操作を行い、酢酸エチル／ｎ−ブタノール層と水層として分取した。ここで、分取した水層は、更に、水飽和ｎ−ブタノールを添加して分配操作を行い、ｎ−ブタノール層と水層として分取して、そのうちの水層を回収した。該水層は、濃縮した後に、逆相カラム（Cosmosil １４０ Ｃ１８−ＰＲＥＰ：ナカライ社製）を用いて分離を行った。分離は、溶出液であるメタノール溶液の濃度を６０〜１００％まで段階的に上昇させて溶出させるステップワイズグラジエント法により行った。メタノールの濃度が１００％に達した時点の溶出画分の有機溶媒を揮発させて、ガングリオシド混合物約０．１８ｇを調製した。次いで、該ガングリオシド混合物をクロロホルム／メタノール／水（クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１）混合液に溶解し、順相カラム（Silica gel 60 ：メルク社製）に添加して同混合液で溶出した。次いで、ゲル濾過カラム（Sephadex ＬＨ−２０：ファルマシア社製）に添加して脱塩し、順相薄層クロマトグラフィーにおいて単一物質の挙動を示すガングリオシドＬＭＧ−２（２．４ｍｇ）を製造した。ＬＭＧ−２の構造式を化５に示す。
【００４２】
（化５）
ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｇａｌ：ガラクトース、Ｇｌｃ：グルコース）
【００４３】
製造例３
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
出発原料にアオヒトデ（学名：Linckia laevigata ）１８ｋｇを用い、製造例２と同様の方法で、ガングリオシドＬＬＧ−３（５８ｍｇ）及びＬＬＧ−５（７０ｍｇ）をそれぞれ製造した。ＬＬＧ−３の構造式を化６、ＬＬＧ−５の構造式を化７に示す。
（化６）
８−Ｏ−ＣＨ₃ ＮｅｕＡｃα２→１１ＮｅｕＧｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸、ＮｅｕＧｃ：Ｎ−グリコリルノイラミン酸、Ｇａｌ：ガラクトース、Ｇｌｃ：グルコース）
（化７）
８−Ｏ−ＣＨ₃ ＮｅｕＧｃα２→１１ＮｅｕＧｃα２→１１ＮｅｕＧｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＧｃ：Ｎ−グリコリルノイラミン酸、Ｇａｌ：ガラクトース、Ｇｌｃ：グルコース）
【００４４】
製造例４
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
出発原料にムラサキヒトデ（学名：Asterias amurensis versicolor ）６５ｋｇを用い、製造例２と同様の方法で、ガングリオシドＧＡＡ−６（２０ｍｇ）及びＧＡＡ−７（８６ｍｇ）を製造した。ＧＡＡ−６の構造式を化８、ＧＡＡ−７の構造式を化９に示す。
（化８）
８（１１）−Ｏ−ＣＨ₃ ＮｅｕＧｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＧｃ：Ｎ−グリコリルノイラミン酸、Ｇａｌ：ガラクトース、Ｇｌｃ：グルコース）
（化９）
８−Ｏ−ＣＨ₃ ＮｅｕＧｃα２→６〔８−Ｏ−ＣＨ₃ ＮｅｕＧｃα２→３〕ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＧｃ：Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｇａｌ：ガラクトース、Ｇｌｃ：グルコース）
【００４５】
製造例５
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
出発原料にオニヒトデ（Acanthaster planci）１２ｋｇを用い、製造例２と同様の方法で、ガングリオシドＡＧ−１（３６．４ｍｇ）、ＡＧ−２（２９０ｍｇ）、 ＡＧ−３（８．９ｍｇ）を製造した。ＡＧ−１の構造式を化１０、ＡＧ−２の構造式を化１１、ＡＧ−３の構造式を化１２に示す。
（化１０）
Ｆｕｃｆβ１→４Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ｆｕｃｆ：フコフラノース）
（化１１）
Ｇａｌｆβ１→３Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ｇａｌｆ：ガラクトフラノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
（化１２）
Ｇａｌｆβ１→３Ｇａｌα１→３Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ｇａｌｆ：ガラクトフラノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
【００４６】
製造例６
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
出発原料にイトマキヒトデ（Asterina pectinifera）４２ｋｇを用い、製造例２と同様の方法で、ガングリオシドＧＰ−１ａ（７２ｍｇ）、ＧＰ−１ｂ（１１９ｍｇ）、ＧＰ−２（４２１ｍｇ）を製造した。ＧＰ１ａの構造式を化１３、ＧＰ−１ｂの構造式を化１４、ＧＰ−２の構造式を化１５に示す。
（化１３）
Ａｒａｆα１→３Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ａｒａｆ：アラビノフラノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
（化１４）
Ａｒａｆα１→４〔Ａｒａｆα１→３〕Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ａｒａｆ：アラビノフラノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
（化１５）
Ａｒａｆα１→４Ｇａｌα１→６〔Ａｒａｆα１→４〕Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ａｒａｆ：アラビノフラノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
【００４７】
製造例７
（α−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するガングリオシドの製造）
出発原料にヒラモミジイガイ（Astropecten latespinosus）３０ｋｇを用い、製造例２と同様の方法で、ガングリオシドＬＧ−１（１４６ｍｇ）、ＬＧ−２（５４５ｍｇ）を製造した。ＬＧ−１の構造式を化１６、ＬＧ−２の構造式を化１７に示す。
（化１６）
Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
（化１７）
Ａｒａβ１→４Ｇａｌα１→４ＮｅｕＡｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃｅｒ２
（Ａｒａ：アラビノース、ＮｅｕＡｃ：Ｎ−アセチルノイラミン酸）
尚、前記製造例１〜７において、本発明者等が棘皮動物から抽出精製したα−オキシ脂肪酸、及びスフィンゴシン骨格又はフィトスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質は、哺乳類や植物から精製されるものとは異なり、棘皮動物特有の構造を有することが確認された。
【００４８】
次に、試験例を示して、本発明を詳細に説明する。
試験例１
本試験は、棘皮動物から抽出分画したスフィンゴ糖脂質の中間精製物のマウスへの経口投与による血糖値低下作用を確認するために行った。
（１）試料の調製
前記製造例１及び２で調製したヤツデスナヒトデ由来のセラミド混合物（セラミド有効成分約１μｇ含有）及びガングリオシド混合物（ガングリオシド有効成分約８μｇ含有）を、それぞれ生理食塩水によって５００μｇ／ｍｌに調製した試料を、それぞれ試験試料１及び試験試料２とした。また、牛由来セラミド（和光純薬工業社製：カタログ番号０３１−１８４４１）、及びα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格をもたない牛由来ガングリオシド混合液（和光純薬工業社製：カタログ番号０７４−０３６４３）を、生理食塩水によって２０μｇ／ｍｌに調製した試料を、それぞれ対照試料１及び対照試料２とした。更に、従来の血糖降下剤である２型経口糖尿病薬ジアベン（中外製薬社製：トルブタミド錠）を粉砕した後、２％カルボキシメチルセルロース（ナカライテスク社製）溶液にて、１ｍｇ／ｍｌに調製した試料を、対照試料３とした。尚、生理食塩水を陰性試料とした。
【００４９】
（２）試験方法
本試験に使用するマウスは、２型糖尿病モデルマウスである、６週齢、雄性ｄｂ／ｄｂマウス（日本クレア社より購入）を１群５匹に群分けして使用し、予め通常の血糖値を測定して、高血糖状態（３００ｍｇ／ｄｌ）であることを確認した。
該２型糖尿病モデルマウスに、試験試料１及び２、対照試料１〜３、並びに陰性試料を、それぞれ５００μl ずつ、１日１回、３６日間連続してゾンデを用いて強制経口投与した。投与を開始してから２７日目に、絶食時の血糖値及び糖化ヘモグロビン量（ＨｂＡ１Ｃ）を、それぞれアントセンスＩＩ及びＤＣＡ２０００（ともにバイエル三共社製）を用いて測定した。
【００５０】
（３）試験結果
本試験の結果は、表１に示すとおりである。表１は、２型糖尿病モデルマウスに試料の投与を開始してから２７日目の血糖値及び糖化ヘモグロビン量を測定した結果を示したものである。その結果、試料投与開始後２７日目において、陰性試料を投与したマウスでは血糖値が約１０％上昇し、対照試料１では約８％減少、対照試料２では約１９％減少、対照試料３では約２７％減少する結果が得られた。これに対し、試験試料１では血糖値が約６０％減少し、試験試料２では約４０％減少したことから、本発明の血糖降下組成物の有効成分は、従来のセラミドやガングリオシド、並びに２型糖尿病治療薬として用いられているジアベンのいずれよりも、優れた血糖値低下作用を有することが判明した。
また、糖化ヘモグロビン量についても、試験試料は、陰性試料及び対照試料より有意に低下していたことから、マウスへの試料の連続投与により血糖値の低下が維持されていたことが確認された。
【００５１】
【表１】

【００５２】
試験例２
本試験は、棘皮動物から精製したスフィンゴ糖脂質精製標品のマウスへの経口投与による血糖値低下作用を確認するために行った。
（１）試料の調製
前記製造例１におけるセラミド混合物を順相カラムクロマトグラフィーにて純度を高めたセラミド精製標品（ＬＭＣｅｒ−２）、及び前記製造例３におけるガングリオシド混合物を順相カラムクロマトグラフィーにて純度を高めたガングリオシド精製標品（ＬＬＧ−３）を、それぞれ生理食塩水によって２μｇ／ｍｌに調製した試料を、それぞれ試験試料３及び試験試料４とした。また、生理食塩水を陰性試料とした。
【００５３】
（２）試験方法
試験例１で使用したマウスと同系の２型糖尿病モデルマウスに、試験試料３、試験試料４又は陰性試料を、それぞれ２００μｌずつ、１日１回、４０日間連続して尾静脈より静脈内投与した。投与を開始してから３０日目に、絶食時の血糖値及び糖化ヘモグロビン量（ＨｂＡ１Ｃ）を、それぞれアントセンスＩＩ及びＤＣＡ２０００（ともにバイエル三共社製）を用いて測定した。
【００５４】
（３）試験結果
本試験の結果は、表２に示されるとおりである。表２は、２型糖尿病モデルマウスに試料の投与を開始してから３０日目の血糖値及び糖化ヘモグロビン量を測定した結果を示したものである。表２から明らかなとおり、陰性試料を投与したマウスでは、投与開始後３０日目の血糖値が２倍に上昇（１０４％増加）したのに対し、試験試料３（セラミド：ＬＭＣｅｒ−２）及び試験試料４（ガングリオシド：ＬＧＧ−３）を投与したマウスでは、投与開始後３０日目の血糖値が、それぞれ約１．５倍の上昇（約５０％増加）に留まり、セラミドやガングリオシドによって血糖値の上昇が抑制されることが判明した。また、同様にセラミドやガングリオシドによって糖化ヘモグロビン量も有意に減少し、血糖値の低下が維持されていることが判明した。
【００５５】
【表２】

【００５６】
【実施例】
次に、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲は、以下の実施例によって何ら限定されるものではない。
実施例１
次の組成からなる組成物を調製し、注射剤を常法により製造した。
製造例１で製造したセラミド（ＬＭＣｅｒ−２） ０．０１（％）
アクチノマイシンＤ（シグマ社製） ０．００５
塩化ナトリウム（和光純薬社製） ０．９
マンニトール（関東化学社製） １．０
注射用蒸留水（大塚製薬社製） ９８．０８５
【００５７】
実施例２（参考実施例）
ホエー蛋白酵素分解物（森永乳業社製）１０．８ｋｇ、デキストリン（昭和産業社製）３６ｋｇ、及び少量の水溶性ビタミンとミネラルを水２００ｋｇに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、大豆サラダ油（太陽油脂社製）３ｋｇ、パーム油（太陽油脂社製）８．５ｋｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）２．５ｋｇ、レシチン（味の素社製）０．２ｋｇ、脂肪酸モノグリセリド（花王社製）０．２ｋｇ、及び少量の脂溶性ビタミンを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約５９ｋｇを調製した。この中間製品粉末５０ｋｇに、蔗糖（ホクレン社製）６．８ｋｇ、アミノ酸混合粉末（味の素社製）１６７ｇ、及び前記製造例１で製造したセラミド（ＬＭＣｅｒ−２）６０ｇを添加し、均一に混合して、スフィンゴ糖脂質を含有する経腸栄養食粉末約５６ｋｇを製造した。
【００５８】
実施例３（参考実施例）
前記製造例４で製造したガングリオシド（ＧＡＡ−７）１００ｇ、ラクチュロース粉末（森永乳業社製）１１０ｇ、マルツデキストリン（松谷化学工業社製）６５５ｇ、脱脂粉乳（森永乳業社製）９５ｇ、ステビア甘味料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）１ｇ、ヨーグルト・フレーバー（三栄源エフ・エフ・アイ社製）５ｇ、及びグリセリン脂肪酸エステル製剤（理研ビタミン社製）３４ｇの各粉末を配合して均一に混合し、打錠機（畑鉄鋼所社製）を使用して、錠剤１錠当り０．５ｇとし、１２錠／分の打錠速度、９．８ＫＰａの圧力で前記混合粉末を連続的に打錠し、ガングリオシド（ＧＡＡ−７）含有タブレット１８００錠（約９００ｇ）を製造した。
【００５９】
実施例４（参考実施例）
乳脂肪含量３．５％、無脂乳固形分含量９．２％の生乳１０ｋｇを均質化し、９０〜９２℃で１０分間加熱殺菌した。これを約４２℃に冷却し、スターターとして市販のストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）及びラクトバシラス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ）の牛乳カルチャーをそれぞれ１００ｇずつ添加した。これを発酵タンク内で充分に攪拌し、４２〜４５℃で４時間静置して発酵させた。この発酵乳を攪拌しながら５〜８℃に冷却し、次いで、ホモゲナイザーで均質化することによって均質化発酵乳を調製した。次に、１７％のグラニュウ糖（東洋精糖社製）液５ｋｇにペクチン（三栄源ＦＦＩ社製）６０ｇ及び前記製造例５で製造したガングリオシド（ＡＧ−３）３０ｇを添加して、９０〜９２℃で１０分間殺菌した後、５〜８℃に冷却して糖液を調製した。これらの方法で調製した均質化発酵乳、糖液のそれぞれ全量をタンク内で十分に混合し、紙容器に１２０ｍｌずつ充填した後、密封してドリンクヨーグルトを製造した。
【００６０】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は、棘皮動物から抽出されるα−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質、又はα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するスフィンゴ糖脂質を有効成分として含有する血糖降下組成物に係るものであり、本発明により、次のような効果が奏される。
（１）本発明の血糖降下組成物は、血糖降下作用を有し、血糖値の上昇を抑制し、高血糖状態の血糖値を低下させる効果を有する。
（２）この組成物は、前糖尿病又は糖尿病状態での高血糖状態から引き起こされる合併症の治療及び／又は予防効果を有する。
（３）血糖降下作用を有する新規医薬組物を提供することができる。
（４）水産業の現場において大量に捕獲される棘皮動物の新しい有効利用法を提供することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、スフィンゴ糖脂質の基本構造を示す図である。
【図２】図２は、棘皮動物からスフィンゴ糖脂質であるセラミド及びガングリオシドを製造する方法を示すフローチャートである。

Claims (3)

1. 棘皮動物門に属する生物から精製されるα−オキシ脂肪酸及びスフィンゴシン骨格を有するセラミド及び／又はガングリオシドを有効成分とすることを特徴とする血糖降下作用を有する血糖降下組成物。
2. 棘皮動物門に属する生物から精製されるα−オキシ脂肪酸及びフィトスフィンゴシン骨格を有するセラミド及び／又はガングリオシドを有効成分とすることを特徴とする血糖降下作用を有する血糖降下組成物。
3. 前記組成物が、医薬組成物である請求項１又は２に記載の血糖降下組成物。

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