JP4152900B2 - βシート模倣物およびプロテアーゼインヒビターとしてのその使用 - Google Patents

Description

（先行出願に対する相互参考文献）
本出願は、米国特許出願第０８／４１０，５１８号（１９９５年３月２４日出願）の一部継続出願である米国特許出願第０８／５４９，００６号（１９９５年１０月２７日出願）の一部継続出願である。
（技術分野）
本発明は、一般にβシート模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃ）に関し、より詳細にはプロテアーゼインヒビターとしての使用のためのβシート模倣物に関する。

（発明の背景）
βシートコンホメーション（β鎖コンホメーションともいう）は、多くのポリペプチド中に存在する２次構造である。βシートコンホメーションは、隣接するアミノ酸間の軸距離が約３．５Åで、ほぼ完全に伸張している。βシートは、異なるポリペプチド鎖中のＮＨ基とＣＯ基との間の水素結合により安定化される。さらに、ペプチド結合の双極子は、βシートに本質的な安定性を与える鎖にそって交互になる。βシート中の隣接する鎖は、同一方向に伸び得る（すなわち、平行βシート）か、または反対方向に伸び得る（すなわち、逆平行βシート）。２つの形態は二面角がわずかに異なるが、両方とも立体的には好ましい。βシートコンホメーションの伸張したコンホメーションにより、βシートの交互の面に突き出るアミノ酸側鎖が生じる。

ペプチドおよびタンパク質におけるβシートの重要性は、十分に確立されている（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２６８：４９５−４９９， １９９７；Ｈａｌｖｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １１３：６７０１−６７０４， １９９１；Ｚｈａｎｇ， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６６：１５５９１−１５５９６， １９９１；Ｍａｄｄｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ， ３５３：３２１−３２５， １９９１）。βシートは、プロテアーゼとタンパク質分解基質との間の相互作用を含む多くの生物学的認識事象において重要である。プロテアーゼ活性は、多くの疾患状態に関係している。

カテプシンＢは、通常、プロ酵素処理およびタンパク質代謝回転に関係するリソソーム性システインプロテアーゼである。活性レベルの上昇は、腫瘍転移（Ｓｌｏａｎｅ， Ｂ．Ｆ．ら、「カテプシンＢおよびその内生インヒビター：腫瘍悪性度におけるその役割」Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖ． ９：３３３−３５２， １９９０）、慢性関節リウマチ（Ｗｅｒｂ， Ｚ． 「プロテイナーゼおよびマトリクス分解」 Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ， Ｋｅｌｌｅｒ， Ｗ．Ｎ．；Ｈａｒｒｉｓ， Ｗ．Ｄ．；Ｒｕｄｄｙ， Ｓ．；Ｓｌｅｄｇｅ， Ｃ．Ｓ．編、１９８９， Ｗ．Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒ Ｃｏ．， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ， ３００−３２１頁）、および筋ジストロフィー（Ｋａｔｕｎｕｍａ Ｎ．およびＫｏｍｉｎａｍｉ
Ｅ．， 「筋肉消耗性疾患におけるリソソーム性システインプロテイナーゼの異常発現」 Ｒｅｖ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １０８：１−２０， １９８７）に関係している。

カルパインは、細胞質ゾル性または膜結合性のＣａ＋＋活性化プロテアーゼであり、これは細胞内のカルシウムレベルの変化に応答して細胞骨格タンパク質の分解を担う。これらは、関節炎および筋ジストロフィーにおける組織分解に寄与する（Ｗａｎｇ Ｋ．Ｋ．およびＹｕｅｎ Ｐ．Ｗ．， 「カルパイン阻害：その治療上の可能性の概要」 Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ． １５：４１２−４１９， １９９４を参照のこと）。

インターロイキン変換酵素（ＩＣＥ）は、プロＩＬ−１βを炎症の鍵メディエイターであるＩＬ−１βに切断し、それゆえＩＣＥのインヒビターは関節炎の処置に有用であると証明され得る（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ Ｂ．Ｅ．ら、「マウスマクロファージにおける成熟ＩＬ−１β産生物の阻害およびＷＩＮ ６７６９４による炎症のマウスモデル、Ｉｌ−１β変換酵素のインヒビター」 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４：１３３１−１３３８， １９９５を参照のこと）。ＩＣＥまたはＩＣＥ様プロテアーゼもまた、アポトーシス（計画された細胞死）において作用し得、それゆえガン、ＡＩＤＳ、アルツハイマー病、およびアポトーシスが関係する他の疾患において役割を果たす（Ｂａｒｒ， Ｐ．Ｊ．；Ｔｏｍｅｉ， Ｌ．Ｄ．， 「ヒト疾患におけるアポトーシスおよびその役割」 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １２：４８７−４９３， １９９４を参照のこと）。

ＨＩＶプロテアーゼは、ＨＩＶ（ＡＩＤＳウイルス）の生活環において鍵となる役割を果たす。ウイルス成熟の最終段階において、ＨＩＶプロテアーゼは、ポリタンパク質前駆体を切断し、ビリオンコアの機能酵素および構造タンパク質にする。ＨＩＶプロテアーゼインヒビターは、ＡＩＤＳに対する優れた治療標的として迅速に同定され（Ｈｕｆｆ， Ｊ．Ｒ．， 「ＨＩＶプロテアーゼ：ＡＩＤＳに対する新規な化学療法の標的」 Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． ３４：２３０５−２３１４を参照のこと）、そしてリトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、クリクシバン（Ｃｒｉｘｉｖａｎ）、およびサクイナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）の近年のＦＤＡ認可により証明されるように、既にその処置において有用であると証明されている。

アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は、血圧の調整において中心的役割を果たすレニン−アンジオテンシン系の一部である。ＡＣＥは、アンジオテンシンＩをその血管収縮活性により強力な昇圧剤であるオクタペプチドアンジオテンシンＩＩに切断する。ＡＣＥの阻害は、高血圧の処置において治療的に有用であると証明された（Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｇ．Ｈ．， 「高血圧の処置における変換酵素インヒビター」 Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ． ３１９：１５１７−１５２５， １９８９）。

コラゲナーゼは、細胞外マトリクス（例えば、結合組織、皮膚、血管）の主要な構成要素であるコラーゲンを切断する。コラゲナーゼ活性の上昇は、関節炎（Ｋｒａｎｅ Ｓ．Ｍ．ら、「慢性関節リウマチにおけるマトリクス分解の機構」
Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ５８０：３４０−３５４， １９９０）、腫瘍転移（Ｆｌｕｇ Ｍ．およびＫｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ Ｐ．， 「最下部膜およびそのガン細胞侵入の関与」 Ａｃｔａ Ａｎａｔ．Ｂａｓｅｌ １５２：６９−８４， １９９５）、および結合組織の分解に関係する他の疾患に寄与する。

トリプシン様セリンプロテアーゼは、止血／凝固（Ｄａｖｉｅ， Ｅ．Ｗ．およびＫ．Ｆｕｊｉｋａｗａ， 「血液凝固における基礎的機構」 Ａｎｎ．Ｒｅｖ． ７９９−８２９， １９７５）および補体活性化（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ， Ｈ．Ｊ．， 「補体」 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ４４：６９７−７２４， １９７５）に関係する大きくかつ高度に選択的な酵素のファミリーを形成する。これらのプロテアーゼの配列決定は、特異性を改変するアミノ酸挿入を有する相同のトリプシン様コアの存在を示し、これは一般に他の高分子成分との相互作用の原因である（Ｍａｇｎｕｓｓｏｎら、「タンパク質分解および生理学的調節」 Ｍｉａｍｉ Ｗｉｎｔｅｒ Ｓｙｍｐｏｓｉａ １１：２０３−２３９， １９７６）。

トリプシン様セリンプロテアーゼであるトロンビンは、フィブリノーゲンからのフィブリンの発生および血小板レセプターの活性化の両方において限定されたタンパク質分解（ｐｒｅｏｌｏｙｓｉｓ）を提供するように作用し、従って血栓症および止血において重要な役割を果たす（Ｍａｎｎ， Ｋ．Ｇ．， 「膜上における血液凝固複合体のアセンブリ」 Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ． １２：２２９−２３３， １９８７）。トロンビンは、フィブリノーゲンにおける１８１個のＡｒｇ−またはＬｙｓ−Ｘａａの配列のうちのわずか２個のＡｒｇ−Ｇｌｙ結合の選択的切断を介するフィブリノーゲンのフィブリノペプチドＡおよびＢの除去において顕著な選択性を示す（Ｂｌｏｍｂａｃｋ， Ｈ．， Ｂｌｏｏｄ Ｃｌｏｔｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｓｅｅｇｅｒ， Ｗ．Ｈ．（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９６７， １４３−２１５頁）。

多くの重大な疾患状態は、急性冠状動脈症候群（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を含む異常止血に関する。アスピリンおよびヘパリンは、急性冠状動脈症候群を有する患者の処置に広く使用される。しかし、これらの薬剤は、いくつかの本質的な制限を有する。例えば、アテローム硬化プラークの破裂を併発する血栓症は、アスピリンおよびヘパリンによる阻害に対して比較的耐性であるトロンビン媒介の血小板依存的プロセスである傾向がある（Ｆｕｓｔｅｒら、「冠状動脈疾患の病原体および急性冠状動脈症候群」 Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．
３２６：２４２−５０， １９９２）。

トロンビンインヒビターは、インビボでの血管損傷部位での血栓形成を防止する。さらに、トロンビンはまた、冠状動脈における機械的損傷部位での平滑筋細胞増殖を開始する強力な成長因子でもあるので、インヒビターは、この増殖性の平滑筋細胞応答をブロックし、そして再狭窄を減少させる。トロンビンインヒビターはまた、血管壁細胞における炎症性応答を誘起する（Ｈａｒｋｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ ７５：１２Ｂ−１６Ｂ， １９９５）。

βシートが果たす重要な生物学的役割の観点から、天然に存在するか、または合成のペプチド、タンパク質または分子の本質的なβシート構造を安定化し得る化合物が当該分野で必要とされる。安定なβシート構造の作製、ならびにこのような安定化された構造を使用してβシート構造を含む生物学的認識事象をもたらすか、または改変することもまた当該分野で必要とされる。本発明は、これらの必要を満たし、そしてさらなる関連した利点を提供する。

（発明の要旨）
簡潔に述べると、本発明はβシート模倣物に関し、より詳細には天然または合成のペプチド、タンパク質または分子のβ鎖構造を安定化するβシート模倣物に関する。

本発明の１つの局面において、二環式環系を含むβシート模倣物が開示され、ここでβシート模倣物は以下の一般構造（Ｉ）およびその薬学的に受容可能な塩を有する：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ₂）_1-4−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ₂）_1-3−、−（ＣＨ₂）_1-2Ｏ−および−（ＣＨ₂）_1-2Ｓ−から選択され；Ｂは、ＮおよびＣＨから選択され；Ｃは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ₂）_1-3−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｏ−（ＣＨ₂）_1-2−および−Ｓ（ＣＨ₂）_1-2−から選択され；ＹおよびＺは、分子の残り（ｒｅｍａｉｎｄｅｒ）を表し；そして二環式環の任意の２つの隣接するＣＨ基は、二重結合を形成し得；但し、（ｉ）Ｒ₁は、水素以外のアミノ酸側鎖部分またはその誘導体であり、（ｉｉ）Ｒ₁がベンジルであり、Ｒ₂およびＲ₃が両方とも水素であり、Ａが−ＣＨ₂ＣＨ₂−であり、そしてＢがＣＨである場合、Ｃは−ＣＨ₂−ではなく、（ｉｉｉ）Ｒ₁がメチルであり、Ｒ₂およびＲ₃が両方とも水素であり、Ａが−ＣＨ₂Ｏ−であり、そしてＢがＣＨである場合、Ｃは−ＣＨ₂−ではなく、そして（ｉｖ）Ｒ₁がベンジルであり、Ｒ₂およびＲ₃が両方とも水素であり、Ａが−ＣＨ₂−であり、そしてＢがＣＨである場合、Ｃは−Ｓ−ではない。

上記構造（Ｉ）の１つの実施態様において、以下の構造（ＩＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ₂）_1-4−および−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ₂）_1-3−から選択され；Ｂは、ＮおよびＣＨから選択され；Ｃは、−Ｃ（＝Ｏ）−および−（ＣＨ₂）_1-3−から選択され；ＹおよびＺは、分子の残りを表し、そして二環式環系は飽和である（すなわち、二環式環系の隣接するＣＨ基間に二重結合を有しない）。

ＢがＣＨであり、そしてＲ₃が水素である構造（ＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＩＩＩ）、（ＩＶ）および（Ｖ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｎは１〜４の整数であり；ｐは１〜３の整数であり；そしてＹおよびＺは分子の残りを表す。

ＢがＮであり、そしてＲ₃が水素である構造（ＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＶＩ）、（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｎは１〜４の整数であり；ｐは１〜３の整数であり；そしてＹおよびＺは分子の残りを表す。

本発明の本局面の好適な実施態様において、以下の構造（ＩＸ）、（Ｘ）および（ＸＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｎは１〜４の整数であり；そしてＹおよびＺは分子の残りを表す。

本発明の本局面のさらに好適な実施態様において、ｎが２である上記構造（Ｘ）のβシート模倣物および以下の構造（Ｘａ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；そしてＹおよびＺは分子の残りを表す。

上記構造（Ｉ）の別の実施態様において、以下の構造（ＸＩＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；Ａは、−（ＣＨ₂）_1-4−、−（ＣＨ₂）_1-2Ｏ−および−（ＣＨ₂）_1-2Ｓ−から選択され；Ｃは、−（ＣＨ₂）_1-3−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｏ（ＣＨ₂）_1-2−および−Ｓ（ＣＨ₂）_1-2−から選択され；ＹおよびＺは、分子の残りを表し、そして二環式環系は飽和である。

Ａが−（ＣＨ₂）_1-4−である構造（ＸＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＸＩＩＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｎは１〜４の整数であり；Ｃは、−（ＣＨ₂）_1-3−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｏ（ＣＨ₂）_1-2−および−Ｓ（ＣＨ₂）_1-2−から選択され；ＹおよびＺは、分子の残りを表す。

Ａが−（ＣＨ₂）_1-2Ｏ−または−（ＣＨ₂）_1-2Ｓ−である構造（ＸＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＸＩＶ）および（ＸＶ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｍは１〜２の整数であり；ｐは１〜３の整数であり；そしてＹおよびＺは、分子の残りを表す。

Ｃが−（ＣＨ₂）_1-3−である構造（ＸＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＸＶＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｐは１〜３の整数であり；Ａは、−（ＣＨ₂）_1-4−、−（ＣＨ₂）_1-2Ｏ−および−（ＣＨ₂）_1-2Ｓ−から選択され；そしてＹおよびＺは、分子の残りを表す。

Ｃが−Ｏ−または−Ｓ−である構造（ＸＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＸＶＩＩ）および（ＸＶＩＩＩ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｐは１〜３の整数であり；そしてＹおよびＺは、分子の残りを表す。

Ｃが−Ｏ（ＣＨ₂）_1-2−または−Ｓ（ＣＨ₂）_1-2−である構造（ＸＩＩ）の実施態様において、以下の構造（ＸＩＸ）および（ＸＸ）を有するβシート模倣物が開示される：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択され；ｐは１〜３の整数であり；ｍは１〜２の整数であり；そしてＹおよびＺは、分子の残りを表す。

本発明のさらなる局面において、βシート改変ペプチドまたはタンパク質が開示され、ここで、本発明のβシート模倣物は、天然に存在するかまたは合成のペプチドまたはタンパク質の少なくとも１つのアミノ酸に共有結合している。本実施態様において、上記構造（Ｉ）〜（ＸＸ）におけるＹおよび／またはＺは、ペプチドまたはタンパク質の１つ以上のアミノ酸を表す。関連する実施態様において、天然または合成のペプチドまたはタンパク質のβ構造を与え、かつ／または安定化する方法が開示される。本方法は、本発明の１つ以上のβシート模倣物を、ペプチドまたはタンパク質の内部またはその端部に共有結合する工程を包含する。

さらなる実施態様において、本発明の化合物の有効量を温血動物に投与することにより、温血動物においてプロテアーゼを阻害する方法が開示される。プロテアーゼとしては、セリンプロテアーゼ（例えば、トロンビン、エラスターゼおよび第Ｘ因子）、ならびにアスパラギン酸プロテアーゼ、システインプロテアーゼおよびメタロプロテアーゼが挙げられる。

本発明によれば、天然に存在するか、または合成のペプチド、タンパク質または分子の本質的なβシート構造を安定化し得る化合物が得られる。

本発明の他の局面は、以下の詳細な説明を参照すれば明らかとなる。

（発明の詳細な説明）
上記のように、β−シートは、多くの生物学的認識事象に重要な構造構成成分である。本発明のβ−シート模倣物は、天然または合成のペプチド、タンパク質、あるいは分子のβ−シート構造を与えおよび／または安定化するために役立ち、特にコンホメーションの安定性について役立つ。さらに、本発明のβ−シート模倣物は、タンパク質分解性の分解により抵抗性であり、したがって、ペプチド、タンパク質、またはこれらを含む分子を分解に対してより抵抗性にする。

本発明のβ−シート模倣物は、一般的に、上記の構造（Ｉ）、ならびに、構造（ＩＩ）〜（ＸＸ）により示されるより特定の実施態様により示され、そして以下の構造（Ｉ’）〜（Ｉ””）により示される立体化学を有する：

ここで、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＺは上で定義されたとおりである。言い換えれば、構造（Ｉ）、ならびに構造（ＩＩ）〜（ＸＸ）により示されるより特定の実施態様のすべての立体コンホメーションは、本発明の範囲内に含まれる。例えば、本発明のβ−シート模倣物は、天然に存在するＬ−アミノ酸を含むβ−シートの３次元コンホメーション、ならびに１またはより多くのＤ−アミノ酸を含むβ−シートの構造を模倣するように構築され得る。好適な実施態様においては、β−シート模倣物は、構造（Ｉ’）または（Ｉ”）の立体コンホメーションを有する。

本発明の文脈において用いられるように、（上記の構造（Ｉ）〜（ＸＸ）におけるＹおよびＺにより示されるような）用語「分子の残り」は任意の化学部分であり得る。例えば、β−シート模倣物がペプチドまたはタンパク質の長さの範囲内に位置する場合、ＹおよびＺはペプチドまたはタンパク質のアミノ酸を示し得る。あるいは、２またはより多くのβ−シート模倣物が連結されるならば、第１のβ−シート模倣物のＹ部分は第２のβ−シート模倣物を示し得るが、反対に、第２のβ−シート模倣物のＺ部分は第１のβ−シート模倣物を示す。β−シート模倣物がペプチドまたはタンパク質の末端に位置される場合、あるいはβ−シート模倣物がペプチドまたはタンパク質と会合されない場合、Ｙおよび／またはＺは適切な末端部分を示し得る。Ｚ部分についての代表的な末端部分には、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、および−ＳＯ₂Ｒ（ここでＲはＣ１−Ｃ８アルキルまたはアリール部分である）を含み（しかし、これらに限定されない）、あるいは、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、またはＣＢＺ（すなわち、それぞれ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、およびベンジルオキシカルボニル）のようなタンパク質合成に適切な保護基であってもよい。同様に、Ｙ部分についての代表的な末端部分には、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＮＨＯＨ、−ＮＨＮＨＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、−ＣＨ₂Ｃｌ、−ＣＦ₃、−Ｃ₂Ｆ₅、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂Ｎ₂ ⁺、

（ここでＲはＣ１−Ｃ８アルキルまたはアリール部分である）、または複素環式部分（例えば、ピリジン、ピラン、チオファン、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、ベンズチアゾール、オキサゾール、ベンゾキサゾール、イミダゾール、およびベンズイミダゾール）を含むが、これらに限定されない。

本明細書で用いられるように、用語「アミノ酸側鎖部分」は、天然に存在するタンパク質中にある任意のアミノ酸側鎖部分を表し、以下の表１に同定される天然に存在するアミノ酸側鎖部分を含む（しかしこれらに限定されない）。本発明の他の天然に存在する側鎖部分には、３，５−ジブロモチロシン、３，５−ジヨードチロシン、ヒドロキシリジン、ナフチルアラニン、チエニルアラニン、γ−カルボキシグルタメート、ホスホチロシン、ホスホセリン、およびグリコシル化アミノ酸（例えば、グリコシル化セリン、アスパラギン、およびトレオニン）の側鎖部分が含まれる（しかしこれらに限定されない）。

天然に存在するアミノ酸側鎖部分の他に、本発明のアミノ酸側鎖部分はまた、それらの種々の誘導体を含む。本明細書で用いられるように、アミノ酸側鎖部分の「誘導体」には、天然に存在するアミノ酸側鎖部分へのすべての改変および／または変更が含まれる。例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、およびフェニルアラニンのアミノ酸側鎖部分は、一般的に低級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分として分類され得る。アミノ酸側鎖部分の誘導体には、他の直鎖または分岐、環式または非環式、置換または非置換、飽和または不飽和の、低級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分が含まれる。

本明細書で用いられるように、「低級鎖アルキル部分」は１〜１２炭素原子を含み、「低級鎖アリール部分」は６〜１２炭素原子を含み、そして「低級鎖アラルキル部分」は７〜１２炭素原子を含む。したがって、１つの実施態様において、アミノ酸側鎖誘導体は、Ｃ_1-12アルキル、Ｃ_6-12アリール、およびＣ_7-12アラルキルから選択され、そしてより好ましい実施態様では、 Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_6-10アリール、およびＣ_7-11アラルキルから選択される。

本発明のアミノ酸側鎖誘導体は、さらに、低級鎖アルキル、アリール、およびアラルキル部分の置換された誘導体を含む。ここで、置換基は以下の化学部分の１つまたはそれ以上から選択される（しかしこれらに限定されない）：−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯ₂Ｒ、−ＳＯ₂Ｈ、−ＳＯＲ、およびハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩを含む）、ここで、Ｒの各存在は独立して低級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分から選択される。さらに、本発明の環式低級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分には、ナフタレンならびに複素環式化合物（例えば、チオフェン、ピロール、フラン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、３−ピロリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミジン、プリン、キノリン、イソキノリン、およびカルバゾール）が含まれる。アミノ酸側鎖誘導体は、さらに、低級鎖アルキルおよびアラルキル部分のアルキル部分のヘテロアルキル誘導体を含み、アルキルおよびアラルキルのホスホネートおよびシランを含む（しかしこれらに限定されない）。

二環式ラクタムが当該分野で公知である。例えば、Ｃｏｌｕｍｂｏ， Ｌ．ら、Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ． ３６（４）：６２５−６２８， １９９５；Ｂａｌｄｗｉｎ， Ｊ．Ｅ．ら、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ ３４（５）：９０３−９０６， １９９２；および、Ｓｌｏｍｃｚｙｎｓｋａ， Ｕ．ら、Ｊ． Ｏｒｇ．
Ｃｈｅｍ． ６１：１１９８−１２０４， １９９６を参照のこと。しかし、本発明の二環式ラクタムはこれらの参考文献に開示されていない。

上記のように、本発明のβ−シート模倣物は、タンパク質、ペプチド、または分子のβ−シート構造を与えおよび／または安定化するために役立つ。β−シート模倣物は、タンパク質、ペプチド、または分子のＣ末端もしくはＮ末端のいずれかに位置し得、あるいは、タンパク質、ペプチド、または分子自体の中に位置し得る。さらに、本発明の１より多いβ−シート模倣物は、タンパク質、ペプチド、または分子中に組み入れられ得る。

本発明のβ−シート模倣物は、多くの反応スキームにより合成され得る。例えば、構造（Ｉ）の種々の実施態様は、以下の反応スキーム（１）〜（１７）に従って合成され得る。

（反応スキーム（１））
構造（ＩＩＩ）およびその代表的化合物（構造（ＩＩＩａ）を有する）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（２））
構造（ＩＶ）は以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（３））
構造（Ｖａ）を有する構造（Ｖ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得、ここで、スキーム（３）における構造（Ｉａ）は二環式環系中に二重結合を有する本発明の代表的構造である：

さらに、構造（Ｖｂ）を有する構造（Ｖ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得、そして、構造（ＩＩ）のＡが−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ₂）_1-3−である場合、関連化合物（以下で（ＩＩａ）と命名される）は以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（４））
以下の構造（ＶＩａ）および（ＶＩｂ）（ここでＲ₃は水素である）を有する構造（ＶＩ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得る（ＨｏｌｍｅｓおよびＮｅｅｌ、Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ． ３１：５５６７−７０， １９９０を参照のこと）：

構造（ＩＩ）の代表的化合物（ここでＲ₃はアミノ酸側鎖部分またはその誘導体である）はまた、上記のスキーム（４）に従って調製され得る。

（反応スキーム（５））
構造（ＶＩＩａ）を有する構造（ＶＩＩ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（６））
構造（ＶＩＩＩ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（７））
以下に示される構造（ＩＸａ）および（ＩＸｂ）を有する構造（ＩＸ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（８））
構造（Ｘｂ）および（Ｘｃ）を有する構造（Ｘ）の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得る（ＪｕｎｇｈｅｉｍおよびＳｉｇｍｕｎｄ、Ｊ．
Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５２：４００７−４０１３， １９８７を参照のこと）：

（反応スキーム（９））
構造（ＸＩ）は、以下の反応スキームにより合成され得る（Ｐｅｒｋｉｎ、Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｐｅｒｋ． Ｔｒａｎｓ． １：１５５−１６４，
１９８４を参照のこと）：

（反応スキーム（１０））
構造（ＸＩＩＩ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（１１））
構造（ＸＩＶ）および（ＸＶ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（１２））
構造（ＸＶＩ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（１３））
構造（ＸＶＩＩ）および（ＸＶＩＩＩ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

（反応スキーム（１４））
構造（ＸＩＸ）および（ＸＸ）は、以下の反応スキームにより合成され得る：

上記構造（Ｉ）の定義によれば、二環式環系は隣接するＣＨ基を含み得る（すなわち、二環式環系は、少なくとも一部は−ＣＨ−ＣＨ−基により形成され得る）。−ＣＨ−ＣＨ−基が−Ｃ＝Ｃ−に置換されるような化合物もまた、構造（Ｉ）の範囲内に含まれる（すなわち、二環式環の任意の２つの隣接するＣＨ基が一緒に二重結合を形成し得る）。構造（Ｉ）の定義によるＲ₁が水素以外の部分であることに留意すべきである。構造（Ｉ）の検査は、Ｒ₁が結合される二環式環原子が本発明の構造（Ｉ）よる炭素−炭素二重結合の一部であり得ないことを示す。しかし、Ｒ₂およびＲ₃は水素であり得、したがって、 Ｒ₂および／またはＲ₃が結合される二環式環原子は、構造（Ｉ）の化合物中の炭素−炭素二重結合の一部を形成し得る。

反応スキーム（１５）、（１６）、および（１７）は、二環式環系が一部分−Ｃ＝Ｃ−基により形成される構造（Ｉ）の代表的化合物を調製するための合成方法論を説明する。

（反応スキーム（１５））

（反応スキーム（１６））

（反応スキーム（１７））

本発明のβ−シート模倣物において、好ましいＹ基は以下の構造を有する：

ここで、好ましい立体化学は

である。

好ましいＲ₄基は、約２〜約１０個の炭素原子および少なくとも１つの窒素原子を有する有機アミン部分である。適切な有機アミン部分は化学式Ｃ_2-10Ｈ_4-20Ｎ_1-6Ｏ_0-2を有し；そして、好ましくは、化学式Ｃ_3-7Ｈ_7-14Ｎ_1-4Ｏ_0-1を有する。本発明の典型的な有機アミン部分は以下のものである：

上記の構造において、Ｒ₅は、（ａ）１〜約１２個の炭素原子のアルキル、必要に応じて１〜４のハライド、Ｃ_1-5アルコキシ、およびニトロで置換されている、（ｂ）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｃ_1-5アルキル、ここでアルキル基は必要に応じてハライドまたはＣ_1-5アルコキシで置換されている、（ｃ） −Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｃ_1-10アラルキル、ここでアリール基は、ニトロ、ハライド、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-5アルキル、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_6-10アリール、Ｃ_1-5アルキル、およびＣ_1-5アルコキシから独立して選択される５つまでの基で必要に応じて置換され得る、および（ｄ）４〜約１１個の環原子の単環式および二環式ヘテロアリール、ここで環原子は炭素およびヘテロ原子（酸素、窒素、および硫黄）から選択され、そしてヘテロアリール環は、約４つまでのハライド、Ｃ_1-5アルキル、Ｃ_1-5アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_1-5アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_6-10アリール、アミノ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_1-5アルキル、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_6-10アリールで必要に応じて置換され得る。

好ましいＲ₅基は、以下のものである：

ここで、Ｒ₆は、水素、ニトロ、ハライド、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ_1-5アルキル、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ_6-10アリール、Ｃ_1-5アルキル、およびＣ_1-5アルコキシである；

ここで、Ｘはハライドである；

ここで、Ｅは、−Ｏ−、−ＮＨ−、または−Ｓ−であり、そしてＲ₇およびＲ₈は、水素、Ｃ_1-5アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_1-5アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_6-10アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_1-5アルキル、および−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_6-10アリールから独立して選択される；および

ここで、ＥおよびＲ₆は、すでに定義されているとおりである。

本発明のβ−シート模倣物は、自動化固相ペプチド合成を含む標準的なペプチド合成プロトコルに使用され得る。ペプチド合成は、段階的プロセスであり、ここでペプチドは単一のアミノ酸の段階的付加によるペプチド鎖の伸長によって形成される。アミノ酸はペプチド（アミド）結合の形成によりペプチド鎖に連結される。ペプチド連結は、ペプチドのアミノ基をアミノ酸のカルボン酸基に結合することにより形成される。このように、ペプチドはカルボキシル末端からアミノ末端へ合成される。アミノ酸付加の個々の工程は、所望の長さおよびアミノ酸配列のペプチド（またはタンパク質）が合成されるまで繰り返される。

上記のようなペプチド（あるいはタンパク質または分子）合成を完了するために、ペプチドに付加すべきアミノ酸のアミノ基は、アミノ酸とペプチドとの間のペプチド結合形成（すなわち、アミノ酸のカルボキシル基の、ペプチドのアミノ基への結合）を妨害すべきではない。このような妨害を防ぐために、ペプチド合成に使用されるアミノ酸のアミノ基は適切な保護基で保護される。代表的なアミノ保護基は、例えば、ＢＯＣおよびＦＭＯＣ基を含む。従って、本発明の１つの実施態様では、本発明のβ−シート模倣物は遊離のカルボン酸基および保護されたアミノ基を有し、そしてこのように、標準的な合成技法によるペプチドへの組み込みに適切である。

本発明のβ−シート模倣物は、天然に存在するまたは合成のペプチド、タンパク質、および分子に広い有用性を有する。例えば、本明細書に開示されるβ−シート模倣物は、トリプシン様セリンプロテアーゼの大きなファミリー（Ｐ’置換基としてアルギニンまたはリジンを選択するものを含む）のインヒビターとしての活性を有する。これらの酵素は、血液凝固に関連し、そして第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、トロンビン、カリクレイン、ウロキナーゼ（これはガン転移にも関連する）、およびプラスミンを含む（しかしこれらに限定されない）。したがって、これらの酵素を選択的に阻害する能力は、心臓血管病および腫瘍学に関連する治療適用に広い有用性を有する。このために、以下のβ−シート模倣物は固体支持体（例えば、ＰＡＭ樹脂）上で合成され得る：

上記のβ−シート模倣物において、Ｌは任意のリンカーである。

β−シート模倣物は、次いで、例えばアミノリシスにより固体支持体から開裂され、適切な試薬（例えば、色素原基質ＢＡＰＮＡ（ベンジロイルアルギニン（ｂｅｎｚｙｏｙｌａｒｇｉｎｉｎｅ）パラニトロアナリド）に対する競合基質としてスクリーニングされ得る（ＥｉｃｈｌｅｒおよびＨｏｕｇｈｔｅｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１１０３５−１１０４１， １９９３を参照のこと）（本明細書に参考として援用される）。あるいは、適切なリンカー部分を用いることにより、β−シート模倣物が固体支持体にまだ付着されている間に、このようなスクリーニングが行われ得る。

上記速度論的分析により基質が選択されると、β−シート模倣物は、Ｃ−末端への改変により−すなわち、Ｙ部分への改変により−プロテアーゼインヒビターへ変換され得る。例えば、末端Ｙ部分は、−ＣＨ₂Ｃｌ、−ＣＦ₃、−Ｈ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲで置換され得る。適切なＲ部分は、基質のライブラリーを用いて、あるいは、ＷａｓｓｅｒｍａｎおよびＨｏの手順の改変を用いて生成されるインヒビターのライブラリーを用いて選択され得る（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９：４３６４−４３６６， １９９４）（本明細書に参考として援用される）。

β−鎖テンプレートを含む化合物のライブラリーは、基質認識または結合に対する最適配列を決定するために構築され得る。このようなライブラリーを使用するための代表的な方策を以下に議論する。

代表的なβ−シート模倣物基質ライブラリーは以下のように構築され得る。以下が、β−シート模倣物基質ライブラリーを調製するために使用され得る方法論の例示であること、および他のライブラリーが類似の方法で調製され得ることが理解されるべきである。

第１の工程において、以下のタイプのライブラリー：

Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ＝アミノ酸側鎖部分またはその誘導体；
Ｙ＝Ｈ、Ａｃ、ＳＯ₂Ｒ；そして、丸で囲まれた「Ｐ」は固体支持体を表す。
が固体支持体上で構築され得る（ＰＥＧＡ樹脂、Ｍｅｌｄａｌ， Ｍ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３３：３０７７−８０， １９９２；制御された細孔ガラス、Ｓｉｎｇｈら、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３８：２１７−１９， １９９５）。次いで、固体支持体は、適切な緩衝液中で酵素（例えばプロテアーゼ）とともに透析バッグ中に置かれ得る。次いで、このバッグは大量の緩衝液とともにビーカー中に置かれる。酵素反応はＨＰＬＣによる時間の関数としてモニターされ、そしてポリマーから開裂された物質はＭＳ／ＭＳにより分析される。この方策は、特定の酵素／プロテアーゼに対する最良の基質に関する情報を提供する。

上記のβ−シート模倣物の合成は次に示す逆合成手順により説明される：

この技法により生成されるライブラリーの複雑性は、（Ｒ₁）（Ｒ₃）（Ｒ）（Ｙ）である。Ｒ₁、Ｒ₃、およびＲが天然に存在するアミノ酸側鎖部分から選択されると仮定すると、ｎは一定であり、そして、Ｙは上で定義したようにＨ、Ａｃ、または−ＳＯ₂Ｒであり、２４，０００メンバーの種類を有するライブラリー［（２０）（２０）（２０）（３）］が生成される。

プロテアーゼに対するライブラリーをスクリーニングした後、ライブラリーは、次いで回収され、そして第２のプロテアーゼなどでスクリーニングされ得る。

さらに、インヒビターのライブラリーは、標準的な色素原アッセイにおいて構築され、そしてスクリーニングされ得る。例えば、ライブラリーは以下のように構築され得る。ここで、以下の実施例は、以下に提供される特定の実施例に類似の方法で調製され得るインヒビターライブラリーの代表例にすぎない。

（Ｗａｓｓｅｒｍａｎら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９：４３６４−６，
１９９４を参照のこと）。

さらなる他の方策は、以下に示すように側鎖Ｒ基を介してライブラリーを連結することである。

アスパラギン酸プロテアーゼインヒビターのライブラリーは、以下の例示の構造を有するように構築され得、そして次いで樹脂から開裂され、そしてスクリーニングされる：

同様に、メタロプロテアーゼについては、以下に示す例示の構造を有するライブラリーが構築され得、次いで樹脂から開裂されてヒドロキサム酸のライブラリーを提供する：

本発明のβ−シート模倣物の活性は、生物学的に活性なペプチドを挙げる表２を参照することによりさらに説明され得る。特に、表２のペプチドは基質またはインヒビターとしての生物学的活性を有することが公知である。

上記の生物学的に活性なペプチドを考慮して、本発明のβ−シート模倣物は、その１つまたはそれより多いアミノ酸に対して置換され得る。例えば、以下のβ−シート改変ペプチドが合成され得る：

より一般的には、本発明のβ−シート模倣物は、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｙ、およびＺ部分（ならびに、構造（Ｉ）自体のＡ、Ｂ、およびＣ部分）の適切な選択によりいくつもの生物学的活性ペプチドを模倣するために合成され得る。これはさらに、表３により説明される。表３は、生物学的に活性な化合物を得るために構造（Ｉ）のβ−シート模倣物に作成され得る種々の改変を開示する。表３において、Ｒ₂およびＲ₃は、「Ｒ₂／Ｒ₃」カラムに基づいて示される原子または基の中から独立して選択される。

本発明のβ−シート模倣物が生物学的に活性なペプチドの１つまたはそれより多いアミノ酸に対して置換される場合、得られるβ−シート改変ペプチドの構造（ＰＡＭのような固体支持体からの開裂の前）は以下の図式により表され得、ここでＡＡ₁からＡＡ₃は同じまたは異なるアミノ酸を表す：

正確なβ−シート模倣物は、コンピュータモデリングを含む任意の種々の技法、無作為化技法（ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、および／または天然基質選択アッセイを用いることにより選択され得る。β−シート模倣物はまた、β−シート模倣物のライブラリーを合成し、そしてこのようなライブラリーメンバーをスクリーニングして上で開示したように活性なメンバーを同定することにより生成され得る。

一旦、最適化されたβ−シート模倣物が選択されると、次いで、改変がそこに付着した種々のアミノ酸に対して行われ得る。種々のアミノ酸置換を有する一連のβ−シート改変ペプチドは、次いで、固体支持体から開裂され、そして好ましい基質を同定するためにアッセイされる。このような基質の生成が多くのβ−シート改変ペプチドの合成およびスクリーニングを含み得ることが理解されるべきである。ここで、各β−シート改変ペプチドは、種々の異なるβ−シート模倣物と組み合わせた種々のアミノ酸置換を有する。さらに、固体支持体からのβ−シート改変ペプチドの開裂の後、上記図式においてＺ部分がＡＡ₃でありそしてＹ部分がＡＡ₂およびＡＡ₁であることもまた認識されるべきである。（この図式は例示のために示されるが、付加的なアミノ酸またはより少数のアミノ酸がβ−シート模倣物に連結され得る−すなわち、ＡＡ₃は存在し得ないかあるいは付加的なアミノ酸がそこに連結され得る；そしてＡＡ₂および／またはＡＡ₁は省略され得るかあるいは付加的なアミノ酸はそこに連結され得る。）
一旦、好ましい基質が上で開示された手順により同定されると、基質は公知の技法によって、容易にインヒビターに変換され得る。例えば、Ｃ末端アミノ酸（この場合にはＡＡ₁）は、基質に対するインヒビター活性を与えることが公知である多くの部分の付加により改変され得る。これには、−ＣＦ₃（公知の可逆的セリンプロテアーゼインヒビター）、−ＣＨ₂Ｃｌ（公知の非可逆的セリンプロテアーゼインヒビター）、−ＣＨ₂Ｎ₂ ⁺および−ＣＨ₂Ｓ（ＣＨ₃）₂ ⁺（公知のシステイニルプロテアーゼインヒビター）、−ＮＨＯＨ（公知のメタロプロテアーゼインヒビター）、

（公知のシステイニルプロテーゼインヒビター）、ならびに

（公知のアスパルチルプロテアーゼインヒビター）を含む（しかしこれらに限定されない）。

本発明のβ−シート模倣物の有用性はいくつかの実施態様に関して開示されているが、広範な種類およびタイプの化合物が本発明のβ−シート模倣物を含むように作成され得ることが理解される。例えば、本発明のβ−シート模倣物はペプチドまたはタンパク質の２つまたはそれより多くのアミノ酸に置換され得る。ペプチドまたはタンパク質のβ−シート構造を改善および／または改変することに加えて、特にコンフォメーションの安定性に関して、本発明のβ−シート模倣物はまたタンパク質分解性の分解を阻害するために役立つ。これにより、本発明のβ−シート模倣物の組み込みのため、タンパク質分解性の分解がより少なくなる傾向があるペプチドまたはタンパク質の付加された有利点が生じる。

別の局面では、本発明は、貯蔵または投与のために調製された薬学的組成物を包含し、この組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に、治療的有効量の本発明のβ−シート模倣物または化合物を含む。抗凝固療法は、種々の血栓症状態、特に冠動脈および脳血管疾患の処置および予防が必要とされる。当業者は、抗凝固療法を必要とする状況に容易に気づく。

本発明の化合物の「治療的有効量」は、投与経路、処置される温血動物のタイプ、および検討中の特定の動物の肉体的特徴に依存する。この量を決定するためのこれらの因子およびそれらの関連は、医療分野の当業者に周知である。この量および投与方法は、最適の有効性を達成するために適合され得るが、体重、食餌、併用薬物のような因子、および医療分野の有名な当業者が認識するような他の因子に依存する。

本発明の化合物の「治療的有効量」は、所望の影響および治療徴候に依存する広い範囲をとり得る。代表的には、用量は、約０．０１ ｍｇ／ｋｇと１００ ｍｇ／ｋｇ体重との間、好ましくは約０．０１と１０ ｍｇ／ｋｇ体重との間である。

治療的使用のための「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学の分野で周知であり、そして、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ． （Ａ．Ｒ．
Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５）に記載されている。例えば、滅菌生理食塩水および生理学的ｐＨのリン酸緩衝化生理食塩水が使用され得る。保存剤、安定化剤、染料、および着香剤（ｆｌａｖｏｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）さえも薬学的組成物中に提供され得る。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが保存剤として添加され得る。さらに、抗酸化剤および沈殿防止剤が使用され得る。

トロンビン阻害は、血栓症状態を有する個体の抗凝固療法に有用であるだけでなく、貯蔵した全血の凝固を防止するためおよびテストまたは貯蔵用の他の生物学的試料中の凝固を防止するためのような、血液凝固の阻害が必要とされるときはいつでも有用である。したがって、トロンビンインヒビターは、トロンビンを含むまたは含むことが疑われる任意の媒体に添加または接触され得、そしてその媒体中で血液凝固が阻害されることが所望される（例えば、血管移植片、幹、整形外科的補綴物、心臓補綴物、および体外循環系からなる群より選択される物質に哺乳動物の血液を接触させる場合）。

トロンビンインヒビターは、種々の血管病理の処置における相乗的効果を達成するために適切な抗凝固剤または血栓溶解剤（例えば、プラスミノーゲンアクチベーターまたはストレプトキナーゼ）とともに同時投与され得る。例えば、トロンビンインヒビターは、組織プラスミノーゲンアクチベーター媒介血栓溶解性再灌流の効能を増強する。トロンビンインヒビターは、血栓形成後に最初に投与され得、そしてその後、組織プラスミノーゲンアクチベーターまたは他のプラスミノーゲンアクチベーターが投与される。それらはまた、ヘパリン、アスピリン、またはワルファリンと組み合わされ得る。

本発明のトロンビンインヒビターは、錠剤、カプセル剤（それぞれは持続放出処方または時間放出（ｔｉｍｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）処方を含む）、丸剤、粉剤、顆粒剤、エリキシル剤（ｅｌｉｘｅｒ）、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、および乳剤のような経口形態で投与され得る。同様に、それらは、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、または筋肉内形態で投与され得、これらはすべて薬学の分野の当業者に周知の形態を用いて投与され得る。有効であるが無毒性の量の所望の化合物は、抗凝集剤としてまたはフィブリンから構築される眼を処置するように用いられ得る。これらの化合物は、眼内にまたは局所的に、ならびに経口または非経口で投与され得る。

トロンビンインヒビターは、蓄積注入または移植調製物の形態で投与され得る。これらは、活性成分の持続放出を可能にするような様式で処方され得る。活性成分は、ペレットまたは小シリンダー中に圧縮され得、そして蓄積注入または移植物として皮下または筋肉内に移植され得る。移植物は、生分解性ポリマーまたは合成シリコーンのような不活性物質（例えば、Ｓｉｌａｓｔｉｃ、シリコーンゴム、またはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎにより製造された他のポリマー）を使用し得る。

トロンビンインヒビターはまた、小さなユニラメラ小胞、大きなユニラメラ小胞、およびマルチラメラ小胞のようなリポソーム送達システムの形態で投与され得る。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンのような種々のリン脂質から形成され得る。

トロンビンインヒビターはまた、化合物分子が結合されている個々のキャリアとしてのモノクローナル抗体の使用により送達され得る。トロンビンインヒビターはまた、標的可能な薬物キャリアとしての可溶性ポリマーに結合され得る。このようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタルニドフェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ−ａｓｐａｒｔａｒｎｉｄｅ−ｐｈｅｎｏｌ）、パルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリジンが含まれ得る。さらに、トロンビンインヒビターは、薬物の制御された放出を達成するために有用な生分解性ポリマーのクラスに結合され得る。例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン（ｐｏｌｙｄｉｂｙｄｒｏｐｙｒａｎ）、ポリシアノアクリレート、および架橋したまたは両親媒性のヒドロゲルのブロックコポリマーが挙げられる。

投与量および投与の方法は、最適効能を達成するように適合され得るが、体重、食餌、併用薬物のような因子、および医療分野の当業者が認識するような他の因子に依存する。投与が日常の基礎に基づいて非経口（例えば、静脈内）であるべき場合、注入可能な薬学的組成物は、液体の溶液または懸濁液として、注入前の液体中での溶液または懸濁に適切な固体形態として、あるいは乳剤としてのいずれかの通常の形態に調製され得る。

本発明の活性化合物（例えば、構造（４７）、（２０ｂ）、（３７）、（３９）、（２９ａ）、（３５）、（４５）、（５１）、（２９ｂ）、（４１）、および（１３ｂ））の経口投与に適切な錠剤は、以下のように調製され得る：
量−ｍｇ
活性化合物 ２５．０ ５０．０ １００．０
微晶質セルロース ３７．２５ １００．０ ２００．０
改変食用コーンスターチ ３７．２５ ４．２５ ８．５
ステアリン酸マグネシウム ０．５０ ０．７５ １．５

すべての活性化合物、セルロース、およびコーンスターチの一部を混合し、そして１０％コーンスターチペーストに顆粒状化する。得られた顆粒をふるいにかけ、乾燥し、そして残りのコーンスターチおよびステアリン酸マグネシウムと混合する。次いで、得られた顆粒を、１錠剤につきそれぞれ２５．０、５０．０、および１００．０ ｍｇの活性成分を含む錠剤に圧縮する。

上に示した活性化合物の静脈内投与形態は、以下のように調製され得る：

活性化合物 ０．５−１０．０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ５−５０ｍｇ
クエン酸 １−１５ｍｇ
塩化ナトリウム １−８ｍｇ
注入用水（ＵＳＰ） １ｍｌまで適量
上記の量を利用すると、活性化合物は、注入用水（ＵＳＰ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ／Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ｆｏｒ １９９５、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， Ｍａｒｙｌａｎｄにより出版、１９９４の版権の１６３６ページを参照のこと）中の塩化ナトリウム、クエン酸、およびクエン酸ナトリウムの予め調製された溶液に、室温で溶解される。

本発明の化合物は、開示されたように作成および選択された場合、インビトロおよびインビボでトロンビンの強力なインヒビターとして有用である。このように、これらの化合物は、血液の凝固を防止するためのインビトロ診断試薬として、および異常血栓症により特徴づけられる症状を有すると疑われる哺乳動物における血栓症を予防するためのインビボ薬学的薬剤として有用である。

本発明の化合物は、血液吸引チューブ中の凝血を阻害するためのインビトロ診断試薬として有用である。静脈穿刺により得られた血液をチューブ中に吸引する手段として、その中が真空である、栓をしたテストチューブを使用することは、医療分野では周知である（Ｋａｓｔｅｎ， Ｂ．Ｌ．、「Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ」、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第２版、Ｌｅｘｉ−Ｃｏｍｐ Ｉｎｃ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ ｐｐ．１６−１７、Ｊａｃｏｂｓ， Ｄ．Ｓ．ら編、１９９０）。血液からの、哺乳動物の血清の単離に有用である場合、このような真空チューブは凝血阻害添加剤を含んでいなくてもよい。あるいは、血液からの、哺乳動物の血漿の単離に有用である場合、これらは凝血阻害添加物（例えば、ヘパリン塩、ＥＤＴＡ塩、クエン酸塩、またはシュウ酸塩）を含んでいてもよい。本発明の化合物は、第Ｘａ因子またはトロンビンの強力なインヒビターであり、そしてこのように、血液採取チューブに吸引する哺乳動物の血液の凝血を防止するために、血液採取チューブに組み入れられ得る。

本発明の化合物は、血液採取チューブ中で、単独で、本発明の他の化合物と組み合わせて、または他の公知の凝血のインヒビターと組み合わせて使用される。このようなチューブに添加すべき量は、哺乳動物の血液がチューブ中に吸引されるときに凝血の形成を阻害するに十分な量である。このようなチューブへの化合物の添加は、それらの液体組成物の導入によるような当該分野で周知の方法により、それらの固体組成物として、または固体へ凍結乾燥される液体組成物として達成され得る。本発明の化合物は、２〜１０ ｍＬの哺乳動物の血液と合わされたときにこのような化合物の濃度が血餅形成を阻害するに十分である量で血液採取チューブに添加される。代表的には、必要とされる濃度は、約１〜１０，０００ ｎＭであり、１０〜１０００ ｎＭが好ましい。

以下の実施例は例示のために提供されるが、限定のために提供されるものではない。

（実施例１）
（代表的なβシート模倣物の合成）
本実施例は、本発明の代表的なβシート模倣物の合成を例示する。

構造（１）の合成：

フェニルアラニンベンズアルジミン［構造（１）］を、次のようにして合成した。室温のＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０ｍｌ）中で攪拌したＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（７．１９ｇ，３３．３ｍｍｏｌ）とベンズアルデヒド（３．４ｍｌ，３３．５ｍｍｏｌ）との混合物に、トリエチルアミン（７．０ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液に無水硫酸マグネシウム（２ｇ）を加え、その混合物を１４時間攪拌した後、セライトの１インチパッドを通してＣＨ₂Ｃｌ₂で濾過した。その濾液を減圧下で最初の容積の約半分まで濃縮した後、等容積のヘキサンで希釈した。その混合物を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、Ｈ₂Ｏおよびブラインで２回抽出した後、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して、無色の油状物８．３２ｇ（収率９３％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ分析は、ほぼ純粋（＞９５％）なフェニルアラニンベンズアルジミンを示した。その粗生成物をさらに精製することなく使用した。

構造（２）の合成：

α−アリルフェニルアラニンベンズアルジミン［構造（２）］を、次のようにして合成した。−７８℃のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中で攪拌したジイソプロピルアミン（４．３ｍｌ，３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルリチウムの溶液（２．５Ｍヘキサン溶液１３ｍｌ，３３ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を２０分間攪拌した後、ＴＨＦ（３０ｍｌ）中のフェニルアラニンベンズアルジミン（７．９７ｇ，２９．８ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。得られた暗赤橙色溶液を１５分間攪拌した後、臭化アリル（３．１ｍｌ，３６ｍｍｏｌ）を加えた。その淡黄色溶液を−７８℃で３０分間攪拌した後、室温に加温し、さらに１時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、その混合物を酢酸エチルに注いだ。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して、粘稠な黄色油状物８．５４ｇを得た。カラムクロマトグラフィーによる精製で、α−アリルフェニルアラニンベンズアルジミン７．９３ｇ（８７％）を粘稠な無色油状物として得た。

構造（３）の合成：

α−アリルフェニルアラニン塩酸塩［構造（３）］を、次のようにして合成した。メタノール（５０ｍｌ）中で攪拌したα−アリルフェニルアラニンベンズアルジミン（５．９４ｇ，１９．３ｍｍｏｌ）の溶液に、５％塩酸水溶液（１０ｍｌ）を加えた。その溶液を室温で２時間攪拌した後、真空下で濃縮して、橙褐色のカラメル質にした。その粗生成物をＣＨＣｌ₃（１０ｍｌ）に溶解し、その溶液を加熱沸騰させた。ヘキサン（約１５０ｍｌ）を加え、わずかに濁ったその混合物を冷却した。結晶化した固体から液体をデカンテーションして取り除いた後、その固体をヘキサンで濯ぎ、そして回収した。残存溶媒を真空下で除去して、純粋なα−アリルフェニルアラニン塩酸塩３．５６ｇ（７２％）を白色結晶性固体として得た。

構造（４）の合成：

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−α−アリルフェニルアラニン［構造（４）］を、次のようにして合成した。ＴＨＦ（１５ｍｌ）と水（５ｍｌ）との混合物中で攪拌したＤ，Ｌα−アリルフェニルアラニン塩酸塩（５６５ｍｇ， ２．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを加え、次いで固形重炭酸ナトリウムを注意深く少しずつ添加した。得られた二相混合物を室温で２日間激しく攪拌した後、酢酸エチルで希釈した。その有機相を分離し、水およびブラインで洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。濾液を真空下で濃縮して無色の油状物を得て、それをカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の５−１０％ＥｔＯＡｃ勾配で溶出）で精製することにより、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−α−アリルフェニルアラニン５９６ｍｇ（８６％）を得た。

構造（５）の合成：

構造（５）のアルデヒドを、次のようにして合成した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）とメタノール（１５ｍｌ）との混合物中−７８℃で攪拌した構造（４）のオレフィン２．１０ｇ（６．５７ｍｍｏｌ）の溶液に、その溶液がはっきりと青色になるまでオゾンを通した。その溶液をさらに１５分間攪拌した後、硫化ジメチルをゆっくりと加えた。得られた無色の溶液を−７８℃で１０分間攪拌した後、室温に加温し、そして６時間攪拌した。その溶液を真空下で濃縮して、粘稠な淡黄色油状物２．７２ｇを得、それをカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０−２０％ＥｔＯＡｃ勾配で溶出）で精製することにより、純粋なアルデヒド１．６３ｇを粘稠な無色油状物として得た。

構造（６）の合成：

構造（６）のヒドラゾンを、次のようにして合成した。室温のＴＨＦ（５０ｍｌ）中で攪拌した構造（５）のアルデヒド（１．６２ｇ，５．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン水和物（０．３２ｍｌ，６．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１０分間攪拌した後、３日間加熱還流した。その溶液を室温に冷却した後、真空下で濃縮して、１．５９ｇ（粗収率１０５％）の無色泡状物にした。このヒドラゾン粗生成物［構造（６）］を精製することなく使用した。

構造（７）の合成：

構造（７）の環状ヒドラジドを、次のようにして合成した。構造（６）の粗ヒドラゾン（５５ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）と酸化白金（５ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）とをメタノールに取り、そのフラスコに、ゴム風船を付けた三方コックを装着した。そのフラスコに水素ガスを３回フラッシュし、風船を水素で膨らませ、その混合物を水素雰囲気下で１７時間、激しく攪拌した。その混合物をセライトを通して酢酸エチルで濾過し、その濾液を真空下で濃縮して、白色泡状物にした。その白色泡状物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、構造（７）の純粋な環状ヒドラジド４４ｍｇを得た（８０％）。

構造（８）の合成：

構造（８）の化合物を次のようにして合成した。９０℃のアクリル酸エチル（２００ｍｌ）中で攪拌した構造（７）の環状ヒドラジド（４．０７ｇ，１３．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ホルムアルデヒド（３７％水溶液１．２ｍｌ）を加えた。その混合物を１５時間加熱還流した後、室温に冷却し、真空下で濃縮して白色泡状物にした。その生成物をカラムクロマトグラフィー（５％アセトン／クロロホルムの後、１０％アセトン／クロロホルム）で分離することにより、二環式エステルの最も極性の低いジアステレオマー［構造（８ｂ）］０．８５１ｇと、より極性の高いジアステレオマー（８ａ）を得た。不純な画分を第２のクロマトグラフィーにかけて、より純粋な構造（８ｂ）を得た（合計の収率２５％）。

構造（９ｂ）の合成：

構造（９ｂ）の化合物を次のようにして合成した。ＴＨＦ（１ｍｌ）中で攪拌した最も極性の低いエチルエステル（すなわち構造（８ｂ））（３１ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム水溶液（１Ｍ，０．１５ｍｌ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した後、反応を５％クエン酸水溶液でクエンチした。その混合物を酢酸エチル（２×）で抽出した後、合わせた抽出物を水およびブラインで洗浄した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して無色のガラス状物にした。その粗製酸［構造（９ｂ）］をさらに精製することなく以降の実験に使用した。

構造（１０ｂ）の合成：

構造（１０ｂ）の化合物を次のようにして合成した。構造（９ｂ）の粗製酸（３０ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）、ＨＡｒｇ（ＰＭＣ）ｐＮＡ（４１ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１５ｍｇ，０．０９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍｌ）に溶解した後、ジイソプロピルエチルアミン（０．０２６ｍｌ，０．１５ｍｍｏｌ）を加え、次いでＥＤＣ（１６ｍｇ，０．０８４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で４時間攪拌した後、酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして真空下で濃縮して、淡黄色ガラス状物５４ｍｇを得た。生成物をカラムクロマトグラフィーで分離することにより、カップリングした（すなわち保護された）生成物［構造（１０ｂ）］のジアステレオマーの混合物３３ｍｇ（５０％）を得た。ＭＳ（ＣＩ＋，ＮＨ₃）ｍ／ｚ ５６６．６（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（１１ｂ）の合成：

構造（１１ｂ）のβシート模倣物を次のようにして合成した。ＴＦＡ ５ｍｌ中のＨ₂Ｏ ０．２５ｍｌ、１，２−エタンジチオール０．１２５ｍｌおよびフェノール３６０ｍｇの溶液を調製し、その溶液２ｍｌに構造（１０ｂ）の保護生成物（３３ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）を溶解した。得られた溶液を室温で３時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。その濃縮物にエーテルを加え、得られた沈殿物を遠心分離によって集めた。その沈殿物をエーテルで粉末化し、さらに２回遠心分離した後、真空デシケーター中で１４時間乾燥した。その粗生成物（１４ｍｇ）をＨＰＬＣクロマトグラフィーで精製することにより、構造（１１ｂ）のβシート模倣物を得た。ＭＳ（ＣＩ＋，ＮＨ₃）ｍ／ｚ ９５４．８（Ｍ＋Ｎａ⁺）。

構造（１２ｂ）の化合物の合成：

構造（１２ｂ）の化合物を次のようにして合成した。−５０℃のＴＨＦ（１ｍｌ）中で攪拌した構造（９ｂ）の粗製酸（２４ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）とＮ−メチルモルホリン（０．００８ｍｌ）との溶液に、クロロギ酸イソブチルを加えた。その濁った混合物を１０分間攪拌した後、Ｎ−メチルモルホリン０．０１６ｍｌ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、次いでＴＨＦ（０．５ｍｌ）中のＨＡｒｇ（Ｍｔｒ）ＣＨ₂Ｃｌ（５０ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。その混合物を２０分間、−５０℃で維持した後、１時間で室温まで加温した。その混合物を酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、４９ｍｇの無色ガラス状物［構造（１２）］を得た。カラムクロマトグラフィーによる分離で、より極性の低いジアステレオマー１２ｍｇと、より極性の高いジアステレオマー１６ｍｇとを得た。

構造（１３ｂ）の合成：

構造（１３ｂ）のβシート模倣物を次のようにして合成した。構造（１２ｂ）のより極性の高いジアステレオマー（１６ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）を９５％
ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ（１ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を室温で６時間攪拌した後、真空下で濃縮して１１ｍｇの粗製物を得た。その粗生成物をエーテルで粉末化し、沈殿物をエーテルで２回洗浄した後、高真空下で１４時間乾燥した。¹Ｈ ＮＭＲ分析は、完全に脱保護された生成物とＭｔｒ保護基を含有する生成物との１：１混合物を示した。その混合物を９５％ ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏに溶解して２日間攪拌し、生成物を上記のようにして回収した。ＨＰＬＣによる生成物の精製で、構造（１３ｂ）の純粋な化合物５ｍｇを得た。ＭＳ（ＥＩ＋）ｍ／ｚ ４７７．９（Ｍ⁺）。
（実施例２）
（代表的なβシート模倣物の合成）
本実施例は、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する。

構造（１４）の合成：

ヒドロキサム酸Ｎ，Ｏ−ジメチル［構造（１４）］を次のようにして合成した。室温のＴＨＦ（１５０ｍｌ）中で攪拌したＢｏｃ−Ｎ^g−４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル−Ｌ−アルギニン（８．２６ｇ，１４．３８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２．７８ｇ，２８．５ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（２．４５ｇ，１６．０ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７．５ｍｌ，４３ｍｍｏｌ）を加え、次いで固体ＥＤＣ（３．０１ｇ，１５．７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１６時間攪拌した後、酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して白色泡状物７．４１２ｇを得た。

構造（１５）の合成：

構造（１５）の化合物を次のようにして合成した。室温のジクロロメタン（１５０ｍｌ）中で攪拌した上記アルギニンアミド（７．４１２ｇ，１３．９９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍｌ，１７ｍｍｏｌ）を加え、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３．５ｍｌ，１５．４ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．１７５ｇ，１．４３ｍｍｏｌ）とを加えた。得られた溶液を１．５時間攪拌した後、水に注いだ。水層を分離し、ジクロロメタン各１００ｍｌで２回抽出した。合わせた抽出物をブラインと共に振とうした後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。濾液を真空下で濃縮して白色泡状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィーで精製して白色泡状物８．３７２ｇを得た。

構造（１６）の合成：

アルギナール［構造（１６）］を次のようにして合成した。乾燥アルゴン雰囲気下−７８℃のトルエン中で攪拌したアルギニンアミド［構造（１５）］の溶液に、水素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（１．０Ｍ，７．３ｍｌ）を１５分間かけて滴下した。得られた溶液を３０分間攪拌した後、さらに水素化ジイソブチルアルミニウム（３．５ｍｌ）を加え、攪拌を１５分間続けた。メタノール（３ｍｌ）を滴下し、その溶液を−７８℃で１０分間攪拌した後、室温に加温した。その混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、飽和酒石酸カリウムナトリウム水溶液５０ｍｌと共に２．５時間激しく攪拌した。水層を分離し、酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出した。その抽出物を元の有機溶液と合わせ、ブラインと共に振とうした後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して白色泡状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィーで分離することにより、上記アルデヒド１．６１７ｇを白色泡状物として得た。

構造（１７）の合成：

ヒドロキシベンゾチアゾール［構造（１７）］を次のようにして合成した。乾燥アルゴン雰囲気下−７８℃の無水ジエチルエーテル（６０ｍｌ）中で攪拌したベンゾチアゾール（１．５５ｍｌ，１４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルリチウム溶液（ヘキサン中２．５Ｍ，５．６ｍｌ，１４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。得られた橙色溶液を４５分間攪拌した後、ジエチルエーテル（５ｍｌ）中のアルギナール［構造（１６）］（１．６０９ｇ，２．８１９ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。その溶液を１．５時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、その混合物を室温に加温した。その混合物を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を水およびブラインで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して黄色油状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（溶離液、３０％酢酸エチル／ヘキサンの後、４０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製することにより、ヒドロキシベンゾチアゾール（ジアステレオマーの約２：１混合物）１．２２ｇを白色泡状物として得た。

そのヒドロキシベンゾチアゾールの混合物（１．００３ｇ，１．４１４ｍｍｏｌ）を室温のＣＨ₂Ｃｌ₂（１２ｍｌ）中で攪拌し、トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）を加えた。得られた溶液を１．５時間攪拌した後、減圧下で濃縮して、ベンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩１．２２ｇを黄色泡状物として得た。

ＭＳ（ＥＩ＋）：ｍ／ｚ ５０６．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（１８ｂ）の合成：

二環式化合物［構造（１８ｂ）］を次のようにして合成した。実施例１で得た構造（９ｂ）の二環式酸（１５１ｍｇ，０．３８７ｍｍｏｌ）とＨＯＢｔ水和物（７１ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）とをＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．３４ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を加え、次いでＥＤＣ（８９ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間攪拌した後、ＴＨＦ（１ｍｌ）中の上記ベンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩［構造（１７）］（２７３ｍｇ，０．３７２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（０．５ｍｌ）すすぎ液と共に加えた。その混合物を室温で１５時間攪拌した後、酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、２９７ｍｇの黄色ガラス状物とした。¹Ｈ ＮＭＲ分析は、構造（１８ｂ）を含む４つのジアステレオ異性アミドの混合物を示した。

ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ ８７７（Ｍ⁺）。

構造（１９ｂ）の合成：

構造（１９ｂ）を次のようにして合成した。粗ヒドロキシベンゾチアゾール（２４７ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍｌ）に溶解し、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ ペルヨージナン（ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（２４１ｍｇ，０．５８８ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で６時間攪拌した後、酢酸エチルで希釈し、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液と共に１０分間激しく攪拌した。有機溶液を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して黄色ガラス状物２５２ｍｇを得た。¹Ｈ ＮＭＲ分析は、構造（１９ｂ）を含む２つのジアステレオ異性ケトベンゾチアゾールの混合物を示した。

構造（２０ｂ）の合成：

ケトベンゾチアゾール［構造（２０）］を次のようにして合成した。ケトベンゾチアゾール（１９）（４１ｍｇ，０．０４７ｍｍｏｌ）を９５％トリフルオロ酢酸水溶液（０．９５ｍｌ）に溶解し、チオアニソール（０．０５ｍｌ）を加えた。得られた暗色溶液を室温で３０時間攪拌した後、真空下で濃縮して暗褐色ゴム状物にした。そのゴム状物をジエチルエーテルで粉末化し、遠心分離した。その溶液を除去し、残った固体をさらに２回、上記のようにして粉末化し、そして回収した。その黄色固体を真空デシケーターで２時間乾燥した後、ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ逆相Ｃ−４カラム（２２×２５０ｍｍ ＩＤ））で精製した。移動相：Ａ＝０．０５％ ＴＦＡ／水；Ｂ＝０．０５％ ＴＦＡ／アセトニトリル。流速は１０．０ｍＬ／分とした。使用した勾配は２５分間で８％ Ｂから２２％ Ｂまでであり、その後、２２％の無勾配溶離とした。目的のピーク（構造（２０ｂ））は４２分に溶出し、脱保護された生成物（構造（２０ｂ））２．５ｍｇが得られた。

ＭＳ（ＥＳ＋）：５６３．５（Ｍ＋Ｈ⁺）。
（実施例３）
（代表的βシート模倣物のタンパク質加水分解基質としての活性）
この実施例では、トロンビンおよび第ＶＩＩ因子の基質として選択的に機能する、本発明の代表的βシート模倣物の能力を例示する。前記構造（１１ｂ）のβシート模倣物を実施例１に開示した手順に従って合成し、さらに修飾することなくこの実験で使用した。

この実験のトロンビンアッセイと第ＶＩＩ因子アッセイは共に、Ｈｉｔａｃｈｉ ＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計（モデルＵ−３０００）を用いて３７℃で行なった。構造（１１ｂ）を脱イオン水に溶解した。濃度は３４２ｎｍの吸光度から決定した。８２７０リットル／ｍｏｌ／ｃｍという吸光係数を使用した。反応緩衝液に関して９９２０リットル／ｍｏｌ／ｃｍというｐ−ニトロアニリンの吸光係数を用い、４０５ｎｍにおける吸光度の変化から、構造（１１ｂ）の加水分解速度を決定した。初速度は反応進行曲線の最初の直線部分から計算した。速度論的パラメーターは、ＧｒａＦｉｔ（バージョン３．０， Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を用いて、実験データに対する簡単なミカエリス−メンテンの式の非加重非線形最小二乗フィッティングによって決定した。

トロンビンアッセイについては、ｐＨ８．４トリス緩衝液（トリス，０．０５Ｍ；ＮａＣｌ，０．１５Ｍ）中で実験を行なった。６．４ ＮＩＨ単位のウシトロンビン（Ｓｉｇｍａ製）を１０ｍｌのアッセイ緩衝液に溶解して１０ｎＭトロンビン溶液を得た。ＵＶキュベットに１３０〜１４８μｌの緩衝液と１００μｌのトロンビン溶液を加え、３７℃で２分間プレインキュベートし、最後に２〜２０マイクロリットル（最終体積を２５０μｌにする量）の０．２４ｍＭ構造（１１ｂ）溶液を加えて反応を開始させた。その反応の最初の二分間を初速度測定のために記録した。８つの構造（１１ｂ）濃度点を集めて速度論的パラメーターを得た。ｋ_catとＫ_Mは、それぞれ５０ｓ^-1および３μＭと計算された。ｋ_cat／Ｋ_Mは１．６７×１０⁷Ｍ^-1ｓ^-1であることがわかった。

第ＶＩＩ因子アッセイには、ｐＨ８．０トリス緩衝液（０．０５Ｍトリス，５ｍＭ ＣａＣｌ₂，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，０．１％ ＴＷＥＥＮ ２０，０．１％ＢＳＡ）を用いた。１０μｌの２０μＭヒト第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）および２２μＭヒト組織因子（ＴＦ）をアッセイ緩衝液に入れて、それぞれ１６０ｎＭ ＦＶＩＩａおよびＴＦ溶液とした。４０〜４８μｌの緩衝液、２５μｌのＦＶＩＩａおよび２５μｌ ＴＦ溶液をキュベットに加え、３７℃で５分間インキュベートした後、２〜１０μｌの２．４ｍＭ構造（１１ｂ）溶液をそのキュベットに加えて反応を開始させた（最終体積は１００ｍｌとした）。最初の３分間の反応進行曲線を記録した。５つの構造（１１ｂ）濃度点を集めた。その初速度を、ＧｒａＦｉｔを用いて、構造（１１ｂ）の濃度に対して線形最小二乗フィッティングした。ｋ_cat／Ｋ_Mをその勾配から計算したところ、１７，５００Ｍ^-1ｓ^-1であることがわかった。

この実験のトロンビンアッセイと第ＶＩＩ因子アッセイではどちらの場合も、（Ｄ）ＦＰＲ−ＰＮＡをコントロールとした。このコントロールと比較した構造（１１ｂ）の活性は、トロンビンと第ＶＩＩ因子について、それぞれ０．７６と１．３８だった（第ＶＩＩ因子：Ｋ_cat／Ｋ_M＝１．２７×１０⁴Ｍ^-1ｓ^-1；トロンビン：Ｋ_cat／Ｋ_M＝２．２０×１０⁷Ｍ^-1ｓ^-1）。
（実施例４）
（代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性）
この実施例では、トロンビン、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）、プロテインＣ、プラスミンおよびトリプシンのプロテアーゼインヒビターとして機能する、本発明の代表的βシート模倣物の能力を例示する。前記構造（１３ｂ）のβシート模倣物を実施例１に開示した手順に従って合成し、この実験で使用した。

この実験の阻害アッセイはすべて、Ｂｉｏ−Ｒａｄマイクロプレートリーダー（モデル３５５０）を用いて、９６ウェルマイクロプレート中、室温で行なった。０．２９ｍｇの構造（１３ｂ）を２００ｍｌの０．０２Ｎ塩酸脱イオン水溶液に溶解した。この溶液（２．０５ｍＭ）を、全ての阻害アッセイ用のストック溶液とした。発色基質の加水分解を４０５ｎｍで監視した。代表的には３０秒〜２分間隔で９０回プレートを読み取ることにより、反応進行曲線を記録した。ＧｒａＦｉｔにおける、一次反応に対する非加重非線形最小二乗フィッティングにより、初速度を決定した。次に、決定した初速度を、ＧｒａＦｉｔを用いて構造（１３ｂ）の濃度に対して非線形最小二乗フィッティングすることによりＩＣ₅₀を得た。代表的には、ＩＣ₅₀の決定に８つの構造（１３ｂ）濃度点を使用した。

トロンビンアッセイについては、基質として、Ｎ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Ｓｉｇｍａ製）を、１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）ｐＨ８．４トリス緩衝液中、０．５ｍＭ濃度で使用した。構造（１３ｂ）ストック溶液から２段階の希釈を行なった。先ず、０．０２Ｎ塩酸塩溶液中に１：２０００希釈、次いでｐＨ８．４トリス緩衝液中に１：１００希釈。その構造（１３ｂ）の最終希釈液を第１点（１０ｎＭ）とした。この第１点から、希釈率２で、７つの連続希釈液を作成した。各反応ウェルに１００μｌの１０ｎＭトロンビン溶液と５０μｌの構造（１３ｂ）溶液を加えた。その酵素とインヒビターとの混合物を２０分間インキュベートした後、１００μｌの０．５ｍＭ基質溶液を加えて反応を開始させた。トロンビンに対する構造（１３ｂ）のＩＣ₅₀は１．２±０．２ｎＭであることがわかった。

第ＶＩＩ因子アッセイでは、基質として、Ｓ−２２８８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）Ｄ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡを脱イオン水中２０μＭで使用した。構造（１３ｂ）のストックから、ｐＨ８．０トリス緩衝液中に１：１００希釈液を作成した。この希釈液をこのインヒビターの第１点（２０μＭ）とした。この濃度点から、希釈率２で、さらに６つの連続希釈液を作成した。５０μｌの１６ｎＭ ＦＶＩＩａおよびＴＦ複合体溶液と４０μｌのインヒビター溶液を各ウェルに加え、その混合物を２０分間インキュベートした後、１０μｌの２０ｍＭ Ｓ−２２８８を加えた。第ＶＩＩ因子に対する構造（１３ｂ）のＩＣ₅₀は１４０±３ｎＭであることがわかった。

第Ｘ因子アッセイにおける緩衝液と基質は、トロンビンアッセイに使用したものと同じである。ｐＨ８．４トリス緩衝液中に１：１００希釈液を作って、それを第１点とした。希釈率２で、７つの希釈液を作成した。アッセイ手順は、トロンビンの代わりにｐＨ８．４トリス緩衝液中の２５ｎＭウシの第Ｘａ因子（Ｓｉｇｍａ製）を使用した点以外は、トロンビンの場合と同じである。第Ｘ因子に対する構造（１３ｂ）のＩＣ₅₀は３８５±１７ｎＭであることがわかった。

ウロキナーゼアッセイにおいて、緩衝液は、脱イオン水中のｐＨ８．８ ０．０５Ｍトリスおよび０．０５Ｍ ＮａＣｌとした。水中０．５ｍＭのＳ−２４４４（Ｓｉｇｍａ製）ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡを基質として使用した。第ＶＩＩ因子および第Ｘ因子の場合と同じ希釈法を用いた。アッセイ手順は、１８．５ｎＭのヒトウロキナーゼ（Ｓｉｇｍａ製）を使用した点以外は、トロンビンの場合と同じである。ＩＣ₅₀は９２７±１３８ｎＭであることがわかった。

組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）：緩衝液、基質および構造（１３ｂ）の希釈法は、第ＶＩＩ因子アッセイに使用したものと同じとした。

活性化プロテインＣ（ａＰＣ）：緩衝液はトロンビンアッセイで用いたものと同じとした。アッセイ緩衝液中の１．２５ｍＭ Ｓ−２３６６を基質として使用した。構造（１３ｂ）の希釈はウロキナーゼアッセイの場合と同じであった。

プラスミン：緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）；アッセイ緩衝液中１．２５ｍＭのＳ−２５５１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ｐＮＡを基質として使用した。構造（１３ｂ）の希釈についてはウロキナーゼアッセイを参照のこと。

トリプシンアッセイでは、ｐＨ７．８トリス（０．１０Ｍトリスおよび０．０２Ｍ ＣａＣｌ₂）を緩衝液として使用した。基質として、ＢＡＰＮＡ（Ｓｉｇｍａ製）を、１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）脱イオン水溶液中、１ｍｇ／ｍｌで使用した。第ＶＩＩ因子アッセイの場合と同じ構造（１３ｂ）の希釈液を作成した。４０μｌの５０μｇ／ｍｌウシトリプシン（Ｓｉｇｍａ製）と２０μｌの構造（１３ｂ）溶液を反応ウェルに加え、その混合物を５分間インキュベートした後、４０μｌの１ｍｇ／ｍｌ ＢＡＰＮＡを加えて反応を開始させた。トリプシンに対する構造（１３ｂ）のＩＣ₅₀は１６０±８ｎＭであることがわかった。

前記のアッセイでは、（Ｄ）ＦＰＲ−ＣＨ₂Ｃｌ（「ＰＰＡＣＫ」）をコントロールとした。このコントロールと比較して構造（１３ｂ）の活性は高かった（表４参照）。

プロトロンビン時間（ＰＴ）については、１００μｌのコントロール血漿（Ｓｉｇｍａ製）を１〜５μｌの緩衝液（０．０５Ｍトリス，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，ｐＨ＝８．４）または試験化合物（すなわちＰＰＡＣＫまたは構造（１３ｂ））と共に緩衝液中でインキュベート（３７℃で３０分間）することにより、これを決定した。次に、予め温めておいた（３７℃で約１０分間）カルシウム入りトロンボプラスチン（Ｓｉｇｍａ製）２００μｌを、前記血漿試料にすばやく加えた。血塊が形成するのに要する時間をストップウォッチを用いて手動で記録したところ（表５参照）、それがＰＰＡＣＫに匹敵することがわかった。

（実施例５）
（代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性）
この実施例では、トロンビン、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、活性化プロテインＣ、プラスミン、トリプターゼおよびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の能力を例示する。前記構造（２０ｂ）のβシート模倣物を実施例２に開示した手法に従って合成し、この実験に使用した。

Ｂｉｏ−Ｒａｄマイクロプレートリーダー（モデル３５５０）を用いて、全ての阻害アッセイを９６ウェルマイクロプレート中、室温で行なった。構造（２０ｂ）の１ｍＭ水溶液を、全ての阻害アッセイ用のストック溶液とした。発色基質の加水分解を４０５ｎｍで監視した。代表的には３０秒〜２分間隔で６０回プレートを読み取ることにより、反応進行曲線を記録した。ＧｒａＦｉｔ（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ， Ｌｏｎｄｏｎ， Ｅｎｇｌａｎｄ）における、一次反応に対する非加重非線形最小二乗フィッティングにより、初速度を決定した。次に、決定した初速度を、ＧｒａＦｉｔで構造（２０ｂ）の濃度に対して非線形最小二乗フィッティングすることにより、Ｋｉを得た。これらアッセイの一般的形式は次の通りである：１００ｍｌの基質溶液と１００ｍｌの構造（２０ｂ）溶液をマイクロプレートウェルに加えた後、５０ｍｌの酵素溶液を加えて反応を開始させた。通常、Ｋｉの決定には、８つの構造（２０ｂ）濃度点を使用した。９種類のセリンプロテアーゼに対する構造（２０ｂ）のＫｉ値を表６に示す。

トロンビン：基質として、Ｎ−ｐ−トシル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Ｓｉｇｍａ製）を１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）ｐＨ８．０トリス緩衝液（トリス，５０ｍＭ、Ｔｗｅｅｎ ２０，０．１％、ＢＳＡ，０．１％、ＮａＣｌ，０．１５Ｍ、ＣａＣｌ₂，５ｍＭ）中、０．５ｍＭ濃度で使用した。構造（２０ｂ）ストック溶液から２段階の希釈を行なった。先ず水中の１：１００希釈液を作り、次にｐＨ８．０トリス緩衝液中の１：５０希釈液を作って、それを第１点（２００ｎＭ）とした。その第１点から、アッセイ用に、７つの連続希釈液を作成した。

第ＶＩＩ因子：ｐＨ８．０トリス緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）中２．０５ｍＭのＳ−２２８８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）Ｄ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡを使用した。構造（２０ｂ）のストックから、１：１００希釈液をトリス緩衝液中に作成した。この濃度点から、アッセイ用に、さらに７つの連続希釈液を作成した。

第Ｘ因子：緩衝液と基質はトロンビンアッセイに用いたものと同じとした。ｐＨ８．０トリス緩衝液中に１：１００希釈液を作成し、それを第１点とした。その第１点から、アッセイ用に、さらに７つの希釈液を作成した。

ウロキナーゼ：緩衝液，５０ｍＭトリス、５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ＝８．８。緩衝液中０．２５ｍＭのＳ−２４４４（Ｓｉｇｍａ製）ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡを基質として使用した。構造（２０ｂ）のストックから、第１点として、緩衝液中に１：１０希釈液を作成し、その第１点からアッセイ用に、さらに７つの希釈液を作成した。

組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）：緩衝液、基質および構造（２０ｂ）の希釈法は、第ＶＩＩ因子アッセイに用いたものと同じとした。

活性化プロテインＣ（ａＰＣ）：緩衝液はトロンビンアッセイで用いたものと同じとした。アッセイ緩衝液中の１．２５ｍＭ Ｓ−２３６６を基質として使用した。構造（２０ｂ）の希釈液はウロキナーゼアッセイの場合と同じとした。

プラスミン：緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）；アッセイ緩衝液中１．２５ｍＭのＳ−２２５１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ｐＮＡを基質として使用した。構造（２０ｂ）の希釈についてはウロキナーゼアッセイを参照のこと。

トリプターゼ：０．１Ｍトリス、０．２Ｍ ＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌヘパリン、ｐＨ＝８．０を緩衝液として使用した。緩衝液中の０．５ｍＭ Ｓ−２３６６（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）Ｌ−ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡを基質として使用した。構造（２０ｂ）の１ｍＭストックから、水中に１０ｍＭ溶液を作成した後、その１０ｍＭ溶液から緩衝液中に１ｍＭ溶液を作成し、それを第１濃度点とした。この点から、アッセイ用に、さらに７つの希釈液を作成した。

トリプシン：緩衝液、基質および構造（２０ｂ）の希釈法は、トロンビンに使用したものと同じとした。

前記表６に示すデータによって例示されるように、構造（２０ｂ）は、繊維素溶解酵素に対して良好な特異性を持つ良好なトロンビンインヒビターとして機能した。
（実施例６）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例では、下記の構造（２１）を持つ本発明の代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（２１）を次のように合成した。ＣＨ₂Ｃｌ₂ ０．４３ｍＬ中のＮ^a−ＦＭＯＣ−Ｎ^e−Ｃｂｚ−ａ−エタナール−Ｌｙｓ−Ｏｍｅ［Ｐｈｅ−ＯＭｅから構造（５）を調製するために使用した方法と同じ方法によって、Ｎ^e−Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−ＯＭｅから合成したもの］４８ｍｇ（０．８５９ｍｍｏｌ）、Ｃｙｓ−ＯＥｔ．ＨＣｌ １５．９ｍｇ（０．０８５９ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ １３．２μＬ（０．０９４５ｍｍｏｌ）の溶液をＡｒ下に室温で２時間攪拌した。ビス（ビス（トリメチルシリル）アミノ）スズ（ＩＩ）（３９．８μＬ）を加え、その反応を一夜攪拌した。その反応溶液を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、各６ｍＬの１０％クエン酸、水およびブラインで洗浄した。その有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残渣を、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、真空乾燥後に、無色の油状物１２．９ｍｇ（２３％）をジアステレオマーの混合物（¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）による）として得た。ＭＳ ＥＳ（＋）ｍ／ｚ ６５８．２（ＭＨ⁺，３０），６７５．３（Ｍ＋Ｎａ⁺，１００），６９６．１（Ｍ＋Ｋ⁺，４５）。
（実施例７）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（２２）の合成：

構造（２２）を次のように合成した。ジクロロメタン（１００ｍｌ）中でＤＭＡＰ（２７０ｍｇ）およびメタノール（３ｍｌ）と共に攪拌したＣｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＢｎ）−ＯＨ（５ｇ，１３．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＥＤＣＩ（３ｇ）を加えた。０℃で３時間攪拌した後、その溶液を室温（ｒｔ）で一夜攪拌した。濃縮後、その残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）と１Ｎ ＨＣｌ（１００ｍｌ）に取り出した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ₃（１００ｍｌ）、ブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、シリカゲルの短いパッドに通し、濃縮して、４．９５ｇの油状物（９５％）を得た。その生成物は、さらに精製しなくても次の反応に使用できるほど純粋だった。

構造（２３）の合成：

構造（２３）を次のように合成した。１，４−ジオキサン（４０ｍｌ）とＨ₂Ｏ（２０ｍｌ）中でトリエチルアミン（８．４ｍｌ，６０ｍｍｏｌ）と共に攪拌したＬ−Ｇｌｕ−ＯＨ（４．４１ｇ，３０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ₂Ｏ（７ｇ，３２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１．５時間攪拌した後、その溶液を６Ｎ ＨＣｌで酸性化（ｐＨ２）し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ₂Ｏ（１００ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮して、油状物（９．５ｇ）を得た。さらに精製することなく、その油状物を次の反応に使用した。

１，２−ジクロロエタン（２００ｍｌ）中の前記油状物（９．５ｇ）とパラホルムアルデヒド（５ｇ）およびｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ₂Ｏ（４００ｍｇ）との混合物を、モレキュラーシーブ４Ａを満たしたディーン−スターク冷却器を用いて６時間加熱還流した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ₃（５０ｍｌ）を添加した後、その溶液を飽和ＮａＨＣＯ₃（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた水性抽出物を６Ｎ ＨＣｌで酸性化（ｐＨ２）し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮して油状物を得た。その粗製油状物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝８０：２０→７０：３０→６０：４０）で精製することにより、油状物（４．０４ｇ，５２％）を得た。この油状物は静置するとゆっくりと固化した。

構造（２４）の合成：

構造（２４）を次のように合成した。ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（２．１ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に０℃でｎ−ＢｕＬｉ（４ｍｌの２．５Ｍヘキサン溶液，１０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を同じ温度で３０分間攪拌した。−７８℃に冷却した後、その攪拌溶液にＴＨＦ（１０ｍｌ）中のカルボン酸（２３）（１．０２ｇ，３．９４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、次いでその添加注射器をＴＨＦ ５ｍｌで濯いだ。得られた溶液を−７８℃で１時間攪拌し、ＰｈＣＨ₂Ｂｒ（０．４６ｍｌ，３．９ｍｍｏｌ）を加えた。−３０℃で３時間攪拌した後、その溶液に１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍｌ）を加え、得られた溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。その有機抽出物をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮して油状物を得た。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝８０：２０→６０：４０→５０：５０）で精製することにより、泡状の固体（１．３５ｇ，９８％）を得た。

構造（２５）の合成：

構造（２５）の合成を次のように行なった。乾燥ＴＨＦ（５ｍｌ）中のカルボン酸（２４）（１．０５ｇ，３．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、室温で１，１’−カルボニルジイミダゾール（５００ｍｇ，３．１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で３０分間攪拌した。そのアシルイミダゾールの溶液を精製することなく次の反応に使用した。

一方、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（１．６ｍｌ，７．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にｎ−ＢｕＬｉ（３ｍｌの２．５Ｍヘキサン溶液，７．５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。同じ温度で３０分間攪拌した後、その溶液を−７８℃に冷却した。その攪拌溶液に、ＴＨＦ（５ｍｌ）中のＣｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＢｎ）−ＯＭｅ（１．１６ｇ，３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、次いでその添加注射器をＴＨＦ ２ｍｌで濯いだ。得られた溶液を同じ温度で１５分間攪拌した。その攪拌溶液に、ＴＨＦ ３ｍｌ中の前記アシルイミダゾールを加えた。−７８℃で３０分間攪拌した後、その溶液に飽和ＮＨ₄Ｃｌ（５０ｍｌ）を加え、ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ₃（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、シリカゲルの短いパッドに通し、濃縮して油状物を得た。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝９０：１０→８０：２０→７０：３０→６０：４０）で精製することにより、油状物（１．４８ｇ，６９％）を得た：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ７３４．４（Ｍ＋ＮＨ₄ ⁺）。

構造（２６ａ）の合成：

構造（２６ａ）を次のように合成した。ＥｔＯＨ／ＡｃＯＨ（１０／１ｍｌ）中の前記出発ケトエステル（２５）（５３０ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、２０気圧のＨ₂圧下、１０％Ｐｄ／Ｃ（約１００ｍｇ）で２日間処理した。セライトの短いパッドを通して濾過した後、その濾液を濃縮して、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）に溶解した。その溶液を１Ｎ ＨＣｌ（３０ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ₃（３０ｍｌ）、ブライン（３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮して油状物を得た。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝８０：２０→６０：４０→５０：５０→２０：８０→０：１００）で精製することにより、泡状の固体（９５ｍｇ，３４％）を得た。

立体化学は２Ｄ ＮＭＲで割り当てた。

構造（２７ａ）の合成：

構造（２７ａ）を次のように合成した。室温のＴＨＦ １ｍｌ中で攪拌した二環式エステル（２６ａ）２８ｍｇ（０．０７０ｍｍｏｌ）の溶液に、１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液０．１４ｍｌを加えた。その混合物を２０時間激しく攪拌した後、５％クエン酸水溶液（１ｍｌ）でクエンチした。その混合物を酢酸エチル（３×２５ｍｌ）で抽出した後、合わせた抽出物を水とブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過と、真空下にその濾液を濃縮することにより、白色泡状物２６ｍｇを得て、それをさらに精製することなく使用した。

構造（２８ａ）の合成：

構造（２８ａ）を以下のように合成した。二環式酸（２７ａ）（２６ｍｇ，０．０６７ｍｍｏｌ）、ベンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩（構造（１７）６１ｍｇ，０．０８３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２１ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ水和物（１６ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．３４ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で１５時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そして５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。この有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして真空下で濃縮して、６０ｍｇの黄色ガラス状物とした。¹Ｈ ＮＭＲ分析により、４つのジアステレオマーアミドの混合物が示された。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ ８９８（Ｍ＋Ｎａ⁺）。

構造（２９ａ）の合成：

構造（２９ａ）のβシート模倣物を以下のように合成した。粗ヒドロキシベンゾチアゾール（２８ａ）（６０ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍｌ）に溶解し、デス−マーチンペルヨージナン（５８ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で６時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そして１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液と共に１０分間激しく攪拌した。この有機溶液を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。この濾液の真空下での濃縮により、４２ｍｇの黄色ガラス状物を得た。¹Ｈ ＮＭＲ分析により、２つのジアステレオマーケトベンゾチアゾールの混合物が示された。

このケトベンゾチアゾール（４２ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）を９５％トリフルオロ酢酸水溶液（０．９５ｍｌ）に溶解し、そしてチオアニソール（０．０５ｍｌ）を添加した。得られた濃色溶液を室温で１８時間攪拌し、次いで真空下で濃縮して濃褐色ゴム状物とした。このゴム状物をジエチルエーテルで粉末化し、そして遠心分離した。溶液を除去し、残った固体をさらに２回、上記のように粉末化し、そして回収した。黄色固体を真空デシケーター中で２時間乾燥し、次いでＨＰＬＣにより精製して、１．４ｍｇの脱保護された生成物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：５６２．４（Ｍ＋Ｈ⁺）。ＨＰＬＣ：（ｔ_R＝２１．１７分）。

構造（２６ｂ）の合成：

構造（２６ｂ）を以下のように合成した。ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（１０／１ｍｌ）中の上記出発ケトエステル（２５）（６１５ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、３日間２０気圧のＨ₂下で、１０％Ｐｄ／Ｃ（約６０ｍｇ）で処理した。Ｃｅｌｉｔｅの短いパッドを通して濾過した後、この濾液を濃縮して油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝８０：２０→６０：４０→５０：５０→０：１００）により精製して、より極性の高い画分（５０ｍｇ）を回収した。Ｒｆ ０．１２（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６０：４０）；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ４３３（Ｍ＋Ｈ＋）。

上記油状物を、２日間還流温度で１，２−ジクロロエタン（１０ ｍｌ）中ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ₂Ｏ（５ｍｇ）で処理した。濃縮後、油状生成物を分取ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝８０：２０→６０：４０）により精製して、油状物（１０ｍｇ）を得た。

立体化学は２Ｄ ＮＭＲにより割り当てた。

構造（２８ｂ）の合成：

構造（２８ｂ）を以下のように合成した。室温でＴＨＦ １ｍｌ中で攪拌した二環式エステル（２６ｂ）１２ｍｇ（０．０３０ｍｍｏｌ）の溶液に、０．０６０ｍｌの１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液を添加した。この混合物を２５時間激しく攪拌し、次いで５％クエン酸水溶液（１ｍｌ）でクエンチした。この混合物を酢酸エチル（３×２５ｍｌ）で抽出し、次いで合わせた抽出物を水およびブラインで洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過および濾液の真空下での濃縮により、１９ｍｇの白色泡状物を得た。

この泡状物、ベンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩（３０ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１０ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ水和物（９ｍｇ，０．０５９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍｌ）中に溶解し、そしてジイソプロピルエチルアミン（０．０２６ｍｌ，０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で３０時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そして５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。この有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して２８ｍｇの黄色ガラス状物とした。¹Ｈ ＮＭＲ分析により、４つのジアステレオマーアミドの混合物が示された。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ ８９８（Ｍ＋Ｎａ⁺）。

構造（２９ｂ）の合成：

構造（２９ｂ）を以下のように合成した。粗ヒドロキシベンゾチアゾール（２８ｂ）（２８ｍｇ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍｌ）に溶解し、そしてデス−マーチンペルヨージナン（２９ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そして１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液と共に１０分間激しく攪拌した。この有機溶液を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。この濾液の真空下での濃縮により、３２ｍｇの黄色ガラス状物を得た。¹Ｈ ＮＭＲ分析により２つのジアステレオマーケトベンゾチアゾールの混合物が示された。

このケトベンゾチアゾール（３２ｍｇ）を９５％トリフルオロ酢酸水溶液（０．９５ｍｌ）に溶解し、そしてチオアニソール（０．０５ｍｌ）を添加した。得られた濃色溶液を室温で２０時間攪拌し、次いで真空下で濃縮して濃褐色ゴム状物とした。このゴム状物をジエチルエーテルで粉末化し、そして遠心分離した。溶液を除去し、残った固体をさらに２回、上記のように粉末化し、そして回収した。黄色固体を真空デシケーター中で２時間乾燥し、次いでＨＰＬＣにより精製して、１．３ｍｇの脱保護された生成物を得た。ＭＳ（ＦＢ＋）：５６２．３６（Ｍ＋Ｈ⁺）；ＨＰＬＣ：ｔ_R＝２１．５１分（勾配 ４０分間にわたって０→９０％ ＣＨ₃ＣＮ中の０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ中の０．１％ＴＦＡ）。
（実施例８）
（代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性）
この実施例は、トロンビン、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子およびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の能力を例示する。上記構造（２９ａ）および（２９ｂ）のβシート模倣物を実施例７に開示した手順に従って合成し、そしてこの実験で使用した。

プロテイナーゼインヒビターアッセイは、第ＸＩ因子について以下に記載した以外は、実施例５に記載したように行なった。結果を表７に示す。

第ＸＩ因子。このアッセイにおいては、トロンビンアッセイと同じ緩衝液を利用した。１ｍＭ Ｓ−２３６６（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）、Ｌ−ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ水溶液を、基質として用いた。構造（２９ａ）または（２９ｂ）の１ｍＭストック水溶液から、緩衝液中の１：１０希釈液を作製した。この１００μＭ溶液から、アッセイ用緩衝液中の７つの連続１：５希釈液を作製した。

（実施例９）
（代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性）
この実施例は、トロンビン、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、トリプターゼ、ａＰＣ、プラスミン、ｔＰＡ、ウロキナーゼおよびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の能力を例示する。上記構造（２０）および（２９ｂ）のβシート模倣物をそれぞれ実施例２および７に開示した手順に従って合成し、そしてこの実験に使用した。

プロテイナーゼインヒビターアッセイは、第ＸＩ因子について実施例８に記載したように行った以外は、実施例５に記載されているように行なった。結果を表８に記載する。

＊選択性はトロンビンのＫｉに対する酵素のＫｉの比率である
（実施例１０）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（３０）の合成：

構造（３０）を以下のように合成した。ｎ−ブチルリチウム（７００μＬ，１．７５ｍｍｏｌ，ヘキサン中２．５Ｍ）を、−７８℃のＴＨＦ（１ｍｌ）中のトリス（メチルチオ）メタン（２５６μＬ，１．９５ｍｍｏｌ）の溶液に５分間にわたって添加した。この混合物を４０分間攪拌し、次いで２ｍｌのＴＨＦ中のビス−Ｂｏｃ−アルギニナール（実施例２の構造（１６））（１００ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して５分間にわたって処理した。１．５時間攪拌した後、反応を飽和ＮＨ₄Ｃｌ溶液でクエンチし、そして室温まで戻した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃで抽出し（３×）、ブラインで洗浄し（１×）、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン １：４）による精製により、９３ｍｇ（７３％）のオルトチオメチルエステル（構造（３０））および８ｍｇの回収アルデヒド（構造（１６））を得た。

構造（３１）の合成：

構造（３１）を以下のように合成した。２．５ｍｌの１２：１メタノール／水中の７７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のオルトチオメチルエステル（構造（３０））、１１７ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の塩化第二水銀および３９ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の酸化第二水銀の混合物を室温で４時間攪拌した。この混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、そして残渣をＥｔＯＡｃで洗浄した（３×）。濾液を水で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した（３×）。有機層を７５％ＮＨ₄ＯＡｃ／ＮＨ₄Ｃｌで２回洗浄し、次いでＮＨ₄Ｃｌで洗浄し、そして乾燥した（Ｎａ₂ＳＯ₄）。溶媒を真空下で除去し、そして残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ，１：３）により精製して、４８ｍｇ（７２％）の構造（３１）の２つのジアステレオマーを１：２．７の比率で得た。

構造（３２）の合成：

構造（３２）を以下のように合成した。ＴＨＦ／水（４ｍｌ，１：３）中の３２ｍｇのメチルエステル（構造（３１））（０．０５１ｍｍｏｌ）の溶液を５ｍｇ（０．１１９ｍｍｏｌ）のＬｉＯＨ・Ｈ₂Ｏで処理した。４５分間攪拌した後、反応物を５％クエン酸で希釈し、そして酢酸エチルで抽出した（３×）。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、そして濃縮して、３０ｍｇ（９６％）の構造（３２）を白色固体として得た。この生成物をさらに精製することなく使用した。

構造（３３）の合成：

構造（３３）を以下のように合成した。ＴＨＦ（５ｍｌ）中の構造（３２）の化合物（２９ｍｇ，０．０４７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１１ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）の溶液に、フェネチルアミン（７ｍｌ，０．０５６ｍｍｏｌ）およびそれに続いてジイソプロピルエチルアミン（１２μＬ，０．０７１ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で一晩攪拌し、そして５％クエン酸で希釈した。有機層を分離し、そして水相をＥｔＯＡｃで抽出した（３×）。合わせた抽出物をＮａＨＣＯ₃の飽和溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、そして濾過した。濃縮後、粗生成物をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ，１：１）で２段階で精製して、２６ｍｇ（７７％）の構造（３３）を得た。

構造（３４）の合成：

構造（３４）を以下のように合成した。ＴＨＦ（５ｍｌ）中のフェネチルアミド（構造（３３），２５ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、１８ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０９３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で一晩攪拌して、ＴＬＣによるベースラインスポットを得た。この溶液を真空下で濃縮し、そして残渣をエーテルで２回洗浄して過剰のｐＴｓＯＨを除去して、構造（３４）を黄白色固体として得、これをさらに精製することなく使用した。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃）は予想された生成物と一致したが、個々のピークの割り当てはブロードになったため困難であった。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ５２０．４（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（３４）を実施例１の構造（９ａ）と反応させ（構造（１８）の合成について実施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行なって（それぞれ構造（１８）および（１９）の酸化および脱保護に関して記載した方法と類似の方法で）、下記表９に示す構造（３５）を得た。
（実施例１１）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（３６）の合成：

構造（３６）を、ベンジルアミンおよび構造（３２）から出発して、化合物（３４）と類似の方法で合成した。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）は予想された生成物と一致したが、個々のピークの割り当てはブロードになったため困難であった。ＭＳ（ＦＡＢ＋）ｍ／ｚ ５０６．４（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（３６）を実施例１の構造（９ａ）と反応させ（構造（１８）の合成について実施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行なって（それぞれ構造（１８）および（１９）の酸化および脱保護に関して記載した方法と類似の方法で）、下記表９に示す構造（３７）を得た。
（実施例１２）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（３８）の合成：

構造（３８）を、ｐ−クロロフェネチルアミンおよび構造（３２）から出発して、構造（３４）と類似の方法で合成した。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）は予想された生成物と一致したが、個々のピークの割り当てはブロードになったため困難であった。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ５５４．５（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（３８）を実施例１の構造（９ａ）と反応させ（構造（１８）の合成について実施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行なって（それぞれ構造（１８）および（１９）の酸化および脱保護に関して記載した方法と類似の方法で）、下記表９に示す構造（３９）を得た。
（実施例１３）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（４０）の合成：

構造（４０）を、ｐ−メトキシフェネチルアミンおよび構造（３２）を用いて、化合物（３４）と類似の方法で合成した。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）は予想された生成物と一致したが、個々のピークの割り当てはブロードになったため困難であった。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ ５５０．５（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（４０）を実施例１の構造（９ａ）と反応させ（構造（１８）の合成について実施例２において記載した手順と類似の方法で）、次いで酸化および脱保護を行なって（それぞれ構造（１８）および（１９）の酸化および脱保護に関して記載した方法と類似の方法で）、下記表９に示す構造（４１）を得た。
（実施例１４）
（代表的なβシート模倣物の合成）
この実施例では、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する。

構造（４２）の合成：

構造（４２）を次のように調製した。１０ｍｌ丸底フラスコにＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）、２，３−ジメチルアミノプロピオン酸メチル二塩酸塩（１９．９ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ，１．５当量）およびジイソプロピルエチルアミン（５３ｍｌ，０．３０４ｍｍｏｌ，４．４当量）を加えた。この懸濁液を室温で１時間マグネチックで撹拌した時点で、構造（３０）の化合物（５０ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ，１当量）、塩化水銀（ＩＩ）（８２．４ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ，４．４当量）および酸化水銀（ＩＩ）（２５．７ｍｇ，０．１２０ｍｍｏｌ，１．７当量）を加えた。得られた黄色懸濁液を１６．５時間攪拌した。この間に懸濁液は灰色に変色した。その反応物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮＨ₄Ｃｌ水溶液（５ｍｌ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（５ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。その濁った懸濁液を濾過し、溶媒を真空下で除去した。その白色固体を分取薄層クロマトグラフィーで精製することにより、イミダゾリン構造（４２）（２５．３ｍｇ，収率５２％）を透明な非晶質固体として得た。

構造（４３）の合成：

構造（４３）を次のように合成した。２５ｍｌ丸底フラスコに、構造（４２）の化合物（２３０ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、ＣＨＣｌ₃（５ｍｌ）およびＭｎＯ₂（５００ｍｇ，５．７５ｍｍｏｌ，１７．４当量）を入れた。５時間攪拌した後、その懸濁液を濾過し、固体をメタノールで洗浄した。溶媒を真空下で除去し、残渣を酢酸エチル（５ｍｌ）とメタノール（１ｍｌ）に溶解し、新たなＭｎＯ₂（５００ｍｇ）を入れて、その反応を室温で１５時間攪拌した。固体を濾過し、溶媒を真空下で除去した。その残渣をシリカゲルによるカラムクロマトグラフィー（１：１酢酸エチル：ヘキサンで溶出後、純粋な酢酸エチルで溶出し、次いで１：９メタノール：酢酸エチルで溶出）で精製することにより、所望の生成物（構造（４３），１９０ｍｇ，収率８３％）を非晶質固体として得た。

構造（４４）の合成：

構造（４４）を、構造（３３）から構造（３４）への構築に使用した方法と同じ方法によって合成した。生成物をさらに精製することなくカップリングに使用した。

構造（４４）を実施例１の構造（９ａ）と（構造（１８）の合成について実施例２に記述した方法と類似の方法で）反応させた後、（それぞれ構造（１９）の脱保護に関して記述した方法と類似の方法で）脱保護を行なうことにより、下記表９に示す構造（４５）を得た。構造（４５）の調製では、そのカップリング段階を、類似のヒドロキシ化合物ではなく構造（４４）のカルボニル化合物で行なった。
（実施例１５）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。

構造（４６）の合成：

構造（４６）を、構造（１６）とチアゾールから出発して、構造（１７）と類似の方法で合成した。この化合物をさらに精製することなくカップリング段階に使用した。

構造（４６）を実施例１の構造（９ａ）と（構造（１８）の合成について実施例２に記述した方法と類似の方法で）反応させた後、（それぞれ構造（１８）および（１９）の酸化および脱保護に関して記述した方法と類似の方法で）酸化と脱保護を行なうことにより、下記表９に示す構造（４７）を得た。
（実施例１６）
（代表的なβシート模倣物の合成）
この実施例では、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する。

構造（４８）の合成：

−２５℃のＴＨＦ（５ｍｌ）中で攪拌したα−Ｂｏｃ−β−Ｆｍｏｃ−２，３−ジアミノプロピオン酸（８１８ｍｇ，１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、４−メチルモルホリン（０．２３ｍｌ，２．１ｍｍｏｌ）を加え、次いでクロロギ酸イソブチル（０．２５ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を５分間攪拌した後、５ｍｌのＴＨＦを使って濾過した。その濾液を氷／水浴で冷却した後、水（２．５ｍｌ）に溶解したホウ水素化ナトリウム（１５２ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）を滴下した。その混合物を１５分間攪拌した後、水（５０ｍｌ）を加え、その混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を真空下で濃縮することにより、淡黄色固体を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン溶離液）で精製して、５９６ｍｇのアルコールを白色固体として得た。

そのアルコール（２２４ｍｇ，０．５４３ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し、デス−マーチンペルヨージナン（２６２ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で１時間攪拌した後、酢酸エチル（５０ｍｌ）で希釈し、１０％Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃水溶液、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して白色固体を得た。その固体をフラッシュクロマトグラフィーで精製することにより、１６９ｍｇのアルデヒド構造（４８）を白色固体として得た。

構造（４９）の合成：

構造（４９）を、構造（４８）とベンゾチアゾールから出発して、構造（１７）と類似の方法で合成した。この化合物を、ジアステレオマーの１：１混合物として、さらに精製することなくカップリング段階（下記）に使用した。ＭＳ（ＥＩ＋）：ｍ／ｚ ４４６．４（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（５０）の合成：

構造（４９）と二環式酸構造（９ａ）（２７．ｍｇ，０．０６９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ水和物（７１ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．０．０５９ｍｌ，０．３４ｍｍｏｌ）を加えた後、ＥＤＣ（１９ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で２０時間攪拌した後、酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して黄色泡状物６１ｍｇを得た。¹Ｈ ＮＭＲ分析は、ジアステレオマーアミドの混合物を示した。

前記泡状物をＣＨ₃ＣＮに溶解し、ジエチルアミンを加えた。その溶液を室温で３０分間攪拌した後、真空下で濃縮して黄色泡状物を得た。その泡状物をヘキサンで濯ぎ、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶解した。別のフラスコで、カルボニルジイミダゾール（１６ｍｇ，０．９９ｍｍｏｌ）とグアニジン塩酸塩（１０ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．０３５ｍｌ，０．２０ｍｍｏｌ）を加えた後、ＤＭＡＰ（１ｍｇ）を加えた。その溶液を室温で１．５時間攪拌した後、前記アミンの溶液を加え、攪拌を１６時間続けた。その溶液を真空下で濃縮した後、その残渣に水を加え、その混合物を酢酸エチル（３×２５ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を真空下で濃縮して、５８ｍｇの構造（５０）を黄色泡状物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ ６８０．６（Ｍ＋Ｈ⁺）。

構造（５０）を酸化して、構造（５１）の対応するケトンを得た。
（実施例１７）
（代表的なβシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性）
この実施例では、トロンビン、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、トリプターゼ、ａＰＣ、プラスミン、ｔＰＡ、ウロキナーゼ、トロンビン−トロンボモジュリン複合体およびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の能力を例証する。表９に挙げる構造のβシート模倣物は表１０に示す阻害活性を有した。

プロテイナーゼインヒビターアッセイは実施例９に記述したように行なった。トロンビン−トロンボモジュリン複合体に関するアッセイは、インヒビターと基質の添加の前に、トロンビンを４ｎＭトロンボモジュリンと共に室温で２０分間予備インキュベートした点を除き、トロンビンの場合と同様に行なった。

δＢ＝ＣＨに関するテンプレートの立体化学は、注記する場合を除き（脚注εを参照）、（３Ｒ，６Ｒ，９Ｓ）である。

εテンプレート立体化学は（３Ｓ，６Ｒ，９Ｓ）である。

^*ＨＰＬＣは、０−９０％アセトニトリル／水，０．１％ＴＦＡの勾配を用い、逆相Ｃ−１８カラムで行なった。

（実施例１８）
（血管移植片における血小板沈着に対する代表的なβシート模倣物の効果）
血管移植片における血小板沈着に対する本発明化合物の効果を、Ｋｅｌｌｙら，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ８９：６０４０−６０４４（１９９２）に記述されているようにシャントに対して近位に化合物を導入した点を除き、Ｈａｎｓｏｎら「合成抗トロンビンＤ−フェニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニルクロロメチルケトンによる急性血小板依存性血栓症の妨害」Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ８５：３１４８−３１８８（１９８８）の手順に従って測定した。その結果を構造（２０ｂ）、（３９）および（２９ｂ）について、それぞれ図１、２および３に示す。
（実施例１９）
（代表的βシート模倣物の合成）
この実施例では、下記の構造を有する本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する。

構造（５２）は、実施例２の中間体（１６）の代わりに下記中間体（５３）を用いることによって合成し得る。

中間体（５３）は次の反応スキームに従って合成し得る。

あるいは、下記反応スキームに従って中間体（５３）を合成し得る。

説明のために本明細書中で本発明の特定の実施態様について記述したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な改変を加えうることは、前記の説明から理解されるだろう。したがって、本発明は、添付の請求の範囲以外によっては限定されない。

図１は、血管移植片における血小板沈着に対する種々の濃度の構造（２０ｂ）の効果を示すプロットである。 図２は、血管移植片における血小板沈着に対する種々の濃度の構造（３９）の効果を示すプロットである。 図３は、血管移植片における血小板沈着に対する種々の濃度の構造（２９ｂ）の効果を示すプロットである。

Claims (18)

1. 二環式環系化合物であって、該二環式環系化合物は以下の構造：
   を有し、ここで、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、天然のアミノ酸の側鎖部分から独立して選択され；Ａは、−（ＣＨ_２）_１〜４−であり；Ｂは、ＮおよびＣＨから選択され；Ｃは、−（ＣＨ_２）_１〜３−であり；Ｙは、ＮＨＣ（Ｒ_４）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_５であり、ここで、Ｒ_４は２〜１０個の炭素原子および少なくとも１つの窒素原子を有する有機アミン部分であり、そしてＲ_５は、（ａ）ハライド、Ｃ_１〜５アルコキシおよびニトロから独立して選択される１〜４個の基で必要に応じて置換される、１〜１２個の炭素原子のアルキル、（ｂ）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｃ_１〜５アルキル（該アルキル基は、ハライドまたはＣ_１〜５アルコキシで必要に応じて置換される）、（ｃ）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｃ_１〜１０アラルキル（ここで、アリール基が、ニトロ、ハライド、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_１〜５アルキル、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_６〜１０アリール、Ｃ_１〜５アルキルおよびＣ_１〜５アルコキシルから独立して選択される５個までの基で必要に応じて置換され得る）、ならびに（ｄ）４〜１１個の環原子の単環式ヘテロアリールおよび二環式ヘテロアリール（ここで、該環原子は炭素および複素原子（酸素、窒素および硫黄）から選択され、かつ該へテロアリール環は、ハライド、Ｃ_１〜５アルキル、Ｃ_１〜５アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_１〜５アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_６〜１０アリール、アミノ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_１〜５アルキルおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ_６〜１０アリールから独立して選択される４つまで基で必要に応じて選択され得る）から選択され；Ｚは、Ｈであり；そして該二環式環の任意の隣接する２個のＣＨ基が二重結合を形成し得；但し、（ｉ）Ｒ_１は、水素以外の天然のアミノ酸の側鎖部分であり、（ｉｉ）Ｒ_１がベンジルであるとき、Ｒ_２およびＲ_３は両方とも水素であり、ＢはＣＨでない、二環式環系化合物。
2. ＢがＮである、請求項１の二環式環系化合物。
3. Ａが−（ＣＨ_２）_２−でありかつＣが−ＣＨ_２−である、請求項２に記載の二環式環系化合物。
4. Ｒ_２が水素である、請求項３に記載の二環式環系化合物。
5. 以下の構造：
   を有する、請求項４に記載の二環式環系化合物。
6. 以下の構造：
   を有する、請求項４に記載の二環式環系化合物。
7. 以下の構造：
   を有する、請求項４に記載の二環式環系化合物。
8. 以下の構造：
   を有する、請求項４に記載の二環式環系化合物。
9. 以下の構造：
   を有する、
   請求項４に記載の二環式環系化合物。
10. 以下の構造：
    を有する、
    請求項４に記載の二環式環系化合物。
11. 以下の構造：
    を有する、
    請求項４に記載の二環式環系化合物。
12. 以下の構造：
    を有する、
    請求項４に記載の二環式環系化合物。
13. 以下の構造：
    を有する、
    請求項３に記載の二環式環系化合物。
14. ＢがＣＨである、請求項１に記載の二環式環系化合物。
15. Ａが−（ＣＨ_２）_２−でありかつＣが−ＣＨ_２−である、請求項１４に記載の二環式環系化合物。
16. Ｒ_２が水素である、請求項１５に記載の二環式環系化合物。
17. 以下の構造：
    を有する、
    請求項１６に記載の二環式環系化合物。
18. 以下の構造：
    を有する、
    請求項１６に記載の二環式環系化合物。