JP4300120B2 - 抗蠕虫性アントラキノン及びその使用方法 - Google Patents

Description

（関連出願へのクロスレファレンス）
本出願は、２００２年４月１５日出願の米国仮出願番号第６０／３７２，５７６号及び２００２年６月１７日出願の米国仮出願番号第６０／３８９，３６８号に関する優先権を主張するものである。
（連邦政府の後援による研究又は開発に関する記述）
適用なし。
（「コンパクトディスクで提出されたコンピュータリスト添付」の参照）
適用なし。

本発明は、抗蠕虫性であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで、特に住血吸虫ｓｐ．を阻害するための組成物に有用であるアントラキノンに関する。好ましいアントラキノンは以下の式を有する

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、置換されたアルキル、アルケン、置換されたアルケン、アルキン、アリール、置換されたアリール、環状、置換された環状、酸基、炭水化物又はそれらの組合せであり、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物又はそれらの組合せなどの１〜１２個の炭素を含む基であり、ハロゲンはＩ、Ｆ、Ｂｒ又はＣｌである）。具体的な実施形態では、アントラキノンは以下の式を有する

（式中、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びそれらの組合せなどの１〜１２個の炭素を含む基である）。

住血吸虫症は、住血吸虫属の寄生性二生吸虫によって引き起こされる、世界中で少なくとも２億人の人々を苦しめ、さらに６億人をリスクに曝している疾患である（Ｃｈｉｔｓｕｌａら、Ａｃｔａ Ｔｒｏｐ．第７７巻、４１〜５１頁（２０００年））。慢性の住血吸虫感染症は、下痢、肝線維症及び門脈圧亢進症、中枢神経系疾患、肺細動脈の塞栓症及び血尿を含む様々な病態への進行を招く可能性がある。多くの住血吸虫が知られているが、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、メコン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｅｋｏｎｇｉ）、住血吸虫インテルカラトゥム（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｕｍ）及びビルハルツ住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）を含む５種だけが、ヒトの感染症の主たる原因であるようである。

これらの二生住血吸虫は、淡水に生息する媒介体のカタツムリ宿主から、自由遊泳性のセルカリアが出現し、口の吸盤又は粘液分泌を介して皮膚に付着することによってヒトに感染し、タンパク質分解酵素を放出することによって真皮に浸透する複雑なライフサイクルを有している。同時に、セルカリアはその尾部（複数）を脱ぎ落として幼住血吸虫（ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｕｌａ）に変態し、これが心臓や肺に輸送され体循環に至る静脈系に侵入する。最後には、幼住血吸虫は肝臓に到達し、そこで性的に成熟した成体に成長する。雄と雌の成体は交尾したペアを形成し、それが門脈に移動し、住血吸虫の特定の種に応じて最終的には腸間膜若しくは膀胱の静脈に達し、産卵を始め、一般にこれは３〜５年間に及ぶ。この卵が一般に宿主の免疫応答の引き金を引く原因となる。この免疫応答が臨床的徴候の続発症を招く肉芽腫形成をもたらす（Ｂｉｃａら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．第１４巻、６３７〜６４２頁（２０００年）；Ｅｌｌｉｏｔ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．第２５巻、５９９〜６２４頁（１９９６年）；Ｍｏｒｒｉｓ及びＫｎａｕｅｒ、Ｓｅｍ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．第１２巻、１５９〜１７０頁（１９９７年）；Ｓｃｈａｆｅｒ及びＨａｌｅ、Ｃｕｒｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ、第３巻、２９３〜３０３頁（２００１年））。

住血吸虫感染症に対する化学療法的治療に利用可能な選択肢は限られているが、選択される薬物はピラジオノイソキノリン、プラジカンテルである（Ｅｌｌｉｏｔ、同上）。最近のプラジカンテル耐性住血吸虫の発見と相まった薬物の世界中での長期的な適用は、残念ながら、薬物耐性住血吸虫菌株への進展に対する懸念を生み出した（Ｃｉｏｌｉ、Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．Ｔｏｄａｙ第１４巻、４１８〜４２２頁（１９９８年）及びＣｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．第１３巻、６５９〜６６３頁（２０００年）；Ｗｉｌｌｉａｍら、Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．第１２２巻、６３〜６６頁（２００１年））。住血吸虫症を治すのに利用可能な他の選択肢がないので、住血吸虫感染症の治療と予防の新規の方法の開発の差し迫った必要性がある（Ｃｉｏｌｉ、ｉｂｉｄ．）。

住血吸虫症の治療のために、カンゾウ（ｄａｙｌｉｌｙ）の根（ヘメロカリス ｓｐｐ．（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓ ｓｐｐ．）、キスゲ科（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｄａｃｅａｅ））がアジアで用いられてきた（Ｓｈｉａｏら、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｉｎｉｃａ、第９巻、２１８〜２２４頁（１９６２年）；Ｓｈｉａｏら、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｉｎｉｃａ、第９巻、２１７〜２２４頁（１９６２年））。しかし、この治療方法は、ヒトへのヘメロカリスの根の抽出物の投与に付随する多くの有毒な副作用と死亡のために好まれていない（Ｗａｎｇら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．第２８巻、１８２５〜１８２６頁（１９８９年））。ヘメロカリスの根の治療特性をもたらす活性構成物質を特定するためのこれまでの努力によって、哺乳動物において麻痺、失明及び死を引き起こすことが示されている、スティパンドロール（ｓｔｙｐａｎｄｒｏｌ（Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｙａｎｇ、１９９３年））として知られている神経毒性のビナフタレンテトロールの単離に至っている（Ｍａｉｎら、Ａｕｓｔ．Ｖｅｔ．Ｊ．第５７巻、１３２〜１３５頁（１９８１年）；Ｃｏｌｅｇａｔｅら、Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．３８：１２３３〜１２４１頁（１９８５年））。Ｃｈｅｎら（Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｉｎｉｃａ、第９巻、５７９〜５８６頁（１９６２年））による他の報告では、研究者等は黄色粉末単離物を得て、住血吸虫に対する生物学的活性と、ヘメロカリスの根の使用に付随する有毒な副作用の両方がこの単離物に帰するとした。しかしその構造は全く同定されなかった。他の研究には、カンゾウ中に見出される他の化合物が記載されているが、これらの取り組みはどれも、ヘメロカリスの根からの生物活性のある駆虫性（ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉｃｉｄａｌ）化学構成物質を完全に特性評価する必要性を検討していない。

抗蠕虫活性を有する化合物は、従来技術では、Ｌｏｅｗｅらの米国特許第４，１１７，１５６号に記載されているオキサムニキン、メトリホナート及び４−（４−ニトロアニリノ）−フェニルイソチオシアナートなどが知られている。しかし、オキサムニキンはマンソン住血吸虫に対してだけ効果があり、雌虫より雄に対してより活性であって、未成熟の虫には効果がない。メトリホナートはビルハルツ住血吸虫に対してだけ活性がある。Ｇｕｌｌｉｙａらの米国特許第５，０９１，３８５号、同５，１７７，０７３号、及び同５，４８９，５９０号は、使用前に化学薬品、放射線（好ましくはレーザーによる照射）、ガンマ線、又は電位装置からの電子などの活性化剤で活性化した場合、腫瘍、細菌、ウイルス及び住血吸虫などの寄生生物を死滅させることができる光活性化合物を含む治療混合物を開示している。その光活性化合物には、アントラキノンの一般的示唆が含まれている。

上記に照らして、ヒトを含む温血動物の蠕虫性感染症を治す薬物の保有量を増やすために、抗蠕虫活性を有する新規の化合物の必要性が依然として存在する。

したがって、本発明の目的は、本明細書で開示される抗蠕虫活性を有するアントラキノンなどの組成物を提供することである。

本発明の他の目的は、ヒトを含む温血動物に感染する蠕虫を阻害するためにアントラキノンを使用する方法を提供することである。

さらに、本発明の目的は、ヒトを含む温血動物に感染する住血吸虫属のものなどの病原性トレマトーデを阻害するためにアントラキノンを使用する方法を提供することである。

本発明の上記その他の目的は、後述する図面と好ましい実施形態を参照すればより明らかになるであろう。

本発明は、蠕虫を阻害量の１種又は複数のアントラキノンに曝すことによって、住血吸虫属を含むものなどの蠕虫を、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで阻害する方法を提供する。アントラキノンは、特にヒドロキシル基が位置していない環において、Ｉ、Ｆ、Ｂｒ及びＣｌなどのハロゲンで置換されていてよい。環の中の置換基は１個又は複数のハロゲンを含むこともできる。

本明細書では、「阻害性」という用語は、蠕虫又は細胞の成長を制限するか、又は蠕虫若しくは細胞の成長を停止するか、或いは蠕虫若しくは細胞を死滅させることを意味する。したがって、この用語は、蠕虫若しくは細胞に不都合な影響を及ぼすどんな影響も包含する。

したがって、一つの実施形態では、本発明は、蠕虫を阻害量のアントラキノンに曝すことを含む寄生性蠕虫を阻害する方法を提供する。

具体的には、本発明は、寄生性蠕虫を以下の式

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、置換されたアルキル、アルケン、置換されたアルケン、アルキン、アリール、置換されたアリール、環状、置換された環状、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基であり、ハロゲンはＩ、Ｆ、Ｂｒ及びＣｌからなる群から選択される）
を有する抗蠕虫量の少なくとも１種のアントラキノンに曝すことを含む、寄生性蠕虫の阻害方法を提供する。

本発明はさらに、寄生性蠕虫を以下の式

（式中、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基である）
を有する抗蠕虫量の少なくとも１種のアントラキノンに曝すことを含む、寄生性蠕虫の阻害方法を提供する。

本発明はさらに、住血吸虫ｓｐ．を以下の式

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、置換されたアルキル、アルケン、置換されたアルケン、アルキン、アリール、置換されたアリール、環状、置換された環状、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基であり、ハロゲンはＩ、Ｆ、Ｂｒ及びＣｌからなる群から選択される）
を有する阻害量の少なくとも１種のアントラキノンに曝すことを含む、住血吸虫ｓｐ．の阻害方法を提供する。

本発明はさらに、住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐ．）を以下の式

（式中、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基である）
を有する阻害量の少なくとも１種のアントラキノンに曝すことを含む、住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐ．）の阻害方法を提供する。

上記方法の好ましい実施形態では、アントラキノンは１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン（化合物３）、１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン（化合物６）又はその両方であり、阻害はｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏのどちらであってもよい。

上記方法の他の実施形態では、アントラキノンは、ミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの投薬量で阻害性である。

本発明は、病原性トレマトーデに感染した温血動物若しくはヒトにおいて、
（ａ）１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン（化合物３）及び１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン（化合物６）からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種のアントラキノンを、薬剤として許容される担体中に含有する組成物を提供することと、（ｂ）病原性トレマトーデを阻害するためにその組成物を温血動物若しくはヒトに投与することを含む病原性トレマトーデを阻害する方法をさらに提供する。具体的な組成物は、住血吸虫の種である住血吸虫性皮膚炎（ｓｗｉｍｍｅｒｓ ｉｔｃｈ、水泳者の痒み）用の局所的な組成物である。

本方法の他の実施形態では、アントラキノンはミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの投薬量で阻害性である。

本方法のさらに他の実施形態では、アントラキノンは温血動物若しくはヒトに、経口、皮下、腹腔内、局所、静脈内、局所、鼻腔内又は経直腸で投与する。

本発明は、病原性トレマトーデに感染した温血動物若しくはヒトにおいて、
（ａ）薬剤として許容される担体中に、阻害量の１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチル−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン（化合物７）と、１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン（化合物４）及び１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−マロニル−（１−６）−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン（化合物５）からなる群から選択される少なくとも１種のアントラキノンを含有する組成物を提供すること、及び（ｂ）病原性トレマトーデを阻害するためにその組成物を温血動物若しくはヒトに投与することを含む病原性トレマトーデを阻害する方法をさらに提供する。

本方法の他の実施形態では、組成物は１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン（化合物３）及び１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン（化合物６）からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種のアントラキノンをさらに含む。

本方法のさらに他の実施形態では、アントラキノンはミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの投薬量で阻害性である。

さらに他の実施形態では、アントラキノンは温血動物若しくはヒトに、経口、皮下、腹腔内、局所、鼻腔内、静脈内又は経直腸で投与する。

本方法の好ましい実施形態では、アントラキノンは１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，６−メチルアントラキノン（化合物１）、２−アセチル−３，６−メチルアントラキノンモノアセテート（化合物１ａ）、１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，７−メチルアントラキノン（化合物２）、２−アセチル−３，７−メチルアントラキノンモノアセテート（化合物２ａ）、１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン（化合物３）、１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン（化合物４）、１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン（化合物６）及び１，８−ジヒドロキシ−３−カルボキシアントラキノン（化合物８）からなる群から選択され、阻害はｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏのどちらであってもよい。

上記方法の他の実施形態では、アントラキノンはミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの投薬量で阻害性である。

本発明は、（ａ）以下の式

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、置換されたアルキル、アルケン、置換されたアルケン、アルキン、アリール、置換されたアリール、環状、置換された環状、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基であり、ハロゲンはＩ、Ｆ、Ｂｒ及びＣｌからなる群から選択される）を有する少なくとも１種のアントラキノンと、（ｂ）薬剤として許容される担体とを含む抗蠕虫性組成物であって、好ましくは組成物が担体ミリリットル若しくはグラム当たり約１〜１，０００マイクログラムのアントラキノンを含有する組成物をさらに提供する。

アントラキノンは以下の式

（式中、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基である）
を有することが好ましい。

アントラキノンは、１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，６−メチルアントラキノン（化合物１）、２−アセチル−３，６−メチルアントラキノンモノアセテート（化合物１ａ）、１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，７−メチルアントラキノン（化合物２）、２−アセチル−３，７−メチルアントラキノンモノアセテート（化合物２ａ）、１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン（化合物３）、１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン（化合物４）、１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン（化合物６）及び１，８−ジヒドロキシ−３−カルボキシアントラキノン（化合物８）からなる群から選択されることがより好ましい。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

本発明は以下の式

を有する単離され精製されたアントラキノンも提供する。

すべての特許、特許出願、官庁出版物、政府規制、及び本明細書で引用した参考文献は、その全体を参照により本明細書に組み込む。紛争の場合、定義を含む本発明の記述によって照査されることになる。

本発明は、アントラキノンと、ヒトを含む温血動物の蠕虫性感染症を治すための抗蠕虫性化合物としてのその使用方法を提供する。具体的には、アントラキノンはヒドロキシ−アントラキノンであり、一般にアントラキノンと共にこれは、従来技術ではそれ自体抗蠕虫の用途に有用であることは未知であると考えられている。ヒドロキシ置換されたアントラキノンは、ＫｈａｎらのＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、２５５〜２５７頁（１９９４年）及びＣａｍｅｒｏｎらのＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、第２７巻、４９９９〜５００２頁（１９８６年）に記載のようにして合成によって得ることができる。或いは、以下に示すようにカンゾウ（ヘメロカリスフルバ（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓ ｆｕｌｖａ））の根などの植物資源から単離することができる。

本明細書の実施例で述べるように、Ｈ．フルバ（Ｋｗａｎｚｏ）の根をヘキサン、ＥｔＯＡｃ及びＭｅＯＨで抽出した。さらなる研究用にヘキサン及びＭｅＯＨ抽出物を選択し、続いて、ＳｉゲルＭＰＬＣ及びＰＴＬＣ、ＯＤＳ ＭＰＬＣ及び分取ＨＰＬＣなどを含むクロマトグラフィー手法と結晶化との組合せにかけた。これによって９種の新規のアントラキノン、クァンゾキノン（ｋｗａｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ）、すなわち、クァンゾキノンＡ（化合物１：（１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，６−メチルアントラキノン））、クァンゾキノンＡモノアセテート（化合物１ａ：（２−アセチル−３，６−メチルアントラキノンモノアセテート））、クァンゾキノンＢ（化合物２：（１−ヒドロキシ−２−アセチル−３，７−メチルアントラキノン））、クァンゾキノンＢモノアセテート（化合物２ａ：（２−アセチル−３，７−メチルアントラキノンモノアセテート））、クァンゾキノンＣ（化合物４：（１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン））、クァンゾキノンＤ（化合物５：（１，８−ジヒドロキシ−２−マロニル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン））、クァンゾキノンＥ（化合物６：（１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノン））、クァンゾキノンＦ（化合物７：（１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチル−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドアントラキノン））及びクァンゾキノンＧ（化合物９：（１，８−ジヒドロキシ−２−メチル−３−カルボキシアントラキノン））、並びに新規のナフタレングリコシド（化合物１１；５−ヒドロキシジアネリン（ｈｙｄｒｏｘｙｄｉａｎｅｌｌｉｎ））を発見し単離するに至った。これらの新規の化合物、並びに既知の化合物３（１，２，８−ヒドロキシ−３−メチルアントラキノン或いは２−ヒドロキシクリソファノールとして知られているアントラキノン）、化合物１０（ジアネリン）及び化合物１２（６−メチルルテオリン）についての、構造及び完全な^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルの帰属を、徹底的な１Ｄ及び２Ｄ ＮＭＲ研究に基づいて行い、本明細書で初めて開示した。上記の化合物の構造を図１に示す。アントラキノンは、これらに限定されないが、ＤＭＳＯ、エタノールなどのアルコール、水酸化アルカリ水溶液、Ｎａ_２ＣＯ_３溶液及びＮＨ_３溶液を含むプロトン性及び非プロトン性溶媒に可溶性である。

アントラキノンの抗蠕虫活性の試験を行った際、化合物３及び６が抗蠕虫活性を有していることを発見した。化合物３は、約２５μｇ／ｍＬの濃度で住血吸虫セルカリアを約１５秒間以内の曝露で急速に固定化し（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ）、曝露後２４時間でセルカリアの約５０％を死滅させることが判明した。約３．１２５μｇ／ｍＬの濃度でセルカリアを、約４５分間以内の曝露で固定化した。化合物６も、約２５μｇ／ｍＬの濃度でセルカリアを固定化するが、約１２〜１４分の時間にわたることが判明した。しかし、化合物６は曝露後２４時間でセルカリアのすべてを死滅させた。化合物４及び５は化合物３へ加水分解することができ、化合物７は化合物６へ加水分解することができる。これらの結果は、アントラキノン、特に化合物３及び６は異なった方式の作用を有しているが、どちらも蠕虫性感染症を治療するのに、単独であっても併用しても、有用であることを実証している。

したがって、抗蠕虫性化合物として有用である本発明のアントラキノンには、それ自体抗蠕虫活性を有する個々のアントラキノン化合物と、蠕虫又はヒトを含む温血動物の腸内で加水分解される、又はｉｎ ｖｉｔｒｏで加水分解されて抗蠕虫活性を有する化合物を生成するアントラキノン化合物との両方が含まれる。例えば、糖置換基を有するアントラキノン（化合物４、５及び７）は、化合物が、投与された蠕虫又はヒトを含む温血動物の腸内で加水分解されて、抗蠕虫活性を有するアントラキノンを生成することができる。

アントラキノンは、蠕虫、特にヒト用医薬品で重要である蠕虫を阻害するための治療方法に特に有用である。そうした蠕虫には、鉤虫などの腸管内に住むもの、特にアンシクロストーマ（Ａｎｃｙｃｌｏｓｔｏｍａ）又はネカトール（Ｎｅｃａｔｏｒ）、及び住血吸虫属の寄生性二生吸虫などの血流中に住むもの、特に、ビルハルツ住血吸虫、マンソン住血吸虫、メコン住血吸虫、住血吸虫インテルカラトゥム及び日本住血吸虫が含まれる。

抗蠕虫活性を有する、したがって抗蠕虫性化合物として有用であるアントラキノンは以下の一般化学式を有する。

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、置換されたアルキル、アルケン、置換されたアルケン、アルキン、アリール、置換されたアリール、環状、置換された環状、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基であり、ハロゲンはＩ、Ｆ、Ｂｒ及びＣｌからなる群から選択される）

具体的な実施形態では、アントラキノンは以下の一般化学構造を有する。

（式中、Ｒはメチル、アルキル、置換されたアルキル、アルデヒド、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、酸基、炭水化物及びこれらの組合せからなる群から選択される１〜１２個の炭素を含む基である）

上記の一般化学式を有する抗蠕虫活性をもつ好ましいアントラキノンは、カンゾウから単離された化合物３であり、種小名２−ヒドロキシクリソファノールを有し、以下の化学式

を有する１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノンと、カンゾウから単離された新規の化合物６であり、種小名クァンゾキノンＦを有し、以下の化学式

を有する１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノンである。

蠕虫若しくは温血動物又はヒトの腸内などでｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで、抗蠕虫活性を有するアントラキノンへ加水分解され得るアントラキノンも抗蠕虫性化合物として有用である。これらのアントラキノンは一般化学式Ａ

又は一般化学式Ｂ

（式中、Ｒはそれぞれについて、低級アルキル、１〜１２個の炭素原子を含む低級置換アルキル、アルデヒド基、炭水化物及び酸基からなる群から選択される）
を有する。

一般化学式Ａを有する抗蠕虫活性をもつアントラキノンへ加水分解され得る好ましいアントラキノンには、カンゾウから単離された新規の化合物４であり、種小名クァンゾキノンＤを有し、化学式

を有する１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−グルコピラノシド−３−メチルアントラキノン、及びカンゾウから単離された新規の化合物５であり、種小名クァンゾキノンＥを有し、化学式

を有する１，８−ジヒドロキシ−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（（１→６）マロニル）−３−メチルアントラキノンが含まれる。

一般化学式Ｂを有する抗蠕虫活性をもつアントラキノンへ加水分解され得る好ましいアントラキノンには、カンゾウから単離された新規の化合物７であり、種小名クァンゾキノンＦを有し、化学式

を有する１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチル−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド−アントラキノンが含まれる。

化合物４及び５の化学式から明らかなように、どちらの化合物もｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで加水分解されると、加水分解されて化合物３となる。化合物７はｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで加水分解されると、加水分解されて化合物６となる。本明細書で示すように、化合物３と６のどちらも抗蠕虫活性を有している。

蠕虫、特に住血吸虫ｓｐ．などの病原性トレマトーデに感染した温血動物若しくはヒト（患者）を治療するための方法は、活性成分として、阻害量の１種又は複数のアントラキノン、好ましくは化合物３、４、５、６及び７からなる群から選択される１種又は複数のアントラキノンを含む抗蠕虫性組成物を温血動物若しくはヒトに提供することを含む。

例えば一つの実施形態では、温血動物若しくはヒトに阻害量の化合物３又は化合物６を提供する。他の実施形態では、好ましいことであるが、温血動物若しくはヒトに阻害量の化合物３及び６を提供する。さらに他の実施形態では、温血動物若しくはヒトに、化合物４、５及び７からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種の化合物を提供する。さらに他の実施形態では、温血動物若しくはヒトに、阻害量の化合物７と、化合物４及び５からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種の化合物を提供する。さらに他の実施形態では、温血動物若しくはヒトに阻害量の化合物３及び阻害量の化合物７を提供する。さらに他の実施形態では、温血動物若しくはヒトに、阻害量の化合物７と、化合物４及び５からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種の化合物と、化合物３及び６からなる群から選択される阻害量の少なくとも１種の化合物とを提供する。上記の化合物の特定の組合せを含む他の実施形態を、蠕虫特に、住血吸虫属のものなどの病原性トレマトーデを阻害するための、抗蠕虫性組成物中の活性成分として用いることができることは容易に明らかである。上記組成物において、アントラキノンはミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの投薬量で阻害性である。

カンゾウから単離されたアントラキノンは、温血動物若しくはヒトに投与する前に活性化させる必要なく抗蠕虫性であるので、アントラキノンを含む抗蠕虫性組成物は、アントラキノンを温血動物若しくはヒトに投与するための広い範囲の実施形態を包含することができる。さらに、抗蠕虫性組成物を、非医療環境（病院や医療クリニック以外）、及び活性化剤へのアクセスが制限されているか、高価であるか、又は存在しない環境において、温血動物又はヒトに投与することができる。

好ましい実施形態では、蠕虫感染症のヒトを含む温血動物を治療するため、又は感染症を阻害するための１種又は複数のアントラキノンを、薬剤として許容される担体中に阻害投薬量で温血動物若しくはヒトに提供する。したがって、アントラキノンを、薬剤担体物質を用いて、通常の混合法、顆粒化法、コーティング法、懸濁法及びカプセル化法の手段などの従来技術でよく知られている方法によって、経口、経直腸又は他の方式の投与のための慣習的な調剤物に加工する。例えば、経口用途のための抗蠕虫性アントラキノン調剤物は、アントラキノンの１種又は複数を固体薬剤担体と混合し、任意選択で、得られた混合物を顆粒化し、望むなら、かつ／又は任意選択で適切な補助剤を添加した後、混合物若しくは顆粒物を加工して錠剤又は糖衣錠コアの形態に加工することによって得ることができる。

固形調剤物用の適切な薬剤担体は、具体的には、糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトール若しくはソルビトール、セルロース調剤物及び／又はリン酸カルシウム、例えばトリリン酸カルシウム若しくはリン酸水素カルシウムなどの賦形剤；また、例えばトウモロコシ、小麦、米若しくはじゃがいもデンプンを用いたデンプンペースト、ゼラチン、トララガント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／又はポリビニルピロリドン、部分的に遊離した官能基を有するポリアクリレート若しくはポリメタクリレートのエステルなどの結合剤；及び／又は、必要なら、上記のデンプン、またカルボキシメチルデンプン、架橋したポリビニルピロリドン、寒天若しくはアルギン酸、又はアルギン酸ナトリウムなどのそれらの塩などの発泡剤である。補助剤は主に流動調節剤及び滑剤であり、例えば、ケイ酸、滑石粉、ステアリン酸、又はステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウムなどのその塩である。糖衣錠コアには、任意選択で胃液に耐性のある、適切なコーティングを施す。その場合、とりわけ、任意選択でアラビアゴム、滑石粉、ポリビニルピロリドン及び／又は二酸化チタンを含有する濃厚糖溶液、又は水性溶媒のラッカー溶液、胃液に対して耐性のあるコーティングをもたらすために部分的に遊離した官能基を有するポリアクリレート若しくはポリメタクリレートのエステルの溶液、又はアセチルセルロースフタレート若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの適切なセルロース調剤物の溶液が使用され、フタル酸エステル若しくはトリアセチンなどの適切な軟化剤は用いられることも用いられないこともある。例えば活性成分の様々な投薬の識別又はマーキングのために、染料又は顔料を、錠剤又は糖衣錠コーティングに添加することができる。

経口投与できる１種又は複数のアントラキノンを含む他の抗蠕虫性調剤物は、硬質のゼラチンカプセル剤、並びにゼラチン、及び必要なら、グリセリン又はソルビトールなどの軟化剤でできた硬質若しくは軟質の密封カプセル剤である。硬質ゼラチンカプセル剤は、例えば、トウモロコシデンプン、任意選択で顆粒状小麦デンプンなどの賦形剤、滑石粉、ステアリン酸マグネシウム若しくはコロイド状ケイ酸などの結合剤若しくは滑剤、任意選択で安定剤との混合物の顆粒の形態で、１種又は複数のアントラキノンを含むことができる。密封カプセル剤では、１種又は複数のアントラキノンは粉末若しくは顆粒の形態であるか、或いは好ましくは適切な溶媒中の懸濁物の形態で存在し、その際、懸濁剤を安定化させるために、例えばグリセリンモノステアレートを加えることができる。

経口で投与される他の抗蠕虫性調剤物は、例えば、通常の方法で調製された水性懸濁剤である。これは、１種又は複数のアントラキノンを、懸濁された形態で、かつ単一投与に十分な量を付与する濃度で含有する。いずれの水性懸濁剤も、最少量の安定剤及び／又は香味物質、例えば、サッカリンナトリウム、又は一定量の糖及び／又はソルビトール若しくは類似の物質を含有するシロップなどの甘味剤を含有する。振盪剤の調製のための、例えば濃縮物若しくは濃縮懸濁剤も適している。そうした濃縮物は単一投与量で包装することもできる。

経直腸投与のための適切な抗蠕虫性調剤物は、例えば１種又は複数のアントラキノンと座剤用ファンデーション物質との混合物からなる座剤である。そうした物質は、具体的には、天然若しくは合成のトリグリセリド混合物である。また、１種又は複数のアントラキノンのファンデーション物質中での懸濁物からなるゼラチン経直腸カプセル剤も適している。適切なファンデーション物質は、例えば高級、特に中級飽和脂肪酸の液体トリグリセリドである。

特に興味のある同様のものは、特に微細に粉砕した、好ましくは、５μｍ以下のメジアン粒子径を有する１種又は複数のアントラキノンを、デンプン、特に、トウモロコシデンプン若しくは小麦デンプン、また、例えばじゃがいもデンプン若しくは米デンプンとの混合物で含む調剤物である。これらは、プロペラ状の鋭利なエッジをもつ攪拌装置を有する高速混合機中で手短に混合する手段によって、例えば、３〜１０分の混合時間で、大量の構成物質の場合必要なら冷却を用いて作製することが好ましい。この混合の過程で、１種又は複数のアントラキノンの粒子は、一部の粒子のサイズが継続的に微細化されながら、デンプン粒子上に均一に沈着する。上記混合物は、例えば前述の通常の補助剤で固形投与単位の形態に加工する、すなわち、例えば錠剤若しくは糖衣錠の形にプレスする、又はカプセル剤中に充填することができる。しかし、これらは直接使用することもでき、或いは例えば、薬剤として許容される湿潤剤及び分散剤、例えばポリオキシエチレンソルビタンの高級脂肪酸とのエステル若しくはラウリル硫酸ナトリウム、及び／又は水性懸濁剤の調製のための、例えば約５〜２０倍量の水による濃縮物としての香味物質などの補助剤の追加後に使用することもできる。アントラキノン／デンプン混合物を表面活性物質若しくは他の補助剤と混合する代わりに、これらの物質を、懸濁剤を調製するために用いる水に加えてもよい。１種又は複数のアントラキノン／デンプン混合物と任意選択で補助剤からなる懸濁剤を作製するための濃縮物は、単一投与量で、必要なら、気密性及び防湿性の形で包装することができる。

さらに、抗蠕虫性調剤物は腹腔内、鼻腔内、皮下又は静脈内で投与することができる。一般に、腹腔内、経鼻、皮下又は静脈内投与の場合、１種又は複数の抗蠕虫性アントラキノンは、これらを、植物性オイル若しくは他の類似のオイル、合成脂肪族系酸グリセリド、高級脂肪族系酸のエステル又はプロピレングリコールなどの水性若しくは非水性溶媒中に、望むなら、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤及び保存剤などの通常の添加剤と共に溶解、懸濁又は乳化させることによって提供される。１種又は複数の抗蠕虫性アントラキノンは、温血動物、特にヒトの腹腔内、皮下又は静脈内での使用に許容される組成物中に提供することが好ましい。

本発明による抗蠕虫性調剤物は、温血動物、特にヒトへの投与に適した濃度で１種又は複数のアントラキノンを含み、その濃度は、投与の方式にもよるが、約０．３〜９５％、好ましくは約２．５〜９０％である。懸濁剤の場合、濃度は通常３０％を超えず、好ましくは約２．５％である。逆に、１種又は複数のアントラキノンを有する錠剤、糖衣錠及びカプセル剤の場合、１種又は複数のアントラキノンの所要投与量を確実に容易に摂取させるために、濃度は約０．３％より低くないことが好ましい。１種又は複数のアントラキノンを含む調剤物による、寄生性蠕虫に感染した温血動物又はヒトの治療は、寄生性蠕虫から温血動物若しくはヒトを実際に完全に解放するのに十分な投薬量、すなわち、寄生性蠕虫によって引き起こされた感染症の温血動物若しくはヒトを治療する、又は寄生性蠕虫の温血動物若しくはヒト中での成長を阻害するのに十分な量の１種又は複数のアントラキノンを含有する、単一の経口、経直腸、腹腔内、経鼻、皮下又は静脈内投与によって実施することが好ましい。必要なら、この治療のための投薬量は、数時間から数日の間隔で投与される複数の部分投薬量に分割することができる。１種又は複数のアントラキノンの投与される投薬量は、治療する温血動物若しくはヒトの種及び一般的状態と、温血動物若しくはヒトに感染している蠕虫の属及び種の両方によって影響を受ける。

アントラキノンは、アスカリディアガリ（Ａｓｃａｒｉｄｉａ ｇａｌｌｉ）、毛様線虫科（ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｉｄａｅ）、例えばニッポストロンギラスブラジリエンシス（ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）若しくはネマトスピロイデスデュビウス（ｎｅｍａｔｏｓｐｉｒｏｉｄｅｓ ｄｕｂｉｕｓ）、アンシロストマチダエ（ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａｔｉｄａｅ）、例えばアメリカ鈎虫（ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）及びアンシロストマセイラニカム（ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、及び円虫科（ｓｔｒｏｎｇｙｌｉｄａｅ）；ヒメノレプシスナナ（ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｓｉｓ ｎａｎａ）、アノプロセファリダエ（ａｎｏｐｌｏｃｅｐｈａｌｉｄａｅ）及びテニア科（ｔａｅｎｉｉｄａｅ）などの条虫類（ｃｅｓｔｏｄａ）に対する；特にファシオリダ（Ｆａｓｃｉｏｌｉｄａ）などの吸虫類（Ｔｒｅｍａｔｏｄａ）、例えば肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ）、特に住血吸虫、例えばマンソン住血吸虫、日本住血吸虫、メコン住血吸虫、住血吸虫インテルカラトゥム及び住血吸虫ヘマトビウム（ｈｅｍａｔｏｂｉｕｍ）に対する；またフィラリア症の病原体、例えば、ジペタロネーマウィテイ（Ｄｉｐｅｔａｌｏｎｅｍａ ｗｉｔｅｉ）及びリトモソイデスカリニーイ（Ｌｉｔｏｍｏｓｏｉｄｅｓ ｃａｒｉｎｉｉ）に対する感染症の温血動物及びヒトを治療する、又はその感染症を阻害するのに有用である。したがって、本発明による抗蠕虫性調剤物は、上記したものなどの寄生性蠕虫による侵襲の場合の温血動物及びヒトの治療、特に、鉤虫の侵襲をうけている、又は、住血吸虫症若しくはフィラリア症を発症している温血動物及びヒトの治療のために使用することができる。

アントラキノンはまた、新鮮な水を処理して、病原性蠕虫、特に水中にいる住血吸虫セルカリアを固定化する、かつ／又は死滅させるためにも有用である。したがって、アントラキノンは、新鮮な水湖、池、小川、川、プール等の中の住血吸虫の数を削減する、或いはそうした所から住血吸虫を除去するための撲滅プログラムに有用である。一般に、１種又は複数のアントラキノンを含む溶液を、表面に噴霧する、又は水面下で水本体中に注入することによって水の本体に施用する。或いは、１種又は複数のアントラキノンを乾燥した形で水本体に施用する。

以下の実施例は本発明のさらなる理解を進展させるためのものである。

本実施例ではカンゾウからのクァンゾキノンの抽出及び単離を示す。

ヘメロカリスフルバ（Ｋｗａｎｚｏ）植物を１９９９年８月にＰｅｒｅｎｎｉａｌ Ｐａｔｃｈ（Ｗａｄｅ、Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）から購入した。この植物をミシガン州立大学のキャンパスで栽培し、次いで２００１年４月に収穫した。葉を取り除き、１２４の植物の根と根頭を洗浄して−４℃で凍結させた。凍結した根を凍結乾燥させＷＡＲＩＮＧブレンダー中で粉砕して２．２ｋｇの微細な淡褐色の粉末を得た。

化合物１〜１２の単離及び精製のために、ＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）、Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）からのＳｉゲル（粒子径４０〜６３μｍ）、Ｓｕｐｅｌｃｏ（Ｂｅｌｌａｆｏｎｔｅ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）からのＡＭＢＥＲＬＩＴＥ ＸＡＤ−１６樹脂、Ｄｙｃｈｒｏｍ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）からのＬＣ−ＳＯＲＢ ＳＰ−Ａ−ＯＤＳゲル（粒子径２５〜４０μｍ）及びＡｎａｌｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｅｗａｒｋ、Ｄｅｌａｗａｒｅ）からのＳｉゲルＰＴＬＣプレート（２０×２０ｃｍ；２５０、５００及び１０００μｍ厚）を使用した。ＪＡＩＧＥＬ−Ｃ_１８カラム（１０μｍ、２０ｍｍ×２５０ｍｍ）で分取ＨＰＬＣをリサイクルさせながら、Ｊａｐａｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．モデルＬＣ−２０で分取ＨＰＬＣを実施した。すべての溶媒及び薬品は、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）から購入した。これらはＡＣＳ分析用グレードのものであった。

凍結乾燥した根（２．０ｋｇ）を３×８Ｌ部のヘキサン、酢酸エチル及びメタノールで順次抽出して、それぞれ、２５、２３及び１３０ｇの抽出物を得た。ヘキサン抽出物を５００ｍＬのヘキサン中に再溶解し、３×５００ｍＬ部のメタノールに分割した。メタノール画分をプールして１５ｇの抽出物を得た。これをＳｉゲルＶＬＣにかけ、４Ｌのヘキサン、３Ｌのヘキサン−アセトン（９：１）及び３Ｌのヘキサン−アセトン（３：２）で溶出させた。ヘキサン溶出液（８．５ｇ）を１００％ヘキサンから１００％アセトンへの勾配条件下でＳｉゲルＭＰＬＣにかけ、２００ｍＬの画分を集めた。すべての画分をＴＬＣで分析し、そのプロファイルの類似性によってプールして画分Ａ１〜Ａ４を得た。

ＳｉゲルＶＬＣからのヘキサン−アセトン（９：１）溶出液を勾配条件１００％ヘキサンからヘキサン−アセトン（１：１）への勾配条件下でＳｉゲルＭＰＬＣにかけて、画分Ｂ１〜Ｂ４を得た。

画分Ｂ２（１．５ｇ）を１００％ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃへの勾配条件下でＳｉゲルＭＰＬＣで再度クロマトグラフにかけ、２００ｍＬの画分を集め、ＴＬＣプロファイルに基づいてプールして画分Ｃ１〜Ｃ４を得た。

画分Ａ３（１ｇ）、Ａ４（１ｇ）、Ｃ２（３００ｍｇ）及びＣ３（３００ｍｇ）をＴＬＣによるさらなる試験に基づいてプールし、ＳｉゲルＭＰＬＣにかけた。溶出を１００％ヘキサンから１００％ＣＨＣｌ_３、ＣＨＣｌ_３−エタノール（１：１）への勾配条件下で実施し、１８ｍＬの画分Ｄ１〜Ｄ９０を集めた。

画分Ｄ１〜Ｄ１０をプールし（５００ｍｇ）、１００％ヘキサンからヘキサン−アセトン（９７：３）への勾配条件下でさらにＳｉゲルＭＰＬＣにかけ、１５ｍＬの画分Ｅ１〜Ｅ４０を集めた。

画分Ｅ６〜Ｅ２０（２００ｍｇ）は主に１つの主要成分からなり、したがってプールし、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（１０：１）（７２ｍｇ）、ヘキサン−ジエチルエーテル（６：１）（５１ｍｇ）及びベンゼン−ＣＨＣｌ_３（２０：１）での連続的なＳｉゲルＰＴＬＣにかけ、３０ｍｇのα−トコフェロールを透明なオイルとして得た。このオイルは文献（Ｂａｋｅｒ及びＭｙｅｒｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．第８巻、７６３〜７７０頁（１９９１年））に報告されているものと同一のスペクトル特性を示した。

画分Ｄ１２〜Ｄ４５（３００ｍｇ）を一緒にして、ＳｉゲルＰＴＬＣプレートにかけ、ベンゼン−ＣＨＣｌ_３（１０：１）中で２回展開させた。鮮明な黄色バンド（４４ｍｇ）が得られ、続いてＳｉゲルから抽出し、これを最少容量のＣＨＣｌ_３に溶解させ、わずかな程度の濁りが認められるまでヘキサンを滴下した。溶液を−２０℃で貯蔵して、化合物１と２の分離されない１：１混合物（^１Ｈ ＮＭＲに基づき）を微細な黄色針状物（１２ｍｇ）として得た。化合物１及び２の両方と、そのモノ酢酸塩１ａ及び２ａ（Ａｃ_２Ｏ／ピリジンから調製）を、他のＳｉゲルＴＬＣ及びＭＰＬＣ、並びにＯＤＳ ＭＰＬＣ及びＯＤＳ分取ＨＰＬＣを含む様々なクロマトグラフ技術にかけた。しかしこの２つの化合物を分離することはできなかった。

根のＭｅＯＨ抽出物を８００ｍＬのＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（３：１）中に溶解し、沈殿物が形成されるまで４℃で放置した。混合物を遠心分離（１６，０００×ｇ、１５分、４℃）にかけ、上澄をデカントして３０ｇの抽出物を得た。これをＸＡＤ−１６樹脂のカラムにかけて１０ＬのＨ_２Ｏ、６Ｌの２５％水性ＭｅＯＨ及び８Ｌの１００％ＭｅＯＨで溶出させた。ＭｅＯＨ溶出物（１８ｇ）を５００ｍＬのＨ_２Ｏ中に溶解させてＣＨＣｌ_３（３×３００ｍＬ）で分割した。ＣＨＣｌ_３画分をプールし乾燥して、２ｇの抽出物を得た。これをＯＤＳ ＭＰＬＣにかけて５０〜１００％ＭｅＯＨで溶出させ、１６ｍＬの画分Ｆ１〜Ｆ１６６を集めた。画分Ｆ１１６〜Ｆ１２５をプールし、１００ｍｇの残留物を得た。この残留物をＭｅＯＨ−アセトン（３：１）中に溶解し−２０℃で貯蔵して７ｍｇの化合物８を黄色粉末として得た。その物理的データ及びスペクトルデータと、文献に報告されているもの（Ｄａｎｉｅｌｓｅｎ及びＡｋｓｎｅｓ、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｃｈｅｍ．第３０巻、３５９〜３６０頁（１９９２年））との比較に基づいて化合物８はレイン（ｒｈｅｉｎ）と同定された。

ＣＨＣｌ_３での分割による水相（１６ｇ）を５０ｍＬのＭｅＯＨ中に溶解し、４５０ｍＬのアセトンを、混合しながら徐々に加え、混合物を４℃に保持した。上澄（１４ｇ）をＯＤＳ ＭＰＬＣにかけ、４５〜１００％ＭｅＯＨの勾配条件下で溶出させて、７５０ｍＬの画分Ｇ１〜Ｇ６を得た。画分Ｇ３（１ｇ）を再度ＯＤＳ ＭＰＬＣにかけ、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（２５：２５：５０：０．１から３０：３０：４０：０．１）の勾配条件下で溶出させて画分Ｈ１〜Ｈ６を得た。画分Ｈ５（１７０ｍｇ）をＭｅＯＨでＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０にかけた。主成分が黄色バンド（２５ｍｇ）として溶出し、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（５０：２０：３０：０．１）を用いてこれをＯＤＳ分取ＨＰＬＣでさらに精製して、１６ｍｇの化合物９を黄色粉末として得た。

画分Ｇ１（１０ｇ）を１０〜５０％ＣＨ_３ＣＮの勾配条件下でＯＤＳ ＭＰＬＣにかけ、５５０ｍＬの画分１１〜１７を集めた。画分１３（４１０ｍｇ）を、ＭｅＯＨを用いてＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０でクロマトグラフにかけ、８０ｍｇの黄色無定形固形物を得た。この物質を、ＥｔＯＡｃ−ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＨＣＯＯＨ（６５：２５：１０：０．８：０．１）（７５ｍｇ）、続くＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（８：２：１）（７０ｍｇ）によるＳｉゲルＰＴＬＣクロマトグラフィーに順次かけてさらに精製した。６０％ＭｅＯＨを用いたＯＤＳ分取ＨＰＬＣによる最終精製によって、６１ｍｇの化合物１０を透明な黄色ガラス状固形物として得た。

画分１４（１．５ｇ）をＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０にかけ、ＭｅＯＨで溶出させて１５０ｍＬの画分１１〜１６を得た。画分１３〜１６（４００ｍｇ）、１７（３００ｍｇ）、及びＨ２〜Ｈ４（７００ｍｇ）をプールして、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（２０：２０：６０：０．１から４０：４０：２０：０．１）を用いた勾配条件下でＯＤＳ ＭＰＬＣにかけ、１６ｍＬの画分Ｋ１〜Ｋ１０５を集めた。画分Ｋ２２〜Ｋ３８（４３０ｍｇ）を一緒にして、ＭｅＯＨを用いてＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０でクロマトグラフにかけ、画分Ｌ１〜Ｌ２を得た。画分Ｌ１（３００ｍｇ）をＳｉゲルＰＴＬＣにかけ、ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（８：２：０．１）で２回展開して単一のバンドを得た。６０％ＭｅＯＨを用いて、これをＯＤＳ分取ＨＰＬＣでさらに精製して３１ｍｇの化合物１１を透明なガラス状固形物として得た。

画分Ｌ２（１３０ｍｇ）をＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０にかけ、ＭｅＯＨで溶出させて８０ｍｇの黄色無定形固形物を得た。この物質をＭｅＯＨ中に溶解させ、−２０℃に置いて６２ｍｇの沈殿物を得た。沈殿物を、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（４０：１５：４５：０．１）を用いてＯＤＳ分取ＨＰＬＣで２回クロマトグラフにかけて３０ｍｇの黄色固形物を得た。６０〜１００％ＭｅＯＨの勾配条件下でさらに精製（分取ＨＰＬＣ）して単一画分を得た。これを減圧にかけ、−２０℃に置いて１ｍｇの化合物７を黄色粉末として得た。

画分Ｋ５０〜Ｋ５５一緒にして（９８ｍｇ）、ＭｅＯＨを用いてＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０クロマトグラフィーにかけ、１２５ｍＬの画分Ｍ１〜Ｍ５を集めた。画分Ｍ５（４０ｍｇ）をＭｅＯＨ中に溶解し、室温で放置して２５ｍｇの化合物４を微細な黄色針状物として得た。

画分Ｋ５６〜Ｋ６２をプールし（１３０ｍｇ）、ＭｅＯＨを用いてＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０にかけて画分Ｎ１〜Ｎ３を得た。画分Ｎ１（５０ｍｇ）を、ＭｅＯＨを用いてさらにＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０クロマトグラフィーにかけて画分（３５ｍｇ）を得た。これをＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（５０：２０：３０：０．１）によるＯＤＳ分取ＨＰＬＣでクロマトグラフにかけた。単一の画分を集め、減圧にして−２０℃に置き、６ｍｇの化合物５を鮮黄色の針状物として得た。画分Ｎ２（７ｍｇ）を、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（５０：２０：３０：０．１）を用いてＯＤＳ分取ＨＰＬＣでさらに精製して１ｍｇの化合物１２を黄色ガラス状固形物として得た。

画分Ｋ６３〜Ｋ７７をプールして、ＭｅＯＨを用いてＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０にかけ、１００ｍＬの画分０１〜０５を得た。画分０３（３０ｍｇ）を、ＣＨ_３ＣＮ−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ−ＴＦＡ（５０：２０：３０：０．１）を用いてＯＤＳ分取ＨＰＬＣにかけ、６ｍｇの黄色無定形固形物を得た。この物質を同じ条件下でＯＤＳ分取ＨＰＬＣによってさらに精製し、得られた画分を減圧にかけ−２０℃に置いて、４ｍｇの化合物６を微細な黄色針状物として得た。

画分Ｋ９４〜Ｋ１００を乾燥するまで減圧にかけて１３ｍｇの橙色の無定形固形物を得た。この物質を最少量のＭｅＯＨ中に溶解させて−２０℃に置き、７ｍｇの化合物３を橙色針状物として得た。

１２の化合物が表１に示す収率で得られた。

表２は、２．０ｋｇの凍結乾燥した根からの、ヘキサン、酢酸エチル及びメタノール抽出物の収量と、各抽出物中の化合物の収量を示す。

化合物１及び２の物理的特徴は以下のようにして測定した。

Ｖａｒｉａｎ ＶＲＸ（５００ＭＨｚ）とＶａｒｉａｎ ＩＮＯＶＡ（６００ＭＨｚ）装置（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルをそれぞれ、５００及び６００ＭＨｚで記録した。^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ ＶＲＸ装置を用いて１２５ＭＨｚで得た。ＣＤＣｌ_３中で化合物１及び２のＮＭＲスペクトルを得た。１Ｄ（^１Ｈ、^１３Ｃ、ＤＥＰＴ、選択的^１Ｈデカップリング及び差ＮＯＥ）及び２Ｄ（ＤＱＦ−ＣＯＳＹ、ロングレンジＣＯＳＹ、ＮＯＥＳＹ、ＨＭＱＣ及びＨＭＢＣ）ＮＭＲ試験のすべてにおいて、標準パルスシーケンスを用いた。マススペクトルを、ミシガン州立大学の質量分析設備で、ＪＯＥＬ ＡＸ−５０５Ｈ二重収束型質量分析計を用いてＥＩＭＳ分析のために７０ｅＶで操作し、ＪＯＥＬ ＨＸ−１１０二重収束型質量分析計（Ｐｅａｂｏｄｙ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いてＦＡＢＭＳ試験のために、陽イオンモードで操作して得た。ＵＶスペクトルは、ＥｔＯＨ中でＳｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ−２６０記録式分光光度計（Ｋｙｏｔｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて記録した。ＩＲスペクトルはＷｉｎＦＩＲＳＴソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ Ｎｉｃｏｌｅｔ，Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を用いてＭａｔｔｓｏｎ Ｇａｌａｘｙ Ｓｅｒｉｅｓ ＦＴＩＲ３０００で得た。旋光度はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ旋光計３４１（Ｓｈｅｌｔｏｎ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）で測定した。融点はＴｈｏｍａｓモデル４０Ｈｏｔ Ｓｔａｇｅ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）を用いて測定した。

ヘキサン抽出物を一連のクロマトグラフィー法にかけて、１２ｍｇの微細な黄色針状物をＣＨＣｌ_３−ヘキサンから結晶化さ、続いて単離した。この生成物の、^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルによる最初の検査では、殆どのプロトンと炭素のシグナルが二倍化していることが示された。これは多分３１超のユニークな炭素核からなる大きな二量体化合物であることを示唆している。しかし、正のＦＡＢＭＳではｍ／ｚ２９５［Ｍ＋Ｈ］^＋で主シグナルが示された。これは生成物が、それぞれがＣ_１８Ｈ_１４Ｏ_４の式を有する構造的に関連した２つの異性体の混合物であることを示唆している。このことは、ｍ／ｚ２７３［Ｍ＋Ｈ−Ｈ_２Ｏ］^＋に有意のフラグメントイオンが存在することによって支持される。それぞれ１８個の炭素及び１４個のプロトンスピンからなる２つの化合物についての^２−３Ｊ_ＣＨ連結性を表している二組の輪郭線（ｃｏｎｔｏｕｒ）を示した、ＨＭＢＣ試験によってさらなる証拠ももたらされた。ＳｉゲルＭＰＬＣ及びＴＬＣ、ＯＤＳ ＭＰＬＣ及び分取ＨＰＬＣ、並びに様々な溶媒系を用いた結晶化によって、２つの化合物を分離するために広範に努力したが不成功に終わった。アセチル化された生成物（１ａ及び２ａ）を互いに分離するためのさらなる試みを行ったが、この方法でも成功しなかった。したがって、これらの分離不可能な２つの構成異性体の１：１混合物で、化合物１と２の構造解明並びに全面的な^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲの帰属を実施した。

化合物１及び２は、それぞれ置換された１−ヒドロキシアントラキノン部分からなっていることが測定された。その証拠はｍ／ｚ２９５．０９７１［Ｍ＋Ｈ］^＋（計算では２９５．０９７０）でのＨＲＦＡＢＭＳと分光学的検討の組合せからもたらされた。化合物１及び２のＩＲスペクトルは、３４３８（ブロード、Ｏ−Ｈストレッチ）、１６７０（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されていない）及び１６３３ｃｍ^−１（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されている）で多くの特徴的な吸収バンドを示した。ＵＶスペクトルはλ_ｍａｘ＝４０３ｎｍを示し、これは単一のペリ−ヒドロキシル官能基の存在を示唆している（Ｓｃｈｒｉｐｓｅｍａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．第５１巻：５５〜６０頁（１９９９年））。これはδ_Ｈ１２．９０及び１２．９５で２つのシャープな一重線（これはＤ_２Ｏ交換でどちらも消失した）を現わした^１Ｈ ＮＭＲスペクトルによって支持された。化合物１及び２中での単一ヒドロキシル官能基の存在のさらなる証拠は、そのアセチル化生成物１ａ及び２ａによってもたらされた。このアセチル化生成物は、アセチル部分の付加を示しているｍ／ｚ３３７．１０６８［Ｍ＋Ｈ］^＋（Ｃ_２０Ｈ_１７Ｏ_５、３３７．１０７６について計算）での同一分子イオンをどちらも示した。１ａ及び２ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはδ_Ｈ１２と１３との間にダウンフィールドピークをもはや示さず、他方、^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルはδ_Ｃ１９．６（−ＣＯＣＨ_３）及び１６９．０（−ＣＯＣＨ_３）に新たなシグナルを示した。

^１Ｈ ＮＭＲ及びＤＥＰＴ試験は、化合物１と２の両方の中に、２つの芳香族基（δ_Ｃ２０．２ ｑ×２、２１．９ ｑ及び２２．０ ｑ）と１つのアセチル（δ_Ｃ３１．９ ｑ×２）メチル基の存在を示した。ＨＭＢＣ試験（表３）からのデータによって、化合物１及び２に示されるような、これらの官能基の帰属に対する証拠が提供された。この結論に好都合なさらなる支持が、ロングレンジＣＯＳＹ及び差ＮＯＥ試験、図２Ａ及び２Ｂから得られた。化合物１及び２はどちらも、Ｃ−１２（どちらもδ_Ｈ２．５９）及び１−ＯＨ’（それぞれδ_Ｈ１２．９５及び１２．９０）のメチルプロトンの放射に対して、逆（ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ）ＮＯＥ相関を示した。さらに、ＮＯＥ増強及びロングレンジＣＯＳＹ相関が、Ｃ−１３（どちらもδ_Ｈ２．３７）のメチルプロトンとＨ−４の芳香族一重線（どちらもδ_Ｈ７．６１）の間に認められた。これらのデータをあわせて、化合物１及び２に対する提案した環Ｂの帰属が確認された。

化合物１は、Ｈ−７（δ_Ｈ７．５８ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）及びＨ−８（δ_Ｈ８．１５ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）の間、並びにＣ−１４（δ_Ｈ２．５１ ｓ）のメチルプロトンと位置Ｈ−７及びＨ−５（δ_Ｈ８．０４ ｓ）でのプロトンとの間（図２Ａ）に、逆ＮＯＥ増強及びＣＯＳＹ相関を示した。これらの証拠によって、芳香族メチルＣ−１４（δ_Ｈ２１．９）は化合物１の環Ａ上の６位に結合していることが確認された。化合物２は、Ｃ−１４（δ_Ｈ２．５１ ｓ）のメチルプロトンとプロトンＨ−６（δ_Ｈ７．５８ ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）及びＨ−８（δ_Ｈ８．０５ ｓ）との間で（図２Ｂ）逆ＮＯＥ増強及びロングレンジＣＯＳＹ相関を示すことから異なっている。Ｈ−６とＨ−５（δ_Ｈ８．１３ ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）との間に、同様のＮＯＥ及びＣＯＳＹ相関が認められた。したがって、芳香族メチルＣ−１４（δ_Ｃ２２．０）の帰属は化合物２の環Ａ上の位置７と確認された。化合物１及び２はどちらも新たに発見された化合物であり、これらをクァンゾキノンＡ及びＢと命名した。それぞれその生物起源のソースを記念したものである。

クァンゾキノンＡ及びＢ（化合物１及び２）：黄色針状物；融点１６５〜１６７℃

すべてのＮＭＲスペクトルをＤＭＳＯ−ｄ_６（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ａｎｄｏｖｅｒ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で記録したこと以外は実施例２と同様にして化合物３の物理的特徴を測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物３〜１２を得た。続く精製によって、ＭｅＯＨから化合物３を橙色針状物として得た。ＨＲＥＩＭＳ（ｍ／ｚ２７０．０５３２［Ｍ］^＋（Ｃ_１５Ｈ_１０Ｏ_５、２７０．０５２８について計算））及びスペクトルによる根拠（ＩＲ、ＵＶ、ＩＤ及び２Ｄ ＮＭＲ）によって、化合物３（１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノン）は、ミルシンアフリカーナ Ｌ．（Ｍｙｒｓｉｎｅ ａｆｒｉｃａｎａ Ｌ．（カブコウジ科（Ｍｙｒｓｉｎａｃｅａｅ）））から以前単離され、種小名２−ヒドロキシクリソファノールが与えられていたものであることが確認された（Ｌｉ及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．第５２巻、６６０〜６６２頁（１９８９年）；Ｍｉｄｉｗｏ及びＡｒｏｔ、Ｉｎｔ．Ｊ．ＢｉｏＣｈｅｍｉＰｈｙｓｉｃｓ、第２巻、１１５〜１１６頁（１９９３年））。以前の研究ではこの化合物について部分的な^１Ｈ ＮＭＲ帰属がなされただけで、^１３Ｃ ＮＭＲ帰属はなされなかった。したがって、提案されたその構造を確認するために、我々は化合物３の徹底したＮＭＲ検討を行った。これはカンゾウからの化合物３の最初の報告であり、完全な^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルデータ（表４）の最初の報告である。

２−ヒドロキシクリソファノール（化合物３）：橙色針状物；融点２３９〜２４０℃；

（文献値についてはＬｉ及びＭｃｌａｕｇｈｌｉｎ、ｉｂｉｄ．；Ｍｉｄｉｗｏ及びＡｒｏｔ、ｉｂｉｄ．を参照されたい）。

化合物４の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物４を得た。化合物４は黄色針状物として得られ、化合物３に類似した多くのスペクトル特性を示した。化合物４のＩＲスペクトルは、３４５５（ブロード、Ｏ−Ｈストレッチ）、１６７１（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されていない）及び１６２４ｃｍ^−１（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されている）で吸収バンドを示した。ＵＶスペクトルλ_ｍａｘ＝４２９ｎｍを示し、これは２つのペリ−ヒドロキシル官能基の存在と一致した（ＳＣｈｒｉｐｓｅｍａ ｉｂｉｄ．；Ｂｒａｕｅｒｓら、Ｊ．Ｎａｔ．ｐｒｏｄ．第６３巻、７３９〜７４５頁（２０００年）；Ｌｉら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．第６３巻、６５３〜６５６頁（２０００年））。さらに、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＤ_２Ｏで交換可能な２つのダウンフィールドピーク（δ_Ｈ１２．００ ｓ及び１２．０４ ｂｒｓ）を示した。あわせると、こうした証拠は化合物４の１，８−ジヒドロキシアントラキノンのクロマフォア（ｃｈｒｏｍａｐｈｏｒｅ）の存在を支持している。

ＦＡＢＭＳはｍ／ｚ４３３［Ｍ＋Ｈ］^＋を示した。これはＣ_２１Ｈ_２１Ｏ_１０の分子組成を表す。^１Ｈ ＮＭＲは化合物４における環バンドＢ及びＡの置換パターンに対する重要な根拠を提供した。δ_Ｈ７．７０（ｄｄ、Ｊ＝１．０、７．５Ｈｚ）、７．７９（ｄｄ、Ｊ＝７．５、８．０Ｈｚ）及び７．３６（ｄｄ、Ｊ＝１．０、８．０Ｈｚ）でのＡＢＣスピン系を表す３個のプロトンが、化合物４の環Ａ上でそれぞれ、Ｃ−５、Ｃ−６及びＣ−７に結合した隣接位置を占めることが確認された。^１３Ｃ ＮＭＲ及びＤＥＰＴ試験（表４）によって、化合物４の環Ｂに結合した置換基、１つのメチン（δ_ｃ１２１．５）、１つのＣ−結合（δ_ｃ１４１．４）メチル（δ_ｃ１７．２）、及びヘテロ原子に結合した２つの第四級炭素（δ_ｃ１４７．７及び１５３．９）の同定のためのさらなる根拠が提供された。これらの炭素は、それぞれのその化学シフトとＨＭＢＣ及びＨＭＱＣ試験からの結果に基づいて、化合物４の環Ｂ中での位置の帰属がなされた。グルコピラノース部分のものと一致する化学シフト値を示す、追加の５つのメチン（δ_ｃ６９．７、７４．２、７６．３、７７．３、及び１０２．９）及び１つのメチレン（δ_ｃ６０．８）スピンが観察された。グルコピラノースは、Ｈ−１’（δ_Ｈ５．０７、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）のカップリングに基づいてβ−配置の帰属がなされた。化合物４の全体構造はＨＭＢＣ試験に基づいて確認された。化合物４は新たに発見されたアントラキノングリコシドであり、クァンゾキノンＣと命名した。

クァンゾキノンＣ（化合物４）：微細な黄色針状物；融点２３３〜２３４℃；

化合物５の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物５を得た。ｍ／ｚ５１９［Ｍ＋Ｈ］^＋を示すＦＡＢＭＳ分析に基づいて、化合物５の分子式をＣ_２４Ｈ_２２Ｏ_１３であると決定した。化合物５のスペクトルデータは化合物４で得られたものと非常に類似していた。^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル（表４）において、δ_ｃ４１．１、１６６．４、及び１６７．４での３つの新規の炭素シグナルと、δ_Ｈ３．２３での２個の水素を一体化している新規のプロトン共鳴の追加での、最も有意な差が観察された。これらの化学シフトはマロニル部分に予測されたものの特徴である。化合物４で観察されたＣ−６’のδ_ｃ６３．７バース（ｖｅｒｓｅ）へのダウンフィールドシフト（Δ＝＋２．９ｐｐｍ）の観察に基づいて、化合物５のマロニル基の結合はマロニル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシドと確定された。これらの観察は、Ｈ−６ａ’（δ_Ｈ４．１２）及びＨ−６ｂ’（δ_Ｈ４．２７）からＣ−１’’（δ_Ｃ４１．１）、並びにＨ−２’’（δ_Ｈ３．２３）からＣ−６’（δ_Ｃ６３．７）へ弱い^４Ｊ_ＣＨ相関を示したＨＭＢＣ分析（図３）によって実証された。これによって、化合物５は新規のアントラキノンマロニル−グルコシドであることが確認された。これをクァンゾキノンＤと命名した。

クァンゾキノンＤ（化合物５）：鮮黄色針状物；融点１７４〜１７５℃；

化合物６の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物６を得た。化合物６のＥＩＭＳ分析はｍ／ｚ２８６［Ｍ］^＋の分子イオンを示した。これはＣ_１５Ｈ_１０Ｏ_６の分子式を示す。ＵＶ（λ＝４２６ｎｍ）及びＩＲ（３４６９（ブロード、Ｏ−Ｈストレッチ）、１６６７（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されていない）、及び１６２０ｃｍ^−１（Ｃ＝Ｏストレッチ、キレート化されている）での吸収バンド）スペクトルは、化合物６について１，８−ジヒドロキシアントラキノンのクロマフォアを示唆した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、３つの芳香族と１つの脂肪族ヒドロキシル官能基を表す、δ１２．０６、１１．９２、１０．４７及び５．４０での４つの交換可能なプロトンについての根拠を提供した。化合物６の環Ａ上でそれぞれＣ−５、Ｃ−６及びＣ−７に結合した隣接位置を占める、δ_Ｈ７．７０（ｄｄ、Ｊ＝０．５、７．８Ｈｚ）、７．７８（重なりｄｄ、Ｊ＝７．８、７．８Ｈｚ）及び７．３３（ｄｄ、Ｊ＝０．５、７．８Ｈｚ）のプロトンでＡＢＣスピン系が確認された。

化合物６（表４）の^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲ並びにＤＥＰＴ試験は、環Ａが、オルト−ヒドロキシル官能基（δ１４９．１ ｓ及び１４８．４ ｓ）、第四級炭素（δ_Ｃ１３６．７）に結合したヒドロキシ−メチレン部分（δ_Ｈ４．５９ ｓ、２Ｈ及びδ_Ｃ５７．８ ｔ）及びメチン（δ_Ｃ１１９．０）を有する第四級炭素を含有する証拠を示した。化合物６（図４）に示すように、ＨＭＢＣ試験を用いてこれらのプロトン及び炭素スピンの全面的な帰属を行った。化合物６は新たに発見されたものであり、これをクァンゾキノンＥと命名した。

クァンゾキノンＥ（化合物６）：微細な黄色針状物；融点１９６〜１９７℃；

化合物７の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物７を得た。グルコピラノース部分のものと一致する化学シフト値を示す、５つのメチン（δ_Ｃ６９．７、７４．１、７６．２、７７．２、及び１０２．７）及び１つのメチレン（δ_Ｃ６０．７）スピンが付加して、化合物７は化合物６と類似したスペクトルデータを示した。グルコピラノース部分の付加は、化合物７について分子式Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１１を表すｍ／ｚ４４９．１０８２［Ｍ＋Ｈ］^＋（Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１１について４４９．１０８４と計算された）を示すＨＲＦＡＢＭＳによって確認された。グルコピラノース部分は、この炭素シグナルのδ_Ｃ５８．１（Δ＝＋０．４）へのダウンフィールドシフトと、結合プロトンのスプリットパターンにおける変化によって、位置１１でＯ−結合していると判定された。化合物６のエナンチオトピックなＣ−１１プロトン（δ_Ｈ４．５９、２Ｈ）は一重線として現れたが、化合物７のジアステレオトピックなＣ−１１プロトン（δ_Ｈ４．６５、１Ｈ及び４．７３、１Ｈ）は、アキラルな溶媒（２滴のＤ_２Ｏを有する０．７５ｍＬのＤＭＳＯ−ｄ_６）中で、それぞれ二重線（Ｊ＝１６．０Ｈｚ）であった。化合物７中のすべてのプロトン及び炭素（表４）スピンの帰属がＨＭＢＣ試験によって確認された。化合物７は新たに発見された共役アントラキノングルコシドであり、これをクァンゾキノンＦと命名した。

クァンゾキノンＦ（化合物７）：黄色粉末；融点２０４〜２０６℃；

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物８を得た。化合物８は無定形黄色粉末として得られ、そのスペクトルデータは既知のアントラキノンレイン関して報告されているもの（Ｄａｎｉｅｌｓｅｎ及びＡｋｓｎｅｓ、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｃｈｅｍ．第３０巻、３５９〜３６０頁（１９９２年））と一致することが判明した。

化合物９の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物９を得た。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルでの主な差が、芳香族二重線（約δ_Ｈ８．１５、１Ｈ、Ｊ＝１．５Ｈｚ）を失ったことと、化合物９の環Ｂの位置２が置換されていることを示す、δ_Ｈ７．５９（ｓ、１Ｈ）でのプロトンシグナルのスプリットを付随して失っていることにあったが、化合物９は、化合物８と類似のスペクトルデータを示した。これらの観察は、化合物９における、芳香族メチル（δ_Ｈ２．６７ ｓ、３Ｈ及びδ_Ｃ１９．５ ｑ）の発現と、化合物８でのＣ−２のδ_Ｃ１２４．２から１３１．２（Δ＝＋７．０ｐｐｍ）へのダウンフィールドシフトとに一致する（表４）。ＨＭＢＣ試験によって、このメチルは、Ｃ−１１メチルプロトンのＣ−２（δ_Ｃ１３１．２）及びＣ−３（δ_Ｃ１４０．４）とのロングレンジカップリングに基づくＣ−２の置換基であることが確認された。化合物９は新たに発見されたアントラキノンであり、クァンゾキノンＧと命名した。

クァンゾキノンＧ（化合物９）：黄色粉末；融点２３５〜２３６℃；

化合物１０の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物３〜１２を得た。化合物１０のＦＡＢＭＳはｍ／ｚ５２５［Ｍ＋Ｈ］^＋の分子イオンを提供し、^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、１１０ｐｐｍと１５５ｐｐｍとの間に１０個のｓｐ^２炭素シグナル、並びに１２個の追加のｓｐ^３炭素シグナルを示した。これらはルチノース部分の特徴である。芳香族メチル（δ_Ｃ１９．０）とアセチル部分（δ_Ｃ３１．９及び２０４．４）を表す３つの追加の炭素シグナルの存在に照らして、化合物１０は置換されたナフタレンジグリコシドであることが決定された。ＨＭＱＣ及びＨＭＢＣ試験によって、化合物１０のアグリコン部分が２−アセチル−３−メチル−１，８−ジヒドロキシナフタレン、すなわちジアネリジンであると確認された。ＨＭＢＣデータのさらなる精査によって、Ｈ−１’（δ_Ｈ５．０４、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）からＣ−８（δ_Ｃ１５４．２ ｓ）への相関に基づいて、８−Ｏ−結合のルチノシド部分への帰属がもたらされた。これらのデータによって、化合物１０は先にＤｉａｎｅｌｌａ ｓｐｐ．（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）から単離された（Ｂａｔｔｅｒｈａｍら、Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．第１４巻、６３７〜６４２頁（１９６１年））ジアネリンと同定された。これは、化合物１０がカンゾウ中に存在することを示した最初の報告であり、その^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルデータの詳細の最初の報告である。

ジアネリン（化合物１０）：白色針状物；融点１５６〜１５７℃；

化合物１１の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物１１を得た。化合物１１の^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲ並びにＤＥＰＴデータは、ヘテロ原子に結合していた第四級炭素（δ_Ｃ１４８．３）によって置き換えられた１つの芳香族メチンスピンを失っているが、化合物１０で観察されたものと非常に類似していた。ＦＡＢＭＳ分析によってｍ／ｚ５４１［Ｍ＋Ｈ］^＋の分子イオンの結果を得た。これは、酸素原子が付加してＣ_２５Ｈ_３２Ｏ_１３の分子式がもたらされたことを示している。化合物１１のアグリコン部分の^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲデータと、ナフタレングリコシドステラデロールについて以前報告されているデータとの比較によって、どちらも同じアグリコン部分を有することが実証された。しかし、これらの化合物は、そのグリコシド部分に関しては異なっている。化合物１１のＨＭＢＣ相関データ（図５）は、これが８−Ｏ−β−Ｄ−ラムノピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド部分を有することを示している。これらの連結性を推論するのに用いた有意なＨＭＢＣ相関には、Ｈ−１’（δ_Ｈ４．８７、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）からＣ−８（δ_Ｃ１４６．７ ｓ）、並びにＨ−６ａ’（δ_Ｈ３．９２ ｍ）及びＨ−６ｂ’（δ_Ｈ３．５２ ｍ）からＣ−１’’（δ_Ｃ１００．７ ｄ）、並びにＨ−１’’（δ_Ｈ４．６１ ｍ）からＣ−６’（δ_Ｃ６６．６ ｔ）について観察されたものを含めた。これらのデータに基づいて、化合物１１、すなわち、５−ヒドロキシジアネリン（１−（１，５，８−トリヒドロキシ−３−メチル−ナフタレン−２−イル）−エタノン−８−Ｏ−β−Ｄ−ラムノピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド）は、新たに発見されたナフタレングリコシドであると同定された。

５−ヒドロキシジアネリン（化合物１１）：黄色無定形固形物；融点１５２〜１５３℃；

化合物１２の物理的特徴を実施例３と同様にして測定した。その特徴は以下の通りである。

ＭｅＯＨ抽出物を、繰り返しＯＤＳとＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０ゲルカラムクロマトグラフィーにかけて化合物１２を得た。化合物１２は透明なガラス状固形物として得られ、Ｓａｌｖｉａ ｎｅｍｏｒｏｓａ Ｌ．（Ｌａｍｍｉａｃｅａｅ）（Ｍｉｌｏｖａｎｏｖｉｃら、Ｊ．Ｓｅｒｂ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．第６１巻、４２３〜４２９頁（１９９６年））から先に報告されている５，７，３，４−テトラヒドロキシ−６−メチルフラボン（６−メチルルテオリン）と同定された。その構造は、１Ｄ及び２Ｄ ＮＭＲの検討と、そのＵＶ及びＩＲスペクトルデータの従来技術で報告されているものとの比較とに基づいて確認された。これはカンゾウ中に化合物１２が存在することを示す最初の報告であり、その^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルデータの詳細を示す最初の報告である。

６−メチルリューオリン（ｍｅｔｈｙｌｌｕｅｏｌｉｎ（化合物１２））：黄色ガラス状固形物；ＵＶ及びＩＲデータはＭｉｌｏｖａｎｏｖｉｃらの（ｉｂｉｄ．）の値と同一であった。；

化合物１ａ及び２ａを含む化合物１〜１１について、ヒト病原性トレマトーデマンソン住血吸虫の複数のライフステージ（セルカリア、幼住血吸虫及び成体）に対する阻害活性のアッセイを行った。アントラキノンについては、住血吸虫セルカリアに対する毒性のアッセイを行った。その結果、化合物３及び６は阻害性であることが示された。アッセイは以下の通り実施した。

ＳａｌｔｅｒらのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７５巻、３８６６７〜３８６７３頁（２０００年）に教示されているように光誘導によって、マンソン住血吸虫（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃａｎ ｓｔｒａｉｎ）セルカリアを、感染したビオンファラリア属グラブラータ（Ｂｉｏｍｐｈａｌａｒｉａ ｇｌａｂｒａｔａ）カタツムリから集めた。

１ｍｇの各化合物を別々に１００μＬのＤＭＳＯ中に溶解させた。この溶液に１９．９ｍＬの蒸留水を加えて５０μｇ／ｍＬの化合物を含有するストック溶液を作り、１：２００希釈の溶液を作製した。

各化合物の阻害性効果を試験するために、５０μｇ／ｍＬで化合物を含有するストック溶液１００μＬを、９６−ウェルアッセイプレートのウェルに新たに落とし込んだ１００μＬのＳ．マンソンセルカリア（約５０）に加えて最終容積の２００μＬを得た。ここで化合物の濃度は２５μｇ／ｍＬであった。セルカリアの移動性と運動性を、時間をかけてモニターした。

２５μｇ／ｍＬの濃度で、化合物３は、化合物３を含有する溶液を加えて１０〜１５秒間以内でウェルの底へ沈んだセルカリアを固定化した。化合物３の曝露の２、５、１０、１５及び３０分間後、溶液をウェルから取り出し２００μＬの新鮮な水で置き換えた。１６時間後、それぞれの曝露時間化合物３に曝露されたセルカリアの５０％は、依然生存しており、かなり活動的であった。生きているセルカリアの腸内は黒味を帯びていた（コントロールウェルでは見られない現象である）。２４時間後、死亡率は５０％のままであった。したがって、セルカリアが化合物３に曝露された時間の長さはセルカリアの生存に特別の影響は及ぼさなかった。化合物３を３．２５μｇ／ｍＬに希釈した場合でも、セルカリアは４５分間曝露後に固定化された。

２５μｇ／ｍＬの濃度では、化合物６は、化合物６を含有する溶液の添加後１２〜１４分間以内にウェルの底に沈んだセルカリアを固定化した。化合物６への曝露の２、５、１０、１５及び３０分間後、溶液をウェルから取り出し、２００μＬの新鮮な水で置き換えた。１６時間後、化合物６でそれぞれの曝露時間処理されたセルカリアの２５〜３０％は依然生存していたが、活動的ではなかった。生存しているセルカリアの腸内はここでも黒味を帯びていた。２４時間後、化合物６でそれぞれの曝露時間処理されたセルカリアはすべて死んでいた（１００％死亡率）。したがって、セルカリアが化合物６に曝露された時間の長さは、セルカリアの生存に特別の影響は及ぼさなかった。

化合物３及び６のグリコシド（それぞれ、化合物４及び７）を含む他の化合物は、どれもＳ．マンソンに対して何ら阻害活性を示さなかった。

より長い時間の追跡では、化合物３はセルカリアを固定化するのにより効能があるが、化合物６より毒性が少ない若しくは致死的でないことを示す結果である。この結果に照らして、ヒトの病原性トレマトーデに感染した患者を治療するためのレジメンは、セルカリアを急速に固定化するための化合物３と、セルカリアをすべて死滅させるための化合物６の両方を含む組成物を提供することを含むことになる。図２に示すように、０．２５ｐｐｍで、化合物３及び６は時間が経つと本質的に１００％のセルカリアの死亡率をもたらした。

化合物４及び５は腸内で加水分解されて化合物３になることができ、化合物７は腸内で加水分解されて化合物６になることができるので、ヒトの病原性トレマトーデに感染した患者を治療するためのレジメンは、化合物７と、化合物４及び化合物５からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む組成物を提供することを含むことになる。さらにレジメンは、化合物３、化合物６、化合物７、並びに化合物４及び化合物５からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む組成物を含むことになる。

１ａ及び２ａを含む化合物１〜１１の、ヒトの病原性トレマトーデマンソン住血吸虫の複数のライフステージ（セルカリア、幼住血吸虫及び成体）に対する活性を試験した。

セルカリアアッセイは以下のように実施した。光誘導によって、感染したビオンファラリア属グラブラータカタツムリからＳ．マンソン（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃａｎ ｓｔｒａｉｎ）セルカリアを得た。Ｓ．マンソンとビオンファラリア属グラブラータ菌株の両方を維持するために用いた方法に関する詳細は、ＳａｌｔｅｒらのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７５巻、３８６６７〜３８６７３頁（２０００年）に記載されている通りである。１００μＬ蒸留水中の合計５０〜１００個のセルカリアを集め、ＣＯＳＴＡＲ９６ウェルのビニルアッセイプレート（ＣＯＳＴＡＲ Ｃｏｒｐ．、Ａｃｔｏｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）に置いた。１００μＬのＤＭＡＳＯと１９．９ｍＬの蒸留水の中に１ｍｇの試験化合物を溶解させて、１ａ及び２ａを含む化合物１〜１１のストック溶液を調製した。ストック溶液を必要に応じてさらに希釈し、１００μＬの分割量を各ウェルに加えた。セルカリアの移動性（すなわち、尾部の動きと遊泳行動）を解剖顕微鏡で観察した。約１０時間後に試験化合物を取り出し、それを新鮮な水で置き換えることによってセルカリアの生存率を測定した。２４時間後に試験化合物への曝露からの回復を評価した。

幼住血吸虫アッセイは以下のように実施した。幼住血吸虫を、尾部を切り取ってその生物体を、平底ＣＯＳＴＡＲ９６−ウェルＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ ＣＬＵＳＴＥＲ組織培養プレート中にペニシリン及びストレプトマイシン並びにウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中で、２日間インキュベートすることによってＳ．マンソンセルカリアから調製した。上記のようにして調製した試験化合物を培地に加え、幼住血吸虫の動き、摂食及び生存率の変化を観測した。

成体アッセイは以下のように実施した。成体虫をＤａｖｉｅｓらのＳｃｉｅｎｃｅ、第２９４巻、１３５８〜１３６１頁（２００１年）に記載のようにして、シリアンゴールデンハムスターから灌流させた。２０匹の雄と雌の成体虫を、２４−ウェルＦＡＬＣＯＮプレート中で、２ｇ／Ｌグルコース、０．３ｇ／ＬのＬ−グルタミン酸塩及び２．０ｇ／ＬのＮａＨＣＯ_３、１５％加熱不活性化したウシ胎児血清、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシン及び１５μＬのＲＰＭＩ−１６４０培地で洗浄したハムスター赤血球を補充した１ｍＬのＲＰＭＩ−１６４０培地中、３７℃で培養した。ＤＭＳＯ（上記と同様に調製）若しくはＤＭＳＯコントロール中の試験化合物の５μＬ分割量を各ウェルに加えた。成体虫の動き、摂食及び生存率を２４時間モニターした。その後、培地を取り出し、試験化合物又はＤＭＳＯをそれに加えている新鮮な培地で置き換えて、成体虫をさらに２４時間観察した。最後に、培地を再度取り出し、試験化合物又はＤＭＳＯを含まない新鮮な培地で置き換えて、成体虫の回復をさらに２４時間観察した。

２５μｇ／ｍＬの濃度で、化合物３（２−ヒドロキシクリソファノール）及び化合物６（クァンゾキノンＥ）は、それぞれ、１５秒間及び１４分間以内で、セルカリアをすべて完全に固定化させることによって、著しい活性を示した。これらの化合物の投薬効果を表５並びに図６及び図７に示す。

３．１μｇ／ｍＬの濃度に希釈した場合でも、化合物３の効能は減少しなかった。試験化合物への曝露の３０分後、試験化合物を含有する溶液を取り出し、新鮮な培地で置き換えた。化合物３で処理したセルカリアは２４時間後に５０％の死亡率を示し、他方、化合物６に曝露したものはすべて死んだ。化合物３及び６、並びに化合物４及び７のそれぞれのグリコシドを含む、Ｈ．フルバ根から単離された他の化合物のどれも、２５μｇ／ｍＬでなんら活性を示さなかった。成体虫も、化合物３及び６によって５０μｇ／ｍＬで１６時間以内に固定化された。化合物の除去に続いて、化合物３及び６にそれぞれ曝露された成体の３５％及び５５％は死んだ。セルカリア及び成体に対する効果とは対照的に、中間的幼住血吸虫段階のものは、３５μｇ／ｍＬですべての化合物に対して抵抗性であった。

本明細書で示してきた実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明はこれらに限定されないことを理解されたい。当分野の技術を有し、本明細書での教示にアクセスできるものは、その範囲内での追加の変更形態及び実施形態を認めるであろう。したがって、本発明は本明細書に添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。

ヘメロカリスフルバ「クァンゾ」ケンペル（Ｋａｅｍｐｆｅｒ）（１７１２年）のカンゾウの根から単離された化合物１〜１２の化学構造を示す図である。Ａｃは−ＣＯＣＨ_３などのアセチル基を指す。 化合物１（クァンゾキノンＡ）の構造を定めるために用いた差ＮＯＥ（→）及びロングレンジＣＯＳＹ（−）相関を示す図である。 化合物２（クァンゾキノンＢ）の構造を定めるために用いた差ＮＯＥ（→）及びロングレンジＣＯＳＹ（−）相関を示す図である。 化合物５（クァンゾキノンＤ）の構造を決定するために用いた選択されたＨＭＢＣ相関を示す図である。 化合物６（クァンゾキノンＥ）の構造を決定するために用いた選択されたＨＭＢＣ相関を示す図である。 化合物１１（５−ヒドロキシジアネリン）の構造を決定するために用いた選択されたＨＭＢＣ相関を示す図である。 Ｓ．マンソンセルカリアの移動性に対する、化合物３（２−ヒドロキシクリソファノール）及び化合物６（クァンゾキノンＥ）の投薬応答効果を示す図である。移動性は侵襲型の水生の幼虫段階（ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｑｕａｔｉｃ ｌａｒｖａｌ ｓｔａｇｅ）の動き及び遊泳行動に基づいて評価した。 セルカリアの移動の阻害パーセントを、化合物３（Ｂ）及び化合物６（Ｆ）の濃度の関数として示すグラフである。

Claims (7)

1. 次式
   

   

   で表される少なくとも一つのアントラキノンを含み、
   式中、Ｒはメチル、アルキル、アセチル、アルデヒド、ヒドロキシメチル及びカルボキシル基からなる群から選ばれ、それぞれのＲは１から１２個の炭素原子を含む、住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐ．）の阻害剤。
2. 前記アントラキノンが次式を有し、
   

   

   式中、Ｒはメチル、アルキル、アセチル、アルデヒド、ヒドロキシメチル及びカルボキシル基からなる群から選ばれ、それぞれのＲは１から１２個の炭素原子を含む、請求項１に記載の阻害剤。
3. 前記アントラキノンは１，２，８−トリヒドロキシ−３−メチルアントラキノンである請求項１に記載の阻害剤。
4. 前記アントラキノンは１，２，８−トリヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルアントラキノンである請求項１に記載の阻害剤。
5. 前記アントラキノンは、担体のミリリットル若しくはグラム当たり１から１，０００マイクログラムの用量で阻害性を有する請求項１に記載の阻害剤。
6. 前記阻害はインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での阻害である請求項１に記載の阻害剤。
7. 前記阻害はインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での阻害である請求項１に記載の阻害剤。

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